Cercetări bacteriologice la dizenterie. Diagnosticul de laborator al dizenteriei, amibiazei și balantidiazei

Dizenterie.

dizenterie - infecţie, caracterizată prin intoxicație generală a corpului, scaune moale și o leziune particulară a membranei mucoase a intestinului gros. Este una dintre cele mai frecvente boli intestinale acute din lume. Boala este cunoscută din cele mai vechi timpuri sub numele de „diaree cu sânge”, dar natura ei s-a dovedit a fi diferită. În 1875 Omul de știință rus Lesh a izolat o amibă de la un pacient cu diaree sângeroasă Entamoeba histolytica,în următorii 15 ani s-a stabilit independența acestei boli, care a păstrat denumirea de amebiază. Agenții cauzali ai dizenteriei propriu-zise sunt un grup mare de bacterii similare din punct de vedere biologic unite în gen Shigelta. Agentul patogen a fost descoperit pentru prima dată în 1888. A. Chantemes și Vidal; în 1891 a fost descris de A.V. Grigoriev, iar în 1898. K. Shiga, folosind serul obținut de la pacient, a identificat agentul patogen la 34 de pacienți cu dizenterie, dovedind în final rolul etiologic al acestei bacterii. Cu toate acestea, în anii următori, au fost descoperiți și alți agenți patogeni ai dizenteriei: în 1900. - S. Flexner, în 1915. - K. Sonne, în 1917. - K. Stutzer și K. Schmitz, în 1932. - J. Boyd, în 1934 - D. Mare, în 1943 - A. Saks.

În prezent genul Shigella include mai mult de 40 de serotipuri. Toate acestea sunt baghete gram-negative scurte imobile, care nu formează spori și capsule, care (cresc bine pe obișnuit medii nutritive, nu crește pe un mediu cu citrat ca unică sursă de carbon; nu formează H2S, nu au urază; reacția Voges-Proskauer este negativă; glucoza și alți carbohidrați sunt fermentați pentru a forma acid fără gaz (cu excepția unor biotipuri Shigella flexneri: S.manchesterși ewcastle); de regulă, nu fermentați lactoza (cu excepția Shigella Sonne), adonitul, inozitolul, nu lichefiază gelatina, de obicei formează catalază, nu au lizin decarboxilază și fenilalanin deaminază. Conținutul de G+C în ADN este de 49-53% mol%. Shigella sunt anaerobi facultativi, temperatura optimă pentru creștere este de 37 ° C, nu cresc peste 45 ° C, pH-ul optim al mediului este de 6,7-7,2. Coloniile pe medii dense sunt rotunde, convexe, translucide; în cazul asocierii, se formează colonii aspre în formă de R. Creșterea pe BCH sub formă de turbiditate uniformă, formele aspre formează un precipitat. Culturile proaspăt izolate de Shigella Sonne J4HO formează colonii de două tipuri: mici rotunde convexe (faza I), plate mari (Faza 2). Natura coloniei depinde de prezența (faza I) sau absența (faza II) a plasmidei cu mm 120 MD, ceea ce determină și virulența Shigella Sonne.

La Shigella s-au găsit antigeni O cu specificitate diferită: comune pentru familie enterobacteriacee, generice, specii, grupe și tip specifice, precum și antigene K; Nu au antigene H.

Clasificarea ia în considerare doar antigenele O-specifice de grup și tip. Conform acestor caracteristici, Shigella subdivizat în 4 subgrupe sau 4 specii și include 44 de serotipuri. În subgrupa A (specii Shigella dysenteriae) Sunt incluse Shigella care nu fermentează manitol. Specia include 12 serotipuri (1-12). Fiecare stereotip are propriul său antigen de tip specific; relațiile antigenice dintre serotipuri, precum și cu alte tipuri de shigella, sunt slab exprimate. La subgrupa B (tip Shigella flexneri) includ shigella, de obicei manitol care fermentează. Shigella acestei specii sunt înrudite serologic între ele: conțin antigene specifice tipului (I-VI), conform cărora sunt împărțite în serotipuri (1-6) și antigene de grup, care se găsesc în compoziții diferite în fiecare serotip. şi conform cărora serotipurile sunt împărţite în subserotipuri. În plus, această specie include două variante antigenice - X și Y, care nu au antigene tipice, ele diferă în seturi de antigene de grup. Serotip S.flexneri 6 nu are subserotipuri, dar este împărțit în 3 tipuri biochimice în funcție de caracteristicile fermentației glucozei, manitolului și dulcitului.

La subgrupa C (tip Shlgella boydll) includ shigella, de obicei manitol care fermentează. Membrii grupului sunt diferiți serologic unul de celălalt. Relațiile antigenice din cadrul speciei sunt slab exprimate. Specia include 18 serotipuri (1-18), fiecare dintre ele având propriul său antigen de tip principal.

În subgrupa D (specii Shlgella sonnel a inclus Shigella, de obicei care fermentează manitolul și capabilă să fermenteze lent (după 24 de ore de incubație și mai târziu) lactoza și zaharoza. Vedere S. sonnei include un serotip, totuși, coloniile de faze I și II au propriile lor antigene specifice tipului. Au fost propuse două metode pentru clasificarea intraspecifică a Shigella lui Sonne:

1) împărțirea lor în 14 tipuri și subtipuri biochimice în funcție de capacitatea lor de a fermenta maltoză, ramnoză și xiloză;

2) împărțirea în tipuri de fagi în funcție de sensibilitatea la un set de fagi corespunzători.

Aceste metode de tipizare au în principal semnificație epidemiologică. În plus, shigella Sonne și shigella Flexner sunt supuse tipării în același scop prin capacitatea de a sintetiza colicine specifice (colicinogenotyping) și prin sensibilitatea la colicine cunoscute (colicinotyping). Pentru a determina tipul de colicine produse de Shigella, J. Abbott și R. Shannon au propus seturi de tulpini tipice și indicator de Shigella și pentru a determina sensibilitatea Shigella la tipuri cunoscute colicine folosesc un set de tulpini colicinogene de referinţă P. Frederick.

rezistenţă. Shigella are o rezistență destul de mare la factorii de mediu. Aceștia supraviețuiesc pe țesături de bumbac și hârtie până la 30-36 de zile, în fecale uscate - până la 4-5 luni, în sol - până la 3-4 luni, în apă - de la 0,5 până la 3 luni, pe fructe și legume - până la la 2 unități, în lapte și produse lactate - până la câteva săptămâni; la 60 °C mor în 15-20 de minute.

Sensibil la soluții de cloramină, clor activ și alți dezinfectanți.

factori de patogenitate. Cel mai important proprietate biologică Shigella, care determină patogenitatea lor - capacitatea de a invada celulele epiteliale, de a se înmulți în ele și de a le provoca moartea. Acest efect poate fi detectat utilizând un test keratoconjunctival (introducerea unei bucle de cultură Shigella (2-3 miliarde de bacterii) sub pleoapa inferioară a cobaiului determină dezvoltarea keratoconjunctivitei seros-purulente), precum și prin infecția celulelor. culturi (efect citotoxic) sau embrioni de pui (moartea lor) sau șoareci albi intranazal (dezvoltarea pneumoniei). Principalii factori de patogenitate ai Shigella pot fi împărțiți în trei grupuri:

1) factori care determină interacțiunea cu epiteliul mucoasei;

2) factori care asigură rezistență la mecanismele umorale și celulare de apărare ale macroorganismului și capacitatea Shigella de a se multiplica în celulele sale;

3) capacitatea de a produce toxine și produse toxice care determină desfășurarea procesului patologic propriu-zis.

Primul grup include factori de adeziune și colonizare: rolul lor este jucat de pili, proteinele membranei exterioare și LPS. Adeziunea si colonizarea sunt facilitate de enzimele care distrug mucusul - neuraminidaza, hialuronidaza, mucinaza. Al doilea grup include factori de invazie care favorizează pătrunderea Shigella în enterocite și reproducerea lor în ele și în macrofage cu manifestarea simultană a unui efect citotoxic și (sau) enterotoxic. Aceste proprietăți sunt controlate de genele plasmidei cu m.m. 140 MD (codifică sinteza proteinelor membranei exterioare care provoacă invazia) și genele cromozomiale Shigella: ksr A (provoacă keratoconjunctivită), cyt (responsabilă de distrugerea celulelor), precum și alte gene care nu au fost încă identificate. Protecția Shigella de fagocitoză este asigurată de antigenul K de suprafață, antigenele 3, 4 și lipopolizaharide. În plus, Shigella endotoxina lipida A are un efect imunosupresor - suprimă activitatea celulelor de memorie imună.

Al treilea grup de factori de patogenitate include endotoxina și două tipuri de exotoxine găsite în Shigella - exotoxine Shiga și exotoxine asemănătoare Shiga (SLT-I și SLT-II), ale căror proprietăți citotoxice sunt cele mai pronunțate în S.dysenteriae 1. Toxine de tip Shiga și Shiga se găsesc și în alte serotipuri S.dysenteriae, sunt de asemenea formate S.flexneri, S.sonnei, S.boydii, ETEC și niște salmonele. Sinteza acestor toxine este controlată de genele toxice ale fagilor convertitori. Enterotoxine de tip LT au fost găsite la Flexner, Sonne și Boyd Shigella. Sinteza LT în ele este controlată de gene plasmide. Enterotoxina stimulează activitatea adenilat-ciclazei și este responsabilă pentru dezvoltarea diareei. Toxina Shiga, sau neurotoxina, nu reacționează cu sistemul de adenil-ciclază, dar are un efect citotoxic direct. Shiga și toxinele asemănătoare Shiga (SLT-I și SLT-II) au m.m. -70 kD și constau din subunități A și B (ultima dintre cele 5 subunități mici identice). Receptorul pentru toxine este glicolipidul membranei celulare.

Virulența Shigella Sonne depinde și de plasmida cu m.m. 120 MD. Controlează sinteza a aproximativ 40 de polipeptide ale membranei exterioare, dintre care șapte sunt asociate cu virulență. Shigella Sonne cu această plasmidă formează colonii de fază I și sunt virulente. Culturile care au pierdut plasmida formează colonii de fază II și sunt lipsite de virulență. Plasmide cu m.m. 120-140 MD au fost găsite la Flexner și Boyd Shigella. Lipopolizaharida Shigella este o endotoxină puternică.

Caracteristicile epidemiologiei. Singura sursă de infecție sunt oamenii. Niciun animal din natură nu suferă de dizenterie. În condiții experimentale, dizenteria poate fi reprodusă numai la maimuțe. Metoda de infectare este fecal-oral. Modalitati de transmitere - apa (predominanta pentru Shigella Flexner), hrana, cu rol deosebit de important revine laptelui si produselor lactate (calea predominanta de infectie pentru Shigella Sonne), si contact-gospodar, in special pentru specie. S. dysenteriae.

O caracteristică a epidemiologiei dizenteriei este modificarea compoziției speciilor a agenților patogeni, precum și a biotipurilor Sonne și a serotipurilor Flexner în anumite regiuni. De exemplu, până la sfârșitul anilor 30 ai secolului XX, cota S.dysenteriae 1 a reprezentat până la 30-40% din toate cazurile de dizenterie, iar apoi acest serotip a început să apară din ce în ce mai puțin și aproape a dispărut. Cu toate acestea, în anii 1960 și 1980 S.dysenteriae a reapărut pe arena istorică și a provocat o serie de epidemii care au dus la formarea a trei focare hiperendemice ale acesteia - în America Centrală, Africa Centrală și Asia de Sud (India, Pakistan, Bangladesh și alte țări). Motivele modificării compoziției speciilor agenților patogeni de dizenterie sunt probabil asociate cu o schimbare imunitate de turmăși cu o modificare a proprietăților bacteriilor de dizenterie. În special, întoarcerea S.dysenteriae 1 iar distribuția sa largă, care a provocat formarea de focare hiperendemice de dizenterie, este asociată cu achiziționarea de plasmide de către aceasta, ceea ce a provocat rezistență la mai multe medicamente și virulență crescută.

