Μικροσκοπική εξέταση κοπράνων. Ενδοβιολογική διάγνωση ελμινθιασών

Άμεσες μέθοδοι: ανίχνευση των ίδιων των ελμινθών, των θραυσμάτων τους, των αυγών, των προνυμφών στα κόπρανα, των ούρων, της δωδεκαδακτυλικής έκκρισης, των πτυέλων, της ρινικής και κολπικής βλέννας, των περιεχομένων των υπογλώσσιων χώρων, των βιοψιών ιστών.

Κατά τη διάγνωση, είναι αδύνατο να εντοπιστούν με οποιαδήποτε μέθοδο τα αυγά ή οι προνύμφες όλων των τύπων ελμινθών που ζουν σε πεπτικό σύστημαπρόσωπο. Έτσι, όταν χρησιμοποιείται η μέθοδος επίπλευσης, τα αυγά τρηματωδών και, σε ορισμένες περιπτώσεις, τα μη γονιμοποιημένα αυγά στρογγυλών σκουληκιών δεν επιπλέουν στην επιφανειακή μεμβράνη (λόγω του υψηλού ειδικού βάρους). Στα κόπρανα, είναι πολύ σπάνιο να βρεθούν αυγά σκουληκιών, τενιοειδή ογκόσφαιρα, τα οποία ανιχνεύονται με ειδικές ερευνητικές μεθόδους: απόξεση από περιπρωκτικές πτυχές για σκουλήκια και τενιοειδή, μέθοδοι καθίζησης για τρεματώδη (αυγά οπίστορα κ.λπ.). Επομένως, για στοχευμένη εξέταση του ασθενούς για ελμινθίαση, ο γιατρός στην παραπομπή θα πρέπει να υποδείξει σε ποιους ελμίνθους πρέπει να δοθεί η κύρια προσοχή (διάγνωση), γεγονός που θα επιτρέψει στον εργαστηριακό βοηθό να επιλέξει την κατάλληλη τεχνική για τον εντοπισμό αυτού του τύπου ελμίνθου. Περιττώματα που λαμβάνονται από διαφορετικούς τόπουςΤα κόπρανα σε ποσότητα τουλάχιστον 50 γραμμαρίων (κουταλάκι του γλυκού) σε καθαρό γυάλινο πιάτο πρέπει να αποστέλλονται στο εργαστήριο το αργότερο μία ημέρα μετά την αφόδευση και να εξετάζονται την ημέρα της εισαγωγής.

Εάν είναι απαραίτητο, αποθηκεύστε τα κόπρανα μέχρι επόμενη μέρατοποθετείται σε κρύο μέρος (0-4°C) ή γεμίζεται με ένα από τα συντηρητικά.

Πριν από τη μελέτη, τα κόπρανα αναμιγνύονται με ένα ραβδί, έτσι ώστε τα αυγά των ελμινθών να κατανέμονται ομοιόμορφα στη συνολική μάζα.

Εάν βρεθούν ωάρια ελμινθών στο παρασκεύασμα, η θέαση δεν διακόπτεται, γιατί. μπορεί να είναι διπλή ή τριπλή εισβολή.

Η παρακολούθηση της αποτελεσματικότητας της θεραπείας της ελμινθίασης πραγματοποιείται με την εξέταση των περιττωμάτων για αυγά ελμινθίας σε 2-3 εβδομάδες ή 2-3 μήνες μετά τη θεραπεία, ανάλογα με την ανιχνευθείσα ελμινθία.

Οι μακροσκοπικές μέθοδοι χρησιμοποιούνται για την ανίχνευση ολόκληρων σεξουαλικά ώριμων ελμίνθων ή θραυσμάτων τους στα κόπρανα με γυμνό μάτι ή με μεγεθυντικό φακό χειρός.

Συχνά στην επιφάνεια των κοπράνων μετά την αφόδευση, μπορείτε να δείτε ενεργά σέρνονται σκουλήκια καρφίτσας. απεκκρίνεται με περιττώματα στρογγυλό σκουλήκι. μερικές φορές οι ίδιοι οι άνθρωποι παρατηρούν την απόρριψη ελμινθών. Σε ασθενείς με διφυλλοβοθρίαση, τα θραύσματα των στροβιλίων της ταινίας (με τη μορφή "ζυμαρικών") μπορούν να ξεχωρίσουν και σε αυτούς που έχουν μολυνθεί από τενιοειδή (χοιρινό ή βοοειδή ταινία), τμήματα ελμινθών συχνά φεύγουν με περιττώματα (με τη μορφή "λευκά κοψίματα") ή βγαίνουν ενεργά πρωκτός.

Η μακροσκοπική μέθοδος είναι η κυριότερη για τη διαφορική διάγνωση της τενιάδωσης και της τενιάρυγχωσης (σε συνδυασμό με έρευνα).

Από τις ειδικές μακροσκοπικές μεθόδους χρησιμοποιείται η μέθοδος της διαδοχικής πλύσης των κοπράνων.

Τα κόπρανα αναμιγνύονται σε νερό για να ληφθεί ένα ομοιόμορφο εναιώρημα, μετά το οποίο, όταν καλός φωτισμόςεξετάζονται προσεκτικά σε ξεχωριστές μικρές μερίδες σε μαύρες φωτογραφικές κυψέλες ή επάνω σκούρο φόντοσε πιάτα Petri. Με τσιμπιδάκια ή βελόνα ανατομής αφαιρούνται όλα τα ύποπτα λευκά σωματίδια, μεγάλοι σχηματισμοί ύποπτοι για θραύσματα ελμινθών και εξετάζονται κάτω από μεγεθυντικό φακό ανάμεσα σε δύο γυάλινες διαφάνειες. Μικροί έλμινθοι ή κεφαλές κεστωδών εξετάζονται κάτω από μεγεθυντικό φακό σε μια σταγόνα γλυκερίνης ή κάτω από μικροσκόπιο.

Όταν χρησιμοποιείται αυτή η μέθοδος για τη διάγνωση τμημάτων του χοιρινού κρέατος, της ταινίας βοοειδών, της φαρδιά ταινίας, τα πλυμένα τμήματα τοποθετούνται ανάμεσα σε δύο ποτήρια και, κοιτάζοντας το φως κάτω από ένα μεγεθυντικό φακό ή χαμηλή μεγέθυνση του μικροσκοπίου, το είδος προσδιορίζεται από τη δομή της μήτρας (σε ένα ώριμο τμήμα της χοιρινής ταινίας, 8-12 πλευρικά κλαδιά, και ταινία ταύρου 18-32, συχνότερα 28-32, σε μια φαρδιά ταινία τα τμήματα είναι ευρύτερα και η μήτρα βρίσκεται στο κέντρο με τη μορφή "ροζέτας"). Εάν η μήτρα είναι ελάχιστα ορατή, τότε μπορεί πρώτα να κρατηθεί για κάποιο χρονικό διάστημα σε διάλυμα γλυκερίνης 50%, μετά το οποίο ακόμη και οι έρημοι κορμοί της μήτρας είναι σαφώς ορατοί.

Κατά τον προσδιορισμό αυτών των κεστόδων από τη δομή των αποκολλημένων κεφαλών, τοποθετούνται προσεκτικά με ένα λαιμό σε μια σταγόνα γλυκερίνης ανάμεσα σε γυάλινες πλάκες (ή καλύπτονται με καλυπτρίδα) και, χωρίς συμπίεση, εξετάζονται σε μικροσκόπιο σε χαμηλή μεγέθυνση.

Μικροσκοπικές μέθοδοιχωρίζεται σε απλό, σύνθετο και ειδικό.

Οι απλές μέθοδοι περιλαμβάνουν αυτοφυή επίχρισμα, αυτοφυή επίχρισμα με διάλυμα Lugol, παχύ επίχρισμα κάτω από σελοφάν κατά Kato, στρίψιμο (σύμφωνα με τον Shulman) και περιπρωκτική απόξεση.

Σύνθετες Μέθοδοιείναι πιο αποτελεσματικά και βασίζονται στη συγκέντρωση των αυγών στα σκευάσματα. Περιλαμβάνουν προεπεξεργασία των κοπράνων με υγρά αντιδραστήρια, με αποτέλεσμα τα αυγά των ελμινθών είτε να καθιζάνουν είτε να επιπλέουν στην επιφάνεια του υγρού.

Οι σύνθετες μέθοδοι περιλαμβάνουν μεθόδους εμπλουτισμού:

α) επίπλευση (όταν ειδικό βάροςαυγά με μικρότερο ειδικό βάρος αλατούχο διάλυμακαι τα αυγά επιπλέουν στην επιφανειακή μεμβράνη).

β) καθίζηση (όταν το ειδικό βάρος των αυγών είναι μεγαλύτερο από το ειδικό βάρος των διαλυμάτων αλάτων και τα αυγά καθιζάνουν σε ίζημα).

Ειδικές μέθοδοι ανίχνευσης αυγών και προνυμφών ελμινθών, κύστεων και βλαστικών μορφών πρωτοζώων είναι οι μέθοδοι απόξεσης, επίπλευσης, καθίζησης, προνυμφοσκόπησης, πρωτοζωοσκόπησης, η μελέτη της χολής και οι μέθοδοι χρώσης επιχρισμάτων κοπράνων, πτυέλων κ.λπ.

Απλές Μέθοδοιμελέτες κοπράνων

αυτοφυές επίχρισμα. Ένα μικρό σωματίδιο περιττωμάτων λαμβάνεται με ένα ξύλινο ραβδί από διαφορετικά μέρη της παρεχόμενης μερίδας, τρίβεται καλά σε μια γυάλινη πλάκα σε μια σταγόνα διαλύματος γλυκερίνης 50% και γίνεται ένα λεπτό επίχρισμα σε 2-3 γυάλινες πλάκες. Τουλάχιστον 3 σκευάσματα εξετάζονται στο μικροσκόπιο. Μειονέκτημα της μεθόδου: παρατηρείται μικρή ποσότητα υλικού, επομένως δεν χρησιμοποιείται ως ανεξάρτητη μέθοδος.

Μέθοδος συστροφής(Σούλμαν). 2,0-3,0 g περιττωμάτων τοποθετούνται σε ένα ποτήρι, ανακατεύονται καλά με μια γυάλινη ράβδο με 5πλάσιο όγκο φυσιολογικού ορού ή απεσταγμένου νερού, κάνοντας γρήγορες κινήσεις για 2-3 λεπτά και αφαιρείτε γρήγορα το ραβδί από το μείγμα. Μια σταγόνα του μείγματος στο τέλος του ραβδιού μεταφέρεται σε γυάλινη πλάκα και υποβάλλεται σε μικροσκόπιο. Η αρχή της φυγόκεντρης δύναμης προκαλεί τη συσσώρευση αυγών και προνυμφών σε ένα ραβδί.

Μέθοδος παχύρρευστης επάλειψης Κάτω με σελοφάν. Χημικά αντιδραστήρια: 100% γλυκερόλη, 6% διάλυμα φαινόλης (100 ml νερό + 6 g φαινόλης), 3% διάλυμα πράσινου μαλαχίτη (2,5 ml απεσταγμένο νερό + 75 ml πράσινου μαλαχίτη).

Παρασκευή διαλύματος εργασίας: 100 ml διαλύματος φαινόλης 6% + 100 ml καθαρής γλυκερίνης + 1,2 ml διαλύματος πράσινου μαλαχίτη 3%.

Προετοιμασία λωρίδων σελοφάν: κόβονται λωρίδες σελοφάν, το μέγεθος των οποίων αντιστοιχεί στη γυάλινη τσουλήθρα. Το σελοφάν πρέπει να είναι υδρόφιλο (το σελοφάν που καίγεται είναι κατάλληλο, αν λιώσει, τότε είναι ακατάλληλο). Στο διάλυμα εργασίας μπορούν να υποστούν επεξεργασία έως και 5 χιλιάδες λωρίδες. Ο χρόνος έκθεσης των λωρίδων σελοφάν μέχρι να είναι έτοιμες για χρήση στο διάλυμα εργασίας είναι τουλάχιστον 24 ώρες.

Ερευνητική πρόοδος. 50 mg περιττωμάτων (μέγεθος ενός μεγάλου μπιζελιού) εφαρμόζονται σε μια γυάλινη πλάκα, τρίβονται με ένα ατομικό ραβδί (γυαλί, ξύλινο), σκεπάζονται με λωρίδα σελοφάν και τρίβονται από πάνω με ελαστικό πώμα μέχρι να δημιουργηθεί ένα ομοιόμορφο παχύρρευστο επίχρισμα . Το φάρμακο ξηραίνεται σε θερμοκρασία δωματίου για μία ώρα ή σε θερμοστάτη στους 40°C για 20-30 λεπτά και μικροσκοπικά (ο χρόνος έκθεσης μπορεί να αυξηθεί σε θερμοκρασία δωματίου σε 5-6 ώρες ή περισσότερο).

Όσον αφορά την αποτελεσματικότητα, αυτή η μέθοδος προσεγγίζει τη μέθοδο επίπλευσης, αλλά αποκαλύπτει έντονη και μέσης έντασης εισβολή.

Χρησιμοποιείται ως ανεξάρτητη διαγνωστική μέθοδος και συνιστάται για μαζική εξέταση του πληθυσμού.

Στα κλινικά διαγνωστικά εργαστήρια, χρησιμοποιείται ως ενοποιημένη μέθοδος για τη διάγνωση ελμινθών ελλείψει συγκεκριμένων διαγνώσεων στις οδηγίες των γιατρών.

Μέθοδοι για περιπρωκτική απόξεση και αυτοφυή επίχρισμα με διάλυμα Lugol περιγράφονται στην ενότητα για ειδικές μεθόδους.

Εξελιγμένες μέθοδοι εμπλουτισμού κοπράνων

Οι μέθοδοι εμπλουτισμού βασίζονται στη διαφορά στο ειδικό βάρος των αυγών ελμινθών και στο διάλυμα αλατιού που χρησιμοποιείται.

Κατά την εφαρμογή της μεθόδου επίπλευσης, μπορούν να χρησιμοποιηθούν τα ακόλουθα διαλύματα αλάτων:

1. Διάλυμα νιτρικού μολύβδου PbNO3 (νιτρικός μολύβδου) πυκνότητας 1,5. Παρασκευάζεται με αναλογία 650 g της ουσίας ανά 1 λίτρο νερού. Το αλάτι διαλύεται σε δόσεις σε ζεστό νερό σε ένα εμαγιέ μπολ, θερμαίνεται στη σόμπα και ανακατεύεται συνεχώς μέχρι να διαλυθεί πλήρως. Δεν είναι απαραίτητο να φιλτράρετε το διάλυμα. Το διάλυμα παρασκευάζεται την ημέρα της μελέτης, αφού με την πάροδο του χρόνου δίνει ίζημα και η πυκνότητά του αρχίζει να πέφτει μετά από 24 ώρες. Εάν το διάλυμα παρασκευαστεί σε μεγάλες ποσότητες, τότε τις επόμενες ημέρες πριν από τη μελέτη θερμαίνεται, αναδεύοντας το ίζημα. Η παρασκευή του διαλύματος πραγματοποιείται σε απαγωγέα καπνού, καθώς ο νιτρικός μόλυβδος είναι άλας βαρέων μετάλλων.

2. Διάλυμα νιτρικού αμμωνίου NH4NO3 (κοκκώδες ή συνηθισμένο νιτρικό αμμώνιο) με πυκνότητα 1,3 παρασκευάζεται με τον ίδιο τρόπο όπως το προηγούμενο, αλλά σε αναλογία 1500 g της ουσίας ανά 1 λίτρο ζεστό νερό.

3. Παρασκευάζεται διάλυμα νιτρικού νατρίου NaNO3 ή νιτρικού νατρίου με πυκνότητα 1,38-1,4 σε αναλογία 1000 g της ουσίας ανά 1 λίτρο ζεστού νερού.

4. Παρασκευάζεται διάλυμα θειοθειικού νατρίου Na2S2O3×5H2O (υποθειώδες νάτριο) με πυκνότητα 1,4 σε αναλογία 1750 g της ουσίας ανά 1 λίτρο ζεστού νερού.

5. Ένα διάλυμα θειικού νατρίου Na2SO4 (άλας epsom) με πυκνότητα 1,26-1,28 παρασκευάζεται σε αναλογία 920 g της ουσίας ανά 1 λίτρο ζεστού νερού.

