मल की सूक्ष्म जांच. हेल्मिंथियासिस का इंट्रावाइटल निदान

प्रत्यक्ष तरीके: स्वयं कृमि का पता लगाना, उनके टुकड़े, अंडे, मल, मूत्र, ग्रहणी स्राव, थूक, नाक और योनि बलगम में लार्वा, उपांग स्थानों की सामग्री, ऊतक के बायोप्सीड टुकड़े।

निदान करते समय, इसमें रहने वाले सभी प्रकार के कृमियों के अंडे या लार्वा की पहचान करना असंभव है पाचन तंत्रव्यक्ति। इस प्रकार, प्लवनशीलता विधि का उपयोग करते समय, ट्रेमेटोड अंडे और, कुछ मामलों में, अनिषेचित राउंडवॉर्म अंडे सतह फिल्म में तैरते नहीं हैं (उनके उच्च विशिष्ट गुरुत्व के कारण)। मल में पिनवॉर्म अंडे और टैनिड ओंकोस्फीयर का पाया जाना बहुत दुर्लभ है, जिन्हें विशेष अनुसंधान विधियों का उपयोग करके पता लगाया जाता है: पिनवॉर्म और टैनिड के लिए पेरिअनल सिलवटों से स्क्रैपिंग, ट्रेमेटोड्स (ऑपिसथोरचिड अंडे, आदि) के लिए अवसादन विधियां। इसलिए, हेल्मिंथ संक्रमण के लिए एक रोगी की लक्षित जांच के लिए, रेफरल में डॉक्टर को यह बताना होगा कि किस हेल्मिंथ पर ध्यान केंद्रित किया जाना चाहिए (निदान), जो प्रयोगशाला सहायक को इस प्रकार के हेल्मिंथ की पहचान करने के लिए उचित तकनीक चुनने की अनुमति देगा। मल से लिया गया अलग - अलग जगहेंएक साफ कांच के कंटेनर में कम से कम 50 ग्राम (चम्मच) की मात्रा में मल को शौच के 24 घंटे बाद प्रयोगशाला में भेजा जाना चाहिए और प्राप्ति के दिन जांच की जानी चाहिए।

यदि मल को तब तक सुरक्षित रखना आवश्यक है अगले दिनइसे ठंडे स्थान (0-4°C) में रखा जाता है या किसी परिरक्षक से भर दिया जाता है।

जांच से पहले, मल को एक छड़ी से मिलाया जाता है ताकि हेल्मिंथ अंडे कुल द्रव्यमान में समान रूप से वितरित हो जाएं।

यदि तैयारी में किसी हेल्मिंथ के अंडे पाए जाते हैं, तो देखना बंद नहीं किया जाता है, क्योंकि दोहरा या तिगुना आक्रमण हो सकता है।

हेल्मिंथ संक्रमण के उपचार की प्रभावशीलता की निगरानी हेल्मिन्थ के अंडों के लिए मल की जांच करके उपचार के 2-3 सप्ताह या 2-3 महीने बाद की जाती है, जो कि पाए गए हेल्मिन्थ पर निर्भर करता है।

नग्न आंखों से या हाथ के आवर्धक कांच का उपयोग करके मल में संपूर्ण परिपक्व कृमि या उनके टुकड़ों का पता लगाने के लिए मैक्रोस्कोपिक तरीकों का उपयोग किया जाता है।

अक्सर, शौच के बाद मल की सतह पर सक्रिय रूप से रेंगने वाले पिनवॉर्म देखे जा सकते हैं; राउंडवॉर्म मल में उत्सर्जित होते हैं; कभी-कभी लोग स्वयं कृमि के मार्ग को नोटिस करते हैं। डिफाइलोबोथ्रियासिस वाले रोगियों में, टेपवर्म स्ट्रोबिली के टुकड़े ("नूडल्स" के रूप में) जारी हो सकते हैं, और टैनिड (सूअर का मांस या गोजातीय टेपवर्म) से संक्रमित लोगों में, हेल्मिंथ के खंड अक्सर मल के साथ ("सफेद" के रूप में) निकलते हैं कतरन") या वे सक्रिय रूप से बाहर रेंगते हैं गुदा.

टेनियासिस और टेनियारिनचोसिस (एक सर्वेक्षण के साथ संयोजन में) के विभेदक निदान के लिए मैक्रोस्कोपिक विधि मुख्य है।

विशेष स्थूल विधियों में से मल की क्रमिक धुलाई की विधि का प्रयोग किया जाता है।

एक समान निलंबन प्राप्त करने के लिए मल को पानी में मिलाया जाता है, जिसके बाद अच्छी रोशनीउन्हें काले फोटोग्राफिक क्यूवेट में या अलग-अलग छोटे हिस्सों में सावधानीपूर्वक जांच की जाती है गहरे रंग की पृष्ठभूमिपेट्री डिश में. चिमटी या विच्छेदन सुई का उपयोग करके, सभी संदिग्ध सफेद कणों, हेल्मिन्थ के टुकड़ों के लिए संदिग्ध बड़ी संरचनाओं को हटा दें, और दो स्लाइडों के बीच एक आवर्धक कांच के नीचे उनकी जांच करें। छोटे कृमि या सेस्टोड सिरों की जांच एक आवर्धक कांच के नीचे ग्लिसरीन की एक बूंद में या एक माइक्रोस्कोप के नीचे की जाती है।

पोर्क टेपवर्म, गोजातीय टेपवर्म, या चौड़े टेपवर्म के खंडों के निदान के लिए इस विधि का उपयोग करते समय, धोए गए खंडों को दो ग्लासों के बीच रखा जाता है और, एक आवर्धक कांच या कम आवर्धन माइक्रोस्कोप के नीचे प्रकाश को देखकर, प्रजाति निर्धारित की जाती है गर्भाशय की संरचना द्वारा (पोर्क टेपवर्म के परिपक्व खंड में, 8- 12 पार्श्व शाखाएं, और गोजातीय फीताकृमि 18-32, अधिक बार 28-32, चौड़े टेपवर्म में खंड चौड़े होते हैं और केंद्र में गर्भाशय "रोसेट" के रूप में होता है)। यदि गर्भाशय को देखना कठिन हो तो उसे पहले 50% ग्लिसरीन के घोल में कुछ देर के लिए रखा जा सकता है, जिसके बाद गर्भाशय के खाली धड़ को भी स्पष्ट रूप से देखा जा सकता है।

अलग किए गए सिरों की संरचना द्वारा इन सेस्टोड की पहचान करते समय, उन्हें स्लाइड के बीच ग्लिसरीन की एक बूंद में गर्दन के साथ सावधानीपूर्वक रखा जाता है (या एक कवरस्लिप के साथ कवर किया जाता है) और, बिना निचोड़े, कम आवर्धन पर एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है।

सूक्ष्म विधियाँसरल, जटिल और विशेष में विभाजित हैं।

सरल लोगों में देशी स्मीयर की विधियाँ, लुगोल के घोल के साथ देशी स्मीयर, काटो के अनुसार सिलोफ़न के नीचे गाढ़े स्मीयर की विधियाँ, ट्विस्टिंग (शुलमैन के अनुसार) और पेरिअनल स्क्रैपिंग शामिल हैं।

जटिल तरीकेअधिक प्रभावी होते हैं और तैयारियों में अंडों की सांद्रता पर आधारित होते हैं। इनमें तरल अभिकर्मकों के साथ मल का पूर्व-उपचार शामिल होता है, जिसके परिणामस्वरूप हेल्मिन्थ अंडे या तो अवक्षेपित हो जाते हैं या तरल की सतह पर तैरने लगते हैं।

जटिल विधियों में संवर्धन विधियाँ शामिल हैं:

ए) प्लवन (कब)। विशिष्ट गुरुत्वअंडों का विशिष्ट गुरुत्व कम होता है नमकीन घोलऔर अंडे सतह की फिल्म पर तैरने लगते हैं);

बी) अवसादन (जब अंडों का विशिष्ट गुरुत्व खारे घोल के विशिष्ट गुरुत्व से अधिक होता है और अंडे तलछट में बस जाते हैं)।

हेल्मिंथ के अंडे और लार्वा, सिस्ट और प्रोटोजोआ के वानस्पतिक रूपों का पता लगाने के लिए विशेष तरीकों में स्क्रैपिंग, प्लवनशीलता, अवसादन, लार्वास्कोपी, प्रोटोजोस्कोपी, पित्त परीक्षण और मल, थूक आदि के धुंधलापन के तरीके शामिल हैं।

सरल तरीकेमल परीक्षण

देशी धब्बा. प्रदत्त भाग के विभिन्न हिस्सों से मल का एक छोटा कण लकड़ी की छड़ी से लिया जाता है, 50% ग्लिसरॉल घोल की एक बूंद में कांच की स्लाइड पर अच्छी तरह से रगड़ा जाता है और 2-3 कांच की स्लाइडों पर एक पतला धब्बा बनाया जाता है। माइक्रोस्कोप के तहत कम से कम 3 तैयारियों की जांच की जाती है। विधि का नुकसान: सामग्री की थोड़ी मात्रा देखी जाती है, इसलिए इसका उपयोग एक स्वतंत्र विधि के रूप में नहीं किया जाता है।

घुमाने की विधि(शुलमैन)। 2.0-3.0 ग्राम मल को एक गिलास में रखा जाता है, 5 गुना मात्रा में खारा घोल या आसुत जल के साथ कांच की छड़ से अच्छी तरह हिलाया जाता है, 2-3 मिनट के लिए तेजी से हिलाया जाता है, और जल्दी से छड़ को मिश्रण से हटा दिया जाता है। छड़ी के अंत में मिश्रण की एक बूंद को एक ग्लास स्लाइड में स्थानांतरित किया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है। केन्द्रापसारक बल के सिद्धांत के कारण अंडे और लार्वा छड़ी पर जमा हो जाते हैं।

सिलोफ़न के साथ काटो मोटी स्मीयर विधि. रासायनिक अभिकर्मक: 100% ग्लिसरीन, 6% फिनोल घोल (100 मिली पानी + 6 ग्राम फिनोल), 3% मैलाकाइट हरा घोल (2.5 मिली आसुत जल + 75 मिली मैलाकाइट ग्रीन)।

कार्यशील घोल की तैयारी: 6% फिनोल घोल का 100 मिली + शुद्ध ग्लिसरीन का 100 मिली + 3% मैलाकाइट हरा घोल का 1.2 मिली।

सिलोफ़न स्ट्रिप्स की तैयारी: सिलोफ़न स्ट्रिप्स को काटें जिसका आकार ग्लास स्लाइड से मेल खाता हो। सिलोफ़न को हाइड्रोफिलिक होना चाहिए (जो सिलोफ़न जलता है वह उपयुक्त है; यदि पिघल जाए तो वह अनुपयुक्त है)। कार्यशील घोल में 5 हजार तक स्ट्रिप्स को संसाधित किया जा सकता है। सिलोफ़न स्ट्रिप्स की एक्सपोज़र अवधि जब तक कि वे कार्यशील समाधान में उपयोग के लिए तैयार न हो जाएं, कम से कम 24 घंटे है।

अध्ययन की प्रगति. 50 मिलीग्राम मल (एक बड़े मटर के आकार के बराबर) को एक कांच की स्लाइड पर लगाया जाता है, एक व्यक्तिगत छड़ी (कांच, लकड़ी) से रगड़ा जाता है, एक सिलोफ़न पट्टी से ढक दिया जाता है और एक रबर स्टॉपर के साथ शीर्ष पर रगड़ा जाता है जब तक कि एक समान गाढ़ा धब्बा न बन जाए। प्राप्त किया। तैयारी को कमरे के तापमान पर एक घंटे के लिए या थर्मोस्टेट में 40°C पर 20-30 मिनट के लिए सुखाया जाता है और सूक्ष्मदर्शी रूप से जांच की जाती है (कमरे के तापमान पर एक्सपोज़र का समय 5-6 घंटे या उससे अधिक तक बढ़ाया जा सकता है)।

दक्षता के संदर्भ में, यह विधि प्लवनशीलता विधि के करीब है, लेकिन गहन और मध्यम तीव्रता के आक्रमण को प्रकट करती है।

इसका उपयोग एक स्वतंत्र निदान पद्धति के रूप में किया जाता है और जनसंख्या की बड़े पैमाने पर जांच के लिए इसकी सिफारिश की जाती है।

नैदानिक ​​​​नैदानिक ​​​​प्रयोगशालाओं में इसका उपयोग डॉक्टरों के रेफरल में विशिष्ट निदान की अनुपस्थिति में हेल्मिंथ के निदान के लिए एक एकीकृत विधि के रूप में किया जाता है।

लुगोल के समाधान के साथ पेरिअनल स्क्रैपिंग और देशी स्मीयर की विधियों का वर्णन विशेष विधि अनुभाग में किया गया है।

परिष्कृत मल संवर्धन विधियाँ

संवर्धन के तरीके हेल्मिंथ अंडों के विशिष्ट गुरुत्व और उपयोग किए गए खारे घोल में अंतर पर आधारित होते हैं।

प्लवन विधि का उपयोग करते समय, निम्नलिखित नमक समाधानों का उपयोग किया जा सकता है:

1. 1.5 के घनत्व के साथ लेड नाइट्रेट घोल PbNO3 (लीड नाइट्रेट)। 650 ग्राम पदार्थ प्रति 1 लीटर पानी की दर से तैयार किया जाता है। नमक को एक तामचीनी कटोरे में गर्म पानी में भागों में घोला जाता है, स्टोव पर गर्म किया जाता है और पूरी तरह से घुलने तक लगातार हिलाया जाता है। घोल को फ़िल्टर करना आवश्यक नहीं है. समाधान अध्ययन के दिन तैयार किया जाता है, क्योंकि समय के साथ यह एक अवक्षेप देता है, और 24 घंटों के बाद इसका घनत्व कम होने लगता है। यदि समाधान बड़ी मात्रा में तैयार किया जाता है, तो अध्ययन से पहले अगले दिनों में इसे गर्म किया जाता है। तलछट को हिलाना. घोल को धूआं हुड में तैयार किया जाता है, क्योंकि लेड नाइट्रेट एक भारी धातु का नमक है।

2. 1.3 के घनत्व के साथ अमोनियम नाइट्रेट NH4NO3 (दानेदार या साधारण अमोनियम नाइट्रेट) का घोल पिछले वाले की तरह ही तैयार किया जाता है, लेकिन 1500 ग्राम पदार्थ प्रति 1 लीटर की दर से गर्म पानी.

