Ανάλυση για σύφιλη ELISA - αποκωδικοποίηση της ανάλυσης. Κανόνας και αποκλίσεις

Σε σχέση με την ανάπτυξη των κυτταρικών τεχνολογιών, της μοριακής βιολογίας, της γενετικής, της φυσικής, της χημείας και ορισμένων άλλων κλάδων υψηλής τεχνολογίας, νέες μέθοδοι υψηλής ακρίβειας και υψηλής τεχνολογίας εισάγονται στην καθημερινή πρακτική. Αυτές οι διεπιστημονικές τάσεις επηρεάζουν τόσο το πεδίο της ιατρικής γνώσης όσο και συναφείς τομείς βιολογικών και βιοχημικών προβλημάτων. Τα τελευταία δέκα χρόνια, μια μέθοδος κλινικής εργαστηριακής διάγνωσης που ονομάζεται ενζυμική ανοσοδοκιμασία έχει γίνει ευρέως διαδεδομένη και εισήχθη στη μαζική πρακτική.

Γενικά, οι τεχνολογίες των ανοσολογικών ενζυματικών και ακτινολογικών αντιδράσεων έχουν χρησιμοποιηθεί ευρέως στην τυποποίηση κυττάρων, κυτταροκαλλιεργειών και διαφόρων ιστών από τις αρχές της δεκαετίας του 1980. Ωστόσο, αυτές οι μέθοδοι ήταν πολύ επίπονες, όχι ενοποιημένες, μη τυποποιημένες, γεγονός που απέκλειε τη χρήση τους για ιατρικούς και διαγνωστικούς σκοπούς σε μαζική κλίμακα. Μόνο στενά, υψηλής έντασης γνώσης και εξαιρετικά εξειδικευμένα εργαστήρια χρησιμοποιούσαν τέτοιες μεθόδους.

Ωστόσο, με την ανάπτυξη της τεχνολογίας, της μικροτεχνολογίας και της παραγωγής διαφόρων βιοπολυμερών υλικών, κατέστη δυνατή η παραγωγή έτοιμων κιτ ενζυμικής ανοσοδοκιμασίας που μπορούν να χρησιμοποιηθούν από εργαστήρια γενικών ιατρικών ιδρυμάτων. Η ELISA χρησιμοποιείται ευρέως για τη διάγνωση όλων των ειδών λοιμώξεων (χλαμύδια, σύφιλη, κυτταρομεγαλοϊός, τοξοπλάσμωση, έρπης κ.λπ.), οξείες και χρόνιες, καθώς και λανθάνουσες μορφές που εμφανίζονται χωρίς κλινικά συμπτώματα. Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιείται επίσης για τον έλεγχο χρόνιων παθήσεων . Ας προσπαθήσουμε να καταλάβουμε τι είδους μέθοδος είναι και ποιες αρχές διέπουν αυτήν;

Συστατικά Ενζυμικής Ανοσοδοκιμασίας - Ανοσολογική Αντίδραση και Ενζυματική Αντίδραση

Η ενζυμική ανοσοδοκιμασία, όπως υποδηλώνει το όνομα, αποτελείται από δύο διαφορετικά συστατικά - μια ανοσοαπόκριση και μια ενζυματική αντίδραση. Η ανοσολογική αντίδραση παράγει τη δέσμευση βιολογικών μορίων, στοιχείων του κυττάρου ή του μικροοργανισμού, τα οποία στην πραγματικότητα προσπαθούν να ανιχνεύσουν και η ενζυματική αντίδραση σάς επιτρέπει να δείτε και να μετρήσετε το αποτέλεσμα της ανοσολογικής αντίδρασης. Δηλαδή, η ανοσοαπόκριση είναι μέρος μιας πολύπλοκης τεχνικής που ανιχνεύει πραγματικά το επιθυμητό μικρόβιο. Και η ενζυματική αντίδραση είναι εκείνο το μέρος μιας πολύπλοκης τεχνικής που σας επιτρέπει να μεταφράσετε το αποτέλεσμα μιας ανοσολογικής αντίδρασης σε μια μορφή που είναι ορατή στο μάτι και προσβάσιμη για μέτρηση με συνήθεις χημικές μεθόδους. Με βάση αυτή τη δομή της μεθόδου ενζυμικής ανοσοδοκιμασίας, θα αναλύσουμε και τα δύο μέρη της ξεχωριστά.

Ανοσολογική αντίδραση, τι είναι; Τι είναι ένα αντίσωμα ή αντιγόνο;

Τι είναι η ανοσολογική απόκριση; Τι είναι ένα αντιγόνο;
Πρώτα απ 'όλα, ας δούμε τι είναι οι αντιδράσεις του ανοσοποιητικού. ανοσολογικές αντιδράσεις- Πρόκειται για ειδικές αντιδράσεις δέσμευσης ενός αντιγόνου σε ένα αντίσωμα με το σχηματισμό ανοσοσυμπλέγματος. Τι σημαίνει? Στην επιφάνεια κάθε κυττάρου οποιουδήποτε οργανισμού υπάρχουν ειδικές δομές που ονομάζονται αντιγόνα. Τα αντιγόνα γενικά είναι μόρια που μεταφέρουν πληροφορίες για ένα κύτταρο (παρόμοιο με τις πληροφορίες στο σήμα ενός ατόμου, το οποίο υποδεικνύει τα βασικά δεδομένα αυτού του ατόμου).

Αντιγόνα μεμονωμένων και ειδών - τι είναι; Γιατί χρειάζονται αυτά τα αντιγόνα;

Διαθέσιμος αντιγόνα ατομικά, δηλαδή εγγενές μόνο στον συγκεκριμένο οργανισμό. Αυτά τα μεμονωμένα αντιγόνα είναι διαφορετικά για όλους τους ανθρώπους, μερικά είναι παρόμοια μεταξύ τους, αλλά εξακολουθούν να είναι διαφορετικά. Δεν υπάρχουν δύο πανομοιότυπα αντίγραφα μεμονωμένων αντιγόνων στη φύση!

Ο δεύτερος κύριος τύπος αντιγόνων είναι αντιγόνα ειδών, δηλαδή εγγενές σε οποιοδήποτε συγκεκριμένο είδος έμβιων όντων. Για παράδειγμα, οι άνθρωποι έχουν το δικό τους αντιγόνο είδους κοινό για όλους τους ανθρώπους, τα ποντίκια έχουν το δικό τους αντιγόνο είδους ποντικού και ούτω καθεξής. Στην επιφάνεια κάθε κυττάρου, υπάρχει απαραίτητα ένα συγκεκριμένο και μεμονωμένο αντιγόνο.

Το αντιγόνο του είδους χρησιμοποιείται από τα κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος για την αναγνώριση του «φίλου ή εχθρού».

