Diagnosticum vi și eritrocitul antigenic. Diagnosticum erythrocyte salmonella o
Certificat de înregistrare nr. RZN 2016/3905 din 04.04.2016
Scop
Trusa de reactivi „Diagnosticum erythrocyte Salmonella Vi-antigenic pentru RPHA” (SED-Vi) este concepută pentru a detecta anticorpii la antigenul Vi al agentului cauzator al febrei tifoide în serurile din sânge uman prin testul de hemaglutinare pasivă (RPHA).
Setare caracteristică
Principiul de funcționare
În prezența anticorpilor la agentul cauzator al febrei tifoide, se observă hemaglutinarea eritrocitelor de pui sensibilizate cu antigenul Vi, ceea ce duce la formarea unei „umbrele” de eritrocite așezate în partea inferioară a puțurilor în formă de U ale plăcii. . În absența anticorpilor la agentul cauzator al febrei tifoide, eritrocitele sedimentate formează un „punct”.
Set compoziția
| Nume reactiv | Descriere | Cantitate in set |
|---|---|---|
| Diagnosticum erythrocyte Salmonella Vi-antigenic, uscat 6% (SED) | Eritrocite de pui formalizate sensibilizate cu antigenul S.typhi Vi. Masă higroscopică uscată de culoare maro. După dizolvare - o suspensie de culoare roșu-maro. | 1 flacon, de la 0,6 ml |
| Salmonella seric de diagnosticare adsorbită, receptor Vi, uscat (diluat 1:20, (K+)) | Ser de iepure adsorbit cu Salmonella, receptor Vi, diluat 1:20. Masă poroasă higroscopică uscată de culoare albă. După dizolvare, este un lichid limpede gălbui sau incolor. | 1 flacon, de la 0,3 ml |
| Diluant de probă (RID) | Lichid limpede albastru-violet. | 1 flacon, 10 ml |
| Soluție tampon fosfat (PBS) | Lichid transparent incolor. | 1 flacon, 10 ml |
| Placă polimerică de unică folosință pentru reacții imunologice | Placă polimerică de unică folosință pentru reacții imunologice din polistiren transparent incolor. | 1 BUC. |
Caracteristici de diagnostic
Diagnosticum trebuie aglutinat în RPHA cu ser de diagnostic pentru salmonella adsorbit, receptor Vi, uscat (la o diluție de 1:20), la titrul indicat pe eticheta serului. Nivelul condiționat al caracteristicilor diagnostice ale serului sanguin al persoanelor sănătoase ar trebui considerat o diluție a serului nu mai mare de 1:20. Timpul de analiză este de 3040 minute. Trusa este concepută pentru studiul a 42 de seruri de sânge în opțiunea de screening sau a 10 seruri de sânge în opțiunea de titrare.
Masuri de precautie
Trusa este doar pentru diagnostic in vitro. Substanțele incluse în componentele kit-ului sunt inactivate și sigure. Când lucrați cu kitul, trebuie respectate SP 1.3.2322-08 și SanPiN 2.1.7.2790-10.
Echipamente și materiale suplimentare
Echipamente, materiale, soluții:
- Dozatoare cu pipete cu 1 canal cu volum de dozare variabil 5-40 µl; 40 - 200 ui; 200 - 1000 ui şi 1000 - 5000 ui;
- dozatoare cu pipete cu 8 sau 12 canale cu volum de dozare variabil 5-40 µl și 40-200 µl;
- apă distilată (GOST 6709-72).
Probele analizate
Probele de ser de sânge studiate sunt păstrate la o temperatură de 2 până la 8 °C timp de cel mult 3 zile din momentul prelevării probei de sânge. Este permisă păstrarea zerului în stare congelată la o temperatură care nu depășește minus 18 ° C timp de cel mult 1 an. Înainte de utilizare, probele sunt dezghețate la o temperatură de 16 până la 25 °C și amestecate prin agitare. Reînghețarea nu este permisă. Nu trebuie utilizate probe cu creștere bacteriană și hemoliză. Înainte de a stabili reacția, serurile de testat sunt încălzite la 56 °C timp de 30 de minute.
