Ο μηχανισμός αντίδρασης καθίζησης της αντίδρασης διαφέρει από την αντίδραση. Αντίδραση καθίζησης (ανοσολογική μέθοδος)
Συνίσταται στην αλληλεπίδραση ενός διαλυτού αντιγόνου με ένα αντίσωμα, που ακολουθείται από την καθίζηση ενός λεπτόκοκκου ιζήματος (ίζημα).
Η αντίδραση κατακρήμνισης σάς επιτρέπει να προσδιορίσετε την παρουσία ενός άγνωστου αντιγόνου στο υλικό δοκιμής προσθέτοντας ένα γνωστό αντίσωμα ή χρησιμοποιώντας ένα γνωστό αντιγόνο - ένα άγνωστο αντίσωμα. κατακρήμνιση πηγαίνει χειρότερααπουσία αλάτων. Η βέλτιστη κατακρήμνιση είναι στην περιοχή pH=7,0-7,4.
Ο μηχανισμός της καθίζησης είναι κοντά σε αυτόν της συγκόλλησης. Υπό την επίδραση του ανοσοποιητικού συστήματος που έχει αντιδράσει με το αντιγόνο, ο βαθμός διασποράς του μειώνεται. Ο ορός και το αντιγόνο πρέπει να είναι εντελώς διαφανή. Κατά τη ρύθμιση της καθίζησης, μπορούν να προστεθούν διαφορετικές αραιώσεις του αντιγόνου σε μία αραίωση ορού ή αντίστροφα.
Η κατακρήμνιση καταγράφεται καλύτερα εάν το αντιγόνο υπερτίθεται στον δοκιμαστικό σωλήνα πάνω στο αντίσωμα. Σε αυτή την περίπτωση, παρατηρείται η εμφάνιση ενός ιζήματος με τη μορφή δακτυλίου - κατακρήμνιση δακτυλίου. Η καθίζηση με δακτύλιο πραγματοποιείται σε ειδικούς δοκιμαστικούς σωλήνες με διάμετρο 2,5-3,5 mm. Για τον προσδιορισμό του αριθμού των αντιγόνων στο υλικό δοκιμής ή των διαφορετικών αντισωμάτων στον ορό, χρησιμοποιείται η αντίδραση καθίζησης άγαρ: 1% διαυγασμένο άγαρ χύνεται μέσα ή πάνω σε γυάλινες πλάκες. Τα διαλύματα αντιγόνου και αντισωμάτων χύνονται σε διαφορετικά φρεάτια κατασκευασμένα σε άγαρ, τα οποία διαχέονται το ένα προς το άλλο, σχηματίζοντας γραμμές καθίζησης. Η αντίδραση κατακρήμνισης χρησιμοποιείται ευρέως στη διάγνωση (βλέπε αντίδραση Ascoli).
Η καθίζηση σε άγαρ επιτρέπει τον προσδιορισμό της τοξικότητας των καλλιεργειών διφθερίτιδας.
ΣΤΟ εγκληματολογική έρευναΗ κατακρήμνιση χρησιμεύει για τον καθορισμό της συσχέτισης των ειδών του αίματος, των οργάνων και των ιστών με τη βοήθεια συγκεκριμένων ορών καθίζησης.
Κατακρήμνιση - η αντίδραση της καθίζησης ενός συμπλόκου αντιγόνου (κατακρημνογόνου) και αντισωμάτων (κατακρήμνισης). Η καθίζηση είναι ένα από τα ανοσολογικά φαινόμενα που καθιστά δυνατό τον προσδιορισμό της περιεκτικότητας σε αντισώματα (βλ.) στον ορό αίματος ασθενών ή εμβολιασμένων ατόμων, καθώς και στο αίμα ανοσοποιημένων ζώων. Όταν χρησιμοποιούνται τυπικοί οροί, η αντίδραση καθίζησης μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την τιτλοδότηση διαλυτών αντιγόνων διαφόρων προελεύσεων (βλ.).
Στην απλούστερη μορφή ρύθμισης της αντίδρασης καθίζησης, ο ορός δοκιμής σε μια σειρά πολλαπλών αραιώσεων προστίθεται με στρώση σε μια σειρά δοκιμαστικών σωλήνων με σταθερή ποσότητα αντιγόνου. Μετά από 30-60 λεπτά. επώαση σε θερμοκρασία δωματίου στο όριο των δύο υγρών σχημάτισε έναν δακτύλιο θολότητας - κατακρήμνισης δακτυλίου. Η ελάχιστη ποσότητα ορού που δίνει μια αντίδραση καθίζησης λαμβάνεται ως τίτλος αντιορού. Όταν η αντίδραση αντιστρέφεται με έναν τυπικό αντιορό, είναι δυνατό να εκτιμηθεί η σχετική συγκέντρωση του αντιγόνου σε διάφορα βιολογικά υγρά.
Τα αποτελέσματα της τιτλοδότησης αντισωμάτων και αντιγόνων με βάση την παραπάνω μέθοδο δεν έχουν απόλυτη ποσοτική έκφραση. Προκειμένου να ποσοτικοποιηθεί η περιεκτικότητα σε αντισώματα, αναπτύχθηκαν οι Heidelberger, Kabat (M. Heidelberger, E. Kabat) και άλλοι. ποσοτική μέθοδοςαντίδραση κατακρήμνισης, η οποία βασίζεται στην ανίχνευση της λεγόμενης ζώνης ισοδυναμίας. Όταν αναμιγνύονται κατάλληλες για την ηλικία ποσότητες αντιγόνου με σταθερούς όγκους αντιορού, η ποσότητα του ιζήματος που σχηματίζεται αρχικά αυξάνεται και μετά μειώνεται ξανά λόγω αύξησης της διαλυτότητας του συμπλόκου αντιγόνου-αντισώματος σε περίσσεια αντιγόνου. Εάν προσδιορίσουμε την περιεκτικότητα σε αντισώματα στο υπερκείμενο σε όλους τους δοκιμαστικούς σωλήνες, τότε αποδεικνύεται ότι στους μεσαίους δοκιμαστικούς σωλήνες μιας σειράς ή ακόμα και σε έναν μόνο δοκιμαστικό σωλήνα δεν υπάρχουν αντισώματα στο υπερκείμενο. την ίδια στιγμή, εδώ σχηματίζεται το μεγαλύτερο ίζημα. Εφόσον στη ζώνη ισοδυναμίας ολόκληρο το αντιγόνο που εισάγεται στο μίγμα των αντιδρώντων εμπλέκεται επίσης στο ίζημα, μετά την αφαίρεση του ιζήματος της πρωτεΐνης αντιγόνου από την ποσότητα της πρωτεΐνης, λαμβάνεται η ακριβής τιμή της περιεκτικότητας αντισώματος σε έναν δεδομένο όγκο ορού δοκιμής. Η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη του ιζήματος μετά από ενδελεχή πλύση με ψυχρό αλατούχο ορό προσδιορίζεται με άζωτο ή με κάποια χρωματομετρική μέθοδο.
Κατά την αξιολόγηση της τιμής της αντίδρασης καθίζησης ως διαγνωστική μέθοδοςπρέπει να ληφθεί υπόψη ότι αντισώματα που δεν έχουν τις ιδιότητες των ιζημάτων και, επομένως, δεν σχηματίζουν ίζημα όταν αλληλεπιδρούν με ένα αντιγόνο, μπορεί να υπάρχουν σε ορούς του ανοσοποιητικού. Αυτά περιλαμβάνουν κυρίως ατελή αντισώματα, καθώς και κάποια άλλα αντισώματα που ανήκουν στην ομάδα των γ-Α σφαιρινών.
Η ικανότητα του αντιορού να καθιζάνει το αντιγόνο μπορεί να μειωθεί με θέρμανση στους 65-70°, επεξεργασία με οργανικούς διαλύτες, αναγωγή σε όξινο μέσο [Isliker (Ν. Isliker), Α.Υα. Kuhlberg]. Το φαινόμενο της κατακρήμνισης με αντιορό, που εν γνώσει του περιέχει ιζηματίνες, είναι δυνατό μόνο σε συγκεκριμένη θερμοκρασία, συγκέντρωση αλάτων και ιόντων υδρογόνου. Η αντίδραση καθίζησης προχωρά ταχύτερα στους 25-37°. Απαραίτητη προϋπόθεση για τον σχηματισμό ενός ιζήματος είναι η παρουσία χλωριούχου νατρίου σε ισοτονικές συγκεντρώσεις (0,85% διάλυμα NaCl). Όταν η συγκέντρωση του NaCl αυξάνεται στο 15%, τα ιζήματα που σχηματίζονται από το αντιγόνο πολυσακχαριδικής φύσης διαλύονται μερικώς, τα οποία μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την εκχύλιση καθαρών αντισωμάτων. Η αντίδραση καθίζησης με αντιγόνα πρωτεϊνικής φύσης προχωρά με τον ίδιο ρυθμό και πληρότητα τόσο σε 0,85% όσο και σε 15% διαλύματα NaCl. Η βέλτιστη συγκέντρωση ιόντων υδρογόνου για το σχηματισμό ιζήματος αντιστοιχεί σε τιμές pH από 5,0 έως 9,0.
Στην εργαστηριακή πρακτική, χρησιμοποιούνται διάφορες τροποποιήσεις της αντίδρασης καθίζησης. Συγκεκριμένα, η αντίδραση θερμοκαθίζησης χρησιμοποιείται για την ανίχνευση βακτηριακών αντιγόνων. άνθρακας, αλλαντίαση κ.λπ., που δεν υπόκεινται σε θερμική μετουσίωση (κοκτοαντιγόνα). Αυτή η αντίδραση διαφέρει από την αντίδραση καθίζησης δακτυλίου μόνο στο ότι το διήθημα του βρασμένου υλικού δοκιμής χρησιμοποιείται ως αντιγόνο (βλ. Αντίδραση Α).
Κατά την ανάλυση ενός πολύπλοκου μείγματος αντιγόνων χρησιμοποιώντας την αντίδραση καθίζησης, είναι αδύνατο να χαρακτηριστούν οι ιδιότητες των επιμέρους συστατικών του μείγματος. Για να λύσετε αυτό το πρόβλημα, καταφύγετε σε μεθόδους καθίζησης σε άγαρ και ανοσοηλεκτροφόρηση. Η μέθοδος κατακρήμνισης σε άγαρ στην πιο κοινή τροποποίηση του Ouchterlony (O. Ouchterlony) βασίζεται στο γεγονός ότι το αντιγόνο και ο αντιορός, που διαχέονται το ένα προς το άλλο σε ένα λεπτό στρώμα άγαρ, σχηματίζουν μια γραμμή καθίζησης όταν συναντώνται. Από τον αριθμό τέτοιων γραμμών, μπορεί κανείς να κρίνει τον αριθμό των συστατικών που περιέχονται σε ένα δεδομένο μείγμα αντιγόνων. Η μέθοδος Ouhgerlonu καθιστά δυνατή τη σύγκριση διαφορετικών αντιγονικών μιγμάτων και τον προσδιορισμό του βαθμού συγγένειας των συστατικών που υπάρχουν σε αυτά. Όταν αναλύεται ένα σύνθετο αντιγονικό μείγμα που περιέχει ουσίες με τους ίδιους ρυθμούς διάχυσης σε άγαρ, μεγάλη βοήθειαμπορεί να φέρει τη μέθοδο της ανοσοηλεκτροφόρησης. Το μίγμα των αντιγόνων διαχωρίζεται προκαταρκτικά σε ένα ηλεκτρικό πεδίο σε μια πλάκα άγαρ, μετά την οποία αναπτύσσεται μεμονωμένα εξαρτήματααντιορός. Ο αντιορός εισάγεται σε μια τάφρο φτιαγμένη σε άγαρ παράλληλα με τη γραμμή κατά την οποία κινούνταν τα αντιγόνα κατά την ηλεκτροφόρηση. Κάθε ένα από τα αντιγόνα δίνει ένα ξεχωριστό τόξο καθίζησης με αντιορό. Η ανοσοηλεκτροφόρηση χρησιμοποιείται ευρέως για ανάλυση παθολογικές ανωμαλίεςσε πρωτεΐνες ορού, καθώς και στην ανοσολογική ανάλυση ιστών και βακτηριακών αντιγόνων.
