सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाएं। शीघ्र प्रतिक्रिया

यह लेख अवक्षेपण प्रतिक्रिया की घटना पर केंद्रित होगा। यहां हम इस घटना की विशेषताओं, प्रसार की घटना, सामान्य विशेषताओं, मानव जीवन में भूमिका और बहुत कुछ देखेंगे।

घटना का परिचय

अवक्षेपण सीरोलॉजिकल प्रकार की एक घटना है, जिसके दौरान घुलनशील एंटीजन एंटीबॉडी के साथ परस्पर क्रिया करते हैं और परिणामस्वरूप, एक अवक्षेप बनता है।
अवक्षेपण प्रतिक्रिया की सामान्य विशेषता एंटीजन और एंटीबॉडी के ठोस प्रभाव का एक रूप है। इस प्रकार की अंतःक्रियाएं ज्ञात एंटीबॉडी और एंटीजन को जोड़कर परीक्षण पदार्थ में अज्ञात एंटीजन की उपस्थिति निर्धारित करना संभव बनाती हैं। लवणों की उपस्थिति के बिना वर्षा की प्रक्रिया बदतर होगी, और सबसे अच्छा इष्टतम 7.0-7.4 पीएच की सीमा के भीतर है।

प्रतिक्रिया के घटक

अवक्षेपण प्रतिक्रिया के घटकों में, तीन मुख्य तत्व प्रतिष्ठित हैं:

1. एक प्रतिजन जो प्रकृति में आणविक है। यह सूक्ष्म रूप से विभाजित अवस्था में है, दूसरे शब्दों में, यह घुलनशील है। और ऐसे एंटीजन को प्रीसिपिटोजेन भी कहा जाता है, जो एक लाइसेट या ऊतक का अर्क होता है, आदि। प्रीसिपिटोजेन में एग्लूटीनोजेन से एक विशिष्ट अंतर होता है, जो उन कणों के आकार में निहित होता है जिनमें यह शामिल होता है। एग्लूटीनोजेन में एक अंतर्निहित कोशिका आकार होता है, जबकि प्रीसिपिटोजेन अणु के आकार के समानुपाती होते हैं। एंटीजन समाधान की विशेषता पारदर्शिता है।
2. मानव रक्त सीरम के साथ-साथ प्रतिरक्षा निदान सीरम में पाया जाने वाला एक एंटीबॉडी, जिसमें अध्ययन किए गए एंटीबॉडी शामिल हैं।
3. इलेक्ट्रोलाइट्स सोडियम क्लोराइड का एक समाधान है, जो एक आइसोटोनिक अवस्था की विशेषता है।

अवक्षेप प्राप्त करना

अवक्षेपण प्रतिक्रिया अवक्षेपण के बिना असंभव है, जो सामग्री को पीसने और उनमें से प्रोटीन एंटीजन निकालने से प्राप्त होता है। उबालकर या अन्य तरीकों से निष्कर्षण होता है।
प्रीसिपिटोजेन्स का एक उल्लेखनीय उदाहरण लाइसेट्स, साथ ही ऊतक और अंग के अर्क, रक्त सीरम, रोगाणुओं की शोरबा संस्कृतियों के आधार पर विभिन्न प्रकार के फिल्टर, साथ ही सूक्ष्मजीवों और ऑटोलिसेट पदार्थों के खारा अर्क हैं।

वर्षा में ठहराव

आइए अब अवक्षेपण प्रतिक्रिया स्थापित करने की विधि पर नजर डालें।
एक वलय अवक्षेपण प्रतिक्रिया की जाती है, जो विशेष रूप से तैयार परीक्षण ट्यूबों में होती है। सीरम को डिश की गुहा में पेश किया जाता है, इसे पिपेट की नाक का उपयोग करके दीवार के साथ डाला जाता है। इसके बाद, उचित मात्रा में अवक्षेपण को सावधानी से शीर्ष पर रखा जाता है, और फिर टेस्ट ट्यूब को क्षैतिज से ऊर्ध्वाधर स्थिति में लाया जाता है। अवक्षेपण प्रतिक्रिया को स्थापित करना और उसे ध्यान में रखना एक बहुत ही सावधानीपूर्वक किया जाने वाला कार्य है। एंटीजन और एंटीबॉडी के बीच की सीमा पर एक सफेद रिंग की उपस्थिति के बाद परिणाम को ध्यान में रखा जाता है। यदि प्रतिक्रिया के प्रतिक्रियाशील तत्व एक-दूसरे से मेल खाते हैं, तो वे संवाद करते हैं, लेकिन यह उनकी बातचीत की लंबी अवधि के बाद ध्यान देने योग्य हो जाता है।
अवक्षेपण प्रतिक्रिया पेट्री डिश या ग्लास स्लाइड पर भी की जाती है, जहां अगर जेल को एक छोटी परत में लगाकर स्थानांतरित किया जाता है। इसके सख्त होने के बाद, जेल में थोड़ी संख्या में कुएं काट दिए जाते हैं जिनमें एंटीजन और एंटीबॉडी रखे जाएंगे। इस क्रिया को करने के दो तरीके हैं: रेडियल इम्यूनोडिफ्यूजन और डबल इम्यूनोडिफ्यूजन की विधि।

सामान्य जानकारी

अवक्षेपण की यांत्रिकी एग्लूटीनेशन उपकरण के समान है। प्रतिरक्षा-प्रकार के सीरम के प्रभाव के संपर्क में आने पर, एंटीजन, जो पहले ही प्रतिक्रिया कर चुका है, अपनी प्रतिक्रिया कम कर देता है। एक महत्वपूर्ण स्थिति सीरम और एंटीजन दोनों की पारदर्शिता है।
एंटीबॉडी पर एंटीजन की परत चढ़ाकर प्रतिक्रिया के पंजीकरण में सुधार किया जा सकता है। परिणामस्वरूप, वलय के आकार के अवक्षेपों की उपस्थिति देखी जा सकती है। इस घटना को रिंग वर्षण कहा जाता है और इसे 2.5 से 3.5 मिमी व्यास वाली विशेष ट्यूबों में किया जाता है। वर्षा प्रतिक्रिया के सबसे व्यापक उदाहरणों में से एक एंथ्रेक्स का निदान है।
वर्षा अगर में डिप्थीरिया कल्चर की विषाक्तता के स्तर को निर्धारित करना संभव बनाती है।
विचाराधीन प्रतिक्रिया के दौरान, एंटीजेनिक कॉम्प्लेक्स और एंटीबॉडी की वर्षा होती है। वर्षा एक प्रतिरक्षाविज्ञानी घटना है जो किसी को बीमार या टीका लगाए गए मनुष्यों और जानवरों के रक्त सीरम में एंटीबॉडी सामग्री की मात्रा निर्धारित करने की अनुमति देती है।

अनुमापन का परिणाम

यह जानना महत्वपूर्ण है कि उपरोक्त विधि के अनुमापन द्वारा प्राप्त डेटा मात्रात्मक नहीं है। एंटीबॉडी की निहित संख्या का मात्रात्मक अनुमान बनाने और विश्लेषण करने के लिए, एम. हीडलबर्गर और ई. काबट द्वारा एक विशेष प्रतिक्रिया तकनीक विकसित की गई थी, जो समतुल्य क्षेत्र की खोज और पहचान पर आधारित है। एंटीजन की आयु-विशिष्ट संख्या को एंटीसीरम की निरंतर मात्रा के साथ मिलाने से शुरू में बने अवक्षेप में वृद्धि होती है, और फिर एंटीजन कॉम्प्लेक्स को भंग करने की क्षमता में वृद्धि के कारण यह फिर से घट जाती है। प्रत्येक ट्यूब में निहित सतह पर तैरनेवाला में एंटीबॉडी की मात्रा निर्धारित करके, आप पा सकते हैं कि एंटीबॉडी वाले व्यंजनों की एक निश्चित संख्या में कोई तरल नहीं होगा। यहां अन्य परखनलियों की तुलना में सबसे बड़ा अवक्षेप बनेगा। इसके लिए धन्यवाद और प्रोटीन के कुल मूल्य से एंटीजेनिक प्रोटीन अवक्षेप को घटाकर, विशेष रूप से अध्ययन किए गए सीरम की मात्रा में निहित एंटीबॉडी का सटीक मूल्य प्राप्त करना संभव है। इसके बाद, अवक्षेप में प्रोटीन अणुओं की मात्रा नाइट्रोजन की मात्रा या वर्णमिति विधियों का उपयोग करके निर्धारित की जाती है।

मूल्यों का अनुमान

निदान पद्धति में अवक्षेपण मूल्यों के आकलन में प्रतिरक्षा सीरम में एक एंटीबॉडी की उपस्थिति की संभावना को ध्यान में रखना चाहिए जिसमें प्रीसिपिटिन का गुण नहीं होता है, जिसका अर्थ है कि एंटीजन के साथ प्रतिक्रिया करने के बाद अवक्षेप स्वयं नहीं बन सकता है। ऐसे अणुओं की सूची में आंशिक एंटीबॉडी और गामा ए-ग्लोबुलिन के समूह की कुछ प्रजातियां शामिल हैं।

प्रयोगशाला स्थितियों में अवक्षेपण प्रतिक्रिया विभिन्न प्रकार के संशोधनों में अपना अनुप्रयोग पाती है। उदाहरण के लिए, थर्मोप्रेसिपिटेशन प्रतिक्रिया का उपयोग बोटुलिज़्म, एंथ्रेक्स आदि के जीवाणु प्रतिजनों का पता लगाने के लिए किया जाता है, जो थर्मल विकृतीकरण के अधीन नहीं हैं। रिंग अवक्षेपण के विपरीत, इस प्रकार की प्रतिक्रिया उबली हुई अवस्था में संबंधित सामग्री के फ़िल्ट्रेट का उपयोग करती है।
एक जटिल मिश्रण में अवक्षेपण मिश्रण के व्यक्तिगत तत्वों के गुणों को चित्रित करने की अनुमति नहीं देता है। ऐसे मामलों में, एक व्यक्ति अगर में अवक्षेपण की विधि का सहारा लेता है, और इम्यूनोइलेक्ट्रोफेरेसिस का भी उपयोग करता है।

विसरित वर्षा

अनुसंधान के इस क्षेत्र में, फैलाना वर्षा प्रतिक्रिया (डीपीआर) की अवधारणा है। यह एंटीबॉडी और घुलनशील एंटीजन की एक जेल में फैलने की क्षमता पर आधारित है। प्रसार एक निश्चित पदार्थ के अणु की दूसरे के अणुओं में प्रवेश करने की क्षमता है, जो तापीय गति के कारण होता है।
जेल एक परिक्षिप्त प्रकार की प्रणाली है जिसमें तरल चरण को ठोस चरण में समान रूप से वितरित किया जाता है। इस प्रतिक्रिया के लिए अक्सर अगर जेल का उपयोग किया जाता है।
पैरामीटर देने के बाद जिसके तहत अणु एक-दूसरे की ओर फैल सकते हैं, उनकी बैठक एंटीजन + एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स के गठन के साथ होगी। ऐसा नियोप्लाज्म जेल में ही फैल सकता है और अवक्षेपित होकर एक पट्टी का रूप ले लेगा जिसे नग्न आंखों से देखा जा सकता है। यदि एंटीजन और एंटीबॉडी समजात हैं, तो कोई बैंड नहीं बनेगा।
ऐसी स्थितियाँ बनाना जिसके तहत प्रसार होगा जबकि अगर परत में घटकों को डालना शामिल है, लेकिन कुओं की कुल संख्या और उनकी सापेक्ष स्थिति समस्या के प्रकार से निर्धारित होती है जिसे हल करने की आवश्यकता होती है। आरपीडी किसी व्यक्ति को ज्ञात एंटीबॉडी सीरम का उपयोग करके परीक्षण करके अज्ञात पृथक वायरस का पता लगाने और पहचानने की क्षमता देता है।

