Χρώμα και διαφάνεια του τελικού μέσου. Αλυσιδωτή αντίδραση ουρανίου και εντυπωσιακή αλυσιδωτή αντίδραση

119. Pandey and Nonne - Αντιδράσεις Apelt

Ως αντιδραστήριο για τη διεξαγωγή της αντίδρασης Pandey, χρησιμοποιείται ένα διαυγές υπερκείμενο υγρό, το οποίο λαμβάνεται με έντονη ανακίνηση 100 g υγρού καρβολικού οξέος με 1000 ml απεσταγμένου νερού. Για ιζήματα και καθαρό υγρό(αντιδραστήριο), το μείγμα αυτό τοποθετείται πρώτα σε θερμοστάτη για 3-4 ώρες, και στη συνέχεια διατηρείται σε θερμοκρασία δωματίου για 2-3 ημέρες.

Τοποθετήστε ένα ρολόι ή μια γυάλινη διαφάνεια σε σκούρο χαρτί και εφαρμόστε 2-3 σταγόνες αντιδραστηρίου σε αυτό και μετά 1 σταγόνα εγκεφαλονωτιαίο υγρό. Εάν η σταγόνα γίνει θολή ή εμφανιστεί νηματώδης θολότητα κατά μήκος της περιφέρειάς της, η αντίδραση θεωρείται θετική.

Για να πραγματοποιηθεί η αντίδραση Nonne-Apelt, απαιτούνται καθαροί δοκιμαστικοί σωλήνες, κορεσμένο διάλυμα θειικού αμμωνίου, απεσταγμένο νερό και σκούρο χαρτί. Παρασκευάζεται κορεσμένο διάλυμα θειικού αμμωνίου με τον εξής τρόπο: 0,5 g χημικά καθαρού ουδέτερου θειικού αμμωνίου τοποθετείται σε φιάλη των 1000 ml, στη συνέχεια χύνεται 100 ml απεσταγμένου νερού που έχει θερμανθεί στους 95 ° C, ανακινείται μέχρι να διαλυθεί πλήρως το αλάτι και αφήνεται για αρκετές ημέρες σε θερμοκρασία δωματίου. Μετά από 2-3 ημέρες, το διάλυμα διηθείται και προσδιορίζεται το pH. Η αντίδραση πρέπει να είναι ουδέτερη.

0,5-1 ml του προκύπτοντος διαλύματος χύνεται στον δοκιμαστικό σωλήνα και η ίδια ποσότητα εγκεφαλονωτιαίου υγρού προστίθεται προσεκτικά κατά μήκος του τοιχώματος του σωλήνα. Μετά από 3 λεπτά, αξιολογήστε το αποτέλεσμα. Η εμφάνιση ενός υπόλευκου δακτυλίου υποδηλώνει θετική αντίδραση. Στη συνέχεια τα περιεχόμενα του δοκιμαστικού σωλήνα ανακινούνται, ο βαθμός θολότητας προσδιορίζεται με σύγκριση με δοκιμαστικό σωλήνα που περιέχει απεσταγμένο νερό. Τα αποτελέσματα της αντίδρασης αξιολογούνται σε φόντο μαύρου χαρτιού.

120. Αντίδραση Bordet-Jangu

Πολύτιμο διαγνωστικό τεστ στην αναγνώριση χρόνια γονόρροιαμεταξύ των ατόμων με χρόνια φλεγμονώδεις ασθένειες ουρογεννητικό σύστημα. Σύμφωνα με τη βιβλιογραφία, όταν σωστή χρήσηΑυτή η μέθοδος αποκαλύπτει έως και το 80% των περιπτώσεων γονόρροιας που δεν ανιχνεύονται με βακτηριοσκοπική ή βακτηριολογική μέθοδο.

Η αντίδραση Bordet-Jangu μπορεί να είναι ίχνος ως αποτέλεσμα προηγούμενης ασθένειας ή χρήσης γονοεμβόλιου για διαγνωστική (ανοσοβιολογική μέθοδος πρόκλησης), καθώς και θεραπευτική (θεραπεία χρόνιων φλεγμονωδών διεργασιών του ουρογεννητικού συστήματος σε γυναίκες σύμφωνα με τον Baksheev) σκοπός. Ως εκ τούτου, πριν από τη διεξαγωγή του, είναι απαραίτητο να συλλέξετε προσεκτικά ένα ιστορικό,

Η αντίδραση μπορεί επίσης να είναι ψευδώς θετική με την εισαγωγή γάλακτος, χρήση σε ιατρικούς σκοπούςπυρετογόνος.

Επομένως, μια θετική αντίδραση Bordet-Jangu δεν χρησιμεύει ως αδιαμφισβήτητη απόδειξη της παρουσίας γονοκοκκική λοίμωξη, καθώς και αρνητικό δεν μπορεί να αποτελεί ένδειξη απουσίας γονόρροιας. Ωστόσο θετικά αποτελέσματαθα πρέπει για μεγάλο χρονικό διάστημα να καθοδηγείται από γιατρό για να αναζητήσει εστία γονοκοκκικής λοίμωξης στο σώμα.

Ως αντιγόνο χρησιμοποιείται μια σκοτωμένη γονοκοκκική καλλιέργεια που περιέχει 3-4 δισεκατομμύρια μικροβιακά σώματα ανά 1 ml. Το γονοκοκκικό αντιγόνο διατηρείται με διάλυμα φορμαλδεΰδης και χύνεται σε αμπούλες 1-5 ml. Οι μη ανοιγμένες αμπούλες είναι κατάλληλες για 6 μήνες, ανοιγμένες μπορούν να αποθηκευτούν για 2-3 ημέρες σε αποστειρωμένο δοκιμαστικό σωλήνα σε ψυγείο σε θερμοκρασία 3-5 ° C,

Η αντίδραση στερέωσης συμπληρώματος Borde-Zhang διεξάγεται παρόμοια με την αντίδραση Wasserman (βλέπε Νο. 121). Το γονοκοκκικό αντιγόνο αραιώνεται με ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου σύμφωνα με τον τίτλο που αναγράφεται στην ετικέτα της αμπούλας. Η αντίδραση πραγματοποιείται συχνότερα σε όγκο 2,5 ml, επομένως, σε 0,5 ml ενός αραιωμένου ορού δοκιμής 1:5, προστίθεται 0,5 ml του αραιωμένου αντιγόνου σε κάθε δοκιμαστικό σωλήνα. Το υπόλοιπο 1,5 ml είναι 1 ml του αιμολυτικού συστήματος και 0,5 ml συμπληρώματος.

Η αντίδραση θεωρείται θετική παρουσία του ποικίλους βαθμούςκαθυστερήσεις αιμόλυσης στον εξεταζόμενο ορό. Σε έλεγχο (ορός αίματος υγιείς ανθρώπους) παρατηρείται πλήρης αιμόλυση.

121. Αντίδραση Wasserman

Στον ορό του αίματος των ασθενών με σύφιλη, υπάρχουν ρεγκίνες και αντισώματα. Οι reagins έχουν την ικανότητα να εισέρχονται σε ενώσεις με αντιγόνο καρδιολιπίνης. Ειδικά αντισώματα κατά του Treponema pallidum συνδυάζονται με συγκεκριμένα αντιγόνα. Τα προκύπτοντα σύμπλοκα αντιγόνου-αντισώματος απορροφώνται από το συμπλήρωμα που προστίθεται στην αντίδραση. Η ένδειξη γίνεται με την εισαγωγή αιμολυτικού συστήματος (ερυθροκύτταρα προβάτου + αιμολυτικός ορός).