Ιατροδικαστική Κατακρήμνιση. Η κατακρήμνιση χρησιμοποιείται στην ιατροδικαστική για τον προσδιορισμό του είδους του αίματος, των μερών των οργάνων και των ιστών. Σε ορισμένες ανακριτικές υποθέσεις, απαιτείται να προσδιοριστεί ο τύπος αίματος που βρέθηκε στα όργανα του εγκλήματος, στα ρούχα του δράστη ή του θύματος, κ.λπ. με πρωτεΐνες από διάφορα ζώα χρησιμοποιούνται. Συνήθως παρασκευάζονται οροί που καθιζάνουν ανθρώπους, άλογο, γάτα, κοτόπουλο, γουρούνι, σκύλο, βοοειδή. Πρέπει να έχουν τίτλο τουλάχιστον 1:10.000 και να είναι επαρκώς συγκεκριμένοι. Παρασκευάζονται εκχυλίσματα από το σημείο ή την κρούστα αίματος που μελετήθηκε για φυσιολογικό ορό, τα οποία στη συνέχεια ελέγχονται με ορούς καθίζησης. Ο τύπος της πρωτεΐνης θεωρείται ότι έχει προσδιοριστεί εάν ένας από τους ορούς καταβύθισης σχηματίζει ίζημα με εκχύλισμα από το αίμα της δοκιμής με κατάλληλη αντίδραση ελέγχου. Η αντίδραση καθίζησης μπορεί επίσης να καθορίσει τον τύπο της πρωτεΐνης σε ανθρώπινους ή ζωικούς ιστούς και όργανα. Τυπικά, η αντίδραση καθίζησης πραγματοποιείται σε δοκιμαστικούς σωλήνες με κωνικό άκρο. Κατά τη λήψη θολό εκχυλισμάτων, η αντίδραση καθίζησης διεξάγεται σε άγαρ σύμφωνα με το Ouchterlon.
Η αντίδραση καθίζησης (RP) είναι η καθίζηση ενός διαλυτού αντιγόνου υπό τη δράση αντισωμάτων παρουσία ηλεκτρολύτη. Ορατό αποτέλεσμα αντίδρασης (φαινόμενο κατακρήμνισης) - θολότητα (σχηματισμός θολού δακτυλίου ή ιζήματος - επισπεύδει).
Το RP χρησιμοποιείται για την ανίχνευση ενός άγνωστου αντιγόνου σε μια σειρά μολυσματικών ασθενειών: με άνθρακα, τουλαραιμία, μηνιγγίτιδα, ευλογιά. Στην ιατροδικαστική, χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό του είδους του αίματος, του σπέρματος. στην υγειονομική και υγειονομική έρευνα - για τη διαπίστωση παραποίησης τρόφιμα. Το RP είναι πολύ διαφορετικό. υψηλή ευαισθησίακαι σας επιτρέπει να ανιχνεύσετε αντιγόνο σε αραίωση 1: 1.000.000 και 1: 10.000.000.
Συστατικά της αντίδρασης καθίζησης.
1. Αντιγόνο (καταβυθογόνο) -είναι αντιγόνο μοριακή φύση, το οποίο βρίσκεται σε λεπτή διασπορά (διαλυτή) κατάσταση. Τα ιζηματογόνα είναι διάφορα κυτταρολύματα ή εκχυλίσματα ιστών κ.λπ. Το ιζηματογόνο διαφέρει από το συγκολλητογόνο ως προς το μέγεθος των σωματιδίων αντιγόνου. ΣυγκολλητογόνοΕχει μεγέθη κυττάρων(αυτά δεν είναι κατεστραμμένα ολόκληρα κύτταρα), αλλά οι διαστάσεις ιζηματογόνοανάλογη με μοριακό μέγεθος(πρόκειται για πρωτεΐνες και τα σύμπλοκά τους με υδατάνθρακες ή λιπίδια). Διάλυμα ιζηματογόνου διαφανής.
2. Αντισώματα (κατακρημνίσματα)βρίσκονται στον ανθρώπινο ορό ή σε ορούς ανοσοδιαγνωστικής καθίζησης που περιέχουν γνωστά αντισώματα.
3. Ηλεκτρολύτης- ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου.
Λήψη ιζηματογόνου.
Λαμβάνεται με άλεση του υλικού και εξαγωγή πρωτεϊνικών αντιγόνων από αυτό με βρασμό ή με άλλες μεθόδους.
Παραδείγματα ιζηματογόνων: λύματα ή εκχυλίσματα διάφορα σώματακαι ιστούς, ορός ξένου αίματος (ορός είναι λύση, πρώτα απ 'όλα, διάφορα πρωτεΐνες),διηθήματα καλλιεργειών ζωμού μικροβίων, εκχυλίσματα αλάτων μικροβίων, προϊόντα αυτολύσεως κ.λπ.
Λήψη ορών καθίζησης.
Λήφθηκε με υπερανοσοποίηση κουνελιών με κατάλληλα ιζηματογόνα. Τέτοιοι οροί περιέχουν αντισώματα σε εκείνα τα ιζηματογόνα με τα οποία ανοσοποιήθηκαν τα κουνέλια.
Παραδείγματα ορών καθίζησης: κατακρημνίζοντας ορός άνθρακα (περιέχει αντισώματα κατά των αντιγόνων άνθρακα), κατακρημνιζόμενος αντιμηνιγγιτιδοκοκκικός ορός(περιέχει αντισώματα κατά των αντιγόνων του αιτιολογικού παράγοντα της μηνιγγίτιδας) κ.λπ.
Τίτλοςο ορός καθίζησης είναι η υψηλότερη αραίωση του ιζηματογόνου στην οποία ο ορός εξακολουθεί να δίνει μια αντίδραση καθίζησης.
Τρόποι ρύθμισης RP.
1. Αντίδραση κατακρήμνισης δακτυλίου -πραγματοποιείται σε ειδικούς σωλήνες καθίζησης (διάμετρος - 0,4-0,5 cm, ύψος - 7-8 cm). 0,2 - 0,3 ml ορού καθίζησης προστίθενται στον δοκιμαστικό σωλήνα και η ίδια ποσότητα ιζηματογόνου τοποθετείται προσεκτικά κατά μήκος του τοιχώματος με τη μακριά μύτη μιας πιπέτας Pasteur. Στη συνέχεια, προσεκτικά από οριζόντια θέση, οι σωλήνες τοποθετούνται κάθετα.
Λογιστική για τα αποτελέσματα της αντίδρασης πραγματοποιείται με την εμφάνιση ενός λευκού δακτυλίου στο όριο του αντιγόνου-αντισώματος. Με θετική αντίδραση παρατηρείται ένας τέτοιος δακτύλιος. Σε αυτή την περίπτωση, το αντιγόνο αντιστοιχεί στο αντίσωμα και λαμβάνει χώρα η δέσμευσή τους.
Εάν τα βρασμένα και φιλτραρισμένα υδατικά εκχυλίσματα οργάνων και ιστών χρησιμοποιούνται ως ιζηματογόνο, τότε η αντίδραση ονομάζεται αντίδραση θερμική κατακρήμνιση (για παράδειγμα, κατά τη διάγνωση του άνθρακα).
2. Αντίδραση καθίζησης σε γέλη -πραγματοποιείται σε τρυβλία Petri ή σε γυάλινες πλάκες, όπου τοποθετείται ένα στρώμα γέλης άγαρ. Όταν το πήκτωμα στερεοποιείται, κόβονται πηγάδια σε αυτό, μέσα στα οποία τοποθετούνται αντιγόνα ή αντισώματα ή και τα δύο. Διακρίνω 2 μέθοδοι RP σε gel:
μια μέθοδος απλή (ακτινική) ανοσοδιάχυση: ένα από τα συστατικά της ανοσολογικής αντίδρασης (αντιγόνο ή αντίσωμα) τοποθετείται στο φρεάτιο και το άλλο συστατικό αναμιγνύεται με άγαρ. στο θετικό αποτέλεσμα (το αντιγόνο αντιστοιχεί σε ένα αντίσωμα) σχηματίζεται γύρω από το φρεάτιο δακτύλιος ιζήματος ;
β) μέθοδος διπλή ανοσοδιάχυση: τόσο το αντίσωμα όσο και το αντιγόνο τοποθετούνται σε χωριστά φρεάτια, διαχέονται στο πήκτωμα άγαρ το ένα προς το άλλο. με θετικό αποτέλεσμα όπου συναντώνται αντισώματα και αντιγόνα γραμμές υετού .
Ένα παράδειγμα RP σε γέληείναι η αντίδραση διπλής ανοσοδιάχυσης Ouchterlony στη διάγνωση της διφθερίτιδας
Ανοσοηλεκτροφόρηση -είναι μια μέθοδος που συνδυάζει τη μέθοδο της ηλεκτροφόρησης και την αντίδραση καθίζησης. Ένα μείγμα αντιγόνων (για παράδειγμα, πρωτεΐνες ορού) διαχωρίζεται στο πήκτωμα χρησιμοποιώντας ηλεκτροφόρηση. Στη συνέχεια, για να βρεθεί και να προσδιοριστεί η επιθυμητή πρωτεΐνη (άγνωστο αντιγόνο), χρησιμοποιείται ένας διαγνωστικός ορός καθίζησης, ο οποίος περιέχει αντισώματα έναντι αυτής της πρωτεΐνης (γνωστό αντίσωμα). Για να γίνει αυτό, εισάγεται διαγνωστικός ορός στην αυλάκωση παράλληλα με τις πρωτεΐνες. Εάν μεταξύ των πρωτεϊνών υπάρχει μία που αντιστοιχεί στο αντίσωμα στον ορό, τότε σχηματίζονται γύρω από αυτό γραμμές υετού.
αντίδραση καθίζησης- RP (απόλατ. praeci-pito- ίζημα,) είναι ο σχηματισμός και η καθίζηση ενός συμπλόκου ενός διαλυτού μοριακού αντιγόνου με αντισώματα υπό μορφή θολότητας, που ονομάζεται επισπεύδει.Σχηματίζεται με ανάμειξη αντιγόνων και αντισωμάτων σε ισοδύναμες ποσότητες. η υπέρβαση ενός από αυτά μειώνει το επίπεδο εκπαίδευσης ανοσοποιητικό σύμπλεγμα. Σε αντίθεση με την αντίδραση συγκόλλησης, το αντιγόνο για την αντίδραση καθίζησης είναι διαλυτές ενώσεις, το μέγεθος των σωματιδίων των οποίων πλησιάζει το μέγεθος των μορίων. Αυτά μπορεί να είναι πρωτεΐνες, σύμπλοκα πρωτεϊνών με υδατάνθρακες και λιπίδια, βακτηριακά εκχυλίσματα, διάφορα διηθήματα ή διηθήματα μικροβιακών ζωμών. Τα αντισώματα που εμπλέκονται στην αντίδραση καθίζησης ονομάζονται κατακρημνίσεις. Το προκύπτον λεπτό σύμπλεγμα αντιγόνου-αντισώματος ανιχνεύεται με ορισμένες μεθόδους σταδιοποίησης της αντίδρασης καθίζησης.
