तैयार माध्यम का रंग और पारदर्शिता। यूरेनियम की श्रृंखला प्रतिक्रिया और संवेदनाओं की श्रृंखला प्रतिक्रिया

119. पंडी और नॉन की प्रतिक्रियाएँ - अपील

पंडी प्रतिक्रिया को अंजाम देने के लिए एक अभिकर्मक के रूप में, एक सतह पर तैरनेवाला पारदर्शी तरल का उपयोग किया जाता है, जो 1000 मिलीलीटर आसुत जल के साथ 100 ग्राम तरल कार्बोलिक एसिड को जोर से हिलाकर प्राप्त किया जाता है। तलछट प्राप्त करने के लिए और साफ़ तरल(अभिकर्मक), इस मिश्रण को पहले 3-4 घंटे के लिए थर्मोस्टेट में रखा जाता है, और फिर 2-3 दिनों के लिए कमरे के तापमान पर रखा जाता है।

एक वॉच ग्लास या स्लाइड ग्लास को काले कागज पर रखा जाता है और उस पर अभिकर्मक की 2-3 बूंदें डाली जाती हैं, फिर 1 बूंद मस्तिष्कमेरु द्रव. यदि बूंद धुंधली हो जाती है या उसकी परिधि पर धागे जैसी गंदगी दिखाई देती है, तो प्रतिक्रिया सकारात्मक मानी जाती है।

नॉन-एपेल्ट प्रतिक्रिया को अंजाम देने के लिए, आपको साफ टेस्ट ट्यूब, एक संतृप्त अमोनियम सल्फेट समाधान, आसुत जल और गहरे कागज की आवश्यकता होती है। अमोनियम सल्फेट का संतृप्त घोल तैयार किया जाता है इस अनुसार: 0.5 ग्राम रासायनिक रूप से शुद्ध तटस्थ अमोनियम सल्फेट को 1000 मिलीलीटर फ्लास्क में रखा जाता है, फिर 95 डिग्री सेल्सियस तक गर्म किया गया 100 मिलीलीटर आसुत जल डाला जाता है, नमक पूरी तरह से घुलने तक हिलाया जाता है और कमरे के तापमान पर कई दिनों के लिए छोड़ दिया जाता है। 2-3 दिनों के बाद, घोल को फ़िल्टर किया जाता है और पीएच निर्धारित किया जाता है। प्रतिक्रिया तटस्थ होनी चाहिए.

परिणामी घोल का 0.5-1 मिली एक परखनली में डाला जाता है और उतनी ही मात्रा में मस्तिष्कमेरु द्रव को परखनली की दीवार के साथ सावधानी से डाला जाता है। 3 मिनट के बाद, परिणाम का मूल्यांकन करें। एक सफेद अंगूठी का दिखना एक सकारात्मक प्रतिक्रिया का संकेत देता है। फिर परखनली की सामग्री को हिलाया जाता है, आसुत जल वाली परखनली से तुलना करके मैलापन की डिग्री निर्धारित की जाती है। प्रतिक्रिया परिणामों का मूल्यांकन काले कागज की पृष्ठभूमि पर किया जाता है।

120. बोर्डेट - झांगौ प्रतिक्रिया

पता चलने पर एक मूल्यवान नैदानिक ​​परीक्षण जीर्ण सूजाकक्रोनिक से पीड़ित लोगों के बीच सूजन संबंधी बीमारियाँ मूत्र तंत्र. साहित्य के अनुसार जब सही उपयोगयह विधि गोनोरिया के 80% मामलों का पता लगाती है जिनका बैक्टीरियोस्कोपिक या बैक्टीरियोलॉजिकल तरीकों से पता नहीं लगाया गया था।

बोर्डेट-झांग प्रतिक्रिया किसी पिछली बीमारी के परिणामस्वरूप या निदान (उत्तेजना की इम्यूनोबायोलॉजिकल विधि) के साथ-साथ चिकित्सीय (बक्शीव के अनुसार महिलाओं में जननांग प्रणाली की पुरानी सूजन प्रक्रियाओं का उपचार) के लिए गोनोवाक्सिन के उपयोग के परिणामस्वरूप हो सकती है। उद्देश्य। इसलिए, इसे करने से पहले, सावधानीपूर्वक इतिहास एकत्र करना आवश्यक है,

जब दूध पिलाया जाता है, उपयोग किया जाता है तो प्रतिक्रिया झूठी सकारात्मक भी हो सकती है औषधीय प्रयोजनपाइरोजेनल.

नतीजतन, एक सकारात्मक बोर्डेट-जिआंगु प्रतिक्रिया उपस्थिति के निर्विवाद प्रमाण के रूप में काम नहीं करती है गोनोकोकल संक्रमण, एक नकारात्मक की तरह, सूजाक की अनुपस्थिति का प्रमाण नहीं हो सकता। तथापि सकारात्मक नतीजेलंबे समय तक डॉक्टर को शरीर में गोनोकोकल संक्रमण के स्रोत का पता लगाने पर ध्यान केंद्रित करना चाहिए।

1 मिलीलीटर में 3-4 बिलियन माइक्रोबियल निकायों वाले मारे गए गोनोकोकल कल्चर को एंटीजन के रूप में उपयोग किया जाता है। गोनोकोकल एंटीजन को फॉर्मेल्डिहाइड के घोल के साथ संरक्षित किया जाता है और 1-5 मिलीलीटर के ampoules में डाला जाता है। बंद शीशियाँ 6 महीने के लिए उपयुक्त होती हैं, खुली हुई शीशियों को 3-5 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर रेफ्रिजरेटर में एक बाँझ ट्यूब में 2-3 दिनों तक संग्रहीत किया जा सकता है।

बोर्डेट-जिआंगु पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया वासरमैन प्रतिक्रिया के समान ही की जाती है (संख्या 121 देखें)। गोनोकोकल एंटीजन को एम्पौल लेबल पर इंगित टिटर के अनुसार आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान से पतला किया जाता है। प्रतिक्रिया अक्सर 2.5 मिलीलीटर की मात्रा में की जाती है, इसलिए, प्रत्येक ट्यूब में 0.5 मिलीलीटर पतला 1:5 परीक्षण सीरम में 0.5 मिलीलीटर पतला एंटीजन जोड़ा जाता है। शेष 1.5 मिली हेमोलिटिक प्रणाली का 1 मिली और पूरक का 0.5 मिली है।

यदि इसे व्यक्त किया जाए तो प्रतिक्रिया सकारात्मक मानी जाती है बदलती डिग्रीपरीक्षण सीरम में हेमोलिसिस में देरी। नियंत्रण में (रक्त सीरम स्वस्थ लोग) पूर्ण हेमोलिसिस मनाया जाता है।

121. वासरमैन प्रतिक्रिया

सिफलिस के रोगियों के रक्त सीरम में रिएगिन और एंटीबॉडी होते हैं। रीगिन्स में कार्डियोलिपिन एंटीजन के साथ संयोजन करने का गुण होता है। ट्रेपोनेमा पैलिडम के विरुद्ध विशिष्ट एंटीबॉडी विशिष्ट एंटीजन के साथ संयोजित होते हैं। परिणामी एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स प्रतिक्रिया में जोड़े गए पूरक द्वारा अवशोषित होते हैं। संकेत एक हेमोलिटिक प्रणाली (भेड़ की लाल रक्त कोशिकाएं + हेमोलिटिक सीरम) शुरू करके किया जाता है।

आपको आवश्यक प्रतिक्रिया करने के लिए:

ए) आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान;

बी) अल्ट्रासोनिक ट्रेपोनेमल (रेफ्रिजरेटर में +4 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत) और कार्डियोलिपिन (कमरे के तापमान पर संग्रहीत) एंटीजन;

ग) पूरक, जो 5-10 स्वस्थ गिनी सूअरों के कार्डियक पंचर से प्राप्त रक्त सीरम है। बशर्ते इसे रेफ्रिजरेटर में 2 महीने तक संग्रहीत किया जा सकता है
4% घोल के साथ डिब्बाबंदी बोरिक एसिडऔर 5% सोडियम सल्फेट समाधान;

डी) हेमोलिसिन - हेमोलिटिक खरगोश रक्त सीरम विभिन्न टाइटर्स के साथ भेड़ एरिथ्रोसाइट्स के साथ प्रतिरक्षित (4 डिग्री सेल्सियस पर रेफ्रिजरेटर में संग्रहीत);

ई) भेड़ की लाल रक्त कोशिकाएं पंचर द्वारा प्राप्त की जाती हैं ग्रीवा शिरा. रक्त को कांच की गेंदों (मिश्रण के लिए) के साथ एक रोगाणुहीन जार में एकत्र किया जाता है, 15 मिनट तक हिलाया जाता है। फाइब्रिन के थक्कों को बाँझ धुंध के माध्यम से छानकर अलग किया जाता है। डिफाइब्रेटेड रक्त को रेफ्रिजरेटर में 5 दिनों तक संग्रहीत किया जा सकता है।

कभी-कभी भेड़ के रक्त के लंबे समय तक भंडारण की आवश्यकता होती है, और इसलिए इसे एक विशेष परिरक्षक (6 ग्राम ग्लूकोज, 4.5 ग्राम बोरिक एसिड, 100 मिलीलीटर आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान) के साथ संरक्षित किया जाता है, जिसे पानी के स्नान में उबाला जाता है। 3 दिनों तक प्रतिदिन 20 मिनट 100 मिलीलीटर डिफाइब्रिनेटेड भेड़ के रक्त के लिए 15 मिलीलीटर परिरक्षक की आवश्यकता होती है। इस तरह से संरक्षित डिफाइब्रेटेड रक्त को रेफ्रिजरेटर में संग्रहित किया जाता है।

मुख्य प्रयोग कई चरणों से पहले होता है।

से एक मरीज उलनार शिरा 5-10 मिलीलीटर रक्त लें और सीरम को संसाधित करें। बच्चों में, टेम्पोरल नस या एड़ी में चीरा लगाकर रक्त लिया जा सकता है। पंचर बाँझ उपकरणों, एक सिरिंज और एक सुई से बनाया जाता है।
आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल से पहले से धोएं।

शोध के लिए रक्त खाली पेट लिया जाता है; अध्ययन से 3-4 दिन पहले, रोगी को सेवन करने से मना किया जाता है नशीली दवाएं, डिजिटलिस तैयारी, शराब लें।

अध्ययन ऐसे रोगियों पर नहीं किया जाना चाहिए उच्च तापमानशरीर, चोट लगने के बाद, सर्जरी, एनेस्थीसिया, हालिया संक्रामक रोग, मासिक धर्म के दौरान महिलाओं में, गर्भवती महिलाओं में (गर्भावस्था के आखिरी 10 दिनों में), प्रसव में महिलाएं (जन्म के बाद पहले 10 दिनों में), साथ ही नवजात शिशुओं में ( जीवन के पहले 10 दिनों में)।

परिणामी रक्त को एक बाँझ ट्यूब में 15-30 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर थर्मोस्टेट में रखा जाता है। परिणामी थक्के को एक बाँझ कांच की छड़ से टेस्ट ट्यूब की दीवारों से अलग किया जाता है और एक दिन के लिए रेफ्रिजरेटर में रखा जाता है। अलग किए गए पारदर्शी सीरम (थक्के के ऊपर) को रबर बल्ब का उपयोग करके पाश्चर पिपेट से चूसा जाता है या सावधानीपूर्वक किसी अन्य बाँझ ट्यूब में डाला जाता है और 56 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 30 मिनट के लिए पानी के स्नान में निष्क्रिय कर दिया जाता है। प्रयोग के लिए इस प्रकार तैयार किया गया सीरम रेफ्रिजरेटर में 5-6 दिनों तक संग्रहीत किया जा सकता है।

एंटीजन को लेबल पर दर्शाई गई विधि और टिटर के अनुसार पतला किया जाता है।

एक हेमोलिटिक प्रणाली तैयार करें. ऐसा करने के लिए, प्रतिक्रिया के लिए आवश्यक मात्रा में डिफाइब्रिनेटेड भेड़ के रक्त या लाल रक्त कोशिकाओं को सेंट्रीफ्यूज किया जाता है, प्लाज्मा को सावधानीपूर्वक अलग किया जाता है, और तलछट को 5-6 मात्रा में आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान से धोया जाता है जब तक कि सतह पर तैरनेवाला तरल पूरी तरह से रंगहीन न हो जाए। तलछट से, ट्रिपल टिटर पर एक आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान में लाल रक्त कोशिकाओं का 3% निलंबन तैयार किया जाता है।

हेमोलिटिक सीरम का एक समाधान और भेड़ एरिथ्रोसाइट्स का एक निलंबन जल्दी से मिलाया जाता है और 30 मिनट के लिए थर्मोस्टेट में रखा जाता है।

सूखा पूरक 1:10 के अनुपात में आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान से पतला होता है, सामान्य निष्क्रिय मानव सीरम - 1:5।

पूरक को 3 पंक्तियों में 10 ट्यूबों के रैक में रखे गए 30 ट्यूबों में शीर्षक दिया जाता है। दो पंक्तियों में इसे दो एंटीजन की उपस्थिति में, तीसरे में - आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान के साथ शीर्षक दिया जाता है। पांच ट्यूब नियंत्रण ट्यूब हैं: दो संबंधित दो एंटीजन के लिए और एक-एक हेमोटॉक्सिसिटी के लिए पूरक, हेमोलिटिक सीरम और आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान की निगरानी के लिए; उन्हें इस प्रकार भरें:

टेस्ट ट्यूबों को 45 मिनट के लिए थर्मोस्टेट में रखा जाता है, जिसके बाद उनकी जांच की जाती है। किसी भी टेस्ट ट्यूब में हेमोलिसिस नहीं होना चाहिए।

1:10 के तनुकरण पर पूरक को रैक की पहली पंक्ति की 10 ट्यूबों में खुराक में डाला जाता है: 0.1, 0.16, 0.2,0.24, 0.3, 0.36,0.4,0.44, 0.5 और 0.55 मिली। प्रत्येक परखनली की सामग्री में 1 मिलीलीटर तक आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल डालें और अच्छी तरह मिलाएँ। प्रत्येक टेस्ट ट्यूब से मिश्रण का 0.25 मिलीलीटर दूसरी और तीसरी पंक्ति की संबंधित टेस्ट ट्यूब में स्थानांतरित किया जाता है। टेस्ट ट्यूब वाले रैक को हिलाया जाता है, टेस्ट ट्यूब की तीसरी पंक्ति में 0.5 मिलीलीटर हेमोलिटिक सिस्टम डाला जाता है, फिर से हिलाया जाता है और 45 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर थर्मोस्टेट में रखा जाता है। सामान्य मानव रक्त सीरम, 1:5 के अनुपात में आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान से पतला, सभी 30 टेस्ट ट्यूबों में डाला जाता है, प्रत्येक 0.25 मिलीलीटर।