Πώς γίνεται η αναγνώριση αντιγόνου;

Ένα κύτταρο του ανοσοποιητικού δεσμεύεται σε ένα ύποπτο κύτταρο και πραγματοποιεί την ταυτοποίηση ακριβώς από ένα μεμονωμένο αντιγόνο. Στη μνήμη του ανοσοποιητικού κυττάρου «καταγράφεται» πώς μοιάζει το «αντιγόνο του». Έτσι, εάν το αντιγόνο ενός ύποπτου κυττάρου ταιριάζει με την περιγραφή «δικό του αντιγόνο», τότε αυτό το κύτταρο του σώματός του δεν αποτελεί κίνδυνο. Τότε το κύτταρο του ανοσοποιητικού «λύνει» και φεύγει. Και αν το αντιγόνο δεν ταιριάζει με την περιγραφή του «εαυτού», τότε το κύτταρο του ανοσοποιητικού προσδιορίζει αυτό το κύτταρο ως «ξένο», και επομένως δυνητικά επικίνδυνο για ολόκληρο τον οργανισμό. Σε αυτή την περίπτωση, το ανοσοποιητικό κύτταρο δεν «ξεφορτώνεται», αλλά αρχίζει να καταστρέφει το επικίνδυνο αντικείμενο. Η ακρίβεια μιας τέτοιας ανοσολογικής αναγνώρισης είναι εκπληκτική - 99,97%. Δεν υπάρχουν σχεδόν καθόλου λάθη!

Τι είναι ένα αντίσωμα, ανοσοσύμπλεγμα;
Τι είναι ένα αντίσωμα;

Ένα αντίσωμα είναι ένα ειδικό μόριο που βρίσκεται στην επιφάνεια ενός κυττάρου του ανοσοποιητικού. Είναι το αντίσωμα που συνδέεται με τα αντιγόνα του ύποπτου κυττάρου. Επιπλέον, το αντίσωμα μεταδίδει πληροφορίες μέσα στο κύτταρο, όπου λαμβάνει χώρα η ταυτοποίηση, και λαμβάνει ένα σήμα επιστροφής δύο τύπων, «εαυτό» ή «εξωγήινο». Στο σήμα «δικό», το αντίσωμα καταστρέφει τον δεσμό με το αντιγόνο και απελευθερώνει το κύτταρο.

Τι είναι το ανοσοποιητικό σύμπλεγμα;
Με το σήμα «εξωγήινος», η κατάσταση εξελίσσεται διαφορετικά. Το αντίσωμα δεν διακόπτει τη σύνδεση με το αντιγόνο, αλλά αντίθετα στέλνοντας συγκεκριμένα σήματα προκαλεί «ενίσχυση». Βιολογικά, αυτό σημαίνει ότι άλλα αντισώματα που βρίσκονται σε άλλο μέρος του κυττάρου αρχίζουν να μετακινούνται στην περιοχή από την οποία προέρχεται το σήμα κινδύνου και επίσης σχηματίζουν έναν δεσμό μεταξύ τους και του δεσμευμένου αντιγόνου. Στο τέλος, το αντιγόνο αποδεικνύεται ότι περιβάλλεται από όλες τις πλευρές και είναι σταθερά συνδεδεμένο. Ένα τέτοιο σύμπλεγμα αντιγόνου + αντισώματος ονομάζεται ανοσοποιητικό σύμπλεγμα. Από αυτή τη στιγμή ξεκινά η χρήση του αντιγόνου. Αλλά τώρα δεν μας ενδιαφέρουν οι λεπτομέρειες της διαδικασίας εξουδετέρωσης του αντιγόνου.

Τύποι αντισωμάτων (IgA, IgM, IgG, IgD, IgE)
Τα αντισώματα είναι πρωτεϊνικές δομές, οι οποίες, κατά συνέπεια, έχουν ένα χημικό όνομα, το οποίο χρησιμοποιείται ως συνώνυμο της λέξης αντίσωμα. Ετσι, αντισώματα = ανοσοσφαιρίνες.

Υπάρχουν 5 τύποι ανοσοσφαιρινών (Ig), τα οποία συνδέονται με διαφορετικούς τύπους αντιγόνων σε διαφορετικά σημεία του ανθρώπινου σώματος (για παράδειγμα, στο δέρμα, στους βλεννογόνους, στο αίμα κ.λπ.). Δηλαδή, τα αντισώματα έχουν καταμερισμό εργασίας. Αυτές οι ανοσοσφαιρίνες ονομάζονται γράμματα του λατινικού αλφαβήτου - A, M, G, D, E και χαρακτηρίζονται ως εξής - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

Στη διαγνωστική, χρησιμοποιείται μόνο ένας τύπος αντισώματος, ο οποίος είναι πιο ειδικός για το μικρόβιο που προσδιορίζεται. Δηλαδή, η σύνδεση αυτού του τύπου αντισώματος με το αντιγόνο που προσδιορίζεται συμβαίνει πάντα. Τα πιο συχνά χρησιμοποιούμενα είναι τα IgG και IgM.

Είναι αυτή η αρχή της ανοσολογικής απόκρισης (η μοναδική ακρίβεια και ειδικότητα αναγνώρισης του βιολογικού αντικειμένου που προσδιορίζεται) που βασίζεται στην ενζυμική ανοσοδοκιμασία Λόγω της υψηλής ακρίβειας των αντισωμάτων στην αναγνώριση αντιγόνων, η ακρίβεια ολόκληρης της μεθόδου ενζυμικής ανοσοδοκιμασίας είναι επίσης το υψηλότερο.

ενζυματική αντίδραση

Τι είναι η ενζυματική αντίδραση; Τι είναι η συγγένεια, το υπόστρωμα και το προϊόν αντίδρασης;
Ας στραφούμε στην εξέταση της ενζυμικής αντίδρασης στο έργο της μεθόδου ενζυμικής ανοσοδοκιμασίας.

Τι είναι η ενζυματική αντίδραση;

Η ενζυματική αντίδραση είναι μια χημική αντίδραση κατά την οποία μια ουσία μετατρέπεται σε άλλη με τη δράση ενός ενζύμου. Η ουσία στην οποία δρα ένα ένζυμο ονομάζεται υπόστρωμα. Μια ουσία που λαμβάνεται ως αποτέλεσμα της δράσης ενός ενζύμου ονομάζεται προϊόν αντίδρασης. Επιπλέον, η ιδιαιτερότητα της ενζυματικής αντίδρασης είναι τέτοια που ένα συγκεκριμένο ένζυμο δρα μόνο σε ένα συγκεκριμένο υπόστρωμα. Αυτή η ιδιότητα ενός ενζύμου να αναγνωρίζει το «δικό του» υπόστρωμα ονομάζεται συγγένεια.

Έτσι, κάθε ένζυμο πραγματοποιεί μόνο μία ειδική αντίδραση για αυτό. Υπάρχουν πάρα πολλά ένζυμα στον βιολογικό κόσμο, καθώς και ενζυματικές αντιδράσεις. Στην ενζυμική ανοσοδοκιμασία, χρησιμοποιούνται μόνο λίγες ενζυματικές αντιδράσεις - όχι περισσότερες από 10. Στην περίπτωση αυτή, επιλέχθηκαν τέτοιες ενζυματικές αντιδράσεις, τα προϊόντα των οποίων είναι έγχρωμες ουσίες. Γιατί πρέπει να χρωματίζονται τα προϊόντα μιας ενζυμικής αντίδρασης; Επειδή υπάρχει μια απλή χημική μέθοδος για τον υπολογισμό της συγκέντρωσης μιας ουσίας από ένα έγχρωμο διάλυμα - χρωματομετρία.