Η αντίδραση κατακρήμνισης δακτυλίου προτάθηκε για πρώτη φορά από τον Ascoli. Χρησιμοποιείται στη διάγνωση του άνθρακα, της πανώλης, της τουλαραιμίας, της μηνιγγίτιδας. Η μέθοδος είναι απλή και προσιτή.
Ένας ειδικός ορός ανοσοκαταβύθισης χύνεται σε στενούς σωλήνες καθίζησης και το αντιγόνο τοποθετείται πολύ προσεκτικά πάνω του. Ως αντιγόνο, για παράδειγμα, κατά τη διάγνωση του άνθρακα λαμβάνονται κομμάτια δέρματος, μαλλί, δέρματα πεσμένου ζώου κλπ. Τα βράζουν, το υγρό φιλτράρεται και χρησιμοποιείται ως αντιγόνο. Η εμφάνιση ενός δακτυλίου - ένα ίζημα στο όριο δύο υγρών - δείχνει την παρουσία του αντίστοιχου αντιγόνου.
Η αντίδραση κατακρήμνισης γέλης άγαρ, ή η μέθοδος καθίζησης διάχυσης, καθιστά δυνατή τη λεπτομερή μελέτη της σύνθεσης πολύπλοκων υδατοδιαλυτών αντιγονικών μιγμάτων. Για τη ρύθμιση της αντίδρασης, χρησιμοποιείται ένα πήκτωμα (ημι-υγρό ή παχύτερο άγαρ). Κάθε συστατικό που συνθέτει το αντιγόνο διαχέεται προς το αντίστοιχο αντίσωμα με διαφορετικό ρυθμό. Επομένως, σύμπλοκα διαφόρων αντιγόνων και αντίστοιχων αντισωμάτων βρίσκονται μέσα διαφορετικές περιοχέςγέλη, όπου σχηματίζονται γραμμές καθίζησης. Κάθε μία από τις γραμμές αντιστοιχεί σε ένα μόνο σύμπλεγμα αντιγόνου-αντισώματος. Η αντίδραση καθίζησης ρυθμίζεται συνήθως σε θερμοκρασία δωματίου.
Η μέθοδος της ανοσοηλεκτροφόρησης ελήφθη ευρεία χρήσησε τα τελευταία χρόνιαστη μελέτη της αντιγονικής δομής των μικροβίων. Το σύμπλεγμα των αντιγόνων τοποθετείται στο φρεάτιο, το οποίο βρίσκεται στο κέντρο της γέλης άγαρ, που χύνεται στην πλάκα. Στη συνέχεια, διέρχεται ηλεκτρικό ρεύμα μέσω της γέλης άγαρ, με αποτέλεσμα τα διάφορα αντιγόνα που περιλαμβάνονται στο σύμπλεγμα να μετακινούνται στο πεδίο. ηλεκτρικό ρεύμαανάλογα με την ηλεκτροφορητική τους κινητικότητα. Μετά την ολοκλήρωση της ηλεκτροφόρησης, ένας ειδικός ανοσοποιητικός ορός εισάγεται στην τάφρο που βρίσκεται κατά μήκος της άκρης της πλάκας και τοποθετείται σε έναν υγρό θάλαμο. Σε μέρη όπου σχηματίζεται το σύμπλεγμα αντιγόνου-αντισώματος, εμφανίζονται γραμμές καθίζησης.
Αντιδράσεις καθίζησης βάζωσε δοκιμαστικούς σωλήνες (αντίδραση κατακρήμνισης δακτυλίου),σε τζελ, θρεπτικά μέσα κ.λπ. Ευρεία παραλήφθηκε η διανομήποικιλίες αντίδρασης καθίζησης σε ημι-υγρή γέλη άγαρ ή αγαρόζης: διπλή ανοσοδιάχυση σύμφωνα με το Ouchterlony. ακτινική ανοσοδιάχυση, ανοσοηλεκτροφόρησηκαι τα λοιπά
Αντίδραση ακτινικής ανοσοδιάχυσης. Ο ανοσοποιητικός ορός με τηγμένο γέλη άγαρ χύνεται ομοιόμορφα στο ποτήρι. Μετά τη στερεοποίηση στο πήκτωμα, κατασκευάζονται φρεάτια στα οποία τοποθετείται το αντιγόνο σε διάφορες αραιώσεις. Το αντιγόνο, που διαχέεται στο πήκτωμα, σχηματίζει με αντισώματα ζώνες καθίζησης δακτυλίου γύρω από τα φρεάτια (Εικ. 13.7). Η διάμετρος του δακτυλίου καθίζησης είναι ανάλογη της συγκέντρωσης του αντιγόνου. Η αντίδραση χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό των επιπέδων στο αίμα των ανοσοσφαιρινών διαφόρων τάξεων, συστατικών του συστήματος συμπληρώματος κ.λπ.
Ανοσοηλεκτροφόρηση- συνδυασμός της μεθόδου ηλεκτροφόρησης και ανοσοκατακρήμνισης: ένα μείγμα αντιγόνων εισάγεται στα φρεάτια της γέλης και διαχωρίζεται στη γέλη χρησιμοποιώντας ηλεκτροφόρηση. Στη συνέχεια, παράλληλα με τις ζώνες ηλεκτροφόρησης, εισάγεται στην αυλάκωση ένας άνοσος ορός, τα αντισώματα του οποίου, διαχέοντας στο πήκτωμα, σχηματίζονται στο σημείο συνάντησης με το αντιγόνο της γραμμής καθίζησης.
Ανοσολογική ηλεκτρονική μικροσκοπία- Ηλεκτρονική μικροσκοπία μικροβίων, συχνότερα ιών, επεξεργασμένη με κατάλληλα αντισώματα. Οι ιοί που θεραπεύονται με άνοσο ορό σχηματίζουν ανοσοσυσσωματώματα (μικροϊζήματα). Γύρω από τα ιοσωμάτια, σχηματίζεται ένα «στεφάνι» αντισωμάτων, σε αντίθεση με το φωσφοβολφραμικό οξύ ή άλλα ηλεκτρονιακά πυκνά παρασκευάσματα.
123. Αντίδραση καθίζησης σε γέλη για προσδιορισμό της τοξικότητας μικροοργανισμών, μηχανισμός, μέθοδοι πήξης.
Αντίδραση καθίζησης (RP)- αυτός είναι ο σχηματισμός και η καθίζηση ενός συμπλόκου ενός διαλυτού μοριακού αντιγόνου με αντισώματα με τη μορφή θολότητας, που ονομάζεται ίζημα. Σχηματίζεται με ανάμειξη αντιγόνων και αντισωμάτων σε ισοδύναμες ποσότητες. η περίσσεια ενός από αυτά μειώνει το επίπεδο σχηματισμού του ανοσοποιητικού συμπλέγματος.
Το 1946, ο J. Oudin πρότεινε την απλή μέθοδο διάχυσης, σύμφωνα με την οποία ένα από τα συστατικά της αντίδρασης καθίζησης, συνήθως ο ορός, βρίσκεται στο πήκτωμα και το άλλο - το αντιγόνο - τοποθετείται στο πρώτο με τη μορφή ενός λύση.
Το αντιγόνο, που διαχέεται στο πήκτωμα, σχηματίζει λευκές γραμμές καθίζησης σε αυτό με αντισώματα, τα οποία είναι καθαρά ορατά κάτω από τον πλευρικό φωτισμό. Το 1948, ο J. Ouchterlonu ανέπτυξε μια ακόμη απλούστερη και πιο βολική μέθοδο δισδιάστατης αντιδιάχυσης, η οποία επιτρέπει την άμεση σύγκριση διαφόρων αντιγόνων και ορών. Αυτή η μέθοδος είναι επίσης πολύ πολύτιμη στη μελέτη διασταυρούμενων αντιδράσεων.
Για τη ρύθμιση της αντίδρασης σύμφωνα με το Ouchterlon, χρησιμοποιείται άγαρ 1% παρασκευασμένο σε φυσιολογικό ορό, το οποίο χύνεται σε τρυβλία Petri με μια στρώση 0,5 εκ. γύρω από την περιφέρεια σε απόσταση 1-2 εκ. από το κέντρο. Διαγνωστικός ορός καθίζησης χύνεται στο κεντρικό φρεάτιο και ένα διάλυμα ομόλογων και αντιγόνων σε σύγκριση με αυτό χύνεται στα περιφερειακά φρεάτια. Τα αποτελέσματα καταγράφονται μετά από 24, 48 και 72 ώρες επώασης σε θερμοκρασία δωματίου.
Τα αντισώματα και τα αντιγόνα διαχέονται το ένα προς το άλλο και σε περιοχές όπου δημιουργούνται οι ισοδύναμες συγκεντρώσεις τους, σχηματίζονται τοξοειδείς ζώνες καθίζησης. Εάν οι ζώνες καθίζησης που προέρχονται από δύο παρακείμενα φρεάτια συγχωνεύονται, αυτό υποδηλώνει την παρουσία αρκετών αντιγονικών συστατικών στο υγρό δοκιμής. Η αντίδραση αντίθετης διάχυσης σύμφωνα με τον Ouchterlohn χρησιμοποιείται συχνά για τον προσδιορισμό της τοξικότητας βακτηρίων, όπως η διφθερίτιδα.
Μια περαιτέρω ανάπτυξη της μεθόδου καθίζησης γέλης είναι η ανοσοηλεκτροφόρηση. Αυτός ο όρος αναφέρεται σε μια μέθοδο που συνδυάζει τον ηλεκτροφορητικό διαχωρισμό ενός μείγματος αντιγόνων και την αντίθετη διάχυση Ouchterlohn στην ίδια πλάκα γέλης άγαρ. Ο ορός που καταβυθίζεται στη συνέχεια χύνεται σε μια αυλάκωση κομμένη στο πήκτωμα παράλληλη προς την κατεύθυνση του ηλεκτροφορητικού διαχωρισμού.
Οι γραμμές κατακρήμνισης που σχηματίζονται ως αποτέλεσμα της αντίδρασης έχουν τη μορφή τόξων επιμήκων προς την κατεύθυνση της ηλεκτροφορητικής κίνησης των κλασμάτων αντιγόνου. Η ανοσοηλεκτροφόρηση καθιστά δυνατό τον προσδιορισμό της σύνθεσης πολύπλοκων μιγμάτων διαλυτών αντιγόνων που περιέχουν έως και 30 συστατικά, και ως εκ τούτου είναι μια πολύτιμη διαγνωστική μέθοδος.
Αντίδραση καθίζησηςΤο (RP) ονομάζεται κατακρήμνιση από ένα διάλυμα Ag (κατακρημνογόνο) όταν εκτίθεται σε άνοσο ορό (κατακρήμνιση) και ηλεκτρολύτη.
Μέσω του RP, ένα αντιγόνο μπορεί να ανιχνευθεί σε αραιώσεις 1:100.000 και ακόμη και 1:1.000.000, δηλαδή σε τόσο μικρές ποσότητες που δεν μπορούν να ανιχνευθούν χημικά.
