Utilizarea bacteriofagelor în medicină. Bacteriofagi și aplicarea lor practică bacteriofagi
Preparatele fagice sunt utilizate pentru tratamentul și prevenirea bolilor infecțioase, precum și în diagnosticare - pentru a determina sensibilitatea fagilor și tiparea fagilor în identificarea microorganismelor. Acțiunea fagilor se bazează pe specificitatea lor strictă. Efectul terapeutic și profilactic al fagilor este determinat de activitatea litică a fagului însuși, precum și de proprietatea de imunizare a componentelor (antigenelor) celulelor microbiene distruse din fagolizate, în special în cazul utilizării repetate. La obținerea preparatelor de fagi, se folosesc tulpini de producție dovedite de fagi și, în consecință, culturi tipice de microorganisme. O cultură bacteriană într-un mediu nutritiv lichid, care se află în faza logaritmică de reproducere, este infectată cu o suspensie mamă de fagi.
Cultura lizată cu fagi (de obicei a doua zi) este filtrată prin filtre bacteriene și se adaugă o soluție de chinosol ca conservant la filtratul care conține fagi.
Produs finit fagul este un lichid limpede culoare gălbuie. Pentru depozitare mai lungă, unii fagi sunt disponibili sub formă uscată (sub formă de tablete). În tratament și prevenire infectii intestinale fagii sunt utilizați simultan cu o soluție de bicarbonat de sodiu, deoarece conținutul acid al stomacului distruge fagul. Fagul nu rămâne mult timp în organism (5-7 zile), de aceea se recomandă reaplicarea.
produs în Uniunea Sovietică următoarele medicamente utilizat pentru tratamentul și prevenirea bolilor: tifoidă, salmopeloză, dizenterie, colifag, fag stafilococic și streptococ. În prezent, fagii sunt utilizați pentru tratament și prevenire în combinație cu antibiotice. Această aplicație oferă mai multe actiune eficienta pentru bacterii rezistente la antibiotice.
Bacteriofagii de diagnosticare sunt utilizați pe scară largă pentru a identifica bacteriile izolate de la un pacient sau de la obiectele din mediu infectate. Cu ajutorul bacteriofagelor, datorită specificității lor ridicate, este posibil să se determine tipurile de bacterii și, cu o precizie mai mare, tipuri individuale de bacterii izolate. Au fost dezvoltate diagnosticarea fagilor și tiparea fagică a bacteriilor din genul Salmonella, Vibrio și stafilococi. Tiparea fagilor ajută la stabilirea sursei infecției, la studiul relațiilor epidemiologice și la distingerea dintre cazurile sporadice și cele epidemice de boli.
Diagnosticarea fagilor și tiparea fagilor se bazează pe principiul cultivării în comun a unui microorganism izolat cu speciile sau tipul de fagi corespunzătoare. rezultat pozitiv se consideră prezența unei lize bine pronunțate a culturii studiate cu fagul speciei, iar apoi cu unul dintre fagii tipici.
Bacteriofagi, aplicare în medicină.
Bacteriofagi. Aplicare în practica medicală.
Bacteriofagii sunt viruși bacterieni capabili să pătrundă în mod specific în celulele bacteriene, reproducându-le și provocând liza.
Se găsesc oriunde există bacterii - în sol, apă, tract intestinal persoană. Toate sunt inerente fagului caracteristici biologice care sunt caracteristice virusurilor.
Morfologia fagilor:
Fagii diferă ca formă - filamentoși, sferici, cubici, fagi având un cap și o coadă (reminiscență a unui spermatozoid).
Dimensiunile sunt mici, medii si mari.
Fagii mari, formați dintr-un cap și o coadă, sunt cei mai complexi. Capul are forma unui icosaedru. Capul este conectat cu procesul cu ajutorul unui guler și a unei umbrele. În interiorul procesului există o tijă cilindrică goală care comunică cu capul, din exterior procesul are o teacă proteică capabilă de contracție, procesul caudal se termină într-o placă bazală hexagonală cu vârfuri scurte, din care se extind structurile fibrile filamentoase. Placa și vârfurile conțin lizozim. Apendicele are 6 vilozități, care asigură o fixare strânsă a fagului de celula bacteriană. Pot exista fagi cu o înveliș care nu se micșorează, fagi cu procese scurte, fagi cu un analog de proces și fagi fără proces.