Μέθοδος χρωματομετρίας - ουσία και αρχή

Χρωματομετρίαχρησιμοποιεί τη μέτρηση της χρωματικής πυκνότητας του διαλύματος και η συγκέντρωση της ουσίας υπολογίζεται από την πυκνότητα χρώματος Σε αυτήν την περίπτωση, μια ειδική συσκευή - ένα χρωματόμετρο μετρά την πυκνότητα χρώματος του διαλύματος. Στη χρωματομετρία, είναι δυνατές δύο παραλλαγές της εξάρτησης της πυκνότητας χρώματος από τη συγκέντρωση μιας ουσίας - αυτή είναι μια άμεσα ανάλογη εξάρτηση ή μια αντιστρόφως ανάλογη εξάρτηση. Με μια ευθέως αναλογική σχέση, όσο μεγαλύτερη είναι η συγκέντρωση της ουσίας, τόσο πιο έντονη είναι η χρωματική πυκνότητα του διαλύματος. Σε μια αντιστρόφως ανάλογη σχέση, όσο μεγαλύτερη είναι η συγκέντρωση μιας ουσίας, τόσο μικρότερη είναι η πυκνότητα χρώματος του διαλύματος. Τεχνικά, αυτό συμβαίνει ως εξής: λαμβάνονται πολλά διαλύματα με γνωστή συγκέντρωση μιας ουσίας, μετράται η πυκνότητα αυτών των διαλυμάτων και σχεδιάζεται ένα γράφημα της εξάρτησης της συγκέντρωσης από την πυκνότητα χρώματος ( γράφημα βαθμονόμησης).

Στη συνέχεια, μετράται η χρωματική πυκνότητα του διαλύματος, η συγκέντρωση του οποίου προσδιορίζεται και σύμφωνα με το γράφημα βαθμονόμησης, η τιμή συγκέντρωσης που αντιστοιχεί στο επίπεδο της μετρούμενης πυκνότητας χρώματος του διαλύματος εμφανίζεται αυτόματα.

Στην ενζυμική ανοσοδοκιμασία, τα ακόλουθα ένζυμα χρησιμοποιούνται συχνότερα: υπεροξειδάση, αλκαλική φωσφατάση, αβιδίνη.

Πώς συνδυάζονται ανοσολογικές και ενζυματικές αντιδράσεις στην ενζυμική ανοσοδοκιμασία; Περνάμε τώρα στην εξέταση της ίδιας της ενζυμικής ανοσοπροσροφητικής δοκιμασίας. Ποια βήματα περιλαμβάνει και τι συμβαίνει κατά τη διάρκεια αυτών των αντιδράσεων; Η ενζυμική ανοσοδοκιμασία είναι άμεση και έμμεση.

Άμεση ενζυμική ανοσοδοκιμασία - στάδια εφαρμογής

Σε μια άμεση ενζυμική ανοσοδοκιμασία, χρησιμοποιούνται αντισώματα στο ανιχνευμένο αντιγόνο, σε συνδυασμό με μια ειδική επισήμανση. Αυτή η συγκεκριμένη ετικέτα είναι το υπόστρωμα της ενζυμικής αντίδρασης.

Προσκόλληση αντιγόνων στην επιφάνεια του φρεατίου και σύνδεση αντιγόνου με αντίσωμα

Πώς γίνεται η άμεση ενζυμική ανοσοδοκιμασία; Λαμβάνεται βιολογικό υλικό (αίμα, ξύσεις από βλεννογόνους, επιχρίσματα) και τοποθετείται σε ειδικά φρεάτια. Το βιολογικό υλικό αφήνεται στα φρεάτια για 15-30 λεπτά, ώστε τα αντιγόνα να μπορούν να προσκολληθούν στην επιφάνεια των πηγαδιών. Περαιτέρω, αντισώματα στο ανιχνευμένο αντιγόνο προστίθενται σε αυτά τα φρεάτια. Αυτό σημαίνει ότι κατά την ανίχνευση αντιγόνων, για παράδειγμα, σύφιλης, προστίθενται αντισώματα κατά των αντιγόνων της σύφιλης. Αυτά τα αντισώματα παράγονται βιομηχανικά και τα εργαστήρια αγοράζουν έτοιμα κιτ.Αυτό το μείγμα δοκιμαστικού υλικού και αντισωμάτων αφήνεται για κάποιο χρονικό διάστημα (από 30 λεπτά έως 4-5 ώρες) ώστε τα αντισώματα να βρουν και να δεσμευτούν στο «δικό τους» αντιγόνο. δείγματα αντιγόνων, τόσο περισσότερα αντισώματα θα συνδεθούν με αυτά.

Αφαίρεση «επιπλέον» αντισωμάτων

Όπως υποδεικνύεται, τα αντισώματα συνδέονται επίσης με μια ειδική επισήμανση. Εφόσον τα αντισώματα προστίθενται σε περίσσεια, δεν θα συνδεθούν όλα με αντιγόνα και εάν δεν υπάρχει καθόλου αντιγόνο στο δείγμα, τότε, κατά συνέπεια, δεν θα δεσμευτεί ούτε ένα αντίσωμα στο επιθυμητό αντιγόνο. Για να αφαιρεθούν τα «επιπλέον» αντισώματα, απλώς χύνεται το περιεχόμενο των φρεατίων. Ως αποτέλεσμα, αφαιρούνται όλα τα «επιπλέον» αντισώματα, και παραμένουν εκείνα που έχουν έρθει σε επαφή με αντιγόνα, αφού τα αντιγόνα «κολλούνται» στην επιφάνεια των πηγαδιών. Τα φρεάτια ξεπλένονται αρκετές φορές με ένα ειδικό διάλυμα που σας επιτρέπει να ξεπλύνετε όλα τα "επιπλέον" αντισώματα.

Στη συνέχεια ξεκινά το δεύτερο στάδιο - η ενζυματική αντίδραση. Το διάλυμα με το ένζυμο προστίθεται στα πλυμένα φρεάτια και αφήνεται για 30-60 λεπτά. Αυτό το ένζυμο έχει συγγένεια για την ουσία (ειδική επισήμανση) στην οποία συνδέονται τα αντισώματα. Το ένζυμο πραγματοποιεί μια αντίδραση, ως αποτέλεσμα της οποίας η συγκεκριμένη ετικέτα (υπόστρωμα) μετατρέπεται σε έγχρωμη ουσία (προϊόν). Τότε η συγκέντρωση αυτής της έγχρωμης ουσίας βρίσκεται με χρωματομετρία. Εφόσον αυτή η ειδική επισήμανση σχετίζεται με αντισώματα, σημαίνει ότι η συγκέντρωση του έγχρωμου προϊόντος αντίδρασης είναι ίση με τη συγκέντρωση των αντισωμάτων. Και η συγκέντρωση των αντισωμάτων είναι ίση με τη συγκέντρωση των αντιγόνων. Έτσι, ως αποτέλεσμα της ανάλυσης, παίρνουμε την απάντηση, ποια είναι η συγκέντρωση του μικροβίου ή της ορμόνης που ανιχνεύτηκε.

Έτσι λειτουργεί η άμεση ενζυμική ανοσοδοκιμασία. Ωστόσο, η έμμεση ενζυμική ανοσοδοκιμασία χρησιμοποιείται πιο συχνά σήμερα επειδή η ευαισθησία και η ακρίβεια της έμμεσης είναι υψηλότερη από αυτή της άμεσης. Λοιπόν, ας προχωρήσουμε στην έμμεση ενζυμική ανοσοδοκιμασία.