Efectuarea unei analize
Prepararea serului de diagnostic de control (K+)
Se prepară o soluție de lucru de ser adsorbit de salmonella diagnostic, receptor Vi, uscat (diluat 1:20) din 0,3 ml (K+). Pentru a face acest lucru, la conținutul flaconului cu K+ se adaugă 0,3 ml de soluție tampon fosfat (PBS). Cantitatea rămasă de ser poate fi alicotată și păstrată congelată la o temperatură care nu depășește minus 18 ° C timp de cel mult 6 luni.
Pregătirea unui diagnostic pentru salmonella eritrocitară (SED)
Pentru a prepara o diluție de lucru a unei suspensii de salmonella erythrocyte diagnosticum, se adaugă 0,6 ml de apă distilată la conținutul unui flacon cu 6% SED uscat și se lasă la hidratare timp de 2 ore la o temperatură de 16 până la 25 °C. Apoi se adaugă la soluție 2,4 ml de soluție tampon fosfat (PBS). Soluția de lucru este păstrată la o temperatură de 2 până la 8 ° C timp de cel mult 1 lună. Înghețarea nu este permisă.
Declarația RPHA în timpul screening-ului serurilor de sânge
Serurile de screening sunt diluate în godeurile plăcii după cum urmează:
- în primele godeuri ale tabletei se prepară diluții preliminare de 1:20, adăugându-le mai întâi 190 μl de soluție RIP, apoi 10 μl din serul studiat. Fiecare ser este adăugat cu un vârf separat și pipetat cu atenție (în acest caz, culoarea soluției din godeuri ar trebui să se schimbe de la albastru-violet la verde după adăugarea serurilor);
- Se prepară diluții de screening de 1:40 în al doilea godeu, introducând mai întâi 25 pl de soluție PBS în ele, apoi 25 pl de ser pre-diluat și pipetând cu atenție.
Cu fiecare setare a RPHA, este necesar să se efectueze o determinare de control a titrului K +. Pentru a face acest lucru, se adaugă 50 μl de soluție PBS la 8 godeuri dintr-un rând lung. Apoi, se adaugă 50 pl de soluție de lucru K+ (1:20) în primul godeu, se pipetează cu atenție și se transferă în godeurile următoare, câte 50 pl fiecare, primind diluții de două ori de la 1:40 la 1:5120. În alte 4 godeuri, se adaugă 50 μl de soluție de PBS pentru a controla SED pentru absența hemaglutinării spontane.
În toate godeurile tabletei cu diluții de screening ale serurilor studiate (cu excepția primului care conține RIP) și martori, se adaugă 25 μl de SED. Amestecați suspensia SED într-o sticlă sau baie înainte de utilizare! Tableta este agitată bine și lăsată la o temperatură de 16 până la 25 ° C timp de 30 până la 40 de minute până la sedimentarea completă a eritrocitelor în control.
Declarația RPHA în timpul titrării serurilor de sânge studiate
Titrarea serurilor studiate și a soluției de lucru K+ se efectuează pe rânduri scurte de tabletă. Un alt rând scurt este utilizat pentru a controla absența hemaglutinării spontane a EDS.
În primele godeuri cu rânduri scurte pentru titrarea serului de testat se adaugă 180 μl de soluție RIP. Toate celelalte godeuri sunt umplute cu 50 pl de soluție PBS.
În godeurile cu soluția RIP se adaugă 20 μl din serul de testat (se obține o diluție 1:10). Fiecare ser se adaugă cu vârful său și se pipetează cu atenție (culoarea soluției din godeuri ar trebui să se schimbe de la albastru-violet la verde). Apoi, 50 μl sunt transferați din primele godeuri în următoarele godeuri ale rândurilor, primind diluții de două ori de la 1:20 la 1:1280. La sfârșitul titrarii, din ultimele godeuri se scot 50 μl de soluții.
Cu fiecare setare a RPHA, este necesar să se efectueze o determinare de control a titrului K +. Pentru a face acest lucru, se adaugă 50 μl de soluție PBS la 8 godeuri dintr-un rând lung. Apoi, se adaugă 50 pl de soluție de lucru K+ (1:20) în primul godeu, se pipetează cu atenție și se transferă în godeurile următoare, câte 50 pl fiecare, primind diluții de două ori de la 1:40 la 1:5120.
Pentru a controla diagnosticul pentru absența hemaglutinării spontane, se adaugă 50 μl de soluție PBS în toate godeurile dintr-un rând scurt.