Τα ιζηματογόνα είναι υπερμικροσκοπικά σωματίδια φυσικής πρωτεΐνης-PS: εκχυλίσματα από μικρά, όργανα και TC, υλικό pat. προϊόντα αποσύνθεσης ενός βακτηριακού κυττάρου, τα προϊόντα λύσης τους, τα διηθήματα. Τα ιζηματογόνα είναι θερμικά σταθερά, επομένως, για να ληφθούν, το υλικό υποβάλλεται σε βρασμό.
Στην RP, χρησιμοποιούνται υγρά διαφανή Ags.
Οι οροί καθίζησης λαμβάνονται συνήθως με υπερανοσοποίηση κουνελιών σε κύκλους αρκετών μηνών, εισάγοντάς τους βακτηριακά εναιωρήματα, διηθήματα καλλιέργειας ζωμού, προϊόντα αυτολύσεως, εκχυλίσματα αλάτων μικροοργανισμών και πρωτεΐνες ορού γάλακτος.
Σκηνοθετεί ο RP Ascoli.Σε ένα στενό δοκιμαστικό σωλήνα με μικρή ποσότητα μη αραιωμένου ορού καθίζησης, κρατώντας τον σε κεκλιμένη θέση, ο ίδιος όγκος Ag τοποθετείται αργά κατά μήκος του τοιχώματος με μια πιπέτα.
Για να μην αναμειχθούν τα δύο υγρά, ο δοκιμαστικός σωλήνας τοποθετείται προσεκτικά κάθετα. Με μια θετική αντίδραση σε ένα δοκιμαστικό σωλήνα, ένας γκριζόλευκος δακτύλιος εμφανίζεται μετά από 5–10 λεπτά στο όριο μεταξύ του ορού και του εκχυλίσματος που μελετήθηκε. Η αντίδραση συνοδεύεται απαραίτητα από ελέγχους ορού και αντιγόνου.
Η αντίδραση Ascoli χρησιμοποιείται για τον εντοπισμό άνθρακα, τουλαραιμίας, πανώλης Αγ.
Έχει επίσης βρει εφαρμογή στην ιατροδικαστική για τον προσδιορισμό του είδους μιας πρωτεΐνης, ιδιαίτερα των λεκέδων αίματος, στην υγειονομική πρακτική για την ανίχνευση παραποίησης κρέατος, ψαριών, προϊόντα αλευριού, ακαθαρσίες στο γάλα. Το μειονέκτημα αυτού του RP είναι η αστάθεια του ιζήματος (δακτυλίου), το οποίο εξαφανίζεται ακόμη και με ελαφρύ τίναγμα. Επιπλέον, δεν μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τον προσδιορισμό ποσοτική σύνθεσηΤο Ag συμμετέχει στο σχηματισμό του ιζήματος.
Αντίδραση καθίζησης Ouchterlony.Η αντίδραση τοποθετείται σε τρυβλία Petri στα φρεάτια γέλης άγαρ.
Το καλά πλυμένο διαφανές άγαρ χρησιμοποιείται ως γέλη. Ag και ορός εισάγονται στη γέλη άγαρ έτσι ώστε τα φρεάτια που τα περιέχουν να βρίσκονται σε μια ορισμένη απόσταση. Διαχέοντας το ένα προς το άλλο και συνδέοντας το ένα με το άλλο, το αντίσωμα και το αντιγόνο σχηματίζουν ένα ανοσοσύμπλεγμα με τη μορφή λευκής ταινίας σε 24-48 ώρες.
Παρουσία ενός πολύπλοκου ιζηματογόνου, εμφανίζονται αρκετές ζώνες. Ταυτόχρονα, οι ζώνες των ορολογικά σχετικών αντιγόνων συγχωνεύονται και οι ζώνες των ετερογενών τέμνονται, γεγονός που καθιστά δυνατό τον προσδιορισμό των λεπτομερειών της αντιγονικής δομής των υπό μελέτη ουσιών.
Χρησιμοποιείται ευρέως για τη διάγνωση ασθενειών που προκαλούνται από ιούς και βακτήρια που παράγουν εξωτοξίνες.
3.Η αντίδραση της έμμεσης αιμοσυγκόλλησης (RNGA).Χρησιμοποιείται για την ανίχνευση πολυσακχαριτών, πρωτεϊνών, εκχυλισμάτων βακτηρίων, μυκοπλασμάτων, ρικέτσιων και ιών, των οποίων τα ανοσοσυμπλέγματα με συγκολλητίνες δεν μπορούν να παρατηρηθούν στη συμβατική κλασσική ΡΑ ή για την ανίχνευση αντισωμάτων στον ορό ασθενών σε αυτές τις ουσίες υψηλής διασποράς και στους μικρότερους μικροοργανισμούς. .
RNGA για την οροδιάγνωση λοιμωδών νοσημάτων.Χρησιμοποιώντας RNHA για την ανίχνευση αντισωμάτων στους ορούς ασθενών, προετοιμάζονται διαγνωστικά αντιγόνων ερυθροκυττάρων.
αντίδραση καθίζησης.
Για να γίνει αυτό, τα ερυθροκύτταρα υποβάλλονται σε επεξεργασία για 15 λεπτά με διάλυμα τανίνης σε αραίωση 1:20.000–1:200.000, που τους δίνει σταθερότητα και αυξάνει την ικανότητα προσρόφησής τους. Στη συνέχεια αναμειγνύονται με ένα γνωστό αντιγόνο και επωάζονται για 2 ώρες σε θερμοκρασία 37° C. Τα ευαισθητοποιημένα σε αντιγόνο ερυθροκύτταρα πλένονται 2-3 φορές με ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου και προστίθενται στον ορό, αραιώνονται και χύνονται στα φρεάτια του πάνελ.
Εναιωρήματα άθικτων και φορτισμένων με αντιγόνο ερυθροκυττάρων, τα οποία προστίθενται στους ορούς, δίνουν προφανώς θετικές και αρνητικές αντιδράσεις, χρησιμεύουν ως έλεγχος.
Τα αποτελέσματα της αντίδρασης λαμβάνονται υπόψη 2 ώρες μετά την επώαση σε θερμοστάτη και αξιολογούνται με τα συν: "++++" - τα ερυθροκύτταρα καλύπτουν το φρεάτιο με τη μορφή ομπρέλας με οδοντωτές άκρες; "-" - συσσώρευση ερυθροκυττάρων με τη μορφή "κουμπιού"
Σχετική πληροφορία:
Αναζήτηση ιστότοπου:
Αντίδραση κατακρήμνισης δακτυλίου
Η αντίδραση προσκόλλησης δακτυλίου είναι από τις πιο απλές ορολογικές μεθόδους. Εκτελείται σε στενούς σωλήνες καθίζησης. Πρώτον, ένα διαυγές διάλυμα του αντιγόνου που λαμβάνεται σε πολλές αραιώσεις (1:2; 1:4; 1:8; 1:16) χύνεται εξίσου σε όλους τους δοκιμαστικούς σωλήνες.
Η σύνδεση αντιγόνων και αντισωμάτων συμβαίνει στο όριο επαφής των αντιδραστηρίων. Ως αποτέλεσμα αυτής της αλληλεπίδρασης, σε θετικές περιπτώσεις (όταν το αντιγόνο αντιστοιχεί στο αντίσωμα), μετά από λίγο, σχηματίζεται ένα ίζημα με τη μορφή ιριδίζοντος δακτυλίου.
Βρέθηκε η αντίδραση ευρεία εφαρμογήσε ιατρική πρακτικήγια την ανίχνευση αντιγόνου άνθρακα σε μαλλί, δέρματα, κρέας ζώων (αντίδραση Ascoli). για την ανίχνευση άλλων παθογόνων μολυσματικών ασθενειών σε παθολογικό υλικό που λαμβάνεται από ασθενείς ή σε αντικείμενα εξωτερικό περιβάλλον, καθώς και σε ιατροδικαστική εξέτασηγια τον προσδιορισμό του είδους μιας πρωτεΐνης, ειδικότερα μιας πρωτεΐνης αίματος ή άλλων βιολογικών υγρών.
Ανοσοδιάχυση Ouchterlony
Η αντίδραση καταβύθισης μπορεί να πραγματοποιηθεί σε γέλη άγαρ.
Η μέθοδος βασίζεται στο γεγονός ότι σωματίδια αντιγόνων και αντισωμάτων, λόγω των διαφορετικών μεγεθών τους, διαχέονται στο πήκτωμα με διαφορετικές ταχύτητες και, ως εκ τούτου, μετακινούνται σε διαφορετικές αποστάσεις. Αυτό καθιστά δυνατό τον διαχωρισμό μεμονωμένων συστημάτων αντιγόνων όταν βρίσκονται σε ένα μείγμα και, ως εκ τούτου, καθιστά δυνατή τη μελέτη της αντιγονικής δομής βακτηρίων και συμπλόκων πρωτεϊνών, ορών και ζωικών ιστών.
Οπτική και αποτελεσματική μέθοδοςΗ κατακρήμνιση γέλης προτάθηκε από την Ouchterlony.
Μικρά πηγάδια γίνονται σε πιάτα Petri με άγαρ, κομμένα σε κάποια απόσταση το ένα από το άλλο. Σε ένα από αυτά χύνεται αντιγόνο, σε άλλα ο ορός. Τα συστατικά της αντίδρασης διαχέονται στο πήκτωμα το ένα προς το άλλο και σχηματίζουν μια ορατή γραμμή καθίζησης όπου τα αντιγόνα συναντώνται με βέλτιστες συγκεντρώσεις αντισωμάτων ειδικά για αυτό. Επειδή τα αντιδραστήρια διαχέονται ομόκεντρα έξω από τα φρεάτια, μπορούν να πραγματοποιηθούν πολλαπλές αναλύσεις τοποθετώντας πολλαπλά φρεάτια με διαφορετικά αντιγόνα (ή διαφορετικές αραιώσεις του ίδιου αντιγόνου) γύρω από ένα φρεάτιο αντισώματος.
Η αντίδραση Ouchterlony καθιστά δυνατή την εξαγωγή συμπερασμάτων σχετικά με τη φύση του αντιγόνου από έναν γνωστό ορό και, αντίθετα, από ένα γνωστό αντιγόνο, προσδιορίζεται η φύση των αντισωμάτων.
Το πλεονέκτημα της μεθόδου είναι ότι επιτρέπει σε κάποιον να συγκρίνει τα αντιγονικά συστατικά σύνθετων μιγμάτων και να κρίνει τα κοινά ή τις διαφορές τους. Για να συγκριθεί η κοινότητα των αντιγόνων, παρασκευάζεται ένα άγαρ με φρεάτια: αντιορός χύνεται σε ένα και τα αντιγόνα που συγκρίνονται χύνονται στα άλλα. Εάν τα αντιγόνα είναι διαφορετικά, τότε οι ζώνες καθίζησης βρίσκονται άνισα.
Ανοσοηλεκτροφόρηση
Τα τελευταία χρόνια, η μέθοδος της ανοσοηλεκτροφόρησης έχει χρησιμοποιηθεί για λεπτές ανοσολογικές μελέτες. Η μέθοδος περιγράφηκε για πρώτη φορά από τον Π.
