Estudio bacteriológico para disentería. Diagnóstico de laboratorio de disentería, amebiasis y balantidiasis.

Disentería.

Disentería - infección, caracterizado por intoxicación general del cuerpo, heces blandas y una lesión peculiar de la mucosa del intestino grueso. Es una de las enfermedades intestinales agudas más comunes en el mundo. La enfermedad se conoce desde la antigüedad con el nombre de “diarrea con sangre”, pero su naturaleza resultó ser diferente. En 1875 El científico ruso Lesh aisló una ameba de un paciente con diarrea con sangre Entamoeba histolytica, Durante los siguientes 15 años se estableció la independencia de esta enfermedad, por lo que se mantuvo el nombre de amebiasis. Los agentes causantes de la disentería propiamente dicha son un gran grupo de bacterias biológicamente similares, unidas en el género. Shigelta. El patógeno fue descubierto por primera vez en 1888. A. Chantemes y Vidal; en 1891 Fue descrito por A.V. Grigoriev, y en 1898. K. Shiga, utilizando suero obtenido del paciente, identificó el patógeno en 34 pacientes con disentería, demostrando finalmente el papel etiológico de esta bacteria. Sin embargo, en los años siguientes se descubrieron otros patógenos de la disentería: en 1900. - S. Flexner, en 1915 - K. Sonne, en 1917 - K. Stutzer y K. Schmitz, en 1932. - J. Boyd, en 1934 - D. Grande, en 1943 - A. Saxo.

Actualmente género Shigella Incluye más de 40 serotipos. Todos ellos son bacilos gramnegativos cortos e inmóviles que no forman esporas ni cápsulas, que (crecen bien en plantas normales). medios nutritivos, no crecer en un medio con citrato como única fuente de carbono; no forman H2S, no tienen ureasa; La reacción de Voges-Proskauer es negativa; la glucosa y algunos otros carbohidratos se fermentan para formar ácido sin gas (excepto en algunos biotipos Shigella flexneri: S. Manchester Y castillo de ew); Como regla general, no fermentan la lactosa (a excepción de Shigella Sonne), adonitol, inositol, no licuan la gelatina, generalmente forman catalasa y no tienen lisina descarboxilasa ni fenilalanina desaminasa. El contenido de G+C en el ADN es del 49-53% en moles. Shigella son anaerobios facultativos, la temperatura óptima para el crecimiento es de 37 ° C, no crecen por encima de los 45 ° C, el pH óptimo del ambiente es 6,7-7,2. Las colonias en medios densos son redondas, convexas, translúcidas; en caso de asociación, se forman colonias rugosas en forma de R. Crecimiento en MPB en forma de turbidez uniforme, las formas rugosas forman un sedimento. Los cultivos recién aislados de Shigella Sonne J4HO forman colonias de dos tipos: pequeñas, redondas y convexas (fase I), grandes y planas (fase 2). La naturaleza de la colonia depende de la presencia (fase I) o ausencia (fase II) de un plásmido con mm 120 MD, que también determina la virulencia de Shigella Sonne.

En Shigella se encontraron antígenos O de diferente especificidad: comunes a la familia enterobacterias genéricos, de especie, de grupo y de tipo, así como antígenos K; No tienen antígenos N.

La clasificación tiene en cuenta únicamente los antígenos O específicos de grupo y tipo. De acuerdo con estas características, el género Shigella se divide en 4 subgrupos, o 4 especies, e incluye 44 serotipos. En el subgrupo A (tipo Shigella disenteriae) incluyó Shigella, que no fermenta el manitol. La especie incluye 12 serotipos (1-12). Cada estereotipo tiene su propio tipo de antígeno específico; Las conexiones antigénicas entre serotipos, así como con otras especies de Shigella, se expresan débilmente. Al subgrupo B (escriba Shigella flexneri) Incluye Shigella, que generalmente fermenta el manitol. Shigella de esta especie están relacionados serológicamente entre sí: contienen antígenos específicos de tipo (I-VI), mediante los cuales se dividen en serotipos (1-6), y antígenos de grupo, que se encuentran en diferentes composiciones en cada serotipo y mediante el cual los serotipos se dividen en subserotipos. Además, esta especie incluye dos variantes antigénicas: X e Y, que no tienen antígenos típicos, se diferencian en conjuntos de antígenos grupales. Serotipo S.flexneri 6 No tiene subserotipos, pero se divide en 3 tipos bioquímicos según las características de fermentación de la glucosa, el manitol y el dulcitol.

Al subgrupo C (escriba Shlgella boydll) Incluye Shigella, que generalmente fermenta el manitol. Los miembros del grupo son serológicamente diferentes entre sí. Las conexiones antigénicas dentro de la especie se expresan débilmente. La especie incluye 18 serotipos (1-18), cada uno de los cuales tiene su propio antígeno tipo principal.

En el subgrupo D (tipo Shlgella sonnel) incluía Shigella, que generalmente fermenta manitol y es capaz de fermentar lentamente (después de 24 horas de incubación y más) lactosa y sacarosa. Vista S. sonnei incluye un serotipo, pero las colonias de las fases I y II tienen sus propios antígenos específicos de tipo. Para la clasificación intraespecífica de Shigella Sonne se han propuesto dos métodos:

1) dividirlos en 14 tipos y subtipos bioquímicos según su capacidad para fermentar maltosa, ramnosa y xilosa;

2) división en tipos de fagos según la sensibilidad a un conjunto de fagos correspondientes.

Estos métodos de tipificación tienen importancia principalmente epidemiológica. Además, Shigella Sonne y Shigella Flexner se tipifican con el mismo propósito en función de su capacidad para sintetizar colicinas específicas (colicinogenotipado) y su sensibilidad a colicinas conocidas (colicinotipado). Para determinar el tipo de colicinas producidas por Shigella, J. Abbott y R. Shenon propusieron conjuntos de cepas estándar e indicadoras de Shigella, y para determinar la sensibilidad de Shigella a tipos conocidos colicins utiliza un conjunto de cepas colicinogénicas de referencia de P. Frederick.

Resistencia. Shigella tiene una resistencia bastante alta a los factores ambientales. Sobreviven en tela de algodón y papel hasta 30-36 días, en heces secas - hasta 4-5 meses, en el suelo - hasta 3-4 meses, en agua - de 0,5 a 3 meses, en frutas y verduras - hasta 2 alimentos, en leche y productos lácteos, hasta varias semanas; a 60 °C mueren en 15-20 minutos.

Sensible a soluciones de cloramina, cloro activo y otros desinfectantes.

Factores de patogenicidad. El más importante propiedad biológica Shigella, lo que determina su patogenicidad, es la capacidad de invadir las células epiteliales, multiplicarse en ellas y provocar su muerte. Este efecto se puede detectar mediante una prueba queratoconjuntival (la introducción de un asa de cultivo de Shigella (2-3 mil millones de bacterias) debajo del párpado inferior de un conejillo de indias provoca el desarrollo de queratoconjuntivitis serosa-purulenta), así como mediante la infección de cultivos celulares. (efecto citotóxico), o embriones de pollo (su muerte), o por vía intranasal en ratones blancos (desarrollo de neumonía). Los principales factores de patogenicidad de Shigella se pueden dividir en tres grupos:

1) factores que determinan la interacción con el epitelio de la membrana mucosa;

2) factores que aseguran la resistencia a los mecanismos de defensa humorales y celulares del macroorganismo y la capacidad de Shigella para reproducirse en sus células;

3) la capacidad de producir toxinas y productos tóxicos que determinan el desarrollo del propio proceso patológico.

El primer grupo incluye factores de adhesión y colonización: su papel lo desempeñan los pili, las proteínas de la membrana externa y el LPS. La adhesión y la colonización son promovidas por enzimas que destruyen el moco: neuraminidasa, hialuronidasa, mucinasa. El segundo grupo incluye factores de invasión que favorecen la penetración de Shigella en los enterocitos y su reproducción en ellos y en los macrófagos con la manifestación simultánea de un efecto citotóxico y (o) enterotóxico. Estas propiedades están controladas por los genes del plásmido con m.m. 140 MD (codifica la síntesis de proteínas de la membrana externa que provocan la invasión) y los genes cromosómicos de Shigella: KSR A (provoca la queratoconjuntivitis), cyt (responsable de la destrucción celular), así como otros genes aún no identificados. La protección de Shigella contra la fagocitosis la proporcionan el antígeno K de superficie, los antígenos 3, 4 y el lipopolisacárido. Además, el lípido A de la endotoxina de Shigella tiene un efecto inmunosupresor: suprime la actividad de las células de memoria inmunitaria.

El tercer grupo de factores de patogenicidad incluye endotoxinas y dos tipos de exotoxinas que se encuentran en Shigella: las exotoxinas Shiga y similares a Shiga (SLT-I y SLT-II), cuyas propiedades citotóxicas son más pronunciadas en S. disenteriae 1. También se han encontrado toxinas Shiga y similares a Shiga en otros serotipos. S. disenteriae, ellos también están formados S.flexneri, S.sonnei, S.boydii, ETEC y algunas salmonelas. La síntesis de estas toxinas está controlada por los genes tox de los fagos convertidores. Las enterotoxinas tipo LT se encuentran en Shigella Flexner, Sonne y Boyd. Su síntesis de LT está controlada por genes plásmidos. La enterotoxina estimula la actividad de la adenilato ciclasa y es responsable del desarrollo de la diarrea. La toxina Shiga, o neurotoxina, no reacciona con el sistema de adenilato ciclasa, pero tiene un efecto citotóxico directo. Las toxinas Shiga y similares a Shiga (SLT-I y SLT-II) tienen m.m. -70 kDa y constan de las subunidades A y B (la última de 5 subunidades pequeñas idénticas). El receptor de toxinas es un glicolípido de la membrana celular.

La virulencia de Shigella Sonne también depende del plásmido con m.m. 120MD. Controla la síntesis de unos 40 polipéptidos de la membrana externa, siete de ellos están asociados con la virulencia. Shigella Sonne, al tener este plásmido, forma colonias de fase I y es virulenta. Los cultivos que han perdido el plásmido forman colonias de fase II y carecen de virulencia. Plásmidos con m.m. Se encontraron 120-140 MD en Shigella Flexner y Boyd. El lipopolisacárido de Shigella es una endotoxina fuerte.

Características de la epidemiología. La fuente de infección son únicamente los humanos. Ningún animal en la naturaleza sufre disentería. En condiciones experimentales, la disentería sólo puede reproducirse en monos. El método de infección es fecal-oral. Vías de transmisión: agua (predominante para Shigella Flexner), alimentos, especialmente leche y productos lácteos (vía de infección predominante para Shigella Sonne), y contacto doméstico, especialmente para esta especie. S. disenteriae.

Una característica de la epidemiología de la disentería es un cambio en la composición de especies de patógenos, así como en los biotipos de Sonne y los serotipos de Flexner en determinadas regiones. Por ejemplo, hasta finales de los años 30 del siglo XX, la proporción S.dysenteriae 1 representó hasta el 30-40% de todos los casos de disentería, y luego este serotipo comenzó a aparecer cada vez con menos frecuencia y casi desapareció. Sin embargo, en los años 60-80 S.dysenteriae reapareció en la arena histórica y provocó una serie de epidemias que llevaron a la formación de tres focos hiperendémicos: en América Central, África Central y el sur de Asia (India, Pakistán, Bangladesh y otros países). Las razones del cambio en la composición de especies de patógenos de disentería probablemente estén asociadas con cambios la inmunidad de grupo y con cambios en las propiedades de las bacterias de la disentería. En particular, el regreso S.dysenteriae 1 y su amplia distribución, que provocó la formación de focos hiperendémicos de disentería, se asocia con la adquisición de plásmidos que provocaron resistencia a múltiples fármacos y mayor virulencia.