6. Παρασκευάζεται διάλυμα χλωριούχου ψευδαργύρου ZnCl2 (χλωριούχος ψευδάργυρος) με πυκνότητα 1,82 σε αναλογία 2000 g της ουσίας ανά 1 λίτρο ζεστού νερού. Το ψυχθέν διάλυμα δεν κρυσταλλώνεται.

7. Κορεσμένο διάλυμα χλωρίου νάτριο NaCl(επιτραπέζιο αλάτι) με πυκνότητα 1,18-1,2. Στο! l νερού, προσθέστε 400-420 g αλάτι σε δόσεις σε έναν εμαγιέ κουβά βραστό νερό, ανακατεύοντας συνεχώς μέχρι να διαλυθεί τελείως. Καθώς το διάλυμα ψύχεται, κρύσταλλοι χλωριούχου νατρίου καθιζάνουν.

Το ειδικό βάρος των διαλυμάτων επίπλευσης μετράται με αερόμετρο μόνο αφού το διάλυμα έχει κρυώσει τελείως σε θερμοκρασία δωματίου.

Οι μέθοδοι επίπλευσης είναι πιο αποτελεσματικές για την ανίχνευση αυγών πυγμαίου ταινίας, μαστιγίου, αγκυλόστομου, ασκαρίδας και ευρείας ταινίας.

Το επιφανειακό φιλμ μπορεί να αφαιρεθεί με συρμάτινο βρόχο ή γυάλινη πλάκα.

σε κορεσμένο διάλυμα επιτραπέζιο αλάτιτο φιλμ μπορεί να εξεταστεί μετά από 30-40 λεπτά, σε διάλυμα νιτρικού αμμωνίου - μετά από 10-20-30 λεπτά μετά την καθίζηση.

Κατά την αφαίρεση της μεμβράνης με συρμάτινο βρόχο, εξετάζονται τουλάχιστον 8 σταγόνες.

Οι αντικειμενοφόρες πλάκες αφαιρούν περισσότερα αυγά από την μεμβράνη από τις συρμάτινες θηλιές. Το ποτήρι πρέπει να έρχεται σε επαφή με το υγρό του διαλύματος επίπλευσης, το οποίο προστίθεται στο ποτήρι ζέσεως με μια πιπέτα. Μετά την καθίζηση, το γυαλί αφαιρείται, τοποθετήστε τη βρεγμένη επιφάνεια επάνω στο ποτήρι μεγαλύτερο μέγεθοςκαι εξετάστηκε στο μικροσκόπιο. Οι αντικειμενοφόρες πλάκες πρέπει να απολιπανθούν πριν από τη χρήση.

Για έρευνα, πρέπει να έχετε: γυάλινες διαφάνειες, κύπελλα χημικών, συρμάτινες θηλιές, κυβέτες, πιάτα Petri, σιφώνια, αχλάδια, γυάλινα ή ξύλινα ραβδιά.

Ερευνητική πρόοδος. 5 g περιττωμάτων χύνονται με 10 φορές την ποσότητα διαλύματος επίπλευσης (κατά προτίμηση με ειδικό βάρος 1,38-1,40), αναδεύονται καλά, μη διαλυόμενα μεγάλα σωματίδια αφαιρούνται από πάνω και το εναιώρημα αφήνεται για 10-15 λεπτά. Στη συνέχεια, το φιλμ αφαιρείται είτε με θηλιά σε γυάλινη πλάκα είτε με γυάλινη πλάκα. Για να αραιώσετε τα κόπρανα, είναι προτιμότερο να λαμβάνετε κύπελλα χωρητικότητας 30-50 ml, να ρίχνετε το διάλυμα στο ίδιο επίπεδο με τις άκρες (ή υπογεμίζοντας 2-3 mm) και να καλύπτετε το μείγμα με μια αντικειμενοφόρο πλάκα και στη συνέχεια να προσθέσετε το διάλυμα επίπλευσης με πιπέτα μέχρι να έρθει σε επαφή με την αντικειμενοφόρο. Μετά από 10-20 λεπτά, το γυαλί αφαιρείται γρήγορα και το φιλμ που παραμένει πάνω του σαρώνεται μικροσκοπικά χωρίς γυαλί κάλυψης.

Μέθοδοι καθίζησης-καθίζησης

Οι μέθοδοι καθίζησης χρησιμοποιούνται για την ανίχνευση αυγών γεωελμίνθων, βιοελμίνθων στα κόπρανα και ως ειδικές μέθοδοι έρευνας για την οπισθορχίαση.

Μέθοδος Goryachev-Zolotukhin(απλοποιημένη μέθοδος Γκοριάτσεφ). Περίπου 1,5 g περιττωμάτων αναδεύεται σε ένα χημικό ποτήρι σε 3-4 ml νερό. Το προκύπτον εναιώρημα διηθείται μέσω δύο στρώσεων γάζας σε ένα σωλήνα φυγοκέντρησης, τοποθετώντας προσεκτικά πάνω από τα 4-5 ml ενός κορεσμένου διαλύματος χλωριούχου νατρίου που υπάρχει σε αυτό. Οι δοκιμαστικοί σωλήνες τοποθετούνται σε ένα ράφι για 15-20 ώρες. Αποκτήστε δύο σαφώς οριοθετημένες στρώσεις. Το ίζημα εξετάζεται μικροσκοπικά.

Μέθοδος αιθέρα-φορμαλίνης.Χρησιμοποιείται για τη διάγνωση όλων των εντερικών προσβολών και ως ειδική μέθοδος για αυγά πρωτόζωων και οπισθορχίας.

Εξοπλισμός: φυγόκεντρος στις 3000 σ.α.λ. φυγοκεντρικοί βαθμωτοί σωλήνες, χοάνες. μεταλλικό σουρωτήρι (τσάι) ή επίδεσμος δύο στρώσεων. γυάλινες τσουλήθρες και καλυπτρίδες. ξύλινα (ή γυάλινα) ραβδιά? βαμβάκι, επίδεσμος.

Χημικά αντιδραστήρια: 10% διάλυμα φορμαλίνης (1 μέρος διαλύματος φαρμακευτικής φορμαλίνης και 4 μέρη απεσταγμένου νερού). αιθυλαιθέρας (ιατρικός).

7 ml διαλύματος φορμαλίνης 10% χύνονται σε φυγοκεντρικούς σωλήνες και τοποθετείται 1 g περιττωμάτων (τέτοια ποσότητα περιττωμάτων ώστε το διάλυμα στο δοκιμαστικό σωλήνα να ανέλθει στα 8 ml). Τα κόπρανα αναμειγνύονται με φορμαλίνη μέχρι να σχηματιστεί ένα ομοιογενές μείγμα και στη συνέχεια χύνονται μέσω ενός μεταλλικού φίλτρου (ή γάζας δύο στρωμάτων, επίδεσμος) σε άλλο σωλήνα φυγοκέντρησης (εάν τα κόπρανα παραμένουν στο φίλτρο, τότε το φίλτρο πρέπει να ξεπλυθεί με φορμαλίνη). Προσθέστε 2 ml αιθέρα σε αυτό το σωλήνα φυγοκέντρησης, πωματίστε και ανακινήστε δυνατά για 30 δευτερόλεπτα.

Το μίγμα φυγοκεντρείται στις 3000 rpm για ένα λεπτό (δυνατό για δύο λεπτά στις 1500 rpm). Λόγω της αντίδρασης αιθέρα-φορμαλίνης, η πήξη των πρωτεϊνών εμφανίζεται με τη μορφή φελλού στην κορυφή του δοκιμαστικού σωλήνα και τα αυγά των ελμινθών κατακρημνίζονται. Το πηκτικό στρώμα αφαιρείται, το υπερκείμενο στραγγίζεται, το ίζημα εφαρμόζεται σε μια γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα απευθείας από τον δοκιμαστικό σωλήνα ή με μια πιπέτα Pasteur, καλύπτεται με καλυπτρίδα και εξετάζεται με μικροσκόπιο.

Μέθοδος καθίζησης αιθέρα-οξικού. Η αρχή της αιθεροοξικής καθίζησης αυγών ελμινθών είναι η διαδοχική επεξεργασία δειγμάτων κοπράνων με υδατικό διάλυμα 10%. οξικό οξύκαι αιθέρας. Το οξικό οξύ είναι καλύτερο από άλλα χημικές ενώσειςγαλακτωματοποιεί ένα δείγμα κοπράνων. Διεισδύει σε άπεπτα σωματίδια, που αποτελούνται κυρίως από ίνες, οι οποίες, όταν υπέροχο περιεχόμενοπαρεμποδίζουν την έρευνα με καθίζηση μετά τη φυγοκέντρηση. Η επακόλουθη προσθήκη αιθέρα στο σωλήνα και η ανάδευση οδηγεί στην εκχύλιση οξικού οξέος από το περιεχόμενο του σωλήνα μαζί με σωματίδια κοπράνων εμποτισμένα με αυτό. Δεδομένου ότι το ειδικό βάρος του μείγματος αιθέρα και οξικού οξέος είναι μικρότερο από το ειδικό βάρος του νερού, τα δείγματα κοπράνων που έχουν υποστεί επεξεργασία με αυτές τις ουσίες επιπλέουν προς τα πάνω και τα αυγά ελμινθών, τα οποία έχουν μεγάλο ειδικό βάρος, καθιζάνουν.

Η ποσότητα του ιζήματος που λαμβάνεται μετά από καθίζηση αιθέρα-οξικού είναι 3-4 φορές μικρότερη από ό,τι μετά την καθίζηση αιθέρα-φορμαλίνης. Αυτό διευκολύνει σημαντικά την ανίχνευση αυγών ελμινθών σε αυτό και σας επιτρέπει να μελετήσετε το ίζημα στο σύνολό του με δείγμα 0,5-1 g. Η τοξικότητα της μεθόδου αιθέρα-οξικού είναι 5 φορές χαμηλότερη.

Ερευνητική πρόοδος. 7 ml διαλύματος οξικού οξέος 10% χύνονται σε βαθμονομημένο σωλήνα φυγοκέντρησης και προστίθεται δείγμα κοπράνων 1 g (δηλαδή, τέτοια ποσότητα περιττωμάτων στην οποία το διάλυμα οξικού οξέος ανέρχεται στα 8 ml). Ανακατεύουμε καλά με ένα ποτήρι ή ξύλινο ραβδί. Περάστε μέσα από ένα χωνί με δύο στρώσεις γάζας σε έναν άλλο σωλήνα φυγοκέντρησης. 2 ml προστίθενται στο γαλάκτωμα αιθυλαιθέρας(δηλαδή μέχρι 10 ml). Οι δοκιμαστικοί σωλήνες κλείνονται με ελαστικό πώμα (είναι δυνατό από φιαλίδιο πενικιλίνης) και ανακινούνται για 15 δευτερόλεπτα. Μετά την αφαίρεση του πώματος, οι σωλήνες φυγοκεντρούνται για ένα λεπτό στις 3000 rpm για 2 λεπτά. Το υπερκείμενο απορρίπτεται από το σωλήνα. Σε ορισμένες περιπτώσεις, το σχηματισμένο βύσμα κοπράνων παρεμβαίνει στην εκκένωση του υπερκειμένου. Σε αυτή την περίπτωση, ο φελλός διαχωρίζεται από τα τοιχώματα του δοκιμαστικού σωλήνα με μια γυάλινη ή ξύλινη ράβδο. Ολόκληρο το ίζημα διοχετεύεται με πιπέτα σε γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα και υποβάλλεται σε μικροσκόπιο κάτω από μια καλυπτρίδα σε χαμηλή μεγέθυνση. Το ίζημα είναι συνήθως μικρό και άχρωμο. Τα αυγά ελμινθίου, ειδικά τα μικρά αυγά, ανιχνεύονται καλά.

Μέθοδος χημικής καθίζησης. Η αρχή της μελέτης βασίζεται στην καθίζηση αυγών από δείγμα κοπράνων σε αλατούχο διάλυμα ειδικού βάρους 1,15. Η ουσία της μεθόδου έγκειται στην άμεση φυγοκέντρηση ενός δοκιμαστικού σωλήνα στον οποίο ένα βύσμα κοπράνων γαλακτωματοποιημένο σε διάλυμα οξικού οξέος 1% τοποθετείται σε ένα διάλυμα νιτρικού νατρίου (σπ. βάρος 1,16). Το υψηλό ειδικό βάρος του αλατούχου διαλύματος και οι φυσαλίδες που απελευθερώνονται από τη χημική αντίδραση, διεισδύοντας στο στρώμα των ομογενοποιημένων κοπράνων, εμποδίζουν την καθίζηση του. Τα αυγά ελμινθίου κατακρημνίζονται με μικρή ποσότητα ινών. Το ίζημα μπορεί να καθαριστεί από τα υπολείμματα που έχουν απομείνει με επεξεργασία με οξικό οξύ 10% και αιθέρα. Σε αυτή την περίπτωση, απομένει μόνο ένα αυγό ελμινθίου, γεγονός που διευκολύνει πολύ την αναγνώρισή τους.

Ερευνητική πρόοδος. 6 ml διαλύματος νιτρικού νατρίου με ειδικό βάρος 1,15 χύνονται σε βαθμονομημένο σωλήνα φυγοκέντρησης. Ρίξτε 7 ml διαλύματος οξικού οξέος 1% σε άλλο δοκιμαστικό σωλήνα. Εισάγεται δείγμα κοπράνων (μέχρι το σημάδι των 7,5 ml για δείγμα 0,5 g και έως 8 ml για δείγμα 1,0 g). Αναμίξτε καλά το δείγμα με μια γυάλινη ράβδο. Περάστε μέσα από ένα χωνί με μια στρώση γάζας, στρώνοντας σε ένα διάλυμα νιτρικού νατρίου. Ο σωλήνας με το στρωματοποιημένο διήθημα φυγοκεντρείται στις 1500-2000 rpm για 5 λεπτά. Απορρίψτε το υπερκείμενο υγρό αναστρέφοντας γρήγορα το σωληνάριο. Προσθέστε 3-4 ml διαλύματος 10% οξικού οξέος και 0,5 ml αιθέρα σε δοκιμαστικό σωλήνα με ίζημα, κλείστε με ελαστικό πώμα και ανακινήστε. Επαναλάβετε τη φυγοκέντρηση για 1 λεπτό. Απορρίψτε το υπερκείμενο. Το ίζημα μεταφέρεται σε γυάλινη πλάκα, καλύπτεται με καλυπτρίδα και εξετάζεται σε μικροσκόπιο.

ΕΛΜΙΝΘΟΛΟΓΙΚΕΣ ΜΕΛΕΤΕΣ ΧΟΛΛΗΣ, ΠΕΡΙΕΧΟΜΕΝΟΥ ΔΩΔΕΚΔΩΔΕΚΤΥΛΟΥ, Πτυέλων, ΑΙΜΑΤΟΣ, ΟΥΡΩΝ ΚΑΙ ΜΥΩΝ

Ανίχνευση αυγών και προνυμφών ελμινθών στο περιεχόμενο του δωδεκαδακτύλου και στη χολή. Η μελέτη του περιεχομένου της χολής και του δωδεκαδακτύλου γίνεται με υποψία ελμινθάσεων του ήπατος και της χοληδόχου κύστης (οπισθορχίαση, κλονορχίαση, δικροκηλίαση) και δωδεκαδάκτυλο(στρινγκυλοειδίαση).

Ερευνητική πρόοδος. Τα περιεχόμενα του δωδεκαδακτύλου και η χολή (τμήματα A, B, C) λαμβάνονται με τον συνήθη τρόπο χρησιμοποιώντας ανίχνευση. Για το τμήμα Β, συνιστάται να αποκτήσετε ένα αντανακλαστικό της χοληδόχου κύστης με την εισαγωγή ενός διαλύματος 33% μέσω ενός καθετήρα θειικό μαγνήσιο. Από το υγρό που ερευνήθηκε, επιλέγονται νιφάδες που επιπλέουν σε αυτό και εξετάζονται με μικροσκόπιο και στη συνέχεια αναμιγνύεται με ίση ποσότητα θειικού αιθέρα. Το μίγμα ανακινείται καλά και φυγοκεντρείται. Το υπερκείμενο απορρίπτεται και ολόκληρο το ίζημα εξετάζεται με μικροσκόπιο.

Ελλείψει πύου και βλέννας, τα περιεχόμενα της χολής και του δωδεκαδακτύλου φυγοκεντρούνται χωρίς ανάμειξη με αιθέρα.

Εξέταση πτυέλων. Στην ελμινθολογική πρακτική, η εξέταση των πτυέλων πραγματοποιείται με σκοπό την εργαστηριακή διάγνωση της παραγονιμίασης. Μερικές φορές, ανιχνεύονται σχιστοσωμικά αυγά, προνύμφες ascaris, στοιχεία της εχινόκοκκου κύστης.