3. 1.38-1.4 घनत्व वाले सोडियम नाइट्रेट NaNO3 या सोडियम नाइट्रेट का घोल 1000 ग्राम पदार्थ प्रति 1 लीटर गर्म पानी की दर से तैयार किया जाता है।

4. 1.4 घनत्व वाले सोडियम थायोसल्फेट Na2S2O3×5H2O (सोडियम हाइपोसल्फाइट) का घोल 1750 ग्राम पदार्थ प्रति 1 लीटर गर्म पानी की दर से तैयार किया जाता है।

5. 1.26-1.28 घनत्व वाले सोडियम सल्फेट Na2SO4 (एप्सम नमक) का घोल 920 ग्राम पदार्थ प्रति 1 लीटर गर्म पानी की दर से तैयार किया जाता है।

6. 1.82 घनत्व वाले जिंक क्लोराइड ZnCl2 (जिंक क्लोराइड) का घोल 2000 ग्राम पदार्थ प्रति 1 लीटर गर्म पानी की दर से तैयार किया जाता है। ठंडा किया गया घोल क्रिस्टलीकृत नहीं होता है।

7. संतृप्त क्लोराइड घोल सोडियम NaCl(टेबल नमक) 1.18-1.2 के घनत्व के साथ। पर! एल पानी, उबलते पानी की एक तामचीनी बाल्टी में भागों में 400-420 ग्राम नमक डालें, पूरी तरह से घुलने तक लगातार हिलाते रहें। जैसे ही घोल ठंडा होता है, सोडियम क्लोराइड क्रिस्टल अवक्षेपित हो जाते हैं।

प्लवनशीलता विलयन के विशिष्ट गुरुत्व को कमरे के तापमान पर विलयन के पूरी तरह से ठंडा हो जाने के बाद ही एरोमीटर से मापा जाता है।

बौने टेपवर्म, व्हिपवर्म, हुकवर्म, राउंडवर्म और टेपवर्म के अंडों का पता लगाने के लिए प्लवनशीलता विधियाँ सबसे प्रभावी हैं।

सतह की फिल्म को वायर लूप या ग्लास स्लाइड का उपयोग करके हटाया जा सकता है।

एक संतृप्त घोल में टेबल नमकफिल्म की जांच 30-40 मिनट के बाद, अमोनियम नाइट्रेट के घोल में - जमने के 10-20-30 मिनट बाद की जा सकती है।

वायर लूप से फिल्म को हटाते समय कम से कम 8 बूंदों की जांच की जाती है।

वायर लूप की तुलना में स्लाइड्स फिल्म से अधिक अंडे हटाती हैं। ग्लास को प्लवनशीलता समाधान तरल के संपर्क में होना चाहिए, जिसे पिपेट के साथ बीकर में जोड़ा जाता है। जमने के बाद, कांच को हटा दिया जाता है और गीली सतह के साथ कांच पर रख दिया जाता है। बड़ा आकारऔर माइक्रोस्कोप के तहत जांच की गई। उपयोग से पहले स्लाइड्स को डीग्रीज़ किया जाना चाहिए।

अनुसंधान करने के लिए आपके पास होना चाहिए: ग्लास स्लाइड, बीकर, वायर लूप, क्यूवेट, पेट्री डिश, पिपेट, बल्ब, ग्लास या लकड़ी की छड़ें।

अध्ययन की प्रगति. 5 ग्राम मल को 10 गुना मात्रा में प्लवनशीलता समाधान (अधिमानतः विशिष्ट गुरुत्व 1.38-1.40) के साथ डाला जाता है, अच्छी तरह से हिलाएं, ऊपर से बड़े अघुलनशील कणों को हटा दें और 10-15 मिनट के लिए निलंबन छोड़ दें। फिर फिल्म को या तो ग्लास स्लाइड पर एक लूप के साथ या ग्लास स्लाइड के साथ हटा दिया जाता है। मल को पतला करने के लिए, 30-50 मिलीलीटर की क्षमता वाले कप लेना बेहतर है, घोल को किनारों से फ्लश डालें (या 2-3 मिमी कम भरें) और मिश्रण को एक ग्लास स्लाइड से ढक दें, और फिर प्लवनशील घोल डालें एक पिपेट को तब तक दबाएं जब तक वह कांच की स्लाइड के संपर्क में न आ जाए। 10-20 मिनट के बाद, ग्लास को तुरंत हटा दें और उस पर बची हुई फिल्म को बिना कवर ग्लास के माइक्रोस्कोप से लगाएं।

अवसादन विधियाँ

अवसादन विधियों का उपयोग जियोहेल्मिंथ के अंडों, मल में बायोहेल्मिंथ का पता लगाने और ओपिसथोरचियासिस के परीक्षण के लिए विशेष तरीकों के रूप में किया जाता है।

गोरीचेव-ज़ोलोटुखिन विधि(सरलीकृत गोरीचेव विधि)। एक बीकर में लगभग 1.5 ग्राम मल को 3-4 मिली पानी में घोलें। परिणामी निलंबन को धुंध की दो परतों के माध्यम से एक अपकेंद्रित्र ट्यूब में फ़िल्टर किया जाता है, इसे ध्यान से इसमें मौजूद 4-5 मिलीलीटर संतृप्त सोडियम क्लोराइड समाधान के ऊपर रखा जाता है। टेस्ट ट्यूबों को 15-20 घंटों के लिए एक स्टैंड में रखा जाता है। इस दौरान, भारी कंपकंपी वाले अंडे जम जाते हैं। दो स्पष्ट रूप से सीमांकित परतें प्राप्त होती हैं। तलछट की सूक्ष्म जांच की जाती है।

ईथर-फॉर्मेलिन विधि.इसका उपयोग सभी आंतों के आक्रमणों के निदान के लिए और प्रोटोजोआ और ओपिसथोरचिड अंडों के लिए एक विशेष विधि के रूप में किया जाता है।

उपकरण: 3000 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज; अपकेंद्रित्र स्नातक ट्यूब, फ़नल; धातु की छलनी (चाय की छलनी) या दो परत वाली पट्टी; स्लाइड और कवरस्लिप; लकड़ी (या कांच) की छड़ें; रूई, पट्टी.

रासायनिक अभिकर्मक: 10% फॉर्मेलिन समाधान (1 भाग फार्मास्युटिकल फॉर्मेलिन समाधान और 4 भाग आसुत जल); एथिल ईथर (औषधीय)।

10% फॉर्मेलिन घोल का 7 मिलीलीटर सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में डाला जाता है और 1 ग्राम मल डाला जाता है (मल की इतनी मात्रा कि टेस्ट ट्यूब में घोल 8 मिलीलीटर तक बढ़ जाए)। एक सजातीय मिश्रण बनने तक मल को फॉर्मेल्डिहाइड के साथ मिलाया जाता है, और फिर एक धातु की छलनी (या डबल-लेयर गॉज, बैंडेज) के माध्यम से एक अन्य सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में डाला जाता है (यदि मल छलनी पर रहता है, तो छलनी को फॉर्मेल्डिहाइड से धोया जाना चाहिए)। इस सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में 2 मिलीलीटर ईथर डालें, ढक्कन लगाएं और 30 सेकंड तक जोर से हिलाएं।

मिश्रण को 3000 आरपीएम पर एक मिनट के लिए (या 1500 आरपीएम पर दो मिनट के लिए) सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। ईथर-फॉर्मेलिन प्रतिक्रिया के कारण, प्रोटीन टेस्ट ट्यूब के शीर्ष पर एक प्लग के रूप में जमा हो जाते हैं, और हेल्मिंथ अंडे अवक्षेपित हो जाते हैं। कौयगुलांट परत हटा दी जाती है, सतह पर तैरनेवाला तरल सूखा दिया जाता है, तलछट को सीधे टेस्ट ट्यूब से या पाश्चर पिपेट के साथ ग्लास स्लाइड पर लगाया जाता है, कवरस्लिप के साथ कवर किया जाता है और माइक्रोस्कोप के नीचे देखा जाता है।

ईथर-एसिटिक अवक्षेपण विधि. हेल्मिंथ अंडों के ईथर-एसिटिक अवसादन के सिद्धांत में 10% जलीय घोल के साथ मल के नमूनों का क्रमिक उपचार शामिल है। एसीटिक अम्लऔर ईथर. एसिटिक एसिड दूसरों की तुलना में बेहतर है रासायनिक यौगिकमल के नमूनों का पायसीकरण करता है। यह मुख्य रूप से फाइबर से युक्त अपचित कणों में प्रवेश करता है, जो जब होता है बढ़िया सामग्रीसेंट्रीफ्यूजेशन के बाद अवक्षेपण करके अनुसंधान में बाधा डालते हैं। इसके बाद परखनली में ईथर मिलाने और हिलाने से परखनली की सामग्री से एसिटिक एसिड और उसमें भीगे हुए मल के कण भी निकल जाते हैं। चूँकि एस्टर और एसिटिक एसिड के मिश्रण का विशिष्ट गुरुत्व पानी के विशिष्ट गुरुत्व से कम होता है, इन पदार्थों से उपचारित मल के नमूने तैरते हैं, और हेल्मिंथ अंडे, जिनमें उच्च विशिष्ट गुरुत्व होता है, बैठ जाते हैं।

ईथर-एसिटिक वर्षा के बाद प्राप्त तलछट की मात्रा ईथर-फॉर्मेलिन वर्षा के बाद की तुलना में 3-4 गुना कम है। इससे इसमें हेल्मिंथ अंडों का पता लगाने में काफी सुविधा होती है और आपको 0.5-1 ग्राम की वजनी मात्रा के साथ संपूर्ण तलछट की जांच करने की अनुमति मिलती है। ईथर-एसिटिक विधि की विषाक्तता 5 गुना कम है।

अध्ययन की प्रगति. 10% एसिटिक एसिड घोल का 7 मिलीलीटर एक स्नातक अपकेंद्रित्र ट्यूब में डाला जाता है और मल का 1 ग्राम नमूना जोड़ा जाता है (यानी, मल की मात्रा जिस पर एसिटिक एसिड समाधान 8 मिलीलीटर तक बढ़ जाता है)। कांच या लकड़ी की छड़ी से अच्छी तरह हिलाएँ। धुंध की दो परतों के साथ एक फ़नल के माध्यम से एक अन्य अपकेंद्रित्र ट्यूब में तनाव डालें। इमल्सेट में 2 मिली मिलाएं इथाइल ईथर(अर्थात् 10 मिली तक)। टेस्ट ट्यूब को रबर स्टॉपर (पेनिसिलिन बोतल से) से बंद कर दिया जाता है और 15 सेकंड के लिए हिलाया जाता है। स्टॉपर को हटाने के बाद, ट्यूबों को 2 मिनट के लिए 3000 आरपीएम पर एक मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। परखनली से सतह पर तैरनेवाला द्रव निकल जाता है। कुछ मामलों में, परिणामी फ़ेकल प्लग सतह पर तैरनेवाला के जल निकासी में हस्तक्षेप करता है। इस मामले में, टेस्ट ट्यूब की दीवारों से स्टॉपर को अलग करने के लिए एक कांच या लकड़ी की छड़ी का उपयोग करें। संपूर्ण तलछट को एक कांच की स्लाइड पर पिपेट किया जाता है और कम आवर्धन पर एक कवरस्लिप के नीचे सूक्ष्मदर्शी रूप से जांच की जाती है। तलछट आमतौर पर छोटी और रंगहीन होती है। हेल्मिंथ अंडे, विशेष रूप से छोटे ट्रैमेटोड अंडे, आसानी से पहचाने जा सकते हैं।

रासायनिक अवसादन विधि. अध्ययन का सिद्धांत 1.15 के विशिष्ट गुरुत्व के साथ खारे घोल में मल के नमूने से अंडों के अवक्षेपण पर आधारित है। विधि का सार एक परीक्षण ट्यूब का प्रत्यक्ष सेंट्रीफ्यूजेशन है जिसमें एसिटिक एसिड के 1% समाधान में उत्सर्जित मल का एक प्लग सोडियम नाइट्रेट (विशिष्ट गुरुत्व 1.16) के समाधान पर स्तरित होता है। खारे घोल का उच्च विशिष्ट गुरुत्व और रासायनिक प्रतिक्रिया के कारण निकलने वाले बुलबुले जो समरूप मल की परत में प्रवेश करते हैं, इसके अवसादन को रोकते हैं। हेल्मिंथ अंडे थोड़ी मात्रा में फाइबर के साथ अवक्षेपित होते हैं। तलछट को एसिटिक एसिड और ईथर के 10% घोल से उपचारित करके बचे हुए मलबे को साफ किया जा सकता है। इस मामले में, केवल एक हेल्मिंथ अंडे ही बचे हैं, जिससे उनकी पहचान में काफी सुविधा होती है।

अध्ययन की प्रगति. 1.15 के विशिष्ट गुरुत्व के साथ 6 मिलीलीटर सोडियम नाइट्रेट घोल को एक स्नातक अपकेंद्रित्र ट्यूब में डाला जाता है। 1% एसिटिक एसिड घोल का 7 मिलीलीटर दूसरी परखनली में डाला जाता है। एक मल नमूना जोड़ें (0.5 ग्राम नमूने के लिए 7.5 मिलीलीटर के निशान तक और 1.0 ग्राम नमूने के लिए 8 मिलीलीटर तक)। नमूने को कांच की छड़ से अच्छी तरह मिला लें। धुंध की एक परत के साथ फ़नल के माध्यम से तनाव डालें, इसे सोडियम नाइट्रेट के घोल पर डालें। स्तरित निस्पंद वाली ट्यूब को 5 मिनट के लिए 1500-2000 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। ट्यूब को जल्दी से उलटा करके सतह पर तैरनेवाला तरल पदार्थ निकाल दिया जाता है। तलछट के साथ टेस्ट ट्यूब में एसिटिक एसिड के 10% घोल के 3-4 मिलीलीटर और ईथर के 0.5 मिलीलीटर जोड़ें, रबर स्टॉपर के साथ बंद करें और हिलाएं। 1 मिनट के लिए बार-बार सेंट्रीफ्यूजेशन किया जाता है। सतह पर तैरनेवाला तरल त्यागें. तलछट को एक ग्लास स्लाइड में स्थानांतरित किया जाता है, एक कवरस्लिप के साथ कवर किया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है।

पित्त, ग्रहणी सामग्री, थूक, रक्त, मूत्र और मांसपेशियों का हेल्मिन्थोलॉजिकल अध्ययन

ग्रहणी सामग्री और पित्त में हेल्मिंथ अंडे और लार्वा का पता लगाना। यदि यकृत और पित्ताशय की हेल्मिंथियासिस (ऑपिसथोरचियासिस, क्लोनोरचियासिस, डाइक्रोसेलियोसिस) का संदेह हो तो पित्त और ग्रहणी सामग्री का अध्ययन किया जाता है और ग्रहणी(स्ट्रॉन्गिलोइडियासिस)।

अध्ययन की प्रगति. डुओडेनल सामग्री और पित्त (भाग ए, बी, सी) इंटुबैषेण का उपयोग करके सामान्य तरीके से प्राप्त किए जाते हैं। भाग बी के लिए, एक जांच के माध्यम से 33% समाधान प्रशासित करके पित्ताशय की थैली प्राप्त करने की सिफारिश की जाती है। मैग्नीशियम सल्फेट. परीक्षण तरल से, इसमें तैरते हुए गुच्छे का चयन किया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है, और फिर समान मात्रा में सल्फ्यूरिक ईथर के साथ मिलाया जाता है। मिश्रण को अच्छी तरह से हिलाया जाता है और सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। सतह पर तैरनेवाला हटा दिया जाता है, और पूरे तलछट की एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है।

मवाद और बलगम की अनुपस्थिति में, पित्त और ग्रहणी की सामग्री को ईथर के साथ मिश्रित किए बिना सेंट्रीफ्यूज किया जाता है।

बलगम जांच. हेल्मिन्थोलॉजिकल अभ्यास में, पैरागोनिमियासिस के प्रयोगशाला निदान के उद्देश्य से थूक की जांच की जाती है। कभी-कभी शिस्टोसोम अंडे, राउंडवॉर्म लार्वा और इचिनोकोकल मूत्राशय के तत्वों का पता लगाया जाता है।

कांच की स्लाइड पर थूक से एक देशी स्मीयर तैयार किया जाता है, जिसकी माइक्रोस्कोप से जांच की जाती है।

यदि थूक में बड़ी मात्रा में मवाद है, तो इसे सोडियम हाइड्रॉक्साइड या पोटेशियम हाइड्रॉक्साइड के 0.5% घोल के साथ मिलाया जाता है, 5 मिनट तक हिलाया जाता है और सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। तलछट की सूक्ष्म जांच की जाती है।

रक्त परीक्षण। अगर किसी मरीज को फाइलेरिया होने का संदेह होता है तो उसके खून की जांच की जाती है।