În toate godeurile (cu excepția primelor godeuri din fiecare rând pentru serurile studiate care conțin RIP) se adaugă 25 µl de SED. Amestecați suspensia SED într-o sticlă sau baie înainte de utilizare! Tableta este agitată bine și lăsată la o temperatură de 16 până la 25 ° C timp de 30 - 40 de minute până la sedimentarea completă a eritrocitelor în control.
Contabilitatea si interpretarea rezultatelor
Contabilizarea rezultatelor la screening-ul serurilor de sânge
Contabilitatea rezultatelor se realizează pe o scară condiționată de patru încrucișări. Titrul seric este diluția sa, care dă hemaglutinare prin cel puțin 3 (+++) încrucișări.
- ++++ (4+) - eritrocitele aglutinate formează o „umbrelă” inversată în fundul găurii, marginile acesteia cad;
- +++ (3+) - eritrocitele aglutinate formează o „umbrelă” inversată în fundul găurii, marginile sale sunt uniforme;
- ++ (2+) - alături de eritrocitele aglutinate, există un sediment sub forma unui mic „inel” de eritrocite neaglutinate în fundul găurii;
- + (1+) - majoritatea eritrocitelor nu sunt aglutinate și se depun sub forma unui mic „inel”;
- (-) - eritrocitele neaglutinate formează un „punct” în fundul puțului.
Un rezultat pozitiv este considerat a fi hemaglutinarea eritrocitelor încărcate cu antigen Vi prin cel puțin 3 încrucișări (+++).
Controlul calității diagnosticului este de 4 godeuri din rândul de control, în care au fost adăugate doar soluția PBS și SED. Nu ar trebui să existe hemaglutinare spontană în aceste godeuri - reacția este negativă (-). În caz contrar, studiul ar trebui repetat. Dacă hemaglutinarea apare în timpul stadializării, atunci medicamentul nu este utilizat.
Serurile cu un rezultat negativ trebuie considerate ca neconținând anticorpi la antigenul Vi la un titru de diagnostic de 1:40 și mai jos.
Serurile care dau un rezultat pozitiv la o diluție de 1:40 trebuie reexaminate în varianta cu titrare a serului pentru a-și stabili titrul.
Luarea în considerare a rezultatelor la titrarea serurilor de sânge
Titrul seric este diluția sa, care dă hemaglutinare prin cel puțin 3 (+++) încrucișări.
Controlul calității diagnosticului este puțurile rândului pentru controlul SED. Nu ar trebui să existe hemaglutinare spontană în aceste godeuri - reacția este negativă (-). În caz contrar, studiul ar trebui repetat. Dacă hemaglutinarea apare în timpul stadializării, atunci medicamentul nu este utilizat.
Un set de reactivi Diagnosticum Salmonella VI-antigenic este destinat detectării în serul sanguin uman a anticorpilor specifici la antigenul V al Salmonella typhoid în reacția de hemaglutinare pasivă (RPHA).
CARACTERISTICI KIT
2.1. Principiul metodei.
Principiul activ al Diagnosticum Salmonella VI-antigenic este antigenul V fixat pe suprafața eritrocitelor. La interacțiunea cu seruri care conțin anticorpi la antigenul Vee se observă fenomenul de aglutinare a eritrocitelor.
2.2. COMPOZIȚIA SETULUI
| Reactivi | Cantitate |
| Diagnosticum eritrocitar Salmonella V-antigenic lichid- reprezinta o suspensie 1% de eritrocite formalinizate si sensibilizate cu antigen Vi Salmonella typhoid oaie in solutie tampon fosfat (pH 7,2 + 0,2; concentrație 0,06 mol/l). Suspensie omogenă de culoare maro fără fulgi; la sedimentare, se formează 2 straturi: un sediment maro dens de eritrocite și un supernatant gălbui transparent | 1 flacon - 3 ml |
| Receptor adsorbit de salmonella seric de diagnostic Vee uscat — masă omogenă de la alb cu o tentă maronie până la bej | 1 flacon - de la 0,1 ml |
| 1% suspensie de eritrocite de oaie formalizate, nesensibilizate- suspensie omogena de culoare maro fara fulgi; la sedimentare, se formează 2 straturi: un sediment maro dens de eritrocite și un supernatant gălbui transparent | 1 flacon - |
| Soluție pentru diluții de ser și stabilirea RPHA - Soluția de clorură de sodiu 0,9% este un lichid limpede, incolor, pH 6,5 până la 7,5 | 2 sticle - 8 ml fiecare |
| Placă cu fund rotund pentru reacții imunologice de unică folosință — constă din 8 rânduri, fiecare dintre ele include 12 găuri cu fund rotund, transparent, incolor | 1 buc |
CARACTERISTICI ANALITICE SI DIAGNOSTICE.