Ένα φυσικό επίχρισμα παρασκευάζεται από πτύελα σε γυάλινη πλάκα, η οποία εξετάζεται σε μικροσκόπιο.

Με άφθονο πύον στα πτύελα, αναμιγνύεται με διάλυμα καυστικής σόδας 0,5% ή καυστικού καλίου, ανακινείται για 5 λεπτά και φυγοκεντρείται. Το ίζημα εξετάζεται μικροσκοπικά.

Μελέτη αίματος. Εξετάζεται αίμα εάν υπάρχει υποψία για φιλαρίαση.

Λόγω του γεγονότος ότι με ορισμένους τύπους φιλαρίασης (λοάωση, wuchereriosis που προκαλείται από ένα υποπεριοδικό στέλεχος), οι προνύμφες (microfilariae) βρίσκονται στο περιφερικό αίμα μόνο κατά τη διάρκεια της ημέρας και με ορισμένους (μπρουγιάση, wuchereriosis που προκαλείται από περιοδικό στέλεχος) - μόνο τη νύχτα, αντίστοιχα, αυτή τη στιγμή πάρτε αίμα για ανάλυση.

Η τεχνική της αιμοληψίας, η παρασκευή σκευασμάτων (λεπτό επίχρισμα και παχιά σταγόνα), η χρώση τους (σύμφωνα με τον Romanovsky) και η μελέτη είναι παρόμοια με εκείνα της εργαστηριακής διάγνωσης της ελονοσίας.

Τα μικροφιλάρια διαφορετικών ειδών διακρίνονται από το μήκος, το πλάτος, την καμπυλότητα του σώματος, την παρουσία ή απουσία καλύμματος, το σχήμα του ουραίο άκρο, τη θέση της πυρηνικής ουσίας στο σώμα και την ουραία περιοχή των προνυμφών.

Ερευνητική πρόοδος. Στη συνέχεια, τα ούρα προστατεύονται για τουλάχιστον 30 λεπτά ανώτερο στρώμαστραγγίζουμε αφήνοντας 10-15 ml ιζήματος, τα οποία χύνονται σε σωληνάρια φυγοκέντρησης και φυγοκεντρούνται για 1-2 λεπτά. Μετά την αποστράγγιση του υπερκειμένου, το ίζημα μεταφέρεται σε γυάλινη πλάκα και εξετάζεται σε μικροσκόπιο.

ΜΕΛΕΤΗ ΜΥΙΚΗΣ ΒΙΟΠΤΙΑΣ

Τριχινοσκοπική μέθοδος. Η ανάγκη για τη μελέτη δειγμάτων βιοψίας των μυών του ασθενούς προκύπτει όταν υπάρχει υποψία τριχίνωσης.

Γίνεται βιοψία σύμφωνα με τους γενικούς κανόνες. Ο δελτοειδής μυς συνήθως υποβάλλεται σε βιοψία. Με παθοανατομική εξέταση είναι δυνατή η βιοψία των μυών του διαφράγματος, του οισοφάγου, της γλώσσας, των μασητικών και μεσοπλεύριων μυών, των καμπτήρων των άκρων, των μυών. βολβός του ματιού, καθώς προσβάλλονται πιο έντονα από τις προνύμφες Trichinella.

Στο εργαστήριο, ένα κομμάτι μυός που υποβάλλεται σε βιοψία κόβεται σε πολύ μικρά κομμάτια (μικρότομο), τα οποία τοποθετούνται ανάμεσα σε δύο ποτήρια, συνθλίβοντας τις μυϊκές ίνες και εξετάζονται στο μικροσκόπιο. Επί του παρόντος, ειδικά μικροσκόπια, τριχινελοσκόπια, χρησιμοποιούνται ευρέως για το σκοπό αυτό.

Στην περίπτωση της τριχινώσεως, η τριχινοσκόπηση κατά μήκος των μυϊκών ινών αποκαλύπτει έντονα οβαλ σχημα(παρόμοια με λεμόνι) κάψουλες τριχίνωσης. μέση αξίακάψουλες στον άνθρωπο είναι 0,4 x 0,26 mm. Η κάψουλα, κατά κανόνα, περιέχει μια τριχινέλλα διπλωμένη σπειροειδή σε 2,5 στροφές. Με υψηλή ένταση εισβολής, μια κάψουλα μπορεί να περιέχει 2 ή 3 προνύμφες. Οι μυϊκές ίνες που γειτνιάζουν με την κάψουλα χάνουν την εγκάρσια ραβδώσεις τους και αποκτούν ομοιογενή εμφάνιση.

Με τον ίδιο τρόπο εξετάζονται το κρέας ή τα προϊόντα κρέατος που προκάλεσαν τη μόλυνση.

Μέθοδος Μυϊκής Πέψης. Η μέθοδος είναι πιο αποτελεσματική.

Ερευνητική πρόοδος. Οι μελετημένοι μύες συνθλίβονται λεπτά και γεμίζουν με τεχνητό γαστρικό υγρόσε αναλογία 1:15-20. Το προκύπτον μίγμα τοποθετείται σε θερμοστάτη στους 37°C για 12-16 ώρες.Μετά από αυτό το διάστημα, το ίζημα υποβάλλεται σε μικροσκόπιο, στο οποίο οι ελεύθερες προνύμφες Trichinella βρίσκονται ανάμεσα στη μάζα των υπολειμμάτων των χωνευμένων μυϊκών ινών.

Ο τεχνητός γαστρικός χυμός μπορεί να αγοραστεί σε φαρμακείο ή να παρασκευαστεί σε εργαστήριο. Για να γίνει αυτό, προσθέστε 10 ml πυκνού υδροχλωρικού οξέος σε 1 λίτρο απεσταγμένου νερού. πριν από τη χρήση, προστίθενται 30 g πεψίνης σε 1 λίτρο αραιωμένου οξέος.

ΠΟΣΟΤΙΚΕΣ ΜΕΘΟΔΟΙ ΕΡΕΥΝΑΣ

Ποσοτικές Μέθοδοιχρησιμοποιούνται μελέτες για τον προσδιορισμό της έντασης της εισβολής, την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας διαφόρων ανθελμινθικών φαρμάκων, τον προσδιορισμό της ποιότητας της αποπαρασίτωσης, την παρακολούθηση των συνεχιζόμενων μαζικών θεραπευτικών και προληπτικών μέτρων κ.λπ.

Ο ποσοτικός προσδιορισμός των αυγών ελμινθών πραγματοποιείται με δύο μεθόδους: τη μέθοδο Stoll και τη μέθοδο των Krasilnikov και Volkova (1974).

Μέθοδος Stoll. Για τη διεξαγωγή της μελέτης, πρέπει να έχετε μικροσκόπιο, γυάλινη φιάλη με ένδειξη 56 και 60 ml, κύλινδρο μέτρησης, γυάλινες χάντρες, ελαστικό πώμα για τη φιάλη, βαθμονομημένες πιπέτες, γυάλινες πλάκες και διάλυμα υδροξειδίου του νατρίου 0,4%.

Ερευνητική πρόοδος. Χύστε αποσυνηθισμένο διάλυμα υδροξειδίου του νατρίου (περίπου συγκέντρωση 0,4%) στη φιάλη με δοσομετρικό κύλινδρο μέχρι την ένδειξη των 56 ml και προσθέστε περιττώματα μέχρι η στάθμη του υγρού να φτάσει τα 60 ml (δηλαδή 4 ml περιττωμάτων). Το μείγμα ανακινείται καλά με γυάλινες χάντρες για 1 λεπτό, κλείνοντας το δοχείο με λαστιχένιο πώμα (μπορείτε να ανακατέψετε και με ένα ξυλάκι). Αμέσως μετά την ανακίνηση, συλλέγονται 0,075 ml του μείγματος με βαθμονομημένη πιπέτα (περιέχει 0,005 ml περιττωμάτων), μεταφέρονται σε γυάλινη πλάκα και μετράται ο αριθμός των αυγών στο παρασκεύασμα στο μικροσκόπιο. Για να προσδιοριστεί ο αριθμός των αυγών σε 1 g περιττωμάτων, ο αριθμός που βρέθηκε πολλαπλασιάζεται επί 200.

Η σύγκριση του αριθμού των αυγών στο παρασκεύασμα, που βρέθηκαν στον ασθενή πριν και μετά τη θεραπεία, μας επιτρέπει να κρίνουμε την αποτελεσματικότητα της αποπαρασίτωσης.

Η μέθοδος του Stoll είναι απλή, δίνει συγκρίσιμα αποτελέσματαμε όλες τις ελμινθιάσες, τα παθογόνα των οποίων εκκρίνουν συστηματικά ωάρια στα έντερα του ασθενούς. Ωστόσο, το μειονέκτημα αυτής της μεθόδου είναι το σχετικά χαμηλή ευαισθησία, ιδιαίτερα σε χαμηλή ένταση εισβολής.

Μέθοδος Krasilnikov-Volkova. Κατά την εξέταση αυτής της μεθόδου, τουλάχιστον 1 g περιττωμάτων αναμειγνύεται σε μια γυάλινη φιάλη ή ένα μεγάλο δοκιμαστικό σωλήνα με διάλυμα Lotus 1% (ή διάλυμα 1,5% Extra) σε αναλογία 1:10. Το εναιώρημα ανακινείται καλά μέχρι να σχηματιστεί ένα ομοιογενές εναιώρημα, στη συνέχεια 0,1 ml του εναιωρήματος (που ισοδυναμεί με 0,01 g περιττωμάτων) συλλέγεται γρήγορα με μια βαθμονομημένη πιπέτα και μεταφέρεται σε μια γυάλινη πλάκα. Το σκεύασμα καλύπτεται με γυαλί κάλυψης ή πλάκα σελοφάν (20 x 30 mm), παλαιωμένο για τουλάχιστον μία ημέρα σε ποσοστό 50%. υδατικό διάλυμαγλυκερίνη.

Μετρήστε τον αριθμό των αυγών σε όλη την προετοιμασία. Για να υπολογίσετε τον αριθμό των αυγών σε 1 g περιττωμάτων, ο αριθμός που προκύπτει πρέπει να πολλαπλασιαστεί επί 100.

Αυτή η μέθοδος έχει πολλά πλεονεκτήματα σε σχέση με τη μέθοδο Stoll. Πρώτον, είναι πιο ευαίσθητο και σας επιτρέπει να ανιχνεύσετε έλμινθους πότε χαμηλό βαθμόεισβολές. Δεύτερον, είναι πολύ βολικό για μαζικές εξετάσεις, καθώς τα διαλύματα απορρυπαντικών, ως συντηρητικά για αυγά ελμινθών, καθιστούν δυνατή τη διεξαγωγή μελετών από όχι αρκετά φρέσκο ​​υλικό. Ωστόσο προαπαιτούμενοΑυτή είναι η συλλογή των κοπράνων απευθείας στο διάλυμα απορρυπαντικού.

Για ποσοτική έρευναμπορεί να χρησιμοποιηθεί οποιαδήποτε από τις περιγραφόμενες ενοποιημένες ποιοτικές μεθόδους που βασίζονται στην αρχή των επιπλέοντων αυγών. Αλλά σε αυτή την περίπτωση, η ίδια ποσότητα περιττωμάτων, ο ίδιος όγκος διαλύματος επίπλευσης θα πρέπει να ληφθούν για ανάλυση. Ο υπολογισμός του βαθμού προσβολής μπορεί να γίνει, γνωρίζοντας τον αριθμό των αυγών σε 1 g κόπρανα, σύμφωνα με τον παρακάτω πίνακα.

Ένταση εισβολής ανάλογα με τον αριθμό των ωαρίων ελμινθών

σε 1 g κόπρανα

ΟΡΡΟΛΟΓΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΗ

Αυτές οι μέθοδοι, που βασίζονται στην ανίχνευση ειδικών αντισωμάτων στον ορό του αίματος, χρησιμοποιούνται για διαγνωστικούς και προληπτικούς σκοπούς.

Οι ορολογικές μέθοδοι περιλαμβάνουν:

Αντίδραση κατακρήμνισης δακτυλίου (RCP) (τριχίνωση, κυστικέρκωση).

Αντίδραση κατακρήμνισης δακτυλίου σε δοκιμαστικούς σωλήνες στο κρύο (τριχίνωση, κυστικέρκωση).

Αντίδραση μικροκατακρήμνισης σε ζωντανές προνύμφες (τριχίνωση, ασκαρίαση).

Η αντίδραση της έμμεσης αιμοσυγκόλλησης (RIHA) (τριχίνωση, εχινοκοκκίαση, κυψελιδική, κυστικέρκωση κ.λπ.);

Αντίδραση συγκόλλησης λατέξ (RAL) (εχινοκοκκίαση, κυψελιδική, τριχίνωση, teniarinhoz, κ.λπ.).

Αντίδραση στερέωσης συμπληρώματος (RCC) (τριχίνωση, εχινόκοκκωση, κυστικέρκωση).

Η αντίδραση των επισημασμένων με ένζυμα αντισωμάτων (REMA) (εχινοκόκκωση, ογκοκοκκίαση, σχιστοσωμίαση, τριχίνωση, τοξοκαρίαση).

Συνδεδεμένη ανοσοπροσροφητική δοκιμασία(ELISA) (τριχίνωση, οπισθορχίαση, τοξοκαρίαση, τοξοπλάσμωση κ.λπ.).

Για τη δημιουργία ορολογικών αντιδράσεων, παράγονται τυπικά αντιγόνα ή παρασκευάζονται ανεξάρτητα (για παράδειγμα, από εχινόκοκκους κύστεις προβάτων), παράγονται ειδικά συστήματα δοκιμών για ELISA.

Ειδικές Μέθοδοιέρευνα για την εντεροβίωση, την ταενιάρχωση, την ταενίαση

Ξύσιμο από περιπρωκτικές πτυχές. Για να αποκτήσετε απόξεση από τις περιπρωκτικές πτυχές, μπορείτε να χρησιμοποιήσετε μια ξύλινη σπάτουλα, λωρίδα σελοφάν, χαρτί ή ταινία κυτταρίνης, μπαστούνια ματιών με ειδική κολλητική στρώση:

α) ξύσιμο με ξύλινη σπάτουλα (η σπάτουλα είναι πεπλατυσμένο σπίρτο ή ραβδί) βρεγμένη με διάλυμα γλυκερίνης 1% (ή διάλυμα 0,5% πίνοντας σόδα), πραγματοποιείται με ελαφριά απόξεση από την επιφάνεια των περιπρωκτικών πτυχών γύρω από ολόκληρη την περιφέρεια του πρωκτού. Η προκύπτουσα απόξεση μεταφέρεται με την άκρη της καλυπτρίδας από το άκρο της σπάτουλας σε μια γυάλινη πλάκα σε μια σταγόνα διαλύματος γλυκερίνης 50%, καλυμμένη με την ίδια καλυπτρίδα και υποβάλλεται σε μικροσκόπιο. Το μειονέκτημα της μεθόδου είναι η ανεπαρκής ανίχνευση αυγών και ερεθιστικό αποτέλεσμα;

β) σύμφωνα με τη μέθοδο Torgushin, γίνεται πλύση με βαμβακερή μπατονέτα σε ξύλινη ή άλλη σπάτουλα βρεγμένη με διάλυμα γλυκερίνης 50% και παρασκευάζεται επίχρισμα σε γυάλινη πλάκα σε μια σταγόνα γλυκερίνης.

γ) σύμφωνα με τη μέθοδο Kevorkova, περίπου 5 ml χύνονται σε ένα σωλήνα φυγοκέντρησης βρασμένο νερό, τοποθετήστε μια σπάτουλα (ξυλάκι) με μια μπατονέτα μέσα. Πριν από τη λήψη του υλικού, το στυλεό πιέζεται ελαφρά στο εσωτερικό τοίχωμα του δοκιμαστικού σωλήνα, σκουπίζονται οι περιπρωκτικές πτυχές με αυτό και η σπάτουλα με το στυλεό εισάγεται στον δοκιμαστικό σωλήνα. Το ταμπόν στον δοκιμαστικό σωλήνα ανακινείται καλά, το πλύσιμο φυγοκεντρείται για 3 λεπτά και το προκύπτον ίζημα εξετάζεται σε μικροσκόπιο.