Grabar και K. A. Williams το 1953. Είναι ένας συνδυασμός ηλεκτροφόρησης γέλης άγαρ σε γυάλινες πλάκες με ανοσοδιάχυση. Στην αρχή, πραγματοποιείται ηλεκτροφορητικός διαχωρισμός του αντιγόνου, το οποίο συχνά είναι ένα μείγμα πρωτεΐνης ή άλλων μορίων. Για να γίνει αυτό, το αντιγόνο εισάγεται σε ένα φρεάτιο κομμένο εκ των προτέρων στο άγαρ και η πλάκα άγαρ τοποθετείται για κάποιο χρονικό διάστημα σε μια ζώνη συνεχούς ηλεκτρικού ρεύματος.
εξαιτίας διαφορετική ταχύτηταη κίνηση των μορίων είναι ο διαχωρισμός του αντιγόνου στα συστατικά μέρη του. Μετά από αυτό, ο ανοσοποιητικός ορός που καθιζάνει εισάγεται στην αυλάκωση προς την κατεύθυνση παράλληλη προς τη ροή του ρεύματος.
Αντιγόνο και αντιορός διαχέονται στο τζελ το ένα προς το άλλο.
κατακρήμνιση
Κάθε αντιγόνο δίνει μια ζώνη καθίζησης με τη μορφή τόξου με αντισώματα που αντιστοιχούν σε αυτό. Ο αριθμός, η θέση και το σχήμα αυτών των γραμμών δίνουν μια ιδέα για τη σύνθεση του αρχικού μείγματος αντιγόνου.
αντίδραση κροκίδωσης
Η μέθοδος προτάθηκε από τον Ramon το 1924.
Βασίζεται στο γεγονός ότι ένα μείγμα τοξίνης με αντιτοξικό ορό υπό ορισμένες συνθήκες δίνει θολότητα και καθίζηση. Σε αυτή την περίπτωση, η αντίδραση εμφανίζεται νωρίτερα σε εκείνους τους δοκιμαστικούς σωλήνες όπου η ποσότητα της αντιτοξίνης αντιστοιχεί στη δόση που εξουδετερώνει πλήρως αυτή την ποσότητα τοξίνης.
Επομένως, εάν η ισχύς της τοξίνης είναι γνωστή, τότε μπορεί να προσδιοριστεί η ποσότητα της αντιτοξίνης στον άγνωστο ορό δοκιμής. Για να γίνει αυτό, παρασκευάζονται αρκετές αραιώσεις του ορού δοκιμής, προστίθενται οι ίδιες ποσότητες γνωστής τοξίνης σε κάθε αραίωση, μετά την οποία παρατηρείται ποιος από τους δοκιμαστικούς σωλήνες θα κροκιδωθεί πρώτος (θολότητα του διαλύματος). Προσδιορίστε την αρχική κροκίδωση. Στη συνέχεια γίνεται ο υπολογισμός.
Για παράδειγμα, απαιτείται ο προσδιορισμός της συγκέντρωσης των αντισωμάτων κατά της διφθερίτιδας στον ορό δοκιμής. Η αντίδραση χρησιμοποιεί τοξίνη διφθερίτιδας που περιέχει 50 Lf ανά 1 ml (Lf είναι η ελάχιστη ποσότητα τοξίνης που εξουδετερώνεται από 1 αντιτοξική μονάδα (AU) αντιορού.
Ας υποθέσουμε ότι η αρχική κροκίδωση σημειώνεται σε ένα δοκιμαστικό σωλήνα που περιέχει 0,2 ml αυτού του ορού και 2 ml μιας γνωστής τοξίνης με δραστηριότητα 100 Lf (50 Lf x 2).
Έτσι 0,2 ml ορού εξουδετέρωσαν αυτή την τοξίνη. Επομένως, 0,2 ml ορού περιέχει 100 AU και σε 1 ml αυτού του ορού, η συγκέντρωση των αντισωμάτων αντιστοιχεί σε 500 AU (100 AU x 5).
Με παρόμοια μέθοδο, η αντίδραση κροκίδωσης μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τον αντίθετο σκοπό - για τον προσδιορισμό των ανοσοποιητικών ιδιοτήτων των τοξοειδών.
Αυτό απαιτεί έναν τυπικό αντιτοξικό ορό.
Αντίδραση εξουδετέρωσης
Η αντίδραση χρησιμοποιείται στη διάγνωση της τροφικής βακτηριακής δηλητηρίασης για τον προσδιορισμό των βακτηριακών τοξινών στο υλικό δοκιμής. Επιπλέον, μπορεί να τεθεί στη μελέτη κάποιων αντικειμένων του εξωτερικού περιβάλλοντος για το περιεχόμενο παθογόνα βακτήριατην παραγωγή τοξινών, για παράδειγμα, κατά την εξέταση του εδάφους για την παρουσία παθογόνων τετάνου ή αέριας γάγγραινας.
Είναι γνωστό ότι η τοξίνη αναμεμειγμένη με ομόλογο αντιτοξικό ορό δεν το δείχνει τοξική δράσηκαθώς η τοξίνη εξουδετερώνεται. Η αντίδραση της αλληλεπίδρασης μιας τοξίνης με μια αντιτοξίνη, κατά κανόνα, είναι αυστηρά ειδική, επομένως, για να δημιουργηθεί μια αντίδραση εξουδετέρωσης προκειμένου να προσδιοριστεί ο τύπος της τοξίνης, είναι απαραίτητο να υπάρχουν διαγνωστικοί οροί ειδικοί για κάθε τύπο και το είδος της τοξίνης. Ένα μείγμα από 2-3 αντιτοξικούς ορούς και περισσότερους μπορεί να χρησιμοποιηθεί ταυτόχρονα εάν αναμένεται να υπάρχουν αρκετές τοξίνες στο υλικό δοκιμής.
Η αντίδραση εξουδετέρωσης σάς επιτρέπει να προσδιορίσετε τον τύπο και τον τύπο της τοξίνης του παθογόνου.
Το υλικό δοκιμής μπορεί να είναι ένα διήθημα προϊόντων διατροφής που φέρεται να προκάλεσε δηλητηρίαση, πλύσεις από πιάτα όπου βρίσκονταν αυτά τα προϊόντα κ.λπ.
Πραγματοποιείται προκαταρκτική εξουδετέρωση της υποτιθέμενης τοξίνης. Για να γίνει αυτό, ένας αντιτοξικός διαγνωστικός ορός (περιέχει αντισώματα στην επιθυμητή τοξίνη) προστίθεται στον δοκιμαστικό σωλήνα με το υλικό δοκιμής (πειραματικός δοκιμαστικός σωλήνας). ίσος όγκος φυσιολογικού ορού προστίθεται σε άλλο δοκιμαστικό σωλήνα (μάρτυρας).
Μετά από μια σύντομη επώαση, τα περιεχόμενα των δοκιμαστικών σωλήνων εισάγονται σε δύο ομάδες λευκών ποντικών (πειραματικό και μάρτυρα).
Τα αποτελέσματα της αντίδρασης εξουδετέρωσης λαμβάνονται υπόψη αμέσως μετά το θάνατο των ζώων ελέγχου. Σε αυτή την περίπτωση, το γεγονός της επιβίωσης των ζώων που έλαβαν αντιτοξικός ορόςμαζί με το υλικό δοκιμής, υποδηλώνει την παρουσία μιας τοξίνης σε αυτό, που αντιστοιχεί στον ορό που εγχύθηκε.
Το πλεονέκτημα της αντίδρασης εξουδετέρωσης είναι η υψηλή αξιοπιστία των αποτελεσμάτων που λαμβάνονται.
Ωστόσο, ως προς την ευαισθησία και την ταχύτητα απόκρισης, είναι κατώτερη από κάποιες άλλες ερευνητικές μεθόδους.
Αντιδράσεις λύσης
Οι αντιδράσεις λύσης ονομάζονται συνήθως η διάλυση σωματιδιακών αντιγόνων υπό τη δράση αντισωμάτων ειδικών για αυτό το αντιγόνο παρουσία συμπληρώματος.
Από ανοσολογικές αντιδράσειςμε βάση το φαινόμενο της λύσης βακτηρίων και άλλων σωματιδιακών αντιγόνων, χρησιμοποιούνται κυρίως αντιδράσεις βακτηριόλυσης και αιμόλυσης.
αντίδραση βακτηριόλυσης
Η αντίδραση λαμβάνει χώρα τόσο in vitro όσο και in vivo. Το τελευταίο είναι γνωστό ως αντίδραση του V.I. Ισάεφ - Φάιφερ.
Αυτοί οι επιστήμονες απέδειξαν ότι αν ινδικά χοιρίδιαέχει προανοσοποιηθεί με αντιγόνα χολέρας, και στη συνέχεια η επακόλουθη εισαγωγή του στην κοιλιακή κοιλότητα μιας πολύ μολυσματικής καλλιέργειας vibrio cholerae δεν προκαλεί μόλυνση των ζώων, καθώς σε κοιλιακή κοιλότητατο παθογόνο διαλύεται υπό την επίδραση συγκεκριμένων αντισωμάτων.
Αργότερα εγώ.
Ο I. Mechnikov απέδειξε ότι παρόμοια διάλυση του vibrio της χολέρας υπό την επίδραση ανοσοποιητικού ορού συμβαίνει σε δοκιμαστικό σωλήνα, εάν στα κύρια συστατικά προστεθεί φρέσκος ορός, μια πηγή συμπληρώματος. Η διάλυση βακτηρίων υπό τη δράση συγκεκριμένων αντισωμάτων παρουσία συμπληρώματος ονομάζεται αντίδραση βακτηριόλυσης.
Κατά τη ρύθμιση της αντίδρασης βακτηριόλυσης, παρασκευάζεται πρώτα μια σειρά από 10-πλάσιες αραιώσεις του ορού δοκιμής. Στη συνέχεια, η ίδια ποσότητα (1-2 σταγόνες) μικροβιακού εναιωρήματος προστίθεται σε κάθε δοκιμαστικό σωλήνα. Συμπλήρωμα προστίθεται στο μείγμα. Μετά την επώαση στους 37 °C, το μείγμα εμβολιάζεται από κάθε σωλήνα σε θρεπτικό μέσο για να προσδιοριστεί η παρουσία ή η απουσία βιώσιμων βακτηρίων.
Η αντίδραση μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την ανίχνευση αντισωμάτων χρησιμοποιώντας έναν γνωστό μικροοργανισμό ή για τον προσδιορισμό του τύπου των μικροβίων χρησιμοποιώντας έναν διαγνωστικό ανοσοποιητικό ορό.
ΣΤΟ πρακτική δουλειάΟι βακτηριολόγοι σπάνια χρησιμοποιούν αυτή την αντίδραση, κυρίως για τη διαφοροποίηση της χολέρας και των δονήσεων που μοιάζουν με χολέρα.
Αντίδραση αιμόλυσης
Ο μηχανισμός της αιμόλυσης είναι παρόμοιος με αυτόν της βακτηριόλυσης.
Τα ερυθροκύτταρα που χρησιμοποιούνται στην αντίδραση είναι το αντιγόνο. Η πηγή των αντισωμάτων είναι ο αντιερυθροκυτταρικός ορός (για παράδειγμα, εάν χρησιμοποιούνται ερυθροκύτταρα προβάτου στην αντίδραση, τότε ο απαραίτητος ορός με ειδικά αντισώματα κατά των ερυθροκυττάρων λαμβάνεται από κουνέλια ανοσοποιημένα με ερυθροκύτταρα προβάτου).
Ο ορός αίματος ινδικού χοιριδίου χρησιμοποιείται συχνότερα ως συμπλήρωμα στις αντιδράσεις λύσης, καθώς περιέχει σημαντικά περισσότερο συμπλήρωμα από ό,τι στους ορούς άλλων ζώων.