इस तथ्य के कारण कि कुछ प्रकार के फाइलेरिया (लोइयासिस, उप-आवधिक तनाव के कारण होने वाले वुचेरेरियोसिस) में, लार्वा (माइक्रोफ़िलारिया) केवल दिन के दौरान परिधीय रक्त में मौजूद होते हैं, और कुछ में (ब्रुगियोसिस, आवधिक तनाव के कारण होने वाले वुचेरेरियोसिस) - केवल रात में, क्रमशः इस समय, विश्लेषण के लिए रक्त लिया जाता है।

रक्त एकत्र करने, तैयारी तैयार करने (पतली स्मीयर और मोटी बूंद), उन्हें धुंधला करने (रोमानोव्स्की के अनुसार) और परीक्षण करने की तकनीक मलेरिया के प्रयोगशाला निदान के समान है।

विभिन्न प्रजातियों के माइक्रोफ़िलारिया को लंबाई, चौड़ाई, शरीर की वक्रता, टोपी की उपस्थिति या अनुपस्थिति, पूंछ के अंत के आकार, शरीर में परमाणु पदार्थ के स्थान और लार्वा के दुम क्षेत्र से अलग किया जाता है।

अध्ययन की प्रगति. फिर, मूत्र को कम से कम 30 मिनट तक रखा रहने दिया जाता है ऊपरी परत 10-15 मिलीलीटर तलछट छोड़ते हुए छान लें, जिसे सेंट्रीफ्यूज ट्यूबों में डाला जाता है और 1-2 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। सतह पर तैरनेवाला निकालने के बाद, तलछट को एक ग्लास स्लाइड में स्थानांतरित किया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है।

मांसपेशी बायोप्स का अध्ययन

ट्राइचिनोस्कोपी विधि. ट्राइकिनोसिस का संदेह होने पर रोगी की मांसपेशियों की बायोप्सी की जांच करने की आवश्यकता उत्पन्न होती है।

बायोप्सी सामान्य नियमों के अनुसार की जाती है। डेल्टोइड मांसपेशी की बायोप्सी आमतौर पर की जाती है। पैथोलॉजिकल जांच के दौरान, डायाफ्राम, अन्नप्रणाली, जीभ, चबाने वाली और इंटरकोस्टल मांसपेशियों, अंग फ्लेक्सर्स, मांसपेशियों की बायोप्सी की जा सकती है। नेत्रगोलक, क्योंकि वे त्रिचिनेला लार्वा से सबसे अधिक प्रभावित होते हैं।

प्रयोगशाला में, मांसपेशियों के एक बायोप्सी किए गए टुकड़े को बहुत छोटे टुकड़ों में (माइक्रोटोम के साथ) काटा जाता है, जिन्हें दो गिलासों के बीच रखा जाता है, मांसपेशियों के तंतुओं को कुचल दिया जाता है, और एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है। वर्तमान में, इस उद्देश्य के लिए विशेष सूक्ष्मदर्शी - ट्राइचिनेलोस्कोप - का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।

ट्राइचिनोसिस के मामले में, ट्राइचिनोस्कोपी मांसपेशी फाइबर के साथ तेजी से प्रमुख संकेतों को प्रकट करता है। अंडाकार आकार(नींबू जैसा) ट्राइकिनोसिस कैप्सूल। औसत मूल्यमनुष्यों में कैप्सूल 0.4 x 0.26 मिमी है। कैप्सूल में, एक नियम के रूप में, एक ट्राइचिनेला सर्पिल रूप से 2.5 मोड़ों में कुंडलित होता है। आक्रमण की उच्च तीव्रता के साथ, एक कैप्सूल में 2 या 3 लार्वा हो सकते हैं। कैप्सूल से सटे मांसपेशी फाइबर अपनी क्रॉस-स्ट्राइशंस खो देते हैं और एक समान रूप धारण कर लेते हैं।

जिस मांस या मांस उत्पाद से संक्रमण हुआ उसकी जांच इसी तरह की जाती है।

मांसपेशी पाचन विधि. यह विधि अधिक प्रभावशाली है.

अध्ययन की प्रगति. जिन मांसपेशियों का अध्ययन किया जा रहा है उन्हें बारीक पीसकर कृत्रिम से भरा जाता है आमाशय रस 1:15-20 के अनुपात में. परिणामी मिश्रण को थर्मोस्टेट में 37°C पर 12-16 घंटों के लिए रखा जाता है। इस अवधि के बाद, तलछट की सूक्ष्म जांच की जाती है, जिसमें त्रिचिनेला लार्वा पचे हुए मांसपेशी फाइबर के अवशेषों के द्रव्यमान के बीच एक स्वतंत्र अवस्था में पाए जाते हैं।

कृत्रिम गैस्ट्रिक जूस किसी फार्मेसी में खरीदा जा सकता है या प्रयोगशाला में तैयार किया जा सकता है। ऐसा करने के लिए, 1 लीटर आसुत जल में 10 मिलीलीटर सांद्र हाइड्रोक्लोरिक एसिड मिलाएं; उपयोग से पहले, 1 लीटर पतला एसिड में 30 ग्राम पेप्सिन मिलाएं।

मात्रात्मक अनुसंधान विधियाँ

मात्रात्मक विधियांअनुसंधान का उपयोग आक्रमण की तीव्रता निर्धारित करने, विभिन्न कृमिनाशक दवाओं की प्रभावशीलता का आकलन करने, कृमि मुक्ति की गुणवत्ता निर्धारित करने, चल रहे सामूहिक उपचार और निवारक उपायों की निगरानी करने आदि के लिए किया जाता है।

हेल्मिंथ अंडों का मात्रात्मक निर्धारण दो तरीकों से किया जाता है: स्टोल विधि और कसीसिलनिकोव और वोल्कोवा (1974) की विधि।

स्टॉल विधि. अध्ययन करने के लिए, आपके पास एक माइक्रोस्कोप, 56 और 60 मिलीलीटर के निशान वाला एक ग्लास फ्लास्क, एक ग्रेजुएटेड सिलेंडर, कांच के मोती, फ्लास्क के लिए एक रबर स्टॉपर, ग्रेजुएटेड पिपेट, ग्लास स्लाइड और 0.4% सोडियम हाइड्रॉक्साइड समाधान होना चाहिए।

अध्ययन की प्रगति. डेसिनॉर्मल सोडियम हाइड्रॉक्साइड घोल (लगभग 0.4% सांद्रता) को 56 मिलीलीटर के निशान तक एक स्नातक सिलेंडर का उपयोग करके फ्लास्क में डाला जाता है और मल को तब तक जोड़ा जाता है जब तक कि तरल स्तर 60 मिलीलीटर (यानी 4 मिलीलीटर मल) तक नहीं पहुंच जाता। मिश्रण को 1 मिनट के लिए कांच के मोतियों से अच्छी तरह हिलाया जाता है, बर्तन को रबर स्टॉपर से बंद कर दिया जाता है (आप छड़ी से भी हिला सकते हैं)। हिलाने के तुरंत बाद, एक स्नातक पिपेट (इसमें 0.005 मिलीलीटर मल होता है) के साथ मिश्रण का 0.075 मिलीलीटर लें, इसे एक ग्लास स्लाइड में स्थानांतरित करें और माइक्रोस्कोप के तहत तैयारी में अंडों की संख्या गिनें। 1 ग्राम मल में अंडों की संख्या निर्धारित करने के लिए, ज्ञात संख्या को 200 से गुणा किया जाता है।

उपचार से पहले और बाद में रोगी में पाए जाने वाले अंडों की संख्या की तुलना करने से कृमि मुक्ति की प्रभावशीलता का अंदाजा लगाया जा सकता है।

स्टॉल की विधि सरल है, यह देता है तुलनीय परिणामसभी हेल्मिंथियासिस के लिए, जिसके रोगजनक व्यवस्थित रूप से रोगी की आंतों में अंडे छोड़ते हैं। हालाँकि, विधि का नुकसान यह है कि यह अपेक्षाकृत है कम संवेदनशीलता, विशेषकर आक्रमण की कम तीव्रता के साथ।

कसीसिलनिकोव-वोल्कोवा विधि. इस विधि से अध्ययन करते समय, कम से कम 1 ग्राम मल को 1:10 के अनुपात में 1% लोटस घोल (या 1.5% अतिरिक्त घोल) के साथ एक ग्लास फ्लास्क या बड़ी टेस्ट ट्यूब में मिलाया जाता है। एक सजातीय निलंबन बनने तक निलंबन को पूरी तरह से हिलाया जाता है, फिर 0.1 मिलीलीटर निलंबन (0.01 ग्राम मल के बराबर) को स्नातक पिपेट के साथ जल्दी से लिया जाता है और एक ग्लास स्लाइड में स्थानांतरित किया जाता है। तैयारी को एक कवर ग्लास या सिलोफ़न प्लेट (20 x 30 मिमी) से ढक दिया जाता है, जिसे कम से कम एक दिन के लिए 50% पर रखा जाता है। जलीय घोलग्लिसरीन।

पूरी तैयारी में अंडों की संख्या गिनें। 1 ग्राम मल में अंडों की संख्या की गणना करने के लिए, परिणामी संख्या को 100 से गुणा करना होगा।

स्टोल विधि की तुलना में इस विधि के कई फायदे हैं। सबसे पहले, यह अधिक संवेदनशील है और आपको कब कृमि का पता लगाने की अनुमति देता है कमजोर डिग्रीसंक्रमण दूसरे, यह सामूहिक परीक्षाओं के लिए बहुत सुविधाजनक है, क्योंकि डिटर्जेंट समाधान, हेल्मिंथ अंडे के लिए संरक्षक होने के कारण, पूरी तरह से ताजा सामग्री पर शोध करना संभव नहीं बनाते हैं। तथापि शर्तइसमें मल को सीधे डिटर्जेंट घोल में एकत्र करना शामिल है।

के लिए मात्रात्मक अनुसंधानआप तैरते अंडों के सिद्धांत के आधार पर वर्णित एकीकृत गुणात्मक तरीकों में से किसी का भी उपयोग कर सकते हैं। लेकिन इस मामले में, विश्लेषण के लिए मल की समान मात्रा और प्लवनशीलता समाधान की समान मात्रा ली जानी चाहिए। नीचे दी गई तालिका के अनुसार, आक्रमण की डिग्री की गणना 1 ग्राम मल में अंडों की संख्या जानकर की जा सकती है।

आक्रमण की तीव्रता हेल्मिंथ अंडों की संख्या पर निर्भर करती है

1 ग्राम मल में

सीरोलॉजिकल निदान के तरीके

रक्त सीरम में विशिष्ट एंटीबॉडी का पता लगाने के आधार पर इन विधियों का उपयोग निदान और स्क्रीनिंग उद्देश्यों के लिए किया जाता है।

सीरोलॉजिकल तरीकों में शामिल हैं:

रिंग वर्षण प्रतिक्रिया (आरसीआर) (ट्राइचिनोसिस, सिस्टिकिकोसिस);

ठंड में टेस्ट ट्यूबों में रिंग अवक्षेपण प्रतिक्रिया (ट्राइचिनोसिस, सिस्टीसर्कोसिस);

जीवित लार्वा (ट्राइचिनोसिस, एस्कारियासिस) पर सूक्ष्म अवक्षेपण प्रतिक्रिया;

अप्रत्यक्ष रक्तगुल्म प्रतिक्रिया (आईआरएचए) (ट्राइचिनोसिस, इचिनोकोकोसिस, एल्वोकॉकोसिस, सिस्टीसर्कोसिस, आदि);

लेटेक्स एग्लूटीनेशन रिएक्शन (एलएआर) (इचिनोकोकोसिस, एल्वोकॉकोसिस, ट्राइकिनोसिस, टेनियारिंचियासिस, आदि);

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (एफएफआर) (ट्राइचिनोसिस, इचिनोकोकोसिस, सिस्टीसर्कोसिस);

एंजाइम-लेबल एंटीबॉडी प्रतिक्रिया (ईआरए) (इचिनोकोकोसिस, ओन्कोसेरसियासिस, शिस्टोसोमियासिस, ट्राइकिनोसिस, टॉक्सोकेरियासिस);

लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख(एलिसा) (ट्राइचिनोसिस, ओपिसथोरचिआसिस, टॉक्सोकेरियासिस, टॉक्सोप्लाज्मोसिस, आदि)।

सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाएं करने के लिए, मानक एंटीजन का उत्पादन किया जाता है या उन्हें स्वतंत्र रूप से तैयार किया जाता है (उदाहरण के लिए, भेड़ के इचिनोकोकल मूत्राशय से), और एलिसा के लिए विशेष परीक्षण प्रणाली का उत्पादन किया जाता है।

विशेष विधियाँएंटरोबियासिस, टेनियारिन्होज़, टेनियासिस के लिए अध्ययन

पेरिअनल सिलवटों से स्क्रैपिंग. पेरिअनल सिलवटों से स्क्रैपिंग प्राप्त करने के लिए, आप एक लकड़ी के स्पैटुला, एक सिलोफ़न पट्टी, सेलूलोज़ पेपर या टेप, एक विशेष चिपकने वाली परत के साथ आंखों की छड़ें का उपयोग कर सकते हैं:

a) 1% ग्लिसरीन घोल (या 0.5% घोल) से सिक्त लकड़ी के स्पैचुला (स्पैटुला एक चपटी माचिस या छड़ी है) से खुरचना मीठा सोडा), गुदा की पूरी परिधि के साथ पेरिअनल सिलवटों की सतह से हल्के से खुरच कर किया जाता है। परिणामी स्क्रैपिंग को एक कवर ग्लास के किनारे से एक स्पैटुला के अंत से एक ग्लास स्लाइड पर 50% ग्लिसरॉल समाधान की एक बूंद में स्थानांतरित किया जाता है, उसी कवर ग्लास के साथ कवर किया जाता है और माइक्रोस्कोप किया जाता है। इस विधि का नुकसान अंडों का अपर्याप्त पता लगाना है चिड़चिड़ा प्रभाव;

बी) टोर्गुशिन विधि के अनुसार, 50% ग्लिसरीन समाधान के साथ सिक्त एक लकड़ी या अन्य स्पैटुला पर कपास झाड़ू के साथ एक कुल्ला किया जाता है, और ग्लिसरीन की एक बूंद में एक ग्लास स्लाइड पर एक स्मीयर तैयार किया जाता है;

ग) केवोर्कोवा की विधि के अनुसार, लगभग 5 मिलीलीटर एक अपकेंद्रित्र ट्यूब में डाला जाता है उबला हुआ पानी, इसमें एक रुई के फाहे के साथ एक स्पैटुला (छड़ी) रखें। सामग्री लेने से पहले, टैम्पोन को टेस्ट ट्यूब की आंतरिक दीवार के खिलाफ हल्के से दबाया जाता है, पेरिअनल सिलवटों को इसके साथ मिटा दिया जाता है, और टैम्पोन के साथ स्पैटुला को टेस्ट ट्यूब में डाला जाता है। स्वाब को एक टेस्ट ट्यूब में अच्छी तरह से हिलाया जाता है, वॉशआउट को 3 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जाता है और परिणामस्वरूप तलछट की माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है;