δ) ξύσιμο με κολλητική ταινία κατά Graham. Μέρος κολλητικής ταινίας (διαφανής ταινία πολυαιθυλενίου με κολλητική στρώση για παιδική δημιουργικότητα, αλλά είναι καλύτερο να χρησιμοποιήσετε το λειτουργικό φιλμ LPO-1, LPO-2) μήκους 8-10 cm, κολλημένο με κολλώδες στρώμα στις περιπρωκτικές πτυχές του δέρματος, κρατώντας τις άκρες και στη συνέχεια να το μεταφέρετε στη γυάλινη τσουλήθρα με ένα κολλώδες στρώμα προς τα κάτω (τα άκρα της ταινίας που εκτείνονται πέρα ​​από τις άκρες του γυαλιού κόβονται), τα γυαλιά αριθμούνται και τα δεδομένα του ασθενούς και ο αριθμός γυαλιού καταγράφονται στο ημερολόγιο. Στο εργαστήριο, η ταινία ξεφλουδίζεται στο ένα άκρο σε μεγάλη απόσταση, 1-2 σταγόνες στάζουν κάτω από αυτήν λάδι βαζελίνηςή γλυκερίνη (για την εξάλειψη οπτικών ελαττωμάτων) και μικροσκοπικά?

ε) ξύσιμο με γυάλινες ράβδους ματιών, η επιφάνεια των οποίων είναι επικαλυμμένη με ειδική συγκολλητική σύνθεση. Τα eye sticks τοποθετούνται σε ειδικό τρίποδο. Το υλικό λαμβάνεται με επαφή του επίπεδου τμήματος της σπάτουλας με το δέρμα του περιπρωκτικού ανοίγματος. Στη συνέχεια το ραβδί στερεώνεται ξανά σε τρίποδο για μεταφορά. Η μικροσκόπηση πραγματοποιείται απευθείας στη σπάτουλα και στις δύο πλευρές (χωρίς διαφάνειες και καλυπτρίδες) με προκαταρκτική στερέωση σε κασέτες σε χαμηλή μεγέθυνση (προσοφθάλμιο x 10, αντικειμενικός φακός x 8). Στο τέλος της εργασίας, τα ξυλάκια απολυμαίνονται με βρασμό σε διάλυμα σαπουνιού και το τρίποδο και οι κασέτες επεξεργάζονται με οινόπνευμα και πλένονται με διάλυμα σαπουνάδας σόδας. Σύνθεση κόλλας: cleol - 10 g, καστορέλαιο- 2,5 g, αιθυλαιθέρας - 5 g, αιθανόλη 96% - 2,5 γρ.

Οι σπάτουλες βυθίζονται σε διάλυμα κόλλας και στη συνέχεια ξηραίνονται στον αέρα σε θερμοκρασία δωματίου. Η αυτοκόλλητη μεμβράνη που σχηματίζεται στην επιφάνεια παραμένει για αρκετές ημέρες.

Η μέθοδος είναι βολική για μαζική εξέταση του παιδικού πληθυσμού για εντεροβίωση και του ενήλικου πληθυσμού για τενιιδώσεις.

Εκτός από τη μέθοδο απόξεσης για τενιαρίγχωση και τενίαση, χρησιμοποιούνται επίσης η μέθοδος έρευνας και η μακροσκοπική μέθοδος που περιγράφονται παραπάνω (όταν ανιχνεύονται τμήματα).

Ειδικές μέθοδοι έρευνας για την ισχυροειδίαση

Η μέθοδος αιθέρα-οξικού χρησιμοποιείται για την ανίχνευση αυγών (βλέπε παραπάνω) και η μέθοδος Berman για την ανίχνευση προνυμφών στα κόπρανα.

Μέθοδος Berman. Εξετάστε τα φρέσκα κόπρανα, καλύτερα μετά τη λήψη ενός καθαρτικού. Δείγμα κοπράνων 5 g τοποθετείται σε μεταλλικό κόσκινο (το πλέγμα είναι επενδεδυμένο εσωτερικά με δύο στρώσεις γάζας) σε ένα γυάλινο χωνί στερεωμένο σε τρίποδο. Ένας ελαστικός σωλήνας με σφιγκτήρα τοποθετείται στο κάτω άκρο της χοάνης (συσκευή Berman).

Το πλέγμα με τα κόπρανα ανασηκώνεται και το νερό που έχει θερμανθεί στους 40-50 ° C χύνεται στη χοάνη με τέτοιο τρόπο ώστε Κάτω μέροςτο πλέγμα βυθίστηκε σε νερό και τα κόπρανα καλύφθηκαν εντελώς με νερό. Μετά από 2-4 ώρες, ο σφιγκτήρας στον ελαστικό σωλήνα ανοίγει γρήγορα και το υγρό κατεβαίνει στον σωλήνα φυγοκέντρησης. Μετά τη φυγοκέντρηση (1-2 λεπτά), το άνω μέρος του υγρού αποστραγγίζεται γρήγορα και το ίζημα σε ποσότητα 1 ml εφαρμόζεται σε λεπτή στρώση σε γυάλινη πλάκα και μικροσκοπικά υπό χαμηλή μεγέθυνση του μικροσκοπίου.

Μέθοδος IMP και TM. Ένα μέρος κοπράνων σε μέγεθος καρυδιού τοποθετείται σε ένα χημικό ποτήρι ζέσεως, χύνεται με ζεστό αλατούχο διάλυμα 40 ° C, έτσι ώστε τα κόπρανα να καλύπτονται με διάλυμα, αφήνονται για 20 λεπτά. Μετά από 20 λεπτά, το υγρό χύνεται σε ένα τρυβλίο Petri και παρατηρείται κάτω από το διοπτρικό μικροσκόπιο MBS.

Για τη διάγνωση της στρογγυλοειδίασης, ειδικά για την παρακολούθηση της αποτελεσματικότητας της θεραπείας, συνιστάται ο συνδυασμός της μεθόδου Berman με τη μελέτη του περιεχομένου του δωδεκαδακτύλου.

Ειδικές μέθοδοι έρευνας για νηματώσεις

Νηματώδεις

Ασκαρίαση

Στην ιστορία, εφιστάται η προσοχή στη στάση για την κηπουρική, την κηπουρική. Τρώγοντας ωμά λαχανικά, σαλάτες από αυτά τα λαχανικά.

Κλινικές ΕΚΔΗΛΩΣΕΙΣ πρώιμη φάσηΗ ασκαρίαση προκαλείται από αλλεργικές αλλαγές στο σώμα. Το πρώιμο ή μεταναστευτικό προνυμφικό στάδιο της ασκαρίασης εμφανίζεται συχνά παρουσία πυρετού με θερμοκρασία σώματος έως 38 ° και άνω, με σύμπλεγμα συμπτωμάτων πνευμονικής βλάβης και παρουσία σοβαρής ηωσινοφιλίας του αίματος. Στις περισσότερες περιπτώσεις, στα παιδιά, τα πρώτα σημάδια της νόσου είναι αδιαθεσία, αδυναμία, επαναλαμβανόμενοι πονοκέφαλοι, εφίδρωση και μερικές φορές πόνοι στους μύες και στις αρθρώσεις. Συχνά υπάρχει άφθονο εξάνθημα τύπου κνίδωσης με έντονο ή μέτριο κνησμό. Η διάγνωση της πρώιμης φάσης επιβεβαιώνεται με ακτινολογικές μελέτες για την παρουσία πτητικών σωματιδίων στους πνεύμονες. ηωσινόφιλα διηθήματαΛέφλερ. Τα νωπά επιχρίσματα πτυέλων συχνά δείχνουν ηωσινόφιλα κύτταρα, ερυθρά αιμοσφαίρια, κρυστάλλους Charcot-Leiden και προνύμφες ascaris.

Στο εντερικό νοητό στάδιο της ασκαρίασης, υπάρχει ένας συνδυασμός εκδηλώσεων από το γαστρεντερικό και ασθενικά σύνδρομα, εντεροκολική συμπτώματα πόνου. Στα παιδιά, υπάρχει συχνά μείωση του βάρους, μερικές φορές αρκετά σημαντική. Ναυτία, αυξημένη σιελόρροια, ευερεθιστότητα, καθυστερημένη ψυχοκινητική ανάπτυξη, μειωμένη νοημοσύνη.

Για εργαστηριακή διάγνωση του εντερικού st

Τα πιο απλά χωρίζονται σε 4 κατηγορίες:

Κατά τη διάρκεια της ενστάσεως, ο μικροοργανισμός αποκτά στρογγυλό σχήμακαι καλυμμένο με προστατευτικό περίβλημα. Με τη μορφή κύστης, τα πρωτόζωα γίνονται λιγότερο ευαίσθητα δυσμενείς παράγοντεςπεριβάλλον.

Η έρευνα μπορεί να περιλαμβάνει:

Σημείωση:Υπάρχουν πολλές ποικιλίες διαγνωστικών, θα εξετάσουμε εκείνους τους τύπους που είναι πιο συνηθισμένοι στην κλινική εργαστηριακή πρακτική.

Ιδιωτικοί τύποι διαγνωστικών

Σε κάθε συγκεκριμένη περίπτωση, ο εργαστηριακός βοηθός είναι επιφορτισμένος με την εύρεση ενός συγκεκριμένου παθογόνου, μερικές φορές εντοπίζονται και άλλα μαζί με το κύριο.

Υπάρχουν 6 είδη αυτού του μικροοργανισμού ικανά να ζουν στο ανθρώπινο έντερο. Κλινική σημασία έχει μόνο η αμοιβάδα δυσεντερίας, η οποία εμφανίζεται σε βλαστική μορφή και με τη μορφή κύστεων.

Επιπλέον, χρησιμοποιούνται ανοσολογικές μέθοδοι:

• Έμμεσος ανοσοφθορισμός;
• έμμεση συγκόλληση (PHA);
• ακτινική ανοσοδιάχυση.

Σημείωση: ορολογικές μεθόδουςείναι μη ενημερωτικές και χρησιμοποιούνται μόνο ως προσθήκη στα κύρια σε αμφίβολες περιπτώσεις.

Διάγνωση βλεφαρίδων (ακροειδών)

Η παθογόνος μορφή των μικροοργανισμών αυτού του γένους είναι τα balantidia. Αυτό είναι ένα μικρόβιο που προκαλεί βαλαντιδίαση - μια ασθένεια που συνοδεύεται από μια ελκώδη διαδικασία του παχέος εντέρου. Ο αιτιολογικός παράγοντας βρίσκεται σε ένα εγγενές επίχρισμα με τη μορφή βλαστικής μορφής και κύστης. Το υλικό για το επίχρισμα (περιττώματα και βλέννα) λαμβάνεται κατά τη διάρκεια σιγμοειδοσκόπησης και σπέρνεται σε ειδικά μέσα.

Διαγνωστικά μαστιγωτών (λεϊσμανία, γιάρδια, τρυπανοσώματα, τριχομονάδες)

Η λεϊσμανία, το τρυπανόσωμα, η γιάρδια, οι τριχομονάδες είναι επικίνδυνες για τον άνθρωπο.

Leishmania- μικρόβια προκαλώντας λεϊσμανίαση, εξετάζονται σε επιχρίσματα αίματος, υλικά μυελός των οστών, ξύσεις από διηθήσεις δέρματος. Σε ορισμένες περιπτώσεις, στη διάγνωση της Λεϊσμανίας, χρησιμοποιείται σπορά σε θρεπτικά μέσα.

Τρυπανοσώματα– παθογόνα ασθένεια του ύπνου(Αμερικανική/Αφρικανική τρυπανοσωμίαση ή νόσος Chagas).

Η αφρικανική έκδοση ορίζεται στο αρχική περίοδοστη μελέτη του περιφερικού αίματος. Παθολογικά μικρόβια κατά την εξέλιξη της νόσου εντοπίζονται στο υλικό των παρακεντήσεων των λεμφαδένων, σε προχωρημένα στάδια - στο εγκεφαλονωτιαίο υγρό.

Για τη διάγνωση των τρυπανοσωμάτων σε περίπτωση ύποπτης νόσου Chagas, το υλικό δοκιμής εξετάζεται κάτω από μικροσκόπιο σε χαμηλή μεγέθυνση. Σε αυτή την περίπτωση, οι κηλίδες και μια παχιά σταγόνα είναι προχρωματισμένα.

Τριχομονάς(εντερικά, στοματικά) ανιχνεύονται με μικροσκοπία υλικών που λαμβάνονται από τους προσβεβλημένους βλεννογόνους.

Αναγνώριση σπορόζωων (πλασμώδιο ελονοσίας, αιτιολογικός παράγοντας κοκκίδωσης κ.λπ.)

Το πιο κοινό και επικίνδυνο είδος για τον άνθρωπο είναι το πλασμώδιο της ελονοσίας, το οποίο έχει 4 κύριες ποικιλίες του παθογόνου: παθογόνο τριήμερη ελονοσία, τετραήμερη ελονοσία, τροπική ελονοσίακαι ελονοσία οβάλ.

Η σεξουαλική ανάπτυξη του Plasmodium (σπορογονία) λαμβάνει χώρα στα κουνούπια Anopheles. Άφυλη (σχιζογονία ιστών και ερυθροκυττάρων) - στον ηπατικό ιστό και στα ανθρώπινα ερυθροκύτταρα. Αυτά τα χαρακτηριστικά του κύκλου ζωής πρέπει να λαμβάνονται υπόψη κατά τη διάγνωση του πλασμωδίου της ελονοσίας.

Έτσι, στο αίμα ενός πρόσφατα άρρωστου ασθενούς, μπορούν να βρεθούν γεννητικά κύτταρα του κύκλου σπορογονίας. Αλλά στο αποκορύφωμα των κρίσεων ελονοσίας, οι σχιζόντες εμφανίζονται σε μεγάλους αριθμούς στο αίμα.

Επιπλέον, σε διαφορετικές φάσεις ελονοσιακός πυρετόςεμφανίζομαι διάφορες μορφέςΠλασμώδιο:

• Κατά την περίοδο της ψύχρας, το αίμα γεμίζει με μεροζωίτες, ένα είδος σχιζόντη.
• στο ύψος της θερμοκρασίας, τροφοζωίτες σε σχήμα δακτυλίου συσσωρεύονται στα ερυθροκύτταρα.
• η μείωση της θερμοκρασίας χαρακτηρίζεται από την επικράτηση των αμοιβοειδών τροφοζωιτών.
• σε περιόδους φυσιολογικής κατάστασης, το αίμα περιέχει ενήλικες μορφές σχιζόντων.

Η μελέτη του αιτιολογικού παράγοντα της ελονοσίας (πλασμώδιο ελονοσίας) πραγματοποιείται σε επίχρισμα και σε παχιά σταγόνα.

Σημείωση:η διάγνωση της ελονοσίας στη μελέτη επιχρισμάτων και παχύρρευστων σταγόνων αίματος είναι μερικές φορές λανθασμένη. Τα αιμοπετάλια του αίματος σε ορισμένες περιπτώσεις μπορεί λανθασμένα να ταξινομηθούν ως παθογόνα ελονοσίας. Επίσης, θραύσματα λευκοκυττάρων και άλλων κυττάρων μερικές φορές προσομοιώνουν το πλασμώδιο.

Βασικές μέθοδοι έρευνας για πρωτόζωα

Ας ρίξουμε μια σύντομη ματιά στις πιο κοινές μεθόδους έρευνας για την παρουσία πρωτοζώων.

Διάγνωση πρωτοζώων με χρήση φυσικού επιχρίσματος και επιχρίσματος βαμμένου με διάλυμα Lugol (στα κόπρανα)

Το φάρμακο παρασκευάζεται από γαλάκτωμα περιττωμάτων σε ισοτονικό διάλυμα. Δύο σταγόνες χλωριούχου νατρίου και διαλύματος Lugol εφαρμόζονται σε μια γυάλινη πλάκα. Το υλικό δοκιμής προστίθεται και στις δύο συνθέσεις με ένα ξύλινο ραβδί και, αφού καλυφθεί με γυαλί, παρατηρείται σε διαφορετικές αναλύσεις του μικροσκοπίου.

Σύμφωνα με ορισμένα σημάδια, τα πρωτόζωα που βρέθηκαν είναι καταχωρημένα. Για ακρίβεια, παρασκευάζονται 2-3 παρασκευάσματα από ένα υλικό. Σε αμφίβολες περιπτώσεις, η ανάλυση επαναλαμβάνεται πολλές φορές σε διάστημα 2-3 εβδομάδων.

Η μέθοδος μπορεί να ανιχνεύσει φυτικές και κυστικές μορφές:

• Λάμπια?
• balantidia;
• αμοιβάδα δυσεντερίας.