एंटीजन I (ट्रेपोनेमल अल्ट्रासोनिक), आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान के साथ टिटर द्वारा पतला, 0.25 मिलीलीटर पहली पंक्ति के 10 टेस्ट ट्यूबों में जोड़ा जाता है; एंटीजन II (कार्डिओलिपिन समान तनुकरण और समान मात्रा में) - दूसरी पंक्ति की 10 ट्यूबों में। तीसरी पंक्ति की 10 परखनलियों में 0.25 मिली आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल डाला जाता है, शेष 0.25 मिली बाहर डाल दिया जाता है। थर्मोस्टेट में ऊष्मायन के बाद, 0.5 मिलीलीटर हेमोलिटिक प्रणाली को 20 ट्यूबों (पहली और दूसरी पंक्ति) में जोड़ा जाता है, हिलाया जाता है और 45 मिनट के लिए थर्मोस्टेट में फिर से रखा जाता है।

45 मिनट के बाद, पूरक की कार्यशील खुराक निर्धारित की जाती है, अर्थात इसका अनुमापांक 15-20% की वृद्धि के साथ निर्धारित किया जाता है।

इसे पूरक अनुमापांक माना जाता है न्यूनतम राशि, जिससे एंटीजन और सामान्य मानव रक्त सीरम की उपस्थिति में भेड़ की लाल रक्त कोशिकाओं का पूर्ण हेमोलिसिस होता है।

मुख्य प्रयोग यह है कि प्रत्येक परीक्षण निष्क्रिय सीरम को आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान के साथ 1: 5 के अनुपात में पतला करके 0.25 मिलीलीटर तीन परीक्षण ट्यूबों में डाला जाता है। पहली टेस्ट ट्यूब में 0.25 मिली एंटीजन I, दूसरी में 0.25 मिली एंटीजन II और तीसरी (नियंत्रण) में 0.25 मिली आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल मिलाएं। सभी परीक्षण ट्यूबों में कार्यशील खुराक तक पतला 0.25 मिलीलीटर पूरक भी मिलाया जाता है। सभी टेस्ट ट्यूबों को 45 मिनट के लिए थर्मोस्टेट में रखा जाता है, फिर उनमें 0.5 मिली हेमोलिटिक सिस्टम मिलाया जाता है, हिलाया जाता है और 45-50 मिनट के लिए थर्मोस्टेट में रखा जाता है। प्रयोग का परिणाम नियंत्रण ट्यूबों में पूर्ण हेमोलिसिस की शुरुआत के बाद दर्ज किया जाता है।

प्रतिक्रिया के परिणामों का मूल्यांकन प्लस के रूप में किया जाता है: हेमोलिसिस की पूर्ण देरी (दृढ़ता से सकारात्मक प्रतिक्रिया) ++++, महत्वपूर्ण (सकारात्मक प्रतिक्रिया) +++, आंशिक (कमजोर सकारात्मक प्रतिक्रिया) ++, महत्वहीन (संदिग्ध प्रतिक्रिया) - ±, हेमोलिसिस में कोई देरी नहीं (नकारात्मक प्रतिक्रिया) -।

पर मात्रात्मक पद्धतिवासरमैन प्रतिक्रिया को अंजाम देने के लिए, आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान के साथ पतला सीरम की घटती मात्रा के साथ प्रयोग किया जाता है।

वासरमैन प्रतिक्रिया के मुख्य प्रयोग की योजना

वासरमैन प्रतिक्रिया के नैदानिक ​​महत्व को कम करके आंकना मुश्किल है। यह उपचार से पहले सभी रोगियों पर किया जाता है, लेकिन विशेष अर्थउसके पास है अव्यक्त उपदंश, हराना आंतरिक अंगऔर तंत्रिका तंत्र.

वासरमैन प्रतिक्रिया के परिणाम प्रदान किए गए उपचार की गुणवत्ता की विशेषता बताते हैं, जो एक निश्चित अवधि के भीतर इलाज किए गए रोगियों को रजिस्टर से हटाने का आधार देता है।

प्राथमिक सिफलिस में, वासरमैन प्रतिक्रिया आमतौर पर संक्रमण के क्षण से छठे सप्ताह के अंत में सकारात्मक होती है; माध्यमिक ताज़ा सिफलिस के साथ यह लगभग 100% मामलों में सकारात्मक है, माध्यमिक आवर्तक सिफलिस के साथ - 98-100% में; तृतीयक सक्रिय - 85% में; तृतीयक छिपा हुआ - 60% मामलों में।

वासरमैन प्रतिक्रिया सभी गर्भवती महिलाओं, दैहिक, तंत्रिका, मानसिक और रोगियों के लिए दो बार की जाती है चर्म रोग, साथ ही साथ निर्धारित आबादी भी। साथ ही, सकारात्मक और कमजोर सकारात्मक प्रतिक्रिया परिणामों को गंभीरता से लिया जाना चाहिए, क्योंकि वे गर्भावस्था के अंत में और प्रसव के बाद हाइपरथायरायडिज्म, मलेरिया, कुष्ठ रोग, क्षय के साथ हो सकते हैं। मैलिग्नैंट ट्यूमर, संक्रामक रोग, कोलेजनोसिस, आदि। इसलिए, यदि वहाँ है नैदानिक ​​अभिव्यक्तियाँसबसे पहले बैक्टीरियोस्कोपी डेटा के साथ-साथ उनकी बीमारियों को भी ध्यान में रखा जाना चाहिए।

साथ ही, ऐसे कारक भी हैं जो वासरमैन प्रतिक्रिया के प्राप्त परिणामों की वास्तविक प्रकृति को विकृत कर सकते हैं: खराब धुले प्रयोगशाला कांच के बर्तन (टेस्ट ट्यूब में एसिड और क्षार के निशान), अनुसंधान के लिए लिए गए रक्त का दीर्घकालिक भंडारण, खपत परीक्षण, मासिक धर्म आदि से पहले रोगियों द्वारा वसा और शराब।

सभी मामलों में, रोगी की व्यापक जांच करने की सलाह दी जाती है, जिसमें वासरमैन प्रतिक्रिया के अलावा, आरआईबीटी (122, 123, 124 देखें) आदि भी शामिल है।

122. सैक्स-विटेब्स्की प्रतिक्रिया (साइटोकोलिक)

सिफलिस का पता लगाने के लिए उपयोग किया जाता है। यह रोगी के रक्त सीरम को एंटीजन के साथ मिलाने पर अवक्षेप के निर्माण पर आधारित है।

एंटीजन तैयार करने के लिए, कई गोजातीय हृदयों की मांसपेशियों को कण्डरा, प्रावरणी और वसा से साफ किया जाता है, एक मांस की चक्की में पीसा जाता है और दैनिक 20 मिनट के झटकों के साथ 15 दिनों के लिए 96% एथिल अल्कोहल की 5 गुना मात्रा के साथ निकाला जाता है। परिणामी अर्क को वैक्यूम के तहत एक चीनी मिट्टी के कप में पानी के स्नान में वाष्पित किया जाता है। गर्म 96% एथिल अल्कोहल को मांसपेशियों के निष्कर्षण के लिए ली गई मात्रा के 1/3 की मात्रा में अवशेष (लिपोइड का एक चमकीला पीला द्रव्यमान) में जोड़ा जाता है।