Rezistența fagilor: Fagii tolerează temperaturi de 50-60°C. Rezista la îngheț, pier la o temperatură de 70 ° C. Ele nu sunt afectate de otrăvuri precum cianura, fluorura, precum și cloroformul și fenolul. Fagii sunt bine conservați în fiole sigilate, dar pot fi distruși prin fierbere, acțiunea acizilor și iradierea UV.
Mecanismul de interacțiune a fagilor cu o celulă microbiană:
În funcție de interacțiune, se disting fagii virulenți și temperați.
Fagi virulenți - intră în celula bacteriană, se reproduc și provoacă liza bacteriilor.
Există o serie de caracteristici pentru fagii cu un proces și o teacă de contractare:
Acești fagi sunt adsorbiți pe suprafața celulei bacteriene cu ajutorul fibrilelor procesului în prezența receptorilor corespunzători. Apoi este activată enzima ATP-aza, ceea ce duce la o contracție a tecii procesului caudat și la introducerea unei tije goale în celulă. O enzimă, lizozima, este implicată în procesul de străpungere a pereților celulari.
ADN-ul fag trece prin tulpina goală a excrescenței și este injectat în celulă. Capsida și procesul rămân pe suprafața celulei. Apoi proteina fagică și acidul nucleic sunt reproduse în interiorul celulei. Etapa următoare constă în asamblarea și formarea particulelor de fagi mature. Etapa finală: liza celulară și eliberarea particulelor fagice mature din aceasta. Liza poate avea loc atât din interior - există o ruptură a peretelui celular și eliberarea fagilor maturi în Mediul extern iar din exterior - fagii fac multe găuri în peretele celular prin care curge conținutul celulei; cu o astfel de liză, fagul nu se înmulțește.
Fagii temperați - nu lizează toate celulele din populație, intră în simbioză cu unele dintre celule, drept urmare ADN-ul fagului este integrat în cromozomul celular. În acest caz, genomul fagului se numește profag.
Profegul devine o parte a cromozomului celular și în timpul reproducerii sale se reproduce sincron cu genomul celulei fără a provoca liza acestuia și este transmis descendenților.
Fenomenul de simbioză a unei celule microbiene cu un profag se numește lizogenie.
Și cultura bacteriilor care conțin profag este lizogenă, acest nume reflectă capacitatea profagului de a spontan sau sub influența unor factori. mediu inconjurator se deplasează în citoplasmă și se comportă ca o bacterie virulentă care lizează fagii. La trecerea la o formă virulentă, un fag temperat poate captura o parte a cromozomului unei celule bacteriene și, la liză, poate fi transferat în alta.
În funcție de spectrul de acțiune, fagii sunt împărțiți în:
1. Polivalent - bacterii înrudite (Salmonella phage lizează numai Salmonella).
2. Specii (monofage) - liză bacteriile dintr-o singură specie.
3. Specific tip - lizează selectiv variantele individuale de bacterii din cadrul unei specii (patogen Staphylococcus aureus - 33 seturi).
Uz practic:
Preparatele fagice sunt utilizate pentru tratamentul și prevenirea infecțiilor și diagnosticarea acestora. Acțiunea fagilor se bazează pe specificitatea lor strictă; tulpinile de producție și culturile bacteriene corespunzătoare sunt utilizate pentru a obține un preparat de fagi.
Forme de eliberare: lichide, uscate, sub formă de tablete, aerosoli, supozitoare. Introdus în organism parenteral, enteral și local. Folosit în scopuri terapeutice și profilactice diverse boli(dizenterie, holeră, diverse boli purulent-inflamatorii).
Diagnosticarea fagilor: principiul diagnosticului se bazează pe cultivarea în comun a culturilor de testare cu fagi cunoscuți și necunoscuți, un rezultat pozitiv este considerat în prezența lizei celulelor bacteriene. Liza poate fi observată pe lichid și solid medii nutritive. Pe mediile nutritive lichide apare clarificarea suspensiei bacteriene, iar pe cele dense se formează zone de lipsă de creștere.
Tiparea fagilor: determinarea variantei de tip a unei specii folosind un set de fagi de tip. Se produc fagi tifoizi, fagi de diagnosticare a holerei, fagi de salmonella și fagi dizenterici. Tiparea fagilor este necesară atunci când se efectuează o analiză epidemiologică a bolii și pentru a stabili sursa și căile de transmitere. Prin detectarea unui fag, se apreciază conținutul microorganismelor corespunzătoare.