Μαζί με τις παθογόνες μορφές προσδιορίζονται και τα μη παθογόνα πρωτόζωα. Οι υγιείς φορείς έχουν επίσης αυλικές και κυστικές μορφές.

Σπουδαίος:έρευνα για την αποφυγή ανακρίβειων και λαθών θα πρέπει να διεξάγεται επανειλημμένα.

Το αποτέλεσμα της διάγνωσης των πρωτοζώων με τη μέθοδο ενός εγγενούς και χρωματισμένου επιχρίσματος πρέπει να περιέχει περιγραφή της μορφής του παθογόνου (ημιδιαφανές, κύστη, ιστός).

Απαιτήσεις έρευνας:

• το υλικό που λαμβάνεται για ανάλυση (υγρά κόπρανα) εξετάζεται το αργότερο 30 λεπτά μετά την αφόδευση.
• Τα σχηματισμένα κόπρανα πρέπει να διαγνωστούν εντός 2 ωρών μετά την αφόδευση.
• το υλικό δεν πρέπει να περιέχει ακαθαρσίες ( απολυμαντικά, νερό, ούρα);
• Μόνο ξύλινα ραβδιά χρησιμοποιούνται για την εργασία με το υλικό, τα γυάλινα δεν είναι κατάλληλα λόγω της ολίσθησης της βλέννας.
• Τα ραβδιά πρέπει να καίγονται αμέσως μετά τη χρήση.

Μέθοδος διατήρησης (εξέταση κοπράνων) στη διάγνωση πρωτοζώων

Η μελέτη πραγματοποιείται με στερέωση των πρωτόζωων με συντηρητικό. Η διαφορά μεταξύ αυτής της μεθόδου και της προηγούμενης είναι ότι τα συντηρητικά σας επιτρέπουν να αποθηκεύσετε το φάρμακο για μεγάλο χρονικό διάστημα.

Χρησιμοποιημένα συντηρητικά:

• Χειράμαξα. Περιέχει συντηρητικά συστατικά: 0,7 ml χλωριούχο νάτριο, 5 ml φορμαλίνη, 12,5 ml αλκοόλη 96%, 2 g φαινόλη και 100 ml απεσταγμένο νερό. Σύνθεση χρωματισμού: 0,01% διάλυμα θειονίνης (αζούρ).
• Η λύση του Safarliev. Σύνθεση: 1,65 g θειικό ψευδάργυρο, 10 ml φορμαλίνη, 2,5 g κρυσταλλική φαινόλη, 5 ml οξικό οξύ, 0,2 g μπλε του μεθυλενίου, 100 ml νερό. Αυτό το συντηρητικό χρησιμοποιείται σε περιπτώσεις όπου το υλικό πρέπει να αποθηκευτεί για περισσότερο από ένα μήνα.

Τα άδεια μπουκάλια γεμίζονται με συντηρητικό, το υλικό μεταφέρεται σε αυτά, σε αναλογίες 3: 1 και, εάν είναι απαραίτητο, προστίθεται μια βαφή. Η αξιολόγηση των αποτελεσμάτων πραγματοποιείται στη μελέτη 2-3 φαρμάκων.

Μέθοδος εμπλουτισμού φορμαλίνης-αιθέρα (ανάλυση για την παρουσία πρωτοζώων στα κόπρανα)

Αυτή η διαγνωστική μέθοδος σας επιτρέπει να διαχωρίσετε και να συγκεντρώσετε κύστεις πρωτόζωων. Για την ανάλυση απαιτούνται τα ακόλουθα συστατικά: φορμαλίνη (10 ml), 0,85 g ισοτονικού διαλύματος, απεσταγμένο νερό, θειικός αιθέρας, διάλυμα Lugol.

Ένα μείγμα βιοϋλικού με τα αναγραφόμενα υγρά αναμειγνύεται και φυγοκεντρείται. Το ίζημα που λαμβάνεται στον πυθμένα του σωλήνα χρωματίζεται με διάλυμα Lugol και εξετάζεται για την παρουσία κύστεων και βλαστικών μορφών.

Μέθοδος ανίχνευσης λεϊσμανίας (επίχρισμα μυελού των οστών)

Για τη διάγνωση της λεϊσμανίασης, χρησιμοποιούνται αντιδραστήρια: μείγμα Nikiforov (θειικός αιθέρας και αιθυλική αλκοόλη), ρυθμιστικό φωσφορικών, Azur-eosin σύμφωνα με τον Romanovsky.

Η ουσία του μυελού των οστών τοποθετείται πολύ προσεκτικά σε μια γυάλινη πλάκα μετά από ειδική προετοιμασία. Χρησιμοποιείται μικροσκόπιο με σύστημα εμβάπτισης.

ΣΕ οξεία περίοδοςασθένειες στα σημεία εντόπισαν μεγάλο αριθμό Leishmania.

Σημείωση:Ωρες ωρες κύτταρα του αίματοςμπορεί να μοιάζει με επεξεργασμένη λεϊσμανία, επομένως είναι πολύ σημαντικό για τον τεχνικό εργαστηρίου να είναι προσεκτικός και να έχει επαρκή εμπειρία για αυτοεξέταση.

Μέθοδος ανίχνευσης λεϊσμανίας σε επίχρισμα από διήθηση δέρματος

Τα απαιτούμενα αντιδραστήρια είναι παρόμοια με την προηγούμενη ανάλυση.

Το υλικό δοκιμής λαμβάνεται από το υπάρχον φυματικό ή ελκώδες περιεχόμενο. Η απόξεση με υποψία λεϊσμανίασης γίνεται πολύ προσεκτικά με νυστέρι, χωρίς αίμα. Στη συνέχεια το παρασκεύασμα παρασκευάζεται σε γυαλί. Για την ακρίβεια των αποτελεσμάτων που λαμβάνονται, εξετάζονται ταυτόχρονα διάφορα παρασκευάσματα.

Με την παρουσία μιας ασθένειας, μεταξύ των μακροφάγων, των ινοβλαστών και των λεμφικών κυττάρων που υπάρχουν στο υλικό δοκιμής, προσδιορίζεται επίσης η Leishmania.

Μέθοδος απομόνωσης καθαρής καλλιέργειας Leishmania που λαμβάνεται με απόξεση παθολογικών ιστών

Με αυτή τη μέθοδο διάγνωσης οι απλούστερες αποξέσεις ιστών τοποθετούνται σε ειδικό θρεπτικό μέσο στο οποίο αναπαράγεται ενεργά η Leishmania.

Πριν από την απόξεση, το δέρμα επεξεργάζεται προσεκτικά με οινόπνευμα, στη συνέχεια γίνεται μια τομή στο φυμάτιο, από το κάτω μέρος του οποίου αφαιρείται το περιεχόμενο και τοποθετείται σε δοκιμαστικό σωλήνα με το μέσο. Το υλικό λαμβάνεται πολλές φορές και στη συνέχεια τοποθετείται σε διαφορετικούς δοκιμαστικούς σωλήνες. Στη συνέχεια, σε θερμοστάτη σε θερμοκρασία 22-24 βαθμών, γίνεται καλλιέργεια. Τα αποτελέσματα αξιολογούνται σε μικροσκόπιο. Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιείται όταν άλλες, φθηνότερες και ταχύτερες μέθοδοι διάγνωσης πρωτοζώων είναι αναποτελεσματικές.

Μπορείτε να δείτε πώς οι δοκιμές για την παρουσία πρωτοζώων αποκρυπτογραφούνται στην πράξη με μια σταγόνα αίματος παρακολουθώντας μια ανασκόπηση βίντεο:

Lotin Alexander, ιατρικός αρθρογράφος

Τα κόπρανα εξετάζονται με δύο τρόπους:

1. Μακροσκοπικό - βρείτε ελμίνθους, τα κεφάλια τους, τμήματα, υπολείμματα στροβιλίων. Μικρές μερίδες κοπράνων αναμειγνύονται με νερό σε ένα επίπεδο λουτρό ή τρυβλίο Petri και βλέπονται σε καλό φως σε σκούρο φόντο, χρησιμοποιώντας μεγεθυντικό φακό εάν είναι απαραίτητο. Όλοι οι ύποπτοι σχηματισμοί μεταφέρονται με τσιμπιδάκια σε ένα άλλο φλιτζάνι νερό ή σε μια γυάλινη πλάκα σε μια σταγόνα αραιωμένης γλυκερίνης.

Με τη μέθοδο υποστηρίζονταςτο εξεταζόμενο τμήμα των κοπράνων αναδεύεται με νερό σε γυάλινο κύλινδρο, μετά την καθίζηση, το ανώτερο στρώμα νερού αποστραγγίζεται. Αυτό επαναλαμβάνεται αρκετές φορές. Όταν το υγρό γίνει διαφανές, στραγγίζεται και το ίζημα παρατηρείται σε ένα τρυβλίο Petri.

2. Μικροσκοπικό - για την ανίχνευση αυγών και προνυμφών ελμινθών. Υπάρχουν πολλές μέθοδοι έρευνας.

1). αυτοφυές επίχρισμα - η πιο κοινή και τεχνικά διαθέσιμη μέθοδος έρευνας. Μπορείτε να βρείτε αυγά και προνύμφες όλων των ελμινθών. Ωστόσο, με μικρό αριθμό αυγών, δεν βρίσκονται πάντα. Ως εκ τούτου, χρησιμοποιείται η μέθοδος εμπλουτισμού.

1). Μέθοδος Fülleborg - αυτή είναι μια μέθοδος εμπλουτισμού, που βασίζεται στην εμφάνιση αυγών ελμινθίασης σε κορεσμένο διάλυμα NaCl (1,2 - πυκνότητα, 400 g NaCl ανά 1 λίτρο νερού, διάλυμα NaCl 40%). Η μέθοδος είναι πιο αποτελεσματική από το εγγενές επίχρισμα. 2-5 g περιττωμάτων τοποθετούνται σε γυάλινα βάζα και γεμίζονται με διάλυμα NaCl, αναδεύονται και μετά από 45 λεπτά το σχηματισμένο φιλμ αφαιρείται με μεταλλικό βρόχο, μια σταγόνα γλυκερίνης τοποθετείται σε μια γυάλινη πλάκα. Εξετάστε στο μικροσκόπιο. Το μειονέκτημα της μεθόδου είναι η καθυστερημένη εμφάνιση αυγών διαφόρων ελμίνθων, νάνος ταινίας - μετά από 15-20 λεπτά, στρογγυλός σκώληκας - 1,5 ώρα, μαστίγιος - 2-3 ώρες.

2) Μέθοδος Καλανταριάν - επίσης μέθοδος εμπλουτισμού, αλλά χρησιμοποιείται κορεσμένο διάλυμα NaNO 3 (πυκνότητα 1,38). Τα περισσότερα από τα αυγά επιπλέουν, δεν απαιτείται εξέταση του ιζήματος. Το μειονέκτημα είναι ότι τα αυγά διατηρούνται σε διάλυμα για μεγάλο χρονικό διάστημα, γεγονός που οδηγεί στο γεγονός ότι ορισμένα αυγά αρχίζουν να διογκώνονται και να κατακάθονται στον πυθμένα, εξαφανίζονται από την επιφανειακή μεμβράνη.

3. Η μέθοδος του Γκοριάτσεφ - με βάση την αρχή της εναπόθεσης αυγών, ανίχνευση μικρών αυγών τρηματωδών. Ως διάλυμα χρησιμοποιείται κορεσμένο διάλυμα NaCl και από πάνω επιστρώνονται προσεκτικά 3-4 ml διαλύματος περιττωμάτων. Μετά από 15-20 ώρες, τα αυγά τρηματωδών εγκαθίστανται στον πυθμένα. Το υγρό στραγγίζεται, καθιζάνει σε γυάλινη πλάκα και κάτω από μικροσκόπιο.

4. Μέθοδος συστροφής Shulman – για την ανίχνευση προνυμφών ελμινθών στα κόπρανα. Εξετάστε μόνο τα πρόσφατα απομονωμένα κόπρανα. 2-3 g τοποθετούνται σε ένα γυάλινο βάζο και χύνεται 5 φορές η ποσότητα νερού, ανακατεύεται γρήγορα με ένα ραβδί, χωρίς να αγγίζει τα τοιχώματα του βάζου - 20-30 λεπτά, στη συνέχεια το ραβδί αφαιρείται γρήγορα και μια σταγόνα υγρό στο τέλος μεταφέρεται σε γυάλινη πλάκα και μικροσκοπείται.

5. Μέθοδος Berman - βασίζεται στην ικανότητα των προνυμφών ελμινθών να μεταναστεύουν προς τη ζεστασιά και χρησιμεύει για την αναγνώρισή τους στα κόπρανα.

6. Μέθοδος Harada και Mori (μέθοδος ανάπτυξης προνυμφών) και συνιστάται για έλεγχο για αγκυλοστομία. Η μέθοδος βασίζεται στο γεγονός ότι στη θερμότητα και σε υγρό φιλτραρισμένο χαρτί, τα αυγά αγκυλόστομων εξελίσσονται σε νηματώδεις προνύμφες, οι οποίες μπορούν εύκολα να ανιχνευθούν. 15 γραμμάρια περιττωμάτων εφαρμόζονται στη μέση μιας λωρίδας φιλτραρισμένου χαρτιού, το χαρτί με περιττώματα τοποθετείται σε ένα βάζο, έτσι ώστε το κάτω άκρο να βυθίζεται σε νερό και το πάνω άκρο στερεώνεται με φελλό. Το βάζο διατηρείται σε θερμοστάτη στους 28 0 C για 5-6 ημέρες. Κατά τη διάρκεια αυτής της περιόδου αναπτύσσονται φιλαρόμορφες προνύμφες και κατεβαίνουν στο νερό. Το υγρό εξετάζεται κάτω από μεγεθυντικό φακό. Εάν είναι δύσκολο να εντοπιστεί, το υγρό φυγοκεντρείται, αφού θανατωθούν οι προνύμφες με θέρμανση στους 60 0. Ο τεχνικός εργαστηρίου πρέπει να φοράει γάντια.

7. Μέθοδοι για εντεροβίαση – αναγνώριση αυγών σκουληκιών και ταινίας βοοειδών.

α) ξύσιμο από τις περιπρωκτικές πτυχές - με μια μπατονέτα σφιχτά τυλιγμένη σε ξύλινο ραβδί και εμποτισμένη με διάλυμα γλυκερίνης 50%. Στο εργαστήριο, το στυλεό ξεπλένεται με 1-2 σταγόνες υδατικού διαλύματος γλυκερίνης 50%.

β) μέθοδος με κολλώδη ακάρεα (μέθοδος Graham)

Η κολλητική ταινία εφαρμόζεται στις περιπρωκτικές πτυχές, στη συνέχεια με ένα κολλώδες στρώμα στη γυάλινη πλάκα και υποβάλλεται σε μικροσκόπιο.

Γ) ξύσιμο με τη βοήθεια eye sticks (μέθοδος Rabinovich). Για τις περιπρωκτικές αποξέσεις χρησιμοποιούνται γυάλινα eye sticks, το ευρύτερο μέρος των οποίων καλύπτεται με ειδική κόλλα, η οποία καθιστά δυνατή τη συγκράτηση των αυγών των σκουληκιών.

Εξέταση αίματος, χολής, πτυέλων και μυών

Μικροσκόπηση αίματος - ανιχνεύονται προνύμφες filariae.

Εξέταση πτυέλων - αυγά paraganim, προνύμφες στρογγυλών σκουληκιών, necator, strongyloid, στοιχεία εχινόκοκκου κύστης.

Εξέταση των μυών - εάν υπάρχει υποψία τριχίνωσης, εξετάζονται οι μύες του ασθενούς ή του πτώματος, καθώς και το κρέας που φέρεται να προκάλεσε τη μόλυνση του ατόμου. Για τους σκοπούς της τριχινοσκόπησης, ο μυς κόβεται σε μικρά κομμάτια και τοποθετείται σε συμπιεστές, πρόκειται για δύο πλατιά, χοντρά ποτήρια που συνθλίβουν τους μύες και οι προνύμφες Trichinella βρίσκονται σε μορφή κάψουλας - η μέθοδος συμπίεσης.

Μέθοδος πέψης - οι μύες χύνονται με τεχνητό γαστρικό χυμό (διάλυμα υδροχλωρικού οξέος και πεψίνη). Οι μύες πέπτονται και οι προνύμφες αναγνωρίζονται εύκολα. Προσδιορισμός της έντασης της εισβολής: αριθμός προνυμφών έως 200 ανά 1 g μυϊκός ιστός– μέτριας έντασης εισβολή. έως 500 - εντατική. πάνω από 500 - υπερεντατική εισβολή.

