अवक्षेपण प्रतिक्रिया तंत्र प्रतिक्रिया से भिन्न है। वर्षा प्रतिक्रिया (इम्यूनोलॉजिकल विधि)

इसमें एक घुलनशील एंटीजन की एक एंटीबॉडी के साथ परस्पर क्रिया होती है, जिसके बाद एक महीन दाने वाली तलछट (अवक्षेप) का निर्माण होता है।

वर्षा प्रतिक्रिया एक ज्ञात एंटीबॉडी जोड़कर या अज्ञात एंटीबॉडी निर्धारित करने के लिए ज्ञात एंटीजन का उपयोग करके परीक्षण सामग्री में अज्ञात एंटीजन की उपस्थिति निर्धारित करना संभव बनाती है। वर्षण यह बदतर हो रही हैलवण के अभाव में. इष्टतम वर्षा pH=7.0-7.4 की सीमा में होती है।

अवक्षेपण का तंत्र एग्लूटीनेशन के तंत्र के करीब है। प्रतिरक्षा प्रणाली के प्रभाव में, जिसने एंटीजन के साथ प्रतिक्रिया की है, इसके फैलाव की डिग्री कम हो जाती है। यह जरूरी है कि सीरम और एंटीजन पूरी तरह से पारदर्शी हों। अवक्षेपण करते समय, आप सीरम के एक तनुकरण में एंटीजन के विभिन्न तनुकरण जोड़ सकते हैं, या इसके विपरीत।

यदि टेस्ट ट्यूब में एंटीबॉडी के ऊपर एंटीजन की परत चढ़ा दी जाए तो वर्षा बेहतर दर्ज की जाती है। इस मामले में, एक वलय के रूप में एक अवक्षेप की उपस्थिति देखी जाती है - वलय अवक्षेपण। रिंग अवक्षेपण 2.5-3.5 मिमी व्यास वाली विशेष ट्यूबों में किया जाता है। परीक्षण सामग्री में एंटीजन या सीरम में विभिन्न एंटीबॉडी की संख्या निर्धारित करने के लिए, एगर अवक्षेपण प्रतिक्रिया का उपयोग किया जाता है: 1% स्पष्ट एगर को ग्लास स्लाइड में या उस पर डाला जाता है। एंटीजन और एंटीबॉडी समाधानों को अगर में बने अलग-अलग कुओं में डाला जाता है, जो एक-दूसरे की ओर फैलते हैं, जिससे वर्षा रेखाएं बनती हैं। अवक्षेपण प्रतिक्रिया का व्यापक रूप से निदान में उपयोग किया जाता है (एस्कोली प्रतिक्रिया देखें)।

अगर में वर्षा डिप्थीरिया संस्कृतियों की विषाक्तता को निर्धारित करना संभव बनाती है।

में फोरेंसिक अनुसंधानअवक्षेपण विशिष्ट अवक्षेपण सीरा का उपयोग करके रक्त, अंगों और ऊतकों की प्रजातियों को स्थापित करने का कार्य करता है।

अवक्षेपण एंटीजन (प्रिसिपिटिनोजेन) और एंटीबॉडी (प्रिसिपिटिन) के एक परिसर की अवक्षेपण प्रतिक्रिया है। वर्षा प्रतिरक्षाविज्ञानी घटनाओं में से एक है जो बीमार या टीकाकरण वाले लोगों के रक्त सीरम के साथ-साथ प्रतिरक्षित जानवरों के रक्त में एंटीबॉडी (देखें) की सामग्री को निर्धारित करना संभव बनाती है। मानक सीरा का उपयोग करते समय, वर्षा प्रतिक्रिया का उपयोग विभिन्न मूल के घुलनशील एंटीजन को अनुमापन करने के लिए किया जा सकता है (देखें)।

अवक्षेपण प्रतिक्रिया स्थापित करने के सबसे सरल रूप में, परीक्षण सीरम को कई तनुकरणों की श्रृंखला में एंटीजन की एक स्थिर मात्रा के साथ परीक्षण ट्यूबों की एक श्रृंखला में परत करके जोड़ा जाता है। 30-60 मिनट के बाद. कमरे के तापमान पर ऊष्मायन, दो तरल पदार्थों के इंटरफेस पर मैलापन की एक अंगूठी बनती है - रिंग अवक्षेपण। सीरम की न्यूनतम मात्रा जो अवक्षेपण प्रतिक्रिया देती है उसे एंटीसीरम के अनुमापांक के रूप में लिया जाता है। एक मानक एंटीसीरम के साथ रिवर्स प्रतिक्रिया करके, विभिन्न जैविक तरल पदार्थों में एंटीजन की सापेक्ष एकाग्रता का अनुमान लगाना संभव है।

उपरोक्त विधि के आधार पर एंटीबॉडी और एंटीजन के अनुमापन के परिणामों की पूर्ण मात्रात्मक अभिव्यक्ति नहीं होती है। एंटीबॉडी सामग्री को मापने के लिए, हीडलबर्गर, काबट (एम. हीडलबर्गर, ई. काबट) और अन्य ने विकसित किया मात्रात्मक पद्धतिअवक्षेपण प्रतिक्रिया, जो तथाकथित तुल्यता क्षेत्र का पता लगाने पर आधारित है। जब एंटीजन की आयु-विशिष्ट मात्रा को एंटीसीरम की निरंतर मात्रा के साथ मिलाया जाता है, तो शुरू में बनने वाले अवक्षेप की मात्रा बढ़ जाती है और फिर अतिरिक्त एंटीजन में एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स की बढ़ती घुलनशीलता के कारण फिर से घट जाती है। यदि हम सभी परीक्षण ट्यूबों में सतह पर तैरनेवाला में एंटीबॉडी की सामग्री निर्धारित करते हैं, तो यह पता चलेगा कि पंक्ति के मध्य परीक्षण ट्यूबों में या यहां तक ​​कि एकमात्र परीक्षण ट्यूब में सतह पर तैरनेवाला में कोई एंटीबॉडी नहीं हैं; इसी समय, यहां सबसे बड़ा अवक्षेप बनता है। चूंकि समतुल्य क्षेत्र में प्रतिक्रियाशील पदार्थों के मिश्रण में पेश किया गया संपूर्ण एंटीजन भी अवक्षेप में शामिल होता है, अवक्षेप प्रोटीन की मात्रा से एंटीजन प्रोटीन को घटाने के बाद, परीक्षण सीरम की दी गई मात्रा में एंटीबॉडी सामग्री का सटीक मूल्य प्राप्त होता है . ठंडे खारे घोल से अच्छी तरह धोने के बाद अवक्षेप की प्रोटीन सामग्री नाइट्रोजन या कुछ वर्णमिति विधि द्वारा निर्धारित की जाती है।

वर्षा प्रतिक्रिया के मूल्य का आकलन करते समय निदान विधियह ध्यान में रखना आवश्यक है कि प्रतिरक्षा सीरा में एंटीबॉडीज हो सकते हैं जिनमें प्रीसिपिटिन के गुण नहीं होते हैं और इसलिए, एंटीजन के साथ बातचीत करते समय वे अवक्षेप नहीं बनाते हैं। इनमें मुख्य रूप से अपूर्ण एंटीबॉडी, साथ ही गामा ए-ग्लोबुलिन के समूह से संबंधित कुछ अन्य एंटीबॉडी शामिल हैं।

एंटीजन को अवक्षेपित करने की एंटीसीरम की क्षमता को 65-70° तक गर्म करने, कार्बनिक सॉल्वैंट्स के साथ उपचार, अम्लीय वातावरण में कमी [इज़्लिकर (एन. इस्लिकर), ए.वाई.ए. द्वारा क्षीण किया जा सकता है। कुल्बर्ग]। प्रीसिपिटिन युक्त एंटीसीरम के साथ अवक्षेपण की घटना केवल एक निश्चित तापमान, लवण और हाइड्रोजन आयनों की सांद्रता पर ही संभव है। वर्षा की प्रतिक्रिया 25-37° पर सबसे तेजी से होती है। अवक्षेप के निर्माण के लिए एक अनिवार्य शर्त आइसोटोनिक सांद्रता में सोडियम क्लोराइड (0.85% NaCl घोल) की उपस्थिति है। जब NaCl सांद्रता 15% तक बढ़ जाती है, तो पॉलीसेकेराइड एंटीजन द्वारा निर्मित अवक्षेप आंशिक रूप से घुल जाते हैं, जिसका उपयोग शुद्ध एंटीबॉडी निकालने के लिए किया जा सकता है। प्रोटीन एंटीजन के साथ वर्षा की प्रतिक्रिया 0.85% और 15% दोनों में समान गति और पूर्णता के साथ होती है NaCl समाधान. अवक्षेप निर्माण के लिए हाइड्रोजन आयनों की इष्टतम सांद्रता 5.0 से 9.0 तक पीएच मान से मेल खाती है।

प्रयोगशाला अभ्यास में अवक्षेपण प्रतिक्रिया के विभिन्न संशोधनों का उपयोग किया जाता है। विशेष रूप से, थर्मोप्रेसिपिटेशन प्रतिक्रिया का उपयोग बैक्टीरिया एंटीजन का पता लगाने के लिए किया जाता है बिसहरिया, बोटुलिज़्म, आदि, थर्मल विकृतीकरण (कोक्टोएंटीजन) के अधीन नहीं हैं। यह प्रतिक्रिया रिंग अवक्षेपण प्रतिक्रिया से केवल इस मायने में भिन्न है कि उबले हुए परीक्षण सामग्री के निस्पंद का उपयोग एंटीजन के रूप में किया जाता है (देखें प्रतिक्रिया क्या है)।

वर्षा प्रतिक्रिया का उपयोग करके एंटीजन के जटिल मिश्रण का विश्लेषण करते समय, मिश्रण के व्यक्तिगत घटकों के गुणों को चिह्नित करना असंभव है। इस समस्या को हल करने के लिए, वे अगर और इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस में अवक्षेपण के तरीकों का सहारा लेते हैं। O. Ouchterlony के सबसे आम संशोधन में अगर वर्षा विधि इस तथ्य पर आधारित है कि एंटीजन और एंटीसेरम, अगर की एक पतली परत में एक दूसरे की ओर फैलते हैं, जब वे मिलते हैं तो वर्षा रेखाएं बनाते हैं। ऐसी रेखाओं की संख्या से कोई एंटीजन के दिए गए मिश्रण में निहित घटकों की संख्या का अनुमान लगा सकता है। औहगेर्लोनु विधि आपको विभिन्न एंटीजेनिक मिश्रणों की तुलना करने और उनमें मौजूद घटकों की संबंधितता की डिग्री निर्धारित करने की अनुमति देती है। अगर में समान प्रसार दर वाले पदार्थों वाले एक जटिल एंटीजेनिक मिश्रण का विश्लेषण करते समय, बड़ी मददइम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस विधि ला सकते हैं। एंटीजन मिश्रण को पहले एक अगर प्लेट में विद्युत क्षेत्र में अलग किया जाता है, जिसके बाद इसे विकसित किया जाता है अलग - अलग घटकसीरमरोधक एंटीसीरम को उस रेखा के समानांतर अगर में बनी खाई में जोड़ा जाता है जिसके साथ एंटीजन इलेक्ट्रोफोरोसिस के दौरान चले गए थे। प्रत्येक एंटीजन एंटीसीरम के साथ एक व्यक्तिगत अवक्षेपण चाप उत्पन्न करता है। विश्लेषण के लिए इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है पैथोलॉजिकल असामान्यताएंसीरम प्रोटीन में, साथ ही ऊतक और जीवाणु प्रतिजनों के प्रतिरक्षाविज्ञानी विश्लेषण में।