Datorită efectului lor distructiv (litic) asupra bacteriilor, fagii pot fi utilizați în scopuri terapeutice și profilactice în diferite boli (dizenterie, holeră, diverse boli pioinflamatorii etc.). Seturi de fagi standard, inclusiv cei internaționali, sunt utilizate pentru tiparea fagilor agenților patogeni ai unui număr de boli (holera, febră tifoidă, salmoneloză, difterie, stafilococ și alte boli). Bacteriofagii sunt, de asemenea, utilizați în Inginerie genetică ca vectori care transferă segmente de ADN, este posibil și transferul natural de gene între bacterii prin intermediul anumitor fagi (transducție). De regulă, acestor pacienți li se prescriu antibiotice. Dar datorită faptului că bacteriile cu mutații constante dobândesc rezistență la antibiotice, eficacitatea lor este anul trecut slăbit. Atenția cercetătorilor a fost atrasă de bacteriofagi – viruși care devorează bacteriile. Spre deosebire de antibiotice, care distrug atât nocive cât și microfloră sănătoasă organism, bacteriofagii sunt doar selectivi bacterii patogene. Cum funcționează bacteriofagii în organism? Ele pătrund doar în anumite celule și interacționează cu ADN-ul lor, creând un efect lizogen sau litic. Acționând asupra microbilor de tip litic, bacteriofagii îi distrug, ceea ce le permite să se înmulțească rapid. Tipul lizogen este pătrunderea genomului fag în genomul bacterian, sinteza lor și trecerea ulterioară de la o generație la alta. Informațiile despre bacteriofagi au apărut în urmă cu mai bine de un secol, când erau folosite pentru a trata stafilococul auriu. În prezent, ele sunt utilizate pe scară largă pentru prevenirea și tratamentul infecțiilor intestinale, stafilococice, streptococice, tifoide și multe alte infecții. Medicină modernă caută metode care să nu folosească bacteriofagi vii, ci enzime care acționează asupra bacteriilor patogene prin liză. Aplicarea lor poate fi sub formă de spray nazal sau oral, pastă de dinți, alimente, aditivi alimentari. Eficacitatea utilizării bacteriofagelor constă în absența contraindicațiilor și a complicațiilor, compatibilitatea cu alte medicamente, influență activă pentru microbi rezistenți la antibiotice. Datorită acestor proprietăți, bacteriofagii sunt evaluați ca fiind medicamentele viitorului pentru lupta reusita cu infectii.
Cele mai importante avantaje ale terapiei cu fagi sunt sensibilitate crescută microflora patogenă la bacteriofag, posibilitatea utilizării inițiale a dozelor mici de bacteriofag, compatibilitatea cu toate tipurile de terapie cu antibiotice tradiționale, absența contraindicațiilor pentru profilaxia fagilor și terapia cu fagi. S-a stabilit că în natură nu există microorganisme care să fie absolut rezistente la bacteriofagi. Este important ca reproducerea bacteriofagelor să fie posibilă numai în prezența bacteriilor sensibile la acesta. După moartea ultimei celule microbiene aflate în focarul unei leziuni infecțioase, aceasta o oprește activitate viguroasăși este complet eliminat din organism.
Datorită scăderii observate actiune terapeutica preparatele antibiotice ale bacteriofagelor sunt utilizate în practica clinica ca alternativă la antibiotice și în combinație cu acestea din urmă. Preparatele bacteriofage nu sunt inferioare preparatelor antibacteriene din punct de vedere al eficacității, ele stimulează factori locali de specific și imunitatea nespecificăși nu provoacă reacții secundare toxice și alergice. Bacteriofagii se administrează pe cale orală, și se folosesc și pentru irigarea rănilor, pentru injectare în cavitățile drenate - abdominale, pleurale, sinusale, urechii medii, abcese, răni, uter, vezică urinară. Cu aplicarea orală și cu aerosoli, precum și atunci când sunt aplicate pe suprafața membranelor mucoase, bacteriofagii pătrund în sânge și limfă și sunt excretați prin rinichi, dezinfectând tractul urinar.
În prezent, interesul pentru terapia cu fagi a fost reînnoit în chirurgie, urologie, oftalmologie și traumatologie.
Preparatele terapeutice și profilactice ale bacteriofagelor sunt compuse din bacteriofagi policlonali virulenți cu o gamă largă de acțiune, care sunt și activi împotriva bacteriilor rezistente la antibiotice. Sunt produse sub formă lichidă, sub formă de tablete cu înveliș rezistent la acid, sub formă de supozitoare, unguente, linimente.
Preparatele bacteriofage sunt un filtrat steril de fagolizate bacteriene, se administrează pe cale orală, topic pentru irigarea rănilor și mucoaselor, introducerea în cavitatea uterului, vezicii urinare, urechii, sinusuri paranazale, precum și în cavitățile drenate - abdominale, pleurale și, de asemenea, în cavitatea abceselor după îndepărtarea exudatului.