अर्क को 3 दिनों के लिए कमरे के तापमान पर रखा जाता है, फ़िल्टर किया जाता है ठंडा पानी) और सकारात्मक और नकारात्मक सीरा के साथ अनुमापन के परिणामों के आधार पर, क्रिस्टलीय कोलेस्ट्रॉल का 0.3-0.6% समाधान जोड़ें। साइटोकॉलिक एंटीजन को कमरे के तापमान पर सीलबंद एम्पौल या स्टॉपर वाली ट्यूबों में स्टोर करें।

कार्यप्रणाली। 1 मिली साइटोकोलिक एंटीजन को तुरंत 2 मिली आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल में मिलाया जाता है और कमरे के तापमान पर 15 मिनट के लिए छोड़ दिया जाता है जब तक कि गुच्छे दिखाई न दें। एक टेस्ट ट्यूब में 0.2 मिली निष्क्रिय सीरम में 0.1 मिली एंटीजेनिक इमल्शन मिलाएं, 3 मिनट तक हिलाएं और 30 मिनट के लिए छोड़ दें, जिसके बाद 1 मिली आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल मिलाएं।

एंटीजन के साथ नियंत्रण ट्यूब में 1.2 मिली आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल और 0.1 मिली एंटीजन इमल्शन मिलाएं। कंट्रोल में कोई परत नहीं होनी चाहिए. प्रतिक्रिया के परिणामों को दृष्टिगत रूप से या एक आवर्धक कांच का उपयोग करके ध्यान में रखा जाता है और प्लस (++++, +++, ++) के साथ गिरने वाले गुच्छे की संख्या के आधार पर निर्दिष्ट किया जाता है। यदि प्रतिक्रिया नकारात्मक है, तो कोई गुच्छे नहीं हैं, लेकिन ट्यूब की सामग्री थोड़ी ओपलेसेंट हो सकती है।

1931 में, पी. सैक्स और ई. विटेब्स्की ने इस तकनीक में एक संशोधन का प्रस्ताव रखा, जिसमें एंटीजन को दो चरणों में पतला करना शामिल है: एंटीजन के 1 भाग में आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान के 2 भाग जोड़ें, 5 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर रखें और आइसोटोनिक घोल सोडियम क्लोराइड के अन्य 9 भाग मिलाएं। एंटीजन को 2% सोडियम क्लोराइड समाधान के साथ पतला करने की भी सिफारिश की जाती है, जो लेखकों के अनुसार, प्रतिक्रिया की संवेदनशीलता को बढ़ाता है। सीरम तनुकरण के साथ प्रतिक्रिया का मात्रात्मक संशोधन भी संभव है (1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64, आदि)।

प्रतिक्रिया काफी संवेदनशील होती है, इसमें थोड़ा समय (लगभग 1 घंटा) लगता है और इसके परिणाम तुरंत सामने आते हैं।

123. ट्रेपोनेमा पैलिडम (आरआईबीटी) की स्थिरीकरण प्रतिक्रिया

एक प्रतिक्रिया का उपयोग करके, सिफलिस वाले रोगियों के रक्त सीरम में ट्रेपोनिमा पैलिडम को स्थिर करने वाले एंटीबॉडी और पूरक का पता लगाया जाता है।

प्राथमिक सिफलिस में, आरआईबीटी मुख्य रूप से नकारात्मक है, माध्यमिक में - 92-96% मामलों में सकारात्मक, तृतीयक में - 92-100% में, तंत्रिका तंत्र और जन्मजात सिफलिस में - 86-89% मामलों में।

सारकॉइड, एरिथेमेटोसिस, मधुमेह, घातक ट्यूमर में आरआईबीटी के सकारात्मक परिणाम देखे गए। वायरल हेपेटाइटिस, लीवर सिरोसिस, मलेरिया, कुष्ठ रोग, संक्रामक मोनोन्यूक्लिओसिस, गर्म देशों के कुछ रोग (पिंटा, यॉ, आदि)।

एंटीजन, सिफलिस से संक्रमित खरगोश के अंडकोष से लिया गया पीला ट्रेपोनिमा का एक निलंबन है, जो एक आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान (प्रति दृश्य क्षेत्र में 50 जानवरों) में पीला ट्रेपोनिमा के 0.75-1 मिलीलीटर निलंबन को अंडकोष में पेश किया जाता है।

पशु के संक्रमित होने के 6-8 दिन बाद अंडकोष से सामग्री लेनी चाहिए। एंटीजन लेने से पहले, खरगोश को रक्तस्राव (कार्डियक पंचर या) से मार दिया जाता है ग्रीवा धमनी). वृषण ऊतक को कुचल दिया जाता है और एक स्वस्थ खरगोश के रक्त सीरम से भर दिया जाता है, आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान के साथ पतला किया जाता है, -30 मिनट के लिए हिलाया जाता है, और फिर 10 मिनट (1000 आरपीएम) के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। सतह पर तैरने वाले तरल पदार्थ की सूक्ष्म जांच की जाती है। प्रत्येक दृश्य क्षेत्र में कम से कम 10-15 ट्रेपोनेमा पैलिडम होने चाहिए।

पूरक तैयार है सामान्य तरीके सेगिनी सूअरों के खून से.

आरआईबीटी करने के लिए आपको चाहिए: 0.2% जिलेटिन घोल का 1.2 मिली, 5% एल्ब्यूमिन घोल का 2.8 मिली, ट्रेपोनेमा पैलिडम सस्पेंशन का 1.6 मिली; पर्यावरण का पीएच 7.2 है। इस मिश्रण में 0.15 मिली कॉम्प्लीमेंट (कॉकटेल) मिलाया जाता है। समानांतर में, दो परीक्षण किए जाते हैं: सक्रिय (प्रयोग) और प्रतिक्रियाशील (नियंत्रण) पूरक के साथ।

मेलेंजर्स को "1" निशान तक परीक्षण सीरम से भर दिया जाता है, और फिर "2" निशान तक कॉकटेल से भर दिया जाता है और एक बाँझ रबर की अंगूठी के साथ बंद कर दिया जाता है।

साथ ही, एक समान प्रतिक्रिया स्पष्ट रूप से सकारात्मक और स्पष्ट रूप से नकारात्मक सीरा के साथ की जाती है।

मेलेंजर्स को क्रमांकित किया जाता है और 18-20 घंटों के लिए 35 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर थर्मोस्टेट में रखा जाता है, जिसके बाद उन्हें थर्मोस्टेट से जोड़े (प्रयोग - नियंत्रण) में हटा दिया जाता है और सामग्री को उपयुक्त परीक्षण ट्यूबों में डाल दिया जाता है। एक ग्लास स्लाइड पर 2 बूंदें डाली जाती हैं: बाईं ओर प्रयोग है, दाईं ओर नियंत्रण है, एक कवर ग्लास के साथ कवर करें और दृश्य के एक अंधेरे क्षेत्र में माइक्रोस्कोप रखें।

सबसे पहले, नियंत्रण परिणामों का अध्ययन किया जाता है: मोबाइल और स्थिर ट्रेपोनेमा पैलिडम का प्रतिशत निर्धारित किया जाता है। गणना सूत्र: एक्स = (ए - बी)/ए * 100, जहां ए नियंत्रण में मोबाइल पैलिडम ट्रेपोनेमा की संख्या है; बी - प्रयोग में मोबाइल ट्रेपोनेम्स पैलिडम की संख्या।

उदाहरण: (24 - 19) / 24 * 100 = 21%।

आरआईबीटी परिणाम मूल्यांकन: 20% से नीचे - नकारात्मक। 21-30% - संदिग्ध, 31-50% - कमजोर रूप से सकारात्मक, 50% से अधिक - सकारात्मक।