Características de patogénesis y clínica. El período de incubación de la disentería es de 2 a 5 días, a veces menos de un día. Formación foco infeccioso en la mucosa de la parte descendente del intestino grueso (sigmoide y recto), donde penetra el patógeno de la disentería, es de naturaleza cíclica: adhesión, colonización, introducción de Shigella en el citoplasma de los enterocitos, su reproducción intracelular, destrucción y rechazo. de células epiteliales, liberación de patógenos en la luz intestinal; después de esto, comienza el siguiente ciclo: adhesión, colonización, etc. La intensidad de los ciclos depende de la concentración de patógenos en la capa parietal de la membrana mucosa. Como resultado de ciclos repetidos, el foco inflamatorio crece, las úlceras resultantes, que se unen, aumentan la exposición. pared intestinal, como resultado de lo cual aparecen sangre, grumos mucopurulentos y leucocitos polimorfonucleares en las heces. Las citotoxinas (SLT-I y SLT-II) causan destrucción celular, enterotoxina - diarrea, endotoxinas - intoxicación general. El cuadro clínico de la disentería está determinado en gran medida por el tipo de exotoxinas que produce en mayor medida el patógeno, el grado de su efecto alergénico y estado inmunológico cuerpo. Sin embargo, muchas cuestiones de la patogénesis de la disentería siguen sin estar claras, en particular: las características del curso de la disentería en niños de los dos primeros años de vida, las razones de la transición de la disentería aguda a la crónica, la importancia de la sensibilización, el mecanismo. de inmunidad local de la mucosa intestinal, etc. Los más típicos manifestaciones clínicas la disentería es causada por diarrea, necesidad frecuente- en casos graves, hasta 50 o más veces al día, tenesmo (espasmos dolorosos del recto) e intoxicación general. La naturaleza de las heces está determinada por el grado de daño al intestino grueso. La disentería más grave es causada por S.dysenteriae 1, más fácilmente: disentería de Sonne.

Inmunidad posinfecciosa. Como han demostrado las observaciones de los monos, después de sufrir disentería, queda una inmunidad fuerte y bastante duradera. Es causada por anticuerpos antimicrobianos, antitoxinas, aumento de la actividad de los macrófagos y linfocitos T. Juega un papel importante inmunidad local mucosa intestinal, mediada por IgAs. Sin embargo, la inmunidad es específica del tipo; no se produce una fuerte inmunidad cruzada.

Diagnóstico de laboratorio . El método principal es bacteriológico. El material para la investigación son las heces. Esquema de aislamiento de patógenos: inoculación en medios de diagnóstico diferencial Endo y Ploskirev (en paralelo en medio de enriquecimiento seguido de inoculación en medios Endo y Ploskirev) para aislar colonias aisladas, obtener cultura pura, el estudio de sus propiedades bioquímicas y, teniendo en cuenta estas últimas, la identificación mediante sueros aglutinantes de diagnóstico polivalentes y monovalentes. Se producen los siguientes sueros comerciales:

1. A Shigella, que no fermenta manitol: a S.dysenteriae 1 a 2 S.dysenteriae 3-7(polivalente y monovalente), a S.dysenteriae 8-12(polivalente y monovalente).

2. Al manitol fermentador de Shigella:

a antígenos típicos S.flexneri I, II, III, IV, V, VI,

para agrupar antígenos S.flexneri 3, 4, 6,7,8- polivalente,

a los antígenos S.boydii 1-18(polivalente y monovalente),

a los antígenos S. sonnei I fase, II fase,

a los antígenos S.flexneri I-VI+ S.sonnei- polivalente.

Para detectar antígenos en la sangre (incluso como parte de la CCA), se pueden utilizar orina y heces. siguientes métodos: RPHA, RSK, reacción de coaglutinación (en orina y heces), IFM, RPGA (en suero sanguíneo). Estos métodos son muy eficaces, específicos y adecuados para el diagnóstico precoz.

Para el diagnóstico serológico se puede utilizar: RPGA con la adecuada diagnóstico de eritrocitos, método de inmunofluorescencia (modificación indirecta), método de Coombs (determinación del título de anticuerpos incompletos). Valor de diagnóstico También dispone de una prueba de alergia con disentería (solución de fracciones proteicas de Shigella Flexner y Sonne). La reacción se tiene en cuenta a las 24 horas, se considera positiva en presencia de hiperemia y infiltrado de 10-20 mm de diámetro.

Tratamiento. La atención se centra en restablecer la normalidad metabolismo agua-sal, nutrición racional, desintoxicación, terapia antibiótica racional (teniendo en cuenta la sensibilidad del patógeno a los antibióticos). Buen efecto proporciona el uso temprano de bacteriófagos polivalentes para la disentería, especialmente en tabletas con una capa de pectina, que protege al fago de la acción del jugo gástrico HC1; V intestino delgado La pectina se disuelve, los fagos se liberan y ejercen su efecto. Con fines preventivos, el fago se debe administrar al menos una vez cada tres días (el período de supervivencia en el intestino).

El problema de la prevención específica. Para crear inmunidad artificial Se utilizaron varias vacunas contra la disentería: de bacterias muertas, químicas y de alcohol, pero todas resultaron ineficaces y fueron suspendidas. Se han creado vacunas contra la disentería de Flexner a partir de Shigella Flexner viva (mutante, dependiente de estreptomicina); vacunas ribosómicas, pero tampoco encontraron aplicación amplia. Por tanto, el problema de la prevención específica de la disentería sigue sin resolverse. La principal forma de combatir la disentería es mejorar el sistema de suministro de agua y alcantarillado, garantizar estrictos regímenes sanitarios e higiénicos en las empresas alimentarias, especialmente en la industria láctea, en las guarderías, en los lugares públicos y en el mantenimiento de la higiene personal.

Microbiología del cólera

Según la OMS, el cólera es una enfermedad caracterizada por una diarrea aguda, grave y deshidratante con heces parecidas al agua de arroz, resultante de una infección por Vibrio cholerae. Debido a que se caracteriza por una marcada capacidad de propagación epidémica amplia, curso severo y una alta mortalidad, el cólera es una de las infecciones más peligrosas.

La patria histórica del cólera es la India, más precisamente, el delta de los ríos Ganges y Brahmaputra (ahora este de la India y Bangladesh), donde existe desde tiempos inmemoriales (se han observado epidemias de cólera en esta zona desde 500 años antes de Cristo). La larga existencia aquí de una fuente endémica de cólera se explica por muchas razones. Vibrio cholerae no solo puede sobrevivir en el agua durante mucho tiempo, sino que también se multiplica en ella en condiciones favorables: temperaturas superiores a +12 ° C y presencia de sustancias orgánicas. Todas estas condiciones están disponibles en la India: clima tropical (temperatura promedio anual de +25 hasta +29 °C), abundantes precipitaciones y zonas pantanosas, alta densidad población, especialmente en el delta del Ganges, un gran número de Sustancias orgánicas en el agua, contaminación continua del agua durante todo el año. aguas residuales y excrementos, el bajo nivel de vida material y los peculiares rituales religiosos y de culto de la población.

El agente causante del cólera. Vibrio cholerae Fue inaugurado en 1883. Sin embargo, durante la quinta pandemia de R. Koch, el vibrio se descubrió por primera vez en 1854 en las heces de pacientes con diarrea. F. Pacini.

V. cholerae pertenece a la familia Vibrionáceas que incluye varios géneros (Vibrio, Aeromonas, Plesiomonas, Photobacterium). Género vibrio desde 1985 Tiene más de 25 especies, de las cuales valor más alto para una persona tener V.cholerae, V.parahaemolyticus, V.alginolyticus, dnificus Y V. fluvialis.

Características clave del género. vibrio : bacilos gramnegativos cortos, que no forman esporas ni cápsulas, rectos o curvos, de 0,5 µm de diámetro, 1,5-3,0 µm de longitud, móviles ( V. cholerae- monotrico, algunas especies tienen dos o más flagelos ubicados polarmente); crecen bien y rápidamente en medios ordinarios, quimioorganotrofos, fermentan carbohidratos con formación de ácido sin gas (la glucosa se fermenta mediante la vía de Embden-Meyerhof). Oxidasa positiva, forma indol, reduce los nitratos a nitritos. (V. cholerae da una reacción nitroso-indol positiva), descomponen la gelatina, a menudo dan una reacción de Voges-Proskauer positiva (es decir, forman acetilmetilcarbinol), no tienen ureasa, no forman HS. tienen lisina y ornitina descarboxilasas, pero no tienen arginina dihidrolasa.

Vibrio cholerae es muy modesto para los medios nutritivos. Se multiplica bien y rápidamente en agua de peptona (PV) alcalina al 1 % (pH 8,6-9,0) que contiene 0,5-1,0 % de NaCl, superando el crecimiento de otras bacterias. Para suprimir el crecimiento de Proteus, se recomienda agregar telurito de potasio del 4 al 1% (PV) (dilución final 1:100.000). El 1% de PV es el mejor medio de enriquecimiento para Vibrio cholerae. A medida que crece, después de 6-8 horas en la superficie del PV, forma una película delicada, suelta y grisácea que, al agitarse, se rompe fácilmente y cae al fondo en forma de escamas; el PV se vuelve moderadamente turbio. . Se han propuesto varios medios selectivos para el aislamiento de Vibrio cholerae: agar alcalino, agar yema-sal, albuminato alcalino, agar sangre alcalino, lactosa-sacarosa y otros medios. El mejor medio es el TCBS (agar tiosulfato, citrato-bromotimol sacarosa) y sus modificaciones. Sin embargo, la mayoría de las veces utilizan MPA alcalino, en el que Vibrio cholerae forma colonias en forma de disco, suaves, transparentes y vítreas, con una consistencia viscosa con un tinte azulado.

Cuando se siembra por inyección en una columna de gelatina, el vibrio después de 2 días a 22-23 ° C provoca la licuefacción de la superficie en forma de burbuja, luego en forma de embudo y, finalmente, capa por capa.

En la leche, el vibrio se multiplica rápidamente, provocando la coagulación después de 24 a 48 horas, y luego se produce la peptonización de la leche, y después de 3 a 4 días el vibrio muere debido a un cambio en el pH de la leche hacia el lado ácido.

B. Heiberg, basándose en la capacidad de fermentar manosa, sacarosa y arabinosa, dividió todos los vibrios (cólera y similares) en varios grupos, cuyo número ahora es 8. Vibrio cholerae pertenece al primer grupo de Heiberg.

Los vibrios, similares en características morfológicas, culturales y bioquímicas al cólera, fueron y se llaman de manera diferente: paracólera, similares al cólera, vibrios NAG (vibrios no aglutinantes); vibrios que no pertenecen al grupo 01. El apellido enfatiza con mayor precisión su relación con Vibrio cholerae. Como establecieron A. Gardner y K. Venkatraman, el cólera y los vibrios similares al cólera tienen un antígeno H común, pero difieren en los antígenos O. Según el antígeno O, el cólera y los vibrios similares al cólera se dividen actualmente en 139 serogrupos O, pero su número crece constantemente. Vibrio cholerae pertenece al grupo 01. Tiene un antígeno A común y dos antígenos específicos de tipo: B y C, que distinguen tres serotipos. V. cholerae- serotipo Ogawa (AB), serotipo Inaba (AS) y serotipo Gikoshima (ABC). Vibrio cholerae en la etapa de disociación tiene un antígeno OR. En este sentido, para la identificación V. cholerae Se utilizan suero O, suero OR y sueros específicos de tipo Inaba y Ogawa.

Factores de patogenicidad V. cholerae :

1. Movilidad.

2. Quimiotaxis. Con la ayuda de estas propiedades, el vibrio supera la capa mucosa e interactúa con las células epiteliales. En los mutantes Che" (que han perdido la capacidad de quimiotaxis), la virulencia se reduce drásticamente. La virulencia en los mutantes Mot" (que han perdido la movilidad) desaparece por completo o se reduce entre 100 y 1000 veces.

3. Factores de adhesión y colonización, con la ayuda de los cuales el vibrio se adhiere a las microvellosidades y coloniza la mucosa del intestino delgado.

4. Enzimas: mucinasa, proteasas, neuraminidasa, lecitinasa, etc.

Promueven la adhesión y la colonización, ya que destruyen las sustancias que componen el moco. La neuraminidasa, al escindir el ácido siálico de las glicoproteínas epiteliales, crea un sitio de “aterrizaje” para los vibrios. Además, aumenta el número de receptores de colerágeno al modificar los tri y disialogangliósidos en monosialogangliósido Gm b, que sirve como receptor de cólera.