Έμμεση ενζυμική ανοσοδοκιμασία - βήματα

Υπάρχουν δύο στάδια στην έμμεση ενζυμική ανοσοδοκιμασία. Κατά τη διάρκεια του πρώτου σταδίου, χρησιμοποιούνται μη επισημασμένα αντισώματα έναντι των ανιχνευόμενων αντιγόνων και στο δεύτερο στάδιο, χρησιμοποιούνται επισημασμένα αντισώματα έναντι των πρώτων μη επισημασμένων αντισωμάτων. Δηλαδή, δεν επιτυγχάνεται άμεση δέσμευση του αντισώματος στο αντιγόνο, αλλά ένας διπλός έλεγχος: η σύνδεση των αντισωμάτων στο αντιγόνο, μετά την οποία η σύνδεση του δεύτερου αντισώματος στο σύμπλεγμα αντισώματος + αντιγόνου. Κατά κανόνα, τα αντισώματα για το πρώτο στάδιο είναι το ποντίκι και για το δεύτερο στάδιο η κατσίκα.

Στερέωση αντιγόνων στην επιφάνεια του φρεατίου και δέσμευση αντιγόνου σε μη επισημασμένο αντίσωμα
Καθώς και για την άμεση ενζυμική ανοσοδοκιμασία, λαμβάνεται βιολογικό υλικό - αίμα, ξύσεις, επιχρίσματα. Το μελετημένο βιολογικό υλικό εισάγεται στα φρεάτια και αφήνεται για 15-30 λεπτά για να προσκολληθούν τα αντιγόνα στην επιφάνεια των φρεατίων. Στη συνέχεια, μη επισημασμένα αντισώματα κατά των αντιγόνων προστίθενται στα φρεάτια και αφήνονται για μια χρονική περίοδο (1-5 ώρες) έτσι ώστε τα αντισώματα να συνδεθούν με τα «δικά τους» αντιγόνα και να σχηματίσουν ένα ανοσοποιητικό σύμπλεγμα ( πρώτο στάδιο). Μετά από αυτό, τα «επιπλέον», μη δεσμευμένα αντισώματα αφαιρούνται με έκχυση του περιεχομένου των φρεατίων. Η πλύση πραγματοποιείται με ειδικό διάλυμα για την πλήρη απομάκρυνση όλων των μη δεσμευμένων αντισωμάτων.

Σύνδεση επισημασμένου αντισώματος με αντιγόνο + σύμπλεγμα μη επισημασμένου αντισώματος
Μετά από αυτό, λαμβάνονται τα δεύτερα αντισώματα - επισημαίνονται, προστίθενται στα φρεάτια και αφήνονται ξανά για λίγο - 15-30 λεπτά ( δεύτερη φάση). Κατά τη διάρκεια αυτού του χρόνου, τα επισημασμένα αντισώματα συνδέονται με το πρώτο - μη επισημασμένο και σχηματίζουν ένα σύμπλοκο - αντίσωμα + αντίσωμα + αντιγόνο. Ωστόσο, τόσο επισημασμένα όσο και μη επισημασμένα αντισώματα προστίθενται στα φρεάτια σε περίσσεια. Ως εκ τούτου, είναι απαραίτητο να αφαιρεθούν ξανά τα «επιπλέον», ήδη επισημασμένα αντισώματα που δεν δεσμεύτηκαν με μη επισημασμένα αντισώματα. Για να γίνει αυτό, επαναλάβετε τη διαδικασία για την έκχυση του περιεχομένου των φρεατίων και το πλύσιμο με ένα ειδικό διάλυμα.

Ενζυματική αντίδραση - ο σχηματισμός μιας έγχρωμης ένωσης
Μετά από αυτό, εισάγεται ένα ένζυμο που πραγματοποιεί την αντίδραση μετατροπής της «ετικέτας» σε έγχρωμη ουσία. Το χρώμα αναπτύσσεται μέσα σε 5-30 λεπτά. Στη συνέχεια πραγματοποιείται χρωματομετρία και υπολογίζεται η συγκέντρωση της έγχρωμης ουσίας. Δεδομένου ότι η συγκέντρωση της έγχρωμης ουσίας είναι ίση με τη συγκέντρωση των επισημασμένων αντισωμάτων και η συγκέντρωση των επισημασμένων είναι ίση με τη συγκέντρωση των μη επισημασμένων αντισωμάτων, η οποία, με τη σειρά της, είναι ίση με τη συγκέντρωση του αντιγόνου. Έτσι, λαμβάνουμε τη συγκέντρωση του ανιχνευθέντος αντιγόνου.
Ένας τέτοιος διπλός έλεγχος με τη μορφή της χρήσης δύο τύπων αντισωμάτων κατέστησε δυνατή την αύξηση της ευαισθησίας και της ειδικότητας της μεθόδου ενζυμικής ανοσοδοκιμασίας. Παρά την επιμήκυνση του χρόνου ανάλυσης και τη συμπερίληψη πρόσθετων σταδίων, αυτές οι απώλειες αντισταθμίζονται από την ακρίβεια του αποτελέσματος. Αυτός είναι ο λόγος για τον οποίο επί του παρόντος η συντριπτική πλειοψηφία των μεθόδων ενζυμικής ανοσοδοκιμασίας είναι έμμεσες ενζυμικές ανοσοδοκιμασίες.

Ποιες ασθένειες ανιχνεύονται με την ενζυμική ανοσοδοκιμασία;

Ας προχωρήσουμε στο να εξετάσουμε ποιες ασθένειες και ποιες βιολογικά δραστικές ουσίες ανιχνεύονται με την ενζυμική ανοσοδοκιμασία. Ουσίες που ανιχνεύονται με ενζυμική ανοσοδοκιμασία παρουσιάζονται στον πίνακα.

Ορμόνες και δείκτες θυρεοειδικής νόσου	θυρεοϋπεροξειδάση (TPO)
	θυρεοσφαιρίνη (TG)
	Θυρεοειδοτρόπος ορμόνη (TSH)
	Θυροξίνη (Τ4)
	Τριωδοθυρονίνη (Τ3)
	Ελεύθερη θυροξίνη (Τ4)
	Δωρεάν τριιωδοθυρονίνη (Τ3)
Διαγνωστικά της αναπαραγωγικής λειτουργίας	ωχρινοτρόπος ορμόνη (LH)
	Θυλακιοτρόπος ορμόνη (FSH)
	Προλακτίνη
	Προγεστερόνη
	Estradiol
	Τεστοστερόνη
	Κορτιζόλη
	Στεροειδής δεσμευτική σφαιρίνη (SHB)
	Αλφαφετοπρωτεΐνη (AFP)
δείκτες όγκου	Χοριακή γοναδοτροπίνη (CG)
	Ειδικό Προστατικό Αντιγόνο (PSA)
	SA - 125
	ΑΕ - 19,9
	CYFRA-21-1
	M - 12 (SA - 15,3)
	MUC-1 (M-22)
	MUC1 (M–20)
	Αλβεομουκίνη
	Κ - αλυσίδα
	L - αλυσίδα
	Παράγοντας νέκρωσης όγκου (TNFα)
	γ - ιντερφερόνη
	Καρκινικό-εμβρυϊκό αντιγόνο (CEA)
Διάγνωση μολυσματικών ασθενειών

Η ELISA είναι μια σύγχρονη εργαστηριακή μελέτη, κατά την οποία αναζητούνται συγκεκριμένα αντισώματα αίματος (ή αντιγόνα) για συγκεκριμένες ασθένειες, προκειμένου να εντοπιστεί όχι μόνο η αιτιολογία, αλλά και το στάδιο της νόσου.