आवेदन

वर्षा का व्यापक रूप से न केवल रोगों के निदान में उपयोग किया जाता है, बल्कि इसका उपयोग फोरेंसिक चिकित्सा में भी किया जाता है। ऐसे विश्लेषण की कल्पना करना मुश्किल है जिसमें अपराध हथियार पर पाए जाने वाले रक्त की प्रजाति, किसी अंग या ऊतक का हिस्सा निर्धारित करना संभव हो जो वर्षा प्रतिक्रिया का उपयोग नहीं करता है। इस प्रक्रिया के दौरान, अवक्षेपित सीरा का उपयोग किया जाता है, जो विभिन्न जानवरों और पक्षियों के टीकाकरण द्वारा प्राप्त किया जाता है। यह महत्वपूर्ण है कि सीरम टिटर स्तर कम से कम 1:10,000 हो, और इसमें पर्याप्त विशिष्टता भी होनी चाहिए। पाए गए खून के धब्बे या उसकी परत से शारीरिक परीक्षण के लिए अर्क निकाला जाता है। समाधान, जो बाद में अवक्षेपित सीरम के संपर्क में आएगा। इस प्रतिक्रिया का उपयोग करके, मनुष्यों और जानवरों दोनों के ऊतक और अंग प्रोटीन के प्रकार को निर्धारित करना संभव है। बादलयुक्त अर्क प्राप्त करने से व्यक्ति को अगर पर अवक्षेपण का सहारा लेना पड़ता है।

निष्कर्ष

हमारे द्वारा पढ़ी गई जानकारी का विश्लेषण करते हुए, हम यह निष्कर्ष निकाल सकते हैं कि अवक्षेपण प्रतिक्रियाएं मनुष्यों के लिए बेहद महत्वपूर्ण हैं, क्योंकि वे एंटीबॉडी का उपयोग करके विभिन्न एंटीजन का निदान करने की अनुमति देते हैं; इस घटना का व्यापक रूप से फोरेंसिक चिकित्सा में भी उपयोग किया जाता है और व्यक्ति को रक्त, ऊतक के प्रकार की पहचान करने की अनुमति मिलती है। या किसी विशिष्ट विषय के संबंध में अंग। अवक्षेपण के कई प्रकार और तरीके हैं जिनका उपयोग हल की जा रही समस्या की उभरती जरूरतों के अनुसार किया जाता है।

अवक्षेपण प्रतिक्रिया (आरपी) बादल के रूप में एंटीबॉडी के साथ घुलनशील आणविक एंटीजन के एक परिसर का निर्माण और अवक्षेपण है जिसे अवक्षेपण कहा जाता है। यह एंटीजन और एंटीबॉडी को समान मात्रा में मिलाने से बनता है; उनमें से एक की अधिकता प्रतिरक्षा जटिल गठन के स्तर को कम कर देती है।

आरपी को टेस्ट ट्यूब (रिंग अवक्षेपण प्रतिक्रिया), जैल, पोषक तत्व मीडिया आदि में रखा जाता है। अर्ध-तरल अगर या एगरोज़ जेल में आरपी की किस्में व्यापक हैं: ऑचटरलोनी के अनुसार डबल इम्यूनोडिफ्यूजन, रेडियल इम्यूनोडिफ्यूजन, इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस, आदि।

तंत्र। यह पैथोलॉजिकल सामग्री, पर्यावरणीय वस्तुओं या शुद्ध जीवाणु संस्कृतियों से निकाले गए पारदर्शी कोलाइडल घुलनशील एंटीजन के साथ किया जाता है। प्रतिक्रिया उच्च एंटीबॉडी टाइटर्स के साथ स्पष्ट डायग्नोस्टिक प्रीसिपिटेटिंग सीरा का उपयोग करती है। अवक्षेपित सीरम के अनुमापांक को एंटीजन का उच्चतम तनुकरण माना जाता है, जो प्रतिरक्षा सीरम के साथ बातचीत करते समय एक दृश्यमान अवक्षेप - मैलापन के गठन का कारण बनता है।

रिंग अवक्षेपण प्रतिक्रिया संकीर्ण परीक्षण ट्यूबों (व्यास 0.5 सेमी) में की जाती है, जिसमें 0.2-0.3 मिलीलीटर अवक्षेपण सीरम मिलाया जाता है। फिर, पाश्चर पिपेट का उपयोग करके, 0.1-0.2 मिलीलीटर एंटीजन घोल को धीरे-धीरे परतबद्ध किया जाता है। ट्यूबों को सावधानीपूर्वक ऊर्ध्वाधर स्थिति में स्थानांतरित कर दिया जाता है। प्रतिक्रिया 1-2 मिनट के बाद दर्ज की जाती है। सकारात्मक प्रतिक्रिया के मामले में, सीरम और परीक्षण एंटीजन के बीच की सीमा पर एक सफेद रिंग के रूप में एक अवक्षेप दिखाई देता है। नियंत्रण ट्यूबों में कोई अवक्षेप नहीं बनता है।

15. पूरक से जुड़ी प्रतिक्रिया: हेमोलिसिस प्रतिक्रिया, पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया। तंत्र, घटक, अनुप्रयोग।

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (सीएफआर) यह है कि जब एंटीजन और एंटीबॉडी एक-दूसरे से मेल खाते हैं, तो वे एक प्रतिरक्षा परिसर बनाते हैं जिसमें पूरक (सी) एंटीबॉडी के एफसी टुकड़े के माध्यम से जुड़ा होता है, यानी, पूरक एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स से बंधा होता है। यदि एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स नहीं बनता है, तो पूरक मुक्त रहता है।

एजी और एटी की विशिष्ट अंतःक्रिया पूरक के सोखने (बंधन) के साथ होती है। चूंकि पूरक निर्धारण की प्रक्रिया दृष्टिगत रूप से स्पष्ट नहीं है, इसलिए जे. बोर्डेट और ओ. झांग ने एक संकेतक के रूप में हेमोलिटिक प्रणाली (भेड़ की लाल रक्त कोशिकाएं + हेमोलिटिक सीरम) का उपयोग करने का सुझाव दिया, जो दर्शाता है कि पूरक तय हो गया है या नहीं

एजी-एटी कॉम्प्लेक्स। यदि एजी और एटी एक-दूसरे से मेल खाते हैं, यानी एक प्रतिरक्षा कॉम्प्लेक्स बन गया है, तो पूरक इस कॉम्प्लेक्स से बंधा हुआ है और हेमोलिसिस नहीं होता है। यदि एटी एजी के अनुरूप नहीं है, तो कॉम्प्लेक्स नहीं बनता है और पूरक, मुक्त रहकर, दूसरी प्रणाली के साथ जुड़ जाता है और हेमोलिसिस का कारण बनता है।

अवयव। पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (सीएफआर) एक जटिल सीरोलॉजिकल प्रतिक्रिया है। इसे पूरा करने के लिए, 5 अवयवों की आवश्यकता होती है, अर्थात्: एजी, एटी और पूरक (पहली प्रणाली), भेड़ एरिथ्रोसाइट्स और हेमोलिटिक सीरम (दूसरी प्रणाली)।

सीएससी के लिए एंटीजन विभिन्न मारे गए सूक्ष्मजीवों, उनके लाइसेट्स, बैक्टीरिया के घटकों, पैथोलॉजिकल रूप से परिवर्तित और सामान्य अंगों, ऊतक लिपिड, वायरस और वायरस युक्त सामग्रियों की संस्कृतियां हो सकती हैं।

ताजा या सूखे गिनी पिग सीरम का उपयोग पूरक के रूप में किया जाता है।

तंत्र। आरएसके दो चरणों में किया जाता है: पहला चरण - तीन घटकों एंटीजन + एंटीबॉडी + पूरक वाले मिश्रण का ऊष्मायन; दूसरा चरण (संकेतक) - भेड़ के एरिथ्रोसाइट्स और उनके प्रति एंटीबॉडी वाले हेमोलिटिक सीरम से युक्त एक हेमोलिटिक प्रणाली को जोड़कर मिश्रण में मुक्त पूरक का पता लगाना। प्रतिक्रिया के पहले चरण में, जब एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स बनता है, पूरक बंधता है, और फिर दूसरे चरण में, एंटीबॉडी द्वारा संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स का हेमोलिसिस नहीं होगा; प्रतिक्रिया सकारात्मक है. यदि एंटीजन और एंटीबॉडी एक दूसरे से मेल नहीं खाते हैं (परीक्षण नमूने में कोई एंटीजन या एंटीबॉडी नहीं है), तो पूरक मुक्त रहता है और दूसरे चरण में एरिथ्रोसाइट - एंटी-एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स में शामिल हो जाएगा, जिससे हेमोलिसिस हो जाएगा; नकारात्मक प्रतिक्रिया। आवेदन। आरएससी का उपयोग कई संक्रामक रोगों के निदान के लिए किया जाता है, विशेष रूप से सिफलिस (वास्सरमैन प्रतिक्रिया) में

इम्यूनोडायग्नोस्टिक प्रतिक्रियाएं। एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रियाएं और लेबल किए गए घटकों के साथ प्रतिक्रियाएं। सूक्ष्मजीवों की पहचान और संक्रामक रोगों के निदान के लिए उपयोग करें।

प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं का उपयोग बीमार और स्वस्थ लोगों में नैदानिक ​​और प्रतिरक्षाविज्ञानी अध्ययनों में किया जाता है। इस उद्देश्य के लिए वे उपयोग करते हैं सीरोलॉजिकल तरीके(अक्षांश से. सीरम - मट्ठा और लोगो - शिक्षण), यानी रक्त सीरम और अन्य तरल पदार्थों, साथ ही शरीर के ऊतकों में निर्धारित एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रियाओं का उपयोग करके एंटीबॉडी और एंटीजन का अध्ययन करने के तरीके।

रोगी के रक्त सीरम में रोगज़नक़ एंटीजन के खिलाफ एंटीबॉडी का पता लगाने से रोग का निदान किया जा सकता है। सीरोलॉजिकल अध्ययनों का उपयोग माइक्रोबियल एंटीजन, विभिन्न जैविक रूप से सक्रिय पदार्थों, रक्त समूहों, ऊतक और ट्यूमर एंटीजन, प्रतिरक्षा परिसरों, सेल रिसेप्टर्स आदि की पहचान करने के लिए भी किया जाता है।

किसी रोगी से किसी सूक्ष्म जीव को अलग करते समय, रोगज़नक़ की पहचान प्रतिरक्षा निदान सीरा, यानी विशिष्ट एंटीबॉडी वाले अतिप्रतिरक्षित जानवरों के रक्त सीरा का उपयोग करके उसके एंटीजेनिक गुणों का अध्ययन करके की जाती है। यह तथाकथित है सीरोलॉजिकल पहचानसूक्ष्मजीव.