5. El principal factor de patogenicidad. V. cholerae es una exotoxina-colerógena que determina la patogénesis del cólera. La molécula de colerógenos tiene un m.m. 84 kDa y consta de dos fragmentos, A y B. El fragmento A consta de dos péptidos, A1 y A2, y tiene la propiedad específica de la toxina del cólera. El fragmento B consta de 5 subunidades idénticas y realiza dos funciones: 1) reconoce el receptor (monosialogangliósido) del enterocito y se une a él;

2) forma un canal hidrofóbico intramembrana para el paso de la subunidad A. El péptido A 2 Cl se utiliza para conectar los fragmentos A y B. La función tóxica real la realiza el péptido A t. Interactúa con NAD, provoca su hidrólisis y la ADP-ribosa resultante se une a la subunidad reguladora de la adenilato ciclasa. Esto conduce a la inhibición de la hidrólisis de GTP. El complejo GTP + adenilato ciclasa resultante provoca la hidrólisis de ATP con la formación de AMPc. (Otra forma de acumular AMPc es la supresión de la enzima que hidroliza el AMPc a 5-AMP mediante colerógenos).

6. Además del colerágeno, Vibrio cholerae sintetiza y secreta un factor que aumenta la permeabilidad capilar.

7. También se han encontrado otras exotoxinas en Vibrio cholerae, en particular los tipos LT, ST y SLT.

8. Endotoxina. lipopolisacárido V. cholerae Tiene fuertes propiedades endotóxicas. Es responsable de la intoxicación general del cuerpo y de los vómitos. Los anticuerpos formados contra las endotoxinas tienen un efecto vibriocida pronunciado (disuelven los vibrios en presencia de complemento) y son un componente importante de la inmunidad posinfecciosa y posvacunación.

La capacidad de los vibrios que no pertenecen al grupo 01 para causar enfermedades diarreicas esporádicas o grupales en humanos está asociada con la presencia de enterotoxinas del tipo LT o ST, que estimulan los sistemas de adenilato o guanilato ciclasa, respectivamente.

Síntesis de colerógeno - propiedad más importante V. cholerae. Los genes que controlan la síntesis de los fragmentos A y B de colerógenos se combinan en el operón vctAB o ctxB y se encuentran en el cromosoma vibrio. Algunas cepas de Vibrio cholerae tienen dos de estos operones no en tándem. La función del operón está controlada por dos genes reguladores. El gen toxR proporciona un control positivo; las mutaciones de este gen conducen a una reducción de 1.000 veces en la producción de toxina. El gen htx ejerce un control negativo; las mutaciones en este gen aumentan la producción de toxinas de 3 a 7 veces.

Se pueden utilizar los siguientes métodos para detectar colerógenos:

1. Ensayos biológicos en conejos. Cuando los vibrios del cólera se inyectan por vía intratestinal a conejos lactantes (de no más de 2 semanas de edad), desarrollan un síndrome colerogénico típico: diarrea, deshidratación y muerte del conejo. En la autopsia: una inyección aguda de los vasos del estómago y los pequeños.
intestinos, a veces se acumula líquido claro en él. Pero los cambios en el intestino grueso son especialmente característicos: está agrandado y lleno de un líquido completamente transparente, de color pajizo, con escamas y burbujas de gas. Cuando los vibrios del cólera se introducen en el área ligada del intestino delgado de conejos adultos, experimentan los mismos cambios en el intestino grueso que cuando se infectan conejos lactantes.

2. Detección directa de colerógenos mediante métodos inmunofluorescentes o inmunoabsorbentes ligados a enzimas o una reacción de hemólisis inmune pasiva (el colerógeno se une a Gm1 de los eritrocitos y se lisan con la adición de anticuerpos antitóxicos y complemento).

3. Estimulación de la adenilato ciclasa celular en cultivos celulares.

4. Usar un fragmento de cromosoma como sonda de ADN V. cholerae, portador de un operoncolerógeno.

Durante la séptima pandemia se aislaron cepas V. cholerae Con grados variables virulencia: colerogénico (virulento), débilmente colerogénico (poco virulento) y no colerogénico (no virulento). No colerogénico V. cholerae, por regla general, tienen actividad hemolítica, no son lisados ​​por el fago diagnóstico 5 del cólera (CDF-5) y no causan enfermedades en humanos.

Para tipificación de fagos V. cholerae(incluido V.eltor) S. Mukherjee propuso conjuntos de fagos correspondientes, que luego se complementaron con otros fagos en Rusia. El conjunto de tales fagos (1-7) permite distinguir entre V. cholerae 16 fagotipos. HDF-3 lisa selectivamente Vibrio cholerae tipo clásico, HDF-4 - vibrios El Tor y HDF-5 solo lisa vibrios colerogénicos (virulentos) de ambos tipos y no lisa vibrios no colerogénicos.

Los vibrios colerogénicos, por regla general, no tienen actividad hemolítica, son lisados ​​por HDF-5 y causan cólera en humanos.

Resistencia de los patógenos del cólera. Los Vibrios cholerae sobreviven bien a bajas temperaturas: en hielo permanecen viables hasta por 1 mes; en agua de mar - hasta 47 días, en agua de río - de 3 a 5 días a varias semanas, en agua hervida agua mineral persisten durante más de 1 año, en el suelo - de 8 días a 3 meses, en heces frescas - hasta 3 días, en alimentos cocidos (arroz, fideos, carne, cereales, etc.) sobreviven de 2 a 5 días, en crudo verduras - 2 a 4 días, frutas - 1-2 días, leche y productos lácteos - 5 días; cuando se almacena en el frío, el período de supervivencia aumenta de 1 a 3 días: en ropa contaminada con heces, duran hasta 2 días y en material húmedo, una semana. Los vibrios del cólera mueren a 80 °C en 5 minutos, a 100 °C, instantáneamente; muy sensible a los ácidos; bajo la influencia de cloramina y otros desinfectantes mueren en 5-15 minutos. Son sensibles al secado y directos. rayos de sol, pero persisten bien y durante mucho tiempo e incluso se multiplican en reservorios abiertos y aguas residuales, ricas en sustancias orgánicas, con un pH alcalino y una temperatura superior a 10-12 ° C. Altamente sensible al cloro: una dosis de cloro activo de 0,3-0,4 mg/l de agua en 30 minutos provoca una desinfección fiable contra Vibrio cholerae.

Características de la epidemiología.. La principal fuente de infección es solo una persona: una persona con cólera o portadora de vibrio, así como el agua contaminada por ellos. Ningún animal en la naturaleza sufre de cólera. El método de infección es fecal-oral. Rutas de infección: a) principal: a través del agua utilizada para beber, bañarse y satisfacer las necesidades del hogar; b) contacto y hogar yc) a través de la alimentación. Todas las principales epidemias y pandemias de cólera se transmitieron por naturaleza a través del agua. Vibrios cholerae tiene mecanismos adaptativos que aseguran la existencia de sus poblaciones tanto en el cuerpo humano como en ciertos ecosistemas de cuerpos de agua abiertos. La diarrea profusa causada por Vibrio cholerae conduce a la limpieza de los intestinos de bacterias competidoras y contribuye a la distribución generalizada del patógeno en el medio ambiente, principalmente en las aguas residuales y en los cuerpos de agua abiertos donde se vierten. Una persona con cólera secreta el patógeno en un numero enorme- de 100 millones a mil millones por 1 ml de heces, el portador de vibrio libera entre 100 y 100 000 vibrios por 1 ml, la dosis infecciosa es de aproximadamente 1 millón de vibrios. La duración de la excreción del vibrio del cólera en portadores sanos oscila entre 7 y 42 días, y entre 7 y 10 días en quienes se han recuperado de la enfermedad. La descarga más prolongada es extremadamente rara.

La peculiaridad del cólera es que después de él, por regla general, no hay transporte a largo plazo y no se forman focos endémicos persistentes. Sin embargo, como ya se mencionó anteriormente, debido a la contaminación de los cuerpos de agua abiertos con aguas residuales que contienen grandes cantidades materia orgánica, detergentes y sal de mesa, en verano, el vibrio del cólera no solo sobrevive en ellos durante mucho tiempo, sino que incluso se multiplica.

De gran importancia epidemiológica es el hecho de que los vibrios del cólera del grupo 01, tanto toxigénicos como no toxigénicos, pueden persistir durante mucho tiempo en varios ecosistemas acuáticos en forma de formas no cultivadas. Mediante la reacción en cadena de la polimerasa, con estudios bacteriológicos negativos, se descubrieron genes veterinarios de formas no cultivadas en varias zonas endémicas de la CEI en varios cuerpos de agua. V. cholerae.

Cuando surgen enfermedades del cólera, se llevan a cabo un conjunto de medidas antiepidémicas, entre las cuales está activa la principal y decisiva. detección oportuna y aislamiento (hospitalización, tratamiento) de pacientes en estado agudo y forma atípica y portadores sanos de vibrio; se están tomando medidas para suprimir posibles formas de propagación de la infección; Se presta especial atención al suministro de agua (cloración agua potable), cumplimiento del régimen sanitario e higiénico en empresas alimentarias, instituciones de cuidado infantil y lugares públicos; Se lleva a cabo un control estricto, incluido el control bacteriológico, en cuerpos de agua abiertos, se lleva a cabo la inmunización de la población, etc.

Características de la patogénesis y la clínica.. El período de incubación del cólera varía de unas pocas horas a 6 días, con mayor frecuencia de 2 a 3 días. Una vez en la luz del intestino delgado, los vibrios del cólera se dirigen al moco debido a la motilidad y la quimiotaxis a la membrana mucosa. Para penetrarlo, los vibrios producen una serie de enzimas: neuraminidasa, mucinasa, proteasas, lecitinasa, algunas destruyen las sustancias contenidas en el moco y facilitan el movimiento de los vibrios hacia las células epiteliales. Por adhesión, los vibrios se adhieren al glicocalix del epitelio y, perdiendo movilidad, comienzan a multiplicarse intensamente, colonizando las microvellosidades del intestino delgado y al mismo tiempo produciendo grandes cantidades de exotoxina-colerógeno. Las moléculas de colerógeno se unen al monosialogangliósido Gm1 y penetran la membrana celular, activan el sistema de adenilato ciclasa y el AMPc acumulado provoca una hipersecreción de líquido, cationes y aniones Na +, HCO 3 ~, K +, SG de los enterocitos, lo que conduce a la diarrea del cólera. Deshidratación y desalinización corporal. Hay tres tipos de enfermedades:

1. enfermedad diarreica deshidratante, violenta y grave, que provoca la muerte del paciente en pocas horas;

2. curso menos severo o diarrea sin deshidratación;

3. curso asintomático de la enfermedad (portador de vibriones).

En las formas graves de cólera, los pacientes desarrollan diarrea, las deposiciones se vuelven más frecuentes, las deposiciones se vuelven más abundantes, se vuelven acuosas, pierden el olor a heces y parecen agua de arroz (un líquido turbio con residuos de moco y células epiteliales flotando en él). Luego vienen los vómitos debilitantes, primero con contenido intestinal, y luego el vómito adquiere la apariencia de agua de arroz. La temperatura del paciente desciende por debajo de lo normal, la piel se vuelve azulada, arrugada y fría: cólera álgido. Como resultado de la deshidratación, la sangre se espesa y se desarrolla cianosis. falta de oxígeno, la función renal se ve gravemente afectada, aparecen convulsiones, el paciente pierde el conocimiento y se produce la muerte. La tasa de letalidad por cólera durante la séptima pandemia osciló entre el 1,5% en los países desarrollados y el 50% en los países en desarrollo.

Inmunidad posinfecciosa Las enfermedades duraderas, duraderas y recurrentes son raras. La inmunidad antitóxica y antimicrobiana es causada por anticuerpos (las antitoxinas duran más que los anticuerpos antimicrobianos), células de memoria inmunitaria y fagocitos.

Diagnóstico de laboratorio. principal y método decisivo El diagnóstico del cólera es bacteriológico. El material de investigación del paciente son las heces y el vómito; se examinan las heces para detectar presencia de vibrio; de personas que murieron a causa del cólera, se toma para investigación un segmento ligado del intestino delgado y la vesícula biliar; Entre los objetos ambientales, los más estudiados son el agua de embalses abiertos y las aguas residuales.