फोरेंसिक वर्षा. रक्त की प्रजाति, अंगों के हिस्सों और ऊतकों को स्थापित करने के लिए फोरेंसिक चिकित्सा में वर्षा का उपयोग किया जाता है। कई जांच मामलों में, अपराध के उपकरणों, अपराधी या पीड़ित के कपड़ों आदि पर पाए जाने वाले रक्त के प्रकार को स्थापित करना आवश्यक है। अवक्षेपण प्रतिक्रिया के लिए, अवक्षेपण सीरा का उपयोग किया जाता है, जो खरगोशों के टीकाकरण से प्राप्त होता है। विभिन्न जानवरों से प्राप्त प्रोटीन के साथ मुर्गे, बकरियाँ। आमतौर पर, ऐसे सीरम तैयार किए जाते हैं जो मानव, घोड़ा, बिल्ली, मुर्गी, सुअर, कुत्ते, पशु. उनके पास कम से कम 1:10,000 का अनुमापांक होना चाहिए और काफी विशिष्ट होना चाहिए। जांच किए जा रहे रक्त के दाग या परत से अर्क तैयार किया जाता है। नमकीन घोल, जिन्हें फिर अवक्षेपित सीरा के साथ परीक्षण किया जाता है। प्रोटीन के प्रकार को स्थापित माना जाता है यदि अवक्षेपित सीरा में से एक संबंधित नियंत्रण प्रतिक्रिया के साथ परीक्षण रक्त से अर्क के साथ एक अवक्षेप बनाता है। अवक्षेपण प्रतिक्रिया मानव या पशु ऊतकों और अंगों में प्रोटीन के प्रकार को भी निर्धारित कर सकती है। आमतौर पर, अवक्षेपण प्रतिक्रिया शंकु के आकार के सिरे वाली परखनलियों में की जाती है। जब गंदले अर्क प्राप्त होते हैं, तो अवक्षेपण प्रतिक्रिया ऑचटरलोहन अगर में की जाती है।

वर्षा प्रतिक्रिया (आरपी) एक इलेक्ट्रोलाइट की उपस्थिति में एंटीबॉडी की कार्रवाई के तहत घुलनशील एंटीजन की वर्षा है। दृश्यमान प्रतिक्रिया प्रभाव (वर्षा घटना) - बादल (बादल वलय या तलछट का निर्माण - अवक्षेपण)।

आरपी का उपयोग कई संक्रामक रोगों में अज्ञात एंटीजन का पता लगाने के लिए किया जाता है: एंथ्रेक्स, टुलारेमिया, मेनिनजाइटिस, चेचक के लिए. फोरेंसिक चिकित्सा में इसका उपयोग रक्त और शुक्राणु की प्रजाति निर्धारित करने के लिए किया जाता है; स्वच्छता और स्वास्थ्यकर अध्ययन में - मिथ्याकरण स्थापित करना खाद्य उत्पाद. आरपी बहुत अलग है उच्च संवेदनशीलऔर आपको 1:1,000,000 और 1:10,000,000 के तनुकरण पर एंटीजन का पता लगाने की अनुमति देता है।

अवक्षेपण प्रतिक्रिया के घटक.

1. एंटीजन (प्रीसिपिटिनोजेन) -यह एक एंटीजन है आणविक प्रकृति, जो सूक्ष्मता से परिक्षिप्त (घुलनशील) अवस्था में है। प्रीसिपिटिनोजेन विभिन्न लाइसेट्स या ऊतकों के अर्क आदि होते हैं। प्रीसिपिटिनोजेन एंटीजन कणों के आकार में एग्लूटीनोजेन से भिन्न होता है। एग्लूटीनोजेनयह है कोशिका आकार(ये नष्ट हुई संपूर्ण कोशिकाएँ नहीं हैं), बल्कि आयाम हैं अवक्षेपणके साथ सहगामी आणविक आकार(ये प्रोटीन और कार्बोहाइड्रेट या लिपिड के साथ उनके कॉम्प्लेक्स हैं)। प्रीसिपिटिनोजेन घोल पारदर्शी।

2. एंटीबॉडीज़ (प्रीसिपिटिन्स)मानव रक्त सीरम या प्रतिरक्षा निदान अवक्षेपित सीरा में पाए जाते हैं जिनमें ज्ञात एंटीबॉडी होते हैं।

3. इलेक्ट्रोलाइट-आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान.

प्रीसिपिटिनोजेन प्राप्त करना.

सामग्री को पीसकर और उबालकर या अन्य तरीकों से उसमें से प्रोटीन एंटीजन निकालकर प्राप्त किया जाता है।

प्रीसिपिटिनोजेन्स के उदाहरण: लाइसेट्स या अर्क विभिन्न अंगऔर ऊतक, विदेशी रक्त सीरम (सीरम है) समाधान, सबसे पहले, विभिन्न प्रोटीन),रोगाणुओं के शोरबा संस्कृतियों के निस्पंद, रोगाणुओं के नमक अर्क, ऑटोलिसेट्स, आदि।

अवक्षेपण सीरम की तैयारी.

उपयुक्त प्रीसिपिटिनोजेन्स के साथ खरगोशों के हाइपरइम्यूनाइजेशन द्वारा प्राप्त किया गया। ऐसे सीरा में उन प्रीसिपिटिनोजेन्स के प्रति एंटीबॉडी होते हैं जिनके साथ खरगोशों को प्रतिरक्षित किया गया था।

अवक्षेपित सीरा के उदाहरण: वेग से गिराना एंथ्रेक्स सीरम (इसमें एंथ्रेक्स एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी शामिल हैं), अवक्षेपण एंटीमेनिंगोकोकल सीरम(मेनिनजाइटिस के प्रेरक एजेंट के एंटीजन के खिलाफ एंटीबॉडी शामिल हैं), आदि।

अनुमापांकअवक्षेपण सीरम - यह अवक्षेपणोजेन का उच्चतम तनुकरण है जिस पर सीरम अभी भी अवक्षेपण प्रतिक्रिया देता है।

आरपी स्थापित करने की विधियाँ।

1. वलय अवक्षेपण प्रतिक्रिया -विशेष अवक्षेपण नलिकाओं (व्यास - 0.4-0.5 सेमी, ऊँचाई - 7-8 सेमी) में किया जाता है। टेस्ट ट्यूब में 0.2 - 0.3 मिली प्रीसिपिटेटिंग सीरम मिलाया जाता है और प्रीसिपिटिनोजेन की समान मात्रा को पाश्चर पिपेट की लंबी टोंटी के साथ दीवार पर सावधानी से लगाया जाता है। फिर सावधानीपूर्वक परखनलियों को क्षैतिज स्थिति से लंबवत रखें।

प्रतिक्रिया परिणामों के लिए लेखांकन एंटीजन-एंटीबॉडी इंटरफेस पर एक सफेद रिंग की उपस्थिति द्वारा किया जाता है। यदि प्रतिक्रिया सकारात्मक है ऐसे वलय का निर्माण देखा जाता है। इस मामले में, एंटीजन एंटीबॉडी से मेल खाता है और वे बंध जाते हैं।

यदि अंगों और ऊतकों के उबले और फ़िल्टर किए गए जलीय अर्क को प्रीसिपिटिनोजेन के रूप में उपयोग किया जाता है, तो प्रतिक्रिया को प्रतिक्रिया कहा जाता है थर्मोरिंग वर्षा (उदाहरण के लिए, एंथ्रेक्स का निदान करते समय)।

2. जेल में अवक्षेपण प्रतिक्रिया -पेट्री डिश या ग्लास स्लाइड पर किया जाता है, जहां अगर जेल की एक परत रखी जाती है। जैसे ही जेल सख्त हो जाता है, कुओं को काट दिया जाता है जिसमें एंटीजन या एंटीबॉडी, या दोनों रखे जाते हैं। अंतर करना 2 तरीकेजेल में आरपी:

एक विधि सरल (रेडियल) इम्युनोडिफ्यूजन: प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के घटकों में से एक (एंटीजन या एंटीबॉडी) को कुएं में रखा जाता है, और दूसरे घटक को अगर के साथ मिलाया जाता है; पर सकारात्मक परिणाम (एंटीजन एंटीबॉडी से मेल खाता है) a अवक्षेपित वलय ;

बी) विधि दोहरा इम्युनोडिफ्यूजन: एंटीबॉडी और एंटीजन दोनों को अलग-अलग कुओं में रखा जाता है, वे अगर जेल में एक दूसरे की ओर फैलते हैं; यदि परिणाम सकारात्मक है जहां एंटीबॉडी और एंटीजन मिलते हैं, उनका निर्माण होता है वर्षा रेखाएँ .

जेल में आरपी का उदाहरणऑचटरलोनी डबल इम्युनोडिफ्यूजन प्रतिक्रिया है डिप्थीरिया का निदान करते समय

इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस -यह एक ऐसी विधि है जो वैद्युतकणसंचलन विधि और अवक्षेपण प्रतिक्रिया को जोड़ती है। इलेक्ट्रोफोरेसिस का उपयोग करके एंटीजन (उदाहरण के लिए, सीरम प्रोटीन) के मिश्रण को एक जेल में अलग किया जाता है। फिर, रुचि के प्रोटीन (अज्ञात एंटीजन) को खोजने और पहचानने के लिए, एक डायग्नोस्टिक अवक्षेपण सीरम का उपयोग किया जाता है जिसमें उस प्रोटीन (ज्ञात एंटीबॉडी) के एंटीबॉडी होते हैं। ऐसा करने के लिए, डायग्नोस्टिक सीरम को प्रोटीन के समानांतर खांचे में डाला जाता है। यदि प्रोटीनों में से कोई एक है जो सीरम में पाए जाने वाले एंटीबॉडी से मेल खाता है, तो वर्षा रेखाएँ.