1. αναζήτηση για συγκεκριμένα αντισώματα για οποιαδήποτε μολυσματική ασθένεια.
2. αναζήτηση αντιγόνων οποιωνδήποτε μολυσματικών ασθενειών.
3. μελέτη της ορμονικής κατάστασης του ασθενούς.
4. εξέταση για την παρουσία αυτοάνοσων νοσημάτων.

Όπως με κάθε μέθοδο εργαστηριακής διάγνωσης, η ELISA έχει τα πλεονεκτήματα και τα μειονεκτήματά της. Τα πλεονεκτήματα της μεθόδου περιλαμβάνουν:

1. υψηλή ειδικότητα και ευαισθησία της μεθόδου (πάνω από 90%).
2. την ικανότητα προσδιορισμού της νόσου και παρακολούθησης της δυναμικής της διαδικασίας, δηλαδή, σύγκριση της ποσότητας αντισωμάτων σε διαφορετικά χρονικά διαστήματα.
3. τη διαθεσιμότητα και την ταχύτητα αυτής της μελέτης·
4. Η μη επεμβατική μέθοδος δειγματοληψίας υλικού δεν είναι μελέτη.

Το μειονέκτημα της μεθόδου είναι το γεγονός ότι κατά την ανάλυση είναι δυνατό να εντοπιστεί όχι ο αιτιολογικός παράγοντας της νόσου, αλλά μόνο η ανοσολογική απόκριση σε αυτήν (αντισώματα).

Η ουσία της μεθόδου ELISA

Υπάρχουν διάφοροι τύποι ELISA: άμεση, έμμεση, μέθοδος αποκλεισμού, ανταγωνιστική. Ωστόσο, στην πράξη, η ετερογενής ανοσοδοκιμασία στερεάς φάσης ή ELISA χρησιμοποιείται πιο συχνά.

Η βάση της συνδεδεμένης με ένζυμο ανοσοπροσροφητικής ανάλυσης είναι η ανοσολογική αντίδραση ενός αντιγόνου και ενός αντισώματος με το σχηματισμό ενός ανοσοσυμπλέγματος, με αποτέλεσμα μια αλλαγή στην ενζυματική δραστηριότητα συγκεκριμένων ετικετών στην επιφάνεια των αντισωμάτων.

Στην πραγματικότητα, αυτή η διαδικασία μπορεί να χωριστεί σε διάφορα στάδια:

1. στην επιφάνεια των φρεατίων του συστήματος δοκιμής υπάρχει ένα καθαρισμένο αντιγόνο ενός συγκεκριμένου παθογόνου. Όταν προστίθεται ο ορός αίματος του ζώου, εμφανίζεται μια ειδική αντίδραση μεταξύ αυτού του αντιγόνου και του επιθυμητού αντισώματος.
2. Επιπλέον, ένα ειδικό χρωμογόνο (συζυγές σημασμένο με υπεροξειδάση) προστίθεται στο φρεάτιο. Εμφανίζεται μια ενζυματική αντίδραση, με αποτέλεσμα το σχηματισμό μιας έγχρωμης ουσίας στο φρεάτιο του δισκίου. Η ένταση του χρώματός του εξαρτάται από την ποσότητα των ανοσοσφαιρινών (αντισωμάτων) που περιέχονται στον ορό του ζώου.
3. Ακολουθεί η αξιολόγηση του αποτελέσματος. Με τη βοήθεια ενός πολυκαναλικού φασματοφωτόμετρου, η οπτική πυκνότητα του υλικού δοκιμής συγκρίνεται με την οπτική πυκνότητα των δειγμάτων ελέγχου και τα αποτελέσματα υποβάλλονται σε μαθηματική επεξεργασία. Η ποσότητα των αντισωμάτων σε έναν ασθενή εξαρτάται άμεσα από το ύψος της οπτικής πυκνότητας ενός δεδομένου φρεατίου.

Πρέπει να θυμόμαστε: για κάθε σύστημα δοκιμής, αναπτύσσονται μεμονωμένοι δείκτες για να ληφθούν υπόψη τα αποτελέσματα, οι δείκτες του κανόνα και η παθολογία ("τιμές αναφοράς"). Αυτό θα πρέπει να λαμβάνεται υπόψη κατά την αξιολόγηση των αποτελεσμάτων κάθε συγκεκριμένης μελέτης.

Δεν είναι σωστό να ερμηνεύονται τα αποτελέσματα ενός εργαστηρίου από τις «τιμές αναφοράς» ενός άλλου εργαστηρίου. Είναι επίσης λάθος να συγκρίνουμε τα αποτελέσματα διαφορετικών εργαστηρίων μεταξύ τους.

Κατά την αξιολόγηση των αποτελεσμάτων για συγκεκριμένες λοιμώξεις, η κατηγορία των αντισωμάτων που ανιχνεύονται και ο αριθμός τους είναι σημαντικά. Από αυτό εξαρτάται όχι μόνο το ζήτημα της αιτιολογίας της λοίμωξης, αλλά και το αναμενόμενο στάδιο της νόσου (οξεία, χρόνια), καθώς και η παρουσία ενεργού λοίμωξης (οξεία ή έξαρση χρόνιας) κατά τη στιγμή της εξέτασης. .

Ποιος είναι κατά προσέγγιση ο χρόνος εμφάνισης των αντισωμάτων;

Τα πιο πρώιμα αντισώματα είναι τα IgM. Μπορούν να ανιχνευθούν 1-3 εβδομάδες μετά από μια πιθανή μόλυνση, η οποία χαρακτηρίζει την οξεία φάση της μολυσματικής διαδικασίας. Η δεύτερη κατάσταση της εμφάνισης αντισωμάτων IgM είναι μια έξαρση μιας χρόνιας διαδικασίας. Τα IgM κυκλοφορούν κατά μέσο όρο για περίπου 3 μήνες, μετά ο αριθμός τους σταδιακά εξαφανίζεται. Ωστόσο, σε ορισμένους ασθενείς, ίχνη IgM μπορεί να ανιχνευθούν εντός 1-2 ετών από τη μόλυνση.

Από την 4η εβδομάδα μετά τη μόλυνση αρχίζουν να εμφανίζονται τα αντισώματα IgG. Στις περισσότερες λοιμώξεις, ο τίτλος τους αυξάνεται σταδιακά με μέγιστο σε διαφορετικούς χρόνους (κατά μέσο όρο, μετά από 1,5-2 μήνες), στη συνέχεια ο τίτλος παραμένει σε χαμηλό επίπεδο και υποδηλώνει ανοσία. Σε ορισμένες ασθένειες, το επίπεδο IgG δεν είναι υψηλό.

Επιλογές ανίχνευσης αντισωμάτων

• Η μεμονωμένη ανίχνευση αντισωμάτων IgM υποδηλώνει πρωτογενή λοίμωξη.
• Η ταυτόχρονη ανίχνευση IgM και IgG στο αίμα είναι χαρακτηριστική για την πρωτοπαθή λοίμωξη τους προηγούμενους 2-3 μήνες, καθώς και κατά τη διάρκεια μιας έξαρσης μιας χρόνιας νόσου.
• Η ανίχνευση της IgG μεμονωμένα μπορεί να υποδεικνύει τόσο ανοσία στη νόσο όσο και χρόνια λοίμωξη. Στη δεύτερη περίπτωση, τόσο η ποσότητα των αντισωμάτων (τίτλος) όσο και η αλλαγή αυτού του τίτλου με την πάροδο του χρόνου έχουν σημασία. Συνήθως, οι μελέτες πραγματοποιούνται σε διαστήματα 2-4-6 εβδομάδων.