Al realizar un estudio bacteriológico se deben observar las siguientes tres condiciones:

1) inocular material del paciente lo más rápido posible (el vibrio cólera permanece en las heces Corto plazo);

2) el recipiente en el que se lleva el material no debe estar desinfectado con productos químicos ni contener trazas de ellos, ya que Vibrio cholerae es muy sensible a ellos;

3) excluir la posibilidad de contaminación e infección de otros.

En los casos en que haya V. cholerae no 01-grupos, deben tipificarse utilizando sueros aglutinantes apropiados de otros serogrupos. Alta de un paciente con diarrea (incluso similar al cólera) V. cholerae El grupo no 01 requiere las mismas medidas antiepidémicas que en el caso del aislamiento. V. cholerae 01-grupos. Si es necesario, la capacidad de sintetizar colerágeno o la presencia de genes de cólera en vibrios de cólera aislados se determina utilizando una sonda de ADN utilizando uno de los métodos.

El diagnóstico serológico del cólera es auxiliar. Para este propósito, se puede usar una reacción de aglutinación, pero es mejor determinar el título de anticuerpos o antitoxinas vibriicidas (los anticuerpos colerógenos se determinan mediante métodos inmunoabsorbentes ligados a enzimas o inmunofluorescentes).

Tratamiento para los pacientes con cólera debe consistir principalmente en la rehidratación y la restauración del metabolismo normal del agua y la sal. Para ello, se recomienda utilizar soluciones salinas, por ejemplo, de la siguiente composición: NaCl - 3,5; NaHCO3 - 2,5; KS1 - 1,5 y glucosa - 20,0 g por 1 litro de agua. Este tratamiento de base patogénica, en combinación con una terapia antibiótica racional, puede reducir la tasa de mortalidad en el cólera al 1% o menos.

Prevención específica. Se han propuesto varias vacunas para crear inmunidad artificial, incluidas las cepas muertas de Inaba y Ogawa; Toxoide colerógeno para uso subcutáneo y vacuna enteral química bivalente, sos

DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO DE DISENTERIA, AMOEBIASE Y BALANTIDIASIS

En las condiciones modernas, en casos aislados o en pequeños brotes focales de enfermedades intestinales, que a menudo ocurren con síntomas poco claros, los métodos de investigación de laboratorio adquieren una importancia práctica importante.

Los estudios realizados con fines diagnósticos deben realizarse respetando estrictamente las recomendaciones establecidas y lo antes posible.

Recopilación heces para la investigación, producir en platos limpios (jarrones, cuñas) que no contengan desinfectantes residuales, el material para la investigación se extrae de la mucosa rectal con hisopos durante la sigmoidoscopia.

Para confirmar bacteriológicamente el diagnóstico, es mejor tomar heces de pacientes con disentería antes del tratamiento con antibióticos y sulfonamidas, y determinar el transporte bacteriano, después del tratamiento con estos medicamentos.

La siembra en placas de Petri debe realizarse inmediatamente después de la toma del material.

En primer lugar, se realiza un examen macroscópico de las heces, en el que se pueden detectar: ​​restos de comida: trozos de carne, restos de grasa, alimentos de origen vegetal e impurezas patológicas: moco de consistencia viscosa en forma de grumos (no transparente en la disentería y transparente en la amebiasis); sangre no alterada por la disentería y lesión ulcerosa la parte inferior del colon de diferente etiología y cambio de color (“gelatina de frambuesa”) con amebiasis, balantidiasis; El pus se detecta en formas graves y prolongadas de disentería.

El examen microscópico de las heces se utiliza para detectar elementos celulares de la sangre, amebas, balantidia y sus quistes. La preparación nativa se prepara de la siguiente manera: se coloca un trozo de heces en un portaobjetos de vidrio con un asa y una gota de solución isotónica de cloruro de sodio al lado, se mezcla y se cubre con un cubreobjetos. La solución de Lugol se utiliza para teñir protozoos.

Para diferenciar los elementos celulares de la sangre, las preparaciones se tratan con tinte Romanovsky-Giemsa o azul-eosina. En la disentería, en una preparación preparada a partir de moco, muchos granulocitos neutrófilos (más del 90% de todos los elementos celulares), granulocitos eosinófilos individuales (eosinófilos) y cantidad diferente las células rojas de la sangre; en la amebiasis, hay pocos elementos celulares, cuya masa principal está formada por células alteradas con un núcleo picnótico y un borde estrecho de protoplasma. Se encuentran granulocitos eosinófilos y cristales de Charcot-Leyden.

Las formas tisulares de ameba (Entamoeba histolytica) en una preparación sin teñir son incoloras, móviles (con la ayuda de pseudópodos), en estado alargado alcanzan 50-60 micrones, a menudo se encuentran en el endoplasma con eritrocitos y hacia la periferia - núcleo. La presencia de glóbulos rojos en la célula permite distinguir Entamoeba histolutica de formas no patógenas (E. hartmani, E. coli.).

La forma luminal de la ameba es más pequeña (hasta 20 micrones), inactiva y no contiene glóbulos rojos. Los quistes son incluso más pequeños (10-12 micrones), forma redonda, inmóvil; en las primeras etapas de desarrollo contienen 2 núcleos y los maduros, 4. En las preparaciones teñidas con solución de Lugol, los núcleos de las amebas y sus quistes son de color marrón claro (Fig. 6).

Balantidia(Balantidium coli) son ciliados grandes, que a veces alcanzan 200 micrones de longitud y 50-70 micrones de diámetro, móviles debido a la presencia de cilios y tienen aberturas orales (peristoma) y anales (citopigotas). En el endoplasma se ven núcleos grandes (macronúcleos) y pequeños (micronúcleos), vacuolas y eritrocitos atrapados. Los quistes de Balantidia son inmóviles, de forma redonda, de 50 a 60 µm de diámetro, tienen una cubierta de doble circuito y contienen macronucleosis y vacuolas en su interior (Fig. 7).

El examen bacteriológico de las heces para detectar disentería bacteriana se realiza mejor poco después de la defecación, y se debe extraer material (moco y pus) de las últimas porciones de heces. El material de prueba se inocula con un asa en placas de Petri con medios electivos (Ploskireva, Ploskireva + cloranfenicol, Levin) y se coloca en un termostato durante 18-24 horas a una temperatura de +37° C. Al día siguiente, sospechoso (incoloro) las colonias se subcultivan en medio de Ressel y se colocan tubos de ensayo en un termostato durante un día a una temperatura de +370 C. Al tercer día, después de recibir un cultivo puro, se preparan frotis para microscopía y estudio de motilidad (Shigella está inmóvil). Se realiza una reacción de aglutinación sobre vidrio con sueros de tipo específico, primero una indicativa con sueros contra los tipos predominantes en la zona, y luego se expande e inocula en la fila “variegada” para determinar propiedades bioquímicas cultura seleccionada.

Los agentes causantes de la disentería no fermentan la lactosa y la sacarosa (excepto Sonne), no descomponen la glucosa (en ácido) y no forman sulfuro de hidrógeno.

La respuesta final durante el examen bacteriológico se da el quinto día. En ocasiones se aíslan cepas atípicas del patógeno, cultivos que han perdido aglutinabilidad y con otras características. En tales casos, la investigación continúa durante períodos más largos.

También existen métodos bacteriológicos acelerados: volver a sembrar colonias sospechosas de placas de Petri entre 18 y 20 horas desde el inicio del estudio en 2 tubos con medio de Ressel (agar inclinado con 1% de lactosa y 0,1% de glucosa, en uno y 1% de sacarosa y 0,1%). manitol - en otro). Pasadas las 4 horas ya puede aparecer el crecimiento de colonias, a partir de las cuales se preparan frotis, se tiñen con Gram, se estudia la motilidad y se realiza una reacción de aglutinación aproximada con sueros contra los patógenos más comunes de la zona. Así, ya el segundo día se podrá dar una respuesta preliminar. La respuesta final se da al tercer día después de tener en cuenta los resultados de la siembra en la fila "variegada" y una reacción de aglutinación detallada.

La tasa de inoculación de patógenos de disentería no siempre es la misma, depende de muchos factores: el método de recolección del material para la investigación, la calidad de los medios y otras razones, una de las cuales es la cantidad de patógenos por unidad de volumen de heces. Se ha demostrado que los patógenos de la disentería se siembran en los casos en que un gramo de heces contiene al menos cientos de millones de cuerpos microbianos. EN en casos raros Es posible aislar el agente causante de la disentería de la sangre.

En presencia de un microscopio fluorescente y sueros específicos con fluorocromos, se muestra a los estudiantes el método de fluorescencia directa de anticuerpos.

También es posible realizar una reacción de aglutinación con el suero sanguíneo del paciente y pruebas diagnósticas, sin embargo, los títulos de anticuerpos en pacientes con disentería son bajos y, además, son comunes los fenómenos de paraaglutinación, lo que dificulta su obtención. resultados confiables. Más sensible es la reacción de hemaglutinación indirecta (IRHA) con el diagnóstico estándar de eritrocitos. Por método auxiliar El estudio es una prueba de alergia intradérmica con disentería según D. A. Tsuverkalov, que se tiene en cuenta a las 24 horas según el tamaño de la pápula resultante.

Pautas para estudiantes para la lección práctica No. 28.

Tema de la lección:

Objetivo: Estudiar métodos de diagnóstico microbiológico, terapia etiotrópica y prevención de la shigelosis.

Módulo 2 . Microbiología especial, clínica y ambiental.

Tema 5: Métodos de diagnóstico microbiológico de la disentería.

Relevancia del tema:La shigelosis está muy extendida y plantea un problema grave en países con un bajo nivel cultural sanitario y una alta incidencia de nutrición insuficiente y de mala calidad. En los países en desarrollo, la propagación de la infección se ve facilitada por un saneamiento deficiente, una mala higiene personal, el hacinamiento y una gran proporción de niños entre la población. En Ucrania, los brotes de shigelosis son más comunes en grupos cerrados en el contexto nivel bajo saneamiento e higiene, por ejemplo en guarderías y jardines de infancia, en barcos turísticos, en clínicas psiquiátricas o en centros de acogida para discapacitados. Shigella ha sido causa de diarrea en viajeros y turistas.

La causa de las enfermedades grupales puede considerarse el consumo de productos alimenticios contaminados por negligencia de los vendedores portadores de Shigella. Hay brotes asociados con el consumo de agua potable; nadar en cuerpos de agua contaminados también ha provocado infecciones. Sin embargo, las rutas de transmisión de alimentos y agua parecen desempeñar un papel menor en la propagación de la shigelosis en comparación con el cólera y la fiebre tifoidea, que generalmente requieren grandes dosis patógenos. En los países en desarrollo, donde la transmisión de enfermedades es predominantemente de persona a persona, los portadores pueden ser un reservorio importante del agente infeccioso. En pacientes que no han tomado medicamentos antibacterianos, la excreción de Shigella en las heces generalmente continúa durante 1×4 semanas, pero en una pequeña proporción de casos continúa mucho más tiempo.

La shigelosis es una infección bacteriana aguda de los intestinos causada por uno de los cuatro tipos de Shigella. El espectro de formas clínicas de infección incluye diarrea acuosa leve y disentería grave, que se caracteriza por calambres en el abdomen, tenesmo, fiebre y signos de intoxicación general.

Etiología.

El género Shigella (llamado así por K. Shiga, quien en 1898 estudió y describió en detalle el agente causante aislado de la disentería bacteriana por A.V. Grigoriev) de la familia Enterobacteriaceae consiste en un grupo de especies de bacterias estrechamente relacionadas con siguientes propiedades:

I. Morfológico: Shigella - palitos pequeños con extremos redondeados. Se diferencian de otros representantes de la familia Enterobacteriaceae por la ausencia de flagelos (inmóviles), no tienen esporas ni cápsulas y son gramnegativos.