एंटीजन, पूरक और सहायक, संकेतक या हेमोलिटिक प्रणाली - हेमोलिटिक सीरम और भेड़ एरिथ्रोसाइट्स।

यदि पहले सिस्टम में एक विशिष्ट एंटीजन + एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स बनता है, तो पूरक सोख लिया जाता है (इस कॉम्प्लेक्स के साथ जुड़ जाता है) और दूसरे सिस्टम में हेमोलिसिस नहीं होता है।

प्रतिक्रिया के लिए आवश्यक है:

1. परीक्षण सीरम, जो रोगी की उलनार नस को पंचर करके लिए गए रक्त से प्राप्त किया जाता है। रक्त का थक्का जमने के बाद, सीरम को एक अलग ट्यूब में डाला जाता है और पानी के स्नान में 56 डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट के लिए निष्क्रिय कर दिया जाता है।

2. एंटीजन - मारे गए गोनोकोकी का निलंबन।

3. भेड़ की लाल रक्त कोशिकाएं बाँझ रूप से एकत्र किए गए डिफाइब्रिनेटेड रक्त से प्राप्त की जाती हैं। उन्हें खारे घोल के नए भागों से 3 बार सेंट्रीफ्यूज करके धोया जाता है। प्रतिक्रिया में लाल रक्त कोशिकाओं के 3% निलंबन का उपयोग किया जाता है।

4. खरगोशों को भेड़ की लाल रक्त कोशिकाओं से प्रतिरक्षित करके हेमोलिटिक सीरम पहले से तैयार किया जाता है। उपयोग से पहले, सीरम का शीर्षक दिया जाता है।

5. पूरक - ताजा गिनी पिग सीरम। गिनी पिग के दिल से सिरिंज की मदद से खून चूसा जाता है और थक्का जमने के बाद सीरम को अलग कर लिया जाता है। प्रयोग से पहले, पूरक की कार्यशील खुराक का शीर्षक दिया जाता है। ऐसा करने के लिए, पूरक 1:10 का मूल तनुकरण लें और इसे 0.1 से 0.5 तक परीक्षण ट्यूबों में डालें, जिसके बाद प्रत्येक परीक्षण ट्यूब में मात्रा को खारे घोल के साथ 1.5 मिलीलीटर तक समायोजित किया जाता है।

उसी समय, एक हेमोलिटिक प्रणाली तैयार की जाती है - ट्रिपल टिटर, हेमोलिटिक सीरम + भेड़ एरिथ्रोसाइट्स के 3% निलंबन में पतला। दोनों सामग्रियां अलग-अलग मात्रा में हैं और 30 मिनट के लिए थर्मोस्टेट में रखी जाती हैं (मिश्रण का संवेदीकरण), जिसके बाद मिश्रण को 1 मिलीलीटर टेस्ट ट्यूब में डाला जाता है और 30 मिनट के लिए थर्मोस्टेट में रखा जाता है। 2 टेस्ट ट्यूब नियंत्रण के रूप में कार्य करते हैं:

1. हेमोलिटिक प्रणाली का 1 मिली + शारीरिक समाधान का 1.5 मिली;

2. 0.5 मिली पूरक 1:10 + 0.5 मिली लाल रक्त कोशिका निलंबन + 1.5 मिली शारीरिक समाधान।

पूरक अनुमापांक वह न्यूनतम मात्रा है जिस पर हेमोलिसिस अभी भी होता है। प्रतिक्रिया स्थापित करने के लिए, पूरक की एक कार्यशील खुराक लें, अनुमापांक के मुकाबले 20-25% की वृद्धि, यानी, आमतौर पर पूरक की मात्रा जो हेमोलिसिस के साथ अंतिम परीक्षण ट्यूब में मौजूद होती है। पूरक की खुराक बढ़ाना आवश्यक है क्योंकि प्रतिक्रिया में पूरक की गतिविधि प्रतिक्रिया के अन्य अवयवों (एंटीजन, सीरम) द्वारा कुछ हद तक दबाई जा सकती है।
43) आरएसके वासरमैन

एंटीबॉडी का पता लगाने के साथ-साथ प्रभावशीलता निर्धारित करने के लिए सिफलिस के निदान के लिए रखा गया विशिष्ट चिकित्सा. यह बोर्डेट-गेंगौ पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया के सिद्धांत पर आधारित है। वासरमैन प्रतिक्रिया के बीच एक महत्वपूर्ण अंतर एंटीजन की गैर-विशिष्टता है: लिपोइड अर्क से सामान्य अंगजानवरों

वासरमैन प्रतिक्रिया करने के लिए, रोगी का सीरम, डायग्नोस्टिक्स, क्रॉस-रिएक्टिंग एंटीजन नंबर 1, नंबर 2, पूरक, हेमोलिटिक सीरम, भेड़ की लाल रक्त कोशिकाएं होना आवश्यक है। खारा.

डायग्नोस्टिकम नंबर 1 - विशिष्ट, ट्रेपोनेमल।

डायग्नोस्टिकम नंबर 2 - निरर्थक, कार्डियोलिपिन एंटीजन, जो लिपोइड्स की निरंतर रासायनिक संरचना के साथ अत्यधिक शुद्ध गोजातीय हृदय अर्क हैं। लिपोइड्स, द्वारा रासायनिक संरचनाट्रेपोनिमा पैलिडम के लिपोइड के करीब हैं, इसलिए, हालांकि वे विशिष्ट नहीं हैं, वे स्पाइरोकीट के खिलाफ एंटीबॉडी को ठीक करते हैं।

ये एंटीजन केंद्रीय रूप से उत्पादित होते हैं और लेबल पर संकेतित अनुमापांक के अनुसार प्रतिक्रिया में पतला करके उपयोग किए जाते हैं।

मुख्य प्रयोग के साथ-साथ, 2 नियंत्रण रखे गए हैं: स्पष्ट रूप से नकारात्मक और स्पष्ट रूप से सकारात्मक सीरा के साथ।

मुख्य प्रयोग की स्थापना

सबसे पहले, निष्क्रिय और पतला 1:5 टेस्ट सीरम को 4 टेस्ट ट्यूबों में डाला जाता है। फिर एंटीजन को 2 टेस्ट ट्यूब (नंबर 1, नंबर 2) में डाला जाता है, और फिजियोलॉजिकल सॉल्यूशन को तीसरी टेस्ट ट्यूब में डाला जाता है। इसके बाद, सभी ट्यूबों में पूरक की एक कार्यशील खुराक डाली जाती है। सामग्री को मिलाने के बाद, टेस्ट ट्यूब वाले रैक को 30 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर थर्मोस्टेट में रखा जाता है। थर्मोस्टेट में रखने के बाद, हेमोलिटिक सिस्टम को सभी टेस्ट ट्यूबों में जोड़ा जाता है। ट्यूबों को फिर से 2 घंटे के लिए थर्मोस्टेट में रखा जाता है और फिर कमरे के तापमान पर छोड़ दिया जाता है। अगले दिन, परिणाम नोट किया जाता है। प्रतिक्रिया की तीव्रता की डिग्री का आकलन किया जाता है, चार प्लस (++++), तीन (+++), दो (++) और एक (+) - तीव्रता के आधार पर तरल के रंग और तल पर लाल रक्त कोशिका तलछट के आकार का। पूर्ण हेमोलिसिस को (-) माइनस द्वारा दर्शाया जाता है। यदि विभिन्न एंटीजन के परिणामों के बीच तीव्र विसंगति है, तो प्रयोग रक्त के एक नए हिस्से के साथ दोहराया जाता है।
44) आरआईटी-आर। ट्रेपोनेमा पैलिडम का स्थिरीकरण।