Σε εκείνες τις περιπτώσεις που τα αντισώματα παρουσία συμπληρώματος καταστρέφουν τα ερυθροκύτταρα, η αιμοσφαιρίνη απελευθερώνεται από αυτά και το αντιδρών μίγμα από ένα θολό εναιώρημα ερυθροκυττάρων μετατρέπεται σε ένα διαφανές κόκκινο υγρό (λάκα αίματος).
Αυτή η αντίδραση ονομάζεται αιμόλυση. Στην εργαστηριακή πρακτική, χρησιμοποιείται ως δείκτης προσρόφησης συμπληρώματος στην αντίδραση στερέωσης του συμπληρώματος.
Σχετική πληροφορία:
Αναζήτηση ιστότοπου:
Σχέδιο διάλεξης: Θέμα και σύντομο ιστορικό της ανάπτυξης της μικροβιολογίας. Γενικές ιδιότητες των μικροοργανισμών και η θέση τους στη φύση. αντίδραση καθίζησης
Η κτηνιατρική μικροβιολογία και τα καθήκοντά της
mir.zavantag.com > Βιολογία > Διάλεξη
1 … 7 8 9 10 11 12 13 14 15
| ^
Η RA αναπτύχθηκε για πρώτη φορά από τον M. Gruber το 1896. Η ουσία της αντίδρασης είναι η αλληλεπίδραση του αντισώματος με το αντιγόνο, με αποτέλεσμα τη συγκόλληση (συγκόλληση) μικροβίων με το σχηματισμό νιφάδων, σβώλων ορατών με γυμνό μάτι. Η ΡΑ χρησιμοποιείται ευρέως για ορολογική διάγνωσηΠολλά βακτηριακές λοιμώξεις(βρουκέλλωση, αδένες, σαλμονέλωση, κολοβακίλλωση κ.λπ.) και για ορολογική ταυτοποίηση ειδών και τύπων απομονωμένων μικροοργανισμών. Υπάρχουν διάφορες μέθοδοι ρύθμισης της ΡΑ: δοκιμαστικός σωλήνας (ογκομετρικός), στάγδην (πλάκα), σταγόνα αίματος, αντίδραση δακτυλίου με γάλα, αντίδραση αιμοσυγκόλλησης και οι παραλλαγές της (RHGA, RNHA), δοκιμή αντισφαιρίνης Coombs κ.λπ. ^ – αντί για ορό λαμβάνεται αίμα. Ρύθμιση αντίδρασης πλάκας. Διάγνωση πυλώρωσης κοτόπουλων και γαλοπούλας, μυκοπλάσμωσης κοτόπουλων. Αντίδραση Coombsεπιτρέπει την ανίχνευση ατελών αντισωμάτων. Τα τελευταία είναι μονοσθενή και ως εκ τούτου αναστέλλουν το σχηματισμό συγκολλητικού. Η μέθοδος βασίζεται στη χρήση ορού αντισφαιρίνης, ο οποίος χρησιμεύει ως ενδιάμεσος για τη σύνδεση ατελών αντισωμάτων στερεωμένων σε σωματιδιακά αντιγόνα (ερυθροκύτταρα, βακτήρια). ^ - δεν ισχύει για ορολογικές και διαγνωστικά ακριβείς αντιδράσεις, ωστόσο, σας επιτρέπει να ανιχνεύσετε το αντιγόνο - αιμοσυγκολλητίνη και να δημιουργήσετε αιμοσυγκολλητικές ιδιότητες (ικανότητα συγκόλλησης ερυθρών αιμοσφαιρίων) σε ορισμένα βακτήρια και μυκόπλασμα. RNGA- τα τελευταία χρόνια κατέλαβε μια από τις κορυφαίες θέσεις στην οροδυναμική. Η ουσία του έγκειται στο γεγονός ότι τα πρωτεϊνικά μόρια του αντιγόνου του αντίστοιχου παθογόνου ή αντισώματος είναι προ-προσροφημένα στα ερυθροκύτταρα ενός προβάτου ή άλλου ζώου που έχει υποβληθεί σε θεραπεία με τανίνη. Στη συνέχεια, βάλτε την αντίδραση με ανάμειξη ευαισθητοποιημένων ερυθροκυττάρων με ορούς αίματος άρρωστων ζώων ή στη δεύτερη περίπτωση με το υπό μελέτη αντιγόνο. Παρουσία προδιαγραφής ορού. Αντισώματα σε αυτό το αντιγόνο (ή αντίστροφα) λαμβάνει χώρα συγκόλληση ερυθροκυττάρων - η αντίδραση είναι θετική. Προτάθηκε από τον R. Kraus το 1897. Η κατακρήμνιση είναι ένα φαινόμενο που παρατηρείται κατά την αλληλεπίδραση αντισωμάτων-κατακρημνισμάτων και αντιγόνου-ιζηματογόνου. Η ουσία της αντίδρασης είναι να αλλάξει η διασπορά των κολλοειδών του αντιγόνου και η κατακρήμνιση τους υπό την επίδραση ειδικών αντισωμάτων στον ανοσιακό ορό. Το RP μπορεί να τοποθετηθεί σε δοκιμαστικούς σωλήνες σε υγρό μέσο (αντίδραση κατακρήμνισης δακτυλίου) ή σε γέλη άγαρ (lamellar RDP). Η αντίδραση δακτυλίου-κατακρήμνισης προτάθηκε για πρώτη φορά από τον Ascoli (1910), και χρησιμοποιείται ευρέως για τη διάγνωση του άνθρακα. Κατά τη διεξαγωγή κτηνιατρική εμπειρογνωμοσύνηΤο RP είναι μια μέθοδος για τον προσδιορισμό της παραποίησης κρέατος, αλευριού και άλλων προϊόντων. Ιδιαίτερο νόημααυτή η αντίδραση έχει ιατροδικαστική εξέταση για τον προσδιορισμό του τύπου αίματος. Η χρήση της αντίδρασης καθίζησης σε ένα υγρό μέσο, ωστόσο, δεν επιτρέπει σε κάποιον να χαρακτηρίσει την ετερογένεια των αντιγόνων, δηλ. τον αριθμό και τη συγκέντρωση των αντιγόνων στο παρασκεύασμα. Αυτές οι πληροφορίες μπορούν να ληφθούν με την τοποθέτηση RP σε ένα πήκτωμα (συνήθως άγαρ). Έχοντας ταχύτητα κίνησης, διαφορετικά αντιγόνα του φαρμάκου διαχέονται διαφορετικά, σχηματίζοντας ιζήματα στο πάχος της διαφανούς γέλης στο σημείο όπου συναντώνται με το ομόλογο αντίσωμα. Ο εντοπισμός και η συγκέντρωση των γραμμών καθίζησης θα είναι χαρακτηριστική για κάθε συστατικό του αντιγονικού παρασκευάσματος, το οποίο χρησιμεύει ως κριτήριο για την ποιότητά του. Με την αραίωση του παρασκευάσματος, είναι δυνατός ο χαρακτηρισμός της σχετικής περιεκτικότητας σε αντιγόνα σε αυτό. Έχουν αναπτυχθεί διάφορες μέθοδοι για τον καθορισμό του RDP: η μέθοδος άμεσης μονοδιάστατης διάχυσης σύμφωνα με τον Uden (1946), η μέθοδος απλής ακτινικής ανοσοδιάχυσης σύμφωνα με τον Mancini (1963), η μέθοδος διπλής διάχυσης σε γέλη άγαρ σύμφωνα με τον Ouchterlony (1948). ), και τα λοιπά. ^
(PH) στο μοντέλο τοξίνες τετάνουκαι αντιτοξίνες. Η ουσία του RN έγκειται στην ικανότητα των ομόλογων αντισωμάτων του ανοσοποιητικού ορού να καταστέλλουν (εξουδετερώνουν) τις μολυσματικές ιδιότητες του αιτιολογικού παράγοντα της νόσου ή των μεταβολικών προϊόντων της. Για να διαπιστωθεί το αποτέλεσμα της αντίδρασης με ένα μείγμα αντιγόνου-αντισώματος μολύνει εργαστηριακά ζώα, CC, EC. Ένας θετικός δείκτης pH είναι η απουσία θανάτου συστημάτων βιολογικών δοκιμών. ΣΤΟ βακτηριακή πρακτικήΤο RN χρησιμοποιείται στη διάγνωση αναερόβιας εντεροτοξιναιμίας, αλλαντίασης κ.λπ. Το RN πραγματοποιείται για την ανίχνευση και την τιτλοδότηση τοξινών, τοξινών ή αντιτοξινών. Χρησιμοποιείται για την ανίχνευση αντισωμάτων στον ορό του αίματος και για την ανίχνευση αντιγόνου στο εξεταζόμενο υλικό (για βρουκέλλωση, αδένες, ρικέτσιωση, φυματίωση κ.λπ.). Αυτή η αντίδραση ανήκει στην έμμεση αντίδραση δύο συστημάτων. Διαθέτει 5 εξαρτήματα:
Τα στοιχεία 3,4,5 συνθέτουν το σύστημα δεικτών. Εάν το αντιγόνο και το αντίσωμα του εξεταζόμενου ορού αντιστοιχούν μεταξύ τους Ένα άλλο, δημιουργείται ένα ανοσοσύμπλεγμα αντιγόνου-αντισώματος, το οποίο δεσμεύει και εξάγει συμπλήρωμα από το περιβάλλον όπου λαμβάνει χώρα η αντίδραση. Ελλείψει αντισωμάτων που αντιστοιχούν στο αντιγόνο στον ορό δοκιμής, το καθορισμένο σύμπλεγμα δεν σχηματίζεται - το συμπλήρωμα παραμένει ελεύθερο. Δεδομένου ότι πρόκειται για αόρατες διαδικασίες, για να λυθεί το ερώτημα τι συνέβη με το συμπλήρωμα, συστατικά του αιμολυτικού συστήματος εισάγονται στον δοκιμαστικό σωλήνα ως δείκτης - αιμολυτικός ορός + ερυθροκύτταρα. Εάν το συμπλήρωμα είναι συνδεδεμένο στο βακτηριολογικό σύστημα, δεν θα συμβεί αιμόλυση των ερυθροκυττάρων, το αποτέλεσμα είναι θετικό - ο ορός περιέχει αντισώματα. Η παρουσία αιμόλυσης χρησιμεύει ως δείκτης της παρουσίας ελεύθερου συμπληρώματος στο βακτηριολογικό σύστημα, το οποίο είναι δυνατό μόνο με την απουσία αντισωμάτων στον ορό δοκιμής - το αποτέλεσμα είναι αρνητικό. Το RSC προχωρά υπό αυστηρές συνθήκες ποσοτικές αναλογίεςσυστατικά. Αυτό επιτυγχάνεται με την προκαταρκτική τους τιτλοδότηση (το συμπλήρωμα και ο αιμολυτικός ορός τιτλοδοτούνται την ημέρα της αντίδρασης· το μικροβιακό αντιγόνο - μία φορά μέσα σε 2-3 μήνες). Τιτλοδότηση είναι ο προσδιορισμός της μικρότερης ποσότητας του ενός ή του άλλου συστατικού στην αντίδραση για τη διεξαγωγή της αντίδρασης, μια περίσσεια ή ανεπάρκεια είναι μια παραμόρφωση των αποτελεσμάτων. Το RDSC είναι μια παραλλαγή του CSC, αλλά διαφέρει στο ότι η πρώτη φάση της αντίδρασης συνεχίζεται για 16-18 ώρες στο κρύο (40 C), γεγονός που αυξάνει την ευαισθησία λόγω της μεγαλύτερης απορρόφησης του συμπληρώματος από το σύμπλεγμα αντιγόνου-αντισώματος. |
7 8 9 10 11 12 13 14 15
Παρόμοιος:
| Ορισμός της «περιβαλλοντικής μικροβιολογίας» Γενική μικροβιολογία, μελέτη της σχέσης των μικροοργανισμών μεταξύ τους, με αντικείμενα του εξωτερικού περιβάλλοντος και του μακροοργανισμού |
Οι πιο γενικές και θεμελιώδεις έννοιες που αντικατοπτρίζουν το ουσιαστικό, ... Η φιλοσοφία είναι μια επιστήμη που μελετά τα περισσότερα γενικές προμήθειεςγια τον άνθρωπο, τη φύση και τη γνώση |
||
| Σχέδιο Το αντικείμενο και η μέθοδος του κλάδου "Διεθνείς Οικονομικές Σχέσεις" ... Το αντικείμενο και η μέθοδος του κλάδου «Διεθνείς Οικονομικές Σχέσεις» και η ιστορία της ανάπτυξης των Διεθνών Οικονομικών Σχέσεων |
Ερωτήσεις για τις εξετάσεις στο μάθημα "νομική ψυχολογία" Για φοιτητές ... Η έννοια της νομικής ψυχολογίας. Θέμα, καθήκοντα και ιστορία της ανάπτυξης της νομικής ψυχολογίας |
||
| 1. Το θέμα και η μέθοδος της ιστορίας των πολιτικών και νομικών δογμάτων > Θέμα ... Αυτό οφείλεται στο γεγονός ότι στο πλαίσιο αυτής της νομικής πειθαρχίας, διερευνάται και καλύπτεται ένα συγκεκριμένο θέμα - το ιστορικό της εμφάνισης του ... |
1.