Bacteriofagii sunt capabili să pătrundă rapid în sânge și limfă și sunt excretați prin rinichi cu urină. După cum se arată în studiile noastre, după ingestia a 30 ml de bacteriofag, particulele de fagi se găsesc în urină după 2 ore, iar concentrația lor maximă în urină este atinsă la 6-8 ore după ingestie.
Activitatea bacteriofagelor terapeutice și profilactice împotriva agenților patogeni ai bolilor purulent-septice și enterice este destul de ridicată - de la 72% la 90%, inclusiv împotriva tulpinilor de origine spitalicească, caracterizate prin rezistență multiplă la antibiotice. Conformitatea preparatelor de bacteriofagi cu structura atiologică modernă a agenților patogeni se realizează prin adaptarea lor constantă la tulpinile circulante datorită reînnoirii raselor de fagi și producției de ștampile bacteriene. Această caracteristică distinge fagii de alții antimicrobiene- antibiotice, eubiotice sau vaccinuri, în cazul în care tulpinile de producție sau tulpinile producătoare sau substanța sintetizată nu fac obiectul unor modificări. O astfel de plasticitate a preparatelor bacteriofagice asigură continuarea rezistenței fagice primare a agenților patogeni.
Beneficiile preparatelor cu bacteriofagi
Avantajele preparatelor bacteriofage includ o specificitate îngustă de acțiune, care, spre deosebire de antibiotice, nu provoacă inhibarea microflorei normale. Efectul stimulant al bacteriofagului stafilococic asupra bifidobacteriilor a fost dovedit - componenta esentiala microbiocenoza intestinala. Utilizarea bacteriofagelor pentru tratament boli infecțioase stimulează factori de imunitate specifică și nespecifică, care este deosebit de eficientă pentru tratamentul bolilor cronice boli inflamatorii pe fondul stărilor imunosupresoare, bacteriopurtător.
Muncă experimentală și lungă observatii clinice s-a dovedit imposibilitatea transmiterii plasmidelor de rezistență la antibiotice și toxicitate prin preparate terapeutice și profilactice ale bacteriofagelor, deoarece sunt complexe policlonale de bacteriofagi virulenți.
În Rusia, țările CSI, Polonia, Franța, Spania, bacteriofagii sunt utilizați pe scară largă în medicină și medicina veterinară. Acumulat experiență grozavă utilizarea bacteriofagelor în tratamentul infecțiilor intestinale: o eficacitate clinică ridicată a terapiei cu fagi pentru afecțiuni acute și dizenterie cronică, salmoneloză, însoțită de igienizarea purtătorilor. S-a dovedit eficacitatea epidemiologică ridicată a utilizării profilactice a bacteriofagelor de dizenterie, tifoidă și salmonella.În experimente epidemiologice controlate efectuate în instituții preșcolare și la întreprinderile industriale, s-a stabilit o scădere a ratei de incidență de 3-6 ori. Utilizarea bacteriofagelor a dat rezultate bune în tratamentul bolilor cauzate de bacterii oportuniste, disbacterioză, leziuni purulente piele, ORL - organe, sistem musculo-scheletic, sistemul genito-urinar, sisteme ale organelor circulator și respirator, inclusiv la nou-născuți și copiii din primul an de viață.
O condiție importantă care asigură eficacitatea tratamentului cu preparate fagice este o anumită sensibilitate fagică a agentului patogen.