माइक्रोबायोलॉजी और इम्यूनोलॉजी में, एग्लूटिनेशन, अवक्षेपण, न्यूट्रलाइजेशन प्रतिक्रियाएं, पूरक से जुड़ी प्रतिक्रियाएं, लेबल किए गए एंटीबॉडी और एंटीजन (रेडियोइम्यूनोलॉजिकल, एंजाइम इम्यूनोएसे, इम्यूनोफ्लोरेसेंट तरीके) का उपयोग व्यापक रूप से किया जाता है। सूचीबद्ध प्रतिक्रियाएं पंजीकृत प्रभाव और उत्पादन तकनीक में भिन्न हैं, हालांकि, वे सभी बुनियादी हैं। एंटीबॉडी के साथ एंटीजन की परस्पर क्रिया की प्रतिक्रिया पर आधारित होते हैं और एंटीबॉडी और एंटीजन दोनों का पता लगाने के लिए उपयोग किया जाता है। प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं की विशेषता उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता है।

नीचे मुख्य इम्यूनोडायग्नोस्टिक प्रतिक्रियाओं के सिद्धांत और चित्र दिए गए हैं। प्रतिक्रियाओं को स्थापित करने की एक विस्तृत तकनीक इसमें दी गई है। इम्यूनोडायग्नोस्टिक्स के लिए व्यावहारिक दिशानिर्देश।

एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया - आरए(अक्षांश से. aggluti- राष्ट्रीय या बहुराष्ट्रीय- आसंजन) एक सरल प्रतिक्रिया है जिसमें एंटीबॉडी कॉर्पसकुलर एंटीजन (बैक्टीरिया, एरिथ्रोसाइट्स या अन्य कोशिकाएं, उन पर अधिशोषित एंटीजन वाले अघुलनशील कण, साथ ही मैक्रोमोलेक्यूलर समुच्चय) को बांधते हैं। यह इलेक्ट्रोलाइट्स की उपस्थिति में होता है, उदाहरण के लिए, जब एक आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान जोड़ा जाता है।

एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया के लिए विभिन्न विकल्पों का उपयोग किया जाता है: व्यापक, सांकेतिक, अप्रत्यक्ष, आदि। एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया गुच्छे या तलछट के गठन से प्रकट होती है

आरए का उपयोग इसके लिए किया जाता है:

रोगियों के रक्त सीरम में एंटीबॉडी का निर्धारण, उदाहरण के लिए, ब्रुसेलोसिस (राइट, हेडेलसन प्रतिक्रिया), टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड बुखार (विडाल प्रतिक्रिया) और अन्य संक्रामक रोगों के साथ;

रोगी से पृथक रोगज़नक़ का निर्धारण;

एरिथ्रोसाइट एलोएंटीजन के विरुद्ध मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का उपयोग करके रक्त समूहों का निर्धारण।

किसी रोगी में एंटीबॉडी निर्धारित करने के लिए रखनाविस्तृत एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया:रोगी के रक्त सीरम के तनुकरण में जोड़ें डायग्नोस्टिकम(मारे गए रोगाणुओं का निलंबन) और 37 डिग्री सेल्सियस पर कई घंटों के ऊष्मायन के बाद, उच्चतम सीरम तनुकरण (सीरम टिटर) नोट किया जाता है, जिस पर एग्लूटिनेशन हुआ, यानी, एक अवक्षेप का निर्माण हुआ।

एग्लूटिनेशन की प्रकृति और गति एंटीजन और एंटीबॉडी के प्रकार पर निर्भर करती है। एक उदाहरण विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ डायग्नोस्टिकम (ओ- और आर-एंटीजन) की बातचीत की ख़ासियत है। एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया के साथ ओ-डायग्नोस्टिकम(बैक्टीरिया गर्मी से मर जाते हैं, गर्मी को स्थिर बनाए रखते हैं ओ-एंटीजन)बारीक दानेदार एग्लूटीनेशन के रूप में होता है। एच-डायग्नोस्टिकम (फॉर्मेल्डिहाइड द्वारा मारे गए बैक्टीरिया, थर्मोलैबाइल फ्लैगेलर एच-एंटीजन को बनाए रखते हुए) के साथ एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया मोटे होती है और तेजी से आगे बढ़ती है।

यदि रोगी से पृथक रोगज़नक़ का निर्धारण करना आवश्यक हो, तो डाल दें सांकेतिक एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया,डायग्नोस्टिक एंटीबॉडीज (एग्लूटिनेटिंग सीरम) का उपयोग करके, रोगज़नक़ का सीरोटाइपिंग किया जाता है। एक सांकेतिक प्रतिक्रिया कांच की स्लाइड पर की जाती है। रोगी से पृथक रोगज़नक़ की एक शुद्ध संस्कृति को 1:10 या 1:20 के कमजोर पड़ने पर डायग्नोस्टिक एग्लूटीनेटिंग सीरम की एक बूंद में जोड़ा जाता है। पास में एक नियंत्रण रखा गया है: सीरम के बजाय, सोडियम क्लोराइड समाधान की एक बूंद लगाई जाती है। जब सीरम और रोगाणुओं से युक्त एक बूंद में फ्लोकुलेंट तलछट दिखाई देती है, ए व्यापक एग्लूटीनेशन प्रतिक्रियाएग्लूटीनेटिंग सीरम के बढ़ते तनुकरण के साथ टेस्ट ट्यूब में, जिसमें रोगज़नक़ निलंबन की 2-3 बूंदें डाली जाती हैं। एग्लूटीनेशन को तलछट की मात्रा और तरल की स्पष्टता की डिग्री के आधार पर ध्यान में रखा जाता है। प्रतिक्रिया को सकारात्मक माना जाता है यदि एग्लूटिनेशन डायग्नोस्टिक सीरम के टिटर के करीब कमजोर पड़ने पर देखा जाता है। उसी समय, नियंत्रणों को ध्यान में रखा जाता है: आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान के साथ पतला सीरम पारदर्शी होना चाहिए, एक ही समाधान में रोगाणुओं का निलंबन तलछट के बिना समान रूप से बादलदार होना चाहिए।

विभिन्न संबंधित जीवाणुओं को एक ही डायग्नोस्टिक एग्लूटीनेटिंग सीरम द्वारा एग्लूटीनेट किया जा सकता है, जिससे उनकी पहचान मुश्किल हो जाती है। इसलिए वे उपयोग करते हैं अधिशोषित एग्लूटीनेटिंग सीरा,जिसमें से क्रॉस-रिएक्टिंग एंटीबॉडीज को संबंधित बैक्टीरिया द्वारा सोखकर हटा दिया गया है। ऐसे सीरा एंटीबॉडीज़ को बनाए रखते हैं जो केवल किसी दिए गए जीवाणु के लिए विशिष्ट होते हैं। विशेष मोनोरिसेप्टर डायग्नोस्टिक एग्लूटीनेटिंग सीरा का उत्पादन ए. कैस्टेलानी (1902) द्वारा प्रस्तावित किया गया था।

अप्रत्यक्ष (निष्क्रिय) रक्तगुल्म प्रतिक्रिया (आरएनजीए, आरपीजीए) उनकी सतह पर अधिशोषित एंटीजन या एंटीबॉडी के साथ लाल रक्त कोशिकाओं के उपयोग पर आधारित है, जिसकी रक्त सीरम के संबंधित एंटीबॉडी या एंटीजन के साथ बातचीत से लाल रक्त कोशिकाएं चिपक जाती हैं और नीचे तक जमा हो जाती हैं। टेस्ट ट्यूब या सेल वीस्कैलप्ड तलछट के रूप में (चित्र 13.2)। नकारात्मक प्रतिक्रिया की स्थिति में, लाल रक्त कोशिकाएं ■ एक "बटन" के रूप में व्यवस्थित हो जाती हैं। आमतौर पर, आरएनजीए में एंटीजेनिक एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम का उपयोग करके एंटीबॉडी का पता लगाया जाता है, जो कि सोखने योग्य एरिथ्रोसाइट्स है। परउन्हें एंटीजन के साथ. कभी-कभी एंटीबॉडी एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिक्स का उपयोग किया जाता है, जिस पर एंटीबॉडी का अधिशोषण किया जाता है। उदाहरण के लिए, इसमें एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी बोटुलिनम टॉक्सिन मिलाकर बोटुलिनम विष का पता लगाया जा सकता है (इस प्रतिक्रिया को कहा जाता है) रिवर्स अप्रत्यक्ष रक्तगुल्म प्रतिक्रिया- रोंग)। आरएनजीए का उपयोग संक्रामक रोगों के निदान और गोनैडोट्रोपिक हार्मोन का निर्धारण करने के लिए किया जाता है वीगर्भावस्था की स्थापना करते समय, दवाओं, हार्मोन और कुछ अन्य मामलों में अतिसंवेदनशीलता की पहचान करने के लिए मूत्र।

जमाव प्रतिक्रिया . रोगज़नक़ कोशिकाओं को प्रतिरक्षा निदान सीरम के साथ पूर्व-उपचारित स्टेफिलोकोसी का उपयोग करके निर्धारित किया जाता है। स्टेफिलोकोसी जिसमें प्रोटीन होता है ए,के प्रति लगाव होनाएफ.सी - इम्युनोग्लोबुलिन का टुकड़ा, गैर-विशिष्ट रूप से सोखने वाले रोगाणुरोधी एंटीबॉडी, जो फिर रोगियों से पृथक संबंधित रोगाणुओं के साथ सक्रिय केंद्रों के साथ बातचीत करते हैं। जमावट के परिणामस्वरूप, गुच्छे बनते हैं जिनमें स्टेफिलोकोसी, डायग्नोस्टिक सीरम एंटीबॉडी और पाए गए सूक्ष्म जीव शामिल होते हैं।

रक्तगुल्म निषेध प्रतिक्रिया (आरटीजीए) नाकाबंदी पर आधारित है, प्रतिरक्षा सीरम एंटीबॉडी द्वारा वायरल एंटीजन का दमन, जिसके परिणामस्वरूप वायरस लाल रक्त कोशिकाओं को एकत्रित करने की अपनी क्षमता खो देते हैं (चित्र 13.3)। आरटीजीए का उपयोग कई वायरल बीमारियों के निदान के लिए किया जाता है, जिनके प्रेरक कारक (इन्फ्लूएंजा वायरस, खसरा, रूबेला, टिक-जनित एन्सेफलाइटिस, आदि) विभिन्न जानवरों की लाल रक्त कोशिकाओं को एकत्रित कर सकते हैं।

रक्त समूहों के निर्धारण के लिए एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया रक्त समूह एंटीजन ए (II), बी (III) के खिलाफ प्रतिरक्षा सीरम एंटीबॉडी के साथ लाल रक्त कोशिकाओं के समूहन का उपयोग करके एबीओ प्रणाली (धारा 10.1.4.1 देखें) स्थापित करने के लिए उपयोग किया जाता है। नियंत्रण है: सीरम जिसमें एंटीबॉडीज़ नहीं होते हैं, यानी सीरम एबी (जीयू)रक्त प्रकार; समूह ए (II), बी (III) की लाल रक्त कोशिकाओं में निहित एंटीजन। नकारात्मक नियंत्रण में एंटीजन नहीं होते हैं, अर्थात, समूह 0 (I) एरिथ्रोसाइट्स का उपयोग किया जाता है।

में Rh कारक निर्धारित करने के लिए एग्लूटिनेशन प्रतिक्रियाएं(धारा 10.1.4.1 देखें) एंटी-रीसस सीरा (कम से कम दो अलग श्रृंखला) का उपयोग करें। यदि अध्ययन के तहत एरिथ्रोसाइट्स की झिल्ली पर एक आरएच एंटीजन है, तो इन कोशिकाओं का समूहन होता है। सभी रक्त समूहों के मानक आरएच-पॉजिटिव और आरएच-नेगेटिव एरिथ्रोसाइट्स नियंत्रण के रूप में कार्य करते हैं।