Caracteristicile patogenezei și clinicii. Perioada de incubație pentru dizenterie este de 2-5 zile, uneori mai puțin de o zi. Formare focus infectiosîn membrana mucoasă a părții descendente a intestinului gros (sigmoid și rect), unde pătrunde agentul cauzal al dizenteriei, este ciclică: aderența, colonizarea, introducerea shigella în citoplasma enterocitelor, reproducerea lor intracelulară, distrugerea și respingerea. a celulelor epiteliale, eliberarea agenților patogeni în lumenul intestinal; după aceasta începe următorul ciclu - aderență, colonizare etc. Intensitatea ciclurilor depinde de concentrația agenților patogeni din stratul parietal al membranei mucoase. Ca urmare a ciclurilor repetate, focarul inflamator crește, ulcerele rezultate, conectându-se, cresc expunerea peretele intestinal, în urma cărora în scaun apar sânge, bulgări mucopurulenți, leucocite polimorfonucleare. Citotoxinele (SLT-I și SLT-II) provoacă distrugerea celulelor, enterotoxina - diaree, endotoxine - intoxicație generală. Clinica de dizenterie este determinată în mare măsură de ce tip de exotoxine este produs într-o măsură mai mare de agentul patogen, de gradul efectului său alergen și starea imunitară organism. Cu toate acestea, multe întrebări cu privire la patogeneza dizenteriei rămân neexplicate, în special: caracteristicile cursului dizenteriei la copiii primilor doi ani de viață, motivele tranziției dizenteriei acute la cronice, semnificația sensibilizării, mecanismul. a imunității locale a mucoasei intestinale etc.Cele mai tipice manifestari clinice dizenteria servește ca diaree, impulsuri frecvente- în cazuri severe, de până la 50 sau mai multe ori pe zi, tenesmus (spasme dureroase ale rectului) și intoxicație generală. Natura scaunului este determinată de gradul de deteriorare a intestinului gros. Cea mai severă dizenterie este cauzată de S.dysenteriae 1, cel mai ușor - dizenteria lui Sonne.

Imunitatea post-infecțioasă. După cum au arătat observațiile asupra maimuțelor, după ce au suferit dizenterie, rămâne o imunitate puternică și destul de lungă. Este cauzată de anticorpi antimicrobieni, antitoxine, activitate crescută a macrofagelor și limfocitelor T. Joacă un rol semnificativ imunitatea locală mucoasa intestinală mediată de IgAs. Cu toate acestea, imunitatea este specifică tipului în natură, nu are loc o imunitate încrucișată puternică.

Diagnosticul de laborator . Metoda principală este bacteriologică. Materialul pentru studiu este fecalele. Schema de izolare a agentilor patogeni: inoculare pe mediile de diagnostic diferential Endo si Ploskirev (in paralel pe mediul de imbogatire, urmata de inoculare pe mediile Endo si Ploskirev) pentru izolarea coloniilor izolate, obtinand cultură pură, studiul proprietăților sale biochimice și, ținând cont de acestea din urmă, identificarea folosind seruri aglutinante de diagnostic polivalente și monovalente. Se produc următoarele seruri comerciale:

1. La Shigella care nu fermentează manitolul: la S.dysenteriae 1 la 2 S.dysenteriae 3-7(polivalent și monovalent), la S.dysenteriae 8-12(polivalent și monovalent).

2. Pentru manitol care fermenta shigella:

la antigeni tipici S. flexneri I, II, III, IV, V, VI,

pentru a grupa antigenele S.flexneri 3, 4, 6,7,8- polivalent,

la antigeni S.boydii 1-18(polivalent și monovalent),

la antigeni S. sonnei faza I, faza a II-a,

la antigeni S.flexneri I-VI+ S.sonnei- polivalent.

Pentru a detecta antigenele din sânge (inclusiv ca parte a CEC), pot fi utilizate urina și fecalele următoarele metode: RPHA, RSK, reacție de coaglutinare (în urină și fecale), IFM, RPHA (în serul sanguin). Aceste metode sunt extrem de eficiente, specifice și potrivite pentru diagnosticul precoce.

Pentru diagnosticul serologic se pot folosi: RPHA cu corespunzatoare diagnosticul eritrocitar, metoda imunofluorescentă (în modificare indirectă), metoda Coombs (determinarea titrului de anticorpi incompleti). Valoarea diagnostica are si un test alergic cu dizenterie (o solutie de fractii proteice de Shigella Flexner si Sonne). Reacția se ia în considerare după 24 de ore.Se consideră pozitivă în prezența hiperemiei și a infiltrațiilor cu diametrul de 10-20 mm.

Tratament. Accentul este pe restabilirea normalului metabolismul apă-sare, alimentație rațională, detoxifiere, antibioticoterapie rațională (ținând cont de sensibilitatea agentului patogen la antibiotice). efect bun oferă utilizarea timpurie a unui bacteriofag dizenter polivalent, în special tablete cu un înveliș de pectină, care protejează fagul de acțiunea HCl gastric; în intestinul subtire pectina se dizolvă, fagii sunt eliberați și își arată acțiunea. În scopuri profilactice, fagul trebuie administrat cel puțin o dată la trei zile (perioada de supraviețuire a acestuia în intestin).

Problema prevenirii specifice. Pentru a crea imunitatea artificială S-au folosit diverse vaccinuri împotriva dizenteriei: de la bacterii ucise, chimice, alcool, dar toate s-au dovedit a fi ineficiente și au fost întrerupte. Vaccinurile împotriva dizenteriei Flexner au fost create din Shigella Flexner viu (mutant, dependent de streptomicina); vaccinuri ribozomale, dar nici nu au găsit aplicare largă. Prin urmare, problema prevenirii specifice a dizenteriei rămâne nerezolvată. Principala modalitate de combatere a dizenteriei este îmbunătățirea sistemului de alimentare cu apă și canalizare, asigurarea unor regimuri sanitare și igienice stricte în întreprinderile alimentare, în special în industria lactatelor, în instituțiile de îngrijire a copiilor, locurile publice și în igiena personală.

Microbiologia holerei

OMS definește holera ca fiind o boală caracterizată prin diaree acută, severă, deshidratantă cu apă de orez, rezultată din infecția cu Vibrio cholerae. Datorită faptului că se caracterizează printr-o capacitate pronunțată de răspândire largă a epidemiei, curs severși mortalitate ridicată, holera este una dintre cele mai periculoase infecții.

Patria istorică a holerei este India, mai exact, delta râurilor Gange și Brahmaputra (acum India de Est și Bangladesh), unde există din timpuri imemoriale (epidemiile de holeră în această zonă au fost observate încă din 500 ani î.Hr). Existența îndelungată a focarului endemic al holerei aici este explicată din mai multe motive. Vibrio cholerae nu poate rămâne numai în apă mult timp, ci și se poate multiplica în ea în condiții favorabile - temperaturi peste +12 ° C, prezența substanțelor organice. Toate aceste condiții sunt prezente în India - un climat tropical (temperatura medie anuală de la +25 până la +29 °С), abundență de precipitații și mlaștină, densitate mare populația, în special în Delta Gangelui, un numar mare de materie organică din apă, poluare continuă a apei pe tot parcursul anului canalizareși fecale, nivel material scăzut de trai și rituri religioase și religioase deosebite ale populației.

Agentul cauzal al holerei Vibrio cholerae a fost deschis în 1883. în timpul celei de-a cincea pandemii de către R. Koch, totuși, pentru prima dată, vibrionul în fecalele pacienților cu diaree a fost descoperit încă din 1854. F. Patsini.

V. holerae aparține familiei vibrionaceae, care include mai multe genuri (Vibrio, Aeromonas, Plesiomonas, Photobacterium). Gen Vibrio din 1985 peste 25 de specii, dintre care cea mai mare valoare pentru o persoană are V.cholerae, V.parahaemolyticus, V.alginolyticus, dnificusși V.fluvialis.

Caracteristicile cheie ale genului Vibrio : scurte, care nu formează spori și capsule, baghete gram-negative curbate sau drepte, de 0,5 µm în diametru, 1,5-3,0 µm lungime, mobile ( V. holerae- monotric, la unele specii doi sau mai mulți flageli polari); cresc bine și rapid pe medii obișnuite, chemoorganotrofe, fermentează carbohidrații cu formare de acid fără gaz (glucoza este fermentată de-a lungul căii Embden-Meyerhof). Oxidaza-pozitiv, formează indol, reduc nitrații la nitriți (V.cholerae dă o reacție pozitivă nitrozo-indol), descompun gelatina, adesea dau o reacție Voges-Proskauer pozitivă (adică formează acetilmetilcarbinol), nu au ureaze, nu formează H S. au lizină și ornitin decarboxilaze, dar nu au arginină dihidrolaze.

Vibrio cholerae este foarte nepretențios față de mediile nutritive. Se înmulțește bine și rapid pe apă peptonă (PV) 1% alcalină (pH 8,6-9,0) care conține 0,5-1,0% NaCl, depășind creșterea altor bacterii. Pentru a suprima creșterea Proteus, se recomandă adăugarea de telurit de potasiu 4 până la 1% (PV) (diluție finală 1:100.000). 1% PV este cel mai bun mediu de îmbogățire pentru V. cholerae. În timpul creșterii, după 6-8 ore, formează o peliculă delicată cenușie liberă pe suprafața HP, care, atunci când este agitată, este ușor distrusă și cade la fund sub formă de fulgi, HP devine moderat tulbure. Pentru izolarea Vibrio cholerae au fost propuse diverse medii selective: agar alcalin, agar-sare galbenus, albuminat alcalin, agar alcalin cu sange, lactoza-zaharoza si alte medii. Cel mai bun mediu este TCBS (agar tiosulfat citrat-bromotimol zaharoză) și modificările acestuia. Cu toate acestea, cel mai des este utilizat MPA alcalin, pe care Vibrio cholerae formează colonii netede, vitros-transparente cu o nuanță albăstruie, în formă de disc, de consistență vâscoasă.

La semănat cu o injecție într-o coloană de gelatină, după 2 zile la 22-23 ° C, vibrionul provoacă lichefierea de la suprafață sub formă de bule, apoi în formă de pâlnie și, în final, strat cu strat.

În lapte, vibrionul se înmulțește rapid, determinând coagularea după 24-48 de ore, apoi are loc peptonizarea laptelui, iar după 3-4 zile vibrionul moare din cauza deplasării pH-ului laptelui pe partea acidă.

B. Heiberg, în funcție de capacitatea de a fermenta manoza, zaharoza și arabinoza, a distribuit toate vibrionii (holera și asemănător holerei) într-un număr de grupuri, al căror număr este acum 8. Vibrio cholerae aparține primului grup Heiberg.

Vibrionii, asemănători ca caracteristici morfologice, culturale și biochimice holerei, au fost denumiți și se numesc diferit: paracholera, asemănător holerei, vibrioni NAG (vibrioni neaglutinanți); vibrioni care nu aparțin grupului 01. Ultimul nume subliniază cel mai precis relația lor cu vibrionul holeric. După cum a fost stabilit de A. Gardner și K. Venkatraman, holera și vibrionii asemănători holerei au un antigen H comun, dar diferă în antigenele O. Conform antigenului O, holera și vibrionii asemănători holerei sunt în prezent împărțiți în 139 de serogrupuri O, dar numărul lor este completat în mod constant. Vibrio cholerae aparține grupului 01. Are un antigen A comun și două antigene specifice tipului - B și C, conform cărora se disting trei serotipuri V. holerae- serotipul Ogawa (AB), serotipul Inaba (AC) și serotipul Gikoshima (ABC). Vibrio cholerae în stadiul de disociere are un antigen OR. Din acest motiv, pentru a identifica V. holerae Se utilizează ser O, ser OR și seruri Inaba și Ogawa specifice tipului.

factori de patogenitate V. holerae :

1. Mobilitate.

2. Chemotaxie. Cu ajutorul acestor proprietăți, vibrionul depășește stratul mucos și interacționează cu celulele epiteliale. În mutanții Che" (care și-au pierdut capacitatea de a face chimiotaxie), virulența scade brusc. Virulența în mutanții Mot" (care și-au pierdut mobilitatea) fie dispare complet, fie scade de 100-1000 de ori.

3. Factori de aderență și colonizare, cu ajutorul cărora vibrionul aderă la microvilozități și colonizează membrana mucoasă a intestinului subțire.

4. Enzime: mucinaza, proteaze, neuraminidaza, lecitinaza etc.

Ele favorizează aderența și colonizarea, deoarece distrug substanțele care alcătuiesc mucusul. Neuraminidaza, despărțind acidul sialic de glicoproteinele epiteliale, creează o platformă de „aterizare” pentru vibrioni. În plus, crește numărul de receptori de colerogen prin modificarea tri- și disialogangliozidelor la monosialogangliozide Gm b care servește ca receptor de colerogen.