Experiența îndelungată a terapiei cu fago la Institutul de Cercetare de Urologie este clară; Ca urmare a adaptării bacteriofagelor comerciali la tulpinile spitalicești care circulă în clinica urologică de la NPO Biofag, sensibilitatea fagică a tulpinilor a crescut cu 15% și a fost la sau peste nivelul de sensibilitate la cele mai moderne antibiotice străine. Pe fundalul utilizare pe termen lung bacteriofagi din spital printre tulpini spitaliceşti nu s-a observat nicio formare de rezistență la fagi, în timp ce rezistența la antibiotice a scăzut. Eficacitatea clinică a terapiei cu fagi a fost observată în 92% din cazuri, depășind adesea rezultatele terapiei cu antibiotice. Absența contraindicațiilor și a complicațiilor în utilizarea preparatelor bacteriofage, posibilitatea utilizării lor în combinație cu alte medicamente, inclusiv cu antibiotice, activitate împotriva tulpinilor rezistente la antibiotice și adaptarea bacteriofagelor la agenți patogeni moderni- toate acestea fac posibilă evaluarea preparatelor bacteriofage ca un mijloc extrem de eficient și promițător de tratament de urgență al infecțiilor purulente-septice și enterice. Cu toate acestea, fagii, acești „ordonați naturali”, pot fi folosiți nu numai pentru tratament, ci și pentru prevenirea bolilor infecțioase. Ele pot fi prescrise femeilor însărcinate, mamelor care alăptează și copiilor de orice vârstă, inclusiv prematurilor. Condiția principală pentru aplicarea lor cu succes este testarea culturii izolate pentru sensibilitatea la fagul corespunzător. S-a remarcat un model uimitor: spre deosebire de antibiotice, sensibilitatea tulpinilor clinice de microorganisme la bacteriofagi este stabilă și tinde să crească, ceea ce poate fi explicat prin îmbogățire. preparate medicale noi rase de fagi. Pe lângă aplicațiile medicale, bacteriofagii sunt utilizați pe scară largă în medicina veterinară; bacteriofag stafilococic deosebit de eficient în tratamentul mastitei la vaci. Preparatele bacteriofage sunt prescrise oral pentru boli organe interne sau local, direct pe leziune. Acțiunea fagului se manifestă deja la 2-4 ore de la introducerea lui (ceea ce este deosebit de important la terapie intensivă). Bacteriofagii pătrund în sânge, limfă și sunt excretați prin rinichi, igienizând tractul urinar.
Astfel, bacteriofagii folosesc:
În medicina veterinară pentru:
prevenire si tratament boli bacteriene păsări și animale;
tratamentul bolilor purulent-inflamatorii ale membranelor mucoase ale ochilor, cavității bucale;
prevenirea complicațiilor purulent-inflamatorii în arsuri, răni, intervenții chirurgicale;
În inginerie genetică:
pentru transducție - transmitere naturală gene între bacterii;
ca vectori care transferă secțiuni de ADN;
folosind fagi, este posibil să se construiască modificări direcționate în genomul ADN-ului gazdă;
În industria alimentară:
agenții care conțin fagi la scară largă prelucrează deja carne și produse de pasăre gata de consumat;
bacteriofagii sunt utilizați la producerea produselor alimentare din carne, păsări de curte, brânzeturi, produse vegetale etc.;
CM. ZAKHARENKO, candidat la științe medicale, profesor asociat, Militar Academiei medicale lor. CM. Kirov, Sankt Petersburg
Bacteriofagii sunt microorganisme unice, pe baza cărora a fost creat un grup special de preparate terapeutice și profilactice în ceea ce privește proprietățile și caracteristicile lor. Acțiunile lor subiacente sunt naturale mecanisme fiziologice interacțiunile dintre fagi și bacterii fac posibilă prezicerea diversității infinite atât a bacteriofagelor înșiși cât și moduri posibile aplicatiile lor. Pe măsură ce colecțiile de bacteriofagi se extind, vor apărea, fără îndoială, noi agenți patogeni țintă și se va extinde gama de boli în care fagii pot fi utilizați atât ca monoterapie, cât și ca parte a schemelor de tratament complexe.
Da, folosește piobacteriofag polivalent Sextafagul în tratamentul necrozei pancreatice infectate (Academia Medicală de Stat Perm numită după Academicianul E.A. Wagner) a făcut posibilă restabilirea rapidă a principalelor parametri ai homeostaziei și a funcțiilor organelor și sistemelor la pacienți. S-a înregistrat și o scădere semnificativă a numărului complicatii postoperatoriiși decese: la lotul pacientilor tratati cu terapie standard, mortalitatea a fost de 100%, in timp ce in trupa tratata cu BF - 16,6%.
Datorită inofensivității și reactogenității preparatelor BP, este posibilă utilizarea lor în practica pediatrica, inclusiv la nou-născuți. Experiența Copiilor Regionale Nijni Novgorod spital clinic, unde, în perioada de complicare a situației epidemiologice, alături de măsurile obișnuite antiepidemice, s-au folosit BP - Intesti-bacteriophage și BP Pseucfomonas aeruginosa. O scădere de 11 ori a incidenței infecției nosocomiale de etiologie cu Pseudomonas aeruginosa a arătat Eficiență ridicată Aplicații BF. Preparatele BF pot fi prescrise atât pentru tratamentul disbacteriozei, cât și al tulburărilor sistem digestivși pentru a preveni colonizarea mucoaselor tractului gastrointestinal de către bacterii oportuniste. Preparatele multicomponente de BF sunt ideale pentru ameliorarea imediată a primelor semne de tulburări gastro-intestinale.