3.1. Diagnosticum trebuie aglutinat în RPHA cu ser de diagnostic al receptorului B adsorbit de Salmonella uscat într-o diluție de cel puțin 1:160.
Nivelul condiționat al caracteristicilor diagnostice ale serului sanguin al persoanelor sănătoase ar trebui considerat o diluție a serului nu mai mare de 1:20.
3.2. Timpul de analiză este de 2 ore.
3.3. Setul este conceput pentru 8 definiții.
MASURI DE PRECAUTIE
Când lucrați cu trusa, trebuie să respectați „Regulile de proiectare, măsuri de siguranță, salubritate industrială, regim antiepidemic și igiena personală atunci când lucrați în laboratoarele (departamente, departamente) ale instituțiilor sanitare și epidemiologice din sistemul Ministerului Sănătatea URSS (M., 1981).
Serurile analizate, precum și reactivii în contact cu acestea, trebuie considerate ca potențial infecțioase, capabile să păstreze sau să transmită pe termen lung HIV, virusul hepatitei sau orice alt agent cauzator al unei infecții virale - trebuie manipulate cu grijă. :
- lucrul cu mănuși de cauciuc;
- la pipetare este necesar să se folosească pipete automate;
- la sfârșitul lucrării, serurile analizate și reactivii în contact cu acestea, instrumentele, trebuie tratate cu o soluție dezinfectantă.
- Ștergeți echipamentul înainte și după lucru cu alcool etilic 70%.
Serurile analizate trebuie inactivate la 56 0 C timp de 30 de minute.
Serul uscat inactivat Vee cu receptorul adsorbit de salmonella de diagnosticare inclus în kit.
Rezultatele analizei obiective sunt garantate în următoarele condiții:
- depozitarea tuturor reactivilor trusei trebuie efectuată la o temperatură de 2 până la 8 0 С;
- nu utilizați reactivi expirați;
- nu utilizați reactivii trusei dacă nu sunt etichetați corespunzător pe ambalaj;
- pentru RPHA, utilizați reactivii incluși numai în acest kit.
2. diagnosticum
4.de la microbi distruși (izolarea Ag specific)
Diagnosticul eritrocitar HBs
2. diagnosticum
4.suspendarea er.oilor tratate cu tanin și precipitate a\g HBs
5. Pentru a detecta anticorpi specifici în serul sanguin
Diagnosticum gp120
2. diagnosticum
4.separa a\g excit. HIV
5. Pentru a detecta HIV
Diagnosticul eritrocitelor tetanosului
2. diagnosticum
4.suspendarea er.oilor tratate cu tanin cu a\g excitare a tetanosului
5. pentru a detecta anticorpi specifici în serul sanguin (la excitația tetanosului
Antigen cardiolipin pentru microprecipitare
2. diagnosticum
4.extracția fracțiilor lipidice din inima unui taur sănătos
5. Pentru a detecta anticorpi specifici în serul sanguin
Antigen treponemal ultrasunet
2. diagnosticum
4.din mort ex. sifilis
5. Pentru a detecta anticorpi specifici în serul sanguin
Diagnostic de tularemie corpusculară
2. diagnosticum
4.particulelor patogene individuale
5. Pentru a detecta anticorpi specifici în serul sanguin
Diagnostic de dizenterie
2. diagnosticum
4. suspendare din ucis m \ o
5. Pentru a detecta anticorpi specifici în serul pacientului
Diagnosticul eritrocitar de la Shigella Sonne
2. diagnosticum
4. suspensie de er. oaie, tratată cu tonină
5. Pentru a detecta anticorpi specifici în serul sanguin
Diagnosticum din Salmonella typhimurium
2. diagnosticum
4.din mort ex. salmonela
5. Pentru a detecta anticorpi specifici în serul sanguin
Seruri
Ser antigangrenos de cal 5000 UI
2.ser
4. din serul sanguin al hiperim.cailor cu anatoxă gangrenică gazoasă excitatoare
6.parenteral, dupa un test cu globulina 1:100
imunoglobulină umană normală
2.ser
4. din serul sanguin al donatorului
5.form-e trece. specific cumparat artele. imm
6. parenteral
ser de antrax precipitant
2.ser
4. din serul sanguin al animalelor hiperimunizate a\g excit.sib. ulcere
6.reacție de precipitare (RP)
Ser botulinic tip - A 400 UI
2.ser
5. pentru a detecta un antigen specific în materialul de testat
6.reacție de neutralizare (RN)
Globulină de antrax
2.ser
4. din serul sanguin al animalelor hiperimunizate a\g ulcere excitabile
5.form-e trece. specific cumparat artele. imm
6. parenteral
Ser hemolitic
2.ser
4. din serul animalelor hiperimunizate cu eritrocite ale animalelor din altă specie
5. pentru a detecta un antigen specific în materialul de testat
Ser de aglutinare a holerei Ogawa
2.ser
4. din serul sanguin al animalelor hiperimunizate
5. pentru a detecta un antigen specific în materialul de testat
Ser luminos de tularemie
2.ser
4. din serul sanguin al animalelor hiperimunizate a\g tular excitabil.