एंटी-रीसस एंटीबॉडी निर्धारित करने के लिए एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया (अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण)इंट्रावस्कुलर हेमोलिसिस वाले रोगियों में उपयोग किया जाता है। इनमें से कुछ रोगियों में, एंटी-रीसस एंटीबॉडी का पता लगाया जाता है, जो अपूर्ण और मोनोवैलेंट होते हैं। वे विशेष रूप से आरएच-पॉजिटिव एरिथ्रोसाइट्स के साथ बातचीत करते हैं, लेकिन उनके एग्लूटिनेशन का कारण नहीं बनते हैं। ऐसे अपूर्ण एंटीबॉडी की उपस्थिति अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण द्वारा निर्धारित की जाती है। ऐसा करने के लिए, एंटीग्लोबुलिन सीरम (मानव इम्युनोग्लोबुलिन के खिलाफ एंटीबॉडी) को एंटी-आरएच एंटीबॉडी + आरएच-पॉजिटिव एरिथ्रोसाइट्स की प्रणाली में जोड़ा जाता है, जो एरिथ्रोसाइट्स के एग्लूटिनेशन का कारण बनता है (चित्र 13.4)। कॉम्ब्स प्रतिक्रिया का उपयोग करते हुए, प्रतिरक्षा मूल के एरिथ्रोसाइट्स के इंट्रावास्कुलर लसीका से जुड़ी रोग संबंधी स्थितियों का निदान किया जाता है, उदाहरण के लिए, नवजात शिशु के हेमोलिटिक रोग: आरएच-पॉजिटिव भ्रूण के एरिथ्रोसाइट्स रक्त में घूमने वाले आरएच कारक के लिए अपूर्ण एंटीबॉडी के साथ जुड़ते हैं, जो कि आरएच-नेगेटिव मां से नाल के माध्यम से पारित हुआ।

वर्षा प्रतिक्रियाएँ

शीघ्र प्रतिक्रिया - आरपी (से)अव्य. प्रेसिपिटो- अवक्षेप) - यह बादल के रूप में एंटीबॉडी के साथ घुलनशील आणविक प्रतिजन के एक परिसर का गठन और अवक्षेपण है, जिसे कहा जाता है अवक्षेपणयह एंटीजन और एंटीबॉडी को समान मात्रा में मिलाने से बनता है; उनमें से एक की अधिकता प्रतिरक्षा जटिल गठन के स्तर को कम कर देती है।

अवक्षेपण अभिक्रियाएँ परखनलियों में की जाती हैं (रिंग अवक्षेपण प्रतिक्रिया),जैल, पोषक तत्व मीडिया, आदि में। एगर या एगरोज़ के अर्ध-तरल जैल में विभिन्न प्रकार की अवक्षेपण प्रतिक्रियाएं व्यापक हो गई हैं: ऑचटरलोनी के अनुसार दोहरा इम्यूनोडिफ्यूजन। रेडियल इम्यूनोडिफ्यूजन, इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिसऔर आदि।

वलय अवक्षेपण प्रतिक्रिया . प्रतिक्रिया प्रतिरक्षा सीरम के साथ संकीर्ण वर्षा ट्यूबों में की जाती है, जिस पर घुलनशील एंटीजन की परत होती है। एंटीजन और एंटीबॉडी के इष्टतम अनुपात के साथ, इन दो समाधानों की सीमा पर अवक्षेप की एक अपारदर्शी अंगूठी बनती है (चित्र 13.5)। तरल सीमा तक अभिकर्मकों के क्रमिक प्रसार के कारण एंटीजन की अधिकता रिंग अवक्षेपण प्रतिक्रिया के परिणाम को प्रभावित नहीं करती है। यदि अंगों या ऊतकों के उबले और फ़िल्टर किए गए जलीय अर्क को रिंग अवक्षेपण प्रतिक्रिया में एंटीजन के रूप में उपयोग किया जाता है, तो इस प्रतिक्रिया को कहा जाता है ताप अवक्षेपण प्रतिक्रिया (एस्कोली प्रतिक्रिया,एंथ्रेक्स के साथ/

ऑचटेरूनी के अनुसार दोहरी इम्यूनोडिफ्यूजन प्रतिक्रिया . प्रतिक्रिया स्थापित करने के लिए, पिघला हुआ अगर जेल एक कांच की प्लेट पर एक पतली परत में डाला जाता है और, इसके सख्त होने के बाद, 2-3 मिमी आकार के कुएं काट दिए जाते हैं। इन कुओं में एंटीजन और प्रतिरक्षा सीरा अलग-अलग रखे जाते हैं, जो एक-दूसरे की ओर फैलते हैं। मिलन बिंदु पर, समान अनुपात में, वे एक सफेद धारी के रूप में अवक्षेप बनाते हैं। बहुघटक प्रणालियों में, विभिन्न एंटीजन और सीरम एंटीबॉडी वाले कुओं के बीच अवक्षेप की कई रेखाएँ दिखाई देती हैं; समान एंटीजन के लिए, अवक्षेप रेखाएँ विलीन हो जाती हैं; गैर-समान लोगों के लिए, वे प्रतिच्छेद करते हैं (चित्र 13.6)।

रेडियल इम्युनोडिफ्यूजन प्रतिक्रिया . पिघले हुए अगर जेल के साथ प्रतिरक्षा सीरम को गिलास पर समान रूप से डाला जाता है। जेल में जमने के बाद, कुएँ बनाए जाते हैं जिनमें एंटीजन को विभिन्न तनुकरणों में रखा जाता है। एंटीजन, जेल में फैलकर, एंटीबॉडी वाले कुओं के चारों ओर अंगूठी के आकार का वर्षा क्षेत्र बनाता है (चित्र 13.7)। अवक्षेपण वलय का व्यास प्रतिजन सांद्रता के समानुपाती होता है। प्रतिक्रिया का उपयोग रक्त में विभिन्न वर्गों के इम्युनोग्लोबुलिन, पूरक प्रणाली के घटकों आदि की सामग्री को निर्धारित करने के लिए किया जाता है।

इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस- वैद्युतकणसंचलन और इम्यूनोप्रेसिपिटेशन का संयोजन: एंटीजन का मिश्रण जेल के कुओं में पेश किया जाता है और वैद्युतकणसंचलन का उपयोग करके जेल में अलग किया जाता है। फिर, प्रतिरक्षा सीरम को वैद्युतकणसंचलन क्षेत्रों के समानांतर खांचे में पेश किया जाता है, जिसके एंटीबॉडी, जेल में फैलते हुए, एंटीजन के साथ बैठक बिंदु पर वर्षा रेखाएं बनाते हैं।

फ़्लोक्यूलेशन प्रतिक्रिया(रेमन के अनुसार) (अक्षांश से) फ्लोकस -ऊन के टुकड़े) - टॉक्सिन-एंटीटॉक्सिन या टॉक्सॉइड-एंटीटॉक्सिन प्रतिक्रिया के दौरान एक टेस्ट ट्यूब में ओपेलेसेंस या फ्लोकुलेंट द्रव्यमान (इम्यूनोप्रेसिपिटेशन) की उपस्थिति। इसका उपयोग एंटीटॉक्सिक सीरम या टॉक्सोइड की गतिविधि को निर्धारित करने के लिए किया जाता है।

प्रतिरक्षा इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी- रोगाणुओं की इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी, अक्सर वायरस, उचित एंटीबॉडी के साथ इलाज किया जाता है। प्रतिरक्षा सीरम से उपचारित वायरस प्रतिरक्षा समुच्चय (माइक्रोप्रेसीपिटेट्स) बनाते हैं। विषाणुओं के चारों ओर एंटीबॉडी का एक "कोरोला" बनता है, जो फॉस्फोटंगस्टिक एसिड या अन्य इलेक्ट्रॉन-ऑप्टिकली सघन तैयारी के विपरीत होता है।

पूरक से जुड़ी प्रतिक्रियाएँ

पूरक से जुड़ी प्रतिक्रियाएँएंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स (पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया, रेडियल हेमोलिसिस, आदि) द्वारा पूरक के सक्रियण पर आधारित हैं।

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (आरएसके) यह है कि जब एंटीजन और एंटीबॉडी एक-दूसरे से मेल खाते हैं, तो वे एक प्रतिरक्षा परिसर बनाते हैं, जिसके माध्यम सेएफ.सी -एंटीबॉडी टुकड़ा पूरक (सी) से जुड़ा हुआ है, यानी, पूरक एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स से बंधा हुआ है। यदि एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स नहीं बनता है, तो पूरक मुक्त रहता है (चित्र 13.8)। आरएसके दो चरणों में किया जाता है: पहला चरण - तीन घटकों एंटीजन + एंटीबॉडी + पूरक वाले मिश्रण का ऊष्मायन; दूसरा चरण (संकेतक) - भेड़ के एरिथ्रोसाइट्स और उनके प्रति एंटीबॉडी वाले हेमोलिटिक सीरम से युक्त एक हेमोलिटिक प्रणाली को जोड़कर मिश्रण में मुक्त पूरक का पता लगाना। प्रतिक्रिया के पहले चरण में, जब एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स बनता है, पूरक बंधता है, और फिर दूसरे चरण में, एंटीबॉडी द्वारा संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स का हेमोलिसिस नहीं होगा; प्रतिक्रिया सकारात्मक है. यदि एंटीजन और एंटीबॉडी एक दूसरे से मेल नहीं खाते हैं (परीक्षण नमूने में कोई एंटीजन या एंटीबॉडी नहीं है), तो पूरक मुक्त रहता है और दूसरे चरण में एरिथ्रोसाइट - एंटी-एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स में शामिल हो जाएगा, जिससे हेमोलिसिस हो जाएगा; प्रतिक्रिया नकारात्मक है.

आरएससी का उपयोग कई संक्रामक रोगों के निदान के लिए किया जाता है, विशेष रूप से सिफलिस (वास्सरमैन प्रतिक्रिया) में।

रेडियल हेमोलिसिस प्रतिक्रिया (आरआरएच) ) भेड़ की लाल रक्त कोशिकाओं और पूरक युक्त अगर जेल के कुओं में रखा गया। जेल के कुओं में हेमोलिटिक सीरम (भेड़ की लाल रक्त कोशिकाओं के खिलाफ एंटीबॉडी) पेश करने के बाद, उनके चारों ओर एक हेमोलिसिस ज़ोन बनता है (एंटीबॉडी के रेडियल प्रसार के परिणामस्वरूप)। इस तरह, इन्फ्लूएंजा, रूबेला और टिक-बोर्न एन्सेफलाइटिस वाले मरीजों के रक्त सीरम में पूरक और हेमोलिटिक सीरम, साथ ही एंटीबॉडी की गतिविधि निर्धारित करना संभव है। ऐसा करने के लिए, वायरस के संबंधित एंटीजन को एरिथ्रोसाइट्स पर अधिशोषित किया जाता है, और रोगी के रक्त सीरम को इन एरिथ्रोसाइट्स वाले जेल के कुओं में जोड़ा जाता है। एंटीवायरल एंटीबॉडी एरिथ्रोसाइट्स पर अधिशोषित वायरल एंटीजन के साथ परस्पर क्रिया करते हैं, जिसके बाद

फिर पूरक घटक इस परिसर में शामिल हो जाते हैं, जिससे हेमोलिसिस होता है।

प्रतिरक्षा पालन प्रतिक्रिया (आईएआर) ) प्रतिरक्षा सीरम से उपचारित कॉर्पसकुलर एंटीजन (बैक्टीरिया, वायरस) द्वारा पूरक प्रणाली के सक्रियण पर आधारित है। परिणामस्वरूप, पूरक का एक सक्रिय तीसरा घटक (C3b) बनता है, जो प्रतिरक्षा परिसर के हिस्से के रूप में कॉर्पसकुलर एंटीजन से जुड़ जाता है। एरिथ्रोसाइट्स, प्लेटलेट्स और मैक्रोफेज में C3b के लिए रिसेप्टर्स होते हैं, जिसके कारण, जब ये कोशिकाएं C3b ले जाने वाले प्रतिरक्षा परिसरों के साथ मिश्रित होती हैं, तो उनका संयोजन और समूहन होता है।