घ) ग्राहम के अनुसार चिपकने वाली टेप से स्क्रैपिंग। चिपकने वाली टेप का एक टुकड़ा (चिपकने वाली परत के साथ पारदर्शी पॉलीथीन टेप)। बच्चों की रचनात्मकता, लेकिन 8-10 सेमी की लंबाई के साथ सर्जिकल फिल्म एलपीओ -1, एलपीओ -2) का उपयोग करना बेहतर है, इसे त्वचा के पेरिअनल सिलवटों पर एक चिपकने वाली परत के साथ गोंद करें, इसे सिरों से पकड़ें, और फिर इसे स्थानांतरित करें चिपकने वाली परत के साथ एक ग्लास स्लाइड पर (ग्लास के किनारों से परे फैले टेप के सिरे काट दिए जाते हैं), ग्लासों पर नंबर डाले जाते हैं, और मरीज का डेटा और ग्लास नंबर जर्नल में दर्ज किया जाता है। प्रयोगशाला में टेप को एक सिरे से काफी दूर तक छीलकर उसके नीचे 1-2 बूंदें टपका दी जाती हैं। वैसलीन तेलया ग्लिसरीन (ऑप्टिकल दोषों को खत्म करने के लिए) और माइक्रोस्कोप;

ई) कांच की आंखों की छड़ों का उपयोग करके स्क्रैपिंग, जिसकी सतह को एक विशेष चिपकने वाली संरचना के साथ लेपित किया जाता है। आई स्टिक को एक विशेष तिपाई में स्थापित किया जाता है। सामग्री को स्पैटुला के सपाट हिस्से को पेरिअनल उद्घाटन की त्वचा से छूकर एकत्र किया जाता है। फिर छड़ी को परिवहन के लिए तिपाई से दोबारा जोड़ दिया जाता है। कम आवर्धन (आईपिस x 10, ऑब्जेक्टिव x 8) पर कैसेट में प्रारंभिक माउंटिंग के साथ माइक्रोस्कोपी सीधे दोनों तरफ (स्लाइड और कवर ग्लास के बिना) स्पैटुला पर की जाती है। काम के अंत में, छड़ियों को साबुन के घोल में उबालकर कीटाणुरहित किया जाता है, और तिपाई और कैसेट को शराब से उपचारित किया जाता है और साबुन-सोडा के घोल से धोया जाता है। गोंद संरचना: क्लियोल - 10 ग्राम, अरंडी का तेल- 2.5 ग्राम, एथिल ईथर - 5 ग्राम, इथेनॉल 96% - 2.5 ग्राम।

स्पैटुला को गोंद के घोल में डुबोया जाता है, फिर कमरे के तापमान पर हवा में सुखाया जाता है। सतह पर बनी चिपकने वाली फिल्म कई दिनों तक टिकी रहती है।

यह विधि एंटरोबियासिस के लिए बच्चों और टेनियासिस के लिए वयस्कों की सामूहिक जांच के लिए सुविधाजनक है।

टेनियारिन्चोसिस और टेनियासिस के लिए स्क्रैपिंग विधि के अलावा, सर्वेक्षण विधि और ऊपर वर्णित मैक्रोस्कोपिक विधि (खंडों की पहचान करते समय) का भी उपयोग किया जाता है।

स्ट्रांगाइलोइडियासिस के लिए विशेष अनुसंधान विधियाँ

ईथर-एसिटिक विधि का उपयोग अंडों का पता लगाने के लिए किया जाता है (ऊपर देखें) और बर्मन विधि का उपयोग मल में लार्वा का पता लगाने के लिए किया जाता है।

बर्मन विधि. ताजा मल की जांच करें, अधिमानतः रेचक लेने के बाद। 5 ग्राम मल का नमूना एक धातु की छलनी (अंदर की जाली धुंध की दो परतों से ढकी होती है) पर एक स्टैंड में लगे कांच की फ़नल में रखा जाता है। फ़नल के निचले सिरे पर एक क्लैंप (बर्मन उपकरण) के साथ एक रबर ट्यूब रखी जाती है।

मल वाली जाली को उठा लिया जाता है और 40-50°C तक गर्म किया गया पानी फ़नल में डाला जाता है ताकि नीचे के भागजाल को पानी में डुबोया गया था और मल पूरी तरह से पानी से ढका हुआ था। 2-4 घंटों के बाद, रबर ट्यूब पर लगा क्लैंप जल्दी से खुल जाता है और तरल को एक सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में निकाल दिया जाता है। सेंट्रीफ्यूजेशन (1-2 मिनट) के बाद, तरल का ऊपरी हिस्सा जल्दी से निकल जाता है, और 1 मिलीलीटर की मात्रा में तलछट को एक पतली परत में एक ग्लास स्लाइड पर लगाया जाता है और कम आवर्धन माइक्रोस्कोप के तहत माइक्रोस्कोप किया जाता है।

छोटा सा भूत और टीएम विधि. अखरोट के आकार के मल के एक हिस्से को एक बीकर में रखा जाता है, गर्म 40 डिग्री सेल्सियस नमकीन घोल के साथ डाला जाता है ताकि मल घोल से ढक जाए, और 20 मिनट के लिए छोड़ दिया जाए। 20 मिनट के बाद, तरल को पेट्री डिश में डाला जाता है और एमबीएस दूरबीन माइक्रोस्कोप के नीचे देखा जाता है।

स्ट्रांगाइलोइडियासिस का निदान करने के लिए, विशेष रूप से उपचार की प्रभावशीलता की निगरानी के लिए, ग्रहणी सामग्री के अध्ययन के साथ बर्मन पद्धति को संयोजित करने की सिफारिश की जाती है।

नेमाटोड के लिए विशेष अनुसंधान विधियाँ

सूत्रकृमि

एस्कारियासिस

इतिहास बागवानी और बागवानी के प्रति दृष्टिकोण की ओर ध्यान आकर्षित करता है। कच्ची सब्जियाँ और इन सब्जियों से बना सलाद खाना।

नैदानिक ​​अभिव्यक्तियाँ प्रारंभिक चरणएस्कारियासिस शरीर में एलर्जी संबंधी परिवर्तनों के कारण होता है। एस्कारियासिस का प्रारंभिक या प्रवासी लार्वा चरण अक्सर 38 डिग्री और उससे ऊपर के शरीर के तापमान के साथ बुखार की उपस्थिति में होता है, जिसमें फेफड़ों की क्षति के लक्षण जटिल होते हैं, और स्पष्ट रक्त ईोसिनोफिलिया की उपस्थिति होती है। ज्यादातर मामलों में, बच्चों में बीमारी के पहले लक्षण अस्वस्थता, कमजोरी, समय-समय पर सिरदर्द, पसीना आना और कभी-कभी मांसपेशियों और जोड़ों में दर्द होते हैं। अक्सर गंभीर या मध्यम खुजली के साथ पित्ती जैसे विपुल दाने दिखाई देते हैं। प्रारंभिक चरण के निदान की पुष्टि फेफड़ों में अस्थिर पदार्थों की उपस्थिति के लिए एक्स-रे अध्ययन द्वारा की जाती है ईोसिनोफिलिक घुसपैठलेफ़लर. ताजा स्रावित थूक के धब्बों में अक्सर इओसिनोफिलिक कोशिकाएं, लाल रक्त कोशिकाएं, चारकोट-लेडेन क्रिस्टल और राउंडवॉर्म लार्वा होते हैं।

एस्कारियासिस के आंतों के काल्पनिक चरण में, गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल और का संयोजन दैहिक सिंड्रोम, एंटरोकोलिटिक दर्द के लक्षण. बच्चों का वज़न अक्सर कम होने लगता है, कभी-कभी तो बहुत ज़्यादा। मतली, बढ़ी हुई लार, चिड़चिड़ापन, साइकोमोटर विकास में देरी, बुद्धि में कमी।

आंतों के सेंट के प्रयोगशाला निदान के लिए।

प्रोटोजोआ को 4 वर्गों में बांटा गया है:

जब संकेंद्रित किया जाता है, तो सूक्ष्मजीव ग्रहण कर लेता है गोल आकारऔर एक सुरक्षा कवच से ढका हुआ है। सिस्ट के रूप में प्रोटोजोआ के प्रति संवेदनशीलता कम हो जाती है प्रतिकूल कारकपर्यावरण।

निम्नलिखित शोध का विषय हो सकता है:

टिप्पणी:निदान के कई प्रकार हैं; हम उन प्रकारों पर विचार करेंगे जो नैदानिक ​​प्रयोगशाला अभ्यास में सबसे आम हैं।

निजी प्रकार के निदान

प्रत्येक विशिष्ट मामले में, प्रयोगशाला सहायक को एक विशिष्ट रोगज़नक़ खोजने का काम सौंपा जाता है; कभी-कभी मुख्य रोगज़नक़ के साथ अन्य की भी खोज की जाती है।

इस सूक्ष्मजीव की 6 प्रजातियाँ हैं जो मानव आंत में रहने में सक्षम हैं। केवल पेचिश अमीबा, जो वानस्पतिक रूप में और सिस्ट के रूप में होता है, नैदानिक ​​महत्व का है।

इसके अतिरिक्त, प्रतिरक्षाविज्ञानी तरीकों का उपयोग किया जाता है:

• अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस;
• अप्रत्यक्ष एग्लूटीनेशन (आईएनए);
• रेडियल इम्युनोडिफ्यूजन।

टिप्पणी: सीरोलॉजिकल तरीकेजानकारीहीन हैं और केवल संदिग्ध मामलों में मुख्य के अतिरिक्त उपयोग किए जाते हैं।

सिलिअटेड (सिलियेट्स) का निदान

इस जीनस के सूक्ष्मजीवों का रोगजनक रूप बैलेंटिडियम है। यह एक सूक्ष्म जीव है जो बैलेन्टिडायसिस का कारण बनता है, एक बीमारी जिसमें बड़ी आंत की अल्सरेटिव प्रक्रिया होती है। रोगज़नक़ का पता देशी स्मीयर में वानस्पतिक रूप और सिस्ट के रूप में लगाया जाता है। स्मीयर के लिए सामग्री (मल और बलगम) को सिग्मायोडोस्कोपी परीक्षा के दौरान लिया जाता है और विशेष मीडिया पर बोया जाता है।

फ्लैगेलेट्स का निदान (लीशमैनिया, जियार्डिया, ट्रिपैनोसोम्स, ट्राइकोमोनास)

लीशमैनिया, ट्रिपैनोसोम्स, लैम्ब्लिया और ट्राइकोमोनास इंसानों के लिए खतरनाक हैं।

लीशमैनिया– सूक्ष्म जीव, लीशमैनियासिस का कारण, रक्त स्मीयरों, सामग्रियों में जांच की जाती है अस्थि मज्जा, त्वचा से खरोंचें घुसपैठ करती हैं। कुछ मामलों में, लीशमैनिया का निदान करते समय, पोषक तत्व मीडिया पर संस्कृति का उपयोग किया जाता है।

ट्रिपैनोसोम्स– रोगज़नक़ नींद की बीमारी(अमेरिकी/अफ्रीकी ट्रिपैनोसोमियासिस, या चगास रोग)।

अफ़्रीकी संस्करण को परिभाषित किया गया है प्रारम्भिक कालपरिधीय रक्त के अध्ययन में. जैसे-जैसे बीमारी बढ़ती है, पैथोलॉजिकल रोगाणु लिम्फ नोड पंचर की सामग्री में पाए जाते हैं, और उन्नत चरणों में - मस्तिष्कमेरु द्रव में।

चगास रोग का संदेह होने पर ट्रिपैनोसोम का निदान करने के लिए, जांच की जा रही सामग्री की जांच कम आवर्धन पर माइक्रोस्कोप के तहत की जाती है। इस मामले में, धब्बा और मोटी बूंद पूर्व-दागदार होती है।

ट्रायकॉमोनास(आंतों, मौखिक) का पता प्रभावित श्लेष्म झिल्ली से ली गई सामग्री की माइक्रोस्कोपी द्वारा लगाया जाता है।

स्पोरोज़ोअन्स की पहचान (मलेरिया प्लास्मोडियम, कोक्सीडोसिस का प्रेरक एजेंट, आदि)

मनुष्यों के लिए सबसे आम और खतरनाक प्रजाति मलेरिया प्लास्मोडियम है, जिसमें 4 मुख्य प्रकार के रोगज़नक़ होते हैं: रोगज़नक़ तृतीयक मलेरिया, चार दिवसीय मलेरिया, उष्णकटिबंधीय मलेरियाऔर मलेरिया अंडाकार.

एनोफ़ेलीज़ मच्छरों में प्लाज़मोडियम (स्पोरोगोनी) का यौन विकास होता है। अलैंगिक (ऊतक और एरिथ्रोसाइट सिज़ोगोनी) - मानव यकृत ऊतक और एरिथ्रोसाइट्स में। मलेरिया प्लास्मोडियम का निदान करते समय जीवन चक्र की इन विशेषताओं को ध्यान में रखा जाना चाहिए।

इस प्रकार, एक नए बीमार रोगी के रक्त में, स्पोरोगनी चक्र की रोगाणु कोशिकाओं का पता लगाया जा सकता है। लेकिन मलेरिया के हमलों के चरम पर, रक्त में शिज़ोन्ट बड़ी संख्या में दिखाई देते हैं।

इसके अलावा, में विभिन्न चरण मलेरिया बुखारके जैसा लगना विभिन्न आकारप्लाज्मोडियम:

• ठंड की अवधि के दौरान, रक्त मेरोज़ोइट्स से भर जाता है, एक प्रकार का शिज़ोन्ट;
• ऊंचे तापमान पर, रिंग के आकार के ट्रोफोज़ोइट्स एरिथ्रोसाइट्स में जमा हो जाते हैं;
• तापमान में कमी अमीबा जैसे ट्रोफोज़ोइट्स की प्रबलता की विशेषता है;
• सामान्य स्थिति की अवधि के दौरान, रक्त में सिज़ोन्ट्स के वयस्क रूप होते हैं।

मलेरिया के प्रेरक एजेंट (मलेरिया प्लास्मोडियम) का अध्ययन एक स्मीयर और एक मोटी बूंद में किया जाता है।

टिप्पणी:रक्त के धब्बों और मोटी बूंदों की जांच से मलेरिया का निदान करना कभी-कभी गलत होता है। कुछ मामलों में रक्त प्लेटलेट्स को गलती से मलेरिया रोगज़नक़ के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है। इसके अलावा कभी-कभी ल्यूकोसाइट्स और अन्य कोशिकाओं के टुकड़े प्लास्मोडियम का अनुकरण करते हैं।

प्रोटोजोआ के अध्ययन की बुनियादी विधियाँ

आइए प्रोटोजोआ की उपस्थिति के लिए सबसे आम शोध विधियों पर संक्षेप में नज़र डालें।

देशी स्मीयर और लुगोल के घोल से सना हुआ स्मीयर (मल में) का उपयोग करके प्रोटोजोआ का निदान

यह दवा आइसोटोनिक घोल में मल के इमल्शन से तैयार की जाती है। सोडियम क्लोरीन और लुगोल के घोल की दो बूंदें एक कांच की स्लाइड पर डाली जाती हैं। परीक्षण सामग्री को लकड़ी की छड़ी के साथ दोनों रचनाओं में जोड़ा जाता है और कांच से ढकने के बाद, विभिन्न माइक्रोस्कोप रिज़ॉल्यूशन पर देखा जाता है।

पाए जाने वाले प्रोटोजोआ को कुछ विशेषताओं के आधार पर दर्ज किया जाता है। सटीकता के लिए, एक ही सामग्री से 2-3 तैयारी तैयार करें। संदिग्ध मामलों में, विश्लेषण 2-3 सप्ताह में कई बार दोहराया जाता है।

विधि वनस्पति और सिस्टिक रूपों का पता लगा सकती है:

• लैंबलिया;
• बैलेंटिडियम;
• पेचिश अमीबा.