Până în prezent, compania plănuiește întreaga linie domenii prioritare pentru dezvoltarea și producerea bacteriofagelor terapeutice și profilactice, care se corelează cu noile tendințe globale emergente. Sunt create și introduse noi preparate: s-au dezvoltat BF împotriva dinturilor și enterobacterii, se lucrează la crearea unui preparat de fagi împotriva Helicobacter pylori.
Un singur producător al acestor medicamente este NPO Microgen, potrivit raportului șefului adjunct al departamentului de știință și dezvoltare inovatoare Alla Lobastova, produce peste 2 milioane de pachete anual. Din păcate, ideile multor medici despre bacteriofagi sunt departe de a fi obiective. Nu mulți oameni știu că bacteriofagii activi împotriva aceluiași agent patogen pot aparține unor familii diferite, au cicluri de viață diferite etc. De exemplu, bacteriofagii P. aeruginosa aparțin familiilor Myoviridae, Podoviridae, Siphoviridae, ciclu de viață sau moderată. Tulpini diferite ale aceluiași agent patogen pot avea sensibilitate diferită la bacteriofagi. Majoritatea experților știu (a auzit, a folosit cineva) despre existența lichidului și a tabletei forma de dozare preparate terapeutice şi profilactice ale bacteriofagelor. Cu toate acestea, gama lor este mult mai largă, ceea ce poate fi atribuit unor avantaje necondiționate, mai ales în combinație cu o varietate de căi de administrare (administrare orală, clisme, aplicații, irigarea rănilor și a mucoaselor, introducerea în cavitățile plăgii etc.). La beneficii evidenteîn mod tradițional se face referire la bacteriofagi impact specific pe o populație destul de limitată de bacterii, limitată în existență în timp (până la dispariția populației țintă de microorganisme), absența unui astfel de efecte secundare ca toxice şi reactii alergice, reacții disbiotice etc. Aceste medicamente pot fi utilizate într-o varietate de grupe de vârstă si in timpul sarcinii. Bacteriofagii înșiși nu sunt alergeni semnificativi. Cazurile de intoleranță la preparatele bacteriofage sunt asociate în cea mai mare parte cu o reacție la componentele mediului nutritiv. Toți producătorii importanți ai acestui grup de medicamente se străduiesc pentru calitatea maximă a componentelor utilizate, ceea ce reduce probabilitatea unor astfel de reacții. În contextul creșterii rezistenței la antibiotice, unii autori sugerează luarea în considerare a bacteriofagelor drept cea mai bună alternativă la antibiotice. Preparatele terapeutice și profilactice ale bacteriofagelor sunt un cocktail de combinații special selectate (un complex de policloni foarte virulente virusuri bacteriene, special selectate împotriva celor mai comune grupuri de agenți patogeni infecții bacteriene) pe baza colecțiilor de fagi ale producătorului. Filialele Întreprinderii Unitare de Stat Federal NPO Microgen din Ufa, Perm și Nijni Novgorod – centre moderne producerea unor astfel de medicamente. Abilitatea de a crea personalizate microorganisme patogene preparatele terapeutice și profilactice ale bacteriofagelor este un alt avantaj major al acestui grup de preparate. Creșterea rezistenței bacteriene la medicamentele antimicrobiene și polietiologia frecventă a bolilor infecțioase moderne necesită terapie antibiotică combinată (două, trei și uneori mai multe medicamente antimicrobiene). Pentru selecție schema eficienta terapia cu antibiotice, pe lângă sensibilitatea reală a bacteriilor la medicament, este necesar să se țină cont de suficient număr mare factori. Terapia fagică are și anumite avantaje în acest sens. Pe de o parte, utilizarea unei combinații de bacteriofagi nu este însoțită de interacțiunea lor între ele și nu duce la o schimbare a schemelor de aplicare a acestora. În setul existent de bacteriofagi terapeutici, există o serie de combinații bine dovedite - bacteriofag coliproteus, piobacteriofag polivalent, intestinal-bacteriofag. Pe de altă parte, bacteriile nu mecanisme comune rezistență la antibiotice și fagi, prin urmare, acestea pot fi utilizate atât atunci când agentul patogen este rezistent la unul dintre medicamente, cât și în combinația de „antibiotic + bacteriofag”. Această combinație este eficientă în special pentru distrugerea biofilmelor microbiene. Experimentul