Η ανάλυση ELISA είναι μια σύγχρονη τεχνική για την εργαστηριακή διάγνωση ενός σημαντικού αριθμού διαφόρων ασθενειών. Η συντομογραφία σημαίνει ενζυμική ανοσοδοκιμασία. Η ουσία της τεχνικής είναι ο προσδιορισμός του τίτλου (δραστικότητας) των αντισωμάτων.

Η τεχνική ELISA κερδίζει μεγάλη δημοτικότητα σήμερα. Χρησιμοποιείται στην κλινική ιατρική για τη διάγνωση διαφόρων παθολογιών, καθώς και σε πειραματικές μελέτες που απαιτούν ακριβή προσδιορισμό της συγκέντρωσης διαφόρων ενώσεων στα υπό μελέτη μέσα.

Η αρχή της τεχνικής ELISA

Η ELISA είναι μια ανοσολογική αντίδραση. Βασίζεται στην προσθήκη ειδικών αντισωμάτων
ή αντιγόνα στο υπό εξέταση μέσο (συνήθως το αίμα της δοκιμής) με επακόλουθο ενζυματικό προσδιορισμό της συγκέντρωσης των προκυπτόντων συμπλεγμάτων αντιγόνου-αντισώματος. Με βάση τη συγκέντρωση του συμπλόκου, μπορεί κανείς να κρίνει το επίπεδο ή τη δραστικότητα της αναλυόμενης ουσίας στο υπό εξέταση μέσο.

Ο προσδιορισμός της συγκέντρωσης των συμπλοκών αντιγόνου-αντισώματος πραγματοποιείται συνήθως με τη χρήση ειδικού εξοπλισμού με τη χρωματογραφική μέθοδο.

Ενδείξεις για διεξαγωγή

Η ανάλυση ELISA πραγματοποιείται για διάφορες ενδείξεις, οι κυριότερες στην κλινική ιατρική είναι:

• Διάγνωση λοιμώδους παθολογίας με κατά κύριο λόγο σεξουαλική μετάδοση (ΣΜΝ), η οποία περιλαμβάνει χλαμύδια, μυκοπλάσμωση, ουρεαπλάσμωση, τριχομονίαση, ενώ ανιχνεύονται ειδικά αντισώματα στον μολυσματικό παράγοντα.
• Διάγνωση μολυσματικών ασθενειών διαφόρων εντοπισμών για τον προσδιορισμό του σταδίου της παθολογικής διαδικασίας, κυρίως στη διαδικασία διάγνωσης της παρεντερικής ιογενούς ηπατίτιδας και του HIV.
• Προσδιορισμός της συγκέντρωσης ορμονών για τη διάγνωση διαφόρων παθολογιών των οργάνων του ενδοκρινικού συστήματος (ενδοκρινείς αδένες).
• Προσδιορισμός διαφόρων ενώσεων για τη διάγνωση της αιτίας της δηλητηρίασης του οργανισμού σε περίπτωση δηλητηρίασης, τσιμπήματος εντόμων ή φιδιών.

Με αυτές τις ιατρικές ενδείξεις, πραγματοποιείται εξέταση αίματος ELISA. Επίσης, αυτή η τεχνική χρησιμοποιείται ενεργά στην πειραματική ιατρική κατά τη διάρκεια διαφόρων κλινικών μελετών κατά την ανάπτυξη νέων φαρμάκων, εμβολίων για ανοσοπροφύλαξη.

Πώς γίνεται η μελέτη

Η εξέταση αίματος ELISA πραγματοποιείται σε εξειδικευμένο εργαστήριο. Προηγουμένως, για την εφαρμογή του, λαμβάνεται φλεβικό αίμα, συνήθως από την κοιλιακή φλέβα σε όγκο 5-10 ml, το οποίο στη συνέχεια αποστέλλεται στο εργαστήριο. Κατά μέσο όρο, το αποτέλεσμα της ανάλυσης μπορεί να ληφθεί την επόμενη κιόλας ημέρα, το οποίο είναι σημαντικό σημείο για τον έγκαιρο διορισμό της θεραπείας μετά τη διάγνωση της νόσου.

Πώς να προετοιμαστείτε για ELISA

Για να αποκτήσετε αξιόπιστα αποτελέσματα της μελέτης με ενζυμική ανοσοδοκιμασία, θα πρέπει να ακολουθήσετε μερικές απλές προπαρασκευαστικές συστάσεις, οι οποίες περιλαμβάνουν:

• Την ημέρα πριν από τη δοκιμή, θα πρέπει να σταματήσετε να τρώτε λιπαρά τρόφιμα (κρέας, καπνιστά κρέατα) και αλκοόλ.
• Το υλικό για έρευνα πρέπει να λαμβάνεται το πρωί με άδειο στομάχι.
• Την ημέρα της μελέτης, είναι επιθυμητό να αποφευχθεί το σωματικό και ψυχο-συναισθηματικό στρες.
• Πριν από τη μελέτη, πρέπει να προσπαθήσετε να μην καπνίζετε.

Τα περισσότερα από τα ληφθέντα ψευδώς θετικά αποτελέσματα της ενζυμικής ανοσοδοκιμασίας οφείλονται σε ακατάλληλη εφαρμογή των προπαρασκευαστικών συστάσεων. Αυτό στις περισσότερες περιπτώσεις σχετίζεται με την κατανάλωση λιπαρών τροφών, οι οποίες οδηγούν σε αύξηση της συγκέντρωσης των τριγλυκεριδίων (λιπών) στο πλάσμα του αίματος, τα οποία μειώνουν την ειδικότητα της ELISA.

Αποκρυπτογράφηση των αποτελεσμάτων

Η εξέταση αίματος για αντισώματα με χρήση ELISA έχει 2 τροποποιήσεις - ποιοτικό και ποσοτικό προσδιορισμό. Στο
ποιοτικός προσδιορισμός αντισωμάτων, το αποτέλεσμα μπορεί να είναι θετικό (ανιχνεύονται αντισώματα, γεγονός που υποδηλώνει την πιθανή παρουσία παθολογικής διαδικασίας που προκαλείται από τον μολυσματικό παράγοντα) ή αρνητικό (δεν υπάρχουν αντισώματα, γεγονός που υποδηλώνει την απουσία μολυσματικής διαδικασίας).

Η απουσία αντισωμάτων δεν είναι πάντα δείκτης 100% της απουσίας μολυσματικής διαδικασίας. Αυτό οφείλεται στο γεγονός ότι μετά τη μόλυνση, τα αντισώματα δεν σχηματίζονται αμέσως, αλλά σε ένα ορισμένο χρονικό διάστημα (τουλάχιστον περίπου 2 εβδομάδες). Επομένως, για να επιβεβαιωθεί η απουσία μόλυνσης, η ELISA μπορεί να επαναληφθεί μετά από λίγο.