Ορολογικές μέθοδοι

Κεφάλαιο III. Διάγνωση ελμινθάσεων και μέθοδοι ελμινθολογικής έρευνας

Είναι απαραίτητο να εξετάζονται για ελμινθίαση όλοι οι ασθενείς που αναζητούν ιατρική βοήθεια και ιδιαίτερα οι ασθενείς που απευθύνονται σε παιδίατρο, παθολόγο και νευροπαθολόγο με παράπονα για φαινόμενα από το γαστρεντερικό σωλήνα, νευρικό σύστημακαι με αναιμία. Εάν ο γιατρός δεν μπορεί πάντα να εφαρμόσει μεθόδους εργαστηριακής έρευνας, τότε κάθε ιατρικός εργαζόμενος που παρέχει βοήθεια σε εξωτερικά ιατρεία ή νοσοκομείο είναι υποχρεωμένος να πάρει συνέντευξη από τον ασθενή σχετικά με την απελευθέρωση ελμινθών από αυτόν.

Παρουσία όσων δίνονται στα σχετικά κεφάλαια κλινικές ενδείξειςη διάγνωση θα πρέπει να διευκρινιστεί με τη χρήση εργαστηριακών εξετάσεων για την ελμινθίαση.

Λόγω της επικράτησης εντερικές ελμινθίεςμέγιστος πρακτική αξίαέχει μια μελέτη των κινήσεων του εντέρου.

Μέθοδοι για τη μελέτη των κοπράνων για ελμινθίαση

Τα κόπρανα παραδίδονται στο εργαστήριο σε καθαρά γυάλινα σκεύη (περίπου ένα τέταρτο του φλιτζανιού περιττωμάτων που λαμβάνονται από διαφορετικά σημεία σε μία μερίδα). κατά τη διάρκεια μιας εξέτασης ρουτίνας, επιτρέπεται η παράδοση κοπράνων στο εργαστήριο σε σπιρτόκουτα ή δημοφιλείς εκτυπώσεις.

Για τον έλεγχο της αποπαρασίτωσης, ολόκληρο το τμήμα των περιττωμάτων που συλλέγονται μετά τη λήψη χορηγείται (όπως συνταγογραφείται από γιατρό). αντιελμινθικόκαι καθαρτικό (σε μεγάλα κλειστά γυάλινα βάζα, κουβάδες).

Η μικροσκοπική εξέταση των κοπράνων είναι η κύρια στη διάγνωση των εντερικών ελμινθιών. θα πρέπει πάντα να προηγείται μια γενική μακροσκοπική εξέταση των κοπράνων για την ανίχνευση τμημάτων μεγάλων κεστωδών, σκουληκιών καρφιών, στρογγυλών σκουληκιών κ.λπ.

Τα κόπρανα πρέπει να είναι φρέσκα ή σε κονσέρβα (σε διάλυμα φορμαλίνης 5%), καθώς το στέγνωμα αλλάζει δραματικά τη δομή των αυγών. Επιπλέον, όταν εμφανίζονται όρθια περιττώματα γρήγορη ανάπτυξηαυγά ορισμένων ελμινθών (για παράδειγμα, αγκυλόστομος), γεγονός που δυσχεραίνει τη διάγνωση.

Σύμφωνα με τις οδηγίες του Υπουργείου Υγείας της ΕΣΣΔ, είναι απαραίτητο να εξετάζονται τα κόπρανα ταυτόχρονα με τη μέθοδο Fülleborn και ένα εγγενές επίχρισμα.

αυτοφυές επίχρισμα

Εγγενές επίχρισμα: ένα μικρό κομμάτι περιττωμάτων (μέγεθος μπιζελιού), που λαμβάνεται με ένα σπίρτο, ένα γυαλί ή ξύλινο ραβδί από διαφορετικά σημεία της παρεχόμενης μερίδας, λειοτριβείται προσεκτικά σε μια γυάλινη πλάκα σε μια σταγόνα διαλύματος γλυκερίνης 50% ή σε φυσιολογικό ορό ή σε νερό. Καλύψτε με μια καλυπτρίδα, πιέζοντας ελαφρά την τελευταία (με μια βελόνα ανατομής). Το επίχρισμα πρέπει να είναι λεπτό, διαφανές και ομοιόμορφο. Χρησιμοποιείται μόνο ως προσθήκη σε άλλες μεθόδους που δίνουν εμπλουτισμό του φαρμάκου. Θα πρέπει να προβληθούν τουλάχιστον δύο παρασκευάσματα.

Προκειμένου να εντοπιστούν οι προνύμφες ελμινθών (καθώς και τα αυγά τους), γίνεται εγγενής επίχρισμα με τον εξής τρόπο(σύμφωνα με τον Shulman): 2-3 g περιττωμάτων αναδεύονται καλά με «στρίψιμο» με γυάλινη ράβδο σε γαλάκτωμα με πενταπλάσια ποσότητα καθαρού νερού ή φυσιολογικού ορού. Κατά τη διάρκεια της ανάδευσης, οι προνύμφες συσσωρεύονται στη γυάλινη ράβδο, επομένως, αμέσως μετά το τέλος της ανάδευσης, μια σταγόνα του γαλακτώματος μεταφέρεται γρήγορα με μια γυάλινη ράβδο σε μια γυάλινη πλάκα, καλύπτεται με καλυπτρίδα και εξετάζεται. Ο S. D. Lyubchenko (1936) απέδειξε ότι η μέθοδος στρίψιμο είναι πιο αποτελεσματική από τη μέθοδο του επιχρίσματος, ειδικά όσον αφορά τα αυγά ascaris. Με βάση την εργασία του S. D. Lyubchenko, θεωρούμε σκόπιμο να αντικατασταθεί η μέθοδος επίχρισης με τη μέθοδο του twist.

Μέθοδος Fülleborn

Μέθοδος Fülleborn: 5-10 g περιττωμάτων που λαμβάνονται από διαφορετικά μέρη τοποθετούνται σε ένα βάζο χωρητικότητας 50-100 ml και λειοτριβούνται καλά με μια γυάλινη ή ξύλινη ράβδο σε ένα κορεσμένο διάλυμα χλωριούχου νατρίου (400 g αυτού του άλατος διαλύονται σε 1 λίτρο νερό, θερμαίνεται μέχρι βρασμού και διηθείται μέσα από ένα στρώμα βαμβακιού ή γάζας· το διάλυμα χρησιμοποιείται κρύο: ειδικό βάρος 1.2). Το διάλυμα χύνεται σταδιακά έως ότου ληφθεί ένα ομοιόμορφο εναιώρημα και η συνολική ποσότητα του διαλύματος που χύνεται πρέπει να είναι περίπου 20 φορές η ποσότητα των κοπράνων. Ο Fülleborn συνέστησε τη χρήση ποτηριών τσαγιού για την ανάμειξη των κοπράνων, αλλά είναι πιο βολικό να παρασκευάζεται το εναιώρημα σε βάζα αλοιφής των 50-100 ml, χρησιμοποιώντας δύο βάζα για κάθε ανάλυση (ή σε φλιτζάνια των 100 ml).

Αμέσως μετά την προετοιμασία του εναιωρήματος, τα μεγάλα σωματίδια που έχουν επιπλεύσει στην επιφάνεια αφαιρούνται από την επιφάνεια με μια σπάτουλα, μια μεταλλική σέσουλα ή ένα κομμάτι καθαρό χαρτί ( φυτικοί σχηματισμοί, άπεπτα υπολείμματα τροφών κ.λπ.), μετά το οποίο το μείγμα αφήνεται να παραμείνει για 1-1,5 ώρα. Μετά από αυτό το χρονικό διάστημα, ολόκληρη η μεμβράνη αφαιρείται από την επιφάνεια του μείγματος αγγίζοντας ένα σύρμα ή βρόχο πλατίνας (επίπεδο) με διάμετρο όχι μεγαλύτερη από 1 cm, λυγισμένο σε ορθή γωνία. Η μεμβράνη ανακινείται σε μια γυάλινη διαφάνεια και καλύπτεται με καλυπτρίδα. Κάτω από κάθε καλυπτρίδα (18x18 mm) τοποθετήστε 3-4 σταγόνες. Συνολικά θα πρέπει να παρασκευαστούν τουλάχιστον 4 παρασκευάσματα (μία καλυπτρίδα για κάθε παρασκεύασμα). Ο βρόχος πυρώνεται στη φωτιά και πλένεται με νερό μετά από κάθε ανάλυση.

Σύμφωνα με τη μέθοδο Fülleborn, τα αυγά όλων των νηματωδών (με εξαίρεση τα μη γονιμοποιημένα αυγά στρογγυλών σκουληκιών) και τα αυγά της ταινίας νάνων εντοπίζονται γρήγορα και εύκολα.

Η μέθοδος Berman χρησιμοποιείται για τη μελέτη των κοπράνων για προνύμφες ελμινθών (με ισχυροειδίαση). Αυτή η μέθοδος έχει ως εξής: 5 g περιττωμάτων σε μεταλλικό πλέγμα (ένα φίλτρο γάλακτος είναι βολικό για αυτό το σκοπό) τοποθετούνται σε γυάλινη χοάνη προσαρτημένη σε τρίποδο. Ένας ελαστικός σωλήνας με σφιγκτήρα τοποθετείται στο κάτω άκρο της χοάνης.

Το πλέγμα με τα κόπρανα ανασηκώνεται και το νερό που έχει θερμανθεί στους 50 ° περίπου χύνεται στη χοάνη έτσι ώστε το κάτω μέρος του πλέγματος με τα κόπρανα να βυθιστεί σε νερό. Οι προνύμφες κινούνται ενεργά στο νερό και συσσωρεύονται στο κάτω μέρος του ελαστικού σωλήνα. Μετά από 2-4 ώρες, ο σφιγκτήρας ανοίγει και το υγρό χαμηλώνεται σε έναν ή δύο φυγοκεντρικούς σωλήνες.

Μετά από φυγοκέντρηση για 1-2 λεπτά, το άνω μέρος του υγρού αποστραγγίζεται γρήγορα και το ίζημα εφαρμόζεται σε σταγόνες σε γυάλινες πλάκες και εξετάζεται κάτω από καλυπτρίδες ή κατανέμεται σε ένα λεπτό στρώμα σε 2-3 μεγάλες πλάκες και στη συνέχεια εξετάζεται χωρίς καλυπτρίδες.

Η μέθοδος Berman χρησιμοποιείται επίσης για την εξέταση του εδάφους για την παρουσία προνυμφών αγκυλόστομων.

Μέθοδος Stoll

Η μέθοδος Stoll χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό της έντασης της εισβολής. Ένα μη φυσιολογικό διάλυμα υδροξειδίου του νατρίου χύνεται σε μια ειδική γυάλινη φιάλη μέχρι το σημάδι των 56 cm 3 και στη συνέχεια προστίθενται περιττώματα έως ότου η στάθμη του υγρού φτάσει τα 60 cm 3, δηλαδή 4 cm 3. Μετά από ανακίνηση με γυάλινες χάντρες, 0,075 ml του μείγματος λαμβάνονται για εξέταση και εξετάζονται κάτω από μία ή δύο συνηθισμένες καλυπτρίδες. Η προκύπτουσα ποσότητα πολλαπλασιάζεται επί 200 για να ληφθεί ο αριθμός των αυγών που περιέχονται σε 1 cm 3 περιττωμάτων.

Μελέτη του περιεχομένου του δωδεκαδακτύλου

Ο χυμός του δωδεκαδακτύλου και η κυστική χολή, που λαμβάνονται με τον συνήθη τρόπο με ανίχνευση (και κυστική χολή και μετά από αντανακλαστικό από τη χοληδόχο κύστη), αναμιγνύονται επιμελώς με ίσο όγκο αιθυλαιθέρα. Το μίγμα φυγοκεντρείται και στη συνέχεια το ίζημα εξετάζεται σε μικροσκόπιο. Εκτός από το ίζημα εξέταση με μικροσκόπιοΟι νιφάδες που επιπλέουν στο υγρό, που μπορεί να περιέχουν αυγά ελμινθών, είναι απαραίτητα εκτεθειμένες. Κατά την εξέταση αυγών ελμινθών γαστρικού υγρού και εμετού, μπορείτε να χρησιμοποιήσετε την ίδια τεχνική.

Εάν υποψιάζεστε, θα πρέπει να γίνεται εξέταση του χυμού του δωδεκαδακτύλου και του περιεχομένου του στομάχου ελμινθικές ασθένειεςσυκώτι, χοληδόχου κύστης (οπισθορχίαση, περιτονίαση, δικροκηλίωση) και δωδεκαδάκτυλο (στρονγυλοειδίαση).

Εξέταση πτυέλων

Τα πτύελα τρίβονται σε γυάλινη πλάκα, καλύπτονται σφιχτά με άλλη γυάλινη πλάκα και εξετάζονται με γυμνό μάτι σε ανοιχτόχρωμο και μαύρο φόντο, καθώς και κάτω από μεγεθυντικό φακό σε μεταδιδόμενο φως. Ξεχωριστά κομμάτια πτυέλων («σκουριασμένες» συσσωρεύσεις, υπολείμματα ιστού κ.λπ.) εφαρμόζονται σε ένα λεπτό στρώμα σε γυάλινη πλάκα, καλύπτονται σφιχτά με καλυπτρίδα και εξετάζονται σε μικροσκόπιο χαμηλής και υψηλής μεγέθυνσης.

α) Για τη διάγνωση της κυστικέρκωσης του δέρματος, του υποδόριου ιστού ή των μυών, εξετάζεται πρώτα με γυμνό μάτι ένα ασηπτικά κομμένο κομμάτι του αντίστοιχου ιστού. Τα τμήματα του ιστού απομακρύνονται με τη βοήθεια βελόνων ανατομής προκειμένου να ανιχνευθεί ένα κυστίδιο ορατό με γυμνό μάτι - ένας κυστικέρκος (φωτογραφία Α). το μήκος του είναι 6-20 mm, το πλάτος είναι 5-10 mm. Όταν βρεθεί μια φυσαλίδα που είναι ύποπτη για κυστικέρκο, συνθλίβεται ανάμεσα σε δύο γυάλινες πλάκες και εξετάζεται στο μικροσκόπιο. Ο κυστικέρκος (Cistycercus cellulosae) προσδιορίζεται από την παρουσία ενός σκόλεξ με τέσσερα κορόιδα και ένα φωτοστέφανο από αγκίστρια (φωτογραφία Β).

Φωτογραφία.Α - κυστικέρκοι με σκολέξη στραμμένα προς τα έξω. Β - Κεφάλι χοιρινής ταινίας.

β) Για τη διάγνωση της τριχίνωσης, ένα ασηπτικά κομμένο κομμάτι μυός (δικέφαλος ή γαστροκνήμιος) συνθλίβεται προσεκτικά σε διάλυμα γλυκερίνης 50% στις λεπτότερες ίνες χρησιμοποιώντας βελόνες ανατομής. Οι θρυμματισμένοι μύες συμπιέζονται ανάμεσα σε δύο γυάλινες πλάκες και εξετάζονται σε χαμηλή μεγέθυνση του μικροσκοπίου σε ένα σκοτεινό οπτικό πεδίο. Η εξέταση των μυών για τριχίνωση συνιστάται να γίνεται όχι νωρίτερα από την 8η ημέρα της νόσου. Οι προνύμφες Trichinella βρίσκονται στους μύες σε κουλουριασμένη θέση: περικλείονται σε κάψουλες σε σχήμα λεμονιού.

Φωτογραφία. A - Προνύμφες Trichinella στους μύες. Β - Ασβεστοποιημένες κάψουλες Trichinella.

Αφθοροσκόπηση

Τις περισσότερες φορές, η ακτινοσκόπηση χρησιμοποιείται για τη διάγνωση της εχινόκοκκωσης και, λιγότερο συχνά, της κυστικέρκωσης. Οι κυστικέρηδες ανιχνεύονται με ακτινοσκόπηση μόνο μετά από ασβεστοποίηση (σε περιπτώσεις παρατεταμένη ασθένεια). Τα τελευταία χρόνια, η ακτινοσκόπηση χρησιμοποιείται επίσης για τη διάγνωση της ασκαρίασης τόσο στο πρώιμο στάδιο της προνύμφης όσο και εν μέρει στο εντερικό στάδιο.