arată în mod convingător că aplicare combinată antagoniştii de fier şi bacteriofagii pot perturba formarea biofilmelor Klebsiella pneumoniae. În același timp, se remarcă atât o scădere semnificativă a numărului de populații microbiene, cât și o scădere a numărului de celule „tinere”. Încă una caracteristică importantă acțiunea bacteriofagelor este un fenomen precum inducerea apoptozei. Unele tulpini de E. coli au gene care provoacă moartea celulelor după introducerea bacteriofagului T4 în ele. Astfel, ca răspuns la expresia genelor târzii ale fagului T4, gena lit (codifică o protează care distruge factorul de alungire EF-Tu necesar pentru sinteza proteinelor) blochează sinteza tuturor proteinelor celulare. Gena prrC codifică o nuclează care scindează ARNt al lizinei. Nucleaza este activată de produsul genei stp fagului T4. În celulele infectate cu fagi T4, genele rex (aparținând genomului fagului și exprimate în celulele lizogenice) determină formarea canalelor ionice, ducând la pierderea ionilor vitali de către celule și, ulterior, la moarte. Fagul T4 în sine poate preveni moartea celulelor prin închiderea canalelor cu proteinele sale, produse ale genelor rII. În cazul formării rezistenței bacteriene la un antibiotic, trebuie să căutați noi opțiuni de modificare a moleculei active sau substanțe fundamental noi. Din păcate, în ultimii ani, ritmul de introducere a noilor antibiotice a încetinit semnificativ. Situația cu bacteriofagi este fundamental diferită. Colecțiile producătorilor importanți includ zeci de tulpini de bacteriofagi gata preparate și sunt în mod constant completate cu noi fagi activi. Datorită monitorizării constante a sensibilității agenților patogeni izolați la bacteriofagi, producătorii ajustează compozițiile fagilor furnizate regiunilor. Datorită bacteriofagelor adaptați, este posibilă eliminarea focarelor de infecții nosocomiale cauzate de tulpini rezistente la antibiotice. 
La aportul oral bacteriofagii ajung rapid la focarele de localizare a infecției: atunci când sunt administrați oral de către pacienții cu boli purulent-inflamatorii, după o oră, fagii intră în fluxul sanguin, după 1-1,5 ore sunt detectați din exudatul bronhopulmonar și de pe suprafața rănilor de arsuri, după 2 ore. ore - din urină și, de asemenea, din lichidul cefalorahidian al pacienților cu leziuni cerebrale traumatice.
Astfel, bacteriofagii sunt microorganisme unice, pe baza cărora a fost creat un grup special de preparate terapeutice și profilactice în ceea ce privește proprietățile și caracteristicile lor. Mecanismele fiziologice naturale de interacțiune dintre fagi și bacterii care stau la baza acțiunii lor fac posibilă prezicerea unei varietăți infinite atât a bacteriofagelor înșiși, cât și a posibilelor moduri de utilizare a acestora. Pe măsură ce colecțiile de bacteriofagi se extind, vor apărea, fără îndoială, noi agenți patogeni țintă și se va extinde gama de boli în care fagii pot fi utilizați atât ca monoterapie, cât și ca parte a schemelor de tratament complexe. O viziune modernă asupra soartei viitoare a terapiei cu fagi ar trebui să se bazeze atât pe specificitatea ridicată a acțiunii lor, cât și pe necesitatea de a respecta cu strictețe toate regulile terapiei cu fagi. Contrastarea bacteriofagelor cu orice mijloc de terapie etiotropă este eronată.
Aplicarea practică a fagilor. Bacteriofagii sunt utilizați în diagnosticul de laborator al infecțiilor în timpul identificării intraspecifice a bacteriilor, adică la determinarea fagovarului (tipul de fag). Pentru a face acest lucru, se folosește metoda de tipare a fagilor, bazată pe specificitatea strictă a acțiunii fagilor: picături de diverși fagi specifici tipului de diagnostic sunt aplicate într-o cană cu un mediu nutritiv dens însămânțat cu un „gazon” de cultură pură. a agentului patogen. Fagul fag al unei bacterii este determinat de tipul de fag care i-a cauzat liza (formarea unei pete sterile, „placă” sau „colonie negativă”, fag). Tehnica de tipărire a fagilor este utilizată pentru a identifica sursa și modalitățile de răspândire a infecției (marcaj epidemiologic). Izolarea bacteriilor aceluiași fagovar de la diferiți pacienți indică o sursă comună de infecție.