Για να λάβει χώρα η αντίδραση:

α) ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου.

β) αντιγόνα τρεπονεμάλης με υπερήχους (αποθηκεύεται στο ψυγείο στους +4 °C) και καρδιολιπίνης (αποθηκεύεται σε θερμοκρασία δωματίου).

γ) συμπλήρωμα, που είναι ο ορός αίματος που λαμβάνεται με παρακέντηση καρδιάς 5-10 υγιών ινδικών χοιριδίων. Μπορεί να αποθηκευτεί στο ψυγείο για έως και 2 μήνες με την προϋπόθεση
διάλυμα κονσερβοποίησης 4%. βορικό οξύκαι διάλυμα θειικού νατρίου 5%.

δ) αιμολυσίνη - αιμολυτικός ορός αίματος κουνελιού ανοσοποιημένος με ερυθροκύτταρα προβάτου με διαφορετικούς τίτλους (αποθηκεύεται σε ψυγείο σε θερμοκρασία 4 ° C).

ε) ερυθροκύτταρα προβάτου που λαμβάνονται με παρακέντηση σφαγίτιδα φλέβα. Το αίμα συλλέγεται σε αποστειρωμένο βάζο με γυάλινες χάντρες (για ανάμειξη), ανακινείται για 15 λεπτά. Οι θρόμβοι ινώδους διαχωρίζονται με διήθηση μέσω αποστειρωμένης γάζας. Το απινιδωμένο αίμα μπορεί να αποθηκευτεί στο ψυγείο για έως και 5 ημέρες.

Μερικές φορές υπάρχει ανάγκη για μεγαλύτερη αποθήκευση του αίματος προβάτου και επομένως συντηρείται με ειδικό συντηρητικό (6 g γλυκόζη, 4,5 g βορικό οξύ, 100 ml ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου), το οποίο βράζεται σε λουτρό νερού για 20 λεπτά την ημέρα για 3 ημέρες Για 100 ml απινιδωμένου αίματος προβάτου, απαιτούνται 15 ml συντηρητικού. Το απινιδωμένο αίμα που διατηρείται με αυτόν τον τρόπο αποθηκεύεται σε ψυγείο.

Το κύριο πείραμα προηγείται από διάφορα στάδια.

Σε ασθενή από κυβική φλέβαπάρτε 5-10 ml αίματος και επεξεργαστείτε τον ορό. Στα παιδιά, μπορεί να ληφθεί αίμα από την κροταφική φλέβα ή μια τομή στη φτέρνα. Η παρακέντηση γίνεται με αποστειρωμένα εργαλεία, σύριγγα και βελόνα
προπλυμένο με ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου.

Το αίμα για έρευνα λαμβάνεται με άδειο στομάχι. 3-4 ημέρες πριν από τη μελέτη, ο ασθενής απαγορεύεται να χρησιμοποιήσει φάρμακα, παρασκευάσματα digitalis, πάρτε αλκοόλ.

Η μελέτη δεν πρέπει να διεξάγεται σε ασθενείς με αυξημένη θερμοκρασίασώμα, μετά από τραύμα, χειρουργική επέμβαση, αναισθησία, πρόσφατες μολυσματικές ασθένειες, σε γυναίκες κατά την έμμηνο ρύση, σε έγκυες γυναίκες (τις τελευταίες 10 ημέρες της εγκυμοσύνης), γυναίκες σε λοχεία (τις πρώτες 10 ημέρες μετά τον τοκετό), καθώς και νεογνά (σε τις πρώτες 10 ημέρες της ζωής).

Το αίμα που λαμβάνεται σε αποστειρωμένο σωληνάριο τοποθετείται για 15-30 λεπτά σε θερμοστάτη σε θερμοκρασία 37 °C. Ο θρόμβος που προκύπτει διαχωρίζεται από τα τοιχώματα του δοκιμαστικού σωλήνα με μια αποστειρωμένη γυάλινη ράβδο και τοποθετείται στο ψυγείο για μια μέρα. Ο διαχωρισμένος διαφανής ορός (πάνω από τον θρόμβο) αναρροφάται με πιπέτα Παστέρ χρησιμοποιώντας λαστιχένιο αχλάδι ή χύνεται προσεκτικά σε άλλο αποστειρωμένο σωλήνα και αδρανοποιείται σε υδατόλουτρο για 30 λεπτά σε θερμοκρασία 56 °C. Ο ορός που παρασκευάζεται με αυτόν τον τρόπο για το πείραμα μπορεί να αποθηκευτεί στο ψυγείο έως και 5-6 ημέρες.

Τα αντιγόνα αραιώνονται σύμφωνα με τη μέθοδο και τον τίτλο που αναγράφονται στην ετικέτα.

Προετοιμάστε το αιμολυτικό σύστημα. Για να γίνει αυτό, το απινιδωμένο αίμα ή τα ερυθροκύτταρα προβάτου στην ποσότητα που απαιτείται για την αντίδραση φυγοκεντρούνται, το πλάσμα διαχωρίζεται προσεκτικά και το ίζημα πλένεται με 5-6 όγκους ισοτονικού διαλύματος χλωριούχου νατρίου έως ότου το υπερκείμενο καταστεί εντελώς άχρωμο. Ένα εναιώρημα 3% ερυθροκυττάρων σε ένα ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου παρασκευάζεται από το ίζημα σύμφωνα με έναν τριπλό τίτλο.

Ένα διάλυμα αιμολυτικού ορού και ένα εναιώρημα ερυθροκυττάρων προβάτου αναμειγνύονται γρήγορα και τοποθετούνται σε θερμοστάτη για 30 λεπτά.

Το ξηρό συμπλήρωμα αραιώνεται με ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου σε αναλογία 1:10, φυσιολογικός αδρανοποιημένος ανθρώπινος ορός - 1:5.

Το συμπλήρωμα τιτλοδοτείται σε 30 σωλήνες που τοποθετούνται σε ένα ράφι 10 σωλήνων σε 3 σειρές. Σε δύο σειρές τιτλοδοτείται παρουσία δύο αντιγόνων, στην τρίτη - με ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου. Πέντε δοκιμαστικοί σωλήνες είναι έλεγχος: δύο για τα αντίστοιχα δύο αντιγόνα και ένας για τον έλεγχο του συμπληρώματος, του αιμολυτικού ορού και του ισοτονικού διαλύματος χλωριούχου νατρίου για αιμοτοξικότητα. συμπληρώστε τα ως εξής:

Οι σωλήνες τοποθετούνται σε θερμοστάτη για 45 λεπτά και μετά ελέγχονται. Η αιμόλυση δεν πρέπει να γίνεται σε κανένα δοκιμαστικό σωλήνα.

Το συμπλήρωμα σε αραίωση 1:10 χύνεται σε 10 δοκιμαστικούς σωλήνες της 1ης σειράς του ραφιού σε δόσεις: 0,1, 0,16, 0,2, 0,24, 0,3, 0,36, 0,4, 0,44, 0,5 και 0,55 ml. Στο περιεχόμενο κάθε σωλήνα προσθέστε ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου μέχρι 1 ml και ανακατέψτε καλά. 0,25 ml του μείγματος από κάθε σωλήνα μεταφέρονται στους αντίστοιχους δοκιμαστικούς σωλήνες της 2ης και 3ης σειράς. Το ράφι με τους δοκιμαστικούς σωλήνες ανακινείται, 0,5 ml του αιμολυτικού συστήματος προστίθεται στην 3η σειρά των δοκιμαστικών σωλήνων, ανακινείται ξανά και τοποθετείται για 45 λεπτά σε θερμοστάτη σε θερμοκρασία 37 °C. Φυσιολογικός ορός ανθρώπινου αίματος αραιωμένος με ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου σε αναλογία 1:5, 0,25 ml χύνεται και στους 30 δοκιμαστικούς σωλήνες.