5. pentru a detecta un antigen specific în materialul de testat
Imunoglobulina impotriva encefalitei umane transmise de capuse
2.ser
4. din serul sanguin al donatorului
5.form-e trece. specific cumparat artele. imm
6. parenteral
Ser de diagnostic ESNO
2.ser
4. din serul sanguin al animalelor hiperimunizate cu virusuri ESNO
5. pentru a detecta un antigen specific în materialul de testat
Imunoglobulina umana impotriva hepatitei B
2.ser
4. din serul sanguin al unui donator vaccinat împotriva hepatitei B
5.form-e trece. specific cumparat artele. imm
6. parenteral
Ser antiglobulinic marcat cu perkoxidază
2.ser
4. din serul sanguin al animalelor hiperimunizate
5. pentru a detecta un antigen specific în materialul de testat (HIV)
Imunoglobulina antirabică
2.ser
4. din serul sanguin al donatorului
5.form-e trece. specific cumparat artele. imm
Certificat de înregistrare nr. RZN 2016/3905 din 04.04.2016
Scop
Trusa de reactivi „Diagnosticum erythrocyte Salmonella Vi-antigenic pentru RPHA” (SED-Vi) este concepută pentru a detecta anticorpii la antigenul Vi al agentului cauzator al febrei tifoide în serurile din sânge uman prin testul de hemaglutinare pasivă (RPHA).
Setare caracteristică
Principiul de funcționare
În prezența anticorpilor la agentul cauzator al febrei tifoide, se observă hemaglutinarea eritrocitelor de pui sensibilizate cu antigenul Vi, ceea ce duce la formarea unei „umbrele” de eritrocite așezate în partea inferioară a puțurilor în formă de U ale plăcii. . În absența anticorpilor la agentul cauzator al febrei tifoide, eritrocitele sedimentate formează un „punct”.
Set compoziția
| Nume reactiv | Descriere | Cantitate in set |
|---|---|---|
| Diagnosticum erythrocyte Salmonella Vi-antigenic, uscat 6% (SED) | Eritrocite de pui formalizate sensibilizate cu antigenul S.typhi Vi. Masă higroscopică uscată de culoare maro. După dizolvare - o suspensie de culoare roșu-maro. | 1 flacon, de la 0,6 ml |
| Salmonella seric de diagnosticare adsorbită, receptor Vi, uscat (diluat 1:20, (K+)) | Ser de iepure adsorbit cu Salmonella, receptor Vi, diluat 1:20. Masă poroasă higroscopică uscată de culoare albă. După dizolvare, este un lichid limpede gălbui sau incolor. | 1 flacon, de la 0,3 ml |
| Diluant de probă (RID) | Lichid limpede albastru-violet. | 1 flacon, 10 ml |
| Soluție tampon fosfat (PBS) | Lichid transparent incolor. | 1 flacon, 10 ml |
| Placă polimerică de unică folosință pentru reacții imunologice | Placă polimerică de unică folosință pentru reacții imunologice din polistiren transparent incolor. | 1 BUC. |
Caracteristici de diagnostic
Diagnosticum trebuie aglutinat în RPHA cu ser de diagnostic pentru salmonella adsorbit, receptor Vi, uscat (la o diluție de 1:20), la titrul indicat pe eticheta serului. Nivelul condiționat al caracteristicilor diagnostice ale serului sanguin al persoanelor sănătoase ar trebui considerat o diluție a serului nu mai mare de 1:20. Timpul de analiză este de 3040 minute. Trusa este concepută pentru studiul a 42 de seruri de sânge în opțiunea de screening sau a 10 seruri de sânge în opțiunea de titrare.