इस प्रतिक्रिया का उपयोग इस प्रकार किया जाता है नैदानिक ​​उद्देश्य, और मान्यता के लिए गलत सकारात्मक परिणाममानक सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाएं, विशेष रूप से अव्यक्त सिफलिस के लिए।

आरआईबीटी यह है कि सिफलिस और सक्रिय पूरक वाले रोगियों के सीरम में इमोबिलिसिन की उपस्थिति में, ट्रेपोनेमा पैलिडम अपनी गतिशीलता खो देते हैं।

आरआईबीटी को जीवाणुरहित बक्सों में रखा जाता है। प्रतिक्रिया में परीक्षण सीरम, पूरक और एंटीजन शामिल हैं।

आरआईबीटी में, एंटीजन खरगोश के अंडकोष से पीले ट्रेपोनिमा का निलंबन है प्रारंभिक तिथियाँ(संक्रमण के 7-8 दिन बाद) सिफिलिटिक ऑर्काइटिस। एक विशेष निलंबन माध्यम कम से कम एक दिन के लिए ट्रेपोनेमा पैलिडम की व्यवहार्यता को बरकरार रखता है। कॉम्प्लीमेंट का उपयोग RIBT में किया जाता है गिनी सूअर. आरआईबीटी अवायवीय परिस्थितियों में होता है। सामग्री के साथ टेस्ट ट्यूब को एक माइक्रोएनेरोस्टेट में रखा जाता है, जहां से वायुमंडलीय वायुऔर एक गैस मिश्रण इंजेक्ट किया जाता है (95 भाग नाइट्रोजन और 5 भाग कार्बन डाईऑक्साइड). टेस्ट ट्यूब के साथ माइक्रोएनेरोस्टेट को 18-20 घंटे के लिए थर्मोस्टेट (35°C) में रखा जाता है।

प्रतिक्रिया के निर्माण के समानांतर में, नियंत्रण अध्ययनपिछले अनुभव से लिए गए सकारात्मक और नकारात्मक रक्त सीरम के साथ।

आरआईबीटी के परिणामों का मूल्यांकन थर्मोस्टेट से ट्यूबों को हटाने के बाद किया जाता है (अर्थात प्रयोग के 18-20 घंटे के बाद)। पाश्चर पिपेट का उपयोग करके, टेस्ट ट्यूब की सामग्री की एक बूंद को ग्लास स्लाइड पर लगाया जाता है, जिसे कवर ग्लास से ढक दिया जाता है और एक डार्क फील्ड माइक्रोस्कोप (उद्देश्य 40, ऐपिस 10) में जांच की जाती है। जब 20% तक ट्रेपोनेमा पैलिडम स्थिर हो जाता है, तो प्रतिक्रिया को नकारात्मक माना जाता है, 21 से 30% तक - संदिग्ध, 31 से 50% तक कमजोर रूप से सकारात्मक, 51 से 100% तक - सकारात्मक। ट्रेपोनेमा पैलिडम के स्थिरीकरण का प्रतिशत एक विशेष तालिका का उपयोग करके निर्धारित किया जाता है।

45) ऑप्सन-फैगोसाइटिक प्रतिक्रिया

तंत्र: एंटीबॉडी, प्रतिरक्षा सीरम और पूरक के अनुकूल प्रभाव के प्रभाव में माइक्रोबियल कोशिकाओं की फागोसाइटोसिस में वृद्धि।

प्रतिक्रिया घटक:

1) एंटीजन - दैनिक माइक्रोबियल संस्कृति;

3) पूरक - ताजा गिनी पिग सीरम;

4) फागोसाइट्स - ल्यूकोसाइट निलंबन।

ऑप्सोनिन एंटीबॉडी हैं जो सामान्य और प्रतिरक्षा सीरा में पाए जाते हैं और फागोसाइटोसिस के लिए रोगाणुओं को तैयार करते हैं।

प्रतिक्रिया विशेष परीक्षण ट्यूबों में t = 37° मिनट पर की जाती है। फिर प्रत्येक टेस्ट ट्यूब से स्मीयर तैयार किए जाते हैं, 100 फैगोसाइट्स की गिनती की जाती है और फैगोसाइटोज्ड माइक्रोकंट्रोल्स की संख्या निर्धारित की जाती है।

ऑप्सोनिक इंडेक्स = फैगोसाइटिक इंडेक्स। सामान्य सीरम का सीरम/फैगोसाइटिक सूचकांक

परीक्षण किए जा रहे सीरम का ऑप्सोनिक इंडेक्स जितना अधिक होगा (>1 होना चाहिए), और, इसलिए, यह उतना ही अधिक है! ब्रुसेलोसिस)।

इसका उपयोग ऑप्सोनिन के निर्धारण के लिए किया जाता है - एंटीबॉडी जो ल्यूकोसाइट्स की फागोसाइटिक गतिविधि को उत्तेजित करते हैं, अर्थात। ब्रुसेलोसिस जैसे संक्रमणों का सेरोडायग्नोसिस।

फागोसाइटोसिस का सुदृढ़ीकरण बैक्टीरिया निर्धारकों के लिए सक्रिय केंद्रों (आरएवी टुकड़ा) के साथ ऑप्सोनिन के लगाव के कारण होता है, और फिर फागोसाइट्स के पीसी रिसेप्टर्स के लिए पीसी टुकड़ों की मदद से होता है। सामान्य सीरम में थोड़ी मात्रा में ऑप्सोनिन होता है, जो पूरक की उपस्थिति में अपना प्रभाव डालता है। प्रतिरक्षा सीरम में अधिक ऑप्सोनिन होते हैं, और उनकी गतिविधि पूरक पर कम निर्भर होती है।

अवयव:

परीक्षण सीरम

सामान्य सीरम

दैनिक माइक्रोबियल संस्कृति (उदाहरण के लिए, स्टेफिलोकोकल)

फागोसाइट्स - न्यूट्रोफिल का निलंबन

30 मिनट के लिए 37°C पर इनक्यूबेट करें। प्रत्येक टेस्ट ट्यूब से स्मीयर तैयार किए जाते हैं, जिन्हें रोमानोव्स्की-गिम्सा के अनुसार दाग दिया जाता है, और 100 या अधिक न्युग्रोफाइल में रोगाणुओं की संख्या को एक माइक्रोस्कोप के तहत गिना जाता है, अर्थात। फागोसाइटिक संकेतक निर्धारित करें।

फागोसाइटिक संकेतक - एक न्यूट्रोफिल द्वारा अवशोषित रोगाणुओं की संख्या।

ऑप्सोनिक इंडेक्स - प्रतिरक्षा (परीक्षण) सीरम का फागोसाइटिक संकेतक / सामान्य सीरम का फागोसाइटिक संकेतक।

ऑप्सोनिक इंडेक्स जितना अधिक होगा (> 1 होना चाहिए), प्रतिरक्षा उतनी ही अधिक होगी।

ऑप्सन-फागोसाइटिक इंडेक्स एक डिजिटल संकेतक है = फागोसाइट्स की संख्या x फागोसाइटोसिस का आकलन (अवशोषित रोगाणुओं की संख्या के आधार पर)। अधिकतम मान -75 है.