Αντιγόνο Ι (υπερηχογράφημα τρεπονήμου), αραιωμένο σε τίτλο με ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου, προστίθενται 0,25 ml σε 10 δοκιμαστικούς σωλήνες της 1ης σειράς. αντιγόνο II (καρδιολιπίνη στην ίδια αραίωση και στην ίδια ποσότητα) - σε 10 δοκιμαστικούς σωλήνες της 2ης σειράς. 0,25 ml ισοτονικού διαλύματος χλωριούχου νατρίου χύνεται σε 10 δοκιμαστικούς σωλήνες της 3ης σειράς, τα υπόλοιπα 0,25 ml χύνονται. Μετά την επώαση σε θερμοστάτη, 0,5 ml του αιμολυτικού συστήματος προστίθενται σε 20 δοκιμαστικούς σωλήνες (1η και 2η σειρά), ανακινούνται και τοποθετούνται ξανά σε θερμοστάτη για 45 λεπτά.

Μετά από 45 λεπτά, προσδιορίζεται η δόση εργασίας του συμπληρώματος, δηλαδή ο τίτλος του με περιθώριο στην περιοχή 15-20%.

Ο τίτλος του συμπληρώματος θεωρείται ότι είναι ελάχιστο ποσό, προκαλώντας πλήρη αιμόλυση των ερυθροκυττάρων του κριού παρουσία αντιγόνου και φυσιολογικού ορού ανθρώπινου αίματος.

Η κύρια εμπειρία είναι ότι κάθε δοκιμασμένος αδρανοποιημένος ορός, αραιωμένος σε αναλογία 1:5 με ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου, χύνεται σε 0,25 ml σε τρεις δοκιμαστικούς σωλήνες. Προσθέστε 0,25 ml αντιγόνου Ι στον πρώτο σωλήνα, 0,25 ml αντιγόνου II στον δεύτερο και 0,25 ml ισοτονικού διαλύματος χλωριούχου νατρίου στον τρίτο (έλεγχος). Προσθέστε 0,25 ml συμπληρώματος αραιωμένο στη δόση εργασίας σε όλους τους δοκιμαστικούς σωλήνες. Όλοι οι δοκιμαστικοί σωλήνες τοποθετούνται σε θερμοστάτη για 45 λεπτά, στη συνέχεια προστίθενται 0,5 ml από το αιμολυτικό σύστημα, ανακινούνται και τοποθετούνται σε θερμοστάτη για 45-50 λεπτά. Το αποτέλεσμα του πειράματος καταγράφεται μετά την έναρξη της πλήρους αιμόλυσης σε σωλήνες ελέγχου.

Τα αποτελέσματα της αντίδρασης αξιολογούνται με τα συν: πλήρης καθυστέρηση στην αιμόλυση (έντονα θετική αντίδραση) ++++, σημαντική (θετική αντίδραση) +++, μερική (ασθενώς θετική αντίδραση) ++, ασήμαντη (αμφίβολη αντίδραση) - ±, καμία καθυστέρηση στην αιμόλυση (αρνητική αντίδραση) - .

Στο ποσοτική μέθοδοςΚατά τη διεξαγωγή της αντίδρασης Wassermann, η εμπειρία ρυθμίζεται με μειούμενους όγκους ορού αραιωμένου με ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου.

Σχέδιο για τη διεξαγωγή της κύριας εμπειρίας της αντίδρασης Wasserman

Η κλινική σημασία της αντίδρασης Wasserman είναι δύσκολο να υπερεκτιμηθεί. Διενεργείται για όλους τους ασθενείς πριν από την έναρξη της θεραπείας, αλλά ιδιαίτερο νόημαέχει στο λανθάνουσα σύφιλη, ήττα εσωτερικά όργανακαι το νευρικό σύστημα.

Τα αποτελέσματα της αντίδρασης Wasserman χαρακτηρίζουν την ποιότητα της θεραπείας, η οποία δίνει λόγο για διαγραφή των ασθενών που έλαβαν θεραπεία εντός ορισμένης χρονικής περιόδου.

Στην πρωτοπαθή σύφιλη, η αντίδραση Wasserman είναι συνήθως θετική στο τέλος της 6ης εβδομάδας από τη στιγμή της μόλυνσης. με δευτερογενή φρέσκια σύφιλη, είναι θετική σχεδόν στο 100% των περιπτώσεων, με δευτεροπαθή υποτροπιάζουσα - στο 98-100%. τριτογενής ενεργός - στο 85%? κρυφό τριτογενές - στο 60% των περιπτώσεων.

Η αντίδραση Wasserman πραγματοποιείται δύο φορές για όλες τις έγκυες γυναίκες, ασθενείς με σωματική, νευρική, ψυχική και δερματικές ασθένειες, καθώς και τα διαταγμένα τμήματα του πληθυσμού. Ταυτόχρονα, τα θετικά και ασθενώς θετικά αποτελέσματα της αντίδρασης θα πρέπει να αντιμετωπίζονται κριτικά, καθώς μπορεί να είναι στο τέλος της εγκυμοσύνης και μετά τον τοκετό, με υπερθυρεοειδισμό, ελονοσία, λέπρα, τερηδόνα. κακοήθης όγκος, μολυσματικές ασθένειες, κολλαγονώσεις κ.λπ. Επομένως, παρουσία κλινικές ΕΚΔΗΛΩΣΕΙΣασθένειες, θα πρέπει να λαμβάνονται υπόψη, μαζί με τα δεδομένα της βακτηριοσκόπησης, κατά πρώτο λόγο.

Ταυτόχρονα, υπάρχουν παράγοντες που μπορούν να παραμορφώσουν την πραγματική φύση των αποτελεσμάτων της αντίδρασης Wasserman: κακώς πλυμένα εργαστηριακά γυάλινα σκεύη (ίχνη οξέος και αλκαλίου σε δοκιμαστικούς σωλήνες), μακροχρόνια αποθήκευση αίματος που λαμβάνεται για έρευνα, κατανάλωση λιπών και το αλκοόλ από τους ασθενείς πριν την εξέταση, την έμμηνο ρύση κ.λπ.

Σε όλες τις περιπτώσεις, είναι επιθυμητό να διεξάγεται μια ολοκληρωμένη εξέταση του ασθενούς, συμπεριλαμβανομένης, εκτός από την αντίδραση Wassermann, και RIBT (βλ. 122, 123, 124) κ.λπ.

122. Αντίδραση Sachs - Vitebsky (κυτταροχολική)

Χρησιμοποιείται για την ανίχνευση της σύφιλης. Βασίζεται στον σχηματισμό ενός ιζήματος όταν ο ορός του αίματος του ασθενούς αναμειγνύεται με ένα αντιγόνο.

Για την παρασκευή του αντιγόνου, οι μύες πολλών καρδιών βοοειδών καθαρίζονται από τένοντες, περιτονία, λίπος, κομματιάζονται σε μύλο κρέατος και εκχυλίζονται με πενταπλάσιο όγκο αιθανόλης 96% για 15 ημέρες με καθημερινή ανακίνηση 20 λεπτών. Το εκχύλισμα που λαμβάνεται εξατμίζεται σε λουτρό νερού σε πορσελάνινο κύπελλο υπό κενό. Ζεστή αιθυλική αλκοόλη 96% προστίθεται στο υπόλειμμα (λαμπρό κίτρινη μάζα λιπιδίων) σε ποσότητα 1/3 του όγκου των μυών που λαμβάνονται για εκχύλιση.