5. Principalul factor de patogenitate V. holerae este un exotoxină-colerogen, care determină patogeneza holerei. Molecula de colerogen are m.m. 84 kD și este format din două fragmente - A și B. Fragmentul A este format din două peptide - A1 și A2 - și are proprietatea specifică a toxinei holerice. Fragmentul B este format din 5 subunități identice și îndeplinește două funcții: 1) recunoaște receptorul (monosialogangliozid) al enterocitului și se leagă de acesta;

2) formează un canal hidrofob intramembranar pentru trecerea subunității A. Peptida A 2 Sl servește la legarea fragmentelor A și B. Peptida A t își îndeplinește propria funcție toxică. Interacționează cu NAD, provoacă hidroliza acestuia, ADP-riboza rezultată se leagă de subunitatea de reglare a adenilat-ciclazei. Acest lucru duce la inhibarea hidrolizei GTP. Complexul rezultat GTP + adenilat ciclază determină hidroliza ATP cu formarea cAMP. (O altă modalitate de acumulare a AMPc este suprimarea de către colerogen a enzimei care hidrolizează AMPc la 5-AMP).

6. Pe langa colerogen, Vibrio cholerae sintetizeaza si secreta un factor care creste permeabilitatea capilara.

7. În V. cholerae s-au găsit și alte exotoxine, în special tipurile LT, ST și SLT.

8. Endotoxina. Lipopolizaharidă V. holerae are o puternică proprietate endotoxică. El este responsabil pentru intoxicația generală a corpului și vărsături. Anticorpii formați împotriva endotoxinei au un efect vibriocid pronunțat (dizolvă vibrionii în prezența complementului) și sunt o componentă importantă a imunității post-infecție și post-vaccinare.

Capacitatea vibrioanelor care nu aparțin grupului 01 de a provoca boli diareice sporadice sau de grup la oameni este asociată cu prezența enterotoxinelor de tip LT sau ST, care stimulează fie sistemele adenilat- sau, respectiv, guanilat ciclază.

Sinteza colerogenului - cea mai importantă proprietate V. holerae. Genele care controlează sinteza fragmentelor A și B de colerogen sunt combinate în operonul vctAB sau ctxB; ele sunt localizate pe cromozomul vibrio. Unele tulpini de Vibrio cholerae au doi astfel de operoni non-tandem. Funcția operonului este controlată de două gene reglatoare. Gena toxR oferă un control pozitiv; mutațiile acestei gene duc la o scădere de 1000 de ori a producției de toxine. Gena htx este un control negativ; mutațiile acestei gene cresc producția de toxine de 3-7 ori.

Următoarele metode pot fi utilizate pentru a detecta colerogenul:

1. Teste biologice pe iepuri. Odată cu administrarea intra-intestinală de vibrioni de holeră la iepuri de lapte (cu vârsta de cel mult 2 săptămâni), aceștia dezvoltă un sindrom colerogen tipic: diaree, deshidratare și moartea iepurilor. La autopsie - o injecție ascuțită a vaselor stomacului și subțire
intestine, uneori se acumulează un lichid limpede în el. Dar modificările la nivelul intestinului gros sunt deosebit de caracteristice - este mărit și plin de un lichid complet transparent, de culoarea paiului, cu fulgi și bule de gaz. Când V. cholerae este injectat în zona ligată a intestinului subțire la iepurii adulți, se observă aceleași modificări în intestinul gros ca și în cazul infecției iepurilor de alăptare.

2. Detectarea directă a colerogenului folosind metode imunofluorescente sau imunologice enzimatice sau reacție de hemoliză imună pasivă (colerogenul se leagă de Gm1 al eritrocitelor și sunt lizate atunci când se adaugă anticorpi antitoxici și complement).

3. Stimularea adenilat-ciclazei celulare în culturi celulare.

4. Utilizarea unui fragment de cromozom ca sondă ADN V. cholerae, operoncolerogen purtător.

În timpul celei de-a șaptea pandemii, tulpinile au fost izolate V. holerae Cu grade diferite virulență: colerogen (virulent), ușor colerogen (virulență scăzută) și non-colerogen (non-virulent). Non-colerogen V. cholerae, de regulă, au activitate hemolitică, nu sunt lizate de fagul de diagnostic al holerei 5 (HDF-5) și nu provoacă boli umane.

Pentru tastarea fagilor V. holerae(inclusiv V.eltor) S. Mukherjee a propus seturi corespunzătoare de fagi, care au fost apoi completate în Rusia cu alți fagi. Setul de astfel de fagi (1-7) face posibilă distingerea între V. holerae 16 tipuri de fagi. HDF-3 lizează selectiv Vibrio cholerae tip clasic, HDF-4 - vibrionii El Tor și HDF-5 lizează numai vibrionii colerogeni (virulenți) de ambele tipuri și nu lizează vibrionii non-colerogeni.

Colerogenii Vibrio, de regulă, nu au activitate hemolitică, sunt lizați de HDF-5 și provoacă holera la om.

rezistența agenților patogeni ai holerei. Vibrio cholerae supraviețuiește bine la temperaturi scăzute: rămân viabile în gheață până la 1 lună; în apă de mare - până la 47 de zile, în apă de râu - de la 3-5 zile până la câteva săptămâni, în fiert apă minerală persistă mai mult de 1 an, în sol - de la 8 zile la 3 luni, în fecale proaspete - până la 3 zile, pe alimente fierte (orez, tăiței, carne, cereale etc.) supraviețuiesc 2-5 zile, pe crude. legume - 2- 4 zile, pe fructe - 1-2 zile, în lapte și produse lactate - 5 zile; atunci când sunt depozitate la rece, perioada de supraviețuire crește cu 1-3 zile: pe lenjeria contaminată cu fecale, durează până la 2 zile, iar pe materialul umed - o săptămână. Vibrio cholerae la 80 ° C moare după 5 minute, la 100 ° C - instantaneu; foarte sensibil la acizi; sub influența cloraminei și a altor dezinfectanți mor în 5-15 minute. Sunt sensibili la uscare și la acțiunea directă. razele de soare, dar se păstrează bine și mult timp și chiar se înmulțesc în rezervoare deschise și în ape uzate bogate în substanțe organice, având un pH alcalin și o temperatură peste 10-12 ° C. Foarte sensibil la clor: o doză de clor activ de 0,3-0,4 mg/l de apă în 30 de minute determină o dezinfecție sigură de vibrionul holeric.

Caracteristicile epidemiologiei. Principala sursă de infecție este doar o persoană - un pacient cu holeră sau un purtător de vibrion, precum și apa contaminată de acestea. Niciun animal din natură nu se îmbolnăvește de holeră. Metoda de infectare este fecal-oral. Modalitati de infectare: a) principala - prin apa folosita pentru baut, baie si nevoi menajere; b) contact-gospodărie şi c) prin alimentaţie. Toate epidemiile și pandemiile majore de holeră au fost de natură apei. Vibrio cholerae are astfel de mecanisme adaptative care asigură existența populațiilor lor atât în corpul uman, cât și în anumite ecosisteme ale corpurilor de apă deschise. Diareea abundentă cauzată de Vibrio cholerae duce la curățarea intestinală a bacteriilor concurente și contribuie la răspândirea pe scară largă a agentului patogen în mediul înconjurător, în primul rând în canalizare și în ape deschise, unde sunt aruncate. O persoană cu holeră elimină agentul patogen în număr mare- de la 100 milioane la 1 miliard la 1 ml de fecale, purtătorul de vibrioni eliberează 100-100.000 de vibrioni la 1 ml, doza infectantă este de aproximativ 1 milion de vibrioni. Durata izolării Vibrio cholerae la purtătorii sănătoși este de la 7 la 42 de zile, iar la cei bolnavi de 7-10 zile. O eliberare mai lungă este extrem de rară.

O caracteristică a holerei este că după aceasta, de regulă, nu există transport pe termen lung și nu se formează focare endemice persistente. Cu toate acestea, așa cum sa menționat deja mai sus, din cauza poluării corpurilor de apă deschise cu ape uzate care conțin cantități mari de materie organică, detergenti si sare de masă, vara, vibrionul holeric din ele nu numai că supraviețuiește mult timp, ci chiar se înmulțește.

De o mare semnificație epidemiologică este faptul că vibrio cholerae din grupa 01, atât netoxigen, cât și toxigen, poate persista mult timp în diverse ecosistemelor acvatice sub formă de forme necultivate. Cu ajutorul unei reacții în lanț a polimerazei cu studii bacteriologice negative într-un număr de teritorii endemice ale CSI în diferite corpuri de apă, au fost găsite gene veterinare de forme necultivate. V. holerae.

În cazul bolilor de holeră, se realizează un complex de măsuri antiepidemice, printre care activează liderul și decisiv. detectarea la timpși izolarea (interne, tratament) a pacienților în stare acută și formă atipicăși purtători de vibrio sănătoși; se iau măsuri pentru prevenirea posibilelor modalități de răspândire a infecției; o atenție deosebită se acordă alimentării cu apă (clorinare bând apă), respectarea regimului sanitar și igienic la întreprinderile alimentare, în instituțiile pentru copii, locurile publice; se efectuează control strict, inclusiv control bacteriologic, asupra corpurilor de apă deschise, se efectuează imunizarea populației etc.

Caracteristicile patogenezei și clinicii. Perioada de incubație pentru holeră variază de la ore anti-alunecare la 6 zile, cel mai adesea 2-3 zile. Odată ajuns în lumenul intestinului subțire, Vibrio cholerae datorită mobilității și chemotaxiei la nivelul mucoasei sunt trimise în mucus. Pentru a-l patrunde, vibrionii produc o serie de enzime: neuraminidaza, mucinaza, proteazele, lecitinaza, unele distrug substantele continute de mucus si faciliteaza deplasarea vibriorilor catre celulele epiteliale. Prin aderență, vibrionii sunt atașați de glicocalixul epiteliului și, pierzându-și mobilitatea, încep să se înmulțească intens, colonizând microvilozitățile intestinului subțire și, în același timp, produc o cantitate mare de exotoxină-colerogen. Moleculele de colerogen se leagă de monosialogangliozida Gm1 și pătrund în membrana celulară, activează sistemul de adenil-ciclază, iar acumularea de cAMP provoacă hipersecreția de lichid, cationi și anioni Na + , HCO 3 ~, K + , SG din enterocite, ceea ce duce la diaree holeră, organism de deshidratare și desalinizare. Există trei tipuri de evoluție a bolii:

1. boală diareică deshidratantă violentă, severă, care duce la moartea pacientului în câteva ore;

2. mai puțin severă, sau diaree fără deshidratare;

3. cursul asimptomatic al bolii (purtător de vibrio).

În holera severă, pacienții dezvoltă diaree, scaunele devin mai frecvente, scaunele devin din ce în ce mai abundente, capătă un caracter apos, își pierd mirosul fecal și arată ca apa de orez (lichid tulbure cu reziduuri de mucus care plutesc în el și celule epiteliale). Apoi vărsăturile debilitante se unesc, mai întâi cu conținutul intestinului, iar apoi vărsăturile ia forma apei de orez. Temperatura pacientului scade sub normal, pielea devine cianotică, încrețită și rece - holeră algidă. Ca urmare a deshidratării, sângele se îngroașă, se dezvoltă cianoza, lipsa de oxigen, funcția rinichilor suferă puternic, apar convulsii, pacientul își pierde cunoștința și apare moartea. Mortalitatea prin holeră în timpul celei de-a șaptea pandemii a variat de la 1,5% în țările dezvoltate la 50% în țările în curs de dezvoltare.

Imunitatea post-infecțioasă bolile durabile, pe termen lung, repetate sunt rare. Imunitatea este antitoxică și antimicrobiană, datorită anticorpilor (antitoxinele persistă mai mult decât anticorpii antimicrobieni), celulelor memoriei imune și fagocitelor.

Diagnosticul de laborator. Principal și metoda decisiva Diagnosticul holerei este bacteriologic. Materialul de cercetare de la pacient este fecalele și vărsăturile; fecalele sunt examinate pentru purtător de vibrio; la persoanele care au murit de holeră, un segment legat al intestinului subțire și al vezicii biliare sunt luate pentru cercetare; Dintre obiectele mediului extern, cel mai adesea sunt examinate apa din rezervoare deschise și apele uzate.

La efectuarea unui studiu bacteriologic, trebuie respectate următoarele trei condiții:

1) cât mai curând posibil să se inoculeze materialul de la pacient (vibrionul holeric persistă în fecale Pe termen scurt);

2) vasele în care este luat materialul să nu fie dezinfectate cu substanțe chimice și să nu conțină urme ale acestora, deoarece Vibrio cholerae este foarte sensibil la acestea;

3) eliminarea posibilității de contaminare și infectare a altora.