46) एक्सोटॉक्सिन स्थापित करने के लिए चूहों पर आरएन

यह प्रतिक्रिया एक्सोटॉक्सिन को बेअसर करने के लिए एक विशिष्ट एंटीटॉक्सिक सीरम की क्षमता पर आधारित है।

प्रतिरक्षा सीरम एंटीबॉडी संवेदनशील कोशिकाओं और ऊतकों पर रोगाणुओं या उनके विषाक्त पदार्थों के हानिकारक प्रभावों को बेअसर करने में सक्षम हैं, जो एंटीबॉडी द्वारा माइक्रोबियल एंटीजन की नाकाबंदी से जुड़ा है, यानी, उनका तटस्थता।

जानवरों में या संवेदनशील परीक्षण वस्तुओं (सेल कल्चर, भ्रूण) में एक एंटीजन-एंटीबॉडी मिश्रण पेश करके न्यूट्रलाइजेशन प्रतिक्रिया (आरएन) की जाती है। जानवरों और परीक्षण वस्तुओं में सूक्ष्मजीवों या उनके एंटीजन या विषाक्त पदार्थों के हानिकारक प्रभावों की अनुपस्थिति में, वे प्रतिरक्षा सीरम के तटस्थ प्रभाव की बात करते हैं और इसलिए, एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स की बातचीत की विशिष्टता की बात करते हैं।

प्रतिक्रिया को अंजाम देने के लिए, परीक्षण सामग्री को मिलाया जाता है, जिसमें एक्सोटॉक्सिन होने की उम्मीद होती है एंटीटॉक्सिक सीरम, थर्मोस्टेट में रखा जाता है और जानवरों (गिनी सूअर, चूहे) को दिया जाता है। नियंत्रण जानवरों को परीक्षण सामग्री के फ़िल्ट्रेट से इंजेक्ट किया जाता है, सीरम से उपचारित नहीं किया जाता है। यदि एक्सोटॉक्सिन को एंटीटॉक्सिक सीरम से बेअसर कर दिया जाता है, तो प्रायोगिक समूह के जानवर जीवित रहेंगे। एक्सोटॉक्सिन के परिणामस्वरूप नियंत्रित जानवर मर जाएंगे।

एक्सोटॉक्सिन न्यूट्रलाइजेशन की प्रतिक्रिया तब होती है जब यह एंटीटॉक्सिक सीरम (एंटीटॉक्सिन एंटीबॉडी) के साथ इंटरैक्ट करता है। एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स के गठन के परिणामस्वरूप, विष अपने विषाक्त गुणों को खो देता है।

विषाक्त पदार्थों, टॉक्सोइड्स या एंटीटॉक्सिन का पता लगाने और अनुमापन करने के लिए तटस्थीकरण प्रतिक्रिया की जाती है।

तरल पदार्थ को छानकर विषाक्त पदार्थ प्राप्त किये जाते हैं पोषक माध्यमया परीक्षण सामग्री जहां विषैले बैक्टीरिया विकसित हुए हैं। जब 37°C के तापमान पर 30-45 दिनों तक फॉर्मल्डिहाइड के साथ उपचार किया जाता है, तो विष टॉक्सोइड में परिवर्तित हो जाता है, जिसका उपयोग एंटीटॉक्सिक सीरम प्राप्त करने के लिए जानवरों को प्रतिरक्षित करने के लिए किया जाता है।

विवो न्यूट्रलाइजेशन प्रतिक्रिया में। विष के प्रकार को निर्धारित करने के लिए इसे डायग्नोस्टिक एंटीटॉक्सिक सीरम के साथ मिलाया जाता है और इस मिश्रण को सफेद चूहों में इंजेक्ट किया जाता है। एंटीटॉक्सिक सीरम से विष को निष्क्रिय करने पर चूहे नहीं मरते।

डिप्थीरिया (स्किक टेस्ट) और स्कार्लेट ज्वर (डिक टेस्ट) वाले बच्चों में एंटीटॉक्सिक प्रतिरक्षा निर्धारित करने के लिए न्यूट्रलाइजेशन प्रतिक्रिया का उपयोग किया जाता है। ऐसा करने के लिए, संबंधित विष (1/40 डीएलएम) की एक निश्चित मात्रा को अग्रबाहु क्षेत्र में अंतःत्वचीय रूप से इंजेक्ट किया जाता है। यदि शरीर में एंटीटॉक्सिन हैं, तो विष निष्क्रिय हो जाएगा और प्रतिक्रिया नकारात्मक होगी। शरीर में एंटीटॉक्सिन की अनुपस्थिति में, सूजन संबंधी प्रतिक्रियाविष इंजेक्शन के स्थल पर.
47) वायरस की पहचान के लिए चूहों में आरएन (न्यूट्रलाइजेशन रिएक्शन)। टिक - जनित इन्सेफेलाइटिस

टीबीई वायरस कई प्रयोगशालाओं और जंगली जानवरों के लिए रोगजनक है। नवजात और युवा सफेद चूहे सबसे अधिक संवेदनशील होते हैं। मस्तिष्क में संक्रमण के बाद, इंट्रापेरिटोनियल, इंट्रामस्क्युलर रूप से, इन जानवरों में एन्सेफलाइटिस विकसित होता है, जिससे जानवरों की मृत्यु हो जाती है। खेत के जानवरों में, बकरियाँ टीबीई वायरस के प्रति सबसे अधिक संवेदनशील होती हैं, भेड़ और गायें कम संवेदनशील होती हैं, और घोड़े थोड़े संवेदनशील होते हैं। टीबीई वायरस में साइटोपैथोजेनिक प्रभाव (सीपीई) होता है, जिससे पोर्सिन भ्रूणीय किडनी कोशिकाओं (पीईबी और पीईएस) की प्राथमिक और निरंतर संस्कृतियों में साइटोपैथिक परिवर्तन होता है और कई अन्य में स्पष्ट सीपीई के बिना गुणा होता है। कोशिका संवर्धन. संक्रमित चूहों के मस्तिष्क और संक्रमित संस्कृतियों के संस्कृति द्रव में, टीबीई वायरस और विशिष्ट वायरल एंटीजन का संचय होता है: पूरक-फिक्सिंग, हेमग्लगुटिनेटिंग, अवक्षेपण, आदि।

टीबीई वायरस लंबे समय तककम तापमान पर सुरक्षित रखता है ( इष्टतम मोड-60 डिग्री सी और नीचे), लियोफिलाइजेशन को अच्छी तरह से सहन करता है, कई वर्षों तक सूखे अवस्था में संग्रहीत किया जा सकता है, लेकिन कमरे के तापमान पर जल्दी से निष्क्रिय हो जाता है। उबालने से यह 2 मिनट में मर जाता है, और गर्म दूध में 60 डिग्री पर। C की 20 मिनट में मृत्यु हो जाती है।

फॉर्मेलिन, फिनोल, अल्कोहल और अन्य कीटाणुनाशक, और पराबैंगनी विकिरण का भी निष्क्रिय प्रभाव होता है।

तटस्थीकरण प्रतिक्रिया वायरस के संक्रामक प्रभाव को खत्म करने के लिए विशिष्ट प्रतिरक्षा सीरा की क्षमता पर आधारित है। दो दिशाओं में लागू:

1) पृथक वायरस टाइप करने के लिए;

2) जो लोग ठीक हो गए हैं उनके सीरा में एंटीबॉडी के अनुमापन के लिए।

प्रतिक्रिया स्थापित करना:

1. प्रयोगशाला जानवरों पर. वायरस की उपस्थिति के लिए मानदंड

प्रयोगशाला जानवरों की मृत्यु का कार्य करता है। LD50 की गणना की जाती है

वायरल सस्पेंशन का अधिकतम तनुकरण, जो

50% संक्रमित पशुओं की मृत्यु का कारण बना। के लिए

टिक-जनित एन्सेफलाइटिस वायरस की पहचान की जाती है

सफेद चूहों का इंट्रासेरेब्रल संक्रमण।

2. ऊतक संवर्धन में। परिणामों को ध्यान में रखा जाता है

साइटोपैथिक प्रभाव (सीपीई) के अनुसार

रंग परिवर्तन के आधार पर रंग परीक्षण विधि के अनुसार

हेमाडोसोर्प्शन द्वारा.