रोगजनक रूपों के साथ-साथ गैर-रोगजनक प्रोटोजोआ की भी पहचान की जाती है। इसके अलावा स्वस्थ वाहकों में ल्यूमिनल और सिस्टिक रूप होते हैं।

महत्वपूर्ण:अशुद्धियों और त्रुटियों से बचने के लिए अनुसंधान बार-बार किया जाना चाहिए।

देशी और दागदार स्मीयर विधि का उपयोग करके प्रोटोजोआ के निदान के परिणाम में रोगज़नक़ (ल्यूमिनल, सिस्ट, ऊतक) के रूप का विवरण होना चाहिए।

अनुसंधान आवश्यकताएँ:

• विश्लेषण के लिए ली गई सामग्री (तरल मल) की जांच शौच के 30 मिनट बाद नहीं की जाती है;
• औपचारिक मल का निदान शौच के 2 घंटे के भीतर किया जाना चाहिए;
• सामग्री में अशुद्धियाँ नहीं होनी चाहिए ( कीटाणुनाशक, पानी, मूत्र);
• सामग्री के साथ काम करने के लिए, केवल लकड़ी की छड़ियों का उपयोग करें; बलगम के फिसलने के कारण कांच वाली छड़ें उपयुक्त नहीं हैं;
• उपयोग के तुरंत बाद लकड़ियों को जला देना चाहिए।

प्रोटोजोआ के निदान के लिए संरक्षण विधि (मल परीक्षण)।

एक परिरक्षक के साथ प्रोटोजोआ को ठीक करके अध्ययन किया जाता है। इस पद्धति और पिछली पद्धति के बीच अंतर यह है कि परिरक्षक आपको दवा को लंबे समय तक संरक्षित रखने की अनुमति देते हैं।

प्रयुक्त परिरक्षक:

• बैरो. इसमें संरक्षक तत्व शामिल हैं: 0.7 मिली सोडियम क्लोराइड, 5 मिली फॉर्मेलिन, 12.5 मिली 96% अल्कोहल, 2 ग्राम फिनोल और 100 मिली आसुत जल। रंग संरचना: थिओनिन (अज़ुरा) का 0.01% घोल।
• सफ़ार्लिव का समाधान। सामग्री: 1.65 ग्राम जिंक सल्फेट, 10 मिली फॉर्मेलिन, 2.5 ग्राम क्रिस्टलीय फिनोल, 5 मिली एसिटिक एसिड, 0.2 ग्राम मेथिलीन ब्लू, 100 मिली पानी। इस परिरक्षक का उपयोग उन मामलों में किया जाता है जहां सामग्री को एक महीने से अधिक समय तक संग्रहीत किया जाना चाहिए।

खाली बोतलों को एक परिरक्षक से भर दिया जाता है, सामग्री को 3:1 के अनुपात में उनमें स्थानांतरित किया जाता है, फिर यदि आवश्यक हो तो डाई मिलाया जाता है। 2-3 दवाओं का अध्ययन करके परिणामों का आकलन किया जाता है।

फॉर्मेलिन-ईथर संवर्धन विधि (मल में प्रोटोजोआ की उपस्थिति का विश्लेषण)

यह निदान पद्धति आपको प्रोटोजोआ सिस्ट को अलग करने और केंद्रित करने की अनुमति देती है। विश्लेषण के लिए निम्नलिखित सामग्रियों की आवश्यकता है: फॉर्मेलिन (10 मिली), 0.85 ग्राम आइसोटोनिक घोल, आसुत जल, सल्फ्यूरिक ईथर, लुगोल का घोल।

सूचीबद्ध तरल पदार्थों के साथ बायोमटेरियल का मिश्रण मिश्रित और सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। टेस्ट ट्यूब के तल पर प्राप्त तलछट को लुगोल के घोल से रंगा जाता है और सिस्ट और वनस्पति रूपों की उपस्थिति के लिए जांच की जाती है।

लीशमैनिया (अस्थि मज्जा स्मीयर) का पता लगाने की विधि

लीशमैनियासिस का निदान करने के लिए, निम्नलिखित अभिकर्मकों का उपयोग किया जाता है: रोमानोव्स्की के अनुसार निकिफोरोव का मिश्रण (सल्फ्यूरिक ईथर और एथिल अल्कोहल), फॉस्फेट बफर, अज़ूर-ईओसिन।

अस्थि मज्जा पदार्थ को विशेष तैयारी के बाद बहुत सावधानी से कांच की स्लाइड पर रखा जाता है। विसर्जन प्रणाली वाले माइक्रोस्कोप का उपयोग किया जाता है।

में तीव्र अवधिरोग, पंक्टेट में बड़ी संख्या में लीशमैनिया पाए जाते हैं।

टिप्पणी:कभी-कभी रक्त कोशिकासंसाधित लीशमैनिया जैसा हो सकता है, इसलिए प्रयोगशाला तकनीशियन के लिए सावधान रहना और स्वतंत्र अनुसंधान करने के लिए पर्याप्त अनुभव होना बहुत महत्वपूर्ण है।

त्वचा की घुसपैठ से स्मीयर में लीशमैनिया का पता लगाने की विधि

आवश्यक अभिकर्मक पिछले विश्लेषण के समान हैं।

परीक्षण सामग्री मौजूदा ट्यूबरकल या अल्सरेटिव सामग्री से प्राप्त की जाती है। यदि लीशमैनियासिस का संदेह है, तो रक्त के बिना स्केलपेल के साथ स्क्रैपिंग बहुत सावधानी से की जाती है। फिर कांच पर तैयारी की जाती है. प्राप्त परिणामों की सटीकता सुनिश्चित करने के लिए, कई तैयारियों की एक साथ जांच की जाती है।

रोग की उपस्थिति में, परीक्षण सामग्री में मौजूद मैक्रोफेज, फ़ाइब्रोब्लास्ट और लिम्फोइड कोशिकाओं के बीच लीशमैनिया का भी पता लगाया जाता है।

पैथोलॉजिकल ऊतकों को खुरच कर प्राप्त लीशमैनिया की शुद्ध संस्कृति को अलग करने की विधि

प्रोटोजोआ के निदान की इस पद्धति के साथ, ऊतक स्क्रैपिंग को एक विशेष पोषक माध्यम में रखा जाता है जिसमें लीशमैनिया सक्रिय रूप से गुणा करता है।

स्क्रैपिंग लेने से पहले, त्वचा को पूरी तरह से अल्कोहल से उपचारित किया जाता है, फिर ट्यूबरकल में एक चीरा लगाया जाता है, जिसके नीचे से सामग्री को हटा दिया जाता है और माध्यम के साथ एक टेस्ट ट्यूब में रखा जाता है। सामग्री को कई बार लिया जाता है, जिसके बाद इसे अलग-अलग टेस्ट ट्यूबों में रखा जाता है। फिर खेती थर्मोस्टेट में 22-24 डिग्री के तापमान पर होती है। परिणामों का मूल्यांकन माइक्रोस्कोप के तहत किया जाता है। इस विधि का उपयोग तब किया जाता है जब प्रोटोजोआ के निदान के अन्य, सस्ते और तेज़ तरीके अप्रभावी होते हैं।

आप वीडियो समीक्षा देखकर देख सकते हैं कि रक्त की एक बूंद का उपयोग करके प्रोटोजोआ की उपस्थिति के परीक्षणों को व्यवहार में कैसे समझा जाता है:

लोटिन अलेक्जेंडर, चिकित्सा स्तंभकार

मल की जांच दो तरीकों से की जाती है:

1. स्थूल - कृमि, उनके सिर, खंड, स्ट्रोबिला टुकड़े का पता लगाएं। मल के छोटे हिस्से को एक फ्लैट ट्रे या पेट्री डिश में पानी के साथ मिलाया जाता है और यदि आवश्यक हो तो एक आवर्धक कांच का उपयोग करके, एक अंधेरे पृष्ठभूमि के खिलाफ अच्छी रोशनी में देखा जाता है। सभी संदिग्ध संरचनाओं को चिमटी के साथ पानी के साथ दूसरे कप में या पतला ग्लिसरॉल की एक बूंद में एक ग्लास स्लाइड पर स्थानांतरित किया जाता है।

विधि के साथ प्रतिवाद करनामल के जिस हिस्से का परीक्षण किया जा रहा है उसे कांच के सिलेंडर में पानी के साथ मिलाया जाता है और जमने के बाद पानी की ऊपरी परत को सूखा दिया जाता है। इसे कई बार दोहराया जाता है. जब तरल पारदर्शी हो जाता है, तो इसे सूखा दिया जाता है और पेट्री डिश में तलछट की जांच की जाती है।

2. सूक्ष्मदर्शी - कृमि के अंडे और लार्वा का पता लगाने के लिए। कई शोध विधियां हैं।

1). देशी धब्बा - सबसे आम और तकनीकी रूप से सुलभ शोध पद्धति। सभी कृमियों के अंडे और लार्वा का पता लगाया जा सकता है। हालाँकि, अंडों की कम संख्या के साथ उन्हें ढूंढना हमेशा संभव नहीं होता है। इसलिए, संवर्धन विधि का उपयोग किया जाता है।

1). फुलेबोर्ग विधि - यह एक संतृप्त NaCl घोल (1.2 - घनत्व; 400 ग्राम NaCl प्रति 1 लीटर पानी; 40% NaCl घोल) में हेल्मिंथियासिस अंडों के तैरने पर आधारित एक संवर्धन विधि है। यह विधि देशी स्मीयर से अधिक प्रभावी है। 2-5 ग्राम मल को कांच के जार में रखा जाता है और NaCl समाधान से भर दिया जाता है, हिलाया जाता है और 45 मिनट के बाद, धातु के लूप के साथ परिणामी फिल्म को हटा दिया जाता है, ग्लास स्लाइड पर ग्लिसरीन की एक बूंद रखी जाती है। माइक्रोस्कोप के नीचे जांच करें. विधि का नुकसान विभिन्न कृमियों के अंडों का धीमी गति से उभरना है, बौना टेपवर्म - 15-20 मिनट के बाद, राउंडवॉर्म - 1.5 घंटे, व्हिपवर्म - 2-3 घंटे।

2) कलन्तरायण विधि - यह भी एक संवर्धन विधि है, लेकिन NaNO 3 (1.38 घनत्व) के संतृप्त घोल का उपयोग किया जाता है। अधिकांश अंडे तैरते हैं; तलछट परीक्षण की आवश्यकता नहीं होती है। नुकसान यह है कि अंडों को लंबे समय तक घोल में रखने से यह तथ्य सामने आता है कि कुछ अंडे फूलने लगते हैं और सतह की फिल्म से गायब होकर नीचे की ओर जम जाते हैं।

3. गोरीचेव विधि - अंडे के जमाव के सिद्धांत पर आधारित, छोटे कंपकंपी अंडे का पता लगाना। एक संतृप्त NaCl घोल का उपयोग घोल के रूप में किया जाता है और 3-4 मिलीलीटर मल घोल को सावधानीपूर्वक शीर्ष पर रखा जाता है। 15-20 घंटों के बाद, ट्रेमेटोड अंडे नीचे बैठ जाते हैं। तरल को सूखा दिया जाता है और तलछट को कांच की स्लाइड पर और माइक्रोस्कोप के नीचे रखा जाता है।

4. शुलमैन घुमा विधि – मल में हेल्मिंथ लार्वा का पता लगाने के लिए। केवल ताजा उत्सर्जित मल की ही जांच की जाती है। 2-3 ग्राम को एक कांच के जार में रखा जाता है और 5 गुना पानी मिलाया जाता है, जार की दीवारों को छुए बिना एक छड़ी से जल्दी से हिलाया जाता है - 20-30 मिनट, फिर छड़ी को जल्दी से हटा दिया जाता है, और एक बूंद अंत में तरल को एक ग्लास स्लाइड में स्थानांतरित किया जाता है और माइक्रोस्कोप किया जाता है।

5. बर्मन विधि - हेल्मिंथ लार्वा की गर्मी की ओर स्थानांतरित होने की क्षमता पर आधारित है, और मल में उनकी पहचान करने का कार्य करता है।

6. हरदा और मोरी विधि (लार्वा पालन की विधि) और हुकवर्म संक्रमण के परीक्षण के लिए अनुशंसित है। यह विधि इस तथ्य पर आधारित है कि गर्मी में और नम फ़िल्टर्ड पेपर पर, हुकवर्म अंडे फिलारिफॉर्म लार्वा में विकसित होते हैं, जिन्हें आसानी से पता लगाया जा सकता है। फ़िल्टर किए गए कागज की एक पट्टी के बीच में 15 ग्राम मल लगाया जाता है; मल वाले कागज को एक जार में रखा जाता है ताकि निचला सिरा पानी में डूबा रहे और ऊपरी सिरा एक डाट से सुरक्षित रहे। जार को थर्मोस्टेट में 28 0 C पर 5-6 दिनों के लिए रखा जाता है। फिलारिफ़ॉर्म लार्वा इस समय के दौरान विकसित होते हैं और पानी में उतरते हैं। तरल की जांच एक आवर्धक कांच के नीचे की जाती है। यदि इसका पता लगाना मुश्किल है, तो तरल को सेंट्रीफ्यूज किया जाता है, पहले 60 0 तक गर्म करके लार्वा को मार दिया जाता है। प्रयोगशाला सहायक को दस्ताने पहनने होंगे।

7. एंटरोबियासिस के तरीके - पिनवॉर्म अंडे और गोजातीय टेपवर्म की पहचान।

ए) पेरिअनल सिलवटों से खुरचना - रुई के फाहे को लकड़ी की छड़ी पर कस कर लपेटें और 50% ग्लिसरीन के घोल में भिगोएँ। प्रयोगशाला में, स्वाब को ग्लिसरीन के 50% जलीय घोल की 1-2 बूंदों से धोया जाता है।

बी) चिपचिपा घुन विधि (ग्राहम विधि)

चिपकने वाला टेप पेरिअनल सिलवटों पर लगाया जाता है, फिर चिपकने वाली परत को कांच की स्लाइड पर लगाया जाता है और माइक्रोस्कोप के नीचे जांच की जाती है।

सी) आंख की छड़ों (राबिनोविच विधि) का उपयोग करके स्क्रैपिंग। पेरिअनल स्क्रैपिंग के लिए, ग्लास आई रॉड्स का उपयोग किया जाता है, जिसका चौड़ा हिस्सा एक विशेष गोंद से ढका होता है, जो पिनवॉर्म अंडे को बनाए रखने की अनुमति देता है।

रक्त, पित्त, थूक और मांसपेशियों की जांच

रक्त माइक्रोस्कोपी से फाइलेरिया लार्वा का पता चलता है।

थूक की जांच - पैरागैनिम अंडे, राउंडवॉर्म लार्वा, नेकेटर, स्ट्रॉन्गिलॉइड, इचिनोकोकल मूत्राशय के तत्व।

मांसपेशियों की जांच - यदि ट्राइकिनोसिस का संदेह है, तो रोगी या शव की मांसपेशियों की जांच की जाती है, साथ ही उस मांस की भी जांच की जाती है जिसके कारण संभवतः व्यक्ति संक्रमित हुआ था। ट्राइचिनोस्कोपी के प्रयोजन के लिए, मांसपेशियों को छोटे टुकड़ों में काटा जाता है और एक कंप्रेसरियम में रखा जाता है, ये दो चौड़े, मोटे ग्लास होते हैं जो मांसपेशियों को कुचलते हैं और ट्राइचिनेला लार्वा कैप्सूल के रूप में पाए जाते हैं - एक संपीड़न विधि।

पाचन विधि - मांसपेशियों को कृत्रिम गैस्ट्रिक जूस (हाइड्रोक्लोरिक एसिड घोल और पेप्सिन) से भरा जाता है। मांसपेशियाँ पच जाती हैं, और लार्वा आसानी से पहचाने जाते हैं। आक्रमण की तीव्रता का निर्धारण: लार्वा की संख्या 200 प्रति 1 ग्राम तक मांसपेशियों का ऊतक– आक्रमण की मध्यम तीव्रता; 500 तक - तीव्र; 500 से अधिक - अति गहन आक्रमण।