În cazurile în care există V. holerae nu 01-grupuri, acestea trebuie tipizate folosind serurile aglutinante adecvate din alte serogrupuri. externare de la un pacient cu diaree (inclusiv asemănătoare holerei) V. holerae non-01-grup necesită aceleași măsuri antiepidemice ca și în cazul izolării V. holerae 01-grupe. Dacă este necesar, capacitatea de a sintetiza colerogen sau prezența genelor de colerogen în vibrio cholerae izolate folosind o sondă ADN este determinată prin una dintre metode.

Diagnosticul serologic al holerei este de natură auxiliară. În acest scop, poate fi utilizată o reacție de aglutinare, dar este mai bine să se determine titrul de anticorpi vibriocizi sau antitoxine (anticorpii la colerogen sunt determinați prin imunotest enzimatic sau metode de imunofluorescență).

Tratament pacienții cu holeră ar trebui să constea în primul rând în rehidratarea și restabilirea metabolismului normal apă-sare. În acest scop, se recomandă utilizarea soluțiilor saline, de exemplu, din următoarea compoziție: NaCl - 3,5; NaHC03-2,5; KS1 - 1,5 și glucoză - 20,0 g la 1 litru de apă. Un astfel de tratament fundamentat patogenetic în combinație cu terapia rațională cu antibiotice poate reduce mortalitatea în holeră la 1% sau mai puțin.

profilaxie specifică. Pentru a crea imunitate artificială, au fost propuse diferite vaccinuri, inclusiv cele din tulpini ucise de Inaba și Ogawa; toxoid colerogen pentru uz subcutanat și vaccin bivalent chimic enteral, sos

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL DZENTERII, AMEBIAZEI SI BALANTIDIAZEI

În condițiile moderne, în unele cazuri sau cu mici focare focale de boli intestinale, care apar adesea cu simptome neclare, metodele de cercetare de laborator au o importanță practică deosebită.

Cercetările efectuate în scopuri de diagnostic trebuie efectuate cu respectarea strictă a recomandărilor stabilite și cât mai devreme posibil.

Colectie scaun pentru cercetare, se pun în vase curate (vaze de noapte, paturi) care nu conțin reziduuri de dezinfectanți; materialul pentru cercetare este prelevat din mucoasa rectală cu tampoane în timpul sigmoidoscopiei.

Pentru confirmarea bacteriologică a diagnosticului, este mai bine să luați fecale de la pacienții cu dizenterie înainte de tratamentul cu antibiotice și sulfonamide și să determinați bacteriopurtător - după tratamentul cu aceste medicamente.

Semănatul pe vase Petri trebuie făcut imediat după preluarea materialului.

În primul rând, se efectuează o examinare macroscopică a fecalelor, în timp ce acestea pot detecta: reziduuri alimentare - bucăți de carne, reziduuri de grăsime, planteaza mancareși impurități patologice - mucus de consistență vâscoasă sub formă de bulgări (netransparent în dizenterie și transparent în amebiază); sânge nealterat în dizenterie şi leziune ulceroasă partea inferioară a colonului de o etiologie diferită și o culoare schimbată („jeleu de zmeură”) cu amebiază, balantidiază; puroiul este detectat în formele severe prelungite de dizenterie.

Examinarea microscopică a fecalelor este utilizată pentru a detecta elementele celulare din sânge, amibe, balantidii și chisturile acestora. Preparatul nativ se prepară după cum urmează: pe o lamă de sticlă se aplică un bulgăre de fecale și alături o picătură de soluție izotonică de clorură de sodiu, se amestecă și se acoperă cu o lamă. Pentru colorarea protozoarelor se folosește soluția Lugol.

Pentru a diferenția elementele celulare ale sângelui, preparatele sunt tratate cu colorant Romanovsky-Giemsa sau azur-eozină. În dizenterie, un preparat preparat din mucus conține multe granulocite neutrofile (peste 90% din toate elementele celulare), granulocite eozinofile unice (eozinofile) și cantitate diferită eritrocite; cu amibiaza, există puține elemente celulare, masa principală a acestora este celulele alterate cu un nucleu picnotic și o margine îngustă de protoplasmă. Găsiți granulocite eozinofile și cristale Charcot-Leiden.

Formele tisulare ale amibei (Entamoeba histolytica) într-un preparat necolorat sunt incolore, mobile (cu ajutorul pseudopodiilor), ajung la 50-60 microni în stare alungită, se găsesc adesea în endoplasmă cu eritrocite și la periferie - nucleu. Prezența eritrocitelor în celulă face posibilă distingerea Entamoeba histolutica de formele nepatogene (E. hartmani, E. coli.).

Forma translucidă a amebei este mai mică (până la 20 de microni), inactivă și nu conține eritrocite. Chisturi chiar mai mici (10-12 microni), forma rotunda, nemișcat; în stadiile incipiente de dezvoltare, conțin 2 nuclei, iar cei maturi - 4. În preparatele colorate cu soluție de Lugol, nucleii de amibe și chisturile lor sunt maro deschis (Fig. 6).

Balantidia(Balantidium coli) - ciliati mari, ajungand uneori la o lungime de 200 microni si 50-70 microni in diametru, mobili, datorita prezentei cililor, au deschideri bucale (peristom) si anus (cytopygus). În endoplasmă sunt vizibile nuclei mari (macronucleos) și mici (micronuclei), vacuole, eritrocite captate. Chisturile Balantidia sunt imobile, rotunjite, cu diametrul de 50–60 μm, au o membrană cu două contururi, în interior conțin macronuclei și vacuole (Fig. 7).

Examinarea bacteriologică a fecalelor în dizenteria bacilară se face cel mai bine la scurt timp după defecare, în timp ce trebuie să luați material (mucus și puroi) din ultimele porțiuni de fecale. Materialul de testat este inoculat cu o ansă pe vase Petri cu mediu electiv (Ploskirev, Ploskirev + levomycetin, Levin) și plasat într-un termostat timp de 18-24 ore la o temperatură de +37 ° C. A doua zi, suspect (incolor) coloniile sunt subcultivate pe mediul lui Ressel și eprubete plasate într-un termostat timp de o zi la o temperatură de +370 C. În a treia zi, după ce au primit o cultură pură, frotiurile sunt pregătite pentru microscopie și studiul mobilității (shigella sunt imobile) . Ei au pus reacția de aglutinare pe pahar cu seruri specifice tipului, mai întâi cu seruri împotriva tipurilor predominante în zonă, apoi au fost desfășurate și însămânțate pe un rând „pestriț” pentru a determina proprietăți biochimice cultura selectată.

Agenții cauzali ai dizenteriei nu fermentează lactoza și zaharoza (cu excepția Sonne), descompun glucoza (în acid), nu formează hidrogen sulfurat.

Răspunsul final la examenul bacteriologic este dat în a 5-a zi. Uneori sunt izolate tulpini atipice ale agentului patogen, culturi care și-au pierdut capacitatea de aglutinare și cu alte caracteristici. În astfel de cazuri, studiile continuă pe perioade mai lungi.

Există, de asemenea, metode bacteriologice accelerate - reînsămânțarea coloniilor suspecte din cutiile Petri după 18-20 de ore de la începerea studiului în 2 eprubete cu mediu Ressel (geloză oblică cu 1% lactoză și 0,1% glucoză - într-una și 1% zaharoză și 0,1 % manitol – în altul). După 4 ore poate apărea deja creșterea coloniilor, din care se prepară frotiuri, se colorează după Gram, se studiază mobilitatea și se face o reacție aproximativă de aglutinare cu seruri împotriva celor mai des întâlniți agenți patogeni din zonă. Astfel, deja în a doua zi puteți da un răspuns preliminar. Răspunsul final se dă în a treia zi după luarea în considerare a rezultatelor semănării pe rândul „pestriț” și o reacție detaliată de aglutinare.

Inocularea agenților patogeni de dizenterie nu este întotdeauna aceeași, depinde de mulți factori - metoda de luare a materialului pentru cercetare, calitatea mediilor și alte motive, dintre care unul este numărul de agenți patogeni pe unitatea de volum de fecale. S-a dovedit că agenții cauzali ai dizenteriei sunt semănați în acele cazuri când există cel puțin sute de milioane de corpuri microbiene într-un gram de fecale. LA cazuri rare este posibilă izolarea din sânge a agentului cauzal al dizenteriei.

În prezența unui microscop luminiscent, a serurilor specifice cu fluorocromi, studenților li se arată metoda de fluorescență directă a anticorpilor.

De asemenea, este posibil să se producă o reacție de aglutinare cu serul sanguin și diagnosticul pacientului, totuși, titrurile de anticorpi la pacienții cu dizenterie sunt scăzute și, în plus, sunt adesea întâlnite fenomene de paraaglutinare, ceea ce face dificilă obținerea. rezultate de încredere. Mai sensibilă este reacția de hemaglutinare indirectă (IHA) cu diagnosticul eritrocitar standard. metoda ajutorului cercetarea este un test alergic intradermic cu dizenterie conform D. A. Tsuverkalov, care se ia în considerare după 24 de ore în funcție de mărimea papulei formate.

Instrucțiuni metodologice pentru elevi pentru lecția practică nr.28.

Tema lecției:

Ţintă: Studiul metodelor de diagnostic microbiologic, terapie etiotropă și prevenirea shigelozei.

Modulul 2 . Microbiologie specială, clinică și ecologică.

Subiectul 5: Metode de diagnostic microbiologic al dizenteriei.

Relevanța subiectului:Shigeloza este omniprezentă și pune o problemă serioasă în țările cu un nivel cultural sanitar scăzut și o incidență mare a malnutriției și alimentației deficitare. În țările în curs de dezvoltare, răspândirea infecției este favorizată de igiena precară, igiena personală precară, supraaglomerare și o proporție mare de copii în populație. În Ucraina, focarele de shigeloză sunt mai frecvente în grupuri închise pe fundalul nivel scăzut salubritate și igienă, de exemplu, în creșe și grădinițe, pe bărci turistice, în clinici de psihiatrie sau adăposturi pentru persoane cu dizabilități. Shigella a fost cauza diareei călătorilor și turiștilor.

Cauza bolilor de grup poate fi considerată utilizarea produselor alimentare contaminate de neglijența lucrătorilor din comerț care sunt purtători de shigella. Există focare asociate cu utilizarea apei potabile, iar înotul în rezervoare poluate a dus, de asemenea, la infecție. Cu toate acestea, căile de transmitere alimentare și de apă par să joace un rol mai mic în răspândirea shigelozei în comparație cu holera și febra tifoidă, care necesită de obicei doze mari agenți patogeni. În țările în curs de dezvoltare, unde răspândirea bolii este predominant de la persoană la persoană, purtătorii pot fi un rezervor important al agentului infecțios. La pacienții care nu au luat medicamente antibacteriene, eliminarea Shigella în fecale durează de obicei 14 săptămâni, dar într-o proporție mică de cazuri durează mult mai mult.

Shigeloza este o infecție bacteriană acută a intestinului cauzată de unul dintre cele patru tipuri de Shigella. Spectrul formelor clinice de infecție variază de la diaree ușoară, apoasă, până la dizenterie severă, caracterizată prin crampe abdominale, tenesmus, febră și semne de intoxicație generală.

Etiologie.

Genul Shigella (numit după K. Shiga, care în 1898 a studiat în detaliu și a descris agentul cauzal izolat al dizenteriei bacteriene de către A.V. Grigoriev) din familia Enterobacteriaceae este format dintr-un grup de specii de bacterii strâns înrudite care au următoarele proprietăți:

eu. Morfologic: shigella - bastoane mici cu capete rotunjite. Ele diferă de alți reprezentanți ai familiei Enterobacteriaceae prin absența flagelilor (nemotile), nu au spori și capsule și sunt gram-negative.

II. Cultural: shigella sunt aerobe sau anaerobe facultative; conditii optime de cultivare temperatura 37°C, pH 7,2-7,4. Ele cresc pe medii nutritive simple (MPA, MPB) sub formă de colonii mici, strălucitoare, translucide, cenușii, rotunde, cu dimensiunea de 1,52 mm. S formă. Excepție este Shigella Sonne, care adesea se disociază, formând colonii mari, plate, tulburi, cu margini zimțate. R forme (coloniile arată ca o „frunză de strugure”). În mediile nutritive lichide, Shigella oferă o turbiditate uniformă, R formele formează un precipitat. Mediul lichid de îmbogățire este bulionul selenit.