II. Cultural: Shigella son aerobios o anaerobios facultativos; condiciones óptimas de cultivo: temperatura 37°C, pH 7,27,4. Crecen en medios nutritivos simples (MPA, MPB) en forma de colonias pequeñas, brillantes, translúcidas, grisáceas y redondas, de 1,5 x 2 mm de tamaño. S forma. La excepción es Shigella Sonne, que a menudo se disocia formando colonias grandes, planas y turbias con bordes dentados. R formas (las colonias tienen la apariencia de una “hoja de parra”). En medios nutritivos líquidos, Shigella produce turbidez uniforme, R Las formas forman un precipitado. El medio de enriquecimiento líquido es caldo de selenita.

III. enzimático: las principales características bioquímicas necesarias para identificar Shigella al aislar un cultivo puro son las siguientes:

1. ausencia de formación de gas durante la fermentación de la glucosa;
2. falta de producción de sulfuro de hidrógeno;
3. sin fermentación de lactosa durante 48 horas.

En total, las cuatro especies se dividen en aproximadamente 40 serotipos. Según las características de los principales antígenos somáticos (O) y las propiedades bioquímicas, se distinguen las siguientes cuatro especies o grupos: S. Dysenteriae (grupo A, incluye: Grigoriev-Shigi, Stutzer-Schmitz, Large-Sachs), S. flexneri (grupo B), S. boydii (grupo C) y S. sonnei (grupo D).

En relación con el manitol, todos los Shigella se dividen en manitol que se divide (Shigella Flexner, Boyd, Sonne) y que no se divide (Shigella Grigoriev-Shiga, Stutzer-Schmitz, Large-Sachs).

IV. Factores de patogenicidad:

1. Plásmido de invasiónproporciona la capacidad de Shigella para provocar una invasión con posterior diseminación intercelular y reproducción en el epitelio de la mucosa del colon;
2. Formación de toxinas: Shigella tiene una endotoxina lipopolisacárido, que es química y bioquímicamente similar a las endotoxinas de otros miembros de la familia Enterobacteriaceae. Además, S. Dysenteriae tipo I (bacilo Shiga) produce una exotoxina. Desde el descubrimiento de este último, se ha comprobado que tiene actividad enterotoxina y puede provocar secreción intestinal, además de tener un efecto citotóxico dirigido contra las células epiteliales intestinales; proporciona efecto neurotóxico que se observa en niños con shigelosis. La toxina Shiga, que ingresa a la sangre, junto con el daño al endotelio submucoso, también afecta los glomérulos del riñón, como resultado de lo cual, además de la diarrea con sangre, se desarrolla el síndrome urémico hemolítico con el desarrollo de insuficiencia renal.

v. Estructura antigénica:Todas las Shigella tienen un antígeno O somático, según cuya estructura se dividen en serovares.

VI. Resistencia: Temperatura 100 0 C mata a Shigella al instante. Shigella es resistente a las bajas temperaturas en agua de rio duran hasta 3 meses, en verduras y frutas, hasta 15 meses.En condiciones favorables, Shigella es capaz de reproducirse en productos alimenticios (ensaladas, vinagretas, carnes hervidas, carne picada, pescado hervido, leche y productos lácteos, compotas y gelatinas), especialmente Shigella Sonne.

Epidemiología.

1. Fuente de infección:Una persona que padece formas agudas y crónicas de shigelosis; portador de bacterias.

2. Vías de transmisión:

• Grado alimenticio (principalmente para S. sonnei)
• Acuático (principalmente para S. flexneri)
• Póngase en contacto con el hogar (principalmente para S. Dysenteriae)

3. Puerta de entradala infección sirve tracto gastrointestinal.

Patogénesis y cambios patológicos.

Después de la ingestión, Shigella coloniza secciones superiores intestino delgado y se multiplican allí, posiblemente causando un aumento de la secreción en Etapa temprana infecciones. Luego, Shigella penetra a través de las células M hasta la submucosa, donde es absorbida por los macrófagos. Esto provoca la muerte de algunas Shigella, lo que provoca la liberación de mediadores inflamatorios que inician la inflamación en la submucosa. La apoptosis de los fagocitos permite que otra parte de Shigella sobreviva y penetre en las células epiteliales de la mucosa a través de membrana basal. Shigella se multiplica y disemina intercelularmente dentro de los enterocitos, lo que resulta en el desarrollo de erosiones. Cuando Shigella muere, se liberan toxinas Shiga y similares, cuya acción conduce a la intoxicación. El daño a la mucosa se acompaña de hinchazón, necrosis y hemorragia, lo que provoca la aparición de sangre en las heces. Además, la toxina afecta el sistema nervioso central, lo que provoca trastornos tróficos.

Manifestaciones clínicas.

El espectro de manifestaciones clínicas de la shigelosis es muy amplio, desde diarrea leve hasta disentería severa con calambres en el abdomen, tenesmo, fiebre e intoxicación general.

Período de incubaciónvaría de varias horas a 7 días, con mayor frecuencia de 2 a 3 días.Inicialmente, los pacientes experimentan heces acuosas, fiebre (hasta 41°C), dolor abdominal difuso, náuseas y vómitos. Además, los pacientes se quejan de mialgias, escalofríos, dolor lumbar y dolor de cabeza. En los próximos días desde el inicio de la enfermedad aparecen signos de disentería: tenesmo, deposiciones frecuentes, escasas y sanguinolentas. La temperatura corporal disminuye gradualmente, el dolor puede localizarse en los cuadrantes inferiores del abdomen. La intensidad de la diarrea alcanza su máximo hacia el final de la primera semana de la enfermedad. La disentería con heces con sangre es más común y aparece más tempranamente en la enfermedad causada por S. disenteriae tipo I que en otras formas de shigelosis.

Para la shigelosis Sonne Es característico un curso más leve de la enfermedad (variante gastroentérica o gastroenterocolítica). El período febril es más corto, los síntomas de intoxicación son de corta duración y los cambios destructivos en la mucosa intestinal no son típicos.

shigelosis de flexnerBásicamente, se caracterizan dos variantes del curso clínico: gastroenterocolítico y colítico.

Complicaciones extraintestinales en la shigelosis.extraño:

1. Una complicación de la shigelosis puede ser el desarrollo de disbiosis intestinal.
2. Además de los dolores de cabeza, pueden aparecer signos de meningitis y convulsiones.
3. Se ha informado neuropatía periférica en infecciones por S. Dysenteriae tipo I y síndrome de Guillain-Barré (polineuritis) durante un brote de gastroenteritis por S. boydii.
4. A excepción de los niños que padecen distrofia, la diseminación hematógena del patógeno es relativamente rara; también se han descrito casos de abscesos por shigelosis y meningitis.
5. Con la shigelosis, es posible el desarrollo del síndrome de Reiter con artritis, conjuntivitis estéril y uretritis, esto generalmente ocurre entre 1 y 4 semanas después del inicio de la diarrea en los pacientes.
6. En los niños, la shigelosis se acompaña de síndrome urémico hemolítico, a menudo en combinación con reacciones similares a la leucemia, colitis grave y circulación de endotoxinas, pero la bacteriemia generalmente no se detecta.
7. En muy raras ocasiones, la queratoconjuntivitis purulenta es causada por Shigella, que entró en los ojos como resultado de una autoinfección con los dedos contaminados.
8. Shock hipovolémico y síndrome de coagulación intravascular diseminada.
9. Peritonitis, gangrena intestinal, hemorragia intestinal.

Inmunidad: Los seres humanos tienen una resistencia natural a la infección por shigella. Después enfermedad pasada la inmunidad no es estable y, después de la shigelosis, Sonne está prácticamente ausente. En caso de una enfermedad causada por Shigella Grigoriev Shiga, se desarrolla una inmunidad antitóxica más estable. En la protección contra infecciones, el papel principal pertenece a la secreción. IgA , previniendo la adhesión y la actividad citotóxica dependiente de anticuerpos de los linfocitos intraepiteliales, que, junto con la secreción IgA destruir a Shigella.

Diagnósticos y pruebas de laboratorio.

Propósito del estudio: detección e identificación de Shigella para diagnóstico; identificación de portadores de bacterias; Detección de Shigella en productos alimenticios.

Material para la investigación: heces, material seccional, productos alimenticios.

Métodos de diagnóstico:microbiológico (bacteriológico, microscópico (luminiscente); serológico; biológico; prueba de alergia.

Progreso del estudio:

1 día de estudio:Los cultivos deben realizarse a partir de heces recién excretadas o mediante hisopos rectales (tubo rectal); Si no se encuentran las condiciones adecuadas, el material debe colocarse en un entorno de transporte. Para ello, utilice agar intestinal (medio MacConkey o Shigella-Salmonella), agar xilosa-lisina desoxicolato moderadamente selectivo, KLD) y caldo nutritivo (caldo selenita). Si el tiempo entre la recolección y la inoculación supera las 2 horas, se deben utilizar soluciones conservantes: caldo de bilis al 20%, medio de Kauffmann combinado.

• Se emulsionan las heces en la mezcla de glicerina, se aplica una gota de la emulsión al medio y se frota con una espátula. Los medios diferenciales para Shigella son Ploskirev, Endo y EMS (agar eosina azul de metileno). Medio de Ploskirev (el medio incluye: MPA, lactosa, sales ácidos biliares e indicador verde brillante) también es un entorno electivo para Shigella, porque Inhibe el crecimiento de Escherichia coli.
• Paralelamente a la siembra directa material recolectado inoculados en caldo de selenita medio de enriquecimiento.
• Todos los cultivos se colocan en un termostato.

Día 2 del estudio:

• Se retiran las placas del termostato, se detectan las colonias sospechosas en medio de Ressel (medio nutritivo que incluye: agar-agar, indicador de Andréde, 1% de lactosa, 0,1% de glucosa) y manitol. La inoculación se realiza mediante golpes sobre una superficie biselada y una inyección en una columna de agar. El medio Ressel inoculado se coloca en un termostato durante 18 a 24 horas (al mismo tiempo, se vuelve a sembrar del medio selenito en medios de diagnóstico diferencial).
• Se hacen frotis (tinción de Gram) y se examinan al microscopio.
• Los preparativos se preparan como una gota "colgante" o "triturada".
• Establecimiento de una AR provisional con sueros de shigella de diagnóstico polivalente.
• Sembrar colonias sospechosas en agar inclinado.

Día 3 del estudio:

• Microscopía de material de agar inclinado.
• Los cultivos que no han fermentado lactosa en medio de Ressel se someten a más estudios: se hacen frotis (tinción de Gram) y se comprueba la pureza del cultivo. En presencia de bacilos gramnegativos, la inoculación se realiza en medio Hiss, caldo con papeles indicadores (para detectar indol y sulfuro de hidrógeno) y leche de tornasol.
• Los medios inoculados se colocan en un termostato durante 18 a 24 horas.

Día 4 del estudio:

• Contabilizando una corta "fila variada".
• Los cultivos sospechosos por sus propiedades enzimáticas y culturales en relación con Shigella se someten a identificación serológica. Declaración de RA sobre vidrio (sueros diagnósticos típicos y de grupo). Configuración de una RA implementada.

Como métodos acelerados utilizado para la shigelosismicroscopio fluorescente Y muestra biológica(introducción de cepas virulentas de Shigella en el saco conjuntival (debajo del párpado inferior) de los conejillos de indias; la conjuntivitis se desarrolla al final del primer día).

Prueba de alergia a Tsuverkalovprueba de alergia intradérmica con disentería (inyección de 0,1 ml de disentería en el antebrazo, reacción positiva en caso de infiltración e hiperemia). Actualmente, el diagnóstico de alergias prácticamente no se utiliza. La prueba de Tsurvekalov no es específica, se registran reacciones positivas no solo para shigelosis, sino también para salmonelosis, escherichiosis, yersiniosis, etc. OKI y, a veces, en individuos sanos.

Tratamiento y prevención.Para el tratamiento y la prevención según indicaciones epidemiológicas, se utiliza el bacteriófago. administracion oral, antibióticos después de determinar el antibiograma; en caso de disbacteriosis, preparaciones probióticas para corregir la microflora. Para reponer la pérdida de líquidos y electrolitos, administre una solución de glucosa y electrolitos en el interior.

Objetivos específicos:

Interpretar las propiedades biológicas de los patógenos de la shigelosis.

Familiarízate con la clasificación de Shigella.

Aprenda a interpretar los patrones patogénicos del proceso infeccioso provocado por Shigella.