शीघ्र प्रतिक्रिया- आरपी (से)अव्य. प्रेसिपिटो- अवक्षेप) - यह मैलापन के रूप में एंटीबॉडी के साथ घुलनशील आणविक प्रतिजन के एक परिसर का गठन और अवक्षेपण है, जिसे कहा जाता है अवक्षेपणयह एंटीजन और एंटीबॉडी को समान मात्रा में मिलाने से बनता है; इनमें से किसी एक की अधिकता शिक्षा के स्तर को कम कर देती है प्रतिरक्षा जटिल. एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया के विपरीत, अवक्षेपण प्रतिक्रिया के लिए एंटीजन घुलनशील यौगिक होते हैं, जिनके कणों का आकार अणुओं के आकार के करीब होता है। ये प्रोटीन, कार्बोहाइड्रेट और लिपिड के साथ प्रोटीन के कॉम्प्लेक्स, जीवाणु अर्क, रोगाणुओं के शोरबा संस्कृतियों के विभिन्न डिसेट्स या फ़िल्टर हो सकते हैं। अवक्षेपण प्रतिक्रिया में शामिल एंटीबॉडीज़ को प्रीसिपिटिन कहा जाता है। परिणामी बारीक बिखरे हुए एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स का पता वर्षा प्रतिक्रिया के मंचन के कुछ तरीकों का उपयोग करके लगाया जाता है।
वलय अवक्षेपण अभिक्रिया सबसे पहले एस्कोली द्वारा प्रस्तावित की गई थी। इसका उपयोग एंथ्रेक्स, प्लेग, टुलारेमिया और मेनिनजाइटिस के निदान में किया जाता है। विधि सरल एवं सुलभ है.
विशिष्ट प्रतिरक्षा अवक्षेपण सीरम को संकीर्ण अवक्षेपण नलिकाओं में डाला जाता है और एंटीजन को बहुत सावधानी से उस पर रखा जाता है। उदाहरण के लिए, एंथ्रेक्स का निदान करते समय, त्वचा के टुकड़े, ऊन, मृत जानवर की त्वचा आदि को एंटीजन के रूप में लिया जाता है। उन्हें उबाला जाता है, तरल को फ़िल्टर किया जाता है और एंटीजन के रूप में उपयोग किया जाता है। दो तरल पदार्थों की सीमा पर एक वलय - अवक्षेप - की उपस्थिति संबंधित एंटीजन की उपस्थिति को इंगित करती है।
अगर जेल अवक्षेपण प्रतिक्रिया, या प्रसार अवक्षेपण विधि, जटिल जल-घुलनशील एंटीजेनिक मिश्रण की संरचना का विस्तार से अध्ययन करना संभव बनाती है। प्रतिक्रिया स्थापित करने के लिए, एक जेल (अर्ध-तरल या गाढ़ा अगर) का उपयोग करें। एंटीजन बनाने वाला प्रत्येक घटक अलग-अलग गति से संबंधित एंटीबॉडी की ओर फैलता है। इसलिए, विभिन्न एंटीजन और संबंधित एंटीबॉडी के कॉम्प्लेक्स स्थित होते हैं अलग - अलग क्षेत्रजेल, जहां अवक्षेपण रेखाएं बनती हैं। प्रत्येक पंक्ति केवल एक एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स से मेल खाती है। वर्षा की प्रतिक्रिया आमतौर पर कमरे के तापमान पर की जाती है।
इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस विधि प्राप्त की गई थी व्यापक उपयोगवी पिछले साल कारोगाणुओं की एंटीजेनिक संरचना का अध्ययन करते समय। एंटीजन कॉम्प्लेक्स को एक कुएं में रखा जाता है, जो प्लेट पर डाले गए अगर जेल के केंद्र में स्थित होता है। फिर एगर जेल के माध्यम से एक विद्युत धारा प्रवाहित की जाती है, जिससे कॉम्प्लेक्स में शामिल विभिन्न एंटीजन क्षेत्र में चले जाते हैं विद्युत प्रवाहउनकी इलेक्ट्रोफोरेटिक गतिशीलता पर निर्भर करता है। वैद्युतकणसंचलन पूरा होने के बाद, विशिष्ट प्रतिरक्षा सीरम को प्लेट के किनारे स्थित एक खाई में जोड़ा जाता है और एक आर्द्र कक्ष में रखा जाता है। अवक्षेपण रेखाएँ उन स्थानों पर दिखाई देती हैं जहाँ एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स बनता है।

वर्षा प्रतिक्रियाएँ रखनाटेस्ट ट्यूब में (रिंग अवक्षेपण प्रतिक्रिया),जैल, पोषक तत्व मीडिया, आदि में व्यापक वितरण प्राप्त हुआअर्ध-तरल अगर या एगरोज़ जेल में अवक्षेपण प्रतिक्रिया के प्रकार: ऑचटरलोनी के अनुसार दोहरा इम्यूनोडिफ्यूजन। रेडियल इम्यूनोडिफ्यूजन, इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिसऔर आदि

रेडियल इम्युनोडिफ्यूजन प्रतिक्रिया. पिघले हुए अगर जेल के साथ प्रतिरक्षा सीरम को गिलास पर समान रूप से डाला जाता है। जेल में जमने के बाद, कुएँ बनाए जाते हैं जिनमें एंटीजन को विभिन्न तनुकरणों में रखा जाता है। एंटीजन, जेल में फैलकर, एंटीबॉडी वाले कुओं के चारों ओर अंगूठी के आकार का वर्षा क्षेत्र बनाता है (चित्र 13.7)। अवक्षेपण वलय का व्यास प्रतिजन सांद्रता के समानुपाती होता है। प्रतिक्रिया का उपयोग रक्त में विभिन्न वर्गों के इम्युनोग्लोबुलिन, पूरक प्रणाली के घटकों आदि की सामग्री को निर्धारित करने के लिए किया जाता है।

इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस- वैद्युतकणसंचलन और इम्यूनोप्रेसिपिटेशन का संयोजन: एंटीजन का मिश्रण जेल के कुओं में पेश किया जाता है और वैद्युतकणसंचलन का उपयोग करके जेल में अलग किया जाता है। फिर, प्रतिरक्षा सीरम को वैद्युतकणसंचलन क्षेत्रों के समानांतर खांचे में पेश किया जाता है, जिसके एंटीबॉडी, जेल में फैलते हुए, एंटीजन के संपर्क के बिंदु पर एक वर्षा रेखा बनाते हैं।

प्रतिरक्षा इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी- रोगाणुओं की इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी, अक्सर वायरस, उचित एंटीबॉडी के साथ इलाज किया जाता है। प्रतिरक्षा सीरम से उपचारित वायरस प्रतिरक्षा समुच्चय (माइक्रोप्रेसीपिटेट्स) बनाते हैं। विषाणुओं के चारों ओर एंटीबॉडी का एक "कोरोला" बनता है, जो फॉस्फोटंगस्टिक एसिड या अन्य इलेक्ट्रॉन-ऑप्टिकली सघन तैयारी के विपरीत होता है।

123. सूक्ष्मजीवों की विषाक्तता, तंत्र, निर्माण के तरीकों को निर्धारित करने के लिए जेल में अवक्षेपण प्रतिक्रिया।

वर्षा प्रतिक्रिया (आरपी)- यह बादल के रूप में एंटीबॉडी के साथ घुलनशील आणविक एंटीजन के एक परिसर का गठन और अवक्षेपण है, जिसे अवक्षेप कहा जाता है। यह एंटीजन और एंटीबॉडी को समान मात्रा में मिलाने से बनता है; उनमें से एक की अधिकता प्रतिरक्षा जटिल गठन के स्तर को कम कर देती है।

1946 में, जे. औडिन ने सरल प्रसार विधि का प्रस्ताव रखा, जिसमें अवक्षेपण प्रतिक्रिया के घटकों में से एक, आमतौर पर सीरम, एक जेल में होता है, और दूसरा - एंटीजन - एक समाधान के रूप में पहले के ऊपर स्तरित होता है .

एंटीजन, जेल में फैलकर, उसमें एंटीबॉडी के साथ सफेद अवक्षेपण रेखाएं बनाता है, जो साइड लाइटिंग के तहत स्पष्ट रूप से दिखाई देती हैं। 1948 में, जे. ओचटरलोन्यु ने एक और भी सरल और अधिक सुविधाजनक द्वि-आयामी काउंटर डिफ्यूजन विधि विकसित की, जो विभिन्न एंटीजन और सीरा की प्रत्यक्ष तुलना की अनुमति देती है। यह विधि क्रॉस-रिएक्शन के अध्ययन में भी बहुत मूल्यवान है।

ऑचटरलॉन प्रतिक्रिया स्थापित करने के लिए, शारीरिक समाधान में तैयार 1% अगर का उपयोग करें, जिसे 0.5 सेमी की परत के साथ पेट्री डिश में डाला जाता है। सख्त होने के बाद, 5-6 मिमी व्यास वाले छेद अगर प्लेट में काट दिए जाते हैं - एक डिश के केंद्र में, 4-5 - परिधि के साथ केंद्रीय से 1-2 सेमी की दूरी पर। डायग्नोस्टिक अवक्षेपण सीरम को केंद्रीय कुएं में डाला जाता है, और समजात और तुलनीय एंटीजन का एक समाधान परिधीय कुओं में डाला जाता है। परिणाम कमरे के तापमान पर 24, 48 और 72 घंटों के ऊष्मायन के बाद दर्ज किए जाते हैं।

एंटीबॉडी और एंटीजन एक-दूसरे की ओर फैलते हैं, और उन क्षेत्रों में जहां उनकी समतुल्य सांद्रता बनती है, चापाकार अवक्षेपण बैंड बनते हैं। यदि दो निकटवर्ती कुओं से आने वाले वर्षा बैंड विलीन हो जाते हैं, तो यह परीक्षण द्रव में कई एंटीजेनिक घटकों की उपस्थिति को इंगित करता है। ऑचटरलोहन काउंटर-डिफ्यूजन प्रतिक्रिया का उपयोग अक्सर डिप्थीरिया जैसे बैक्टीरिया की विषाक्तता को निर्धारित करने के लिए किया जाता है।

जेल अवक्षेपण विधि का एक और विकास इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस है। यह शब्द एक ऐसी विधि को संदर्भित करता है जो एंटीजन के मिश्रण के इलेक्ट्रोफोरेटिक पृथक्करण और एक ही एगर जेल प्लेट पर ऑचटरलॉन काउंटर प्रसार को जोड़ती है। अवक्षेपित सीरम को इलेक्ट्रोफोरेटिक पृथक्करण की दिशा के समानांतर जेल में काटे गए खांचे में डाला जाता है।

प्रतिक्रिया के परिणामस्वरूप बनने वाली अवक्षेपण रेखाओं में एंटीजन अंशों के इलेक्ट्रोफोरेटिक आंदोलन की दिशा में लम्बी चाप का रूप होता है। इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस 30 घटकों तक वाले घुलनशील एंटीजन के जटिल मिश्रण की संरचना को निर्धारित करना संभव बनाता है, और इसलिए यह एक मूल्यवान निदान पद्धति है।

शीघ्र प्रतिक्रिया(आरपी) को प्रतिरक्षा सीरम (प्रिसिपिटिन) और इलेक्ट्रोलाइट के संपर्क में आने पर एजी (प्रिसिपिटिनोजेन) के घोल से अवक्षेपण कहा जाता है।

आरपी का उपयोग करके, 1:100,000 और यहां तक ​​कि 1:1,000,000 के तनुकरण में एंटीजन का पता लगाना संभव है, यानी इतनी कम मात्रा में जिसका रासायनिक रूप से पता नहीं लगाया जा सकता है।

प्रीसिपिटिनोजेन्स प्रोटीन-पीएस प्रकृति के अल्ट्रामाइक्रोस्कोपिक कण हैं: सूक्ष्मजीवों, अंगों और ऊतकों से अर्क, पैट सामग्री; जीवाणु कोशिका विखंडन उत्पाद, उनके लाइसेट्स, फ़िल्ट्रेट्स। प्रीसिपिटिनोजेन गर्मी प्रतिरोधी होते हैं, इसलिए उन्हें प्राप्त करने के लिए सामग्री को उबाला जाता है।

आरपी तरल पारदर्शी एजी का उपयोग करता है।

प्रीसिपिटेटिंग सीरा आमतौर पर कई महीनों के चक्रों में खरगोशों को हाइपरइम्यूनाइजिंग करके प्राप्त किया जाता है, उन्हें बैक्टीरिया सस्पेंशन, शोरबा संस्कृतियों के फिल्टर, ऑटोलिसेट्स, सूक्ष्मजीवों के नमक अर्क और मट्ठा प्रोटीन के साथ इंजेक्ट किया जाता है।