III. Enzimatic: principalele caracteristici biochimice necesare pentru identificarea shigella în izolarea unei culturi pure sunt următoarele:

lipsa formării gazelor în timpul fermentației glucozei;
nu produce hidrogen sulfurat;
fără fermentare a lactozei în 48 de ore.

În total, cele patru specii sunt subdivizate în aproximativ 40 de serotipuri. După caracteristicile principalelor antigene somatice (O) și proprietățile biochimice, se disting următoarele patru specii sau grupuri: S. dysenteriae (grupa A, include: Grigoriev-Shigi, Stutzer-Schmitz, Large-Sachs), S. flexneri (grupa B), S. boydii (Grupa C) și S. sonnei (Grupa D).

În ceea ce privește manitol, toate shigella sunt împărțite în manitol de scindare (Flexner, Boyd, Sonne shigella) și nedivizare (Grigoriev-Shiga, Stutzer-Schmitz, Large-Sachs shigella).

IV. Factori patogeni:

Invazia plasmideloroferă capacitatea shigella de a provoca invazie cu răspândire intercelulară și reproducere ulterioară în epiteliul mucoasei colonului;
formarea de toxine: Shigella are endotoxină lipopolizaharidă, care este similară din punct de vedere chimic și biochimic cu endotoxinele altor membri ai familiei Enterobacteriaceae. În plus, S. dysenteriae tip I (bacilul lui Shiga) produce o exotoxină. De la descoperirea acestuia din urmă, s-a stabilit că are activitate de enterotoxină și poate provoca secreție intestinală, precum și efect citotoxic asupra celulelor epiteliale intestinale; redă efect neurotoxic observată la copiii cu shigeloză. Toxina Shiga, care pătrunde în sânge, împreună cu deteriorarea endoteliului submucos, afectează și glomerulii rinichilor, drept urmare, pe lângă diareea sângeroasă, sindromul hemolitic uremic se dezvoltă odată cu dezvoltarea insuficienței renale.

V. Structura antigenică:Toate Shigella au un O-antigen somatic, în funcție de structura căreia sunt împărțite în serovare.

VI. Rezistenţă: Temperatura 100 0 C ucide Shigella instantaneu. Shigella este rezistentă la temperaturi scăzute în apa râului se păstrează până la 3 luni, pe legume și fructe - până la 15 luni.În condiții favorabile, shigella este capabilă să se reproducă în produsele alimentare (salate, vinegrete, carne fiartă, carne tocată, pește fiert, lapte și produse lactate, compoturi și jeleu), în special sonne shigella.

Epidemiologie.

1. Sursa de infectare:O persoană care suferă de forme acute și cronice de shigeloză; bacteriopurtător.

2. Modalitati de transmitere:

Mâncare (în principal pentru S. sonnei)
Acvatic (în principal pentru S. flexneri)
Contactați gospodăria (în principal pentru S. dysenteriae)

3. Poarta de intrareinfecția servește tract gastrointestinal.

Patogenie și modificări patologice.

Odată ingerată, Shigella colonizează divizii superioare intestinul subțire și se înmulțesc acolo, provocând posibil secreție crescută pe stadiu timpuriu infectii. Shigella pătrunde apoi prin celulele M în submucoasă, unde sunt înghițite de macrofage. Acest lucru duce la moartea unora dintre shigella, ducând la eliberarea de mediatori inflamatori, care inițiază inflamația în submucoasa. Apoptoza fagocitelor permite unei alte părți a Shigella să supraviețuiască și să pătrundă în celulele epiteliale ale mucoasei prin membrana bazala. În interiorul enterocitelor, shigella se reproduc și se răspândește intercelular, rezultând în dezvoltarea eroziunilor. Când shigella moare, shiga și toxine asemănătoare shiga sunt eliberate, a căror acțiune duce la intoxicație. Înfrângerea membranei mucoase este însoțită de umflături, necroză și hemoragie, care provoacă apariția sângelui în scaun. În plus, toxina afectează sistemul nervos central, ceea ce duce la tulburări trofice.

Manifestari clinice.

Spectrul de manifestări clinice ale shigelozei este foarte larg de la diaree ușoară până la dizenterie severă cu crampe, dureri abdominale, tenesmus, febră și intoxicație generală.

Perioadă de incubațievariază de la câteva ore până la 7 zile, cel mai adesea este de 2-3 zile.Inițial, pacienții au scaun apos, febră (până la 41 ° C), durere difuză în abdomen, greață și vărsături. Odată cu aceasta, pacienții se plâng de mialgie, frisoane, dureri de spate și durere de cap. În zilele următoare de la debutul bolii apar semne de dizenterie - tenesme, scaune frecvente, rare, sângeroase-mucoase. Temperatura corpului scade treptat, durerea poate fi localizată în cadranele inferioare ale abdomenului. Intensitatea diareei atinge un maxim în jurul sfârșitului primei săptămâni de boală. Dizenteria cu scaune cu sânge este mai frecventă și apare mai devreme în boala cauzată de S. dysenteriae tip I decât în alte forme de shigeloză.

Pentru Shigellosis Sonne este caracteristică o evoluție mai blândă a bolii (varianta gastroenterică sau gastroenterocolitică). Perioada febrilă este mai scurtă, efectele intoxicației sunt de scurtă durată, iar modificările distructive ale mucoasei intestinale nu sunt tipice.

Shigellosis FlexnerPractic, sunt caracteristice două variante ale cursului clinic - gastroenterocolitic și colita.

Complicații extraintestinale în shigelozărar:

O complicație a shigelozei poate fi dezvoltarea disbacteriozei intestinale.
Alături de durerile de cap, pot apărea semne de meningită și convulsii.
Cazuri de neuropatie periferică au fost descrise în infecția cu S. dysenteriae tip I, iar cazuri de sindrom Guillain-Barré (polinevrite) au fost raportate în timpul unui focar de gastroenterită cu S. boydii.
Cu excepția copiilor care suferă de distrofie, diseminarea hematogenă a agentului patogen este relativ rară și au fost descrise și cazuri de abcese de shigeloză și meningită.
Cu shigeloza, este posibilă dezvoltarea sindromului Reiter cu artrită, conjunctivită sterilă și uretrita, aceasta apare de obicei după 1-4 săptămâni de la debutul diareei la pacienți.
La copii, shigeloza este însoțită de un sindrom hemolitic uremic, adesea asociat cu reacții asemănătoare leucemiei, colită severă și endotoxină circulantă, dar bacteriemia nu este de obicei detectată.
Foarte rar, keratoconjunctivita purulentă este cauzată de shigella care a intrat în ochi ca urmare a autoinfectării cu degetele contaminate.
Șoc hipovolemic și DIC.
Peritonita, cangrena intestinala, sangerari intestinale.

Imunitate: Oamenii au o rezistență naturală la shigeloză. După boală trecută imunitatea nu este stabilă, iar după shigeloză Sonne este practic absent. Cu o boală cauzată de Shigella Grigoriev Shigi, se dezvoltă o imunitate antitoxică mai stabilă. Rolul principal în protecția împotriva infecțiilor îi revine secretorului IgA , prevenirea aderenței și a activității dependente de anticorpi citotoxici a limfocitelor intraepiteliale, care, împreună cu secretorii IgA ucide Shigella.

Diagnosticare și cercetări de laborator.

Scopul studiului: detectarea și identificarea shigella pentru diagnostic; detectarea purtătorilor de bacterii; detectarea Shigella în alimente.

Material de cercetare: excremente, material secţional, alimente.

Metode de diagnostic:microbiologic (bacteriologic, microscopic (luminiscent); serologic; biologic; test de alergie.

Progresul cercetării:

1 zi de studiu:Culturile trebuie făcute din fecale proaspăt excretate sau folosind tampoane rectale (tub rectal); in lipsa conditiilor adecvate, materialul trebuie plasat intr-un mediu de transport. Pentru aceasta, ar trebui să se folosească agar enteric (mediu MacConkey sau Shigella-Salmonella), agar xiloză-lizină-deoxicolat moderat selectiv, KLD) și bulion nutritiv (bulion selenit). Dacă timpul dintre colectare și inoculare depășește 2 ore, atunci trebuie utilizate soluții de conservare: bulion de bilă 20%, mediu Kauffmann combinat.

Excrementele din amestecul de glicerină sunt emulsionate, o picătură de emulsie se aplică pe mediu și se freacă cu o spatulă. Mediile diferențiale pentru Shigella sunt mediile Ploskirev, Endo și EMS (agar albastru eosinmetilen). Mediul lui Ploskirev (compoziția mediului include: MPA, lactoză, săruri acizi biliariși indicator verde strălucitor) este, de asemenea, un mediu electiv pentru Shigella, deoarece inhibă creșterea Escherichia coli.
Paralel cu semănatul direct materialul colectatînsămânțat pe mediul de îmbogățire - bulion selenit.
Toate culturile sunt plasate într-un termostat.

Ziua 2 a studiului:

Cupele sunt îndepărtate de pe termostat, coloniile suspecte sunt testate pe mediu Ressel (mediu nutritiv care include: agar-agar, indicator Andrede, 1% lactoză, 0,1% glucoză) și manitol. Semănatul se face prin mișcări pe o suprafață înclinată și o injecție într-o coloană de agar. Mediul Ressel inoculat se pune într-un termostat timp de 18-24 ore (în paralel se face reînsămânțarea din mediul selenit în mediul de diagnostic diferențial).
Faceți frotiuri (colorație Gram), microscop.
Pregătiți preparatele „atârnate” sau „zdrobite” picătură.
Declarație de RA indicativ cu ser de diagnostic polivalent de shigeloză.
Semănatul de colonii suspecte pe agar agar.

Ziua 3 a studiului:

Microscopia materialului înclinat de agar.
Culturile care nu au fermentat lactoza pe mediu Ressel sunt supuse unui studiu suplimentar: se fac frotiuri (colorație Gram), se verifică puritatea culturii. În prezența bastonașelor gram-negative, inocularea se efectuează pe medii Hiss, bulion cu hârtie indicatoare (pentru a detecta indol și hidrogen sulfurat) și lapte de turnesol.
Mediile inoculate sunt plasate într-un termostat timp de 18-24 ore.

Ziua 4 a studiului:

Reprezentând o scurtă „serie pestriță”.
Culturile suspecte pentru proprietățile lor enzimatice și culturale împotriva Shigella sunt supuse identificării serologice. Declarație de RA pe sticlă (seruri de diagnostic tipice și de grup). Configurarea RA desfășurată.

La fel de metode accelerate folosit pentru shigelozamicroscopie cu fluorescențăși proba biologica(introducerea tulpinilor virulente de Shigella în sacul conjunctival (sub pleoapa inferioară) al cobaiului se dezvoltă conjunctivita la sfârșitul primei zile).

Test alergic Zuverkalovtest alergic intradermic cu dizenterie (introducerea a 0,1 ml dizenterie in antebrat reactie pozitiva in caz de infiltratie si hiperemie). Diagnosticul alergologic nu este practic utilizat în prezent. Testul lui Tsurvekalov nu diferă în specificitate, reacțiile pozitive sunt înregistrate nu numai în shigeloză, ci și în salmoneloză, escherichioză, yersinioză și alte infecții intestinale acute și, uneori, la indivizi sănătoși.

Tratament și prevenire.Bacteriofagul este utilizat pentru tratament și prevenire conform indicațiilor epidemiologice. administrare orală, antibiotice după determinarea antibiogramei; în cazul disbacteriozei preparate de probiotice pentru corectarea microflorei. Pentru a reumple pierderea de fluide și electroliți - introducerea unei soluții de glucoză-electroliți în interior.

Obiective specifice:

Interpretați proprietățile biologice ale agenților patogeni ai shigelozei.

Familiarizați-vă cu clasificarea Shigella.

Învață să interpretezi tiparele patogenetice ale procesului infecțios cauzat de shigella.

Pentru a determina metodele de diagnostic microbiologic, terapia etiotropă și prevenirea shigelozei.

A fi capabil să:

Inoculați materialul de testat pe medii nutritive.
- Pregătiți frotiuri și colorație Gram.
- Efectuați microscopia preparatelor folosind un microscop cu imersie.
- Analizați caracteristicile morfologice, culturale, enzimatice ale Shigella.