Το εκχύλισμα διατηρείται για 3 ημέρες σε θερμοκρασία δωματίου, διηθείται (in κρύο νερό) και προσθέτουμε 0,3-0,6% διάλυμα κρυσταλλικής χοληστερόλης, ανάλογα με τα αποτελέσματα της τιτλοδότησης με θετικούς και αρνητικούς ορούς. Αποθηκεύστε το κυτταροχολικό αντιγόνο σε θερμοκρασία δωματίου σε σφραγισμένες αμπούλες ή σφραγισμένους δοκιμαστικούς σωλήνες.

Μεθοδολογία. Σε 2 ml ισοτονικού διαλύματος χλωριούχου νατρίου, 1 ml αντιγόνου κυτοχόλης χύνεται γρήγορα και αφήνεται σε θερμοκρασία δωματίου για 15 λεπτά μέχρι να εμφανιστούν νιφάδες. Προσθέστε 0,1 ml αντιγονικού γαλακτώματος σε 0,2 ml αδρανοποιημένου ορού, ανακινήστε για 3 λεπτά και αφήστε το μόνο για 30 λεπτά, στη συνέχεια προσθέστε 1 ml ισοτονικού διαλύματος χλωριούχου νατρίου.

1,2 ml ισοτονικού διαλύματος χλωριούχου νατρίου και 0,1 ml αντιγονικού γαλακτώματος προστίθενται στον σωλήνα ελέγχου με αντιγόνο. Δεν πρέπει να υπάρχουν νιφάδες στον έλεγχο. Τα αποτελέσματα της αντίδρασης λαμβάνονται υπόψη οπτικά ή με μεγεθυντικό φακό και υποδεικνύονται ανάλογα με την ποσότητα των νιφάδων που έχουν πέσει με συν (++++, +++, ++). Με αρνητική αντίδραση, δεν υπάρχουν νιφάδες, αλλά το περιεχόμενο του σωλήνα μπορεί να είναι ελαφρώς ιριδίζον.

Το 1931, οι P. Sachs και E. Witebsky πρότειναν μια τροποποίηση αυτής της τεχνικής, η οποία συνίσταται στην αραίωση του αντιγόνου σε δύο φάσεις: 2 μέρη ισοτονικού διαλύματος χλωριούχου νατρίου προστίθενται σε 1 μέρος του αντιγόνου, διατηρούνται σε θερμοκρασία δωματίου για 5 λεπτά. και άλλα 9 μέρη ισοτονικού διαλύματος προστίθενται χλωριούχο νάτριο. Συνιστάται επίσης η αραίωση του αντιγόνου με διάλυμα χλωριούχου νατρίου 2%, το οποίο, σύμφωνα με τους συγγραφείς, αυξάνει την ευαισθησία της αντίδρασης. Είναι επίσης δυνατή μια ποσοτική τροποποίηση της αντίδρασης με αραίωση ορού (1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64, κ.λπ.).

Η αντίδραση είναι αρκετά ευαίσθητη, διαρκεί λίγο (περίπου 1 ώρα), και τα αποτελέσματά της διαβάζονται αμέσως.

123. Αντίδραση ακινητοποίησης ωχρού τρεπονήματος (RIBT)

Με τη βοήθεια μιας αντίδρασης στον ορό του αίματος ασθενών με σύφιλη, ανιχνεύονται αντισώματα και συμπλήρωμα που ακινητοποιούν το χλωμό τρεπόνεμα.

Με την πρωτοπαθή σύφιλη, η RIBT είναι κυρίως αρνητική, με δευτερογενή - θετική στο 92-96% των περιπτώσεων, με τριτογενή - στο 92-100%, με σύφιλη του νευρικού συστήματος και συγγενή - στο 86-89% των περιπτώσεων.

Θετικά αποτελέσματα του RIBT σημειώθηκαν σε σαρκοειδείς, ερυθηματώσεις, διαβήτη, κακοήθεις όγκους, ιογενής ηπατίτιδα, κίρρωση του ήπατος, ελονοσία, λέπρα, λοιμώδης μονοπυρήνωση, ορισμένες ασθένειες των καυτών χωρών (πίντα, εκτροπή κ.λπ.).

Το αντιγόνο είναι ένα εναιώρημα χλωμού τρεπόνεμα που λαμβάνεται από τους όρχεις ενός κουνελιού που έχει μολυνθεί με σύφιλη με την εισαγωγή στον όρχι 0,75-1 ml ενός εναιωρήματος ωχρού τρεπονέμματος σε ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου (50 άτομα ανά οπτικό πεδίο).

Το υλικό των όρχεων πρέπει να λαμβάνεται 6-8 ημέρες μετά τη μόλυνση του ζώου. Πριν από τη λήψη του αντιγόνου, το κουνέλι σφάζεται με αφαίμαξη (καρδιακή παρακέντηση ή καρωτίδα). Ο ιστός των όρχεων συνθλίβεται και γεμίζεται με υγιή ορό αίματος κουνελιού αραιωμένο με ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου, ανακινείται για -30 λεπτά και στη συνέχεια φυγοκεντρείται για 10 λεπτά (1000 rpm). Το υπερκείμενο εξετάζεται μικροσκοπικά. Θα πρέπει να υπάρχουν τουλάχιστον 10-15 ωχρά τρεπονήματα σε κάθε οπτικό πεδίο.

Το συμπλήρωμα ετοιμάζεται με τον συνηθισμένο τρόποαπό το αίμα των ινδικών χοιριδίων.

Για το RIBT, χρειάζεστε: 1,2 ml διαλύματος ζελατίνης 0,2%, 2,8 ml διαλύματος λευκωματίνης 5%, 1,6 ml εναιωρήματος ωχρού τρεπονέμματος. μεσαίο pH - 7,2. Σε αυτό το μείγμα προστίθενται 0,15 ml συμπληρώματος (κοκτέιλ). Παράλληλα, τοποθετούνται δύο δείγματα: με ενεργά (πείραμα) και αντιδραστικά (έλεγχος) συμπληρώματα.

Ο ορός που μελετήθηκε συλλέγεται στα melangeurs μέχρι το σημείο «1» και στη συνέχεια το κοκτέιλ συλλέγεται μέχρι το σημείο «2» και κλείνονται με αποστειρωμένο λαστιχένιο δακτύλιο.

Παράλληλα, παρόμοια αντίδραση πραγματοποιείται με εμφανώς θετικούς και εμφανώς αρνητικούς ορούς.

Τα Melanger αριθμούνται και τοποθετούνται σε θερμοστάτη θερμοκρασίας 35°C για 18-20 ώρες, μετά αφαιρούνται από τον θερμοστάτη ανά δύο (πείραμα - έλεγχος) και το περιεχόμενο χύνεται στους κατάλληλους δοκιμαστικούς σωλήνες. Εφαρμόζονται 2 σταγόνες στη γυάλινη πλάκα: στα αριστερά - εμπειρία, στα δεξιά - έλεγχος, καλυμμένη με καλυπτρίδα και μικροσκόπιο σε σκοτεινό οπτικό πεδίο.