Η ιστορία της φιλοσοφίας ως επιστήμης. Το θέμα και η μέθοδος του |
||
| Υπουργείο Παιδείας και Επιστημών της Δημοκρατίας του Καζακστάν Συμμαχία Φοιτητών… Αυτός ο κανονισμός για τον δημοκρατικό διαγωνισμό "Φοιτητής της Χρονιάς-2011" (εφεξής ο διαγωνισμός) καθορίζει τους στόχους και τους στόχους του, οι συμμετέχοντες ... |
Ορισμός των όρων «μικροβιολογία» και «μικροοργανισμός» … |
||
| Ερωτήσεις για την προετοιμασία για το τεστ στην πειθαρχία "conflictology" Η σύγκρουση ως επιστήμη: θέμα, στόχοι, στόχοι, τρέχοντα προβλήματα, σημασία παρόν στάδιοανάπτυξη της κοινωνίας |
Σχετικά με τον περιφερειακό διαγωνισμό βίντεο κλιπ "k-roly-k!" Γενικές προμήθειες Με τον παρόντα Κανονισμό καθορίζονται οι στόχοι, οι στόχοι, οι αρχές του Διαγωνισμού, η διαδικασία διοργάνωσης και διεξαγωγής του, η διαδικασία συμμετοχής και καθορισμός ... |
Προσθέστε ένα κουμπί στον ιστότοπό σας:
σχολικό υλικό
www.mir.zavantag.com
αντίδραση καθίζησης
Η καθίζηση και η συγκόλληση είναι αρκετά παρόμοιες αντιδράσεις που διαφέρουν κυρίως με βάση φυσικές ιδιότητεςΑΓ.
Στην πρώτη περίπτωση, παρουσιάζεται σε διαλυτή, στη δεύτερη - σε σωματιδιακές μορφές. Η RP βασίζεται στο σχηματισμό ενός ιζήματος κατά την αντίδραση AG-AT. Το RP είναι εξαιρετικά συγκεκριμένο και ευαίσθητο.
Συστατικά αντίδρασης:
1. διαλυτό αντιγόνο ή απτένιο (καταβυθογόνο).
2. ΑΤ - κατακρημνίσεις (ανοσοποιητικός ορός καθίζησης· λαμβάνεται με ανοσοποίηση κουνελιών με κατάλληλα διαλύματα αντιγόνων).
αντίδραση καθίζησης
ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου ή γέλη άγαρ.
Μέθοδοι ρύθμισης RP:
1) RP σε διαλύματα - r.
βροχόπτωση δακτυλίου?
2) RP σε gel.
Η αντίδραση κατακρήμνισης δακτυλίου τοποθετείται σε στενούς σωλήνες καθίζησης στους οποίους χύνονται οι οροί καθίζησης.
Στη συνέχεια χύνεται το διάλυμα του ιζηματογόνου. Με μια θετική αντίδραση, εμφανίζεται ένας θολός δακτύλιος κατακρήμνισης στη διεπιφάνεια των συστατικών. Ένα παράδειγμα αυτής της μεθόδου ρύθμισης RP είναι η αντίδραση θερμοκαθίζησης Ascoli, η οποία χρησιμοποιείται για την ανίχνευση ενός θερμοσταθερού απτενίου του παθογόνου άνθρακα, που εξάγεται από ζωικά όργανα. δέρμα και μαλλί με εκχύλιση κατά τη διάρκεια του βρασμού Μια από τις ποικιλίες RP στο τζελ (αντίδραση Ouchterlony) σας επιτρέπει να προσδιορίσετε την τοξικότητα βάκιλος της διφθερίτιδαςμε αντιτοξικό ορό.
Σε ένα πιάτο Petri με θρεπτικό μέσοΤοποθετήστε μια λωρίδα διηθητικού χαρτιού εμποτισμένη με αντιτοξικό ορό διφθερίτιδας και ενοφθαλμίστε με τις καλλιέργειες που μελετήθηκαν με τη μορφή κτυπημάτων κάθετα στη λωρίδα χαρτιού. Επωάστηκε στα 37 PS κατά τη διάρκεια της ημέρας. Παρουσία τοξικογόνου καλλιέργειας, σχηματίζονται γραμμές καθίζησης στο σημείο αλληλεπίδρασης της τοξίνης με την αντιτοξίνη.Η αντίδραση καταβύθισης στο πήκτωμα ονομάζεται ανοσοδιάχυση.
Συχνά με φόρεση σε γέλη - ανοσοηλεκτροφόρηση. Αρχή της μεθόδου: το αντιγόνο που μελετήθηκε κλασματοποιείται ηλεκτροφορητικά. Τα ληφθέντα κλάσματα αναλύονται με τη μέθοδο της διπλής διάχυσης χρησιμοποιώντας αντιορό.
Η αντίδραση Ascoli χρησιμοποιείται για τη διάγνωση του άνθρακα προκειμένου να ανιχνευθεί το αντιγόνο των βακίλων του άνθρακα. Για να δημιουργήσετε μια αντίδραση καθίζησης, πρέπει να έχετε: ιζηματογόνο - απτένιο Β.
Antrachis (εκχύλισμα ιστού), κατακρημνιστήριο (ορός καθίζησης άνθρακα) και φυσιολογικό ορό.
Παρασκευή θερμοκατακρημνίσματος.
1. Ρίξτε 10 ml φυσιολογικού ορού σε μια φιάλη που περιέχει 1 g θρυμματισμένου δέρματος ή 1 ml καλλιέργειας B. anthracis.
2. Τοποθετήστε τη φιάλη σε βραστό λουτρό για 30-45 λεπτά.
3. Διήθηση μέσω αμιάντου. Το διήθημα πρέπει να είναι εντελώς διαυγές. Για την αντίδραση καθίζησης, το διήθημα αραιώνεται 100 φορές ή περισσότερο.
Ρύθμιση της αντίδρασης κατακρήμνισης δακτυλίου.
1) 0,3 ml πλήρους ορού καθίζησης ή αραιωμένου 1:5, 1:10 χύνεται στον σωλήνα καθίζησης.
2) Ένα ιζηματογόνο επιστρώνεται προσεκτικά κατά μήκος του τοιχώματος του σωλήνα.Η αντίδραση θεωρείται θετική εάν σχηματιστεί ένας θολός δακτύλιος καταβυθισμένης πρωτεΐνης στο όριο δύο υγρών το αργότερο 5-15 λεπτά.
Κατά τη ρύθμιση της αντίδρασης καθίζησης, χρησιμοποιούνται οι ακόλουθοι έλεγχοι:
α) Αντιγόνο και αλατούχο διάλυμα.
β) συγκεκριμένο ορό και σωματικό.
γ) αντιγόνο και μη ειδικός ορός.
Δεν πρέπει να υπάρχει θολότητα σε όλους τους σωλήνες ελέγχου Για την αντίδραση κατακρήμνισης χρησιμοποιούνται ειδικοί σωλήνες καθίζησης ύψους 40-60 mm και διαμέτρου 4-5 mm, η καθίζηση σε στενούς σωλήνες εμφανίζεται πολύ πιο γρήγορα και εκδηλώνεται πιο καθαρά από ότι στους συνηθισμένους δοκιμαστικούς σωλήνες , πλένονται και στεγνώνουν καλά, ώστε το ποτήρι τους να είναι τελείως διάφανο και στεγνό.
Στην αντίδραση κατακρήμνισης, κατακρημνίζεται ένα ειδικό ανοσοσύμπλεγμα, που αποτελείται από ένα διαλυτό αντιγόνο (λύμα, εκχύλισμα, απτένιο) και ένα ειδικό αντίσωμα παρουσία ηλεκτρολυτών.
Ο θολός δακτύλιος ή το ίζημα που σχηματίζεται ως αποτέλεσμα αυτής της αντίδρασης ονομάζεται επισπεύδει. Αυτή η αντίδραση διαφέρει από την αντίδραση συγκόλλησης κυρίως στο μέγεθος των σωματιδίων του αντιγόνου.
Η αντίδραση κατακρήμνισης χρησιμοποιείται συνήθως για τον προσδιορισμό του αντιγόνου στη διάγνωση ενός αριθμού λοιμώξεων (άνθρακας, μηνιγγίτιδας κ.λπ.). στην ιατροδικαστική - για τον προσδιορισμό του είδους του αίματος, του σπέρματος κ.λπ. σε υγειονομικές και υγειονομικές μελέτες - κατά τη διαπίστωση παραποίησης προϊόντων. με τη βοήθειά του να προσδιορίσει τη φυλογενετική σχέση ζώων και φυτών. Για την αντίδραση χρειάζεστε:
1. Αντισώματα (ιζηματίνες) - άνοσος ορός με υψηλό τίτλο αντισωμάτων (όχι μικρότερο από 1:100.000). Ο τίτλος του ορού καθίζησης προσδιορίζεται από την υψηλότερη αραίωση του αντιγόνου με το οποίο αντιδρά. Ο ορός χρησιμοποιείται συνήθως αδιάλυτος ή αραιωμένος 1:5 -1:10.
2. Αντιγόνο - διαλυμένες ουσίες πρωτεϊνικής ή λιποειδούς πολυσακχαριδικής φύσης (πλήρη αντιγόνα και απτένια).
3. Ισοτονικό διάλυμα.
Οι κύριες μέθοδοι για τη διεξαγωγή της αντίδρασης καθίζησης είναι: αντίδραση κατακρήμνισης δακτυλίου και αντίδραση κατακρήμνισης σε άγαρ (γέλη).
Προσοχή! Όλα τα συστατικά που εμπλέκονται στην αντίδραση καθίζησης πρέπει να είναι απολύτως διαφανή.