Întrebări teoretice:

1. Caracteristicile agenților patogeni ai shigelozei. proprietăți biologice.

2. Clasificarea shigella. Principiile care stau la baza.

3. Epidemiologie, patogeneză și caracteristici clinice shigeloza.

4. Diagnosticare de laborator.

5. Principii de tratament și prevenire a shigelozei.

Sarcini practice care se execută în clasă:

1. Microscopia preparatelor demonstrative din culturi pure de agenți patogeni de shigeloză.

2. Lucrări privind diagnosticul bacteriologic al shigelozei: studiul culturilor fecale pe mediul lui Ploskirev.

3. Subcultura coloniilor suspecte pe mediul Ressel și pe BCH pentru a determina formarea de indol și H 2 S .

4. Schițarea preparatelor demonstrative și schema diagnosticului microbiologic al shigelozei în protocolul lecției.

5. Înregistrarea protocolului.

Literatură:

1. Korotyaev A.I., Babichev S.A., Microbiologie medicală, imunologie și virologie / Manual pentru universități medicale, Sankt Petersburg „Literatura specială”, 1998. - 592p.

2. Timakov V.D., Levashev V.S., Borisov L.B. Microbiologie / Manual.-ed. a II-a, revăzută. Și suplimentar - M .: Medicină, 1983, -512s.

3. Pyatkin K.D. Krivoshein Yu.S. Microbiologie cu virologie și imunologie.- Kiev: În școala și școala, 1992. - 431s.

4. Microbiologie medicală / Editat de V.I. Pokrovsky.-M.: GEOTAR-MED, 2001.-768s.

5. Ghid pentru instruire practicăîn microbiologie, imunologie și virologie. Ed. M.P. Zykov. M. „Medicina”. 1977. 288 p.

6. Cherkes F.K., Bogoyavlenskaya L.B., Belskan N.A. Microbiologie. / Ed. F.K. Cerchez. M.: Medicină, 1986. 512 p.

7. Note de curs.

Literatură suplimentară:

1. Makiyarov K.A. Microbiologie, virologie și imunologie. Alma-Ata, „Kazahstan”, 1974. 372 p.

2. Titov M.V. Boli infecțioase. - K., 1995. 321s.

3. Shuvalova E.P. boli infecțioase. - M.: Medicină, 1990. - 559 p.

4. BME, Vol. 1, 2, 7.

5. Pavlovich S.A. Microbiologie medicală în grafice: Proc. indemnizatie medicala în-tovarăș. Mn.: Vysh. şcoală, 1986. 255 p.

Scurt instrucțiuni să lucreze în sesiunea practică.

La începutul lecției se verifică nivelul de pregătire a elevilor pentru lecție.

Munca independentă constă în studierea clasificării Shigella, analizarea schemei patogenetice și semne clinice shigeloza. Studiul metodelor de diagnosticare de laborator a shigelozei. Elevii efectuează însămânțarea biomaterialului pe medii nutritive. Apoi se prepară micropreparate, se colorează după Gram, se efectuează microscopia, se schițează micropreparatele și se dau explicațiile necesare. Compoziția lucrării independente include și microscopia preparatelor demonstrative și schițarea acestora în protocolul lecției.

La sfârșitul lecției se efectuează un test de control și o analiză a rezultatelor finale ale muncii independente ale fiecărui elev.

Harta tehnologică a lecției practice.

p/p	Etape	Timp în minute	Modalitati de invatare	Echipamente	Locație
	Verificarea și corectarea nivelului inițial de pregătire pentru lecție		Sarcini de testare de bază	Tabele, atlas	cameră de studiu
	Muncă independentă		Graficul de structură logică	Microscop cu imersiune, coloranți, lame de sticlă, bucle bacteriologice, medii nutritive, mediu Ploskirev, mediu Ressel, „serie Hiss pestriță”
	Verificare personalăși corectarea stăpânirii materialului		Sarcini de învățare direcționate
	Controlul de testare		Teste
	Analiza rezultatelor muncii

Sarcini de învățare vizate:

Fecalele au fost obținute de la un copil cu infecții intestinale acute (colectarea fecalelor a fost efectuată cu un tub rectal) care conținea mucus și puroi. Ce metodă de diagnosticare expresă ar trebui utilizată?

A. ELISA.

b. RECIF.

C. RA.

D. RSK.

E. RIA.

Agentul cauzal al dizenteriei a fost izolat de la un copil bolnav cu infecție intestinală acută. Ce fel caracteristici morfologice caracteristică agentului patogen?

A . Tija Gram-negativă imobilă.

B . Tijă mobilă Gram-pozitivă.

C . Formează o capsulă pe un mediu nutritiv.

D . Formează spori în mediul extern.

E . Streptobacili Gram pozitivi.

3. Un pacient care s-a îmbolnăvit în urmă cu trei zile și se plânge de o temperatură de 38 ° C, dureri abdominale, frecvente scaun lichid, prezența sângelui în scaun, a diagnosticat clinic medicul dizenteria bacilară. Ce metodă de diagnostic microbiologic ar trebui utilizată în acest caz și ce material trebuie luat de la pacient pentru a confirma diagnosticul?

A. Cal. bacterioscopic.

B. Cal. bacteriologic.

C. Sânge bacterioscopic.

D. Urina bacteriologică.

E. Sânge serologic.

4. Shigella Sonne a fost izolata din fecalele pacientului. Ce trebuie făcut cercetări suplimentare pentru a determina sursa infecției?

A . Se efectuează tiparea fagică a culturii pure izolate.

B . Determinați antibiograma.

C . Configurați reacția de precipitare.

D . Configurați reacția de fixare a complementului.

E . Stabiliți o reacție de neutralizare.

5. Dintre grupul de turiști (27 de persoane) care obișnuia să bea apă din lac, după două zile, 7 persoane au dezvoltat simptome diaree acută. Ce material să stabilească etiologia această boală ar trebui trimis la laborator?

A. Apa, fecalele pacienților.

B. Apa, sângele bolnavilor.

C. Produse alimentare.

D. Urină.

E. Flegmă.

6. Un dezavantaj semnificativ al metodei de diagnostic microscopic pentru infecțiile intestinale acute este conținutul său insuficient de informații din cauza identității morfologice a bacteriilor din familie. Enterobacteriaceae . Ce face această metodă mai informativă?

A . Radioimunotest.

B . Reacția Coombs.

C . Test imunosorbant legat.

D . reacție de opsonizare.

E . Reacția de imunofluorescență.

7. Un pacient de 29 de ani a fost internat cu accese de vărsături, diaree și tenesmus. Fecale cu bucăți de mucus și un amestec de sânge. Examenul bacteriologic al bacteriilor din coloniile pe mediul lui Ploskirev a evidențiat bastonașe imobile, gram-negative, care nu fermentează lactoza. Numiți agentul cauzal al procesului infecțios.

A. Shigella flexneri.

b. Vibrio eltor.

C. E. Coli.

D. Proteus mirabilis.

E. Salmonella enteritidis.

8. La laboratorul de microbiologie a fost livrată o salată verde, care este suspectată a fi cauza unei acute infecție intestinală. Ce mediu nutritiv se utilizează pentru inocularea primară?

A . Agar gălbenuș-sare, MPB.

b. MPA, MPB.

C . Bulion de selenită, Endo, Ploskireva.

D . Bulion de ficat, Roux Wednesday.

E . Agar sânge, agar alcalin.

9. În studiul microbiologic al cărnii tocate au fost izolate bacterii aparținând genului Shigella. Studiul ce proprietăți ale microbilor a condus la o astfel de concluzie?

A . Cultural, tinctorial.

B . Antigenic, cultural.

C . Zaharolitic, proteolitic.

D . Antigenic, imunogen.

E . Morfologic, antigenic.

10. Când examinare microscopica vărsături luate de la un pacient cu simptome de infecție intestinală acută, s-au găsit bețișoare nemișcate. În ce frotiu sau preparat ar putea fi studiată motilitatea bacteriană?

A . Într-un frotiu colorat cu Gram.

B . Într-un frotiu pătat conform Tsil - Nelsen.

C . În preparat „picătură groasă”.

D . Într-un frotiu pătat de Neisser.

E . În preparat „picătură zdrobită”.

Algoritm munca de laborator:

1. Studiul proprietăților biologice ale Shigella.

2. Cunoașterea clasificării shigella.

3. Analiza schemei manifestărilor patogenetice și clinice ale shigelozei.

4. Studiul metodelor de diagnosticare de laborator a shigelozei.

5. Studierea principiilor de bază ale terapiei și prevenirii shigelozei.

Prepararea preparatelor fixe din cultura bacteriană.
Colorare micropreparate de Gram.
Microscopia micropreparatelor Cu folosind un microscop cu imersie, analiza și schițarea lor în protocolul lecției.
Mi cromoscopia și analiza preparatelor demonstrative din culturi pure de Shigella.
Schițarea preparatelor demonstrative și schema de diagnosticare de laborator a shigelozei în protocol.
Formularea protocolului.

Dizenterie - aceasta este o infecție dureroasă, însoțită de diaree cu eliberare de sânge, puroi și mucus, dureri abdominale și simptome de intoxicație generală, care apar cu o leziune predominantă a colonului, este cauzată de tipuri diferite drăguț Shigella(bacteriile de dizenterie).

agenți cauzali ai dizenteriei aparțin departamentului Gracilicutes, familie Enterobacteriaceae, drăguț Shigella.
Dizenterie , numit Shigella dysenteriae, este mai severă decât bolile cauzate de alte Shigella, deoarece pe lângă endotoxina care provoacă inflamația intestinală, acest tip de bacterii produce o exotoxină puternică care acționează ca o neurotoxină.

Dizenteria bacteriană , sau shigeloza, este o boală infecțioasă cauzată de bacterii din acest gen Shigella,

Dizenterie.Morfologie și proprietăți tinctoriale.
Shigella - bastonașe gram-negative cu capete rotunjite, lungi de 2-3 microni, grosime de 0,5-7 microni, nu formează spori, nu au flageli, sunt imobile. În multe tulpini se găsesc vilozități de tip general și pili genitali. Unele Shigella au o microcapsulă.

Dizenterie. Cultivare.
Bastoanele de dizenterie sunt anaerobe facultative. Sunt nepretențioși față de mediile nutritive, cresc bine la o temperatură de 37 ° C și un pH de 7,2-7,4. Pe medii dense formează mici colonii transparente, în medii lichide - turbiditate difuză. Bulionul selenit este cel mai adesea folosit ca mediu de îmbogățire pentru cultivarea Shigella.

Dizenterie.activitate enzimatică.
Shigella are o activitate enzimatică mai mică decât alte enterobacterii. Fermentează carbohidrații cu formarea de acid. O caracteristică importantă care face posibilă diferențierea Shigella este relația lor cu manitol: S. dysenteriae nu fermentează manitolul, reprezentanții grupelor B, C, D sunt manitol-pozitivi. Cele mai active biochimic sunt S. sonnei, care încet (în decurs de 2 zile) poate fermenta lactoza. Pe baza relației dintre S. sonnei și ramnoză, xiloză și maltoză, se disting 7 variante biochimice ale acestuia.

Dizenterie.Structura antigenică.
Shigella are antigen O, eterogenitatea sa permite distincția serovariilor și subserovarurilor în cadrul grupurilor; la unii membri ai genului se găsește antigenul K.

Dizenterie.factori de patogenitate.
Toți bacilii dizenterici formează endotoxină, care are un efect enterotrop, neurotrop, pirogen. În plus, S. dysenteriae - Shigella Grigoriev-Shiga - secretă o exotoxină care are un efect enterotoxic, neurotoxic, citotoxic și nefrotoxic asupra organismului, care, în consecință, perturbă metabolismul apă-sare și activitatea sistemului nervos central, duce la moarte. a celulelor epiteliale ale colonului.intestine, afectarea tubilor renali.

Odată cu formarea exotoxinei, este asociată un curs mai sever de dizenterie cauzată de acest agent patogen. Exotoxina poate fi secretată și de alte tipuri de Shigella. A fost descoperit factorul de permeabilitate RF, în urma căruia sunt afectate vasele de sânge. Factorii patogeni includ, de asemenea proteine invazive, facilitând pătrunderea lor în celulele epiteliale, precum și în pili și proteinele membranei exterioare responsabile de aderență și o microcapsulă.

Dizenterie.rezistenţă.
Shigella are o rezistență scăzută la acțiune diverși factori. S. sonnei au o rezistenţă mai mare, care în apă de la robinet persistă până la 2,5 luni, în apa rezervoarelor deschise supraviețuiește până la 1,5 luni. S. sonnei nu numai că poate supraviețui mult timp, ci și se poate înmulți în produse, în special în produse lactate.