सीरोलॉजिकल तरीके

अध्याय III. हेल्मिंथियासिस का निदान और हेल्मिंथोलॉजिकल अनुसंधान के तरीके

चिकित्सा सहायता चाहने वाले सभी रोगियों और विशेष रूप से जठरांत्र संबंधी विकारों की शिकायत के साथ बाल रोग विशेषज्ञ, चिकित्सक और न्यूरोलॉजिस्ट के पास जाने वाले रोगियों में हेल्मिंथियासिस की जांच करना आवश्यक है। तंत्रिका तंत्रऔर एनीमिया के साथ। यदि डॉक्टर हमेशा प्रयोगशाला अनुसंधान विधियों का उपयोग करने में सक्षम नहीं होता है, तो आउट पेशेंट क्लिनिक या अस्पताल में देखभाल प्रदान करने वाले प्रत्येक चिकित्सा कर्मचारी को हेल्मिंथ के अलगाव के बारे में रोगी से साक्षात्कार करना आवश्यक है।

यदि उपलब्ध हो तो संबंधित अध्यायों में दिया गया है नैदानिक ​​संकेतहेल्मिंथियासिस के परीक्षण के लिए प्रयोगशाला विधियों का उपयोग करके निदान को स्पष्ट किया जाना चाहिए।

प्रबलता के कारण आंतों के कृमिरोगमहानतम व्यवहारिक महत्वमल परीक्षण होता है।

हेल्मिंथियासिस के लिए मल परीक्षण के तरीके

मल को एक साफ कांच के कंटेनर में प्रयोगशाला में पहुंचाया जाता है (एक हिस्से में विभिन्न स्थानों से लिया गया लगभग एक चौथाई कप मल); नियमित जांच के दौरान, माचिस या स्प्लिंट बॉक्स में मल को प्रयोगशाला में पहुंचाने की अनुमति है।

कृमि मुक्ति को नियंत्रित करने के लिए, प्रशासन के बाद एकत्र किए गए मल का पूरा हिस्सा वितरित किया जाता है (जैसा कि डॉक्टर द्वारा निर्धारित किया गया है)। कृमिनाशकऔर रेचक (बड़े बंद कांच के जार, बाल्टियों में)।

आंतों के हेल्मिंथियासिस के निदान में मल की सूक्ष्म जांच बुनियादी है; बड़े सेस्टोड, पिनवॉर्म, राउंडवॉर्म आदि के खंडों का पता लगाने के लिए हमेशा मल की सामान्य मैक्रोस्कोपिक जांच से पहले होना चाहिए।

मल ताजा या डिब्बाबंद (5% फॉर्मेल्डिहाइड घोल में) होना चाहिए, क्योंकि सूखने से अंडों की संरचना नाटकीय रूप से बदल जाती है। इसके अलावा, जब मल खड़ा होता है, तेजी से विकासकुछ कृमियों के अंडे (उदाहरण के लिए, हुकवर्म), जिससे निदान मुश्किल हो जाता है।

यूएसएसआर स्वास्थ्य मंत्रालय के निर्देशों के अनुसार, फुलबॉर्न विधि और देशी स्मीयर का उपयोग करके मल की एक साथ जांच करना आवश्यक है।

देशी धब्बा

देशी स्मीयर: मल का एक छोटा टुकड़ा (मटर के आकार के बारे में), वितरित हिस्से में विभिन्न स्थानों से माचिस, कांच या लकड़ी की छड़ी के साथ लिया जाता है, 50% ग्लिसरॉल समाधान की एक बूंद में कांच की स्लाइड पर अच्छी तरह से पीस लिया जाता है या खारे घोल में या पानी में. कवरस्लिप से कवर करें, बाद वाले पर हल्के से दबाएं (विच्छेदन सुई के साथ)। स्मीयर पतला, पारदर्शी और एक समान होना चाहिए। इसका उपयोग केवल अन्य तरीकों के अतिरिक्त के रूप में किया जाता है जो दवा को समृद्ध बनाते हैं। कम से कम दो दवाओं की समीक्षा की जानी चाहिए.

हेल्मिंथ लार्वा (साथ ही उनके अंडे) का पता लगाने के लिए, एक देशी स्मीयर बनाया जाता है इस अनुसार(शुलमैन के अनुसार): 2-3 ग्राम मल को एक कांच की छड़ को "घुमा"कर पांच गुना साफ पानी या खारे पानी के साथ एक इमल्शन में मिलाया जाता है। हिलाने के दौरान, लार्वा कांच की छड़ के पास जमा हो जाता है, इसलिए हिलाने की समाप्ति के तुरंत बाद, इमल्शन की एक बूंद को कांच की छड़ के साथ जल्दी से कांच की स्लाइड पर स्थानांतरित किया जाता है, कवरस्लिप से ढक दिया जाता है और जांच की जाती है। एस. डी. ल्युबचेंको (1936) ने साबित किया कि ट्विस्टिंग विधि स्मीयर विधि की तुलना में अधिक प्रभावी है, खासकर राउंडवॉर्म अंडों के संबंध में। एस. डी. ल्यूबचेंको के काम के आधार पर, हम स्मीयर विधि को ट्विस्टिंग विधि से बदलने की सलाह देते हैं।

फुलबॉर्न विधि

फुलबॉर्न विधि: विभिन्न स्थानों से लिए गए 5-10 ग्राम मल को 50-100 मिलीलीटर की क्षमता वाले जार में रखा जाता है और टेबल नमक के संतृप्त घोल में कांच या लकड़ी की छड़ी से अच्छी तरह से रगड़ा जाता है (इस नमक का 400 ग्राम घुल जाता है) 1 लीटर पानी में, उबाल आने तक गर्म करें और रूई या धुंध की एक परत के माध्यम से छान लें; घोल को ठंडा उपयोग किया जाता है: विशिष्ट गुरुत्व 1.2)। एक समान निलंबन प्राप्त होने तक घोल को धीरे-धीरे मिलाया जाता है, और मिलाए गए घोल की कुल मात्रा मल की मात्रा से लगभग 20 गुना होनी चाहिए। मल को मिलाने के लिए, फुलबॉर्न ने चाय के गिलास का उपयोग करने की सिफारिश की, लेकिन प्रत्येक विश्लेषण के लिए दो जार (या 100 मिलीलीटर की क्षमता वाले कप में) का उपयोग करके 50-100 मिलीलीटर की क्षमता वाले मलहम जार में निलंबन तैयार करना अधिक सुविधाजनक है।

निलंबन तैयार करने के तुरंत बाद, सतह पर तैरने वाले बड़े कणों को एक स्पैटुला, एक धातु स्कूप या साफ कागज के टुकड़े के साथ सतह से हटा दिया जाता है ( पौधों का निर्माण, बिना पचा भोजन रह जाना आदि), जिसके बाद मिश्रण को 1-1.5 घंटे के लिए छोड़ दिया जाता है। इस समय के बाद, एक समकोण पर मुड़े हुए 1 सेमी से अधिक व्यास वाले तार या प्लैटिनम लूप (फ्लैट) को छूकर पूरी फिल्म को मिश्रण की सतह से हटा दिया जाता है; फिल्म को कांच की स्लाइड पर हिलाया जाता है और कवरस्लिप से ढक दिया जाता है। प्रत्येक कवर स्लिप (18x18 मिमी) के नीचे 3-4 बूंदें रखें। कुल मिलाकर, कम से कम 4 तैयारियां तैयार की जानी चाहिए (प्रत्येक तैयारी के लिए एक कवर ग्लास)। लूप को आग पर गर्म किया जाता है और प्रत्येक विश्लेषण के बाद पानी से धोया जाता है।

फुलबॉर्न विधि का उपयोग करके, सभी नेमाटोड के अंडे (अनिषेचित राउंडवॉर्म अंडे को छोड़कर) और बौने टेपवर्म अंडे का जल्दी और आसानी से पता लगाया जाता है।

बर्मन विधि का उपयोग हेल्मिंथ लार्वा (स्ट्रॉन्गिलोइडियासिस के लिए) के लिए मल की जांच करने के लिए किया जाता है। यह विधि इस प्रकार है: एक धातु की जाली पर 5 ग्राम मल (एक दूध की छलनी इस उद्देश्य के लिए सुविधाजनक है) को एक तिपाई से जुड़े कांच की कीप पर रखा जाता है। क्लैंप के साथ एक रबर ट्यूब को फ़नल के निचले सिरे पर रखा जाता है।

मल वाली जाली को उठा लिया जाता है और लगभग 50° तक गर्म किया गया पानी फ़नल में डाला जाता है ताकि मल वाली जाली का निचला हिस्सा पानी में डूब जाए। लार्वा सक्रिय रूप से पानी में चले जाते हैं और रबर ट्यूब के निचले हिस्से में जमा हो जाते हैं। 2-4 घंटों के बाद, क्लैंप खोला जाता है और तरल को एक या दो सेंट्रीफ्यूज ट्यूबों में डाला जाता है।

1-2 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद, तरल का ऊपरी हिस्सा जल्दी से सूखा जाता है, और तलछट को ग्लास स्लाइड पर बूंदों में लगाया जाता है और कवर स्लिप के नीचे जांच की जाती है या 2-3 बड़े ग्लास पर एक पतली परत में वितरित किया जाता है और फिर बिना कवर के जांच की जाती है फिसल जाता है।

हुकवर्म लार्वा की उपस्थिति के लिए मिट्टी का परीक्षण करने के लिए बर्मन विधि का भी उपयोग किया जाता है।

स्टॉल विधि

आक्रमण की तीव्रता निर्धारित करने के लिए स्टोल विधि का उपयोग किया जाता है। कास्टिक सोडा का एक डेसीनॉर्मल घोल एक विशेष ग्लास फ्लास्क में 56 सेमी 3 के निशान तक डाला जाता है, और तब तक मल मिलाया जाता है जब तक कि तरल स्तर 60 सेमी 3, यानी 4 सेमी 3 तक नहीं पहुंच जाता। कांच के मोतियों से हिलाने के बाद, मिश्रण का 0.075 मिलीलीटर जांच के लिए लिया जाता है और एक या दो साधारण कवरस्लिप के नीचे जांच की जाती है। मल के 1 सेमी 3 में निहित अंडों की संख्या प्राप्त करने के लिए परिणामी मात्रा को 200 से गुणा किया जाता है।

ग्रहणी सामग्री का अध्ययन

ग्रहणी रस और मूत्राशय पित्त, जांच का उपयोग करके सामान्य तरीके से प्राप्त किया जाता है (और पित्ताशय से पलटा के बाद मूत्राशय पित्त), एथिल ईथर की समान मात्रा के साथ अच्छी तरह मिलाया जाता है; मिश्रण को सेंट्रीफ्यूज किया जाता है, जिसके बाद तलछट की माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है। तलछट के अलावा, सूक्ष्मदर्शी द्वारा परीक्षणतरल में तैरते हुए गुच्छे, जिनमें कृमि के अंडे हो सकते हैं, आवश्यक रूप से उजागर हो जाते हैं। हेल्मिंथ अंडे के लिए गैस्ट्रिक जूस और उल्टी का परीक्षण करते समय, आप उसी तकनीक का उपयोग कर सकते हैं।

संदेह होने पर ग्रहणी रस और पेट की सामग्री की जांच की जानी चाहिए कृमि रोगयकृत, पित्ताशय (ऑपिसथोरचिआसिस, फैसीओलियासिस, डाइक्रोसेलियोसिस) और ग्रहणी (स्ट्रॉन्गिलॉइडियासिस)।

बलगम जांच

थूक को एक कांच की प्लेट पर पीसा जाता है, एक अन्य कांच की प्लेट से कसकर ढक दिया जाता है और प्रकाश और काली पृष्ठभूमि के साथ-साथ प्रसारित प्रकाश में एक आवर्धक कांच के नीचे नग्न आंखों से जांच की जाती है। थूक के अलग-अलग टुकड़े ("जंग लगे" संचय, ऊतक स्क्रैप, आदि) को एक पतली परत में एक ग्लास स्लाइड पर लगाया जाता है, एक कवरस्लिप के साथ कसकर कवर किया जाता है और कम और उच्च आवर्धन माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है।

ए) त्वचा, चमड़े के नीचे के ऊतक या मांसपेशियों के सिस्टीसर्कोसिस का निदान करने के लिए, संबंधित ऊतक के सड़न रोकनेवाला रूप से निकाले गए टुकड़े की पहले नग्न आंखों से जांच की जाती है। नग्न आंखों को दिखाई देने वाले पुटिका - एक सिस्टीसर्कस (फोटो ए) का पता लगाने के लिए ऊतक के क्षेत्रों को विच्छेदन सुइयों का उपयोग करके अलग किया जाता है; इसकी लंबाई 6-20 मिमी, चौड़ाई 5-10 मिमी है। जब सिस्टीसर्कस के लिए संदिग्ध पुटिका का पता चलता है, तो इसे दो ग्लास स्लाइडों के बीच कुचल दिया जाता है और माइक्रोस्कोप के नीचे जांच की जाती है। सिस्टीसर्कस (सिस्टीसर्कस सेलुलोसे) चार सकर और हुक के एक कोरोला के साथ एक स्कोलेक्स की उपस्थिति से निर्धारित होता है (फोटो बी)।

तस्वीर।ए - स्कोलेक्स के साथ सिस्टिसिरसी बाहर की ओर निकला हुआ; बी - पोर्क टेपवर्म का सिर।

बी) ट्राइकिनोसिस का निदान करने के लिए, मांसपेशियों के एक सड़न रोकनेवाला टुकड़े (बाइसेप्स या गैस्ट्रोकनेमियस) को विच्छेदन सुइयों का उपयोग करके 50% ग्लिसरीन समाधान में सावधानीपूर्वक कुचलकर बेहतरीन फाइबर में बदल दिया जाता है। कुचली हुई मांसपेशियों को दो ग्लास स्लाइडों के बीच दबाया जाता है और एक अंधेरे क्षेत्र में कम-शक्ति वाले माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है। बीमारी के 8वें दिन से पहले ट्राइकिनोसिस के लिए मांसपेशियों का परीक्षण करने की सिफारिश की जाती है। ट्राइचिनेला लार्वा मांसपेशियों में कुंडलित स्थिति में पाए जाते हैं: वे नींबू के आकार के कैप्सूल में बंद होते हैं।

तस्वीर।ए - मांसपेशियों में त्रिचिनेला लार्वा; बी - ट्राइचिनेला के कैल्सीफाइड कैप्सूल।

एक्स-रे

अक्सर, फ्लोरोस्कोपी का उपयोग इचिनोकोकोसिस और, कम सामान्यतः, सिस्टिकिकोसिस के निदान के लिए किया जाता है। कैल्सीफिकेशन के बाद ही फ्लोरोस्कोपी द्वारा सिस्टीसेरसी का पता लगाया जाता है (मामलों में)। दीर्घकालिक बीमारी). हाल के वर्षों में, प्रारंभिक लार्वा चरण और आंशिक रूप से, आंतों के चरण में एस्कारियासिस का निदान करने के लिए फ्लोरोस्कोपी का भी उपयोग किया गया है।

राउंडवॉर्म (और हुकवर्म) लार्वा के प्रवास की अवधि के दौरान, फेफड़ों में अस्थिर, कभी-कभी कई सूजन वाले फॉसी पाए जाते हैं; उसी समय, रक्त में महत्वपूर्ण ईोसिनोफिलिया प्रकट होता है।