Με την ποσοτική ELISA προσδιορίζεται ο τίτλος (δραστικότητα) των αντισωμάτων, καθώς και οι τάξεις τους. Στις περισσότερες περιπτώσεις, για τη διάγνωση μολυσματικών ασθενειών, προσδιορίζονται αντισώματα της κατηγορίας IgG (ανοσοσφαιρίνες G) και IgM (ανοσοσφαιρίνες M), τα οποία σχηματίζονται στο σώμα σε διάφορα διαστήματα μετά τη μόλυνση, επομένως η αποκρυπτογράφηση του αποτελέσματος της ανάλυσης μπορεί να έχει πολλές έννοιες:

• Η αύξηση της δραστηριότητας IgM και η απουσία IgG αποτελούν ένδειξη πρόσφατης μόλυνσης και οξείας πορείας της μολυσματικής διαδικασίας.
• Η αύξηση της δραστηριότητας των IgM και IgG αποτελεί έξαρση της μολυσματικής διαδικασίας στη χρόνια πορεία της και μακροχρόνια μόλυνση.
• Η υψηλή δραστηριότητα του IgG και η απουσία IgM είναι μια χρόνια πορεία της μολυσματικής διαδικασίας στο πλαίσιο μιας μακροχρόνιας λοίμωξης, μετά την οποία έχουν περάσει περισσότεροι από έξι μήνες (ο χρόνος που απαιτείται για το σχηματισμό αντισωμάτων κατηγορίας IgG).

Γενικά, η ερμηνεία των αποτελεσμάτων της ELISA για κάθε μολυσματική διαδικασία έχει ορισμένα χαρακτηριστικά. Ο ακριβέστερος προσδιορισμός της παρουσίας μιας μολυσματικής νόσου, καθώς και του σταδίου της πορείας της, πραγματοποιείται από γιατρό.

Η ELISA είναι σήμερα η μέθοδος εκλογής για τη διάγνωση των περισσότερων μολυσματικών ασθενειών. Με βάση τα αποτελέσματα μιας τέτοιας μελέτης, ο γιατρός έχει την ευκαιρία να καθορίσει μια ακριβή διάγνωση και να καθορίσει το στάδιο της πορείας της παθολογικής διαδικασίας προκειμένου να συνταγογραφήσει την επακόλουθη επαρκή και αποτελεσματική θεραπεία.

Οι σύγχρονες διαγνωστικές μέθοδοι καθιστούν δυνατό στο εργαστήριο τον εντοπισμό μιας συγκεκριμένης ασθένειας με τη βοήθεια ειδικών εξετάσεων. Ένα από αυτά θα πρέπει να περιλαμβάνει ενζυμική ανοσοδοκιμασία, μέσω της οποίας μπορείτε να επιβεβαιώσετε μια προκαταρκτική διάγνωση.

Η ELISA είναι μια από τις πιο αποτελεσματικές και σύγχρονες μεθόδους για την ανίχνευση διαταραχών που σχετίζονται με ανοσολογικές και ορμονικές αποτυχίες, καθώς και με ογκολογικές διεργασίες. Κατά την ανάλυση στο αίμα, μπορούν να ανιχνευθούν αντισώματα που παράγονται όταν υπάρχει μόλυνση στο σώμα. Δεδομένης αυτής της απόχρωσης, είναι δυνατό να εντοπιστεί η ασθένεια ακόμη και στο πολύ πρώιμο στάδιο της ανάπτυξής της.

Ποια είναι η βάση της μεθοδολογίας

Τα αποτελέσματα της ανάλυσης ELISA βασίζονται στη λήψη χημικών αντιδράσεων σε ένζυμα που χρησιμεύουν ως ειδικά σήματα αναγνώρισης για την αναγνώριση των αντισωμάτων. Επομένως, κατά τη διάρκεια ανοσοχημικών αντιδράσεων, τα αντισώματα αρχίζουν να αλληλεπιδρούν με ορισμένα αντιγόνα. Όλα αυτά δίνουν τη βάση για να ισχυριστεί κανείς ότι τα ψευδή αποτελέσματα κατά την αιμοδοσία για ELISA είναι ελάχιστα.

Η μελέτη σάς επιτρέπει να προσδιορίσετε τον αριθμό των κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος, τις ιδιότητές τους, καθώς και την παρουσία των απαραίτητων αντισωμάτων

Θετικό αποτέλεσμα θεωρείται όταν ανιχνεύεται το χρώμα του διαλύματος. Το χρώμα δείχνει ότι τα αντιγόνα αλληλεπιδρούν με το αντίσωμα. Στην περίπτωση που δεν συμβαίνει κάτι τέτοιο, το αποτέλεσμα είναι αρνητικό.

Πραγματοποιείται ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία (ELISA) για μια ολοκληρωμένη αξιολόγηση των προστατευτικών λειτουργιών του σώματος. Κατά τη διάρκεια της μελέτης, προσδιορίζεται ο αριθμός και οι ιδιότητες των κυττάρων του ανοσοποιητικού, η παρουσία των απαραίτητων αντισωμάτων. Η εξέταση αίματος ELISA πραγματοποιείται για τη διάγνωση λοιμωδών, αιματολογικών, αυτοάνοσων νοσημάτων, πρωτοπαθών και δευτερογενών ανοσοανεπάρκειων. Σκεφτείτε τι είναι η εξέταση αίματος με ELISA και ποιες ενδείξεις υπάρχουν για αυτήν τη μελέτη.

Τι είναι

Η εξέταση αίματος ELISA είναι μια εργαστηριακή μέθοδος που ανιχνεύει αντισώματα ή αντιγόνα σε δείγμα αίματος. Αυτή η μελέτη χρησιμοποιείται για την ανίχνευση του επιπέδου των ανοσοσφαιρινών, ανοσολογικών συμπλεγμάτων, ορμονών.

Ενδείξεις για ανάλυση

Για το διορισμό μιας εξέτασης αίματος ELISA, υπάρχουν οι ακόλουθες ενδείξεις:

• διάγνωση σεξουαλικά μεταδιδόμενων λοιμώξεων - ουρεόπλασμα, μυκόπλασμα, χλαμύδια, τριχομονάδα, σύφιλη.
• διάγνωση ιογενών ασθενειών - κυτταρομεγαλοϊός, έρπης, ηπατίτιδα, ιός Epstein-Barr.
• προσδιορισμός του επιπέδου των ορμονών.
• διάγνωση ογκολογικών ασθενειών ·
• προσδιορισμός ανοσοανεπάρκειας;
• διάγνωση αλλεργιών?
• προεγχειρητική ολοκληρωμένη εξέταση πριν από τη μεταμόσχευση οργάνων.
• αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας της θεραπείας.

Αρχή της μεθόδου

Η αρχή λειτουργίας της μεθόδου ενζυμικής ανοσοδοκιμασίας βασίζεται στον προσδιορισμό ειδικών πρωτεϊνών-αντισωμάτων στο αίμα - ανοσοσφαιρινών. Οι ανοσοσφαιρίνες παράγονται από το ανθρώπινο ανοσοποιητικό σύστημα όταν εισέρχονται αντιγόνα (ξένοι μικροοργανισμοί) στο σώμα. Αυτά τα μόρια του ανοσοποιητικού συνδέονται με μια ποικιλία μολυσματικών παραγόντων στο σώμα και τους εξουδετερώνουν.