Masuri de precautie
Trusa este doar pentru diagnostic in vitro. Substanțele incluse în componentele kit-ului sunt inactivate și sigure. Când lucrați cu kitul, trebuie respectate SP 1.3.2322-08 și SanPiN 2.1.7.2790-10.
Echipamente și materiale suplimentare
Echipamente, materiale, soluții:
- Dozatoare cu pipete cu 1 canal cu volum de dozare variabil 5-40 µl; 40 - 200 ui; 200 - 1000 ui şi 1000 - 5000 ui;
- dozatoare cu pipete cu 8 sau 12 canale cu volum de dozare variabil 5-40 µl și 40-200 µl;
- apă distilată (GOST 6709-72).
Probele analizate
Probele de ser de sânge studiate sunt păstrate la o temperatură de 2 până la 8 °C timp de cel mult 3 zile din momentul prelevării probei de sânge. Este permisă păstrarea zerului în stare congelată la o temperatură care nu depășește minus 18 ° C timp de cel mult 1 an. Înainte de utilizare, probele sunt dezghețate la o temperatură de 16 până la 25 °C și amestecate prin agitare. Reînghețarea nu este permisă. Nu trebuie utilizate probe cu creștere bacteriană și hemoliză. Înainte de a stabili reacția, serurile de testat sunt încălzite la 56 °C timp de 30 de minute.
Efectuarea unei analize
Prepararea serului de diagnostic de control (K+)
Se prepară o soluție de lucru de ser adsorbit de salmonella diagnostic, receptor Vi, uscat (diluat 1:20) din 0,3 ml (K+). Pentru a face acest lucru, la conținutul flaconului cu K+ se adaugă 0,3 ml de soluție tampon fosfat (PBS). Cantitatea rămasă de ser poate fi alicotată și păstrată congelată la o temperatură care nu depășește minus 18 ° C timp de cel mult 6 luni.
Pregătirea unui diagnostic pentru salmonella eritrocitară (SED)
Pentru a prepara o diluție de lucru a unei suspensii de salmonella erythrocyte diagnosticum, se adaugă 0,6 ml de apă distilată la conținutul unui flacon cu 6% SED uscat și se lasă la hidratare timp de 2 ore la o temperatură de 16 până la 25 °C. Apoi se adaugă la soluție 2,4 ml de soluție tampon fosfat (PBS). Soluția de lucru este păstrată la o temperatură de 2 până la 8 ° C timp de cel mult 1 lună. Înghețarea nu este permisă.
Declarația RPHA în timpul screening-ului serurilor de sânge
Serurile de screening sunt diluate în godeurile plăcii după cum urmează:
- în primele godeuri ale tabletei se prepară diluții preliminare de 1:20, adăugându-le mai întâi 190 μl de soluție RIP, apoi 10 μl din serul studiat. Fiecare ser este adăugat cu un vârf separat și pipetat cu atenție (în acest caz, culoarea soluției din godeuri ar trebui să se schimbe de la albastru-violet la verde după adăugarea serurilor);
- Se prepară diluții de screening de 1:40 în al doilea godeu, introducând mai întâi 25 pl de soluție PBS în ele, apoi 25 pl de ser pre-diluat și pipetând cu atenție.
Cu fiecare setare a RPHA, este necesar să se efectueze o determinare de control a titrului K +. Pentru a face acest lucru, se adaugă 50 μl de soluție PBS la 8 godeuri dintr-un rând lung. Apoi, se adaugă 50 pl de soluție de lucru K+ (1:20) în primul godeu, se pipetează cu atenție și se transferă în godeurile următoare, câte 50 pl fiecare, primind diluții de două ori de la 1:40 la 1:5120. În alte 4 godeuri, se adaugă 50 μl de soluție de PBS pentru a controla SED pentru absența hemaglutinării spontane.
În toate godeurile tabletei cu diluții de screening ale serurilor studiate (cu excepția primului care conține RIP) și martori, se adaugă 25 μl de SED. Amestecați suspensia SED într-o sticlă sau baie înainte de utilizare! Tableta este agitată bine și lăsată la o temperatură de 16 până la 25 ° C timp de 30 până la 40 de minute până la sedimentarea completă a eritrocitelor în control.