निराकरण प्रतिक्रिया

प्रतिरक्षा सीरम के एंटीबॉडी संवेदनशील कोशिकाओं और ऊतकों पर रोगाणुओं या उनके विषाक्त पदार्थों के हानिकारक प्रभाव को बेअसर करने में सक्षम हैं, जो एंटीबॉडी द्वारा माइक्रोबियल एंटीजन की नाकाबंदी से जुड़ा है, अर्थात। निष्प्रभावीकरण. निराकरण प्रतिक्रिया(आरएन) जानवरों में या संवेदनशील परीक्षण वस्तुओं (सेल कल्चर, भ्रूण) में एक एंटीजन-एंटीबॉडी मिश्रण पेश करके किया जाता है। जानवरों और परीक्षण वस्तुओं में सूक्ष्मजीवों या उनके एंटीजन या विषाक्त पदार्थों के हानिकारक प्रभावों की अनुपस्थिति में, वे प्रतिरक्षा सीरम के तटस्थ प्रभाव की बात करते हैं और इसलिए, एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स की बातचीत की विशिष्टता (छवि 13.9)।

इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रतिक्रिया - आरआईएफ (कून विधि)

विधि के तीन मुख्य प्रकार हैं: प्रत्यक्ष, अप्रत्यक्ष (चित्र 13.10), पूरक के साथ। कून्स प्रतिक्रिया माइक्रोबियल एंटीजन की पहचान करने या एंटीबॉडी निर्धारित करने के लिए एक तीव्र निदान पद्धति है।

प्रत्यक्ष आरआईएफ विधि इस तथ्य पर आधारित है कि फ्लोरोक्रोम के साथ लेबल किए गए एंटीबॉडी के साथ प्रतिरक्षा सीरा के साथ इलाज किए गए ऊतक एंटीजन या रोगाणु एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप की यूवी किरणों में चमकने में सक्षम हैं।

इस तरह के ल्यूमिनसेंट सीरम से उपचारित स्मीयर में बैक्टीरिया कोशिका की परिधि के साथ हरे बॉर्डर के रूप में चमकते हैं।

अप्रत्यक्ष आरआईएफ विधि इसमें फ़्लोरोक्रोम के साथ लेबल किए गए एंटीग्लोबुलिन (एंटी-एंटीबॉडी) सीरम का उपयोग करके एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स की पहचान करना शामिल है। ऐसा करने के लिए, रोगाणुओं के निलंबन से स्मीयरों को रोगाणुरोधी खरगोश निदान सीरम से एंटीबॉडी के साथ इलाज किया जाता है। फिर उन एंटीबॉडी को धोया जाता है जो माइक्रोबियल एंटीजन से बंधे नहीं होते हैं, और रोगाणुओं पर बचे हुए एंटीबॉडी का पता फ्लोरोक्रोम के साथ लेबल किए गए एंटीग्लोबुलिन (खरगोश विरोधी) सीरम के साथ स्मीयर का इलाज करके लगाया जाता है। परिणामस्वरूप, फ्लोरोक्रोम से लेबल किए गए सूक्ष्म जीव + रोगाणुरोधी खरगोश एंटीबॉडीज + खरगोश विरोधी एंटीबॉडी का एक कॉम्प्लेक्स बनता है। इस परिसर को प्रत्यक्ष विधि की तरह, फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप में देखा जाता है।

एंजाइम इम्यूनोसॉर्बेंट विधि, या विश्लेषण (एलिसा)

एलिसा -एक टैग एंजाइम (हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज, बीटा-गैलेक्टोसिडेज या क्षारीय फॉस्फेट) से संयुग्मित उनके संबंधित एंटीबॉडी का उपयोग करके एंटीजन का पता लगाना। एंटीजन को एंजाइम-लेबल प्रतिरक्षा सीरम के साथ संयोजित करने के बाद, सब्सट्रेट/क्रोमोजेन को मिश्रण में जोड़ा जाता है। सब्सट्रेट को एंजाइम द्वारा साफ़ किया जाता है, और प्रतिक्रिया उत्पाद का रंग बदल जाता है - रंग की तीव्रता बाध्य एंटीजन और एंटीबॉडी अणुओं की संख्या के सीधे आनुपातिक होती है।

ठोस चरण एलिसा - एक प्रतिरक्षाविज्ञानी परीक्षण का सबसे आम प्रकार, जब प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया (एंटीजन या एंटीबॉडी) के घटकों में से एक को ठोस वाहक पर अवशोषित किया जाता है, उदाहरण के लिए, पॉलीस्टीरिन प्लेटों के कुओं में

एंटीबॉडी का निर्धारण करते समय, रोगी के रक्त सीरम, एक एंजाइम के साथ लेबल किया गया एंटीग्लोबुलिन सीरम, और एंजाइम के लिए एक सब्सट्रेट (क्रोमोजेन) को क्रमिक रूप से सॉर्बड एंटीजन के साथ प्लेटों के कुओं में जोड़ा जाता है।

हर बार एक और घटक जोड़ने के बाद, अनबाउंड अभिकर्मकों को अच्छी तरह से धोकर कुओं से हटा दिया जाता है। यदि परिणाम सकारात्मक है, तो क्रोमोजेन घोल का रंग बदल जाता है। एक ठोस चरण वाहक को न केवल एंटीजन के साथ, बल्कि एंटीबॉडी के साथ भी संवेदनशील बनाया जा सकता है। फिर वांछित एंटीजन को सोर्बड एंटीबॉडी के साथ कुओं में जोड़ा जाता है, एक एंजाइम के साथ लेबल किए गए एंटीजन के खिलाफ प्रतिरक्षा सीरम जोड़ा जाता है, और फिर एंजाइम के लिए एक सब्सट्रेट जोड़ा जाता है।

प्रतिस्पर्धी एलिसा विकल्प . लक्ष्य एंटीजन और एंजाइम-लेबल एंटीजन सीमित मात्रा में प्रतिरक्षा सीरम एंटीबॉडी को बांधने के लिए एक दूसरे के साथ प्रतिस्पर्धा करते हैं। एक और परीक्षण - आप जिस एंटीबॉडी की तलाश कर रहे हैं

और लेबल किए गए एंटीबॉडी एंटीजन के लिए एक दूसरे से प्रतिस्पर्धा करते हैं।

रेडियोइम्यूनोलॉजिकल विधि, या विश्लेषण (आरआईए)

रेडियोन्यूक्लाइड (125 जे, 14 सी, 3 एच, 51 करोड़, आदि) के साथ लेबल किए गए एंटीजन या एंटीबॉडी का उपयोग करके एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रिया पर आधारित एक अत्यधिक संवेदनशील विधि। उनकी परस्पर क्रिया के बाद, परिणामी रेडियोधर्मी प्रतिरक्षा परिसर को अलग कर दिया जाता है और इसकी रेडियोधर्मिता उपयुक्त काउंटर (बीटा या गामा विकिरण) में निर्धारित की जाती है:

विकिरण की तीव्रता बाध्य एंटीजन और एंटीबॉडी अणुओं की संख्या के सीधे आनुपातिक है।

पर ठोस-चरण आरआईए संस्करण प्रतिक्रिया घटकों (एंटीजन या एंटीबॉडी) में से एक को ठोस समर्थन पर सोख लिया जाता है, उदाहरण के लिए, पॉलीस्टाइनिन माइक्रोपैनल के कुओं में। दूसरा तरीका विकल्प है प्रतिस्पर्धी आरआईए।वांछित एंटीजन और रेडियोन्यूक्लाइड-लेबल एंटीजन सीमित मात्रा में प्रतिरक्षा सीरम एंटीबॉडी को बांधने के लिए एक दूसरे के साथ प्रतिस्पर्धा करते हैं। इस विकल्प का उपयोग परीक्षण सामग्री में एंटीजन की मात्रा निर्धारित करने के लिए किया जाता है।

आरआईए का उपयोग माइक्रोबियल एंटीजन की पहचान करने, हार्मोन, एंजाइम, दवाओं और इम्युनोग्लोबुलिन के साथ-साथ परीक्षण सामग्री में मामूली सांद्रता में निहित अन्य पदार्थों को निर्धारित करने के लिए किया जाता है - 10~ |0 -I0~ 12 ग्राम/लीटर। यह विधि एक निश्चित पर्यावरणीय खतरा उत्पन्न करती है।

immunoblotting

इम्यूनोब्लॉटिंग (आईबी)- वैद्युतकणसंचलन और एलिसा या आरआईए के संयोजन पर आधारित एक अत्यधिक संवेदनशील विधि।

पॉलीएक्रिलामाइड जेल में इलेक्ट्रोफोरेसिस का उपयोग करके एंटीजन को अलग किया जाता है, फिर स्थानांतरित किया जाता है (ब्लॉटिंग - अंग्रेजी से)। दाग, दाग) जेल से सक्रिय कागज या नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली पर और एलिसा का उपयोग करके विकसित किया गया। कंपनियाँ "ब्लाट्स" वाली ऐसी पट्टियाँ बनाती हैं

प्रतिजन। इन पट्टियों पर मरीज का सीरम लगाया जाता है। फिर, ऊष्मायन के बाद, रोगी को अनबाउंड एंटीबॉडी से धोया जाता है और एक एंजाइम के साथ लेबल किए गए मानव इम्युनोग्लोबुलिन के खिलाफ सीरम लगाया जाता है। पट्टी पर बने मानव आईजी के खिलाफ जटिल एंटीजन + रोगी एंटीबॉडी + एंटीबॉडी का पता एक सब्सट्रेट/क्रोमोजेन को जोड़कर लगाया जाता है जो एक एंजाइम की कार्रवाई के तहत रंग बदलता है (चित्र 13.12)।

आईबी का उपयोग एचआईवी संक्रमण आदि के लिए निदान पद्धति के रूप में किया जाता है।

13.1. एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रियाएं और उनके अनुप्रयोग

जब कोई एंटीजन डाला जाता है तो शरीर में एंटीबॉडीज बन जाती हैं। एंटीबॉडीज उस एंटीजन के पूरक हैं जो उनके संश्लेषण का कारण बना और उससे जुड़ने में सक्षम हैं। एंटीजन का एंटीबॉडी से बंधन दो चरणों में होता है। पहला चरण विशिष्ट है, जिसमें एंटीबॉडी के फैब टुकड़े के सक्रिय केंद्र में एंटीजेनिक निर्धारक का तेजी से बंधन होता है। यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि बंधन वैन डेर वाल्स बलों, हाइड्रोजन और हाइड्रोफोबिक इंटरैक्शन के कारण होता है। बंधन की ताकत एंटीबॉडी की सक्रिय साइट और एंटीजन के एपिटोप के बीच स्थानिक पत्राचार की डिग्री से निर्धारित होती है। विशिष्ट चरण के बाद, एक धीमा चरण शुरू होता है - गैर-विशिष्ट, जो एक दृश्य भौतिक घटना द्वारा प्रकट होता है (उदाहरण के लिए, एग्लूटिनेशन के दौरान गुच्छे का निर्माण, आदि)।

प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाएं एंटीबॉडी और एंटीजन के बीच परस्पर क्रिया होती हैं, और ये प्रतिक्रियाएं विशिष्ट और अत्यधिक संवेदनशील होती हैं। चिकित्सा पद्धति में इनका व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं की मदद से निम्नलिखित समस्याओं का समाधान किया जा सकता है:

ज्ञात एंटीजन (एंटीजेनिक डायग्नोस्टिकम) द्वारा अज्ञात एंटीबॉडी का निर्धारण। यह कार्य तब होता है जब रोगी के रक्त सीरम (सेरोडायग्नोसिस) में रोगज़नक़ के प्रति एंटीबॉडी निर्धारित करना आवश्यक होता है। एंटीबॉडी ढूँढने से आप निदान की पुष्टि कर सकते हैं;

ज्ञात एंटीबॉडी (नैदानिक ​​सीरम) का उपयोग करके अज्ञात एंटीजन का निर्धारण। यह अध्ययन रोगी की सामग्री (सीरोटाइपिंग) से पृथक रोगज़नक़ संस्कृति की पहचान करते समय, साथ ही पता लगाते समय किया जाता है

रक्त और अन्य जैविक तरल पदार्थों में माइक्रोबियल एंटीजन और उनके विषाक्त पदार्थ। प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाएं कई प्रकार की होती हैं, जो स्टेजिंग की तकनीक और रिकॉर्ड किए गए प्रभाव में भिन्न होती हैं। ये एग्लूटिनेशन प्रतिक्रियाएं (आरए), अवक्षेपण प्रतिक्रियाएं (आरपी), पूरक (आरएससी) से जुड़ी प्रतिक्रियाएं, लेबल किए गए घटकों (आरआईएफ, एलिसा, आरआईए) का उपयोग करने वाली प्रतिक्रियाएं हैं।

13.2. एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया

एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया (आरए) इलेक्ट्रोलाइट्स की उपस्थिति में एंटीबॉडी के साथ एक एंटीजन की बातचीत की एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया है, और एंटीजन एक कणिका अवस्था (एरिथ्रोसाइट्स, बैक्टीरिया, अधिशोषित एंटीजन के साथ लेटेक्स कण) में है। एग्लूटिनेशन के दौरान, कणिका प्रतिजन एंटीबॉडी द्वारा एक साथ चिपक जाते हैं, जो एक फ्लोकुलेंट अवक्षेप के गठन से प्रकट होता है। गुच्छे का निर्माण इस तथ्य के कारण होता है कि एंटीबॉडी के दो सक्रिय केंद्र होते हैं, और एंटीजन बहुसंयोजक होते हैं, अर्थात। कई एंटीजेनिक निर्धारक हैं। आरए का उपयोग रोगी की सामग्री से पृथक रोगज़नक़ की पहचान करने के लिए किया जाता है, साथ ही रोगी के रक्त सीरम में रोगज़नक़ के प्रति एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए किया जाता है (उदाहरण के लिए, ब्रुसेलोसिस के लिए राइट और हेडलसन प्रतिक्रियाएं, टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड बुखार के लिए विडाल प्रतिक्रिया)।

आरए का निदान करने का सबसे सरल तरीका कांच पर प्रतिक्रिया है; यह एक अनुमानित आरए है, जिसका उपयोग रोगी से पृथक रोगज़नक़ को निर्धारित करने के लिए किया जाता है। जब एक प्रतिक्रिया स्थापित हो जाती है, तो डायग्नोस्टिक एग्लूटिनेटिंग सीरम को एक ग्लास स्लाइड पर (1:10 या 1:20 के तनुकरण पर) लगाया जाता है, फिर रोगी से एक कल्चर जोड़ा जाता है। यदि बूंद में फ्लोकुलेंट तलछट दिखाई दे तो प्रतिक्रिया सकारात्मक होती है। पास में एक नियंत्रण रखा गया है: सीरम के बजाय, सोडियम क्लोराइड समाधान की एक बूंद लगाई जाती है। यदि डायग्नोस्टिक एग्लूटीनेटिंग सीरम 1 को अधिशोषित नहीं किया जाता है, तो इसे पतला कर दिया जाता है (टाइटर तक - वह पतलापन जिससे एग्लूटिनेशन होना चाहिए), यानी। टेस्ट ट्यूब में वृद्धि के साथ विस्तारित आरए डालें

1 अनसोर्बड एग्लूटीनेटिंग सीरम उन संबंधित बैक्टीरिया को एग्लूटीनेट कर सकता है जिनमें सामान्य (क्रॉस-रिएक्टिंग) एंटीजन होते हैं। इसलिए वे उपयोग करते हैंअधिशोषित एग्लूटीनेटिंग सीरा, जिसमें से क्रॉस-रिएक्टिंग एंटीबॉडीज को संबंधित बैक्टीरिया द्वारा सोखकर हटा दिया गया है। ऐसे सीरा एंटीबॉडीज़ को बनाए रखते हैं जो केवल किसी दिए गए जीवाणु के लिए विशिष्ट होते हैं।

एग्लूटीनेटिंग सीरम का पतलापन, जिसमें रोगी से पृथक रोगज़नक़ के निलंबन की 2-3 बूंदें मिलाई जाती हैं। एग्लूटीनेशन को तलछट की मात्रा और टेस्ट ट्यूब में तरल के साफ होने की डिग्री के आधार पर ध्यान में रखा जाता है। प्रतिक्रिया को सकारात्मक माना जाता है यदि एग्लूटिनेशन डायग्नोस्टिक सीरम के टिटर के करीब कमजोर पड़ने पर देखा जाता है। प्रतिक्रिया नियंत्रण के साथ होती है: आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान के साथ पतला सीरम पारदर्शी होना चाहिए, उसी समाधान में रोगाणुओं का निलंबन तलछट के बिना समान रूप से बादलदार होना चाहिए।

रोगी के रक्त सीरम में रोगज़नक़ के प्रति एंटीबॉडी निर्धारित करने के लिए, पूर्ण पैमाने पर आरए का उपयोग किया जाता है। इसे स्थापित करते समय, रोगी के रक्त सीरम को टेस्ट ट्यूब में पतला किया जाता है और टेस्ट ट्यूब में समान मात्रा में डायग्नोस्टिकम सस्पेंशन (मारे गए रोगाणुओं का निलंबन) जोड़ा जाता है। ऊष्मायन के बाद, उच्चतम सीरम तनुकरण जिस पर एग्लूटिनेशन हुआ, निर्धारित किया जाता है, अर्थात। एक अवक्षेप (सीरम टिटर) बन गया है। इस मामले में, ओ-डायग्नोस्टिकम (थर्मोस्टेबल ओ-एंटीजन को बनाए रखते हुए गर्म करने से मारे गए बैक्टीरिया) के साथ एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया बारीक दाने वाले एग्लूटिनेशन के रूप में होती है। एच-डायग्नोस्टिकम (फॉर्मेल्डिहाइड द्वारा मारे गए बैक्टीरिया, थर्मोलैबाइल फ्लैगेलर एच-एंटीजन को बनाए रखते हुए) के साथ एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया मोटे होती है और तेजी से आगे बढ़ती है।

अप्रत्यक्ष (निष्क्रिय) रक्तगुल्म प्रतिक्रिया(आरएनजीए या आरपीजीए) आरए का एक प्रकार है। यह विधि अत्यधिक संवेदनशील है. आरएनजीए की मदद से, दो समस्याओं को हल किया जा सकता है: रोगी के रक्त सीरम में एंटीबॉडी निर्धारित करने के लिए, जिसमें एक एंटीजेनिक एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम जोड़ा जाता है, जो एरिथ्रोसाइट्स है जिस पर ज्ञात एंटीजन सोख लिए जाते हैं; परीक्षण सामग्री में एंटीजन की उपस्थिति निर्धारित करें। इस मामले में, प्रतिक्रिया को कभी-कभी रिवर्स इनडायरेक्ट हेमग्लूटीनेशन रिएक्शन (RONHA) कहा जाता है। प्रक्रिया के दौरान, एक एंटीबॉडी एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम (उनकी सतह पर अवशोषित एंटीबॉडी वाले एरिथ्रोसाइट्स) को परीक्षण सामग्री में जोड़ा जाता है। इस प्रतिक्रिया में, लाल रक्त कोशिकाएं वाहक के रूप में कार्य करती हैं और प्रतिरक्षा समुच्चय के निर्माण में निष्क्रिय रूप से शामिल होती हैं। एक सकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ, निष्क्रिय रूप से चिपकी हुई लाल रक्त कोशिकाएं छेद के निचले हिस्से को स्कैलप्ड किनारों ("छाता") के साथ एक समान परत में ढक देती हैं; एग्लूटिनेशन की अनुपस्थिति में, लाल रक्त कोशिकाएं छिद्र के केंद्रीय अवकाश में जमा हो जाती हैं, जिससे तेजी से परिभाषित किनारों के साथ एक कॉम्पैक्ट "बटन" बनता है।

जमाव प्रतिक्रियाइसका उपयोग रोगज़नक़ कोशिकाओं (एंटीजन) को निर्धारित करने के लिए अधिशोषित एंटीबॉडी का उपयोग करके किया जाता है स्टाफीलोकोकस ऑरीअस,प्रोटीन ए युक्त। प्रोटीन ए इम्युनोग्लोबुलिन के एफसी टुकड़े के लिए आकर्षण रखता है। इसके लिए धन्यवाद, एंटीबॉडी एफसी टुकड़े के माध्यम से अप्रत्यक्ष रूप से स्टेफिलोकोकस से बंधते हैं, और फैब टुकड़े बाहर की ओर उन्मुख होते हैं और रोगियों से पृथक संबंधित रोगाणुओं के साथ बातचीत करने में सक्षम होते हैं। इस मामले में, गुच्छे बनते हैं।

रक्तगुल्म निषेध प्रतिक्रिया (HAI)इसका उपयोग वायरल संक्रमणों के निदान में किया जाता है, और केवल हेमग्लूटिनेटिंग वायरस के कारण होने वाले संक्रमणों के निदान में। इन वायरस की सतह पर एक प्रोटीन होता है - हेमाग्लगुटिनिन, जो वायरस में लाल रक्त कोशिकाओं को जोड़ने पर हेमग्लगुटिनेशन प्रतिक्रिया (एचआरए) के लिए जिम्मेदार होता है। आरटीजीए में वायरल एंटीजन को एंटीबॉडी के साथ अवरुद्ध करना शामिल है, जिसके परिणामस्वरूप वायरस लाल रक्त कोशिकाओं को एकत्रित करने की अपनी क्षमता खो देते हैं।

कॉम्ब्स प्रतिक्रिया -अपूर्ण एंटीबॉडी के निर्धारण के लिए आरए। ब्रुसेलोसिस जैसे कुछ संक्रामक रोगों में, रोगज़नक़ के प्रति अपूर्ण एंटीबॉडी रोगी के रक्त सीरम में फैलती हैं। अपूर्ण एंटीबॉडीज़ को ब्लॉकिंग एंटीबॉडीज़ कहा जाता है क्योंकि उनमें पूर्ण एंटीबॉडीज़ की तरह एक एंटीजन-बाइंडिंग साइट होती है, दो नहीं। इसलिए, जब एक एंटीजेनिक डायग्नोस्टिकम जोड़ा जाता है, तो अपूर्ण एंटीबॉडी एंटीजन से जुड़ते हैं, लेकिन उन्हें एक साथ चिपकाते नहीं हैं। प्रतिक्रिया प्रकट करने के लिए, एंटीग्लोबुलिन सीरम (मानव इम्युनोग्लोबुलिन के लिए एंटीबॉडी) जोड़ा जाता है, जिससे प्रतिक्रिया के पहले चरण में गठित प्रतिरक्षा परिसरों (एंटीजेनिक डायग्नोस्टिकम + अपूर्ण एंटीबॉडी) का समूहन हो जाएगा।

अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स प्रतिक्रिया का उपयोग इंट्रावास्कुलर हेमोलिसिस वाले रोगियों में किया जाता है। इनमें से कुछ रोगियों में, अपूर्ण मोनोवैलेंट एंटी-रीसस एंटीबॉडी का पता लगाया जाता है। वे विशेष रूप से आरएच-पॉजिटिव एरिथ्रोसाइट्स के साथ बातचीत करते हैं, लेकिन उनके एग्लूटिनेशन का कारण नहीं बनते हैं। इसलिए, एंटीग्लोबुलिन सीरम को एंटी-आरएच एंटीबॉडी + आरएच-पॉजिटिव एरिथ्रोसाइट्स की प्रणाली में जोड़ा जाता है, जो एरिथ्रोसाइट्स के एग्लूटिनेशन का कारण बनता है। कॉम्ब्स प्रतिक्रिया का उपयोग करते हुए, प्रतिरक्षा मूल के एरिथ्रोसाइट्स के इंट्रावास्कुलर लसीका से जुड़ी रोग संबंधी स्थितियों का निदान किया जाता है, उदाहरण के लिए, आरएच संघर्ष के कारण नवजात शिशु के हेमोलिटिक रोग।

रक्त समूह निर्धारित करने के लिए आरएरक्त समूह एंटीजन ए (II), बी (III) के लिए प्रतिरक्षा सीरम एंटीबॉडी द्वारा एरिथ्रोसाइट्स के समूहन पर आधारित है। नियंत्रण सीरम है जिसमें एंटीबॉडी नहीं होते हैं, यानी। सीरम AB(IV) रक्त समूह, और समूह A(P) और B(III) के एरिथ्रोसाइट एंटीजन। समूह 0(I) लाल रक्त कोशिकाओं का उपयोग नकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया जाता है क्योंकि उनमें एंटीजन नहीं होते हैं।

आरएच कारक निर्धारित करने के लिए, एंटी-आरएच सीरा का उपयोग किया जाता है (कम से कम दो अलग-अलग श्रृंखलाएं)। यदि अध्ययन के तहत एरिथ्रोसाइट्स की झिल्ली पर एक आरएच एंटीजन है, तो इन कोशिकाओं का समूहन होता है।

13.3. शीघ्र प्रतिक्रिया

आरपी इलेक्ट्रोलाइट्स की उपस्थिति में एंटीजन के साथ एंटीबॉडी की बातचीत की एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया है, और एंटीजन घुलनशील अवस्था में होता है। वर्षा के दौरान, घुलनशील एंटीजन एंटीबॉडी द्वारा अवक्षेपित होते हैं, जो वर्षा बैंड के रूप में बादल के रूप में प्रकट होता है। जब दोनों अभिकर्मकों को समान अनुपात में मिलाया जाता है तो दृश्य अवक्षेप का निर्माण देखा जाता है। उनमें से एक की अधिकता अवक्षेपित प्रतिरक्षा परिसरों की संख्या को कम कर देती है। अवक्षेपण प्रतिक्रिया करने के विभिन्न तरीके हैं।

वलय अवक्षेपण प्रतिक्रियाछोटे व्यास वाली अवक्षेपण नलिकाओं में रखा जाता है। प्रतिरक्षा सीरम को टेस्ट ट्यूब में जोड़ा जाता है और घुलनशील एंटीजन को सावधानीपूर्वक स्तरित किया जाता है। यदि परिणाम सकारात्मक है, तो दो समाधानों के इंटरफेस पर एक दूधिया वलय बनता है। रिंग अवक्षेपण प्रतिक्रिया, जिसका उपयोग अंगों और ऊतकों में एंटीजन की उपस्थिति निर्धारित करने के लिए किया जाता है, जिसके अर्क को उबाला और फ़िल्टर किया जाता है, को थर्मोप्रेसिपिटेशन प्रतिक्रिया (थर्मोस्टेबल एंथ्रेक्स एंटीजन निर्धारित करने के लिए एस्कोली प्रतिक्रिया) कहा जाता है।

ऑचटरलोनी डबल इम्युनोडिफ्यूजन प्रतिक्रिया।यह प्रतिक्रिया अगर जेल में की जाती है। समान मोटाई की जेल की एक परत में, कुओं को एक दूसरे से एक निश्चित दूरी पर काटा जाता है और क्रमशः एंटीजन और प्रतिरक्षा सीरम से भर दिया जाता है। इसके बाद, एंटीजन और एंटीबॉडी जेल में फैल जाते हैं, एक-दूसरे से मिलते हैं और प्रतिरक्षा परिसरों का निर्माण करते हैं, जो जेल में अवक्षेपित हो जाते हैं और सटीक रेखाओं के रूप में दिखाई देने लगते हैं।

पोषण। इस प्रतिक्रिया का उपयोग अज्ञात एंटीजन या एंटीबॉडी की पहचान करने के लिए किया जा सकता है, और विभिन्न एंटीजन के बीच समानता का परीक्षण करने के लिए भी किया जा सकता है: यदि एंटीजन समान हैं, तो अवक्षेपण रेखाएं विलीन हो जाती हैं, यदि एंटीजन समान नहीं हैं, तो अवक्षेपण रेखाएं एक दूसरे को काटती हैं, यदि एंटीजन आंशिक रूप से हैं समान, एक स्पर बनता है।

रेडियल इम्युनोडिफ्यूजन प्रतिक्रिया।पिघले हुए अगर जेल में एंटीबॉडीज़ मिलाई जाती हैं और जेल को कांच पर एक समान परत में लगाया जाता है। जेल में कुओं को काट दिया जाता है और विभिन्न सांद्रता के एंटीजन समाधानों की एक मानक मात्रा उनमें जोड़ दी जाती है। ऊष्मायन के दौरान, एंटीजन कुएं से रेडियल रूप से फैलते हैं और, एंटीबॉडी से मिलकर, एक अवक्षेपण वलय बनाते हैं। जब तक कुएं में अतिरिक्त एंटीजन रहता है, अवक्षेपण वलय के व्यास में धीरे-धीरे वृद्धि होती रहती है। इस विधि का उपयोग परीक्षण समाधान में एंटीजन या एंटीबॉडी निर्धारित करने के लिए किया जाता है (उदाहरण के लिए, रक्त सीरम में विभिन्न वर्गों के इम्युनोग्लोबुलिन की एकाग्रता निर्धारित करने के लिए)।

इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस।एंटीजन मिश्रण को पहले इलेक्ट्रोफोरेटिक रूप से अलग किया जाता है, फिर अवक्षेपित एंटीसीरम को प्रोटीन आंदोलन की दिशा में चलने वाले खांचे में जोड़ा जाता है। एंटीजन और एंटीबॉडी एक दूसरे की ओर जेल में फैल जाते हैं; परस्पर क्रिया करते हुए, वे धनुषाकार अवक्षेपण रेखाएँ बनाते हैं।

फ़्लोक्यूलेशन प्रतिक्रिया(रेमन के अनुसार) - एक प्रकार की अवक्षेपण प्रतिक्रिया जिसका उपयोग एंटीटॉक्सिक सीरम या टॉक्सोइड की गतिविधि को निर्धारित करने के लिए किया जाता है। प्रतिक्रिया परीक्षण ट्यूबों में की जाती है। एक परखनली में जहां टॉक्सोइड और एंटीटॉक्सिन एक समान अनुपात में होते हैं, वहां मैलापन देखा जाता है।

13.4. पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया

एंटीबॉडीज, संबंधित एंटीजन के साथ बातचीत करके, अतिरिक्त पूरक (प्रथम प्रणाली) को बांधते हैं। पूरक निर्धारण का एक संकेतक हेमोलिटिक सीरम के साथ संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स है, अर्थात। लाल रक्त कोशिकाओं के प्रति एंटीबॉडी (दूसरी प्रणाली)। यदि पूरक पहली प्रणाली में तय नहीं है, अर्थात। यदि एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रिया नहीं होती है, तो संवेदनशील लाल रक्त कोशिकाएं पूरी तरह से नष्ट हो जाती हैं (नकारात्मक प्रतिक्रिया)। जब संवेदीकृत एरिथ्रोसाइट्स को जोड़ने के बाद पहली प्रणाली के प्रतिरक्षा परिसरों द्वारा पूरक तय किया जाता है, तो हेमोलिसिस होता है

अनुपस्थित (सकारात्मक प्रतिक्रिया)। पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया का उपयोग संक्रामक रोगों (गोनोरिया, सिफलिस, इन्फ्लूएंजा, आदि) के निदान के लिए किया जाता है।

13.5. निराकरण प्रतिक्रिया

रोगाणुओं और उनके विषाक्त पदार्थों का मानव शरीर के अंगों और ऊतकों पर हानिकारक प्रभाव पड़ता है। एंटीबॉडीज़ इन हानिकारक एजेंटों से जुड़ने और उन्हें अवरुद्ध करने में सक्षम हैं, यानी। बेअसर करना. नैदानिक ​​​​तटस्थीकरण प्रतिक्रिया एंटीबॉडी की इस विशेषता पर आधारित है। यह जानवरों में या संवेदनशील परीक्षण वस्तुओं (सेल कल्चर, भ्रूण) में एक एंटीजन-एंटीबॉडी मिश्रण पेश करके किया जाता है। उदाहरण के लिए, किसी रोगी की सामग्री में विषाक्त पदार्थों का पता लगाने के लिए, पहले समूह के जानवरों को रोगी की सामग्री का इंजेक्शन लगाया जाता है। दूसरे समूह के जानवरों को समान सामग्री के साथ इंजेक्शन लगाया जाता है, उचित एंटीसेरम के साथ पूर्व-उपचार किया जाता है। सामग्री में विष होने पर पहले समूह के जानवर मर जाते हैं। जानवरों का दूसरा समूह जीवित रहता है; विष का हानिकारक प्रभाव स्वयं प्रकट नहीं होता है, क्योंकि यह निष्प्रभावी हो जाता है।

13.6. लेबल किए गए एंटीबॉडी या एंटीजन का उपयोग करके प्रतिक्रियाएं

13.6.1. इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रतिक्रिया (आरआईएफ, कून्स विधि)

इस पद्धति का उपयोग एक्सप्रेस डायग्नोस्टिक्स के लिए किया जाता है। इसका उपयोग माइक्रोबियल एंटीजन और एंटीबॉडी दोनों का पता लगाने के लिए किया जा सकता है।

प्रत्यक्ष आरआईएफ विधि- एंटीजन के साथ एंटीबॉडी की परस्पर क्रिया की एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया, और एंटीबॉडी को फ्लोरोक्रोम के साथ लेबल किया जाता है - एक पदार्थ जो एक निश्चित तरंग दैर्ध्य के प्रकाश के संपर्क में आने पर एक निश्चित तरंग दैर्ध्य के प्रकाश क्वांटा का उत्सर्जन करने में सक्षम होता है। इस पद्धति की ख़ासियत गैर-विशिष्ट ल्यूमिनसेंस का पता लगाने से बचने के लिए अप्रयुक्त घटकों को हटाने की आवश्यकता है। ऐसा करने के लिए, अप्रतिक्रियाशील एंटीबॉडी को धो लें। परिणामों का मूल्यांकन एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप का उपयोग करके किया जाता है। इस तरह के ल्यूमिनसेंट सीरम से उपचारित स्मीयर में बैक्टीरिया कोशिका की परिधि के साथ एक अंधेरे पृष्ठभूमि पर चमकते हैं।