Αντίδραση κατακρήμνισης δακτυλίου. 0,2 - 0,3 ml (5-6 σταγόνες) ορού προστίθενται στο σωλήνα καθίζησης χρησιμοποιώντας μια πιπέτα Pasteur (ο ορός δεν πρέπει να πέφτει στα τοιχώματα του σωλήνα). Το αντιγόνο τοποθετείται προσεκτικά στον ορό στον ίδιο όγκο, χύνοντάς τον με μια λεπτή πιπέτα Παστέρ κατά μήκος του τοιχώματος του δοκιμαστικού σωλήνα. Ο δοκιμαστικός σωλήνας διατηρείται σε κεκλιμένη θέση. Με την κατάλληλη στρώση, θα πρέπει να επιτευχθεί ένα σαφές όριο μεταξύ του ορού και του αντιγόνου. Προσεκτικά, για να μην αναμειχθεί το υγρό, τοποθετήστε τον δοκιμαστικό σωλήνα σε τρίποδο. Με ένα θετικό αποτέλεσμα της αντίδρασης, σχηματίζεται ένας θολός "δακτύλιος" στο όριο του αντιγόνου και του αντισώματος - ένα ίζημα.
Αντίδραση καθίζησης σε άγαρ(γέλη).Η ιδιαιτερότητα της αντίδρασης είναι ότι η αλληλεπίδραση του αντιγόνου και του αντισώματος συμβαίνει σε ένα πυκνό μέσο, δηλ. γέλη.Το προκύπτον ίζημα δίνει μια θολή ζώνη στο πάχος του μέσου. Η απουσία ζώνης υποδηλώνει αναντιστοιχία μεταξύ των συστατικών της αντίδρασης. Αυτή η αντίδραση χρησιμοποιείται ευρέως στη βιοϊατρική έρευνα, ιδιαίτερα στη μελέτη του σχηματισμού τοξινών στον αιτιολογικό παράγοντα της διφθερίτιδας.
Αντίδραση λύσης (ανοσολογική κυτταρόλυση)
ανοσολογική λύση- αυτή είναι η διάλυση των κυττάρων υπό την επίδραση αντισωμάτων με την υποχρεωτική συμμετοχή συμπληρώματος. Για την αντίδραση χρειάζεστε:
1. Αντιγόνομικρόβια, ερυθροκύτταρα ή άλλα κύτταρα.
2. Αντίσωμα(λυσίνη) - ανοσοποιητικός ορός, σπάνια ορός του ασθενούς. Ο βακτηριολυτικός ορός περιέχει αντισώματα που εμπλέκονται στη λύση των βακτηρίων. αιμολυτικές - αιμολυσίνες που συμβάλλουν στη λύση των ερυθρών αιμοσφαιρίων. για τη λύση των σπειροχαιτών χρειάζονται σπειροχαιτολιζίνες, κύτταρα - ιτολιζίνες κ.λπ.
3. Συμπλήρωμα.Τα περισσότερα συμπληρώνουν στον ορό των ινδικών χοιριδίων. Αυτός ο ορός (μείγμα από πολλά ζώα) χρησιμοποιείται συνήθως ως συμπλήρωμα.
4. Ισοτονικό διάλυμα.
αντίδραση καθίζησης.
| Όνομα παραμέτρου | Εννοια |
| Θέμα άρθρου: | αντίδραση καθίζησης. |
| Ρουμπρίκα (θεματική κατηγορία) | Εκπαίδευση |
Αντίδραση καθίζησης (RP) - ϶ᴛᴏ καθίζηση ενός διαλυτού αντιγόνου υπό τη δράση αντισωμάτων παρουσία ηλεκτρολύτη. Ορατό αποτέλεσμα αντίδρασης (φαινόμενο κατακρήμνισης) - θολότητα (σχηματισμός θολού δακτυλίου ή ιζήματος - επισπεύδει).
Το RP χρησιμοποιείται για την ανίχνευση ενός άγνωστου αντιγόνου σε έναν αριθμό από μεταδοτικές ασθένειες: με άνθρακα, τουλαραιμία, μηνιγγίτιδα, ευλογιά. Στην ιατροδικαστική, χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό του τύπου αίματος, σπέρματος. στην υγειονομική και υγειονομική έρευνα - για τη διαπίστωση παραποίησης προϊόντων διατροφής. Το RP είναι πολύ ευαίσθητο και μπορεί να ανιχνεύσει το αντιγόνο σε αραιώσεις 1:1.000.000 και 1:10.000.000.
Συστατικά της αντίδρασης καθίζησης.
1. Αντιγόνο (καταβυθογόνο) -είναι ένα αντιγόνο μοριακής φύσης, το οποίο βρίσκεται σε λεπτή διασπορά (διαλυτή) κατάσταση. Κατακρημνιογόνα - ϶ᴛᴏ διάφορα λύματα ή εκχυλίσματα ιστών, κ.λπ.
Φιλοξενείται στο ref.rf
Ένα ιζηματογόνο διαφέρει από ένα συγκολλητογόνο ως προς το μέγεθος των σωματιδίων του αντιγόνου. ΣυγκολλητογόνοΕχει μεγέθη κυττάρων(αυτά δεν είναι κατεστραμμένα ολόκληρα κύτταρα), αλλά οι διαστάσεις ιζηματογόνοανάλογη με μοριακό μέγεθος(πρόκειται για πρωτεΐνες και τα σύμπλοκά τους με υδατάνθρακες ή λιπίδια). Διάλυμα ιζηματογόνου διαφανής.
2. Αντισώματα (κατακρημνίσματα)βρίσκονται στον ανθρώπινο ορό ή σε ορούς ανοσοδιαγνωστικής καθίζησης που περιέχουν γνωστά αντισώματα.
3. Ηλεκτρολύτης- ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου.
Λήψη ιζηματογόνου.
Λαμβάνεται με άλεση του υλικού και εξαγωγή πρωτεϊνικών αντιγόνων από αυτό με βρασμό ή με άλλες μεθόδους.
Παραδείγματα ιζηματογόνων: λύματα ή εκχυλίσματα διαφόρων οργάνων και ιστών, ορός ξένου αίματος (ορός είναι λύση, πρώτα απ 'όλα, διάφορα πρωτεΐνες),διηθήματα καλλιεργειών ζωμού μικροβίων, εκχυλίσματα αλάτων μικροβίων, προϊόντα αυτολύσεως κ.λπ.
Λήψη ορών καθίζησης.
Λήφθηκε με υπερανοσοποίηση κουνελιών με κατάλληλα ιζηματογόνα. Τέτοιοι οροί περιέχουν αντισώματα σε εκείνα τα ιζηματογόνα με τα οποία ανοσοποιήθηκαν τα κουνέλια.
Παραδείγματα ορών καθίζησης: καθίζησης ορού άνθρακα(περιέχει αντισώματα κατά των αντιγόνων άνθρακα), κατακρημνιζόμενος αντιμηνιγγιτιδοκοκκικός ορός(περιέχει αντισώματα κατά των αντιγόνων του αιτιολογικού παράγοντα της μηνιγγίτιδας) κ.λπ.
Τίτλοςορός καθίζησης - ϶ᴛᴏ η υψηλότερη αραίωση του ιζηματογόνου, στην οποία ο ορός εξακολουθεί να δίνει μια αντίδραση καθίζησης.
Τρόποι ρύθμισης RP.
1. Αντίδραση κατακρήμνισης δακτυλίου -πραγματοποιείται σε ειδικούς σωλήνες καθίζησης (διάμετρος - 0,4-0,5 cm, ύψος - 7-8 cm). 0,2 - 0,3 ml ορού καθίζησης προστίθενται στον δοκιμαστικό σωλήνα και η ίδια ποσότητα ιζηματογόνου τοποθετείται προσεκτικά κατά μήκος του τοιχώματος με τη μακριά μύτη μιας πιπέτας Pasteur. Στη συνέχεια, προσεκτικά οριζόντια θέσηοι σωλήνες τοποθετούνται κάθετα.
Λογιστική για τα αποτελέσματα της αντίδρασηςπραγματοποιείται με την εμφάνιση ενός λευκού δακτυλίου στο όριο του αντιγόνου-αντισώματος. Με θετική αντίδραση παρατηρείται ένας τέτοιος δακτύλιος. Σε αυτή την περίπτωση, το αντιγόνο αντιστοιχεί στο αντίσωμα και λαμβάνει χώρα η δέσμευσή τους.
Αν βράσει και φιλτραριστεί υδατικά εκχυλίσματαόργανα και ιστούς, τότε η αντίδραση συνήθως ονομάζεται αντίδραση θερμική κατακρήμνιση (για παράδειγμα, στη διάγνωση του άνθρακα).
2. Αντίδραση καθίζησης γέλης -πραγματοποιείται σε τρυβλία Petri ή σε γυάλινες πλάκες, όπου τοποθετείται ένα στρώμα γέλης άγαρ. Όταν το πήκτωμα στερεοποιείται, κόβονται πηγάδια σε αυτό, μέσα στα οποία τοποθετούνται αντιγόνα ή αντισώματα ή και τα δύο. Διακρίνω 2 μέθοδοι RP σε gel:
μια μέθοδος απλή (ακτινική) ανοσοδιάχυση: ένα από τα συστατικά της ανοσολογικής αντίδρασης (αντιγόνο ή αντίσωμα) τοποθετείται στο φρεάτιο και το άλλο συστατικό αναμιγνύεται με άγαρ. με θετικό αποτέλεσμα (το αντιγόνο αντιστοιχεί σε ένα αντίσωμα) σχηματίζεται γύρω από το φρεάτιο δακτύλιος ιζήματος ;
β) μέθοδος διπλή ανοσοδιάχυση: τόσο το αντίσωμα όσο και το αντιγόνο τοποθετούνται σε χωριστά φρεάτια, διαχέονται στο πήκτωμα άγαρ το ένα προς το άλλο. με θετικό αποτέλεσμα όπου συναντώνται αντισώματα και αντιγόνα γραμμές υετού.
Ένα παράδειγμα RP σε gelείναι η αντίδραση διπλής ανοσοδιάχυσης Ouchterlony στη διάγνωση της διφθερίτιδας
Ανοσοηλεκτροφόρηση -είναι μια μέθοδος που συνδυάζει τη μέθοδο της ηλεκτροφόρησης και την αντίδραση καθίζησης. Ένα μείγμα αντιγόνων (για παράδειγμα, πρωτεΐνες ορού αίματος) διαχωρίζεται σε ένα πήκτωμα χρησιμοποιώντας ηλεκτροφόρηση. Στη συνέχεια, για να βρεθεί και να προσδιοριστεί η επιθυμητή πρωτεΐνη (άγνωστο αντιγόνο), χρησιμοποιείται ένας διαγνωστικός ορός καθίζησης, ο οποίος περιέχει αντισώματα έναντι αυτής της πρωτεΐνης (γνωστό αντίσωμα). Για να γίνει αυτό, εισάγεται διαγνωστικός ορός στην αυλάκωση παράλληλα με τις πρωτεΐνες. Εάν μεταξύ των πρωτεϊνών υπάρχει μία που αντιστοιχεί στο αντίσωμα στον ορό, τότε σχηματίζονται γύρω από αυτό γραμμές υετού.
αντίδραση καθίζησης. - έννοια και τύποι. Ταξινόμηση και χαρακτηριστικά της κατηγορίας "Αντίδραση κατακρήμνισης". 2017, 2018.