Declarația RPHA în timpul titrării serurilor de sânge studiate
Titrarea serurilor studiate și a soluției de lucru K+ se efectuează pe rânduri scurte de tabletă. Un alt rând scurt este utilizat pentru a controla absența hemaglutinării spontane a EDS.
În primele godeuri cu rânduri scurte pentru titrarea serului de testat se adaugă 180 μl de soluție RIP. Toate celelalte godeuri sunt umplute cu 50 pl de soluție PBS.
În godeurile cu soluția RIP se adaugă 20 μl din serul de testat (se obține o diluție 1:10). Fiecare ser se adaugă cu vârful său și se pipetează cu atenție (culoarea soluției din godeuri ar trebui să se schimbe de la albastru-violet la verde). Apoi, 50 μl sunt transferați din primele godeuri în următoarele godeuri ale rândurilor, primind diluții de două ori de la 1:20 la 1:1280. La sfârșitul titrarii, din ultimele godeuri se scot 50 μl de soluții.
Cu fiecare setare a RPHA, este necesar să se efectueze o determinare de control a titrului K +. Pentru a face acest lucru, se adaugă 50 μl de soluție PBS la 8 godeuri dintr-un rând lung. Apoi, se adaugă 50 pl de soluție de lucru K+ (1:20) în primul godeu, se pipetează cu atenție și se transferă în godeurile următoare, câte 50 pl fiecare, primind diluții de două ori de la 1:40 la 1:5120.
Pentru a controla diagnosticul pentru absența hemaglutinării spontane, se adaugă 50 μl de soluție PBS în toate godeurile dintr-un rând scurt.
În toate godeurile (cu excepția primelor godeuri din fiecare rând pentru serurile studiate care conțin RIP) se adaugă 25 µl de SED. Amestecați suspensia SED într-o sticlă sau baie înainte de utilizare! Tableta este agitată bine și lăsată la o temperatură de 16 până la 25 ° C timp de 30 - 40 de minute până la sedimentarea completă a eritrocitelor în control.
Contabilitatea si interpretarea rezultatelor
Contabilizarea rezultatelor la screening-ul serurilor de sânge
Contabilitatea rezultatelor se realizează pe o scară condiționată de patru încrucișări. Titrul seric este diluția sa, care dă hemaglutinare prin cel puțin 3 (+++) încrucișări.
- ++++ (4+) - eritrocitele aglutinate formează o „umbrelă” inversată în fundul găurii, marginile acesteia cad;
- +++ (3+) - eritrocitele aglutinate formează o „umbrelă” inversată în fundul găurii, marginile sale sunt uniforme;
- ++ (2+) - alături de eritrocitele aglutinate, există un sediment sub forma unui mic „inel” de eritrocite neaglutinate în fundul găurii;
- + (1+) - majoritatea eritrocitelor nu sunt aglutinate și se depun sub forma unui mic „inel”;
- (-) - eritrocitele neaglutinate formează un „punct” în fundul puțului.
Un rezultat pozitiv este considerat a fi hemaglutinarea eritrocitelor încărcate cu antigen Vi prin cel puțin 3 încrucișări (+++).
Controlul calității diagnosticului este de 4 godeuri din rândul de control, în care au fost adăugate doar soluția PBS și SED. Nu ar trebui să existe hemaglutinare spontană în aceste godeuri - reacția este negativă (-). În caz contrar, studiul ar trebui repetat. Dacă hemaglutinarea apare în timpul stadializării, atunci medicamentul nu este utilizat.
Serurile cu un rezultat negativ trebuie considerate ca neconținând anticorpi la antigenul Vi la un titru de diagnostic de 1:40 și mai jos.
Serurile care dau un rezultat pozitiv la o diluție de 1:40 trebuie reexaminate în varianta cu titrare a serului pentru a-și stabili titrul.
Luarea în considerare a rezultatelor la titrarea serurilor de sânge
Titrul seric este diluția sa, care dă hemaglutinare prin cel puțin 3 (+++) încrucișări.
Controlul calității diagnosticului este puțurile rândului pentru controlul SED. Nu ar trebui să existe hemaglutinare spontană în aceste godeuri - reacția este negativă (-). În caz contrar, studiul ar trebui repetat. Dacă hemaglutinarea apare în timpul stadializării, atunci medicamentul nu este utilizat.