आरपी एस्कोली द्वारा निर्माण।एक संकीर्ण टेस्ट ट्यूब में थोड़ी मात्रा में बिना पतला अवक्षेपण सीरम के, इसे एक झुकी हुई स्थिति में पकड़कर, एजी की समान मात्रा को धीरे-धीरे एक पिपेट के साथ दीवार के साथ स्तरित किया जाता है।

दो तरल पदार्थों के मिश्रण से बचने के लिए, टेस्ट ट्यूब को सावधानी से लंबवत रखा जाता है। यदि टेस्ट ट्यूब में प्रतिक्रिया सकारात्मक है, तो 5-10 मिनट के बाद सीरम और अध्ययन के तहत अर्क के बीच की सीमा पर एक भूरे-सफेद रंग की अंगूठी दिखाई देती है। प्रतिक्रिया आवश्यक रूप से सीरम और एंटीजन नियंत्रण के साथ होती है।

एस्कोली प्रतिक्रिया का उपयोग एंथ्रेक्स, टुलारेमिया और प्लेग एजी की पहचान करने के लिए किया जाता है।

मांस, मछली में मिलावट की पहचान करने में सैनिटरी अभ्यास में, विशेष रूप से रक्त के धब्बों में, प्रोटीन के प्रकार को निर्धारित करने के लिए फोरेंसिक चिकित्सा में भी इसका उपयोग पाया गया है। आटा उत्पाद, दूध में अशुद्धियाँ। इस आरपी का नुकसान अवक्षेप (रिंग) की अस्थिरता है, जो हल्के झटकों से भी गायब हो जाता है। इसके अलावा, इसका उपयोग निर्धारित करने के लिए नहीं किया जा सकता है मात्रात्मक रचनाएजी अवक्षेप के निर्माण में शामिल होते हैं।

ऑचटरलोनी अवक्षेपण प्रतिक्रिया।प्रतिक्रिया अगर जेल के कुओं में पेट्री डिश पर की जाती है।

अच्छी तरह से धोए गए पारदर्शी अगर का उपयोग जेल के रूप में किया जाता है। एगर जेल में एजी और सीरम मिलाया जाता है ताकि उनमें मौजूद कुएं एक निश्चित दूरी पर हों। एक-दूसरे की ओर फैलते हुए और एक-दूसरे के साथ मिलकर, एंटीबॉडी और एंटीजन 24-48 घंटों के बाद एक सफेद पट्टी के रूप में एक प्रतिरक्षा परिसर बनाते हैं।

एक जटिल प्रीसिपिटिनोजेन की उपस्थिति में, कई बैंड दिखाई देते हैं। इस मामले में, सीरोलॉजिकल रूप से संबंधित एंटीजन के बैंड एक साथ विलीन हो जाते हैं, और असमान एंटीजन के बैंड एक दूसरे को काटते हैं, जिससे अध्ययन के तहत पदार्थों की एंटीजेनिक संरचना का विवरण निर्धारित करना संभव हो जाता है।

एक्सोटॉक्सिन उत्पन्न करने वाले वायरस और बैक्टीरिया से होने वाली बीमारियों के निदान के लिए व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।

3.अप्रत्यक्ष रक्तगुल्म प्रतिक्रिया (आईआरएचए)।इसका उपयोग पॉलीसेकेराइड, प्रोटीन, बैक्टीरिया के अर्क, माइकोप्लाज्मा, रिकेट्सिया और वायरस का पता लगाने के लिए किया जाता है, जिनके एग्लूटीनिन के साथ प्रतिरक्षा परिसरों को पारंपरिक शास्त्रीय आरए में नहीं देखा जा सकता है, या इन अत्यधिक बिखरे हुए पदार्थों और छोटे सूक्ष्मजीवों के लिए रोगी सीरा में एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए किया जाता है।

संक्रामक रोगों के सेरोडायग्नोसिस के लिए आरएनजीए।रोगियों के सीरा में एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए आरएनजीए का उपयोग करके एरिथ्रोसाइट एंटीजन डायग्नोस्टिक्स तैयार किया जाता है।

शीघ्र प्रतिक्रिया।

ऐसा करने के लिए, लाल रक्त कोशिकाओं को 1:20,000-1:200,000 के तनुकरण पर टैनिन समाधान के साथ 15 मिनट तक उपचारित किया जाता है, जो उन्हें स्थिरता देता है और सोखने की क्षमता बढ़ाता है। फिर उन्हें एक ज्ञात एंटीजन के साथ मिलाया जाता है और 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 2 घंटे तक इनक्यूबेट किया जाता है। एंटीजन-संवेदी लाल रक्त कोशिकाओं को आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान के साथ 2-3 बार धोया जाता है और सीरम में जोड़ा जाता है, पतला किया जाता है और कुओं में डाला जाता है पैनलों का.

नियंत्रण बरकरार और एंटीजन-लोडेड एरिथ्रोसाइट्स का निलंबन है, जो सीरा में जोड़े जाते हैं जो स्पष्ट रूप से सकारात्मक और नकारात्मक प्रतिक्रियाएं देते हैं।

थर्मोस्टेट में ऊष्मायन के 2 घंटे बाद प्रतिक्रिया परिणामों को ध्यान में रखा जाता है और प्लसस के साथ मूल्यांकन किया जाता है: "++++" - लाल रक्त कोशिकाएं एक छतरी के रूप में कुएं को कवर करती हैं दांतेदार किनारे; "-" - "बटन" के रूप में लाल रक्त कोशिकाओं का संचय

सम्बंधित जानकारी:

साइट पर खोजें:

वलय अवक्षेपण प्रतिक्रिया

रिंग युग्मन प्रतिक्रिया सबसे सरल में से एक है सीरोलॉजिकल तरीके. यह संकीर्ण अवक्षेपण नलिकाओं में किया जाता है। सबसे पहले, कई तनुकरण (1:2; 1:4; 1:8; 1:16) में लिया गया एंटीजन का एक स्पष्ट घोल सभी परीक्षण ट्यूबों में समान रूप से डाला जाता है।

एंटीजन और एंटीबॉडी का संयोजन अभिकर्मकों के संपर्क की सीमा पर होता है। इस अंतःक्रिया के परिणामस्वरूप, सकारात्मक मामलों में (जब एंटीजन एंटीबॉडी से मेल खाता है), कुछ समय बाद एक ओपलेसेंट रिंग के रूप में एक अवक्षेप बनता है।

प्रतिक्रिया मिली व्यापक अनुप्रयोगवी मेडिकल अभ्यास करनाजानवरों के ऊन, खाल और मांस में एंथ्रेक्स एंटीजन का पता लगाने के लिए (एस्कोली प्रतिक्रिया); रोगियों या वस्तुओं से प्राप्त रोग संबंधी सामग्री में संक्रामक रोगों के अन्य रोगजनकों का पता लगाने के लिए बाहरी वातावरण, साथ ही इसमें फोरेंसिक मेडिकल जांचप्रोटीन के प्रकार को निर्धारित करने के लिए, विशेष रूप से, रक्त प्रोटीन या अन्य जैविक तरल पदार्थ।

ऑचटरलोनी इम्युनोडिफ्यूजन

अवक्षेपण प्रतिक्रिया अगर जेल पर की जा सकती है।

यह विधि इस तथ्य पर आधारित है कि एंटीजन और एंटीबॉडी के कण, अपने अलग-अलग आकार के कारण, जेल में अलग-अलग गति से फैलते हैं और परिणामस्वरूप, अलग-अलग दूरी तक चले जाते हैं। इससे उन मामलों में व्यक्तिगत एंटीजन सिस्टम को अलग करना संभव हो जाता है जहां वे मिश्रण में होते हैं, और इसलिए, बैक्टीरिया और जटिल प्रोटीन पदार्थों, सीरम और पशु ऊतकों की एंटीजेनिक संरचना का अध्ययन करना संभव हो जाता है।

दृश्य और प्रभावी तरीकाजेल में अवक्षेपण का प्रस्ताव आउचरलोनी द्वारा किया गया था।

पेट्री डिश पर अगर से छोटे-छोटे छेद किये जाते हैं, एक दूसरे से कुछ दूरी पर काटे जाते हैं। उनमें से एक में एंटीजन डाला जाता है, दूसरे में सीरम। प्रतिक्रिया घटक जेल में एक दूसरे की ओर फैलते हैं और एक दृश्य अवक्षेपण रेखा बनाते हैं जहां एंटीजन अपने लिए विशिष्ट एंटीबॉडी की इष्टतम सांद्रता से मिलते हैं। क्योंकि अभिकर्मक कुओं से संकेंद्रित रूप से फैलते हैं, एक एंटीबॉडी कुएं के चारों ओर अलग-अलग एंटीजन (या एक ही एंटीजन के अलग-अलग तनुकरण) वाले कई कुओं को रखकर कई परखें की जा सकती हैं।

ऑचटरलोनी प्रतिक्रिया एक ज्ञात सीरम से एंटीजन की प्रकृति के बारे में निष्कर्ष निकालना संभव बनाती है और, इसके विपरीत, एक ज्ञात एंटीजन से एंटीबॉडी की प्रकृति निर्धारित होती है।

विधि का लाभ यह है कि यह किसी को जटिल मिश्रण के एंटीजेनिक घटकों की तुलना करने और उनकी समानता या अंतर का न्याय करने की अनुमति देता है। एंटीजन की समानता की तुलना करने के लिए, कुओं के साथ अगर तैयार करें: एंटीसीरम को एक में डाला जाता है, और तुलना किए जा रहे एंटीजन को दूसरे में डाला जाता है। यदि एंटीजन भिन्न हैं, तो अवक्षेपण बैंड अलग-अलग स्थित हैं।

इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस

हाल के वर्षों में, नाजुक प्रतिरक्षाविज्ञानी अध्ययनों के लिए इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस की विधि का उपयोग किया गया है। विधि का वर्णन सबसे पहले पी. द्वारा किया गया था।

1953 में ग्रैबर और के.ए. विलियम्स। यह इम्यूनोडिफ्यूजन के साथ कांच की प्लेटों पर अगर जेल वैद्युतकणसंचलन का एक संयोजन है। सबसे पहले, एंटीजन का इलेक्ट्रोफोरेटिक पृथक्करण किया जाता है, जो अक्सर प्रोटीन या अन्य अणुओं का मिश्रण होता है। ऐसा करने के लिए, एंटीजन को अगर में पहले से कटे हुए कुएं में डाला जाता है, और अगर प्लेट को कुछ समय के लिए निरंतर विद्युत प्रवाह के क्षेत्र में रखा जाता है।

के कारण अलग गतिअणुओं की गति के कारण एंटीजन अपने घटक भागों में विभाजित हो जाता है। इसके बाद, अवक्षेपित प्रतिरक्षा सीरम को वर्तमान प्रवाह के समानांतर दिशा में काटे गए खांचे में डाला जाता है।

एंटीजन और एंटीसीरम जेल में एक दूसरे की ओर फैलते हैं।

वर्षण

प्रत्येक एंटीजन अपने संबंधित एंटीबॉडी के साथ एक चाप-आकार के वर्षा क्षेत्र को जन्म देता है। इन रेखाओं की संख्या, स्थिति और आकार मूल एंटीजन मिश्रण की संरचना का अंदाजा देते हैं।

फ़्लोक्यूलेशन प्रतिक्रिया

यह विधि 1924 में रेमन द्वारा प्रस्तावित की गई थी।

यह इस तथ्य पर आधारित है कि कुछ शर्तों के तहत एंटीटॉक्सिक सीरम के साथ विष का मिश्रण मैलापन और वर्षा देता है। इस मामले में, प्रतिक्रिया उन परीक्षण ट्यूबों में पहले होती है जहां एंटीटॉक्सिन की मात्रा उस खुराक से मेल खाती है जो विष की इस मात्रा को पूरी तरह से बेअसर कर देती है।

इसलिए, यदि विष की ताकत ज्ञात है, तो अज्ञात परीक्षण सीरम में एंटीटॉक्सिन की मात्रा निर्धारित की जा सकती है। ऐसा करने के लिए, परीक्षण सीरम के कई तनुकरण तैयार करें, प्रत्येक तनुकरण में समान मात्रा में ज्ञात विष मिलाएं, और फिर देखें कि किस परखनली में फ्लोक्यूलेशन (समाधान का मैलापन) पहले होता है। प्रारंभिक फ़्लोक्यूलेशन निर्धारित किया जाता है। फिर गणना की जाती है.