अप्रत्यक्ष आरआईएफ विधिपिछले वाले की तुलना में अधिक बार उपयोग किया जाता है। यह प्रतिक्रिया दो चरणों में सम्पन्न होती है। पहले चरण में, एंटीजन परस्पर

संबंधित एंटीबॉडी के साथ परस्पर क्रिया करके प्रतिरक्षा परिसरों का निर्माण करते हैं। सभी घटक जिन्होंने प्रतिक्रिया नहीं की है (अर्थात, प्रतिरक्षा परिसरों का हिस्सा नहीं हैं) को धोकर हटा दिया जाना चाहिए। दूसरे चरण में, फ्लोरोक्रोमाइज्ड एंटीग्लोबुलिन सीरम का उपयोग करके परिणामी एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स का पता लगाया जाता है। परिणामस्वरूप, फ़्लोरोक्रोम के साथ लेबल किए गए सूक्ष्म जीव + रोगाणुरोधी खरगोश एंटीबॉडी + खरगोश इम्युनोग्लोबुलिन के एंटीबॉडी का एक परिसर बनता है। परिणामों का मूल्यांकन एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप का उपयोग करके किया जाता है।

13.6.2. एंजाइम इम्यूनोसॉर्बेंट विधि या परख

एलिसा सबसे आम आधुनिक विधि है जिसका उपयोग वायरल, बैक्टीरियल, प्रोटोजोअल संक्रमणों के निदान के लिए किया जाता है, विशेष रूप से एचआईवी संक्रमण, वायरल हेपेटाइटिस आदि के निदान के लिए।

बहुत सारे एलिसा संशोधन हैं। ठोस-चरण गैर-प्रतिस्पर्धी एलिसा का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। यह 96-अच्छी तरह से पॉलीस्टीरीन प्लेटों (ठोस चरण) में किया जाता है। प्रतिक्रिया करते समय, प्रत्येक चरण में अप्रतिक्रिया न किए गए घटकों को धोना आवश्यक है। एंटीबॉडी का निर्धारण करते समय, परीक्षण रक्त सीरम को उन कुओं में जोड़ा जाता है जिन पर एंटीजन को अवशोषित किया जाता है, फिर एंटीग्लोबुलिन सीरम को एक एंजाइम के साथ लेबल किया जाता है। प्रतिक्रिया एंजाइम के लिए एक सब्सट्रेट जोड़कर की जाती है। एक एंजाइम की उपस्थिति में, सब्सट्रेट बदलता है, और एंजाइम-सब्सट्रेट कॉम्प्लेक्स का चयन किया जाता है ताकि प्रतिक्रिया में बनने वाला उत्पाद रंगीन हो। इस प्रकार, सकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ, घोल के रंग में परिवर्तन देखा जाता है। एंटीजन निर्धारित करने के लिए, ठोस चरण वाहक को एंटीबॉडी के साथ संवेदनशील बनाया जाता है, फिर एंटीजन में परीक्षण सामग्री (एंटीजन) और एंजाइम-लेबल सीरम को क्रमिक रूप से जोड़ा जाता है। प्रतिक्रिया होने के लिए, एंजाइम के लिए एक सब्सट्रेट जोड़ा जाता है। घोल के रंग में परिवर्तन सकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ होता है।

13.6.3. immunoblotting

यह विधि इलेक्ट्रोफोरेसिस और एलिसा के संयोजन पर आधारित है। इम्युनोब्लॉटिंग (अंग्रेजी से ब्लॉटिंग) करते समय। दाग- स्पॉट) एंटीजन के एक जटिल मिश्रण को पहले पॉलीएक्रिलामाइड जेल में वैद्युतकणसंचलन के अधीन किया जाता है। परिणामी भिन्नात्मक विरोधी-

जीन पेप्टाइड्स को नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली में स्थानांतरित किया जाता है। फिर धब्बों को एक विशिष्ट एंटीजन के लिए एंजाइम-लेबल एंटीबॉडी के साथ इलाज किया जाता है, अर्थात। एलिसा ब्लॉट करें। इम्यूनोब्लॉटिंग का उपयोग एचआईवी जैसे संक्रमण के निदान में किया जाता है।

13.6.4. प्रतिरक्षा इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी

इस विधि में एक इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप में माइक्रोस्कोपिंग वायरस (आमतौर पर अन्य रोगाणुओं) को शामिल किया जाता है, जिसे इलेक्ट्रॉन-ऑप्टिकली घने तैयारी के साथ लेबल किए गए उचित प्रतिरक्षा सीरम के साथ पूर्व-उपचार किया जाता है, उदाहरण के लिए फेरिटिन, एक लौह युक्त प्रोटीन।

13.7. फ़्लो साइटॉमेट्री

लेजर साइटोफ्लोरोमेट्री के आधार पर रक्त कोशिकाओं को विभेदित किया जाता है। ऐसा करने के लिए, वांछित कोशिकाओं को सीडी एंटीजन के लिए फ्लोरोसेंट मोनोक्लोनल एंटीबॉडी से रंग दिया जाता है। रक्त के नमूने को लेबल किए गए एंटीबॉडी से उपचारित करने के बाद, एक पतली ट्यूब के माध्यम से पारित किया जाता है और एक लेजर बीम को इसके माध्यम से पारित किया जाता है, जो फ्लोरोक्रोम को चमकने के लिए उत्तेजित करता है। प्रतिदीप्ति तीव्रता कोशिका सतह पर एंटीजन के घनत्व से संबंधित होती है और इसे फोटोमल्टीप्लायर ट्यूब का उपयोग करके मात्रात्मक रूप से मापा जा सकता है। प्राप्त परिणाम हिस्टोग्राम में परिवर्तित हो जाते हैं।

फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग प्रतिरक्षा स्थिति (लिम्फोसाइटों की मुख्य आबादी की सामग्री, इंट्रासेल्युलर और बाह्य कोशिकीय साइटोकिन्स की सामग्री, एनके कोशिकाओं की कार्यात्मक गतिविधि, फागोसाइटोसिस गतिविधि, आदि) निर्धारित करने के लिए किया जाता है।

बादल के रूप में जिसे अवक्षेप कहते हैं। यह एंटीजन और एंटीबॉडी को समान मात्रा में मिलाने से बनता है; उनमें से एक की अधिकता प्रतिरक्षा जटिल गठन के स्तर को कम कर देती है। अवक्षेपण प्रतिक्रिया टेस्ट ट्यूब (रिंग अवक्षेपण प्रतिक्रिया), जैल, पोषक मीडिया आदि में की जाती है। अर्ध-तरल अगर या एगरोज़ जेल में वर्षा प्रतिक्रिया की विविधताएं व्यापक हैं: ऑचटरलोनी के अनुसार डबल इम्यूनोडिफ्यूजन, रेडियल इम्यूनोडिफ्यूजन, इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस , वगैरह।
वलय अवक्षेपण प्रतिक्रिया. प्रतिक्रिया संकीर्ण अवक्षेपण नलिकाओं में की जाती है: घुलनशील एंटीजन को प्रतिरक्षा सीरम पर स्तरित किया जाता है। एंटीजन और एंटीबॉडी के इष्टतम अनुपात के साथ, इन दो समाधानों की सीमा पर अवक्षेप की एक अपारदर्शी अंगूठी बनती है (चित्र 7.50)। यदि उबले हुए और फ़िल्टर किए गए ऊतक के अर्क को प्रतिक्रिया में एंटीजन के रूप में उपयोग किया जाता है, तो इस प्रतिक्रिया को थर्मोप्रेसिपिटेशन प्रतिक्रिया (एस्कोली प्रतिक्रिया, जिसमें एंथ्रेक्स हैप्टेन का पता लगाया जाता है) कहा जाता है।

चावल। 7.50.

ऑचटरलोनी डबल इम्युनोडिफ्यूजन प्रतिक्रिया।

प्रतिक्रिया स्थापित करने के लिए पिघले हुए अगर जेल की एक पतली परत कांच की प्लेट पर डाली जाती है और सख्त होने के बाद इसमें छेद कर दिए जाते हैं। एंटीजन और प्रतिरक्षा सीरा को जेल के कुओं में अलग-अलग रखा जाता है, जो एक दूसरे की ओर फैलते हैं। मिलन बिंदु पर, समान अनुपात में, वे एक सफेद धारी के रूप में एक अवक्षेप बनाते हैं (चित्र 7.51)। बहुघटक प्रणालियों में, एंटीजन और एंटीबॉडी वाले कुओं के बीच अवक्षेप की कई रेखाएँ दिखाई देती हैं; समान एंटीजन के लिए, अवक्षेप रेखाएँ विलीन हो जाती हैं, और गैर-समान एंटीजन के लिए, वे प्रतिच्छेद करती हैं।

चावल। 7.51

पिघले हुए अगर जेल के साथ प्रतिरक्षा सीरम को गिलास पर समान रूप से डाला जाता है। जेल में सख्त होने के बाद, कुएँ बनाए जाते हैं जिनमें एंटीजन (एजी) को विभिन्न तनुकरणों में रखा जाता है। एंटीजन, जेल में फैलकर, एंटीबॉडी वाले कुओं के चारों ओर रिंग वर्षा क्षेत्र बनाता है। अवक्षेपण वलय का व्यास एंटीजन की सांद्रता के समानुपाती होता है (चित्र 7.52)। प्रतिक्रिया का उपयोग रक्त सीरम में विभिन्न वर्गों के इम्युनोग्लोबुलिन, पूरक प्रणाली के घटकों आदि को निर्धारित करने के लिए किया जाता है।

चावल। 7.52.

वैद्युतकणसंचलन और इम्यूनोप्रेसिपिटेशन का एक संयोजन: एंटीजन के मिश्रण को जेल के कुओं में पेश किया जाता है और वैद्युतकणसंचलन का उपयोग करके जेल में अलग किया जाता है, फिर प्रतिरक्षा सीरम को वैद्युतकणसंचलन क्षेत्रों के समानांतर जेल खांचे में जोड़ा जाता है। प्रतिरक्षा सीरम से एंटीबॉडीज जेल में फैल जाती हैं और एंटीजन के साथ "मिलन" के स्थान पर अवक्षेपण रेखाएं बनाती हैं (चित्र 7.53)।

चावल। 7.53.

फ़्लोक्यूलेशन प्रतिक्रिया (रेमन के अनुसार) (अक्षांश से. फलोकस- ऊन के टुकड़े) - टॉक्सिन-एंटीटॉक्सिन या टॉक्सॉइड-एंटीटॉक्सिन प्रतिक्रिया के दौरान एक टेस्ट ट्यूब में ओपेलेसेंस या फ्लोकुलेंट द्रव्यमान (इम्यूनोप्रेसिपिटेशन) की उपस्थिति (चित्र। 7.54)। इसका उपयोग एंटीटॉक्सिक सीरम या टॉक्सोइड की गतिविधि को निर्धारित करने के लिए किया जाता है।

चावल। 7.54.

डिप्थीरिया के प्रेरक एजेंट के उपभेद - सी. डिप्थीरिया विषैले (एक्सोटॉक्सिन का उत्पादन करने वाले) और गैर विषैले हो सकते हैं। एक एक्सोटॉक्सिन का निर्माण एक एक्सोटॉक्सिन के गठन को एन्कोड करने वाले टॉक्स जीन ले जाने वाले प्रोफ़ेज के बैक्टीरिया में उपस्थिति पर निर्भर करता है। बीमारी के मामले में, सभी आइसोलेट्स का विषाक्तता के लिए परीक्षण किया जाता है - अगर अवक्षेपण प्रतिक्रिया का उपयोग करके डिप्थीरिया एक्सोटॉक्सिन का उत्पादन (चित्र 7.55)।

चावल। 7.55