Κατά την περίοδο μετανάστευσης των προνυμφών ascaris (και του αγκυλόστομου) στους πνεύμονες, ανιχνεύονται ασταθείς, μερικές φορές πολλαπλές φλεγμονώδεις εστίες. Ταυτόχρονα, στο αίμα εμφανίζεται σημαντική ηωσινοφιλία.

Τα σεξουαλικά ώριμα στρογγυλά σκουλήκια είναι σαφώς ορατά στην ακτινοσκόπηση των εντέρων των προσβεβλημένων ατόμων. Αυτή η μέθοδος, παρά την πολυπλοκότητα και τη δυσκινησία της, θα πρέπει να χρησιμοποιείται ως πρόσθετη μέθοδος για τη διάγνωση της ασκαρίασης σε περιπτώσεις με αρνητική σκατολογική ανάλυση. Σύμφωνα με τον E. S. Geselevich, από τους 180 ασθενείς με ασκαρίαση που εντοπίστηκαν με ακτινοσκόπηση, 54 αυγά ασκαρίδας δεν βρέθηκαν στα κόπρανα (βλ.).

7.7. Μέθοδοι για τον προσδιορισμό της βιωσιμότητας των αυγών και των προνυμφών των ελμινθών

Η βιωσιμότητα των αυγών ελμινθών καθορίζεται από την εμφάνισή τους, από τη χρώση με ζωτικές βαφές, από την καλλιέργεια σε βέλτιστες συνθήκεςκαι τη δημιουργία βιολογικού δείγματος.

7.7.1. Προσδιορισμός της βιωσιμότητας αυγών ή προνυμφών ελμινθών με εμφάνιση

Τα αυγά ελμινθίου μικροσκοπούνται πρώτα σε χαμηλή μεγέθυνση και μετά σε μεγάλη μεγέθυνση. Σε παραμορφωμένα και νεκρά αυγά ελμινθών, το κέλυφος είναι σχισμένο ή λυγισμένο προς τα μέσα, το πλάσμα είναι θολό, χαλαρό. Στα τεμαχισμένα αυγά, οι σφαίρες διάσπασης (βλαστομερή) είναι άνισου μεγέθους, ακανόνιστου σχήματος και συχνά μετατοπίζονται σε έναν πόλο. Μερικές φορές υπάρχουν μη φυσιολογικά ωάρια, τα οποία, έχοντας εξωτερικές παραμορφώσεις, αναπτύσσονται φυσιολογικά. Στις ζωντανές προνύμφες των στρογγυλών σκουληκιών, η λεπτή κοκκοποίηση υπάρχει μόνο στο μεσαίο μέρος του σώματος, καθώς πεθαίνουν, εξαπλώνεται σε όλο το σώμα, εμφανίζονται μεγάλα γυαλιστερά υαλώδη κενοτόπια, οι λεγόμενες "χορδές από μαργαριτάρια".

Για να προσδιορίσετε τη βιωσιμότητα των ώριμων αυγών στρογγυλών σκουληκιών, μαστιγίων, σκουληκιών, θα πρέπει να καλέσετε ενεργητικές κινήσειςπρονύμφες θερμαίνοντας ελαφρά το παρασκεύασμα (σε θερμοκρασία που δεν υπερβαίνει τους 37 ° C). Είναι πιο βολικό να παρατηρήσετε τη βιωσιμότητα των προνυμφών ascaris και whipworm αφού απομονωθούν από το κέλυφος του αυγού πιέζοντας το γυαλί κάλυψης του παρασκευάσματος με βελόνα ή τσιμπιδάκια ανατομής.

Σε επεμβατικές προνύμφες ασκαριδών, παρατηρείται συχνά ένα καπάκι που έχει απολεπιστεί στο άκρο της κεφαλής και σε προνύμφες μαστιγίων που έχουν ολοκληρώσει την ανάπτυξη στο αυγό, σε αυτό το σημείο βρίσκεται ένα στυλεό σε μεγάλη μεγέθυνση. Οι νεκρές προνύμφες των ελμινθών, ανεξάρτητα από τη θέση τους (στο αυγό ή έξω από αυτό), παρατηρούν τη φθορά του σώματος. Εν εσωτερική δομήη προνύμφη γίνεται ογκώδης ή κοκκώδης και το σώμα είναι θολό και αδιαφανές. Τα κενοτόπια βρίσκονται στο σώμα και τα σπασίματα στην επιδερμίδα.

Η βιωσιμότητα των ογκοσφαιρών των τενιιδών (βόειος, χοιρινός ταινία κ.λπ.) καθορίζεται από την κίνηση των εμβρύων όταν εκτίθενται σε πεπτικά ένζυμα. Τα αυγά τοποθετούνται γυαλί ρολογιούμε γαστρικό χυμό σκύλου ή τεχνητό χυμό δωδεκαδακτύλου. Η σύνθεση του τελευταίου: παγκρεατίνη - 0,5 g, διττανθρακικό νάτριο - 0,09 g, απεσταγμένο νερό - 5 ml. Τα ποτήρια ρολογιού με αυγά τοποθετούνται σε θερμοστάτη στους 36 - 38 ° C για 4 ώρες. Σε αυτή την περίπτωση, τα ζωντανά έμβρυα απελευθερώνονται από τις μεμβράνες. Τα κελύφη των ζωντανών ογκόσφαιρων επίσης διαλύονται σε οξινισμένη πεψίνη και μέσα αλκαλικό διάλυμαθρυψίνη μετά από 6-8 ώρες σε θερμοστάτη στους 38 °C.

Εάν τα αυγά teniid τοποθετηθούν σε διάλυμα θειούχου νατρίου 1% ή σε διάλυμα υποχλωριώδους νατρίου 20%, ή σε διάλυμα χλωριούχου νερού 1% στους 36 - 38 ° C, ώριμα και ζωντανά έμβρυα απελευθερώνονται από τα κελύφη και δεν αλλαγή κατά τη διάρκεια 1 ημέρας. Τα ανώριμα και νεκρά ογκόσφαιρα συρρικνώνονται ή διογκώνονται και μεγεθύνονται δραματικά και στη συνέχεια «διαλύονται» μέσα σε 10 λεπτά έως 2 ώρες. Ζωντανά έμβρυα τενιειδών κινούνται επίσης ενεργά σε ένα μείγμα διαλύματος χλωριούχου νατρίου 1%, διαλύματος διττανθρακικού νατρίου 0,5% και χολής στους 36 - 38 ° C.

Η βιωσιμότητα της fasciolia adolescariae που συλλέγεται από φυτά και άλλα αντικείμενα υδάτινων σωμάτων ελέγχεται εξετάζοντάς τα σε μια γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα σε φυσιολογικό ορό κάτω από μικροσκόπιο με στάδιο θέρμανσης. Όταν θερμαίνονται, οι προνύμφες τρηματωδών στην κύστη αρχίζουν να κινούνται.

Για τον προσδιορισμό της βιωσιμότητας των αυγών του πυγμαίου ταινίας, η μέθοδος της Ionina N.S. είναι η απλούστερη: στα ζωντανά αυγά, το διάμεσο ζεύγος των εμβρυϊκών αγκίστρων είναι είτε παράλληλο με τα πλευρικά, είτε τα τελευταία σχηματίζουν γωνία στη βάση μικρότερης από 45 ° με τη διάμεσο. Στα νεκρά αυγά, τα πλευρικά ζεύγη σχηματίζουν μια γωνία στη βάση με ένα διάμεσο ζεύγος μεγαλύτερη από 45 ° ή τα άγκιστρα είναι τυχαία διασκορπισμένα (η ζευγαρωμένη διάταξη τους χάνεται). μερικές φορές υπάρχει ρυτίδωση του εμβρύου, σχηματισμός κοκκοποίησης. Μια πιο ακριβής μέθοδος βασίζεται στην εμφάνιση των κινήσεων της ογκόσφαιρας κατά τη διάρκεια μιας απότομης αλλαγής της θερμοκρασίας: από 5 - 10 ° σε 38 - 40 ° C.

Ο προσδιορισμός της βιωσιμότητας των ανώριμων αυγών νηματωδών θα πρέπει να μελετηθεί σε έναν υγρό θάλαμο (πιάτα Petri), τοποθετώντας τα αυγά ascaris σε διάλυμα φορμαλίνης 3% παρασκευασμένο σε ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου σε θερμοκρασία 24 - 30 ° C, αυγά μαστιγίου σε 3 % διάλυμα υδροχλωρικού οξέος σε θερμοκρασία 30 - 35 ° C. αυγά σκώληκα σε ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου στους 37 °C. Τα πιάτα Petri πρέπει να ανοίγουν 1 - 2 φορές την εβδομάδα για καλύτερο αερισμό και να υγραίνουμε ξανά το διηθητικό χαρτί καθαρό νερό.

Οι παρατηρήσεις της ανάπτυξης αυγών ελμινθών πραγματοποιούνται τουλάχιστον 2 φορές την εβδομάδα. Η απουσία σημείων ανάπτυξης μέσα σε 2-3 μήνες υποδηλώνει τη μη βιωσιμότητά τους. Τα σημάδια της ανάπτυξης των αυγών ελμινθών είναι πρώτα τα στάδια σύνθλιψης, η διαίρεση του περιεχομένου του αυγού σε ξεχωριστά βλαστομερή. Τις πρώτες ημέρες, αναπτύσσονται έως και 16 βλαστομερή, τα οποία περνούν στο δεύτερο στάδιο - μόρουλας κ.λπ.

Τα αυγά αγκυλόστομων καλλιεργούνται σε γυάλινο κύλινδρο (50 cm ύψος και 7 cm διάμετρος) κλειστό με πώμα. Ένα μείγμα από ίσους όγκουςαποστειρωμένη άμμος, κάρβουνο και περιττώματα με αυγά αγκυλόστομων, αραιωμένα με νερό σε ημι-υγρή σύσταση, χύνονται προσεκτικά στον πυθμένα του κυλίνδρου χρησιμοποιώντας έναν γυάλινο σωλήνα. Κατά τη διάρκεια 1 - 2 ημερών εγκατάστασής τους στο σκοτάδι σε θερμοκρασία 25 - 30 ° C, οι ραβδιτοειδείς προνύμφες εκκολάπτονται από τα αυγά και μετά από 5 - 7 ημέρες γίνονται ήδη νηματώδεις: οι προνύμφες σέρνονται στα τοιχώματα του κυλίνδρου, όπου είναι ορατά ακόμη και με γυμνό μάτι.

Τα αυγά τρηματωδών που αναπτύσσονται φυσικά στο νερό, όπως οπιστόρχες, διφυλλοβοθρίδες, φασιόλες και άλλα, τοποθετούνται σε ένα ποτήρι ρολογιού, σε ένα πιάτο Petri ή σε άλλο δοχείο και χύνεται ένα μικρό στρώμα συνηθισμένου νερού. Κατά την καλλιέργεια αυγών fasciola, θα πρέπει να ληφθεί υπόψη ότι αναπτύσσονται πιο γρήγορα στο σκοτάδι, ενώ το miracidium σχηματίζεται σε ζωντανά αυγά σε θερμοκρασία 22–24 ° C μετά από 9–12 ημέρες. Όταν γίνεται μικροσκόπηση αναπτυσσόμενων ωαρίων τρηματωδών, οι κινήσεις του miracidium είναι καθαρά ορατές. Το Fasciola miracidium αναδύεται από τα κελύφη των αυγών μόνο στο φως.

Μέθοδος Fulleborn. Οι προνύμφες των αγκυλόστομων και των ισχυροειδών καλλιεργούνται σε άγαρ σε τρυβλίο Petri με ζωικό κάρβουνο. Αφού διατηρηθούν σε θερμοστάτη σε θερμοκρασία 25 - 30 ° C για 5 - 6 ώρες, οι προνύμφες απλώθηκαν πάνω από το άγαρ, αφήνοντας πίσω τους μια διαδρομή βακτηρίων.

Μέθοδος Harada και Mori. 7 ml απεσταγμένου νερού προστίθενται σε δοκιμαστικούς σωλήνες τοποθετημένους σε σχάρα. Πάρτε 0,5 g περιττωμάτων με ένα ξύλινο ραβδί και κάντε ένα επίχρισμα σε διηθητικό χαρτί (15 x 150 mm) 5 cm από το αριστερό άκρο (αυτή η λειτουργία πραγματοποιείται σε ένα φύλλο χαρτιού για να προστατεύσετε την επιφάνεια του εργαστηριακού τραπεζιού). Στη συνέχεια, η λωρίδα με το επίχρισμα εισάγεται στο σωληνάριο έτσι ώστε το αριστερό άκρο που είναι απαλλαγμένο από το επίχρισμα να φτάσει στο κάτω μέρος του σωλήνα. Καλύψτε το πάνω άκρο με ένα κομμάτι σελοφάν και τυλίξτε το σφιχτά με μια ελαστική ταινία. Στον δοκιμαστικό σωλήνα γράψτε τον αριθμό, το όνομα του ατόμου. Σε αυτή την κατάσταση, οι δοκιμαστικοί σωλήνες αποθηκεύονται για 8-10 ημέρες σε θερμοκρασία 28 °C. Για να μελετήσετε τις προνύμφες, αφαιρέστε και αφαιρέστε το κάλυμμα από σελοφάν και αφαιρέστε μια λωρίδα διηθητικού χαρτιού με τσιμπιδάκια. Θα πρέπει να ληφθεί μέριμνα σε αυτή την περίπτωση, καθώς ένας μικρός αριθμός μολυσματικών προνυμφών μπορεί να μετακινηθεί στο πάνω άκρο του διηθητικού χαρτιού ή στο τοίχωμα του δοκιμαστικού σωλήνα και να διεισδύσει κάτω από την επιφάνεια του σελοφάν.

Οι σωλήνες τοποθετούνται σε λουτρό ζεστού νερού στους 50°C για 15 λεπτά, μετά τα οποία τα περιεχόμενα ανακινούνται και χύνονται γρήγορα σε σωλήνα καθίζησης προνυμφών 15 ml. Μετά τη φυγοκέντρηση, το υπερκείμενο αφαιρείται και το ίζημα μεταφέρεται σε γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα, καλυμμένη με καλυπτρίδα και μικροσκόπιο υπό χαμηλή μεγέθυνση.

Για τη διαφορική διάγνωση των νηματόμορφων προνυμφών, είναι απαραίτητο να χρησιμοποιηθούν τα δεδομένα του Πίνακα 3.

Πίνακας 3

ΔΙΑΦΟΡΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΑ ΦΙΛΑΡΙΩΜΕΝΩΝ ΠΡΟΝΥΜΦΩΝ A. DUODENALE, N. AMERICANUS, S. STERCORALIS, trICHOStrONGYLUS SP.

Προνύμφες	Διαστάσεις	Ιδιαίτερα χαρακτηριστικά
A. duodenale	Μήκος σώματος περίπου 660 μικρά, καπάκι - 720 nm	Η ραβδώσεις του καλύμματος είναι λιγότερο έντονη, η προεξοχή του στόματος είναι λιγότερο αισθητή, το πρόσθιο άκρο του σώματος (αλλά όχι το καπάκι) είναι αμβλύ, η διάμετρος του εντερικού σωλήνα είναι μικρότερη από τον οισοφαγικό βολβό, το ουραίο άκρο είναι αμβλύ
N. americanus	Μήκος σώματος περίπου 590 μm, καπάκι - 660 nm	Το έλυτρο είναι αισθητά ραβδωτό, ειδικά στο ουραίο μέρος του σώματος, το στόμα φαίνεται σκούρο, το πρόσθιο άκρο του σώματος (αλλά όχι η θήκη) είναι στρογγυλεμένο σαν στενό άκρο. αυγό κότας, το πρόσθιο τμήμα του εντερικού σωλήνα τέτοιας διαμέτρου όπως ο βολβός του οισοφάγου, το άκρο της ουράς είναι έντονα μυτερό
S. stercoralis	Μήκος σώματος περίπου 500 μm	Η προνύμφη χωρίς θήκη, ο οισοφάγος είναι περίπου το ήμισυ του μήκους του σώματος, η ουρά είναι αμβλεία ή διακλαδισμένη
Trichostrongylus sp.	Μήκος σώματος περίπου 750 μικρά	Ο αυλός του εντέρου δεν είναι ίσιος, αλλά ζιγκ-ζαγκ, το ουραίο άκρο είναι στρογγυλεμένο και έχει σχήμα κουμπιού

7.7.2. Μέθοδοι χρώσης αυγών και προνυμφών ελμινθών

Οι νεκροί ιστοί στις περισσότερες περιπτώσεις αντιλαμβάνονται τα χρώματα πιο γρήγορα από τους ζωντανούς. Αυτά τα χαρακτηριστικά χρησιμοποιούνται στην ελμινθολογία για τον προσδιορισμό της βιωσιμότητας των αυγών και των προνυμφών των ελμινθών. Ωστόσο, σε ορισμένες περιπτώσεις, ορισμένα χρώματα γίνονται καλύτερα αντιληπτά από τους ζωντανούς ιστούς παρά από τους νεκρούς.