उदाहरण के लिए, परीक्षण सीरम में एंटी-डिप्थीरिया एंटीबॉडी की एकाग्रता निर्धारित करना आवश्यक है। प्रतिक्रिया में 1 मिलीलीटर में 50 एलएफ युक्त डिप्थीरिया विष का उपयोग किया जाता है (एलएफ विष की न्यूनतम मात्रा है जिसे एंटीसेरम की 1 एंटीटॉक्सिक यूनिट (एयू) द्वारा बेअसर किया जाता है।

आइए मान लें कि प्रारंभिक फ्लोक्यूलेशन एक टेस्ट ट्यूब में देखा गया था जिसमें इस सीरम के 0.2 मिलीलीटर और 100 एलएफ (50 एलएफ x 2) की गतिविधि के साथ ज्ञात विष के 2 मिलीलीटर शामिल थे।

इसका मतलब है कि 0.2 मिलीलीटर सीरम ने इस विष को निष्क्रिय कर दिया। इसलिए, 0.2 मिलीलीटर सीरम में 100 एई होता है, और इस सीरम के 1 मिलीलीटर में एंटीबॉडी एकाग्रता 500 एई (100 एई x 5) से मेल खाती है।

इसी तरह की विधि से, फ्लोक्यूलेशन प्रतिक्रिया का उपयोग विपरीत उद्देश्य के लिए किया जा सकता है - टॉक्सोइड्स के प्रतिरक्षा गुणों को निर्धारित करने के लिए।

इसके लिए एक मानक एंटीटॉक्सिक सीरम की आवश्यकता होती है।

निराकरण प्रतिक्रिया

प्रतिक्रिया का उपयोग परीक्षण सामग्री में जीवाणु विषाक्त पदार्थों को निर्धारित करने के लिए जीवाणु खाद्य विषाक्तता के निदान में किया जाता है। इसके अलावा, रखरखाव के लिए बाहरी वातावरण की कुछ वस्तुओं की जांच करते समय इसका उपयोग किया जा सकता है। रोगजनक जीवाणुउदाहरण के लिए, टेटनस या गैस गैंग्रीन रोगजनकों की उपस्थिति के लिए मिट्टी का परीक्षण करते समय विषाक्त पदार्थों का उत्पादन।

यह ज्ञात है कि विष, जब समजात एंटीटॉक्सिक सीरम के साथ मिलाया जाता है, तो इसका प्रदर्शन नहीं होता है विषैला प्रभाव, चूंकि विष निष्प्रभावी हो गया है। एक नियम के रूप में, एक एंटीटॉक्सिन के साथ एक विष की परस्पर क्रिया प्रतिक्रिया सख्ती से विशिष्ट होती है, इसलिए, विष के प्रकार को निर्धारित करने के लिए एक तटस्थीकरण प्रतिक्रिया करने के लिए, प्रत्येक प्रकार और प्रकार के लिए विशिष्ट नैदानिक ​​सीरा होना आवश्यक है। विष. यदि परीक्षण सामग्री में कई विषाक्त पदार्थों की उपस्थिति अपेक्षित हो तो 2-3 एंटीटॉक्सिक सीरा या अधिक का मिश्रण एक साथ उपयोग किया जा सकता है।

तटस्थीकरण प्रतिक्रिया आपको रोगज़नक़ के विष के प्रकार और प्रकार को निर्धारित करने की अनुमति देती है।

जिस सामग्री का परीक्षण किया जा रहा है वह खाद्य उत्पादों का छनना हो सकता है जो कथित तौर पर विषाक्तता का कारण बनता है, उन व्यंजनों से धुल जाना जहां ये उत्पाद स्थित थे, आदि।

सबसे पहले संदिग्ध विष को निष्क्रिय किया जाता है। ऐसा करने के लिए, परीक्षण सामग्री (प्रायोगिक ट्यूब) के साथ टेस्ट ट्यूब में एक एंटीटॉक्सिक डायग्नोस्टिक सीरम जोड़ा जाता है (इसमें वांछित विष के प्रति एंटीबॉडी होते हैं); एक अन्य परखनली (नियंत्रण) में समान मात्रा में शारीरिक घोल मिलाया जाता है।

अल्पकालिक ऊष्मायन के बाद, ट्यूबों की सामग्री को सफेद चूहों के दो समूहों (प्रायोगिक और नियंत्रण) में प्रशासित किया जाता है।

नियंत्रण जानवरों की मृत्यु के तुरंत बाद तटस्थीकरण प्रतिक्रिया के परिणामों को ध्यान में रखा जाता है। इस मामले में, प्राप्त जानवरों के जीवित रहने का तथ्य एंटीटॉक्सिक सीरमपरीक्षण सामग्री के साथ, इसमें प्रशासित सीरम के अनुरूप विष की उपस्थिति का संकेत मिलता है।

तटस्थीकरण प्रतिक्रिया का लाभ प्राप्त परिणामों की उच्च विश्वसनीयता है।

हालाँकि, इसकी संवेदनशीलता और उत्तर प्राप्त करने की गति के मामले में, यह कुछ अन्य शोध विधियों से कमतर है।

लाइसिस प्रतिक्रियाएं

लाइसिस प्रतिक्रियाओं को आमतौर पर पूरक की उपस्थिति में किसी दिए गए एंटीजन के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी के प्रभाव में कॉर्पस्क्यूलर एंटीजन का विघटन कहा जाता है।

से प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाएंबैक्टीरिया और अन्य कणिका प्रतिजनों के लसीका की घटना के आधार पर, बैक्टीरियोलिसिस और हेमोलिसिस की प्रतिक्रियाओं का मुख्य रूप से उपयोग किया जाता है।

बैक्टीरियोलिसिस प्रतिक्रिया

प्रतिक्रिया इन विट्रो और विवो दोनों में होती है। उत्तरार्द्ध को वी.आई. प्रतिक्रिया के रूप में जाना जाता है। इसेव-फ़िफ़र।

इन वैज्ञानिकों ने दिखा दिया है कि अगर गिनी सूअरहैजा एंटीजन के साथ पहले टीकाकरण करें, फिर बाद में विब्रियो कोलेरी की अत्यधिक विषैली संस्कृति के पेट की गुहा में इंजेक्शन से जानवरों में संक्रमण नहीं होता है, क्योंकि पेट की गुहारोगज़नक़ विशिष्ट एंटीबॉडी के प्रभाव में घुल जाता है।

इसके बाद मैं.

आई. मेचनिकोव ने साबित किया कि प्रतिरक्षा सीरम के प्रभाव में विब्रियो कॉलेरी का एक समान विघटन एक टेस्ट ट्यूब में होता है यदि ताजा सीरम, पूरक का एक स्रोत, मुख्य घटकों में जोड़ा जाता है। पूरक की उपस्थिति में विशिष्ट एंटीबॉडी की क्रिया के तहत बैक्टीरिया के विघटन को बैक्टीरियोलिसिस प्रतिक्रिया कहा जाता है।

बैक्टीरियोलिसिस प्रतिक्रिया स्थापित करते समय, पहले परीक्षण सीरम के 10 गुना तनुकरण की एक श्रृंखला तैयार की जाती है। फिर प्रत्येक टेस्ट ट्यूब में माइक्रोबियल सस्पेंशन की समान मात्रा (1-2 बूंद) डाली जाती है। मिश्रण में पूरक मिलाया जाता है। 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन के बाद, व्यवहार्य बैक्टीरिया की उपस्थिति या अनुपस्थिति का निर्धारण करने के लिए मिश्रण को प्रत्येक ट्यूब से एक पोषक माध्यम पर टीका लगाया जाता है।

प्रतिक्रिया का उपयोग किसी ज्ञात सूक्ष्मजीव का उपयोग करके एंटीबॉडी निर्धारित करने या नैदानिक ​​प्रतिरक्षा सीरम का उपयोग करके सूक्ष्म जीव के प्रकार को निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है।

में व्यावहारिक कार्यइस प्रतिक्रिया का उपयोग शायद ही कभी बैक्टीरियोलॉजिस्ट द्वारा किया जाता है, मुख्य रूप से हैजा और हैजा जैसे विब्रियोस को अलग करने के लिए।

हेमोलिसिस प्रतिक्रिया

हेमोलिसिस का तंत्र बैक्टीरियोलिसिस के तंत्र के समान है।

प्रतिक्रिया में प्रयुक्त लाल रक्त कोशिकाएं एंटीजन हैं। एंटीबॉडी का स्रोत एंटी-एरिथ्रोसाइट सीरम है (उदाहरण के लिए, यदि प्रतिक्रिया में भेड़ एरिथ्रोसाइट्स का उपयोग किया जाता है, तो विशिष्ट एंटी-एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी के साथ आवश्यक सीरम भेड़ एरिथ्रोसाइट्स से प्रतिरक्षित खरगोशों से प्राप्त किया जाता है)।

गिनी पिग रक्त सीरम का उपयोग अक्सर लसीका प्रतिक्रियाओं में पूरक के रूप में किया जाता है, क्योंकि इसमें अन्य जानवरों के सीरा की तुलना में काफी अधिक पूरक होता है।

ऐसे मामलों में जहां पूरक की उपस्थिति में एंटीबॉडी लाल रक्त कोशिकाओं को नष्ट कर देते हैं, उनमें से हीमोग्लोबिन निकलता है, और लाल रक्त कोशिकाओं के बादल निलंबन का प्रतिक्रियाशील मिश्रण एक पारदर्शी लाल तरल (लैकर रक्त) में बदल जाता है।

इस प्रतिक्रिया को हेमोलिसिस कहा जाता है। प्रयोगशाला अभ्यास में, इसका उपयोग पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया में पूरक सोखना के संकेतक के रूप में किया जाता है।

सम्बंधित जानकारी:

साइट पर खोजें:

व्याख्यान की रूपरेखा: सूक्ष्म जीव विज्ञान के विकास का विषय और संक्षिप्त इतिहास। सूक्ष्मजीवों के सामान्य गुण और प्रकृति में उनकी स्थिति।