Αρχικά, μελετώνται τα αποτελέσματα του ελέγχου: προσδιορίζεται το ποσοστό των κινητών και ακίνητων ωχρών τρεπονεμμάτων. Τύπος μέτρησης: X = (A - B) / A * 100, όπου A είναι ο αριθμός των κινητών ωχρών τρεπονεμμάτων στον έλεγχο. Β - ο αριθμός των κινητών ωχρών τρεπονεμμάτων στο πείραμα.

Παράδειγμα: (24 - 19) / 24 * 100 = 21%.

Εκτιμήσεις των αποτελεσμάτων του RIBT: κάτω από 20% - αρνητικό. 21-30% - αμφίβολο, 31-50% - ασθενώς θετικό, πάνω από 50% - θετικό.

Αντιγόνο, συμπλήρωμα και βοηθητικό, δείκτη ή αιμολυτικό σύστημα - αιμολυτικός ορός και ερυθροκύτταρα προβάτου.

Εάν στο πρώτο σύστημα σχηματιστεί ένα συγκεκριμένο σύμπλεγμα αντιγόνου + αντισώματος, τότε το συμπλήρωμα προσροφάται (συνδυάζεται με αυτό το σύμπλεγμα) και δεν συμβαίνει αιμόλυση στο δεύτερο σύστημα.

Η αντίδραση απαιτεί:

1. Εξεταστικός ορός, ο οποίος λαμβάνεται από αίμα που λαμβάνεται με παρακέντηση της κοιλιακής φλέβας του ασθενούς. Μετά την πήξη του αίματος, ο ορός αναρροφάται σε ξεχωριστό σωλήνα και αδρανοποιείται για 30 λεπτά στους 56 °C σε λουτρό νερού.

2. Αντιγόνο - ένα εναιώρημα νεκρών γονόκοκκων.

3. Τα ερυθροκύτταρα προβάτου λαμβάνονται από στείρο απινιδωμένο αίμα. Πλένονται με φυγοκέντρηση 3 φορές με νέες δόσεις φυσιολογικού ορού. Ένα εναιώρημα 3% ερυθροκυττάρων χρησιμοποιείται στην αντίδραση.

4. Ο αιμολυτικός ορός παρασκευάζεται εκ των προτέρων με ανοσοποίηση κουνελιών με ερυθροκύτταρα κριαριού. Ο ορός τιτλοποιείται πριν από τη χρήση.

5. Συμπλήρωμα - φρέσκος ορός ινδικού χοιριδίου. Το αίμα αναρροφάται από την καρδιά ενός ινδικού χοιριδίου με μια σύριγγα, μετά την πήξη, ο ορός διαχωρίζεται. Πριν από το πείραμα, τιτλοποιείται η δόση εργασίας του συμπληρώματος. Για να το κάνετε αυτό, πάρτε την κύρια αραίωση του συμπληρώματος 1:10 και χύστε το σε δοκιμαστικούς σωλήνες από 0,1 έως 0,5, μετά την οποία ο όγκος σε κάθε δοκιμαστικό σωλήνα ρυθμίζεται με φυσιολογικό ορό στο 1,5 ml.

Ταυτόχρονα, παρασκευάζεται ένα αιμολυτικό σύστημα - αραιωμένο σε τριπλό τίτλο, αιμολυτικό ορό + 3% εναιώρημα ερυθροκυττάρων προβάτου. Και τα δύο συστατικά βρίσκονται σε διαφορετικούς όγκους και διατηρούνται σε θερμοστάτη για 30 λεπτά (ευαισθητοποίηση του μείγματος), μετά από την οποία το μείγμα προστίθεται σε 1 ml σε δοκιμαστικούς σωλήνες και τοποθετείται σε θερμοστάτη για 30 λεπτά. 2 δοκιμαστικοί σωλήνες χρησιμεύουν ως έλεγχος:

1. 1 ml αιμολυτικού συστήματος + 1,5 ml φυσιολογικού ορού.

2. 0,5 ml συμπληρώματος 1:10 + 0,5 ml εναιωρήματος ερυθροκυττάρων + 1,5 ml φυσιολογικού ορού.

Ο τίτλος του συμπληρώματος είναι η ελάχιστη ποσότητα στην οποία εξακολουθεί να συμβαίνει αιμόλυση. Για τη ρύθμιση της αντίδρασης, λαμβάνεται μια δόση εργασίας συμπληρώματος, αυξημένη έναντι του τίτλου κατά 20-25%, δηλαδή συνήθως η ποσότητα του συμπληρώματος που βρίσκεται στον προτελευταίο δοκιμαστικό σωλήνα με αιμόλυση. Η αύξηση της δόσης του συμπληρώματος είναι απαραίτητη γιατί στην αντίδραση, η δραστηριότητα του συμπληρώματος μπορεί να καταστέλλεται κάπως από άλλα συστατικά της αντίδρασης (αντιγόνο, ορός).
43) RSK Wasserman

Χρησιμοποιείται για τη διάγνωση της σύφιλης για την ανίχνευση αντισωμάτων, καθώς και για τον προσδιορισμό της αποτελεσματικότητας ειδική θεραπεία. Βασίζεται στην αρχή της αντίδρασης στερέωσης συμπληρώματος Borde-Gangou. Μια σημαντική διαφορά στην αντίδραση Wasserman είναι η μη εξειδίκευση του αντιγόνου: λιποειδή εκχυλίσματα από φυσιολογικά όργανατων ζώων

Για να ρυθμίσετε την αντίδραση Wasserman, είναι απαραίτητο να έχετε ορό του ασθενούς, διαγνωστικά, αντιγόνα διασταυρούμενης αντίδρασης Νο. 1, Νο. 2, συμπλήρωμα, αιμολυτικό ορό, ερυθροκύτταρα κριαριού, αλατούχος.

Diagnosticum No. 1 - ειδικό, treponemal.

Διαγνωστικό Νο. 2 - μη ειδικό, αντιγόνο καρδιολιπίνης, τα οποία είναι εκχυλίσματα καρδιάς βοοειδών υψηλής καθαρότητας που έχουν σταθερή χημική σύνθεση λιπιδίων. Lipoids, από χημική σύνθεσηείναι κοντά στο treponema pallidum lipoids, επομένως, αν και δεν είναι ειδικά, στερεώνουν αντισώματα κατά των σπειροχαιτών.

Αυτά τα αντιγόνα παράγονται κεντρικά και χρησιμοποιούνται στην αντίδραση αραιωμένα σύμφωνα με τον τίτλο που υποδεικνύεται στην ετικέτα.

Ταυτόχρονα με το κύριο πείραμα τοποθετούνται 2 μάρτυρες: με εμφανώς αρνητικούς και με εμφανώς θετικούς ορούς.

Ρύθμιση της κύριας εμπειρίας

Αρχικά, απενεργοποιημένος και αραιωμένος ορός δοκιμής 1:5 χύνεται σε 4 δοκιμαστικούς σωλήνες. Στη συνέχεια, τα αντιγόνα (Νο. 1, Νο. 2) χύνονται σε 2 δοκιμαστικούς σωλήνες, ο φυσιολογικός ορός χύνεται στον 3ο δοκιμαστικό σωλήνα. Μετά από αυτό, μια δόση εργασίας συμπληρώματος προστίθεται σε όλους τους σωλήνες. Μετά την ανάμειξη των συστατικών, η σχάρα με τους δοκιμαστικούς σωλήνες τοποθετείται σε θερμοστάτη στους 37 °C για 30 λεπτά. Μετά τη διατήρηση σε θερμοστάτη, προστίθεται αιμολυτικό σύστημα σε όλους τους δοκιμαστικούς σωλήνες. Οι σωλήνες τοποθετούνται ξανά σε θερμοστάτη για 2 ώρες και μετά αφήνονται σε θερμοκρασία δωματίου. Την επόμενη μέρα σημειώνεται το αποτέλεσμα Εκτιμάται ο βαθμός έντασης της αντίδρασης, τέσσερα συν (++++), τρία (+++), δύο (++) και ένα (+) - ανάλογα με την ένταση του χρώματος του υγρού και του μεγέθους του ιζήματος των ερυθροκυττάρων στον πυθμένα. Η πλήρης αιμόλυση υποδεικνύεται με (-) μείον. Με έντονη ασυμφωνία μεταξύ των αποτελεσμάτων με διαφορετικά αντιγόνα, το πείραμα επαναλαμβάνεται με μια νέα δόση αίματος.
44) RIT-r. Ακινητοποίηση ωχρού τρεπονήματος.