3. मुर्गी के भ्रूण में। परिणाम तदनुसार दर्ज किए जाते हैं

कोरियोएलैंटोइक झिल्ली के साथ पॉकमार्क की उपस्थिति।

48) आरटीजीए

इस प्रतिक्रिया का उपयोग वायरोलॉजिकल अभ्यास में किया जाता है:

वायरस का प्रकार (कांच पर) निर्धारित करने के लिए;

रोगियों के सीरम में पता लगाने के लिए (विस्तारित)।

हेमग्लूटीनेशन निषेध की एक सांकेतिक प्रतिक्रिया स्थापित करते समय, प्रकार-विशिष्ट प्रतिरक्षा सीरा की 1 बूंद ग्लास पर लागू की जाती है, फिर परीक्षण सामग्री की 1 बूंद और लाल रक्त कोशिकाओं के 5% निलंबन की 1 बूंद डाली जाती है।

परिणामों को ध्यान में रखते हुए: वायरस का प्रकार उस सीरम द्वारा निर्धारित किया जाता है जिसके साथ प्रतिक्रिया नहीं हुई, क्योंकि पृथक वायरस के लिए विशिष्ट प्रतिरक्षा सीरम इसकी हेमग्लूटिनेटिंग गतिविधि को दबा देता है, और लाल रक्त कोशिकाएं एकत्रित नहीं होती हैं।
49)आरआईएफ

चमकदार फ्लोरोक्रोम डाई (फ्लोरिसिन आइसोथियोसाइनेट, आदि) का उपयोग लेबल के रूप में किया जाता है।

आरआईएफ के विभिन्न संशोधन हैं। संक्रामक रोगों के स्पष्ट निदान के लिए, कून्स आरआईएफ का उपयोग परीक्षण सामग्री में रोगाणुओं या उनके एंटीजन की पहचान करने के लिए किया जाता है।

कून्स के अनुसार आरआईएफ की दो विधियाँ हैं: प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष।

प्रत्यक्ष आरआईएफ घटक:

1) जांच की जा रही सामग्री (नासॉफरीनक्स द्वारा छोड़ा गया मल, आदि);

2) वांछित एंटीजन के लिए एटी-ला युक्त विशिष्ट प्रतिरक्षा सीरम लेबल;

3) आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान।

परीक्षण सामग्री से निकले स्मीयर को लेबल वाले एंटीसीरम से उपचारित किया जाता है।

एजी-एटी प्रतिक्रिया होती है। ल्यूमिनसेंट सूक्ष्म परीक्षण के दौरान, उस क्षेत्र में प्रतिदीप्ति का पता लगाया जाता है जहां एजी-एटी कॉम्प्लेक्स स्थानीयकृत होते हैं।

अप्रत्यक्ष आरआईएफ के घटक:

1) अध्ययन की जा रही सामग्री;

2) विशिष्ट एंटीसीरम;

3) एंटीग्लोबुलिन सीरम (इम्युनोग्लोबुलिन के खिलाफ एटी-ला), फ्लोरीक्रोम के साथ लेबल किया गया;

4) आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल।

परीक्षण सामग्री से एक स्मीयर को पहले वांछित एंटीजन के लिए प्रतिरक्षा सीरम के साथ इलाज किया जाता है, और फिर लेबल एंटीग्लोबुलिन सीरम के साथ इलाज किया जाता है।

ल्यूमिनसेंट एजी-एटी कॉम्प्लेक्स - लेबल एटी का पता फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप का उपयोग करके लगाया जाता है।

अप्रत्यक्ष विधि का लाभ यह है कि फ्लोरोसेंट विशिष्ट सीरा की एक विस्तृत श्रृंखला तैयार करने की आवश्यकता नहीं है, लेकिन केवल एक फ्लोरोसेंट एंटीग्लोबुलिन सीरम का उपयोग किया जाता है।

अप्रत्यक्ष आरआईएफ का एक 4-घटक प्रकार भी होता है, जब पूरक (गिनी पिग सीरम) अतिरिक्त रूप से पेश किया जाता है। एक सकारात्मक प्रतिक्रिया में, एजी-एटी-लेबल-एटी-पूरक का एक कॉम्प्लेक्स बनता है।

प्रतिक्रिया को संदर्भित करता है सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाएंलेबल किए गए एंटीजन या एंटीबॉडी शामिल हैं।

यह प्रत्यक्ष एवं अप्रत्यक्ष तरीकों से किया जाता है।

पर सीधी विधिकिसी मरीज़ की सामग्री में एंटीजन का पता लगाना। एक डायग्नोस्टिक फ्लोरोसेंट सीरम का उपयोग किया जाता है, जिसमें इम्यूनोग्लोबुलिन को प्रतिरक्षा सीरा से अलग किया जाता है और फ्लोरोक्रोम के साथ लेबल किया जाता है।

विशिष्ट एंटीजन को चमकीले हरे ल्यूमिनसेंट समूह के रूप में पाया जाता है, और तैयारी की पृष्ठभूमि नारंगी-लाल रंग की होती है।

प्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रतिक्रिया के घटक:

1) अध्ययन की जा रही सामग्री;

2) विशिष्ट ल्यूमिनसेंट सीरम;

3) फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप।

इन्फ्लूएंजा का निदान करते समय, पैराइन्फ्लुएंजा और के रोगजनकों से भेदभाव किया जाता है एडेनोवायरस संक्रमण. नासॉफिरिन्जियल स्वैब का इलाज फ्लोरोसेंट इन्फ्लूएंजा सीरम या इन्फ्लूएंजा इम्युनोग्लोबुलिन से किया जाता है।

हरे रंग की चमक के रूप में "+" परिणाम 3 घंटे के बाद प्राप्त होता है।

अप्रत्यक्ष विधि से, विशिष्ट एंटीबॉडी का पता लगाया जाता है और उनका शीर्षक दिया जाता है। सीरम टिटर इसका अधिकतम तनुकरण है जिस पर "+ +" का प्रतिदीप्ति नोट किया जाता है।

अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रतिक्रिया के घटक

त्वरित निदान के दौरान एंटीजन की खोज करने के लिए:

1) परीक्षण सामग्री (एंटीजन);

2) विशिष्ट सीरम;

3) एंटीग्लोबुलिन ल्यूमिनसेंट सीरम

4) फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप।

/ चरण विशिष्ट

सीरम एंटीबॉडीज़ एंटीजन को सोख लेती हैं।

// गैर-विशिष्ट चरण

फ्लोरोक्रोमेस लेबल वाले एंटीबॉडी वाले एंटीग्लोबुलिन सीरम का उपयोग किया जाता है। एक जटिल एंटीजन + एंटीबॉडी (I) + एंटीग्लोबुलिन सीरम (II) बनता है, जो चमकता है।