शीघ्र प्रतिक्रिया

पशु चिकित्सा सूक्ष्म जीव विज्ञान और उसके कार्य

mir.zavantag.com > जीव विज्ञान > व्याख्यान

1 … 7 8 9 10 11 12 13 14 15

^ आरए को पहली बार 1896 में एम. ग्रुबर द्वारा विकसित किया गया था। प्रतिक्रिया का सार एक एंटीजन के साथ एक एंटीबॉडी की बातचीत है, जिसके परिणामस्वरूप नग्न आंखों को दिखाई देने वाले गुच्छे और गांठ के गठन के साथ रोगाणुओं का चिपकना (एग्लूटिनेशन) होता है। आरए का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है सीरोलॉजिकल डायग्नोस्टिक्सअनेक जीवाण्विक संक्रमण(ब्रुसेलोसिस, ग्लैंडर्स, साल्मोनेलोसिस, कोलीबैसिलोसिस, आदि) और पृथक सूक्ष्मजीवों की प्रजातियों और प्रकारों की सीरोलॉजिकल पहचान के लिए। आरए की स्टेजिंग के लिए कई तरीके हैं: टेस्ट ट्यूब (वॉल्यूम), ड्रिप (प्लेट), ब्लड ड्रॉप, दूध के साथ रिंग रिएक्शन, हेमग्लूटीनेशन रिएक्शन और इसके वेरिएंट (आरजेडजीए, आरएनजीए), कॉम्ब्स एंटीग्लोबुलिन टेस्ट आदि। ^ – सीरम की जगह खून लिया जाता है. एक प्लेट प्रतिक्रिया की जाती है. मुर्गियों और टर्की के पुलोरोसिस, मुर्गियों के माइकोप्लाज्मोसिस का निदान किया जाता है। कूम्ब्स प्रतिक्रियाआपको अपूर्ण एंटीबॉडी की पहचान करने की अनुमति देता है। उत्तरार्द्ध मोनोवैलेंट हैं, और इसलिए वे एग्लूटीनेट के गठन को रोकते हैं। विधि एंटीग्लोबुलिन सीरम के उपयोग पर आधारित है, जो कॉर्पसकुलर एंटीजन (एरिथ्रोसाइट्स, बैक्टीरिया) पर तय अपूर्ण एंटीबॉडी के कनेक्शन के लिए मध्यस्थ के रूप में कार्य करता है। ^ - यह सीरोलॉजिकल और डायग्नोस्टिक रूप से सटीक प्रतिक्रियाओं पर लागू नहीं होता है, लेकिन यह आपको एंटीजन - हेमाग्लगुटिनिन का पता लगाने और कुछ बैक्टीरिया और माइकोप्लाज्मा में हेमग्लगुटिनेटिंग गुण (लाल रक्त कोशिकाओं को जोड़ने की क्षमता) स्थापित करने की अनुमति देता है। आरएनजीए- हाल के वर्षों में सेरोडायनामिक्स में अग्रणी स्थानों में से एक ले लिया है। इसका सार इस तथ्य में निहित है कि संबंधित रोगज़नक़ या एंटीबॉडी के एंटीजन के प्रोटीन अणु भेड़ या अन्य जानवर के टैनिन-उपचारित एरिथ्रोसाइट्स पर पूर्व-अवशोषित होते हैं। फिर संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स को बीमार जानवरों के रक्त सीरा के साथ या दूसरे मामले में, अध्ययन के तहत एंटीजन के साथ मिलाकर एक प्रतिक्रिया की जाती है। अगर सीरम में कोई खास बात है. इस एंटीजन के प्रतिरक्षी (या इसके विपरीत) लाल रक्त कोशिकाओं के एकत्रीकरण का कारण बनते हैं - एक सकारात्मक प्रतिक्रिया। 1897 में आर. क्रॉस द्वारा प्रस्तावित। अवक्षेपण एक ऐसी घटना है जो प्रीसिपिटिन एंटीबॉडी और प्रीसिपिटिनोजेन एंटीजन की परस्पर क्रिया के दौरान देखी जाती है। प्रतिक्रिया का सार प्रतिरक्षा सीरम में पाए जाने वाले विशिष्ट एंटीबॉडी के प्रभाव में एंटीजन कोलाइड्स के फैलाव और उनकी वर्षा में परिवर्तन है। आरपी को टेस्ट ट्यूब में तरल माध्यम (रिंग रिएक्शन) या अगर जेल (प्लेट आरपी) में वितरित किया जा सकता है। रिंग-प्रिसिपिटेशन प्रतिक्रिया पहली बार एस्कोली (1910) द्वारा प्रस्तावित की गई थी; इसका उपयोग एंथ्रेक्स के निदान के लिए सबसे व्यापक रूप से किया जाता है। संचालन करते समय पशु चिकित्सा परीक्षणआरपी मांस, आटा और अन्य उत्पादों के मिथ्याकरण का निर्धारण करने की एक विधि है। विशेष अर्थरक्त के प्रकार का निर्धारण करते समय यह प्रतिक्रिया फोरेंसिक चिकित्सा परीक्षण में होती है। हालाँकि, तरल माध्यम में अवक्षेपण प्रतिक्रिया का उपयोग किसी को एंटीजन की विविधता को चिह्नित करने की अनुमति नहीं देता है, अर्थात। तैयारी में एंटीजन की मात्रा और एकाग्रता। यह जानकारी आरपी को एक जेल (आमतौर पर अगर) में रखकर प्राप्त की जा सकती है। गति की गति होने पर, दवा के विभिन्न एंटीजन असमान रूप से फैलते हैं, समजात एंटीबॉडी के साथ मिलने के बिंदु पर पारदर्शी जेल की मोटाई में अवक्षेप बनाते हैं। प्रीसिपिटिन लाइनों का स्थानीयकरण और एकाग्रता एंटीजेनिक तैयारी के प्रत्येक घटक की विशेषता होगी, जो इसकी गुणवत्ता के लिए एक मानदंड के रूप में कार्य करता है। दवा को पतला करके, उसमें एंटीजन की सापेक्ष सामग्री की विशेषता बताई जा सकती है। आरडीपी के मंचन के लिए कई तरीके विकसित किए गए हैं: हौडिन (1946) के अनुसार प्रत्यक्ष एक-आयामी प्रसार की विधि, मैनसिनी (1963) के अनुसार सरल रेडियल इम्युनोडिफ्यूजन की विधि, ऑचटरलोनी के अनुसार अगर जेल में दोहरे प्रसार की विधि ( 1948), आदि। ^ (आरएन) इस प्रतिक्रिया को पहली बार 1890 में बेहरिंग और किताज़ाटो द्वारा प्रदर्शित किया गया था। मॉडल पर टेटनस विषाक्त पदार्थऔर एंटीटॉक्सिन। आरएन का सार रोगज़नक़ या उसके चयापचय उत्पादों के संक्रामक गुणों को दबाने (निष्क्रिय) करने के लिए प्रतिरक्षा सीरम के समजात एंटीबॉडी की क्षमता में निहित है। प्रतिक्रिया के परिणाम को स्थापित करने के लिए, प्रयोगशाला जानवरों, सीसी और ईसी को एंटीजन-एंटीबॉडी मिश्रण से संक्रमित किया जाता है। सूचक सकारात्मक आरएन है - जैविक परीक्षण प्रणालियों की मृत्यु की अनुपस्थिति। में जीवाणु अभ्यासआरएन का उपयोग एनारोबिक एंटरोटॉक्सिमिया, बोटुलिज़्म आदि के निदान में किया जाता है। आरएन को विषाक्त पदार्थों, टॉक्सोइड्स या एंटीटॉक्सिन का पता लगाने और अनुमापन करने के लिए किया जाता है। ^ (आरएसके) बोर्डेट और झांगौ (1901) द्वारा दो घटनाओं के आधार पर विकसित: बैक्टीरियोलिसिस और हेमोलिसिस। रक्त सीरम में एंटीबॉडी का पता लगाने और परीक्षण सामग्री में एंटीजन का पता लगाने के लिए उपयोग किया जाता है (ब्रुसेलोसिस, ग्लैंडर्स, रिकेट्सियोसिस, तपेदिक, आदि के लिए)। यह प्रतिक्रिया एक अप्रत्यक्ष दो-प्रणाली प्रतिक्रिया है। इसमें 5 घटक शामिल हैं: प्रतिजन। परीक्षण सीरम. पूरक होना। हेमोलिटिक सीरम. भेड़ की लाल रक्त कोशिकाएं. घटक 3,4,5 सूचक प्रणाली बनाते हैं। यदि परीक्षण सीरम के एंटीजन और एंटीबॉडी एक दूसरे से मेल खाते हैं मित्र, एक एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिरक्षा कॉम्प्लेक्स उत्पन्न होता है, जो उस वातावरण से पूरक को बांधता है और निकालता है जहां प्रतिक्रिया होती है। यदि परीक्षण सीरम में एंटीजन के अनुरूप कोई एंटीबॉडी नहीं हैं, तो निर्दिष्ट कॉम्प्लेक्स नहीं बनता है - पूरक मुक्त रहता है। चूंकि ये अदृश्य प्रक्रियाएं हैं, पूरक का क्या हुआ, इस सवाल को हल करने के लिए, हेमोलिटिक प्रणाली के घटकों - हेमोलिटिक सीरम + लाल रक्त कोशिकाओं - को एक संकेतक के रूप में टेस्ट ट्यूब में पेश किया जाता है। यदि बैक्टीरियोलॉजिकल सिस्टम में पूरक बंधा हुआ है, तो लाल रक्त कोशिकाओं का हेमोलिसिस नहीं होगा, परिणाम सकारात्मक है - सीरम में एंटीबॉडी होते हैं। हेमोलिसिस की उपस्थिति बैक्टीरियोलॉजिकल सिस्टम में मुक्त पूरक की उपस्थिति के संकेतक के रूप में कार्य करती है, जो केवल तभी संभव है जब परीक्षण सीरम में कोई एंटीबॉडी न हों - परिणाम नकारात्मक है। आरएससी सख्त के तहत होता है मात्रात्मक संबंधअवयव। यह उनके प्रारंभिक अनुमापन द्वारा प्राप्त किया जाता है (प्रतिक्रिया के दिन पूरक और हेमोलिटिक सीरम का अनुमापन किया जाता है; माइक्रोबियल एंटीजन - 2-3 महीने के भीतर एक बार)। अनुमापन प्रतिक्रिया को अंजाम देने के लिए किसी विशेष घटक की सबसे छोटी मात्रा का निर्धारण है; अधिकता या कमी का अर्थ है परिणामों का विरूपण। आरडीएससी आरएसके का एक प्रकार है, लेकिन इसमें अंतर है कि प्रतिक्रिया का पहला चरण ठंड (40C) में 16-18 घंटे तक चलता है, जो एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स द्वारा पूरक के लंबे समय तक सोखने के कारण संवेदनशीलता बढ़ाता है।

7 8 9 10 11 12 13 14 15

समान:

	"पारिस्थितिक सूक्ष्म जीव विज्ञान" की अवधारणा की परिभाषा सामान्य सूक्ष्म जीव विज्ञान, पर्यावरणीय वस्तुओं और मैक्रोऑर्गेनिज्म के साथ एक दूसरे के साथ सूक्ष्मजीवों के संबंधों का अध्ययन करता है		आवश्यक को प्रतिबिंबित करने वाली सबसे सामान्य और मौलिक अवधारणाएँ... दर्शनशास्त्र सबसे अधिक अध्ययन करने वाला विज्ञान है सामान्य प्रावधानमनुष्य, प्रकृति और ज्ञान के बारे में
	योजना विषय और अनुशासन की विधि "अंतर्राष्ट्रीय आर्थिक संबंध"... अनुशासन का विषय और विधि "अंतर्राष्ट्रीय आर्थिक संबंध" और अंतर्राष्ट्रीय आर्थिक संबंधों के विकास का इतिहास		छात्रों के लिए "कानूनी मनोविज्ञान" पाठ्यक्रम में परीक्षा के लिए प्रश्न... कानूनी मनोविज्ञान की अवधारणा. कानूनी मनोविज्ञान के विकास का विषय, उद्देश्य और इतिहास
	1. राजनीतिक और कानूनी सिद्धांतों के इतिहास का विषय और पद्धति > विषय… यह इस तथ्य के कारण है कि इस कानूनी अनुशासन के ढांचे के भीतर, एक विशिष्ट विषय का अध्ययन और कवर किया जाता है - उत्पत्ति का इतिहास...		1. एक विज्ञान के रूप में दर्शन का इतिहास। इसका विषय एवं विधि इसका विषय सबसे सामान्य कानून, सिद्धांत, तरीके और अस्तित्व के रूप, मनुष्य का अपने आसपास की दुनिया और स्वयं से संबंध है...
	कजाकिस्तान गणराज्य के शिक्षा और विज्ञान मंत्रालय छात्र गठबंधन... रिपब्लिकन प्रतियोगिता "स्टूडेंट ऑफ द ईयर 2011" (बाद में प्रतियोगिता के रूप में संदर्भित) पर यह विनियमन इसके लक्ष्यों और उद्देश्यों, प्रतिभागियों को परिभाषित करता है...		"सूक्ष्मजीव विज्ञान" और "सूक्ष्मजीव" शब्दों की परिभाषा …
	अनुशासन "संघर्षविज्ञान" में परीक्षण की तैयारी के लिए प्रश्न एक विज्ञान के रूप में संघर्षविज्ञान: विषय, लक्ष्य, उद्देश्य, वर्तमान समस्याएं, महत्व आधुनिक मंचसमाज का विकास		क्षेत्रीय वीडियो क्लिप प्रतियोगिता "के-रोल-के!" के बारे में सामान्य प्रावधान ये विनियम प्रतियोगिता के लक्ष्यों, उद्देश्यों, सिद्धांतों, इसके संगठन और संचालन की प्रक्रिया, भागीदारी और निर्धारण की प्रक्रिया को परिभाषित करते हैं...

अपनी वेबसाइट पर एक बटन जोड़ें:
स्कूल सामग्री
mir.zavantag.com

शीघ्र प्रतिक्रिया

वर्षा और एग्लूटीनेशन काफी हद तक समान प्रतिक्रियाएं हैं जो मुख्य रूप से अलग-अलग होती हैं भौतिक गुणएजी.

पहले मामले में, इसे घुलनशील रूप में प्रस्तुत किया जाता है, दूसरे में - कणिका रूपों में। आरपी का आधार एजी-एटी प्रतिक्रिया के दौरान अवक्षेप का निर्माण है। आरपी अत्यधिक विशिष्ट और संवेदनशील है।

प्रतिक्रिया सामग्री:

1. घुलनशील एजी या हैप्टेन (प्रेसीपिटिटोजेन);

2. एटी - प्रीसिपिटिन्स (प्रतिरक्षा अवक्षेपण सीरम; एंटीजन के उचित समाधान के साथ खरगोशों को प्रतिरक्षित करके प्राप्त);

शीघ्र प्रतिक्रिया

आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान या अगर जेल।

आरपी सेट करने के तरीके:

1) समाधान में आरपी - पी.

वलय वर्षा;

2) जेल में आरपी.

रिंग अवक्षेपण प्रतिक्रिया संकीर्ण अवक्षेपण नलिकाओं में की जाती है जिसमें अवक्षेपित सीरा डाला जाता है।

फिर एक प्रीसिपिटिनोजेन घोल डाला जाता है। यदि प्रतिक्रिया सकारात्मक है, तो अवयवों के बीच इंटरफेस पर एक बादलयुक्त अवक्षेपण वलय दिखाई देता है। आरपी को स्टेज करने की इस विधि का एक उदाहरण एस्कोली थर्मोप्रेसिपिटेशन प्रतिक्रिया है, जिसका उपयोग जानवरों के अंगों, त्वचा से निकाले गए एंथ्रेक्स रोगज़नक़ के थर्मोस्टेबल हैप्टेन का पता लगाने के लिए किया जाता है। और ऊन को उबालकर निष्कर्षण द्वारा। जेल में आरपी की किस्मों में से एक (ओचटरलोनी प्रतिक्रिया) आपको विषाक्तताजन्यता निर्धारित करने की अनुमति देती है डिप्थीरिया बैसिलसएंटीटॉक्सिक सीरम का उपयोग करना।

के साथ एक पेट्री डिश में पोषक माध्यमएंटीटॉक्सिक डिप्थीरिया सीरम में भिगोए गए फिल्टर पेपर की एक पट्टी रखें और इसे कागज की पट्टी के लंबवत धारियों के रूप में परीक्षण संस्कृतियों के साथ टीका लगाएं। 24 घंटे के लिए 37 पीएस पर इनक्यूबेट करें। टॉक्सिजेनिक कल्चर की उपस्थिति में, एंटीटॉक्सिन के साथ टॉक्सिन की परस्पर क्रिया के स्थल पर अवक्षेपण रेखाएँ बनती हैं। जेल में अवक्षेपण प्रतिक्रिया को इम्यूनोडिफ्यूजन कहा जाता है।

अक्सर जेल में फोरेसिस - इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस। विधि का सिद्धांत: अध्ययन के तहत एंटीजन को इलेक्ट्रोफोरेटिक रूप से विभाजित किया जाता है। परिणामी अंशों का विश्लेषण एंटीसेरम का उपयोग करके दोहरे प्रसार द्वारा किया जाता है।

एंथ्रेक्स बेसिली के एंटीजन का पता लगाने के लिए एंथ्रेक्स का निदान करने के लिए एस्कोली परीक्षण किया जाता है। अवक्षेपण प्रतिक्रिया करने के लिए, आपके पास होना चाहिए: प्रीसिपिटिनोजेन - हैप्टेन बी।

एंट्राचिस (ऊतक अर्क), प्रीसिपिटिन (प्रिसिपिटेटिंग एंथ्रेक्स सीरम) और सेलाइन।

थर्मोप्रेसीपिटिनोजेन की तैयारी।

1. एक 8 फ्लास्क में 1 ग्राम कुचली हुई त्वचा या 1 मिली बी. एंटीलगैस कल्चर को 10 मिली शारीरिक घोल से भरें।

2. फ्लास्क को उबलते हुए स्नान में 30-45 मिनट के लिए रखें।

3. एस्बेस्टस सामग्री के माध्यम से फ़िल्टर करें। छानना पूर्णतः पारदर्शी होना चाहिए। अवक्षेपण प्रतिक्रिया के लिए, निस्पंद को 100 गुना या अधिक पतला किया जाता है।

वलय अवक्षेपण प्रतिक्रिया की स्थापना।

1) 0.3 मिलीलीटर अवक्षेपण सीरम, संपूर्ण या पतला 1:5, 1:10, एक अवक्षेपण ट्यूब में डाला जाता है।

2) प्रीसिपिटिनोजेन को टेस्ट ट्यूब की दीवार के साथ सावधानी से स्तरित किया जाता है। यदि 5-15 मिनट के भीतर दो तरल पदार्थों की सीमा पर अवक्षेपित प्रोटीन की एक बादलदार अंगूठी बनती है तो प्रतिक्रिया सकारात्मक मानी जाती है।

अवक्षेपण प्रतिक्रिया स्थापित करते समय, निम्नलिखित नियंत्रणों का उपयोग किया जाता है:

ए) एंटीजन और खारा समाधान;

बी) विशिष्ट सीरम और भौतिक।

ग) एंटीजन और गैर विशिष्ट सीरम।

सभी नियंत्रण ट्यूबों में कोई गंदलापन नहीं होना चाहिए। वर्षा प्रतिक्रिया के लिए, 40-60 मिमी की ऊंचाई और 4-5 मिमी के व्यास वाली विशेष वर्षा ट्यूबों का उपयोग किया जाता है। संकीर्ण ट्यूबों में वर्षा बहुत तेजी से होती है और तुलना में अधिक स्पष्ट रूप से दिखाई देती है साधारण ट्यूबों को अच्छी तरह से धोया और सुखाया जाता है, ताकि उनका ग्लास पूरी तरह से पारदर्शी और सूखा रहे।

अवक्षेपण प्रतिक्रिया में, एक विशिष्ट प्रतिरक्षा परिसर अवक्षेपित होता है, जिसमें एक घुलनशील एंटीजन (लाइसेट, अर्क, हैप्टेन) और इलेक्ट्रोलाइट्स की उपस्थिति में एक विशिष्ट एंटीबॉडी शामिल होता है।

इस प्रतिक्रिया के परिणामस्वरूप बनने वाला बादल का छल्ला या अवक्षेप कहलाता है तलछट. यह प्रतिक्रिया मुख्य रूप से एंटीजन कणों के आकार में एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया से भिन्न होती है।

वर्षा प्रतिक्रिया का उपयोग आमतौर पर कई संक्रमणों (एंथ्रेक्स, मेनिनजाइटिस, आदि) के निदान में एंटीजन निर्धारित करने के लिए किया जाता है; फोरेंसिक चिकित्सा में - रक्त, शुक्राणु, आदि की प्रजाति निर्धारित करने के लिए; स्वच्छता और स्वास्थ्यकर अध्ययन में - उत्पादों के मिथ्याकरण की स्थापना करते समय; इसकी सहायता से जंतुओं और पौधों का फ़ाइलोजेनेटिक संबंध निर्धारित किया जाता है। प्रतिक्रिया के लिए आपको चाहिए:

1. एंटीबॉडीज (प्रेसीपिटिन्स) - एंटीबॉडी के उच्च टिटर (1:100,000 से कम नहीं) के साथ प्रतिरक्षा सीरम। अवक्षेपित सीरम का अनुमापांक उस एंटीजन के उच्चतम तनुकरण से निर्धारित होता है जिसके साथ यह प्रतिक्रिया करता है। सीरम का उपयोग आमतौर पर बिना पतला या पतला किया जाता है 1:5 -1:10.