Αυτή η αντίδραση χρησιμοποιείται σε διαγνωστικούς σκοπούς, και για την αναγνώριση ψευδώς θετικά αποτελέσματατυπικές ορολογικές αντιδράσεις, ειδικά με λανθάνουσα σύφιλη.

Το RIBT έγκειται στο γεγονός ότι παρουσία ακινητοποιήσεων στον ορό ασθενών με σύφιλη και ενεργό συμπλήρωμα, τα ωχρά τρεπονήματα χάνουν την κινητικότητά τους.

Το RIBT τοποθετείται σε αποστειρωμένα κουτιά. Ο ορός δοκιμής, το συμπλήρωμα και το αντιγόνο συμμετέχουν στην αντίδραση.

Στο RIBT, το αντιγόνο είναι ένα εναιώρημα ωχρού τρεπονήματος από όρχι κουνελιού σε πρώιμες ημερομηνίες(7-8 ημέρες μετά τη μόλυνση) συφιλιδική ορχίτιδα. Ένα ειδικό μέσο ανάρτησης διατηρεί τη βιωσιμότητα του χλωμού τρεπονέμματος για τουλάχιστον μία ημέρα. Το συμπλήρωμα χρησιμοποιείται στο RIBT ινδικά χοιρίδια. Το RIBT προχωρά υπό αναερόβιες συνθήκες. Οι δοκιμαστικοί σωλήνες με συστατικά τοποθετούνται σε μικροαεροστάτη, από τον οποίο ατμοσφαιρικός αέραςκαι εγχέεται ένα μείγμα αερίου (95 μέρη αζώτου και 5 μέρη διοξείδιο του άνθρακα). Ο μικροαναεροστάτης με δοκιμαστικούς σωλήνες τοποθετείται σε θερμοστάτη (35°C) για 18-20 ώρες.

Παράλληλα με τη διαμόρφωση της αντίδρασης, μελέτες ελέγχουμε θετικό και αρνητικό ορό αίματος που λαμβάνεται από προηγούμενη εμπειρία.

Τα αποτελέσματα του RIBT αξιολογούνται μετά την αφαίρεση των δοκιμαστικών σωλήνων από τον θερμοστάτη (δηλαδή μετά από 18-20 ώρες εμπειρίας). Με μια πιπέτα Pasteur, μια σταγόνα από το περιεχόμενο του δοκιμαστικού σωλήνα εφαρμόζεται σε μια γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα, η οποία καλύπτεται με καλυπτρίδα και εξετάζεται στο σκοτεινό πεδίο ενός μικροσκοπίου (στόχος 40, προσοφθάλμιος φακός 10). Με ακινητοποίηση έως και 20% των ωχρών τρεπονεμμάτων, η αντίδραση θεωρείται αρνητική, από 21 έως 30% - αμφίβολη, από 31 έως 50% ασθενώς θετική, από 51 έως 100% - θετική. Το ποσοστό ακινητοποίησης του ωχρού τρεπονήματος προσδιορίζεται σύμφωνα με ειδικό πίνακα.

45) Opson-φαγοκυτταρική αντίδραση

Μηχανισμός: αυξημένη φαγοκυττάρωση των μικροβιακών κυττάρων υπό την επίδραση των φιλικών επιδράσεων των αντισωμάτων, του ανοσοποιητικού ορού και του συμπληρώματος.

Συστατικά αντίδρασης:

1) αντιγόνο - καθημερινή μικροβιακή καλλιέργεια.

3) συμπλήρωμα - φρέσκος ορός ινδικού χοιριδίου.

4) φαγοκύτταρα - εναιώρημα λευκοκυττάρων.

Οι οψονίνες είναι αντισώματα που βρίσκονται σε φυσιολογικούς και ανοσοποιητικούς ορούς και προετοιμάζουν τα μικρόβια για φαγοκυττάρωση.

Η αντίδραση τοποθετείται σε ειδικούς δοκιμαστικούς σωλήνες σε t=37° λεπτά. Στη συνέχεια, παρασκευάζονται επιχρίσματα από κάθε σωλήνα, μετρώνται 100 φαγοκύτταρα και προσδιορίζεται ο αριθμός των μικροελέγχων που έχουν φαγοκυτταρωθεί.

Οψωνικός δείκτης = φαγοκυτταρικός δείκτης. ορός/φαγοκυτταρικός δείκτης φυσιολογικού ορού

Όσο υψηλότερος είναι ο οψωνικός δείκτης (πρέπει να είναι >1) του υπό μελέτη ορού, άρα και τόσο υψηλότερος! βρουκέλλωση).

Χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό των οψονινών - αντισωμάτων που διεγείρουν τη φαγοκυτταρική δραστηριότητα των λευκοκυττάρων, δηλ. οροδιάγνωση λοιμώξεων όπως η βρουκέλλωση.

Η ενίσχυση της φαγοκυττάρωσης συμβαίνει λόγω της προσκόλλησης οψονινών με ενεργά κέντρα (θραύσμα Pav) σε βακτηριακούς προσδιοριστές και στη συνέχεια, με τη βοήθεια θραυσμάτων Pc, στους υποδοχείς Pc των φαγοκυττάρων. Ο κανονικός ορός περιέχει μικρές ποσότητες οψονινών, οι οποίες δρουν παρουσία συμπληρώματος. Υπάρχουν περισσότερες οψονίνες στον ανοσοποιητικό ορό και η δράση τους εξαρτάται λιγότερο από το συμπλήρωμα.

Συστατικά:

Ορός υπό μελέτη

κανονικός ορός

Καθημερινή μικροβιακή καλλιέργεια (π.χ. σταφυλοκοκκική)

Φαγοκύτταρα - εναιώρημα ουδετερόφιλων

Επώαση στους 37°C για 30 λεπτά. Παρασκευάζονται επιχρίσματα από κάθε σωλήνα, χρωματίζονται σύμφωνα με τον Romanovsky-Giemsa και ο αριθμός των μικροβίων μετράται με μικροσκόπιο, σε 100 ή περισσότερα νεφρόφιλα, δηλ. προσδιορίζουν τον φαγοκυτταρικό δείκτη.

Φαγοκυτταρικός δείκτης - ο αριθμός των μικροβίων που απορροφώνται από ένα ουδετερόφιλο.

Οψωνικός δείκτης φαγοκυτταρικός δείκτης ανοσοποιητικού (δοκιμασμένου) ορού / φαγοκυτταρικός δείκτης φυσιολογικού ορού.

Όσο υψηλότερος είναι ο οψωνικός δείκτης (πρέπει να είναι > 1), τόσο μεγαλύτερη είναι η ανοσία.