Dizenterie.Epidemiologie.
Dizenteria este o infecție antroponotică: sursa sunt bolnavii și purtătorii. Mecanismul de transmitere a infecțiilor este fecal-oral. Căile de transmitere pot fi diferite - cu dizenteria Sonne predomină calea alimentară, cu dizenteria Flexner - apă, pentru dizenteria Grigoriev-Shiga este caracteristică calea contact-gospodărie.

Dizenterie găsite în multe țări ale lumii. LA anul trecut s-a înregistrat o creștere bruscă a incidenței acestei infecții. Oamenii de toate vârstele se îmbolnăvesc, dar copiii de la 1 la 3 ani sunt cei mai susceptibili la dizenterie. Numărul de pacienți crește în iulie-septembrie. Diferite tipuri de Shigella sunt distribuite neuniform în anumite regiuni.

Dizenterie.Patogeneza.
Shigella intră în tractul gastrointestinal prin gură și ajunge în intestinul gros. Posedând tropism pentru epiteliul său, agenții patogeni se atașează la celule cu ajutorul piliului și proteinelor membranei exterioare. Datorită factorului invaziv, ele pătrund în interiorul celulelor, se înmulțesc acolo, drept urmare celulele mor.

În peretele intestinal se formează ulcerații, în locul cărora se formează apoi cicatrici. Endotoxina, eliberată în timpul distrugerii bacteriilor, provoacă intoxicație generală, motilitate intestinală crescută și diaree. Sângele din ulcerele formate intră în scaun. Ca urmare a acțiunii exotoxinei, se observă o încălcare mai pronunțată a metabolismului apă-sare, a activității sistemului nervos central și a leziunilor renale.

Dizenterie.tablou clinic.
Perioada de incubație durează de la 1 la 5 zile. Boala începe acut cu o creștere a temperaturii corpului la 38-39 ° C, apar dureri abdominale, diaree. Un amestec de sânge, mucus se găsește în scaun. Dizenteria Grigoriev-Shiga este cea mai gravă.

Dizenterie.Imunitate.
După o boală, imunitatea este specifică speciei și specifică variantei. Este de scurtă durată și este instabilă. Adesea boala devine cronică. Bolile repetate au fost observate chiar și într-un singur sezon.

Dizenterie.laborator diagnostice.
Fecalele pacientului sunt luate ca material de testare. Baza diagnosticului este metoda bacteriologică, care permite identificarea agentului patogen, determinarea sensibilității acestuia la antibiotice, efectuarea identificării intraspecifice (determinarea variantei biochimice, serovar sau colicinogenovar). Cu un curs prelungit de dizenterie, poate fi folosit ca auxiliar metoda serologica, constând în formularea RA, RNHA (prin creșterea titrului de anticorpi cu formularea repetată a reacției, se poate confirma diagnosticul).

Dizenterie.Tratament.
Pacienții cu forme severe de dizenterie Grigorieva-Shish și Flexner sunt tratați cu antibiotice o gamă largă acțiuni cu luarea în considerare obligatorie a antibiogramei, deoarece printre shigella există adesea nu numai forme rezistente la antibiotice, ci și forme dependente de antibiotice. În formele ușoare de dizenterie, antibioticele nu sunt utilizate, deoarece utilizarea lor duce la disbacterioză, care agravează proces patologic, și întreruperea proceselor de recuperare în membrana mucoasă a colonului.

Dizenterie.Prevenirea.
Singurul medicament care poate fi utilizat în focarele de infecție în scop profilactic este bacteriofagul dizenter. Rolul principal îl joacă profilaxia nespecifică.

Prevenția nespecifică asigură aranjarea sanitară și igienă adecvată a vieții oamenilor, furnizându-le apă și alimente de înaltă calitate.

În mediul pacientului, trebuie luate măsuri pentru a preveni răspândirea agentului patogen.

Microbiologia dizenteriei

Dizenteria este o boală infecțioasă caracterizată prin intoxicație generală a corpului, diaree și o leziune particulară a membranei mucoase a intestinului gros. Este una dintre cele mai frecvente boli intestinale acute din lume. Boala este cunoscută din cele mai vechi timpuri sub numele de „diaree cu sânge”, dar natura ei s-a dovedit a fi diferită. În 1875, omul de știință rus F. A. Lesh a izolat o amibe de la un pacient cu diaree sângeroasă Entamoeba histolytica, în următorii 15 ani s-a stabilit independența acestei boli, pentru care s-a păstrat denumirea de amebiază.

Agenții cauzali ai dizenteriei propriu-zise sunt un grup mare de bacterii similare din punct de vedere biologic unite în gen Shigella. Agentul patogen a fost descoperit pentru prima dată în 1888 de A. Chantemes și F. Vidal; în 1891, a fost descris de A. V. Grigoriev, iar în 1898, K. Shiga, folosind serul primit de la un pacient, a identificat agentul patogen la 34 de bolnavi cu dizenterie, dovedind în final rolul etiologic al acestei bacterii. Totuși, în anii următori, au fost descoperiți și alți agenți cauzali ai dizenteriei: în 1900 - de S. Flexner, în 1915 - de K. Sonne, în 1917 - de K. Stutzer și K. Schmitz, în 1932 - de J. Boyd , în 1934 - de D. Large, în 1943 - de A. Sachs. În prezent genul Shigella include mai mult de 40 de serotipuri. Toate sunt baghete gram-negative scurte imobile care nu formează spori și capsule, care cresc bine pe medii nutritive obișnuite, nu cresc pe un mediu de foame cu citrat sau malonat ca unică sursă de carbon; nu formează H2S, nu au urează; reacția Voges-Proskauer este negativă; glucoza și alți carbohidrați sunt fermentați pentru a forma acid fără gaz (cu excepția unor biotipuri Shigella flexneri: S. manchesterși S. newcastle); de regulă, nu fermentează lactoza (cu excepția Shigella Sonne), adonitul, salicină și inozitol, nu lichefiază gelatina, de obicei formează catalază, nu au lizin decarboxilază și fenilalanin deaminază. Conținutul de G + C în ADN este de 49 - 53 % mol. Shigella sunt anaerobi facultativi, temperatura optimă pentru creștere este de 37 °C, nu cresc la temperaturi peste 45 °C, pH-ul optim al mediului este de 6,7 - 7,2. Coloniile pe medii dense sunt rotunde, convexe, translucide; în cazul disocierii, se formează colonii aspre în formă de R. Creșterea pe BCH sub formă de turbiditate uniformă, formele aspre formează un precipitat. Culturile proaspăt izolate de Sonne Shigella formează de obicei colonii de două tipuri: mici, rotunde, convexe (faza I), plate mari (faza II). Natura coloniei depinde de prezența (faza I) sau absența (faza II) a unei plasmide cu m. m. 120 MD, ceea ce determină și virulența Shigella Sonne.

Clasificarea internațională a Shigella este construită ținând cont de caracteristicile biochimice ale acestora (manitol-nefermentant, manitol-fermentant, Shigella cu fermentație lentă a lactozei) și caracteristicile structurii antigenice (Tabelul 37).

La Shigella s-au găsit antigeni O cu specificitate diferită: comune pentru familie Enterobacteriaceae, generic, specific de specie, grup și tip, precum și antigenele K; Nu au antigene H.

Tabelul 37

Clasificarea bacteriilor din gen Shigella

Clasificarea ia în considerare doar antigenele O-specifice de grup și tip. Conform acestor caracteristici, Shigella subdivizat în 4 subgrupe sau 4 specii și include 44 de serotipuri. În subgrupa A (specii Shigella dysenteriae) include shigella care nu fermentează manitolul. Specia include 12 serotipuri (1 - 12). Fiecare serotip are propriul său antigen de tip specific; relațiile antigenice dintre serotipuri, precum și cu alte tipuri de shigella, sunt slab exprimate. La subgrupa B (tip Shigella flexneri) includ Shigella, de obicei manitol care fermentează. Shigella acestei specii sunt înrudite serologic între ele: conțin antigene specifice tipului (I - VI), conform cărora sunt împărțite în serotipuri (1 - 6) și antigene de grup, care se găsesc în compoziții diferite în fiecare serotip. şi conform cărora serotipurile sunt împărţite în subserotipuri. În plus, această specie include două variante antigenice, X și Y, care nu au antigene tipice; ele diferă în seturi de antigene de grup. Serotip S. flexneri 6 nu are subserotipuri, dar este împărțit în 3 tipuri biochimice în funcție de caracteristicile fermentației glucozei, manitolului și dulcitului (Tabelul 38).

Tabelul 38

Biotipuri S. flexneri 6

Notă. K - fermentație cu formare numai de acid; KG - fermentație cu formare de acid și gaz; (-) - fără fermentație.

Antigenul lipopolizaharidic O din toate Shigella Flexner conține antigenul de grup 3, 4 ca structură primară principală, sinteza sa este controlată de o genă cromozomială localizată în apropierea locului his. Antigenele specifice de tip I, II, IV, V și antigenele de grup 6, 7, 8 sunt rezultatul modificării antigenelor 3, 4 (glicozilare sau acetilare) și sunt determinate de genele profagelor de conversie corespunzătoare, locul de integrare al care se află în regiunea lac-pro a cromozomului Shigella.

A apărut pe teritoriul țării în anii 80. Secolului 20 și un nou subserotip utilizat pe scară largă S. flexneri 4(IV:7, 8) diferă de subserotipul 4a (IV:3, 4) și 4b (IV:3, 4, 6), a apărut din varianta S. flexneri Y(IV:3, 4) din cauza lizogenizării prin profagile sale de conversie IV și 7, 8.

La subgrupa C (tip Shigella boydii) includ Shigella, de obicei manitol care fermentează. Membrii grupului sunt diferiți serologic unul de celălalt. Relațiile antigenice din cadrul speciei sunt slab exprimate. Specia include 18 serotipuri (1 - 18), fiecare dintre ele având propriul său antigen de tip principal.

În subgrupa D (specii Shigella sonnei) include Shigella, care fermentează de obicei manitolul și sunt capabile să fermenteze lent (după 24 de ore de incubație și mai târziu) lactoza și zaharoza. Vedere S. sonnei include un serotip, totuși, coloniile de faze I și II au propriile lor antigene specifice tipului. Au fost propuse două metode pentru clasificarea intraspecifică a Shigella lui Sonne:

1) împărțirea lor în 14 tipuri și subtipuri biochimice în funcție de capacitatea lor de a fermenta maltoză, ramnoză și xiloză; 2) împărțirea în tipuri de fagi în funcție de sensibilitatea la un set de fagi corespunzători.

Aceste metode de tipizare au în principal semnificație epidemiologică. În plus, shigella Sonne și shigella Flexner sunt supuse tipării în același scop prin capacitatea de a sintetiza colicine specifice (colicinogenotyping) și prin sensibilitatea la colicine cunoscute (colicinotyping). Pentru a determina tipul de colicine produse de shigella, J. Abbott și R. Shannon au propus seturi de tulpini tipice și indicator de shigella și pentru a determina sensibilitatea shigella la tipuri cunoscute de colicine, un set de tulpini colicinogene de referință de P. Frederick este folosit.

rezistenţă. Shigella are o rezistență destul de mare la factorii de mediu. Aceștia supraviețuiesc pe țesătură de bumbac și pe hârtie până la 30-36 de zile, în fecale uscate - până la 4-5 luni, în sol - până la 3-4 luni, în apă - de la 0,5 până la 3 luni, pe fructe și legume - până la 2 săptămâni, în lapte și produse lactate - până la câteva săptămâni; la o temperatură de 60 ° C mor în 15 - 20 de minute. Sensibil la soluții de cloramină, clor activ și alți dezinfectanți.

factori de patogenitate. Cea mai importantă proprietate biologică a Shigella, care le determină patogenitatea, este capacitatea de a invada celulele epiteliale, de a se multiplica în ele și de a provoca moartea acestora. Acest efect poate fi detectat utilizând un test keratoconjunctival (introducerea unei bucle a unei culturi Shigella (2-3 miliarde de bacterii) sub pleoapa inferioară a cobaiului determină dezvoltarea unei keratoconjunctivite purulente seroase), precum și prin infecția celulelor. culturi (efect citotoxic) sau embrioni de pui (moartea lor) sau intranazal la șoareci albi (dezvoltarea pneumoniei). Principalii factori de patogenitate ai Shigella pot fi împărțiți în trei grupuri:

1) factori care determină interacțiunea cu epiteliul mucoasei;

2) factori care asigură rezistență la mecanismele umorale și celulare de apărare ale macroorganismului și capacitatea Shigella de a se multiplica în celulele sale;

3) capacitatea de a produce toxine și produse toxice care determină desfășurarea procesului patologic propriu-zis.