Determinar métodos de diagnóstico microbiológico, terapia etiotrópica y prevención de la shigelosis.

Ser capaz de:

• Inocular el material de prueba en medios nutritivos.
  • Preparar frotis y tinción de Gram.
  • Realice microscopía de preparaciones utilizando un microscopio de inmersión.
  • Analizar las características morfológicas, culturales, enzimáticas de Shigella.

Preguntas teóricas:

1. Características de los patógenos de la shigelosis. Propiedades biológicas.

2. Clasificación de Shigella. Los principios que lo sustentan.

3. Epidemiología, patogénesis y características clínicas shigelosis

4. Diagnóstico de laboratorio.

5. Principios de tratamiento y prevención de la shigelosis.

Tareas prácticas realizadas en clase:

1. Microscopía de preparaciones de demostración de cultivos puros de patógenos de shigelosis.

2. Trabajos de diagnóstico bacteriológico de la shigelosis: estudio de cultivos fecales en medio de Ploskirev.

3. Subcultivo de colonias sospechosas en medio de Ressel y MPB para determinar la formación de indol y H 2S.

4. Dibujar preparativos de demostración y diagramas de diagnóstico microbiológico de shigelosis en el protocolo de la lección.

5. Elaboración del protocolo.

Literatura:

1. Korotyaev A.I., Babichev S.A., Microbiología médica, inmunología y virología / Libro de texto para universidades de medicina, San Petersburgo “Literatura especial”, 1998. - 592 p.

2. Timakov V.D., Levashev V.S., Borisov L.B. Microbiología/Libro de texto.-2ª ed., revisada. Y adicional - M.: Medicina, 1983, - 512 p.

3. Pyatkin K.D. Krivoshein Yu.S. Microbiología con virología e inmunología.- Kiev: escuela V i scha, 1992. - 431 p.

4. Microbiología médica / Editado por V.I. Pokrovsky.-M.:GEOTAR-MED, 2001.-768p.

5. Guía de Clases prácticas en microbiología, inmunología y virología. Ed. MP Zykova. M. "Medicina". 1977. 288 pág.

6. Cherkes F.K., Bogoyavlenskaya L.B., Belskan N.A. Microbiología. /Ed. F.K. Circasiano. M.: Medicina, 1986. 512 p.

7. Apuntes de clase.

Literatura adicional:

1. Makiyarov K.A. Microbiología, virología e inmunología. Alma-Ata, “Kazajstán”, 1974. 372 p.

2. Titov M.V. Enfermedades infecciosas. - K., 1995. 321 p.

3. Shuvalova E.P. Enfermedades infecciosas. - M.: Medicina, 1990. - 559 p.

4. BME, T. 1, 2, 7.

5. Pavlovich S.A. Microbiología médica en gráficos: libro de texto. subsidio para gastos médicos Inst. Mn.: Más alto. escuela, 1986. 255 p.

Breve pautas trabajar en una lección práctica.

Al comienzo de la lección, se comprueba el nivel de preparación de los estudiantes para la lección.

El trabajo independiente consiste en estudiar la clasificación de Shigella, analizando el esquema de patogenia y signos clínicos shigelosis Estudio de métodos para el diagnóstico de laboratorio de la shigelosis. Los estudiantes inoculan biomaterial en medios nutritivos. Luego se preparan los portaobjetos, se tiñen con Gram, se realiza la microscopía, se dibujan los portaobjetos y se dan las explicaciones necesarias. El trabajo independiente también incluye la microscopía de los preparativos de demostración y su boceto en el protocolo de la lección.

Al final de la lección se realiza un test de control y análisis de los resultados finales del trabajo independiente de cada alumno.

Mapa tecnológico para la realización de una lección práctica.

páginas	Etapas	tiempo en minutos	Formas de aprender	Equipo	Ubicación
	Comprobar y corregir el nivel inicial de preparación para la lección.		Tareas de prueba base	tablas, atlas	Sala de estudio
	Trabajo independiente		Gráfico de estructura lógica	Microscopio de inmersión, colorantes, portaobjetos de vidrio, asas bacteriológicas, medios nutritivos, medio de Ploskirev, medio de Ressel, “serie abigarrada de Hiss”
	Autochequeo y corrección del dominio material		Tareas de aprendizaje específicas
	Control de prueba		Pruebas
	Análisis de resultados del trabajo.

Tareas de entrenamiento objetivo:

1. Se obtuvieron heces que contenían moco y pus de un niño con ICA (la recolección de heces se realizó mediante un tubo rectal). ¿Qué método de diagnóstico rápido se debe utilizar?

A. ELISA.

B. ARRECIFE.

C. REAL ACADEMIA DE BELLAS ARTES.

D. RSK.

MI. RIA.

1. El agente causante de la disentería se aisló de un niño enfermo con una infección intestinal aguda. Cual características morfológicas¿Característica del patógeno?

A . Bacilo gramnegativo inmóvil.

B . Bacilo móvil Gram positivo.

C . Forma una cápsula en un medio nutritivo.

D . Forma esporas en el ambiente externo.

mi . Estreptobacilos grampositivos.

3. Un paciente que enfermó hace tres días y se queja de temperatura de 38°C, dolor abdominal, frecuentes heces sueltas, el médico diagnosticó clínicamente la presencia de sangre en las heces disentería bacilar. ¿Qué método de diagnóstico microbiológico es recomendable utilizar en este caso y qué material se debe extraer del paciente para confirmar el diagnóstico?

A. Cal bacterioscópica.

B. Cal bacteriológica.

C. Sangre bacterioscópica.

D. Orina bacteriológica.

E. Sangre serológica.

4. Shigella Sonne fue aislada de las heces del paciente. Lo que hay que hacer investigación adicional para determinar la fuente de infección?

A . Realizar fagotipificación del cultivo puro aislado.

B . Determinar el antibiograma.

C . Configure una reacción de precipitación.

D . Realizar una reacción de fijación del complemento.

mi . Establecer una reacción de neutralización.

5. Entre un grupo de turistas (27 personas) que bebieron agua del lago, después de dos días, 7 personas desarrollaron síntomas. diarrea aguda. ¿Qué material se necesita para establecer la etiología? de esta enfermedad¿Es necesario enviarlo a un laboratorio bacteriológico?

A. Agua, heces de pacientes.

B. Agua, la sangre de los pacientes.

C. Productos alimenticios.

D. Me meo.

E. Esputo.

6. Un inconveniente importante del método de diagnóstico microscópico de las infecciones intestinales agudas es su falta de contenido informativo debido a la identidad morfológica de las bacterias de la familia. enterobacterias . ¿Qué hace que este método sea más informativo?

A . Radioinmunoensayo.

B . Reacción de Coombs.

C . Ensayo inmunoabsorbente vinculado.

D . Reacción de opsonización.

mi . Reacción de inmunofluorescencia.

7. Un paciente de 29 años fue hospitalizado con ataques de vómitos, diarrea y tenesmo. Heces con trozos de moco y algo de sangre. Un estudio bacteriológico de bacterias de colonias en el medio de Ploskirev reveló bacilos gramnegativos inmóviles que no fermentan la lactosa. Nombra el agente causante del proceso infeccioso.

A. Shigella flexneri.

B. Vibrio eltor.

C. E. Coli.

D. Proteo mirabilis.

MI. Salmonella enteritidis.

8. Se entregó lechuga al laboratorio microbiológico, lo que presumiblemente es la causa del cuadro agudo. infección intestinal. ¿Qué medios nutritivos se utilizan para la siembra primaria?

A . Agar yema-sal, MPB.

B. AMP, MPB.

C . Caldo selenita, Endo, Ploskireva.

D . Caldo de hígado, medio Roux.

mi . Agar sangre, agar alcalino.

9. Durante un estudio microbiológico de la carne picada, se aislaron bacterias pertenecientes al género Shigella. ¿El estudio de qué propiedades de los microbios llevó a esta conclusión?

A . Cultural, tintorial.

B . Antigénico, cultural.

C . Sacarolítico, proteolítico.

D . Antigénico, inmunogénico.

mi . Morfológico, antigénico.

10. cuando examinación microscópica Vómito extraído de un paciente con síntomas de infección intestinal aguda, se encontraron palos inmóviles. ¿En qué frotis o preparación se podría estudiar la movilidad de las bacterias?

A . En un frotis teñido con Gram.

B . En un frotis teñido según Ziehl-Neelsen.

C . La preparación contiene una “gota espesa”.

D . En un frotis teñido según Neisser.

mi . La preparación contiene una "gota triturada".

Algoritmo trabajo de laboratorio:

1. Estudio de las propiedades biológicas de Shigella.

2. Familiarización con la clasificación de Shigella.

3. Análisis del esquema de manifestaciones patogénicas y clínicas de la shigelosis.

4. Estudio de métodos de diagnóstico de laboratorio de la shigelosis.

5. Estudio de los principios básicos de la terapia y prevención de la shigelosis.

1. Elaboración de preparados fijos a partir de cultivo bacteriano.
2. Colorante microportaobjetos según la abuela.
3. Microscopía de microportaobjetos. Con usando un microscopio de inmersión, su análisis y registro en el protocolo de la lección.
4. Mi croscopia y análisis de preparaciones de demostración de cultivos puros de Shigella.
5. Elaboración de preparaciones de demostración y diagramas de diagnóstico de laboratorio de shigelosis en el protocolo.
6. Elaboración del protocolo.

Disentería Es una infección dolorosa acompañada de diarrea con liberación de sangre, pus y mocos, dolor abdominal y síntomas de intoxicación general, cursando con lesión predominante del colon, causada por diferentes tipos algo así como Shigella(bacterias de la disentería).

Patógenos de la disentería. pertenecen al departamento Gracilicutes, familia enterobacterias, familia Shigella.
Disentería , llamado Shigella disenteriae, es más grave que las enfermedades causadas por otras Shigella, ya que además de la endotoxina, que provoca la inflamación intestinal, este tipo de bacteria produce una fuerte exotoxina que actúa como neurotoxina.

disentería bacteriana , o shigelosis, es una enfermedad infecciosa causada por bacterias del género Shigella,

Disentería.Morfología y propiedades tintoriales..
Shigella son bacilos gramnegativos con extremos redondeados, de 2 a 3 micrones de largo, de 0,5 a 7 micrones de espesor, no forman esporas, no tienen flagelos y son inmóviles. En muchas cepas se encuentran vellosidades de tipo general y pelos sexuales. Algunas Shigella tienen una microcápsula.

Disentería. Cultivo.
Los bacilos de la disentería son anaerobios facultativos. Son poco exigentes con los medios nutritivos y crecen bien a una temperatura de 37 °C y un pH de 7,2-7,4. En medios densos forman pequeñas colonias transparentes, en medios líquidos, turbidez difusa. El caldo de selenita se utiliza con mayor frecuencia como medio de enriquecimiento para el cultivo de Shigella.

Disentería.Actividad enzimática.
Shigella tiene menos actividad enzimática que otras enterobacterias. Fermentan los carbohidratos para formar ácido. Una característica importante que permite diferenciar a Shigella es su relación con el manitol: S. Dysenteriae no fermenta el manitol, los representantes de los grupos B, C, D son positivos para el manitol. Los más bioquímicamente activos son S. sonnei, que puede fermentar lentamente (en 2 días) la lactosa. Según la relación de S. sonnei con la ramnosa, la xilosa y la maltosa, se distinguen 7 variantes bioquímicas.

Disentería.Estructura antigénica.
Shigella tiene un antígeno O, su heterogeneidad permite distinguir serovares y subserovares dentro de los grupos; Algunos miembros del género exhiben antígeno K.

Disentería.Factores de patogenicidad.
Todos los bacilos de la disentería forman endotoxina, que tiene un efecto enterotrópico, neurotrópico y pirógeno. Además, S. Dysenteriae - Shigella Grigoriev-Shiga - secreta una exotoxina que tiene un efecto enterotóxico, neurotóxico, citotóxico y nefrotóxico en el cuerpo, lo que en consecuencia altera el metabolismo agua-sal y la actividad del sistema nervioso central, provocando la muerte. de las células epiteliales del intestino del colon, daño a los túbulos renales.