Ο οψονοφαγοκυτταρικός δείκτης είναι ένας ψηφιακός δείκτης = ο αριθμός των φαγοκυττάρων x η βαθμολογία της φαγοκυττάρωσης (ανάλογα με τον αριθμό των μικροβίων που προσλαμβάνονται). Η μέγιστη βαθμολογία είναι -75.

46) RN σε ποντίκια προκειμένου να δημιουργηθεί εξωτοξίνη

Αυτή η αντίδραση βασίζεται στην ικανότητα ενός συγκεκριμένου αντιτοξικού ορού να εξουδετερώνει την εξωτοξίνη.

Τα αντισώματα του ανοσοποιητικού ορού είναι σε θέση να εξουδετερώσουν την καταστροφική επίδραση των μικροβίων ή των τοξινών τους σε ευαίσθητα κύτταρα και ιστούς, η οποία σχετίζεται με τον αποκλεισμό των μικροβιακών αντιγόνων από τα αντισώματα, δηλαδή την εξουδετέρωση τους.

Η αντίδραση εξουδετέρωσης (RN) πραγματοποιείται με την εισαγωγή ενός μίγματος αντιγόνου-αντισώματος σε ζώα ή σε ευαίσθητα αντικείμενα δοκιμής (κυτταροκαλλιέργεια, έμβρυα). Ελλείψει της καταστροφικής επίδρασης των μικροοργανισμών ή των αντιγόνων τους, των τοξινών σε ζώα και των αντικειμένων δοκιμής, μιλούν για την εξουδετερωτική επίδραση του ανοσοποιητικού ορού και, επομένως, για την ειδικότητα της αλληλεπίδρασης του συμπλέγματος αντιγόνου-αντισώματος.

Για τη διεξαγωγή της αντίδρασης, το υλικό δοκιμής, στο οποίο αναμένεται η παρουσία εξωτοξίνης, αναμιγνύεται με αντιτοξικός ορός, διατηρείται σε θερμοστάτη και χορηγείται σε ζώα (ινδικά χοιρίδια, ποντίκια). Στα ζώα ελέγχου εγχέεται το διήθημα του υλικού δοκιμής, δεν υποβάλλονται σε θεραπεία με ορό. Σε περίπτωση που συμβεί η εξουδετέρωση της εξωτοξίνης με αντιτοξικό ορό, τα ζώα της πειραματικής ομάδας θα παραμείνουν ζωντανά. Τα ζώα ελέγχου θα πεθάνουν ως αποτέλεσμα της δράσης της εξωτοξίνης.

Η αντίδραση εξουδετέρωσης της εξωτοξίνης εμφανίζεται όταν αλληλεπιδρά με αντιτοξικό ορό (αντισώματα-αντιοξίνες). Ως αποτέλεσμα του σχηματισμού του συμπλέγματος αντιγόνου-αντισώματος, η τοξίνη χάνει τις τοξικές της ιδιότητες.

Η αντίδραση εξουδετέρωσης πραγματοποιείται με σκοπό την ανίχνευση και την τιτλοδότηση τοξινών, τοξινών ή αντιτοξινών.

Οι τοξίνες λαμβάνονται με διήθηση υγρού μέσο ανάπτυξηςή υλικό δοκιμής όπου έχουν πολλαπλασιαστεί τοξικογόνα βακτήρια. Όταν υποβληθεί σε επεξεργασία με φορμαλίνη για 30-45 ημέρες σε θερμοκρασία 37°C, η τοξίνη μετατρέπεται σε ανατοξίνη, η οποία χρησιμοποιείται για την ανοσοποίηση των ζώων προκειμένου να ληφθεί αντιτοξικός ορός.

Αντίδραση εξουδετέρωσης in vivo. Για να προσδιοριστεί ο τύπος της τοξίνης, αναμιγνύεται με διαγνωστικό αντιτοξικό ορό και το μείγμα αυτό χορηγείται σε λευκά ποντίκια. Όταν η τοξίνη εξουδετερώνεται με αντιτοξικό ορό, τα ποντίκια δεν πεθαίνουν.

Η αντίδραση εξουδετέρωσης χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό της αντιτοξικής ανοσίας σε παιδιά με διφθερίτιδα (δοκιμή Schick) και οστρακιά (δοκιμή Dick). Για να γίνει αυτό, μια ορισμένη ποσότητα της αντίστοιχης τοξίνης (1/40 DLM) εγχέεται ενδοδερμικά στην περιοχή του αντιβραχίου. Εάν υπάρχουν αντιτοξίνες στο σώμα, η τοξίνη θα εξουδετερωθεί και η αντίδραση θα είναι αρνητική. Σε περίπτωση απουσίας αντιτοξινών στο σώμα, φλεγμονώδης απόκρισηστο σημείο της ένεσης.
47) RN (αντίδραση εξουδετέρωσης) σε ποντίκια για αναγνώριση του ιού εγκεφαλίτιδα που μεταδίδεται από κρότωνες

Ο ιός ΤΒΕ είναι παθογόνος για έναν αριθμό εργαστηριακών και άγριων ζώων. Τα νεογέννητα και τα νεαρά λευκά ποντίκια είναι πιο ευαίσθητα. Μετά από μόλυνση στον εγκέφαλο, ενδοπεριτοναϊκά, ενδομυϊκά, τα ζώα αυτά αναπτύσσουν εγκεφαλίτιδα, που καταλήγει στο θάνατο των ζώων. Από τα ζώα της φάρμας, οι κατσίκες είναι πιο ευαίσθητες στον ιό ΤΒΕ, τα πρόβατα και οι αγελάδες είναι λιγότερο ευαίσθητα και τα άλογα είναι ασθενώς ευαίσθητα. Ο ιός TBE έχει κυτταροπαθογόνο δράση (CPE), προκαλώντας κυτταροπαθητικές αλλαγές σε πρωτογενείς και μεταμοσχευμένες καλλιέργειες εμβρυϊκών νεφρικών κυττάρων χοίρου (SPEV και RPE) και πολλαπλασιάζεται χωρίς έντονο CPE σε πολλές άλλες. καλλιέργειες κυττάρων. Στον εγκέφαλο των μολυσμένων ποντικών και στο πολιτιστικό υγρό των μολυσμένων καλλιεργειών, ο ιός ΤΒΕ και συγκεκριμένα ιικά αντιγόνα συσσωρεύονται: στερέωση συμπληρώματος, αιμοσυγκόλληση, καθίζηση κ.λπ.

Ιός ΤΒΕ πολύς καιρόςδιατηρούνται σε χαμηλές θερμοκρασίες ( βέλτιστη λειτουργία-60 μοίρες. C και κάτω), ανέχεται καλά τη λυοφιλοποίηση, σε ξηρή κατάσταση παραμένει για πολλά χρόνια, αλλά αδρανοποιείται γρήγορα σε θερμοκρασία δωματίου. Το βράσιμο το σκοτώνει μετά από 2 λεπτά, και σε ζεστό γάλα στους 60 βαθμούς. Ο Γ πεθαίνει μετά από 20 λεπτά.

Η φορμαλίνη, η φαινόλη, το αλκοόλ και άλλα απολυμαντικά, η υπεριώδης ακτινοβολία έχουν επίσης αδρανοποιητική δράση.

Η αντίδραση εξουδετέρωσης βασίζεται στην ικανότητα συγκεκριμένων ορών του ανοσοποιητικού να σβήνουν τη μολυσματική δράση των ιών. Εφαρμόζεται σε δύο κατευθύνσεις:

1) για την πληκτρολόγηση μεμονωμένων ιών.