Fagii sunt, de asemenea, utilizați pentru a trata și a preveni o serie de infecții bacteriene. Ele produc tifoidă, salmonella, dizenterie, pseudomonas, fagi stafilococici, streptococici și preparate combinate(coliproteice, piobacteriofage etc.). Bacteriofagii sunt prescriși conform indicațiilor pe cale orală, parenterală sau locală sub formă de lichide, tablete, supozitoare sau aerosoli.
Bacteriofagii sunt folosiți pe scară largă în inginerie genetică și biotehnologie ca vectori pentru obținerea ADN-ului recombinant.
Preparatele bacteriofage utilizate în practică sunt un filtrat dintr-o cultură în bulion a microbilor corespunzători lizați de un fag, care conține particule de fagi vii, precum și antigene bacteriene dizolvate eliberate din celulele bacteriene în timpul lizei lor. Preparatul rezultat - un bacteriofag lichid ar trebui să arate ca un complet lichid limpede Culoarea galbena intensitate mai mare sau mai mică.
În scopuri terapeutice și profilactice, fagii pot fi produși sub formă de tablete cu un înveliș rezistent la acid. Fagul uscat tabletat este mai stabil în timpul depozitării și mai ușor de utilizat. O tabletă de bacteriofag uscat corespunde la 20-25 ml de preparat lichid. Perioada de valabilitate a preparatului uscat și lichid este de 1 an. Bacteriofag lichid trebuie păstrat la o temperatură de + 2 +10 C, uscat - nu mai mare de +1 ° C, dar poate fi păstrat la frigider și la o temperatură negativă.
Bacteriofagul luat pe cale orală rămâne în organism timp de 5-7 zile. De regulă, administrarea unui bacteriofag nu este însoțită de reacții sau complicații. Nu există contraindicații pentru internare. Ele sunt utilizate sub formă de irigații, clătiri, loțiuni, tampoane, injecții și, de asemenea, injectate în cavități - abdominale, pleurale, articulare și vezica urinara, în funcție de localizarea agentului patogen.
Fagii de diagnostic sunt produși atât sub formă lichidă, cât și uscată în fiole.Înainte de începerea lucrului, bacteriofagul uscat este diluat. Dacă titrul, tr, DRT (doza de titru de lucru) este indicat pe fiole, acesta este utilizat în testul de lizabilitate a fagilor (metoda Otto) pentru a identifica bacteriile, dacă este indicat tipul de fag, atunci pentru tiparea fagilor - pentru a determina sursa de infectie.
Acțiunea unui bacteriofag asupra unei culturi microbiene în mediu lichid și pe mediu dens
Metoda lui Otto (Picătură care căde)
Faceți un gazon dens de semănat al culturii studiate. La 5-10 minute după însămânțare, pe suprafața uscată a mediului nutritiv se aplică un fag de diagnostic lichid. Vasul este înclinat ușor, astfel încât picătura de fag să se răspândească pe suprafața agarului. Cupa se pune într-un termostat timp de 18-24 de ore. Rezultatul este contabilizat absenta totala creșterea culturii la locul aplicării picăturilor de fagi.
Experimentați pe un mediu nutritiv lichid
Semănat culturii studiate în două eprubete cu mediu lichid. Un bacteriofag de diagnostic este adăugat într-o buclă într-o eprubetă („O”). După 18-20 de ore într-o eprubetă în care nu a fost adăugat bacteriofagul („K”), se observă o tulburare puternică a bulionului - cultura însămânțată a crescut. Bulionul din eprubetă, unde s-a adăugat bacteriofagul, a rămas transparent datorită lizei culturii sub influența sa.
Tiparea fagică a bacteriilor
După spectrul de acțiune, se disting următoarele bacteriofagi: tipuri de bacterii polivalente, înrudite cu liză; bacterii monovalente, lizante un anumit fel; tipuri (variante) de bacterii tipice, care lizează.
De exemplu, o tulpină de stafilococ patogen poate fi lizată de mai multe tipuri de fagi, astfel încât toți fagii (24) și tulpinile tipice stafilococi patogeni grupate in 4 grupe.
Metoda de tipare a fagilor are mare importanță pentru cercetarea epidemiologică, deoarece permite identificarea sursei și modalităților de răspândire a agenților patogeni. În acest scop, se determină fagovarul izolat din materialul patologic. cultura pura pe medii nutritive dense folosind fagi tipici de diagnostic.
Fagovarul culturii de microorganisme este determinat de tipul de fag care i-a cauzat liza.Izolarea bacteriilor aceluiași fagovar de la diferiți subiecți indică sursa infecției.