Un set de reactivi Diagnosticum Salmonella VI-antigenic este destinat detectării în serul sanguin uman a anticorpilor specifici la antigenul V al Salmonella typhoid în reacția de hemaglutinare pasivă (RPHA).
CARACTERISTICI KIT
2.1. Principiul metodei.
Principiul activ al Diagnosticum Salmonella VI-antigenic este antigenul V fixat pe suprafața eritrocitelor. La interacțiunea cu seruri care conțin anticorpi la antigenul Vee se observă fenomenul de aglutinare a eritrocitelor.
2.2. COMPOZIȚIA SETULUI
| Reactivi | Cantitate |
| Diagnosticum eritrocitar Salmonella V-antigenic lichid- reprezinta o suspensie 1% de eritrocite formalinizate si sensibilizate cu antigen Vi Salmonella typhoid oaie in solutie tampon fosfat (pH 7,2 + 0,2; concentrație 0,06 mol/l). Suspensie omogenă de culoare maro fără fulgi; la sedimentare, se formează 2 straturi: un sediment maro dens de eritrocite și un supernatant gălbui transparent | 1 flacon - 6 ml |
| Receptor adsorbit de salmonella seric de diagnostic Vee uscat — masă omogenă de la alb cu o tentă maronie până la bej | 1 flacon - de la 0,1 ml |
| 1% suspensie de eritrocite de oaie formalizate, nesensibilizate- suspensie omogena de culoare maro fara fulgi; la sedimentare, se formează 2 straturi: un sediment maro dens de eritrocite și un supernatant gălbui transparent | 1 flacon - |
| Soluție pentru diluții de ser și stabilirea RPHA - Soluția de clorură de sodiu 0,9% este un lichid limpede, incolor, pH 6,5 până la 7,5 | 2 sticle - 8 ml fiecare |
| Placă cu fund rotund pentru reacții imunologice de unică folosință — constă din 8 rânduri, fiecare dintre ele include 12 găuri cu fund rotund, transparent, incolor | 1 buc |
CARACTERISTICI ANALITICE SI DIAGNOSTICE.
3.1. Diagnosticum trebuie aglutinat în RPHA cu ser de diagnostic al receptorului B adsorbit de Salmonella uscat într-o diluție de cel puțin 1:160.
Nivelul condiționat al caracteristicilor diagnostice ale serului sanguin al persoanelor sănătoase ar trebui considerat o diluție a serului nu mai mare de 1:20.
3.2. Timpul de analiză este de 2 ore.
3.3. Setul este conceput pentru 8 definiții.
MASURI DE PRECAUTIE
Când lucrați cu trusa, trebuie să respectați „Regulile de proiectare, măsuri de siguranță, salubritate industrială, regim antiepidemic și igiena personală atunci când lucrați în laboratoarele (departamente, departamente) ale instituțiilor sanitare și epidemiologice din sistemul Ministerului Sănătatea URSS (M., 1981).
Serurile analizate, precum și reactivii în contact cu acestea, trebuie considerate ca potențial infecțioase, capabile să păstreze sau să transmită pe termen lung HIV, virusul hepatitei sau orice alt agent cauzator al unei infecții virale - trebuie manipulate cu grijă. :
- lucrul cu mănuși de cauciuc;
- la pipetare este necesar să se folosească pipete automate;
- la sfârșitul lucrării, serurile analizate și reactivii în contact cu acestea, instrumentele, trebuie tratate cu o soluție dezinfectantă.
- Ștergeți echipamentul înainte și după lucru cu alcool etilic 70%.
Serurile analizate trebuie inactivate la 56 0 C timp de 30 de minute.
Serul uscat inactivat Vee cu receptorul adsorbit de salmonella de diagnosticare inclus în kit.
Rezultatele analizei obiective sunt garantate în următoarele condiții:
- depozitarea tuturor reactivilor trusei trebuie efectuată la o temperatură de 2 până la 8 0 С;
- nu utilizați reactivi expirați;
- nu utilizați reactivii trusei dacă nu sunt etichetați corespunzător pe ambalaj;
- pentru RPHA, utilizați reactivii incluși numai în acest kit.
Vi-Diagnosticum
Diagnosticum Vee
Vi-antigenic