2) για τιτλοδότηση αντισωμάτων στους ορούς των αναρρωμένων ασθενών.

Ρύθμιση της αντίδρασης:

1. Σε πειραματόζωα. Κριτήρια για την παρουσία ιού

είναι ο θάνατος των εργαστηριακών ζώων. Υπολογίζεται το LD50

Η μέγιστη αραίωση του ιικού εναιωρήματος, το οποίο

προκάλεσε το θάνατο του 50% των μολυσμένων ζώων. Για

διενεργείται ταυτοποίηση του ιού της εγκεφαλίτιδας που μεταδίδεται από κρότωνες

ενδοεγκεφαλική μόλυνση λευκών ποντικών.

2. Σε καλλιέργειες ιστών. Γίνεται λογιστική για τα αποτελέσματα

Με κυτταροπαθητική δράση (CPE)

Με μέθοδο δοκιμής χρώματος που βασίζεται στην αλλαγή χρώματος

Με αιμορροφηση.

3. Στο έμβρυο κοτόπουλου. Η λογιστική για τα αποτελέσματα πραγματοποιείται σύμφωνα με

η εμφάνιση σακιδίων κατά μήκος της χοριοαλλαντοϊκής μεμβράνης.

48) RTGA

Αυτή η αντίδραση χρησιμοποιείται στην ιολογική πρακτική:

Για τον προσδιορισμό του τύπου του ιού (σε γυαλί).

Για ανίχνευση στον ορό ασθενών (ανεπτυγμένο).

Κατά τη δημιουργία μιας κατά προσέγγιση αντίδρασης αναστολής αιμοσυγκόλλησης, 1 σταγόνα τυποειδικών ανοσοποιητικών ορών εφαρμόζεται στο γυαλί, στη συνέχεια προστίθεται 1 σταγόνα του υλικού δοκιμής και 1 σταγόνα από ένα εναιώρημα 5% ερυθροκυττάρων.

Λογιστική για τα αποτελέσματα: ο τύπος του ιού καθορίζεται από τον ορό με τον οποίο δεν εμφανίστηκε η αντίδραση, καθώς ο ανοσοποιητικός ορός που είναι ειδικός για τον απομονωμένο ιό καταστέλλει την αιμοσυγκολλητική του δραστηριότητα και τα ερυθροκύτταρα δεν συγκολλούνται.
49) RIF

Ως ετικέτα χρησιμοποιούνται φωτεινές βαφές φθοριοχρωμάτων (ισοθειοκυανική φλουορισκεΐνη κ.λπ.).

Υπάρχουν διάφορες τροποποιήσεις του RIF. Για ρητή διάγνωση μολυσματικών ασθενειών - για την ανίχνευση μικροβίων ή των αντιγόνων τους στο υλικό δοκιμής, χρησιμοποιείται RIF σύμφωνα με τον Koons.

Υπάρχουν δύο μέθοδοι RIF σύμφωνα με τον Koons: άμεση και έμμεση.

Άμεση στοιχεία RIF:

1) το υπό μελέτη υλικό (μια κίνηση του εντέρου που χωρίζεται από τον ρινοφάρυγγα κ.λπ.)

2) επισημασμένος ειδικός ανοσοορός που περιέχει AT-la στο επιθυμητό αντιγόνο.

3) ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου.

Ένα επίχρισμα από το υλικό δοκιμής υποβάλλεται σε επεξεργασία με επισημασμένο αντιορό.

Εμφανίζεται μια αντίδραση AG-AT. Η φωταυγής μικροσκοπική εξέταση στην περιοχή που εντοπίζονται τα σύμπλοκα AG-AT αποκαλύπτει φθορισμό - φωταύγεια.

Έμμεσα στοιχεία RIF:

1) το υπό μελέτη υλικό.

2) ειδικός αντιορός?

3) ορός αντισφαιρίνης (AT-la έναντι ανοσοσφαιρίνης) επισημασμένος με φθορόχρωμα.

4) Ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου.

Ένα επίχρισμα από το υλικό δοκιμής υφίσταται πρώτα επεξεργασία με ανοσοορό προς το επιθυμητό αντιγόνο και στη συνέχεια με επισημασμένο ορό αντισφαιρίνης.

Φωτεινά σύμπλοκα AG-AT - επισημασμένα AT ανιχνεύονται χρησιμοποιώντας μικροσκόπιο φθορισμού.

Το πλεονέκτημα της έμμεσης μεθόδου είναι ότι δεν υπάρχει ανάγκη να παρασκευαστεί ένα ευρύ φάσμα φθοριζόντων ειδικών ορών και χρησιμοποιείται μόνο ένας ορός φθορισμού αντισφαιρίνης.

Απομονώνεται επίσης μια ποικιλία έμμεσων RIF 4 συστατικών, όταν εισάγεται επιπλέον συμπλήρωμα (ορός ινδικού χοιριδίου). Με μια θετική αντίδραση, σχηματίζεται ένα σύμπλοκο AG-AT - επισημαίνεται - AT-συμπλήρωμα.

Η αντίδραση αναφέρεται σε ορολογικές αντιδράσειςπου περιλαμβάνουν επισημασμένα αντιγόνα ή αντισώματα.

Πραγματοποιείται με άμεσες και έμμεσες μεθόδους.

Στο άμεση μέθοδοςανίχνευση αντιγόνου στο υλικό από τον ασθενή. Χρησιμοποιείται ένας διαγνωστικός φθορίζων ορός, ο οποίος περιέχει ανοσοσφαιρίνες που έχουν απομονωθεί από ορούς του ανοσοποιητικού και έχουν επισημανθεί με φθοριόχρωμα.

Το συγκεκριμένο αντιγόνο βρίσκεται με τη μορφή φωτεινών πράσινων φωταυγών συσσωματωμάτων και το φόντο του σκευάσματος γίνεται πορτοκαλοκόκκινο.

Συστατικά της αντίδρασης άμεσου ανοσοφθορισμού:

1) το υπό μελέτη υλικό.

2) ειδικός ορός φωταύγειας.

3) μικροσκόπιο φωταύγειας.

Κατά τη διάγνωση της γρίπης, γίνεται διαφοροποίηση από τα παθογόνα της παραγρίπης και λοίμωξη από αδενοϊό. Το ρινοφαρυγγικό επίχρισμα αντιμετωπίζεται με φθορίζοντα ορό γρίπης ή ανοσοσφαιρίνη γρίπης.

Το αποτέλεσμα "+" με τη μορφή πράσινης λάμψης λαμβάνεται μετά από 3 ώρες.

Στην έμμεση μέθοδο ανιχνεύονται και τιτλοποιούνται συγκεκριμένα αντισώματα. Ο τίτλος ορού είναι η μέγιστη αραίωσή του, στην οποία ο φθορισμός σημειώνεται στο "+ +".

Συστατικά της έμμεσης αντίδρασης ανοσοφθορισμού

Για να αναζητήσετε ένα αντιγόνο σε ταχεία διάγνωση:

1) υλικό δοκιμής (αντιγόνο).

2) ειδικός ορός?

3) ορός φωταύγειας αντισφαιρίνης

4) μικροσκόπιο φωταύγειας.

/ ειδική φάση

Τα αντισώματα ορού απορροφώνται στο αντιγόνο.

// μη ειδική φάση

Χρησιμοποιείται ορός αντισφαιρίνης σημασμένος με φθορόχρωμα. Σχηματίζεται ένα σύμπλεγμα αντιγόνου + αντισώματος (Ι) + ορός αντισφαιρίνης (II), το οποίο λάμπει.