2. एंटीजन - प्रोटीन या लिपोइड पॉलीसेकेराइड प्रकृति के विघटित पदार्थ (पूर्ण एंटीजन और हैप्टेंस)।

3. आइसोटोनिक समाधान।

अवक्षेपण प्रतिक्रिया को अंजाम देने की मुख्य विधियाँ हैं: वलय अवक्षेपण प्रतिक्रिया और अगर (जेल) में अवक्षेपण प्रतिक्रिया।

ध्यान! अवक्षेपण प्रतिक्रिया में शामिल सभी घटक पूरी तरह से पारदर्शी होने चाहिए।

वलय अवक्षेपण प्रतिक्रिया.पाश्चर पिपेट का उपयोग करके, अवक्षेपण ट्यूब में 0.2 - 0.3 मिलीलीटर (5-6 बूंद) सीरम डालें (सीरम ट्यूब की दीवारों पर नहीं लगना चाहिए)। समान मात्रा में एंटीजन को सीरम पर सावधानीपूर्वक स्तरित किया जाता है, इसे टेस्ट ट्यूब की दीवार के साथ एक पतली पाश्चर पिपेट के साथ डाला जाता है। टेस्ट ट्यूब को झुकी हुई स्थिति में रखा जाता है। जब ठीक से स्तरित किया जाता है, तो सीरम और एंटीजन के बीच एक स्पष्ट सीमा होनी चाहिए। सावधानी से, ताकि तरल मिश्रण न हो, टेस्ट ट्यूब को एक स्टैंड में रखें। यदि प्रतिक्रिया सकारात्मक है, तो एंटीजन और एंटीबॉडी के इंटरफेस पर एक बादलदार "रिंग" - एक अवक्षेप - बनता है।

आगर में वर्षा प्रतिक्रिया(गेले).प्रतिक्रिया की ख़ासियत यह है कि एंटीजन और एंटीबॉडी की परस्पर क्रिया घने वातावरण में होती है, अर्थात। जेल.परिणामी अवक्षेप माध्यम की मोटाई में एक अशांत लकीर देता है। एक बैंड की अनुपस्थिति प्रतिक्रिया घटकों के बीच एक विसंगति को इंगित करती है। इस प्रतिक्रिया का व्यापक रूप से बायोमेडिकल अनुसंधान में उपयोग किया जाता है, विशेष रूप से डिप्थीरिया के प्रेरक एजेंट में विष निर्माण के अध्ययन में।

लाइसिस प्रतिक्रिया (प्रतिरक्षा साइटोलिसिस)

प्रतिरक्षा लसीका- यह पूरक की अनिवार्य भागीदारी के साथ एंटीबॉडी के प्रभाव में कोशिकाओं का विघटन है। प्रतिक्रिया के लिए आपको चाहिए:

1. एंटीजन- रोगाणु, लाल रक्त कोशिकाएं या अन्य कोशिकाएं।

2. एंटीबॉडी(लाइसिन) - प्रतिरक्षा सीरम, कम अक्सर रोगी सीरम। बैक्टीरियोलाइटिक सीरम में बैक्टीरिया के विश्लेषण में शामिल एंटीबॉडी होते हैं; हेमोलिटिक - हेमोलिसिन जो लाल रक्त कोशिकाओं के लसीका को बढ़ावा देते हैं; स्पाइरोकेट्स के विश्लेषण के लिए स्पाइरोकेटोलिसिन, सेल-इटोलिसिन आदि की आवश्यकता होती है।

3. पूरक होना।गिनी पिग के सीरम में सबसे अधिक पूरक होता है। यह सीरम (कई जानवरों का मिश्रण) आमतौर पर पूरक के रूप में उपयोग किया जाता है।

4. आइसोटोनिक समाधान.

शीघ्र प्रतिक्रिया।

मापदण्ड नाम	अर्थ
लेख का विषय:	शीघ्र प्रतिक्रिया।
रूब्रिक (विषयगत श्रेणी)	शिक्षा

वर्षा प्रतिक्रिया (आरपी) - इलेक्ट्रोलाइट की उपस्थिति में एंटीबॉडी की कार्रवाई के तहत घुलनशील एंटीजन की वर्षा। दृश्यमान प्रतिक्रिया प्रभाव (वर्षा घटना) - बादल (बादल वलय या तलछट का निर्माण - अवक्षेपण)।

आरपी का उपयोग कई मामलों में अज्ञात एंटीजन का पता लगाने के लिए किया जाता है संक्रामक रोग: एंथ्रेक्स, टुलारेमिया, मेनिनजाइटिस, चेचक के लिए. फोरेंसिक चिकित्सा में इसका उपयोग रक्त और शुक्राणु की प्रजाति निर्धारित करने के लिए किया जाता है; स्वच्छता और स्वास्थ्यकर अध्ययन में - खाद्य उत्पादों के मिथ्याकरण का निर्धारण करने के लिए। आरपी बहुत संवेदनशील है और 1:1,000,000 और 1:10,000,000 के तनुकरण पर एंटीजन का पता लगा सकता है।

अवक्षेपण प्रतिक्रिया के घटक.

1. एंटीजन (प्रीसिपिटिनोजेन) -यह आणविक प्रकृति का एक प्रतिजन है, जो सूक्ष्म रूप से परिक्षिप्त (घुलनशील) अवस्था में स्थित होता है। प्रीसिपिटिनोजेन्स - विभिन्न लाइसेट्स या ऊतक अर्क, आदि।
Ref.rf पर पोस्ट किया गया
एंटीजन कणों के आकार में प्रीसिपिटिनोजेन एग्लूटीनोजेन से भिन्न होता है। एग्लूटीनोजेनयह है कोशिका आकार(ये नष्ट हुई संपूर्ण कोशिकाएँ नहीं हैं), बल्कि आयाम हैं अवक्षेपणके साथ सहगामी आणविक आकार(ये प्रोटीन और कार्बोहाइड्रेट या लिपिड के साथ उनके कॉम्प्लेक्स हैं)। प्रीसिपिटिनोजेन घोल पारदर्शी।

2. एंटीबॉडीज़ (प्रीसिपिटिन्स)मानव रक्त सीरम या प्रतिरक्षा निदान अवक्षेपित सीरा में पाए जाते हैं जिनमें ज्ञात एंटीबॉडी होते हैं।

3. इलेक्ट्रोलाइट-आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान.

प्रीसिपिटिनोजेन प्राप्त करना.

सामग्री को पीसकर और उबालकर या अन्य तरीकों से उसमें से प्रोटीन एंटीजन निकालकर प्राप्त किया जाता है।

प्रीसिपिटिनोजेन्स के उदाहरण: विभिन्न अंगों और ऊतकों के लाइसेट्स या अर्क, विदेशी रक्त सीरम (सीरम है)। समाधान, सबसे पहले, विभिन्न प्रोटीन),रोगाणुओं के शोरबा संस्कृतियों के निस्पंद, रोगाणुओं के नमक अर्क, ऑटोलिसेट्स, आदि।

अवक्षेपण सीरम की तैयारी.

उपयुक्त प्रीसिपिटिनोजेन्स के साथ खरगोशों के हाइपरइम्यूनाइजेशन द्वारा प्राप्त किया गया। ऐसे सीरा में उन प्रीसिपिटिनोजेन्स के प्रति एंटीबॉडी होते हैं जिनके साथ खरगोशों को प्रतिरक्षित किया गया था।

अवक्षेपित सीरा के उदाहरण: अवक्षेपित करने वाला एंथ्रेक्स सीरम(इसमें एंथ्रेक्स एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी शामिल हैं), अवक्षेपण एंटीमेनिंगोकोकल सीरम(मेनिनजाइटिस के प्रेरक एजेंट के एंटीजन के खिलाफ एंटीबॉडी शामिल हैं), आदि।

अनुमापांकअवक्षेपण सीरम - अवक्षेपणोजेन का उच्चतम तनुकरण जिस पर सीरम अभी भी अवक्षेपण प्रतिक्रिया देता है।

आरपी स्थापित करने की विधियाँ।

1. वलय अवक्षेपण प्रतिक्रिया -विशेष अवक्षेपण नलिकाओं (व्यास - 0.4-0.5 सेमी, ऊँचाई - 7-8 सेमी) में किया जाता है। टेस्ट ट्यूब में 0.2 - 0.3 मिली प्रीसिपिटेटिंग सीरम मिलाया जाता है और प्रीसिपिटिनोजेन की समान मात्रा को पाश्चर पिपेट की लंबी टोंटी के साथ दीवार पर सावधानी से लगाया जाता है। अगला, ध्यान से क्षैतिज स्थितिटेस्ट ट्यूब को लंबवत रखा गया है।

प्रतिक्रिया परिणामों के लिए लेखांकनएंटीजन-एंटीबॉडी इंटरफेस पर एक सफेद रिंग की उपस्थिति द्वारा किया जाता है। यदि प्रतिक्रिया सकारात्मक है ऐसे वलय का निर्माण देखा जाता है। इस मामले में, एंटीजन एंटीबॉडी से मेल खाता है और वे बंध जाते हैं।

यदि उबालकर छान लिया जाए जलीय अर्कअंग और ऊतक, तो प्रतिक्रिया को आमतौर पर प्रतिक्रिया कहा जाता है थर्मोरिंग वर्षा (उदाहरण के लिए, एंथ्रेक्स का निदान करते समय)।

2. जेल में अवक्षेपण प्रतिक्रिया -पेट्री डिश या ग्लास स्लाइड पर किया जाता है, जहां अगर जेल की एक परत रखी जाती है। जैसे ही जेल सख्त हो जाता है, कुओं को काट दिया जाता है जिसमें एंटीजन या एंटीबॉडी, या दोनों रखे जाते हैं। अंतर करना 2 तरीकेजेल में आरपी:

एक विधि सरल (रेडियल) इम्युनोडिफ्यूजन: प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के घटकों में से एक (एंटीजन या एंटीबॉडी) को कुएं में रखा जाता है, और दूसरे घटक को अगर के साथ मिलाया जाता है; यदि परिणाम सकारात्मक है (एंटीजन एंटीबॉडी से मेल खाता है) a अवक्षेपित वलय ;

बी) विधि दोहरा इम्युनोडिफ्यूजन: एंटीबॉडी और एंटीजन दोनों को अलग-अलग कुओं में रखा जाता है, वे अगर जेल में एक दूसरे की ओर फैलते हैं; यदि परिणाम सकारात्मक है जहां एंटीबॉडी और एंटीजन मिलते हैं, उनका निर्माण होता है वर्षा रेखाएँ.

जेल में आरपी का उदाहरणऑचटरलोनी डबल इम्युनोडिफ्यूजन प्रतिक्रिया है डिप्थीरिया का निदान करते समय

इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस -यह एक ऐसी विधि है जो वैद्युतकणसंचलन विधि और अवक्षेपण प्रतिक्रिया को जोड़ती है। इलेक्ट्रोफोरेसिस का उपयोग करके एंटीजन (उदाहरण के लिए, सीरम प्रोटीन) के मिश्रण को एक जेल में अलग किया जाता है। फिर, रुचि के प्रोटीन (अज्ञात एंटीजन) को खोजने और पहचानने के लिए, एक डायग्नोस्टिक अवक्षेपण सीरम का उपयोग किया जाता है जिसमें उस प्रोटीन (ज्ञात एंटीबॉडी) के एंटीबॉडी होते हैं। ऐसा करने के लिए, डायग्नोस्टिक सीरम को प्रोटीन के समानांतर खांचे में डाला जाता है। यदि प्रोटीनों में से कोई एक है जो सीरम में पाए जाने वाले एंटीबॉडी से मेल खाता है, तो वर्षा रेखाएँ.

शीघ्र प्रतिक्रिया। - अवधारणा और प्रकार. "वर्षा प्रतिक्रिया" श्रेणी का वर्गीकरण और विशेषताएं। 2017, 2018.