प्रभावित व्यक्तियों की आंतों की फ्लोरोस्कोपी पर यौन रूप से परिपक्व राउंडवॉर्म स्पष्ट रूप से दिखाई देते हैं। इस विधि को, इसकी जटिलता और बोझिलता के बावजूद, नकारात्मक स्कैटोलॉजिकल विश्लेषण वाले मामलों में एस्कारियासिस के निदान के लिए एक अतिरिक्त विधि के रूप में उपयोग किया जाना चाहिए। ई. एस. गेसेलेविच के अनुसार, फ्लोरोस्कोपी द्वारा पहचाने गए एस्कारियासिस के 180 रोगियों में से 54 के मल में कोई एस्केरिस अंडे नहीं पाए गए (देखें)।

7.7. हेल्मिंथ अंडे और लार्वा की व्यवहार्यता निर्धारित करने के तरीके

हेल्मिंथ अंडों की व्यवहार्यता उनके स्वरूप, महत्वपूर्ण रंगों से रंगने, और संवर्धन द्वारा निर्धारित की जाती है इष्टतम स्थितियाँऔर एक जैविक नमूना स्थापित करना।

7.7.1. उपस्थिति के आधार पर हेल्मिंथ अंडे या लार्वा की व्यवहार्यता का निर्धारण करना

हेल्मिंथ अंडों को पहले कम आवर्धन पर, फिर उच्च आवर्धन पर सूक्ष्मदर्शी से जांचा जाता है। विकृत और मृत हेल्मिंथ अंडों में, खोल फटा हुआ या अंदर की ओर मुड़ा हुआ होता है, प्लाज्मा धुंधला और ढीला होता है। खंडित अंडों में, कुचलने वाली गेंदें (ब्लास्टोमेरेस) आकार में असमान, आकार में अनियमित और अक्सर एक ध्रुव पर स्थानांतरित हो जाती हैं। कभी-कभी असामान्य अंडे होते हैं जो बाहरी विकृति के बावजूद सामान्य रूप से विकसित होते हैं। जीवित राउंडवॉर्म लार्वा में, बारीक दानेदारता केवल शरीर के मध्य भाग में मौजूद होती है; जैसे ही वे मरते हैं, यह पूरे शरीर में फैल जाती है, बड़े चमकदार हाइलिन रिक्तिकाएं, तथाकथित "मोतियों की माला" दिखाई देती हैं।

राउंडवॉर्म, व्हिपवर्म और पिनवॉर्म के परिपक्व अंडों की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए, आपको कॉल करना चाहिए सक्रिय हलचलेंतैयारी को हल्के से गर्म करके (37 डिग्री सेल्सियस से अधिक नहीं तापमान पर) लार्वा। अंडे के छिलके से अलग होने के बाद राउंडवॉर्म और व्हिपवर्म लार्वा की व्यवहार्यता का निरीक्षण करने के लिए तैयारी के कवर ग्लास पर एक विच्छेदन सुई या चिमटी के साथ दबाव डालना अधिक सुविधाजनक होता है।

आक्रामक राउंडवॉर्म लार्वा में, एक आवरण अक्सर सिर के अंत में छीलता हुआ देखा जाता है, और व्हिपवर्म लार्वा में, जिन्होंने अंडे में विकास पूरा कर लिया है, उच्च आवर्धन पर इस स्थान पर एक स्टाइललेट पाया जाता है। मृत हेल्मिंथ लार्वा में, चाहे उनका स्थान कुछ भी हो (अंडे में या उसके बाहर), शरीर का क्षय देखा जाता है। जिसमें आंतरिक संरचनालार्वा गुच्छेदार या दानेदार हो जाता है, और शरीर बादलदार और अपारदर्शी हो जाता है। शरीर में रिक्तिकाएँ पाई जाती हैं, और छल्ली पर विराम पाए जाते हैं।

टैनिड ऑन्कोस्फीयर (गोजातीय, पोर्क टेपवर्म, आदि) की व्यवहार्यता पाचन एंजाइमों के संपर्क में आने पर भ्रूण की गति से निर्धारित होती है। अंडे रखे जाते हैं घड़ी का शीशाकुत्ते के गैस्ट्रिक रस या कृत्रिम ग्रहणी रस के साथ। उत्तरार्द्ध की संरचना: पैनक्रिएटिन - 0.5 ग्राम, सोडियम बाइकार्बोनेट - 0.09 ग्राम, आसुत जल - 5 मिली। अंडे वाले वॉच ग्लास को थर्मोस्टेट में 36 - 38 डिग्री सेल्सियस पर 4 घंटे के लिए रखा जाता है। इस मामले में, जीवित भ्रूण अपनी झिल्लियों से मुक्त हो जाते हैं। जीवित ओंकोस्फीयर के गोले भी अम्लीय पेप्सिन और में घुल जाते हैं क्षारीय घोल 38 डिग्री सेल्सियस पर थर्मोस्टेट में 6-8 घंटे के बाद ट्रिप्सिन।

यदि आप टेनिड अंडों को सोडियम सल्फाइड के 1% घोल या सोडियम हाइपोक्लोराइड के 20% घोल या क्लोरीन पानी के 1% घोल में 36 - 38 डिग्री सेल्सियस पर रखते हैं, तो परिपक्व और जीवित भ्रूण झिल्ली से निकल जाते हैं और नहीं 1 दिन के दौरान परिवर्तन. अपरिपक्व और मृत ओंकोस्फियर सिकुड़ते या सूजते हैं और तेजी से बड़े होते हैं, और फिर 10 मिनट से 2 घंटे के भीतर "विघटित" हो जाते हैं। जीवित टैनिड भ्रूण भी 1% सोडियम क्लोराइड घोल, 0.5% सोडियम बाइकार्बोनेट घोल और पित्त के मिश्रण में 36 - 38 डिग्री सेल्सियस पर सक्रिय रूप से चलते हैं।

पौधों और जल निकायों की अन्य वस्तुओं पर एकत्र किए गए एडोलसेरिया फैसीओली की व्यवहार्यता को हीटिंग चरण के साथ माइक्रोस्कोप के तहत शारीरिक समाधान में एक ग्लास स्लाइड पर जांच करके जांच की जाती है। जब ट्रेमेटोड लार्वा को गर्म किया जाता है, तो वे हिलना शुरू कर देते हैं।

बौने टेपवर्म अंडों की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए, सबसे सरल विधि एन.एस. आयोनिना है: जीवित अंडों में, भ्रूणीय हुकों की मध्य जोड़ी या तो पार्श्व वाले हुकों के समानांतर होती है, या बाद वाले आधार पर मध्यिका के साथ एक कोण बनाते हैं। 45°. मृत अंडों में, पार्श्व युग्म 45° से अधिक के आधार पर मध्य युग्म के साथ एक कोण बनाते हैं, या हुक बेतरतीब ढंग से बिखरे हुए होते हैं (उनकी युग्मित व्यवस्था खो जाती है); कभी-कभी भ्रूण सिकुड़ जाता है और दाने बन जाते हैं। एक अधिक सटीक विधि तापमान में तेज बदलाव के दौरान ऑन्कोस्फियर के आंदोलनों की उपस्थिति पर आधारित है: 5 - 10 डिग्री से 38 - 40 डिग्री सेल्सियस तक।

अपरिपक्व नेमाटोड अंडों की व्यवहार्यता का निर्धारण एक आर्द्र कक्ष (पेट्री डिश) में किया जाना चाहिए, 24 - 30 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान में तैयार 3% फॉर्मेल्डिहाइड समाधान में राउंडवॉर्म अंडे रखकर, व्हिपवॉर्म अंडे को एक में रखना चाहिए। 30 - 35 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 3% हाइड्रोक्लोरिक एसिड समाधान; 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान में पिनवॉर्म अंडे। बेहतर वातायन के लिए पेट्री डिश को सप्ताह में 1-2 बार खोलना चाहिए और फिल्टर पेपर को दोबारा गीला करना चाहिए। साफ पानी.

हेल्मिंथ अंडों के विकास का अवलोकन सप्ताह में कम से कम 2 बार किया जाता है। 2-3 महीनों के भीतर विकास के संकेतों की अनुपस्थिति उनकी अव्यवहार्यता को इंगित करती है। हेल्मिंथ अंडों के विकास के लक्षण सबसे पहले अंडे की सामग्री को अलग-अलग ब्लास्टोमेरेस में विभाजित करने, कुचलने के चरण हैं। पहले दिनों के दौरान, 16 ब्लास्टोमेरेस विकसित होते हैं, जो दूसरे चरण में चले जाते हैं - मोरुला, आदि।

हुकवर्म अंडों को एक डाट से बंद कांच के सिलेंडर (50 सेमी ऊंचे और 7 सेमी व्यास) में संवर्धित किया जाता है। का एक मिश्रण समान मात्राहुकवर्म अंडे के साथ बाँझ रेत, लकड़ी का कोयला और मल, अर्ध-तरल स्थिरता के लिए पानी से पतला, एक ग्लास ट्यूब का उपयोग करके सिलेंडर के तल पर सावधानीपूर्वक डाला जाता है। 25 - 30 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर अंधेरे में बसने के 1 - 2 दिनों के दौरान, अंडों से रबडीटिफ़ॉर्म लार्वा निकलते हैं, और 5 - 7 दिनों के बाद वे फ़ाइलारिफ़ॉर्म बन जाते हैं: लार्वा सिलेंडर की दीवारों पर रेंगते हैं, जहां वे होते हैं नग्न आंखों से भी दिखाई देता है.

ट्रैमेटोड के अंडे जो स्वाभाविक रूप से पानी में विकसित होते हैं, उदाहरण के लिए ओपिसथोर्चिस, डिफाइलोबोथ्रिडे, फासिओले और अन्य, एक वॉच ग्लास, पेट्री डिश या अन्य बर्तन पर रखे जाते हैं, और साधारण पानी की एक छोटी परत डाली जाती है। फासिओला अंडों की खेती करते समय इस बात का ध्यान रखना चाहिए कि वे अंधेरे में तेजी से विकसित होते हैं, जबकि जीवित अंडों में 22 - 24 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर मिरासिडियम 9 - 12 दिनों में बनता है। जब ट्रेमेटोड अंडों को विकसित करने वाली सूक्ष्मदर्शी से जांच की जाती है, तो मिरासिडियम की गतिविधियां स्पष्ट रूप से दिखाई देती हैं। मिरासिडियम फासिओला केवल प्रकाश में ही अंडे के छिलके से निकलता है।

फुलबॉर्न विधि. हुकवर्म और स्ट्रांगाइलिड लार्वा को जानवरों के कोयले के साथ पेट्री डिश में आगर पर संवर्धित किया जाता है। थर्मोस्टेट में 25 - 30 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 5 - 6 घंटे तक रखने के बाद, लार्वा बैक्टीरिया का रास्ता छोड़कर अगर में रेंगता है।

हरदा और मोरी विधि. एक रैक में रखी टेस्ट ट्यूब में 7 मिलीलीटर आसुत जल डालें। एक लकड़ी की छड़ी का उपयोग करके, 0.5 ग्राम मल लें और बाएं किनारे से 5 सेमी की दूरी पर फिल्टर पेपर (15 x 150 मिमी) पर एक धब्बा बनाएं (यह ऑपरेशन प्रयोगशाला बेंच की सतह की रक्षा के लिए कागज की एक शीट पर किया जाता है)। फिर स्मीयर वाली पट्टी को टेस्ट ट्यूब में डाला जाता है ताकि स्मीयर से मुक्त बायां सिरा टेस्ट ट्यूब के नीचे तक पहुंच जाए। ऊपरी सिरे को सिलोफ़न के एक टुकड़े से ढँक दें और इसे एक इलास्टिक बैंड से कसकर लपेट दें। जिस व्यक्ति की जांच की जा रही है उसका नंबर और उपनाम टेस्ट ट्यूब पर लिखा होता है। इस अवस्था में, ट्यूबों को 28 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 8 - 10 दिनों के लिए संग्रहीत किया जाता है। लार्वा का अध्ययन करने के लिए, सिलोफ़न कवर हटा दें और चिमटी से फ़िल्टर पेपर की एक पट्टी हटा दें। ऐसा करते समय सावधानी बरतनी चाहिए क्योंकि छोटी संख्या में संक्रामक लार्वा फिल्टर पेपर के ऊपरी सिरे या ट्यूब के किनारे तक जा सकते हैं और सिलोफ़न की सतह के नीचे घुस सकते हैं।

ट्यूबों को 15 मिनट के लिए 50 डिग्री सेल्सियस पर गर्म पानी के स्नान में रखा जाता है, जिसके बाद सामग्री को हिलाया जाता है और लार्वा को तलछट करने के लिए तुरंत 15 मिलीलीटर ट्यूब में डाला जाता है। सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद, सतह पर तैरनेवाला हटा दिया जाता है, और तलछट को एक ग्लास स्लाइड में स्थानांतरित कर दिया जाता है, एक कवरस्लिप के साथ कवर किया जाता है, और कम आवर्धन के तहत सूक्ष्मदर्शी से जांच की जाती है।

फाइलेरिफॉर्म लार्वा के विभेदक निदान के लिए, तालिका 3 में डेटा का उपयोग करना आवश्यक है।

टेबल तीन

ए. डुओडेनेल, एन. अमेरिकन, एस. स्टेरकोरेलिस, ट्राइकोस्ट्रॉन्गिलस एसपी के फाइलेरियाइड लार्वा के विभेदक निदान।

लार्वा	DIMENSIONS	चारित्रिक लक्षण
ए. ग्रहणी	शरीर की लंबाई लगभग 660 µm, आवरण की लंबाई - 720 एनएम	टोपी की धारियाँ कम स्पष्ट होती हैं, मौखिक उभार कम ध्यान देने योग्य होता है, शरीर का अगला सिरा (लेकिन टोपी नहीं) कुंद होता है, आंत्र नली का व्यास ग्रासनली बल्ब से छोटा होता है, दुम का सिरा कुंद होता है
एन. अमेरिकन	शरीर की लंबाई लगभग 590 माइक्रोन, म्यान की लंबाई - 660 एनएम	टोपी स्पष्ट रूप से धारीदार है, विशेष रूप से शरीर के दुम भाग में, मौखिक उभार गहरा दिखाई देता है, शरीर का पूर्वकाल सिरा (लेकिन टोपी नहीं) एक संकीर्ण सिरे की तरह गोल होता है मुर्गी का अंडा, आंतों की नली के अग्र भाग का व्यास ग्रासनली बल्ब के समान होता है, दुम का सिरा तेजी से नुकीला होता है
एस. स्टेरकोरेलिस	शरीर की लंबाई लगभग 500 माइक्रोन	लार्वा बिना आवरण का होता है, ग्रासनली शरीर की लंबाई से लगभग आधी होती है, पूंछ कुंद या शाखायुक्त होती है
ट्राइकोस्ट्रॉन्गिलस एसपी।	शरीर की लंबाई लगभग 750 µm	आंतों का लुमेन सीधा नहीं है, बल्कि टेढ़ा है, पूंछ का सिरा गोल है और बटन के आकार का है

7.7.2. हेल्मिंथ अंडे और लार्वा को धुंधला करने के तरीके

अधिकांश मामलों में मृत ऊतक जीवित ऊतकों की तुलना में रंगों को अधिक तेजी से समझते हैं। इन विशेषताओं का उपयोग हेल्मिन्थोलॉजी में हेल्मिन्थ अंडे और लार्वा की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए किया जाता है। हालाँकि, कुछ मामलों में, कुछ पेंट मृत ऊतकों की तुलना में जीवित ऊतकों द्वारा बेहतर समझे जाते हैं।