La formación de una exotoxina se asocia con un curso más grave de disentería causada por este patógeno. Otras especies de Shigella también pueden producir exotoxinas. Se ha descubierto el factor de permeabilidad a la RF, que daña los vasos sanguíneos. Los factores de patogenicidad también incluyen proteína invasiva, facilitando su penetración en las células epiteliales, así como en los pili y las proteínas de la membrana externa responsables de la adhesión, y una microcápsula.

Disentería.Resistencia.
Shigella tiene baja resistencia a varios factores. S. sonnei, que en agua del grifo duran hasta 2,5 meses; en aguas abiertas sobreviven hasta 1,5 meses. S. sonnei no sólo puede sobrevivir durante bastante tiempo, sino que también puede reproducirse en productos, especialmente en productos lácteos.

Disentería.Epidemiología.
La disentería es una infección antroponótica: la fuente son los enfermos y los portadores. El mecanismo de transmisión de infecciones es fecal-oral. Las vías de transmisión pueden ser diferentes: en la disentería de Sonne predomina la vía alimentaria, en la disentería de Flexner, el agua, en la disentería de Grigoriev-Shiga la vía de contacto y doméstica es típica.

Disentería encontrado en muchos países del mundo. EN últimos años Ha habido un fuerte aumento en la incidencia de esta infección. Personas de todas las edades se ven afectadas, pero los niños de 1 a 3 años son los más susceptibles a la disentería. El número de pacientes aumenta en julio - septiembre. Los diferentes tipos de Shigella se distribuyen de manera desigual en cada región.

Disentería.Patogénesis.
Shigella ingresa al tracto gastrointestinal a través de la boca y llega al colon. Al poseer tropismo por su epitelio, los patógenos se adhieren a las células con la ayuda de pili y proteínas de la membrana externa. Gracias al factor invasivo, penetran en el interior de las células, se multiplican allí y, como resultado, las células mueren.

Se forman ulceraciones en la pared intestinal, en lugar de las cuales se forman cicatrices. La endotoxina, liberada cuando se destruyen las bacterias, causa intoxicación general, aumento de la motilidad intestinal y diarrea. La sangre de las úlceras resultantes ingresa a las heces. Como resultado de la acción de la exotoxina, se observa una alteración más pronunciada del metabolismo agua-sal, la actividad del sistema nervioso central y daño renal.

Disentería.Cuadro clinico.
El período de incubación dura de 1 a 5 días. La enfermedad comienza de forma aguda con un aumento de la temperatura corporal a 38-39 ° C, aparecen dolor abdominal y diarrea. Hay una mezcla de sangre y moco en las heces. La disentería de Grigoriev-Shiga es la más grave.

Disentería.Inmunidad.
Después de una enfermedad, la inmunidad es específica de cada especie y de variante. Es de corta duración y frágil. A menudo la enfermedad se vuelve crónica. Se han observado enfermedades repetidas incluso dentro de una misma temporada.

Disentería.Laboratorio diagnóstico.
Se toman las heces del paciente como material de prueba. La base del diagnóstico es el método bacteriológico, que permite identificar el patógeno, determinar su sensibilidad a los antibióticos y realizar una identificación intraespecífica (determinar la variante bioquímica, serovar o colicinogenovar). En caso de un curso prolongado de disentería, se puede utilizar como auxiliar. método serológico, que consiste en diagnosticar AR, RNGA (el diagnóstico puede confirmarse por el aumento del título de anticuerpos cuando se repite la reacción).

Disentería.Tratamiento.
Los pacientes con formas graves de disentería de Grigoriev-Shish y Flexner son tratados con antibióticos amplia gama acciones con consideración obligatoria del antibiograma, ya que entre Shigella a menudo hay formas no solo resistentes a los antibióticos, sino también dependientes de los antibióticos. Para las formas leves de disentería, no se utilizan antibióticos, ya que su uso provoca disbacteriosis, lo que empeora la enfermedad. proceso patologico y alteración de los procesos regenerativos en la membrana mucosa del colon.

Disentería.Prevención.
El único fármaco que se puede utilizar en focos de infección con fines profilácticos es el bacteriófago de la disentería. La prevención no específica juega el papel principal.

La prevención no específica implica una adecuada ordenación sanitaria e higiénica de la vida de las personas, suministrándoles agua y alimentos de calidad.

En el entorno del paciente, se deben tomar medidas para prevenir la propagación del patógeno.

Microbiología de la disentería

La disentería es una enfermedad infecciosa caracterizada por intoxicación general del cuerpo, diarrea y una lesión peculiar de la membrana mucosa del intestino grueso. Es una de las enfermedades intestinales agudas más comunes en el mundo. La enfermedad se conoce desde la antigüedad con el nombre de “diarrea con sangre”, pero su naturaleza resultó ser diferente. En 1875, el científico ruso F.A. Lesh aisló una ameba de un paciente con diarrea con sangre. Entamoeba histolytica, en los siguientes 15 años se estableció la independencia de esta enfermedad, por lo que se mantuvo el nombre de amebiasis.

Los agentes causantes de la disentería propiamente dicha son un gran grupo de bacterias biológicamente similares, unidas en el género. Shigella. El patógeno fue descubierto por primera vez en 1888 por A. Chantemes y F. Vidal; en 1891 fue descrita por AV Grigoriev, y en 1898 K. Shiga, utilizando suero obtenido de un paciente, identificó el patógeno en 34 pacientes con disentería, demostrando finalmente el papel etiológico de esta bacteria. Sin embargo, en los años siguientes, se descubrieron otros agentes causantes de la disentería: en 1900, por S. Flexner, en 1915, por K. Sonne, en 1917, por K. Stutzer y K. Schmitz, en 1932, por J. Boyd. en 1934 - D. Large, en 1943 - A. Sax. Actualmente género Shigella Incluye más de 40 serotipos. Todos ellos son bacilos gramnegativos cortos, inmóviles, que no forman esporas ni cápsulas, que crecen bien en medios nutritivos regulares y no crecen en medios de inanición con citrato o malonato como única fuente de carbono; no forma H 2 S, no tiene ureasa; la reacción de Voges-Proskauer es negativa; la glucosa y algunos otros carbohidratos se fermentan para formar ácido sin gas (excepto en algunos biotipos Shigella flexneri: manchester Y Newcastle); Como regla general, no fermentan la lactosa (a excepción de Shigella Sonne), adonitol, salicina e inositol, no licuan la gelatina, generalmente forman catalasa y no tienen lisina descarboxilasa ni fenilalanina desaminasa. El contenido de G + C en el ADN es del 49 al 53% en moles. Shigella son anaerobios facultativos, la temperatura óptima para el crecimiento es 37 °C, no crecen a temperaturas superiores a 45 °C, el pH óptimo del ambiente es 6,7 - 7,2. Las colonias en medios densos son redondas, convexas, translúcidas; en caso de disociación, se forman colonias rugosas en forma de R. Crecimiento en MPB en forma de turbidez uniforme, las formas rugosas forman un sedimento. Los cultivos recién aislados de Shigella Sonne suelen formar colonias de dos tipos: pequeñas, redondas y convexas (fase I), grandes y planas (fase II). La naturaleza de la colonia depende de la presencia (fase I) o ausencia (fase II) de un plásmido con un peso molecular de 120 MD, que también determina la virulencia de Shigella Sonne.

La clasificación internacional de Shigella se basa en sus características bioquímicas (Shigella que no fermenta con manitol, que fermenta con manitol, que fermenta lentamente la lactosa) y las características de la estructura antigénica (Tabla 37).

En Shigella se encontraron antígenos O de diferente especificidad: comunes a la familia enterobacterias, genérico, específico de especie, grupo y tipo, así como antígenos K; No tienen antígenos N.

Tabla 37

Clasificación del género de bacterias. Shigella

La clasificación tiene en cuenta únicamente los antígenos O específicos de grupo y tipo. De acuerdo con estas características, el género Shigella se divide en 4 subgrupos, o 4 especies, e incluye 44 serotipos. En el subgrupo A (tipo Shigella disenteriae) incluía Shigella, que no fermenta el manitol. La especie incluye 12 serotipos (1 – 12). Cada serotipo tiene su propio tipo de antígeno específico; Las conexiones antigénicas entre serotipos, así como con otras especies de Shigella, se expresan débilmente. Al subgrupo B (escriba Shigella flexneri) incluyen Shigella, que generalmente fermenta el manitol. Shigella de esta especie están relacionados serológicamente entre sí: contienen antígenos específicos de tipo (I – VI), por los cuales se dividen en serotipos (1 – 6), y antígenos de grupo, que se encuentran en diferentes composiciones en cada serotipo y mediante el cual los serotipos se dividen en subserotipos. Además, esta especie incluye dos variantes antigénicas: X e Y, que no tienen antígenos típicos, se diferencian en conjuntos de antígenos grupales. Serotipo S. flexneri 6 no tiene subserotipos, pero se divide en 3 tipos bioquímicos según las características de la fermentación de la glucosa, manitol y dulcitol (Tabla 38).

Tabla 38

Biotipos S. flexneri 6

Nota. K – fermentación con formación de sólo ácido; CG – fermentación con formación de ácido y gas; (–) – sin fermentación.

El antígeno lipopolisacárido O en todas las Shigella Flexner contiene el antígeno del grupo 3, 4 como estructura primaria principal, su síntesis está controlada por un gen cromosómico localizado cerca del locus his. Los antígenos específicos de tipo I, II, IV, V y los antígenos de grupo 6, 7, 8 son el resultado de la modificación de los antígenos 3, 4 (glicosilación o acetilación) y están determinados por los genes de los profagos convertidores correspondientes, el sitio de integración. de los cuales se encuentra en la región lac - pro del cromosoma Shigella.

Apareció en el país en los años 80. Siglo XX y un nuevo subserotipo que se ha generalizado S. flexneri 4(IV:7, 8) difiere del subserotipo 4a (IV:3, 4) y 4b (IV:3, 4, 6), surgió de una variante S. flexneriY(IV:3, 4) debido a la lisogenización por sus profagos convertidores IV y 7, 8.

Al subgrupo C (escriba Shigella boydii) incluyen Shigella, que generalmente fermenta el manitol. Los miembros del grupo son serológicamente diferentes entre sí. Las conexiones antigénicas dentro de la especie se expresan débilmente. La especie incluye 18 serotipos (1 – 18), cada uno de los cuales tiene su propio antígeno tipo principal.

En el subgrupo D (tipo Shigella sonnei) incluía Shigella, que generalmente fermenta manitol y es capaz de fermentar lentamente (después de 24 horas de incubación y más) lactosa y sacarosa. Vista S. sonnei incluye un serotipo, pero las colonias de las fases I y II tienen sus propios antígenos específicos de tipo. Para la clasificación intraespecífica de Shigella Sonne se han propuesto dos métodos:

1) dividirlos en 14 tipos y subtipos bioquímicos según su capacidad para fermentar maltosa, ramnosa y xilosa; 2) división en tipos de fagos según la sensibilidad a un conjunto de fagos correspondientes.

Estos métodos de tipificación tienen importancia principalmente epidemiológica. Además, Shigella Sonne y Shigella Flexner se tipifican con el mismo propósito en función de su capacidad para sintetizar colicinas específicas (colicinogenotipado) y su sensibilidad a colicinas conocidas (colicinotipado). Para determinar el tipo de colicinas producidas por Shigella, J. Abbott y R. Chenon propusieron conjuntos de cepas estándar e indicadoras de Shigella, y para determinar la sensibilidad de Shigella a tipos conocidos de colicinas, un conjunto de cepas colicinogénicas estándar de P. Frederick. se utiliza.

Resistencia. Shigella tiene una resistencia bastante alta a los factores ambientales. Sobreviven en tela de algodón y papel hasta 30 - 36 días, en heces secas - hasta 4 - 5 meses, en el suelo - hasta 3 - 4 meses, en agua - de 0,5 a 3 meses, en frutas y verduras. – hasta 2 semanas, en leche y productos lácteos – hasta varias semanas; a una temperatura de 60 °C mueren en 15 a 20 minutos. Sensible a soluciones de cloramina, cloro activo y otros desinfectantes.