Για τον διαφορικό προσδιορισμό ζωντανών και νεκρών αυγών και προνυμφών, χρησιμοποιούνται οι ακόλουθες βαφές και μέθοδοι.

Η λευκοβάση του μπλε του μεθυλενίου χρησιμοποιείται συχνά για τη χρώση ζωντανών και νεκρών ιστών. ζωντανό κύτταροή ο ιστός ανάγει το μπλε του μεθυλενίου σε άχρωμη λευκοβάση, ο νεκρός ιστός δεν έχει αυτή την ικανότητα και επομένως αποκτά χρώμα.

Το κριτήριο για την κατάσταση του αυγού είναι η χρώση του εμβρύου, αλλά όχι το κέλυφος. Αυτή η ικανότητα σχετίζεται με τις συνθήκες θανάτου του αυγού. Σε εκείνες τις περιπτώσεις όπου το ινώδες κέλυφος στο νεκρό αυγό δεν χάνει τις ημιπερατές του ιδιότητες, δεν θα περάσει βαφές, επομένως, το νεκρό έμβρυο δεν θα λερωθεί. Ένα έγχρωμο έμβρυο δείχνει πάντα το θάνατο του αυγού.

Για το χρωματισμό των αυγών Ascaris, μπορείτε να χρησιμοποιήσετε μπλε του μεθυλενίου σε διάλυμα γαλακτικού οξέος με καυστικό αλκάλιο (μπλε του μεθυλενίου 0,05 g, καυστική σόδα 0,5 g, γαλακτικό οξύ - 15 ml). Τα ζωντανά αυγά δεν αντιλαμβάνονται το χρώμα. είναι ζωγραφισμένα Μπλε χρώμαέμβρυα νεκρών ωαρίων. Οι προνύμφες Ascaris χρωματίζονται με ένα βασικό διάλυμα μπλε χρώματος μπριγιάν-κρεσυλίου σε συγκέντρωση 1:10.000 ως εξής: μια σταγόνα υγρού με αυγά ascaris και μια σταγόνα από το βασικό διάλυμα βαφής εφαρμόζονται σε μια γυάλινη πλάκα. Το παρασκεύασμα καλύπτεται με καλυπτρίδα, η οποία πιέζεται σφιχτά πάνω στη γυάλινη πλάκα με ελαφρύ χτύπημα με βελόνα ανατομής. Στο μικροσκόπιο, παρατηρείται ο αριθμός των εκκολαφθέντων προνυμφών και ο βαθμός χρώσης τους. μετά από την οποία το ίδιο φάρμακο επανεξετάζεται μετά από 2 έως 3 ώρες. Μόνο μη παραμορφωμένες προνύμφες που δεν έχουν χρωματιστεί για 2 ώρες θεωρούνται ζωντανές. Οι νεκρές προνύμφες είτε δεν αναδύονται από τα αυγά, είτε λερώνονται όταν σπάσει το κέλυφος (μερικώς ή πλήρως).

Κατά τον προσδιορισμό της βιωσιμότητας των αυγών των πτηνών ascaridia, είναι δυνατή η χρώση των παρασκευασμάτων με 5% διάλυμα αλκοόληςιώδιο. Όταν εφαρμόζεται στο φάρμακο, τα έμβρυα νεκρών αυγών ασκαριδών για 1 - 3 δευτερόλεπτα. είναι βαμμένα πορτοκαλί.

Νεκρά αυγά οπίσθορχης και ογκόσφαιρες ταινίας βοοειδών χρωματίζονται με διάλυμα κυανού τολουιδίνης (1:1000) και νεκρές ογκόσφαιρες ταινίας βοοειδών χρωματίζονται με διάλυμα μπλε κρεζυλίου (1:10000). Ταυτόχρονα, τα έμβρυα και το κέλυφος τόσο των νεκρών όσο και των ζωντανών αυγών αποκτούν χρώμα. Επομένως, μετά τη χρώση, τα αυγά και οι ογκόσφαιρες πλένονται καθαρό νερόκαι επιπλέον τα βάφουμε με σαφρανίνη (σε αραίωση 1:10.000 αλκοόλης 10 ° C). Το αλκοόλ αφαιρεί τη βαφή από τα κελύφη και η σαφρανίνη κηλιδώνει κόκκινο. Ως αποτέλεσμα, τα ζωντανά αυγά γίνονται κόκκινα. αυγά με νεκρά έμβρυα - σε μπλε, και το κέλυφος παραμένει κόκκινο. Νεκρά έμβρυα ογκόσφαιρων βοοειδούς ταινίας γρήγορα, μέσα σε λίγα λεπτά, χρωματίζονται έντονο κόκκινο ή ροζ με σαφρανίνη ή μπλε με μπλε κρεζυλίου σε αραίωση 1:4000 ή με καρμίνη indigo σε αραίωση 1:1000 - 1 :2000. Τα ζωντανά έμβρυα δεν αλλάζουν υπό την επίδραση αυτών των χρωμάτων ακόμη και μετά από 2 - 7 ώρες.

Για να προσδιορίσετε τη βιωσιμότητα των αυγών της ταινίας πυγμαίου, συνιστάται η χρήση των ακόλουθων χρωμάτων:

1. Γυαλιστερό κρεασυλικό μπλε (1:8000) - μετά από 1 ώρα, η ογκόσφαιρα των νεκρών αυγών λερώνεται ιδιαίτερα έντονα, η οποία ξεχωρίζει έντονα στο χλωμό ή άχρωμο φόντο του υπόλοιπου αυγού.

2. Safranin (1:8000 για 2 ώρες και 1:5000 για 3 έως 5 ώρες).

3. Διάλυμα 50% πυρογαλικού οξέος σε αραίωση 1:2 ​​- όταν εκτίθεται για 1 ώρα σε θερμοκρασία 29 - 30 ° C (όσο χαμηλότερη είναι η θερμοκρασία, τόσο μεγαλύτερη είναι η διαδικασία χρώσης).

7.7.3. Μέθοδος φωταύγειας για τη μελέτη αυγών και προνυμφών ελμινθών

Το μικροσκόπιο φθορισμού καθιστά δυνατή τη διαφοροποίηση ζωντανών και νεκρών αντικειμένων χωρίς να καταστρέφεται το αυγό. Δεν χρησιμοποιείται για φθορισμό υπεριώδεις ακτίνεςκαι το μπλε-ιώδες τμήμα του ορατού φωτός, με συνηθισμένο μικροσκόπιο και γυάλινες διαφάνειες. ένα ειδικό σετ έγχρωμων φίλτρων προστίθεται στο φωτιστικό OI-18.

Ζωντανά και νεκρά αυγά στρογγυλών σκουληκιών, σκουληκιών καρφίτσας, πυγμαίων ταινιών, βοοειδών, ταινίας και άλλων ελμινθών φωτίζουν διαφορετικά. Αυτό το φαινόμενο παρατηρείται τόσο κατά τη διάρκεια της πρωτογενούς φωταύγειας χωρίς τη χρήση χρωστικών, όσο και όταν χρωματίζεται με φθοριόχρωμα (ακριδίνη πορτοκαλί, κοριφωσφίνη, πριμουλίνη, αουρολίνη, θειική βερλερίνη, τριφλαβίνη, ριβανόλη, κινακρίνη κ.λπ.).

Τα μη λεκιασμένα, ζωντανά αυγά στρογγυλών σκουληκιών, χωρίς τμήματα, λάμπουν έντονο πράσινο με κιτρινωπή απόχρωση. στα νεκρά αυγά, το κέλυφος ακτινοβολεί πράσινο φωςπολύ πιο φωτεινό από το σκούρο πράσινο τμήμα φύτρων. στα αυγά στρογγυλών σκουληκιών με προνύμφη εμφανίζεται μόνο το κέλυφος, ενώ στα νεκρά τόσο το κέλυφος όσο και η προνύμφη είναι έντονο κίτρινο.

Ζωντανά αυγά ακίδων και νάνων ταινιών που δεν έχουν χρωματιστεί και δεν είναι τμηματικά εκπέμπουν ένα πρασινωπό-κίτρινο φως· στα νεκρά αυγά, το κέλυφος φωτίζει έντονα στο φόντο μιας σκούρα πράσινης εμβρυϊκής μάζας.

Με δευτερογενή φωταύγεια (κατά τη χρώση πορτοκαλί ακριδίνης σε αραίωση 1:10000 και 1:50000 από 30 λεπτά έως 2 ώρες), το κέλυφος των ζωντανών και νεκρών νηματωδών, τρεματωδών και κεστωδών φωτίζει διαφορετικά.

Το κέλυφος των ζωντανών και νεκρών αυγών των ασκαριδών, τοξόκαρ, των σκουληκιών καρφίτσας, των πυγμαίων ταινιών, της ταινίας αρουραίων, της ταινίας των ταύρων, των ταυροσκώληκων γίνεται πορτοκαλοκόκκινο. Τα έμβρυα ζωντανών αυγών ασκαρίδας, τοξασκάρις, ταινίας αρουραίου, πλατιάς ταινίας και ογκόσφαιρας ταινίας βοοειδών φωτοβολούν με θαμπό σκούρο πράσινο ή γκριζοπράσινο. Τα νεκρά έμβρυα των αυγών αυτών των ελμινθών εκπέμπουν ένα "φλεγόμενο" πορτοκαλοκόκκινο χρώμα. Οι ζωντανές προνύμφες και τα τοξόκαρα (κέλυφος αυγών) εκπέμπουν ένα θαμπό γκριζοπράσινο φως, όταν πεθαίνουν, το χρώμα αλλάζει από το άκρο του κεφαλιού σε ένα "φλεγόμενο" ανοιχτό πράσινο, μετά σε κίτρινο, πορτοκαλί και τέλος σε έντονο πορτοκαλί.

Όταν βάφονται με φθορόχρωμα - coryphosphyllum, primulin, νεκρά αυγά ascarids και whipworms δείχνουν μια λάμψη από λιλά-κίτρινο έως χαλκό-κόκκινο. Τα βιώσιμα αυγά δεν φωτίζουν, αλλά γίνονται σκούρα πράσινα.

Τα ζωντανά αυγά τρεματωδών (Paragonimus και Clonorchis) δεν φωτίζουν μετά τη χρώση με πορτοκαλί ακριδίνης και ένα κιτρινοπράσινο χρώμα προέρχεται από τα νεκρά αυγά.

Η μέθοδος φωταύγειας μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί για τον προσδιορισμό της βιωσιμότητας των προνυμφών ελμινθών. Έτσι, φθοροχρωματισμένες με διάλυμα ακριδίνης πορτοκαλί (1:2000) προνύμφες στρογγυλικού, λάμψη rhabdita: ζωντανό - πράσινο (με απόχρωση), νεκρό - φωτεινό πορτοκαλί φως.

Τα ζωντανά miracidia που έχουν αναδυθεί από το κέλυφος εκπέμπουν ένα αμυδρό γαλαζωπό φως με μια ελάχιστα αισθητή ανοιχτό κίτρινη στεφάνη από βλεφαρίδες, αλλά 10-15 λεπτά μετά το θάνατο εμφανίζονται ως ένα έντονο "φλεγόμενο" ανοιχτό πράσινο, και στη συνέχεια πορτοκαλοκόκκινο φως.

7.7.4. μέθοδος βιολογικής ανάλυσης

Για παράδειγμα, για να προσδιοριστεί η βιωσιμότητα των αυγών ascaris (χοιροί ascaris, άνθρωποι, toxocara, toxascaris κ.λπ.) ανά ζώο (ινδικά χοιρίδια, ποντίκια), χρειάζονται τουλάχιστον 100 - 300 αυγά με ανεπτυγμένη προνύμφη. Τα αυγά Ascaris σε ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου διοχετεύονται με πιπέτα μέσω του στόματος ενός ποντικιού ή ενός ινδικού χοιριδίου. Μετά από 6-7 ημέρες, το ζώο σφάζεται, ανοίγεται και το συκώτι και οι πνεύμονές του εξετάζονται χωριστά για την παρουσία προνυμφών ascaris. Για να γίνει αυτό, το συκώτι και οι πνεύμονες κόβονται σε μικρά κομμάτια με ψαλίδι και εξετάζονται σύμφωνα με τη μέθοδο Berman ή Supryaga (ενότητα 6.1.2).

Εάν τα ζώα είχαν μολυνθεί με ζωντανά επεμβατικά αυγά, τότε σε αυτοψία στο ήπαρ και τους πνεύμονες, εντοπίζονται μεταναστευτικές προνύμφες ασκαρίδων.

Σε περίπτωση μόλυνσης, τα αυγά Fasciola στα κόπρανα των εργαστηριακών ζώων μπορούν να ανιχνευθούν σε κουνέλια μετά από 2 μήνες, σε ινδικά χοιρίδια- μετά από 50 ημέρες, σε ποντίκια - μετά από 35 - 40 ημέρες.

Για ταχύτερη απόκριση, τα πειραματόζωα ανοίγουν μετά από 20-30 ημέρες και το ήπαρ εξετάζεται για την παρουσία νεαρών φασιόλων.

Για να προσδιοριστεί η βιωσιμότητα των αυγών της ταινίας πυγμαίου, συνιστάται επίσης η τροφοδοσία τους σε λευκά ποντίκια που δεν είχαν μολυνθεί προηγουμένως, ακολουθούμενη από αυτοψία των ζώων μετά από 92-96 ώρες και ανίχνευση κυστικεροειδών στις εντερικές λάχνες ή κεστόδων στον εντερικό αυλό.

Για τον προσδιορισμό της βιωσιμότητας των αυγών της οπίσθορχης, συνιστάται μια μέθοδος (German S.M., Beer S.A., 1984), που βασίζεται στη φυσικοχημική ενεργοποίηση του αδένα εκκόλαψης miracidium και στη διέγερση κινητική δραστηριότηταπρονύμφες, που οδηγεί στο άνοιγμα του καπακιού του αυγού και στην ενεργό απελευθέρωση του miracidium υπό πειραματικές συνθήκες.

Ένα εναιώρημα αυγών opisthorchis σε νερό προψύχεται στους 10 - 12 ° C (όλες οι επόμενες εργασίες πραγματοποιούνται σε θερμοκρασία δωματίου 19 - 20 ° C). 1 σταγόνα ενός εναιωρήματος που περιέχει 100-150 αυγά προστίθεται σε ένα σωλήνα φυγοκέντρησης. Ο δοκιμαστικός σωλήνας τοποθετείται σε τρίποδο για 5-10 λεπτά. Κατά τη διάρκεια αυτής της περιόδου, όλα τα αυγά έχουν χρόνο να βυθιστούν στον πάτο. Στη συνέχεια, με μια λωρίδα διηθητικού χαρτιού, αναρροφάται προσεκτικά η περίσσεια νερού και προστίθενται 2 σταγόνες ειδικού μέσου στον δοκιμαστικό σωλήνα. Το μέσο παρασκευάζεται σε ρυθμιστικό διάλυμα Tris-HCl 0,005 Μ. Διάλυμα αιθανόλης 12 - 13% και βαφή (ματζέντα, σαφρανίνη, ηωσίνη, μπλε του μεθυλενίου, κ.λπ.) προστίθενται στο ρυθμιστικό. Ο δοκιμαστικός σωλήνας ανακινείται, το περιεχόμενό του μεταφέρεται με μια πιπέτα σε μια γυάλινη πλάκα και αφήνεται για 10 λεπτά ανακινώντας ελαφρά. Στη συνέχεια προσθέστε 2 σταγόνες από το υποδεικνυόμενο μέσο. Το παρασκεύασμα είναι έτοιμο για μικροσκόπηση κάτω από ένα συμβατικό μικροσκόπιο φωτός σε μεγέθυνση 20x.

Κατά τη διάρκεια αυτής της περιόδου, το καπάκι των βιώσιμων προνυμφών ανοίγει και το miracidium εισέρχεται ενεργά στο υποδεικνυόμενο μέσο. Λόγω της παρουσίας αιθανόλης σε αυτό, ακινητοποιούνται μετά από 2-5 λεπτά και μετά βάφονται με βαφή. Μπορούν εύκολα να ανιχνευθούν και να μετρηθούν στο μικροσκόπιο.