Οι ανοσοσφαιρίνες έχουν ένα σημαντικό χαρακτηριστικό - ειδικότητα. Λόγω αυτού, μπορούν να συνδεθούν με ένα συγκεκριμένο αντιγόνο, σχηματίζοντας ένα σύμπλεγμα αντιγόνου-αντισώματος. Κατά τη διάρκεια μιας εξέτασης αίματος ELISA, αυτό το σύμπλεγμα προσδιορίζεται ποιοτικά και ποσοτικά.

Υπάρχουν πέντε κατηγορίες ανοσοσφαιρινών. Αλλά συνήθως ορίζονται τρεις κατηγορίες - ανοσοσφαιρίνες A, M, G. Αυτά τα αντισώματα συσσωρεύονται στο σώμα σε διαφορετικούς χρόνους από τη στιγμή της μόλυνσης.

• Ανοσοσφαιρίνες κατηγορία M (IgM)εμφανίζονται στο αίμα για πρώτη φορά την πέμπτη ημέρα από τη στιγμή της μόλυνσης. Βρίσκονται στο σώμα για 5-6 εβδομάδες και μετά εξαφανίζονται από την κυκλοφορία του αίματος. Τα αντισώματα IgM υποδεικνύουν μια οξεία περίοδο της νόσου ή μια έξαρση της νόσου στη χρόνια πορεία της.
• Περίπου 3-4 εβδομάδες μετά τη μόλυνση, εμφανίζονται ανοσοσφαιρίνες στο αίμα κατηγορία G (IgG). Μπορούν να υπάρχουν στο ανθρώπινο αίμα για αρκετούς μήνες ή και χρόνια. Σύμφωνα με την αποκωδικοποίηση της εξέτασης αίματος ELISA, εάν σε δύο δείγματα αίματος που λαμβάνονται διαδοχικά δύο εβδομάδες αργότερα, αυξηθεί η ποσότητα των ανοσοσφαιρινών IgG, μιλούν για τρέχουσα μόλυνση ή επαναμόλυνση - επαναμόλυνση με την ίδια μόλυνση.
• Ανοσοσφαιρίνες κατηγορία Α (IgA)μπορεί να ανιχνευθεί με αυτήν την ερευνητική μέθοδο 2-4 εβδομάδες μετά τη μόλυνση ή την έξαρση μιας μολυσματικής νόσου. Από αυτά, μόνο το 20% κυκλοφορεί στο αίμα, το υπόλοιπο εκκρίνεται από τους βλεννογόνους. Τα αντισώματα IgA εξαφανίζονται από την κυκλοφορία του αίματος 2-8 εβδομάδες μετά την καταστροφή των μολυσματικών παραγόντων. Η εξαφάνιση αυτών των ανοσοσφαιρινών σημαίνει θεραπεία για τη μόλυνση. Εάν μετά το τέλος της νόσου διαπιστωθεί η παρουσία αντισωμάτων IgA στο αίμα, τότε η νόσος έχει περάσει στο χρόνιο στάδιο.

Προετοιμασία για ανάλυση

Το ανθρώπινο αίμα χρησιμοποιείται συχνότερα για τη διεξαγωγή μιας εξέτασης αίματος ELISA. Αλλά μπορείτε επίσης να εξετάσετε το περιεχόμενο του υαλοειδούς σώματος, του εγκεφαλονωτιαίου υγρού, του αμνιακού υγρού.

Λαμβάνεται δείγμα αίματος για έρευνα από τον ασθενή από την κοιλιακή φλέβα. Συνιστάται η αιμοδοσία με άδειο στομάχι (τουλάχιστον 12 ώρες πρέπει να περάσουν από τη στιγμή του τελευταίου γεύματος). Είναι απαραίτητο να ενημερώσετε τον γιατρό εάν ο ασθενής λαμβάνει φάρμακα, καθώς ορισμένα από αυτά μπορούν να αλλάξουν το αποτέλεσμα της ανάλυσης. Η αξιοπιστία των αποτελεσμάτων της μελέτης επηρεάζεται από τη χρήση αλκοόλ και ναρκωτικών.

Αποκρυπτογράφηση

Η μορφή αποτελέσματος αυτής της ανάλυσης υποδεικνύει ένα θετικό (+) ή αρνητικό (-) αποτέλεσμα για κάθε κατηγορία ανοσοσφαιρινών.

Εξετάστε την ερμηνεία μιας πιθανής αποκωδικοποίησης της εξέτασης αίματος ELISA.

• Αρνητικό αποτέλεσμα IgM, IgG, IgA - έλλειψη ανοσίας στη μόλυνση.
• Αρνητικό αποτέλεσμα IgM, IgA και θετικό IgG - ανοσία μετά τη μόλυνση ή μετά τον εμβολιασμό.
• Τα αρνητικά ή θετικά IgG, IgA και θετικά IgM είναι οξεία λοίμωξη.
• Ένα θετικό αποτέλεσμα των IgM, IgG, IgA είναι μια έξαρση μιας χρόνιας λοιμώδους νόσου.
• Ένα αρνητικό αποτέλεσμα IgM και ένα αρνητικό ή θετικό αποτέλεσμα IgG, IgA είναι μια χρόνια λοίμωξη.
• Αρνητικό αποτέλεσμα IgM και όχι IgG, IgA - ανάκτηση.

Πλεονεκτήματα της μεθόδου

Μια εξέταση αίματος ELISA έχει πολλά πλεονεκτήματα. Τα κυριότερα μπορούν να διακριθούν:

• σχετικά υψηλή ακρίβεια (ευαισθησία).
• τη δυνατότητα έγκαιρης διάγνωσης·
• την ικανότητα παρακολούθησης της δυναμικής της μολυσματικής διαδικασίας.
• υψηλό επίπεδο ενοποίησης, που επιτρέπει μαζικές έρευνες·
• ένα σύντομο χρονικό διάστημα που απαιτείται για την απόκτηση του αποτελέσματος της ανάλυσης·
• ευκολία στην εργασία?
• αυτοματοποίηση όλων των σταδίων ανάλυσης.
• σχετικά χαμηλό κόστος.

Ελαττώματα

Το μειονέκτημα της μεθόδου ELISA είναι ότι μερικές φορές δίνει ψευδώς αρνητικά ή ψευδώς θετικά αποτελέσματα. Εκτός από τα τεχνικά λάθη κατά τη διάρκεια της μελέτης, η αιτία των ψευδών αποτελεσμάτων μπορεί να είναι ο ρευματοειδής παράγοντας στον ασθενή, η παρουσία χρόνιων ασθενειών (στις οποίες παράγονται αντισώματα), οι μεταβολικές διαταραχές και η λήψη ορισμένων φαρμάκων.

• ασκαρίαση?
• τριχίνωση - η ανάλυση πραγματοποιείται αρκετές φορές, το μέγιστο επίπεδο αντισωμάτων προσδιορίζεται σε 4-12 εβδομάδες μετά τη μόλυνση.
• κυστικέρκωση;
• ταενίαση;
• Fascioliasis - τα αντισώματα προσδιορίζονται στο οξύ στάδιο της νόσου.
• οπισθορχίαση - διενεργεί διαφορική διάγνωση μεταξύ χρόνιων και οξέων μορφών της νόσου.
• γιαρδιάση;
• σπλαχνική και δερματική λεϊσμανίαση.
• αμοιβάδα;
• τοξοπλάσμωση.

4.2 4,20 από 5 (5 ψήφοι)