जीवित और मृत अंडे और लार्वा के बीच अंतर करने के लिए निम्नलिखित पेंट और विधियों का उपयोग किया जाता है।

ल्यूकोबेस मेथिलीन ब्लू का उपयोग अक्सर जीवित और मृत ऊतकों को दागने के लिए किया जाता है। लिविंग सेलया ऊतक मेथिलीन ब्लू को रंगहीन ल्यूकोबेस में बदल देता है, मृत ऊतक में यह क्षमता नहीं होती है, इसलिए वह रंग प्राप्त कर लेता है।

अंडे की स्थिति का मानदंड भ्रूण का रंग है, लेकिन खोल नहीं। यह क्षमता उन परिस्थितियों से जुड़ी होती है जिनके तहत अंडा मर जाता है। ऐसे मामलों में जहां मृत अंडे में रेशेदार झिल्ली अपने अर्ध-पारगम्य गुणों को नहीं खोती है, यह रंगों को गुजरने की अनुमति नहीं देगी, और इसलिए मृत भ्रूण पर दाग नहीं पड़ेगा। रंगीन भ्रूण हमेशा अंडे की मृत्यु का संकेत देता है।

राउंडवॉर्म अंडों को रंगने के लिए, आप कास्टिक क्षार (0.05 ग्राम मेथिलीन ब्लू, 0.5 ग्राम सोडियम हाइड्रॉक्साइड, 15 मिली लैक्टिक एसिड) के साथ लैक्टिक एसिड के घोल में मेथिलीन ब्लू का उपयोग कर सकते हैं। जीवित अंडे रंग नहीं पहचानते; में चित्रित हैं नीला रंगमृत अंडे के भ्रूण. 1:10000 की सांद्रता पर ब्रिलियंटक्रेसिल ब्लू पेंट के मूल समाधान के साथ राउंडवॉर्म लार्वा का धुंधलापन निम्नानुसार किया जाता है: राउंडवॉर्म अंडे के साथ तरल की एक बूंद और मूल पेंट समाधान की एक बूंद को कांच की स्लाइड पर लगाया जाता है। तैयारी को एक कवरस्लिप के साथ कवर किया गया है, जिसे एक विच्छेदन सुई के साथ हल्के से टैप करते हुए स्लाइड पर कसकर दबाया जाता है। उभरते हुए लार्वा की संख्या और उनके धुंधला होने की डिग्री को माइक्रोस्कोप के नीचे देखा जाता है; जिसके बाद 2 - 3 घंटे बाद उसी दवा की दोबारा जांच की जाती है। केवल विकृत लार्वा जिन पर 2 घंटे तक दाग न लगा हो, उन्हें जीवित माना जाता है। मृत लार्वा या तो अंडों से नहीं निकलते हैं, या जब खोल टूट जाता है (आंशिक रूप से या पूरी तरह से) तो रंगीन हो जाते हैं।

एवियन राउंडवॉर्म अंडों की व्यवहार्यता का निर्धारण करते समय, तैयारी को 5% से दागना संभव है शराब समाधानयोडा। जब इसे तैयारी पर लगाया जाता है, तो मृत एस्केरिडिया अंडों के रोगाणु 1 - 3 सेकंड के भीतर हो जाते हैं। नारंगी रंग से रंगे गए हैं.

मृत ओपिसथोर्चिस अंडे और गोजातीय टेपवर्म ऑन्कोस्फीयर को टोल्यूडीन ब्लू (1:1000) के घोल से रंगा जाता है, और मृत गोजातीय टेपवर्म ऑन्कोस्फीयर को ब्रिलियंट क्रेसिल ब्लू (1:10000) के घोल से रंगा जाता है। इसी समय, मृत और जीवित दोनों अंडों के भ्रूण और खोल रंग प्राप्त कर लेते हैं। इसलिए, धुंधला होने के बाद, अंडे और ओंकोस्फीयर को धोया जाता है साफ पानीऔर इसके अतिरिक्त उन्हें सैफ्रानिन (अल्कोहल 10 डिग्री सेल्सियस में 1:10000 पतला) के साथ दाग दें। अल्कोहल शेल से पेंट हटा देता है, और सफ़्रैनिन इसे लाल कर देता है। परिणामस्वरूप, जीवित अंडे लाल हो जाते हैं; मृत भ्रूण वाले अंडे नीले हो जाते हैं, लेकिन खोल लाल रहता है। गोजातीय टेपवर्म ओंकोस्फीयर के मृत भ्रूणों को कुछ ही मिनटों में जल्दी ही सफ्रानिन के साथ चमकीले लाल या गुलाबी रंग में रंग दिया जाता है या 1:4000 के तनुकरण पर शानदार क्रेसिल नीले रंग के साथ नीले रंग में रंग दिया जाता है, या 1:1000 - 1:2000 के तनुकरण पर इंडिगो कारमाइन के साथ रंग दिया जाता है। . इन पेंट के प्रभाव में जीवित भ्रूण 2 - 7 घंटे के बाद भी नहीं बदलते हैं।

बौने टेपवर्म अंडों की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए, निम्नलिखित पेंट का उपयोग करने की अनुशंसा की जाती है:

1. ब्रिलियंटक्रेसिल नीला (1:8000) - 1 घंटे के बाद, मृत अंडों का ऑन्कोस्फियर विशेष रूप से चमकीले रंग का हो जाता है, जो अंडे के बाकी हिस्सों की पीली या रंगहीन पृष्ठभूमि के मुकाबले तेजी से खड़ा होता है।

2. सफ़्रैनिन (2 घंटे के लिए उजागर होने पर 1:8000 और 3 - 5 घंटे के लिए 1:5000)।

3. 1:2 के तनुकरण में पाइरोगेलिक एसिड का 50% घोल - 29 - 30 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 1 घंटे के लिए उजागर होने पर (तापमान जितना कम होगा, रंगाई प्रक्रिया उतनी ही लंबी होगी)।

7.7.3. हेल्मिंथ अंडे और लार्वा का अध्ययन करने के लिए ल्यूमिनसेंट विधि

फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी अंडे को नुकसान पहुंचाए बिना जीवित और मृत वस्तुओं के बीच अंतर करना संभव बनाती है। प्रतिदीप्ति के लिए उपयोग नहीं किया जाता पराबैंगनी किरण, और दृश्य प्रकाश का नीला-बैंगनी हिस्सा, एक पारंपरिक माइक्रोस्कोप और ग्लास स्लाइड के साथ; OI-18 इलुमिनेटर में रंग फिल्टर का एक विशेष सेट जोड़ा जाता है।

राउंडवॉर्म, पिनवॉर्म, बौना टेपवर्म, बोवाइन टेपवर्म, ब्रॉड टेपवर्म और अन्य हेल्मिंथ के जीवित और मृत अंडे अलग-अलग तरीके से चमकते हैं। यह घटना रंगों के उपयोग के बिना प्राथमिक ल्यूमिनेसेंस के दौरान और फ्लोरोक्रोम (एक्रिडीन ऑरेंज, कोरिफोस्फीन, प्रिमुलिन, ऑरोलिन, बेर्लेरिन सल्फेट, ट्रिपाफ्लेविन, रिवानॉल, एक्रिन, आदि) के साथ दागने पर देखी जाती है।

बिना रंग वाले, सजीव, खंडित राउंडवॉर्म अंडे पीले रंग की टिंट के साथ चमकीले हरे रंग में चमकते हैं; मृत अंडों में खोल विकिरण करता है हरी बत्तीगहरे हरे भ्रूणीय भाग की तुलना में बहुत अधिक चमकीला; लार्वा वाले राउंडवॉर्म अंडों में, केवल खोल दिखाई देता है, और मृत अंडों में, खोल और लार्वा दोनों चमकीले पीले होते हैं।

पिनवर्म और बौने टेपवर्म के अप्रकाशित और अखंडित जीवित अंडे एक हरे-पीले प्रकाश का उत्सर्जन करते हैं; मृत अंडों का खोल गहरे हरे रंग के भ्रूण द्रव्यमान की पृष्ठभूमि के खिलाफ तीव्रता से चमकता है।

द्वितीयक चमक के साथ (जब 30 मिनट से 2 घंटे तक 1:10,000 और 1:50,000 के तनुकरण पर एक्रिडीन ऑरेंज से रंगा जाता है), जीवित और मृत नेमाटोड, ट्रेमेटोड और सेस्टोड के खोल अलग-अलग तरह से चमकते हैं।

राउंडवॉर्म, टोक्सोकारा, पिनवॉर्म, बौना टेपवर्म, चूहा टेपवर्म, बैल टेपवर्म और टैपवर्म के जीवित और मृत अंडों के छिलके नारंगी-लाल रंग के होते हैं। राउंडवॉर्म, टॉक्सास्करिस, चूहे के टेपवर्म, चौड़े टेपवर्म और बोवाइन टेपवर्म के ओंकोस्फीयर के जीवित अंडों के भ्रूण फ्लोरोसेंट गहरे हरे रंग के या भूरा-हरा रंग. इन कृमियों के मृत भ्रूण अंडे एक "जलता हुआ" नारंगी-लाल रंग उत्सर्जित करते हैं। जीवित पिनवर्म और टोक्सोकारा लार्वा (अंडे के छिलके मुक्त) एक फीकी धूसर-हरी रोशनी उत्सर्जित करते हैं; जब वे मर जाते हैं, तो सिर के सिरे से रंग बदलकर "जलता हुआ" हल्का हरा, फिर पीला, नारंगी और अंत में चमकीला नारंगी हो जाता है।

जब फ्लोरोक्रोम से रंगा जाता है - कोरिफोस्फिलम, प्रिमुलिन, राउंडवॉर्म और व्हिपवर्म के मृत अंडे बकाइन-पीले से तांबे-लाल तक की चमक दिखाते हैं। व्यवहार्य अंडे चमकते नहीं हैं, लेकिन गहरे हरे रंग में रंगे जाते हैं।

ट्रेमेटोड्स (पैरागोनिमस और क्लोनोरचिस) के जीवित अंडे एक्रिडीन नारंगी रंग से रंगे जाने पर चमकते नहीं हैं, लेकिन मृत अंडे पीले-हरे रंग का उत्पादन करते हैं।

हेल्मिंथ लार्वा की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए ल्यूमिनसेंस विधि का भी उपयोग किया जा सकता है। इस प्रकार, स्ट्रांगाइलेट और रबडिटैटस लार्वा फ्लोरोक्रोम एक्रिडीन ऑरेंज (1:2000) के घोल से चमकते हैं: जीवित - हरे (एक टिंट के साथ), मृत - एक उज्ज्वल नारंगी रोशनी के साथ।

खोल से निकलने वाले जीवित मिरासिडिया सिलिया के बमुश्किल ध्यान देने योग्य हल्के पीले रंग के कोरोला के साथ एक मंद नीली रोशनी उत्सर्जित करते हैं, लेकिन मृत्यु के 10 - 15 मिनट बाद वे चमकदार "जलती हुई" हल्के हरे रंग और फिर नारंगी-लाल रोशनी के साथ दिखाई देते हैं।

7.7.4. जैविक नमूना विधि

उदाहरण के लिए, प्रति जानवर (गिनी सूअर, चूहे) एस्केरिड अंडे (सुअर राउंडवॉर्म, मानव राउंडवॉर्म, टोक्सोकारा, टोक्सास्कारिस, आदि) की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए आपको विकसित लार्वा के साथ कम से कम 100 - 300 अंडे की आवश्यकता होती है। आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल में एस्केरिस अंडे को चूहे या गिनी पिग के मुंह के माध्यम से पिपेट किया जाता है। 6-7 दिनों के बाद, जानवर का वध कर दिया जाता है, उसके जिगर और फेफड़ों को खोला जाता है और एस्केरिडेट लार्वा की उपस्थिति के लिए अलग से जांच की जाती है। ऐसा करने के लिए, लीवर और फेफड़ों को कैंची से छोटे टुकड़ों में काट दिया जाता है और बर्मन या सुप्रियागा विधि (धारा 6.1.2) का उपयोग करके जांच की जाती है।

यदि जानवर जीवित आक्रामक अंडों से संक्रमित थे, तो शव परीक्षण पर, यकृत और फेफड़ों में प्रवासी एस्केराइड लार्वा पाए जाते हैं।

संक्रमण के मामले में, प्रयोगशाला जानवरों के मल में फासिओला अंडे 2 महीने के बाद खरगोशों में पाए जा सकते हैं। गिनी सूअर- 50 दिनों के बाद, चूहों में - 35-40 दिनों के बाद।

अधिक शीघ्रता से उत्तर प्राप्त करने के लिए, 20-30 दिनों के बाद प्रयोगशाला जानवरों को खोला जाता है और युवा फैसीओली की उपस्थिति के लिए यकृत की जांच की जाती है।

बौने टेपवर्म अंडों की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए, उन्हें पहले से असंक्रमित सफेद चूहों को खिलाने की भी सिफारिश की जाती है, इसके बाद 92-96 घंटों के बाद जानवरों को खोला जाता है और आंतों के विल्ली या आंतों के लुमेन में सेस्टोड में सिस्टिकेरोइड्स की पहचान की जाती है।

ओपिसथोर्चिस अंडों की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए, एक विधि की सिफारिश की जाती है (जर्मन एस.एम., बेयर एस.ए., 1984), जो मिरासिडियम हैचिंग ग्रंथि के भौतिक रासायनिक सक्रियण और उत्तेजना पर आधारित है। मोटर गतिविधिलार्वा, जो प्रयोगात्मक स्थितियों के तहत अंडे की टोपी के खुलने और मिरासिडियम की सक्रिय रिहाई की ओर जाता है।

पानी में ओपिसथोर्चिस अंडे के निलंबन को 10 - 12 डिग्री सेल्सियस तक पहले से ठंडा किया जाता है (बाद के सभी ऑपरेशन कमरे के तापमान 19 - 20 डिग्री सेल्सियस पर किए जाते हैं)। 100 - 150 अंडों वाले सस्पेंशन की 1 बूंद को सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में डाला जाता है। टेस्ट ट्यूब को 5-10 मिनट के लिए स्टैंड में रखा जाता है। इस दौरान सभी अंडे नीचे डूबने में कामयाब हो जाते हैं। फिर अतिरिक्त पानी को फिल्टर पेपर की एक पट्टी से सावधानीपूर्वक खींच लिया जाता है और एक विशेष माध्यम की 2 बूंदें टेस्ट ट्यूब में डाली जाती हैं। माध्यम 0.005 एम ट्रिस-एचसीएल बफर में तैयार किया जाता है; बफर में 12 - 13% इथेनॉल घोल और एक डाई (फुचिन, सफ्रानिन, ईओसिन, मेथिलीन ब्लू, आदि) मिलाया जाता है। टेस्ट ट्यूब को हिलाया जाता है, इसकी सामग्री को कांच की स्लाइड पर पाइप से डाला जाता है और थोड़ा हिलाते हुए 10 मिनट के लिए छोड़ दिया जाता है। फिर निर्दिष्ट माध्यम की 2 बूंदें डालें। 20x आवर्धन पर एक पारंपरिक प्रकाश माइक्रोस्कोप के तहत माइक्रोस्कोपी के लिए तैयारी तैयार है।

इस समय के दौरान, व्यवहार्य लार्वा का ढक्कन खुल जाता है, और मिरासिडियम सक्रिय रूप से निर्दिष्ट वातावरण में बाहर निकल जाता है। इसमें इथेनॉल की उपस्थिति के कारण, उन्हें 2 - 5 मिनट के बाद स्थिर कर दिया जाता है और फिर डाई से रंग दिया जाता है। इन्हें माइक्रोस्कोपी द्वारा आसानी से पहचाना और गिना जा सकता है।