Factores de patogenicidad. La propiedad biológica más importante de Shigella, que determina su patogenicidad, es la capacidad de invadir las células epiteliales, multiplicarse en ellas y provocar su muerte. Este efecto se puede detectar mediante una prueba queratoconjuntival (la introducción de un asa de un cultivo de Shigella (2 a 3 mil millones de bacterias) debajo del párpado inferior de un conejillo de indias provoca el desarrollo de queratoconjuntivitis seroso-purulenta), así como mediante la infección de las células. cultivos (efecto citotóxico) o embriones de pollo (su muerte), o por vía intranasal en ratones blancos (desarrollo de neumonía). Los principales factores de patogenicidad de Shigella se pueden dividir en tres grupos:

1) factores que determinan la interacción con el epitelio de la membrana mucosa;

2) factores que aseguran la resistencia a los mecanismos de defensa humorales y celulares del macroorganismo y la capacidad de Shigella para reproducirse en sus células;

3) la capacidad de producir toxinas y productos tóxicos que determinan el desarrollo del propio proceso patológico.

El primer grupo incluye factores de adhesión y colonización: su papel lo desempeñan los pili, las proteínas de la membrana externa y el LPS. La adhesión y la colonización son promovidas por enzimas que destruyen el moco: neuraminidasa, hialuronidasa, mucinasa. El segundo grupo incluye factores de invasión que favorecen la penetración de Shigella en los enterocitos y su reproducción en ellos y en los macrófagos con la manifestación simultánea de un efecto citotóxico y (o) enterotóxico. Estas propiedades están controladas por los genes de un plásmido con un peso molecular de 140 MD (codifica la síntesis de proteínas de la membrana externa que provocan la invasión) y los genes cromosómicos de Shigella: kcp A (provoca queratoconjuntivitis), cyt (responsable de la destrucción celular ), así como otros genes aún no identificados. La protección de Shigella contra la fagocitosis la proporcionan el antígeno K de superficie, los antígenos 3, 4 y el lipopolisacárido. Además, el lípido A de la endotoxina de Shigella tiene un efecto inmunosupresor: suprime la actividad de las células de memoria inmunitaria.

El tercer grupo de factores de patogenicidad incluye endotoxinas y dos tipos de exotoxinas que se encuentran en Shigella: las exotoxinas Shiga y similares a Shiga (SLT-I y SLT-II), cuyas propiedades citotóxicas son más pronunciadas en S. disenteriae 1. También se han encontrado toxinas Shiga y similares a Shiga en otros serotipos. S. disenteriae, también se forman S. flexneri, S. sonnei, S. boydii, ECEH y algunas salmonelas. La síntesis de estas toxinas está controlada por los genes tox de los fagos convertidores. Las enterotoxinas tipo LT se encuentran en Shigella Flexner, Sonne y Boyd. Su síntesis de LT está controlada por genes plásmidos. La enterotoxina estimula la actividad de la adenilato ciclasa y es responsable del desarrollo de la diarrea. La toxina Shiga, o neurotoxina, no reacciona con el sistema de adenilato ciclasa, pero tiene un efecto citotóxico directo. Las toxinas Shiga y similares a Shiga (SLT-I y SLT-II) tienen un peso molecular de 70 kDa y constan de las subunidades A y B (esta última de 5 subunidades pequeñas idénticas). El receptor de toxinas es un glicolípido de la membrana celular.

La virulencia de Shigella Sonne también depende de un plásmido con un peso molecular de 120 MD. Controla la síntesis de unos 40 polipéptidos de la membrana externa, siete de ellos están asociados con la virulencia. Shigella Sonne, al tener este plásmido, forma colonias de fase I y es virulenta. Los cultivos que han perdido el plásmido forman colonias de fase II y carecen de virulencia. Shigella Flexner y Boyd encontraron plásmidos con un peso molecular de 120 a 140 MD. El lipopolisacárido de Shigella es una endotoxina fuerte.

Características de la epidemiología. La fuente de infección son únicamente los humanos. Ningún animal en la naturaleza sufre disentería. En condiciones experimentales, la disentería sólo puede reproducirse en monos. El método de infección es fecal-oral. Vías de transmisión: agua (predominante para Shigella Flexner), alimentos, especialmente leche y productos lácteos (vía de infección predominante para Shigella Sonne), y contacto doméstico, especialmente para esta especie. S. disenteriae.

Una característica de la epidemiología de la disentería es un cambio en la composición de especies de patógenos, así como en los biotipos de Sonne y los serotipos de Flexner en determinadas regiones. Por ejemplo, hasta finales de los años 30. Siglo XX a una parte S. disenteriae 1 representó hasta el 30-40% de todos los casos de disentería, y luego este serotipo comenzó a aparecer cada vez con menos frecuencia y casi desapareció. Sin embargo, en las décadas de 1960 y 1980. S. disenteriae reapareció en la arena histórica y provocó una serie de epidemias que llevaron a la formación de tres focos hiperendémicos: en América Central, África Central y el sur de Asia (India, Pakistán, Bangladesh y otros países). Las razones del cambio en la composición de especies de los patógenos de la disentería probablemente estén asociadas con cambios en la inmunidad colectiva y cambios en las propiedades de las bacterias de la disentería. En particular, el regreso S. disenteriae 1 y su amplia distribución, que provocó la formación de focos hiperendémicos de disentería, se asocia con la adquisición de plásmidos que provocaron resistencia a múltiples fármacos y mayor virulencia.

Características de patogénesis y clínica. El período de incubación de la disentería es de 2 a 5 días, a veces menos de un día. La formación de un foco infeccioso en la mucosa de la parte descendente del intestino grueso (sigmoide y recto), por donde penetra el patógeno de la disentería, es de naturaleza cíclica: adhesión, colonización, introducción de Shigella en el citoplasma de los enterocitos, su intracelular. reproducción, destrucción y rechazo de células epiteliales, liberación de patógenos en la luz del intestino; después de esto, comienza el siguiente ciclo: adhesión, colonización, etc. La intensidad de los ciclos depende de la concentración de patógenos en la capa parietal de la membrana mucosa. Como resultado de ciclos repetidos, el foco inflamatorio crece, las úlceras resultantes, que se conectan, aumentan la exposición de la pared intestinal, como resultado de lo cual aparecen sangre, grumos mucopurulentos y leucocitos polimorfonucleares en las heces. Las citotoxinas (SLT-I y SLT-II) causan destrucción celular, enterotoxina – diarrea, endotoxinas – intoxicación general. El cuadro clínico de la disentería está determinado en gran medida por el tipo de exotoxina que produce en mayor medida el patógeno, el grado de su efecto alergénico y el estado inmunológico del cuerpo. Sin embargo, muchas cuestiones sobre la patogénesis de la disentería siguen sin estar claras, en particular: las características del curso de la disentería en niños de los dos primeros años de vida, las razones de la transición de la disentería aguda a la crónica, la importancia de la sensibilización, el mecanismo. de inmunidad local de la mucosa intestinal, etc. Las manifestaciones clínicas más típicas de la disentería son diarrea, urgencia frecuente: en casos graves, hasta 50 o más veces al día, tenesmo (espasmos dolorosos del recto) e intoxicación general. La naturaleza de las heces está determinada por el grado de daño al intestino grueso. La disentería más grave es causada por S. disenteriae 1, más fácilmente: disentería de Sonne.

Inmunidad posinfecciosa. Como han demostrado las observaciones de los monos, después de sufrir disentería, queda una inmunidad fuerte y bastante duradera. Es causada por anticuerpos antimicrobianos, antitoxinas, aumento de la actividad de los macrófagos y linfocitos T. La inmunidad local de la mucosa intestinal, mediada por IgA, desempeña un papel importante. Sin embargo, la inmunidad es específica del tipo; no se produce una fuerte inmunidad cruzada.

Diagnóstico de laboratorio. El método principal es bacteriológico. El material para la investigación son las heces. Esquema de aislamiento de patógenos: inoculación en medios de diagnóstico diferencial Endo y Ploskirev (en paralelo en medio de enriquecimiento seguido de inoculación en medios Endo y Ploskirev) para aislar colonias aisladas, obtener un cultivo puro, estudiar sus propiedades bioquímicas y, teniendo en cuenta estas últimas, identificar utilizando sueros aglutinantes de diagnóstico polivalentes y monovalentes. Se producen los siguientes sueros comerciales.

1. A Shigella, que no fermenta manitol:

A S. disenteriae 1 Y 2

A S. disenteriae 3 – 7(polivalente y monovalente),

A S. disenteriae 8 – 12(polivalente y monovalente).

2. Al manitol fermentador de Shigella:

a antígenos típicos S. flexneri I, II, III, IV, V, VI,

para agrupar antígenos S. flexneri 3, 4, 6, 7, 8– polivalente,

a los antígenos S. boydii 1 – 18(polivalente y monovalente), a antígenos S. sonnei I fase, II fase,

a los antígenos S. flexneri I-VI+ S. sonnei– polivalente.

Para identificar rápidamente Shigella, se recomienda el siguiente método: se subcultiva una colonia sospechosa (lactosa negativa en medio Endo) en medio TSI (English. hierro triple azúcar) – agar de tres azúcares (glucosa, lactosa, sacarosa) con hierro para determinar la producción de H2S; o a un medio que contenga glucosa, lactosa, sacarosa, hierro y urea. Cualquier organismo que descomponga la urea después de 4 a 6 horas de incubación probablemente sea miembro del género. Proteo y puede ser excluido. Se puede excluir un microorganismo que produzca H2S o que tenga una unión formadora de ureasa o ácido (fermente lactosa o sacarosa), aunque se deben investigar las cepas productoras de H2S como posibles miembros del género. Salmonela. En todos los demás casos, el cultivo cultivado en estos medios debe examinarse y, si fermenta glucosa (cambio de color), aislarse en forma pura. Al mismo tiempo, se puede estudiar en una reacción de aglutinación vítrea con antisueros apropiados para el género. Shigella. Si es necesario, se realizan otras pruebas bioquímicas para comprobar la pertenencia al género. Shigella, y también movilidad de estudios.

Para detectar antígenos en la sangre (incluso como parte de la CCA), orina y heces, se pueden utilizar los siguientes métodos: RPGA, RSK, reacción de coaglutinación (en orina y heces), IFM, RAGA (en suero sanguíneo). Estos métodos son muy eficaces, específicos y adecuados para el diagnóstico precoz.

Para el diagnóstico serológico se puede utilizar: RPHA con el correspondiente diagnóstico de eritrocitos, método de inmunofluorescencia (modificación indirecta), método de Coombs (determinación del título de anticuerpos incompletos). También tiene valor diagnóstico una prueba de alergia con disentería (una solución de fracciones proteicas de Shigella Flexner y Sonne). La reacción se tiene en cuenta a las 24 horas y se considera positiva en presencia de hiperemia e infiltrado de 10 a 20 mm de diámetro.

Tratamiento. Se presta especial atención a la restauración del metabolismo normal del agua y la sal, una nutrición racional, la desintoxicación y la terapia antibiótica racional (teniendo en cuenta la sensibilidad del patógeno a los antibióticos). Se logra un buen efecto mediante el uso temprano de un bacteriófago polivalente para la disentería, especialmente tabletas recubiertas de pectina, que protege al fago de la acción del jugo gástrico HCl; En el intestino delgado, la pectina se disuelve, los fagos se liberan y ejercen su efecto. Con fines preventivos, el fago se debe administrar al menos una vez cada tres días (el período de supervivencia en el intestino).

El problema de la prevención específica. Para crear inmunidad artificial contra la disentería, se utilizaron varias vacunas: de bacterias muertas, químicas, alcohol, pero todas resultaron ineficaces y fueron suspendidas. Se han creado vacunas contra la disentería de Flexner a partir de Shigella Flexner viva (mutante, dependiente de estreptomicina); vacunas ribosómicas, pero tampoco han encontrado un uso generalizado. Por tanto, el problema de la prevención específica de la disentería sigue sin resolverse. La principal forma de combatir la disentería es mejorar el sistema de suministro de agua y alcantarillado, garantizar estrictos regímenes sanitarios e higiénicos en las empresas alimentarias, especialmente en la industria láctea, en las guarderías, en los lugares públicos y en el mantenimiento de la higiene personal.