Primul grup include factori de adeziune și colonizare: rolul lor este jucat de pili, proteinele membranei exterioare și LPS. Enzimele care distrug mucusul, cum ar fi neuraminidaza, hialuronidaza și mucinaza, promovează aderența și colonizarea. Al doilea grup include factori de invazie care favorizează pătrunderea Shigella în enterocite și reproducerea lor în ele și în macrofage cu manifestarea simultană a unui efect citotoxic și (sau) enterotoxic. Aceste proprietăți sunt controlate de genele plasmidei cu m. m. 140 MD (codifică sinteza proteinelor membranei exterioare care provoacă invazia) și genele cromozomiale Shigella: kcp A (provoacă keratoconjunctivită), cyt (responsabilă de distrugerea celulelor), precum și alte gene, neidentificate încă. Protecția Shigella de fagocitoză este asigurată de antigenul K de suprafață, antigenele 3, 4 și lipopolizaharide. În plus, lipida A de Shigella endotoxina are un efect imunosupresor: suprimă activitatea celulelor memoriei imune.

Al treilea grup de factori de patogenitate include endotoxina și două tipuri de exotoxine găsite în Shigella - exotoxine Shiga și exotoxine asemănătoare Shiga (SLT-I și SLT-II), ale căror proprietăți citotoxice sunt cele mai pronunțate în S. dysenteriae 1. Toxine de tip Shiga și Shiga se găsesc și în alte serotipuri S. dysenteriae, se formează și ele S. flexneri, S. sonnei, S. boydii, EHEC și niște salmonele. Sinteza acestor toxine este controlată de genele toxice ale fagilor convertitori. Enterotoxine de tip LT au fost găsite la Flexner, Sonne și Boyd Shigella. Sinteza LT în ele este controlată de gene plasmide. Enterotoxina stimulează activitatea adenilat-ciclazei și este responsabilă pentru dezvoltarea diareei. Toxina Shiga, sau neurotoxina, nu reacționează cu sistemul de adenil-ciclază, dar are un efect citotoxic direct. Toxinele Shiga și Shiga-like (SLT-I și SLT-II) au un MW de 70 kD și constau din subunități A și B (ultima dintre cele 5 subunități mici identice). Receptorul pentru toxine este glicolipidul membranei celulare.

Virulența Shigella Sonne depinde și de plasmida cu m. m. 120 MD. Controlează sinteza a aproximativ 40 de polipeptide ale membranei exterioare, dintre care șapte sunt asociate cu virulență. Shigella Sonne cu această plasmidă formează colonii de fază I și sunt virulente. Culturile care au pierdut plasmida formează colonii de fază II și sunt lipsite de virulență. Plasmide cu m.m. 120 - 140 MD au fost găsite la Shigella Flexner și Boyd. Lipopolizaharida Shigella este o endotoxină puternică.

O caracteristică a epidemiologiei dizenteriei este modificarea compoziției speciilor a agenților patogeni, precum și a biotipurilor Sonne și a serotipurilor Flexner în anumite regiuni. De exemplu, până la sfârșitul anilor 1930 Secolului 20 a împărtăși S. dysenteriae 1 a reprezentat până la 30 - 40% din toate cazurile de dizenterie, iar apoi acest serotip a început să apară din ce în ce mai puțin și aproape a dispărut. Cu toate acestea, în anii 1960 - 1980. S. dysenteriae a reapărut pe arena istorică și a provocat o serie de epidemii care au dus la formarea a trei focare hiperendemice ale acesteia - în America Centrală, Africa Centrală și Asia de Sud (India, Pakistan, Bangladesh și alte țări). Motivele pentru modificarea compoziției speciilor a agenților patogeni de dizenterie sunt probabil asociate cu o modificare a imunității colective și cu o modificare a proprietăților bacteriilor de dizenterie. În special, întoarcerea S. dysenteriae 1 iar distribuția sa largă, care a provocat formarea de focare hiperendemice de dizenterie, este asociată cu achiziționarea de plasmide de către aceasta, ceea ce a provocat rezistență la mai multe medicamente și virulență crescută.

Caracteristicile patogenezei și clinicii. Perioada de incubație pentru dizenterie este de 2-5 zile, uneori mai puțin de o zi. Formarea unui focar infecțios în membrana mucoasă a părții descendente a intestinului gros (sigmoid și rect), unde pătrunde agentul cauzal al dizenteriei, este ciclică: aderența, colonizarea, introducerea Shigella în citoplasma enterocitelor, a acestora. reproducerea intracelulară, distrugerea și respingerea celulelor epiteliale, eliberarea agenților patogeni în lumenul intestinului; după aceasta începe următorul ciclu - aderență, colonizare etc. Intensitatea ciclurilor depinde de concentrația agenților patogeni din stratul parietal al membranei mucoase. Ca urmare a ciclurilor repetate, focarul inflamator crește, ulcerele rezultate, conectându-se, cresc expunerea peretelui intestinal, ca urmare a faptului că în fecale apar sânge, bulgări mucopurulenți și leucocite polimorfonucleare. Citotoxinele (SLT-I și SLT-II) provoacă distrugerea celulelor, enterotoxina - diaree, endotoxine - intoxicație generală. Clinica de dizenterie este determinată în mare măsură de ce tip de exotoxine este produsă într-o măsură mai mare de agentul patogen, de gradul efectului său alergenic și de starea imunitară a organismului. Cu toate acestea, multe probleme ale patogenezei dizenteriei rămân neexplicate, în special: cursul dizenteriei la copiii primilor doi ani de viață, motivele tranziției dizenteriei acute la cronice, semnificația sensibilizării, mecanismul imunității locale. ale mucoasei intestinale etc. Cele mai tipice manifestări clinice ale dizenteriei sunt diareea, impulsurile frecvente: în cazuri severe de până la 50 sau mai multe ori pe zi, tenesmul (spasme dureroase ale rectului) și intoxicația generală. Natura scaunului este determinată de gradul de deteriorare a intestinului gros. Cea mai severă dizenterie este cauzată de S. dysenteriae 1, cel mai ușor - dizenteria lui Sonne.

Imunitatea postinfecțioasă. După cum au arătat observațiile asupra maimuțelor, după ce au suferit dizenterie, rămâne o imunitate puternică și destul de lungă. Este cauzată de anticorpi antimicrobieni, antitoxine, activitate crescută a macrofagelor și limfocitelor T. Un rol semnificativ îl joacă imunitatea locală a mucoasei intestinale, mediată de IgA. Cu toate acestea, imunitatea este specifică tipului în natură, nu are loc o imunitate încrucișată puternică.

Diagnosticul de laborator. Metoda principală este bacteriologică. Materialul pentru studiu este fecalele. Schema de izolare a agentului patogen: inoculare pe mediile de diagnostic diferenţial Endo şi Ploskirev (în paralel pe mediul de îmbogăţire, urmată de inoculare pe mediile Endo şi Ploskirev) pentru izolarea coloniilor izolate, obţinerea unei culturi pure, studierea proprietăţilor biochimice a acesteia şi, ţinând cont acesta din urmă, identificarea folosind seruri aglutinante de diagnostic polivalente și monovalente. Sunt produse următoarele seruri comerciale.

1. Shigella care nu fermentează manitolul:

la S. dysenteriae 1și 2

la S. dysenteriae 3–7(polivalent și monovalent),

la S. dysenteriae 8 – 12(polivalent și monovalent).

2. Pentru manitol care fermenta shigella:

la antigeni tipici S. flexneri I, II, III, IV, V, VI,

pentru a grupa antigenele S. flexneri 3, 4, 6, 7, 8- polivalent,

la antigeni S.boydii 1–18(polivalent și monovalent), la antigeni S. sonnei faza I, faza a II-a,

la antigeni S. flexneri I–VI+ S. sonnei- polivalent.

Pentru identificarea rapidă a Shigella, se recomandă următoarea metodă: o colonie suspectă (lactosonnegativă pe mediu Endo) este subcultivată pe mediu TSI (ing. fier de zahăr triplu) - agar cu trei zaharuri (glucoza, lactoza, zaharoza) cu fier pentru determinarea productiei de H 2 S; sau pe un mediu care conține glucoză, lactoză, zaharoză, fier și uree. Orice organism care descompune ureea după 4 până la 6 ore de incubație este cel mai probabil să aparțină genului Proteusși poate fi exclus. Un microorganism care produce H2S sau care are ureaza sau produce acid la nivelul articulației (fermentează lactoza sau zaharoza) poate fi exclus, deși tulpinile producătoare de H2S ar trebui investigate ca posibili membri ai genului. Salmonella. În toate celelalte cazuri, cultura crescută pe aceste medii trebuie examinată și, dacă fermentează glucoza (schimbarea culorii coloanei), izolată în formă pură. Totodată, poate fi investigat în testul de aglutinare pe sticlă cu antiserurile adecvate genului Shigella. Dacă este necesar, se efectuează alte teste biochimice pentru a verifica apartenența la gen Shigellași mobilitatea studiilor.

Următoarele metode pot fi utilizate pentru a detecta antigenele din sânge (inclusiv ca parte a CEC), urină și fecale: RPHA, RSK, reacție de coaglutinare (în urină și fecale), IFM, RAGA (în serul sanguin). Aceste metode sunt extrem de eficiente, specifice și potrivite pentru diagnosticul precoce.

Pentru diagnosticul serologic se pot utiliza: RPGA cu diagnosticul eritrocitar corespunzător, metoda imunofluorescentă (în modificare indirectă), metoda Coombs (determinarea titrului de anticorpi incompleti). Un test alergic cu dizenterie (o soluție de fracții proteice din Shigella Flexner și Sonne) are, de asemenea, valoare diagnostică. Reacția se ia în considerare după 24 de ore.Se consideră pozitivă în prezența hiperemiei și a infiltrațiilor cu diametrul de 10-20 mm.

Tratament. Atenția principală se acordă restabilirii metabolismului normal apă-sare, alimentație rațională, detoxifiere, antibioticoterapie rațională (ținând cont de sensibilitatea agentului patogen la antibiotice). Un efect bun se obține prin utilizarea timpurie a unui bacteriofag dizenteric polivalent, în special tablete cu un înveliș pectinic, care protejează fagul de acțiunea HCl al sucului gastric; în intestinul subțire, pectina se dizolvă, fagii sunt eliberați și își arată acțiunea. În scopuri profilactice, fagul trebuie administrat cel puțin o dată la trei zile (perioada de supraviețuire a acestuia în intestin).

Problema prevenirii specifice. Pentru a crea imunitate artificială împotriva dizenteriei, s-au folosit diferite vaccinuri: de la bacterii ucise, chimice, alcool, dar toate s-au dovedit a fi ineficiente și au fost întrerupte. Vaccinurile împotriva dizenteriei Flexner au fost create din Shigella Flexner viu (mutant, dependent de streptomicina); vaccinuri ribozomale, dar nici acestea nu au fost utilizate pe scară largă. Prin urmare, problema prevenirii specifice a dizenteriei rămâne nerezolvată. Principala modalitate de combatere a dizenteriei este îmbunătățirea sistemului de alimentare cu apă și canalizare, asigurarea unor regimuri sanitare și igienice stricte în întreprinderile alimentare, în special în industria lactatelor, în instituțiile de îngrijire a copiilor, locurile publice și în igiena personală.

CATEGORII

Screening

Ecografia extremităților

Tipuri de ultrasunete

ecografie abdominală

ecografie toracică

ARTICOLE POPULARE

	Negația nu cu verbe (în formă personală, la infinitiv, sub formă de gerunziu) se scrie separat: nu lua, nu era, neștiind, încet.
	Prezentare, raportare principalele trăsături ale filosofiei Renașterii
	Stilul de ficțiune
	Copiii pământului Prezentare noi suntem copiii pământului pentru grădină
	Prezentare pe tema barierelor în calea comunicării, munca a fost făcută de studenți.Fără comunicare, ne închidem.

2022 "kingad.ru" - examinarea cu ultrasunete a organelor umane

Cercetări bacteriologice la dizenterie. Diagnosticul de laborator al dizenteriei, amibiazei și balantidiazei

Etape

Echipamente