Culoarea și transparența mediului finit. Reacția în lanț a uraniului și reacția senzațională în lanț

119. Reacții Pandey și Nonne - Apelt

Ca reactiv pentru efectuarea reacției Pandey, se folosește un lichid supernatant limpede, care se obține prin agitarea puternică a 100 g de acid carbolic lichid cu 1000 ml apă distilată. Pentru sedimente şi lichid limpede(reactiv), acest amestec se pune mai întâi într-un termostat timp de 3-4 ore, apoi se păstrează la temperatura camerei timp de 2-3 zile.

Puneți un ceas sau o lamă de sticlă pe hârtie de culoare închisă și aplicați 2-3 picături de reactiv pe acesta, apoi 1 picătură fluid cerebrospinal. Dacă picătura devine tulbure sau apare o turbiditate filamentoasă de-a lungul periferiei sale, reacția este considerată pozitivă.

Pentru a efectua reacția Nonne-Apelt, sunt necesare eprubete curate, o soluție saturată de sulfat de amoniu, apă distilată și hârtie închisă la culoare. Se prepară o soluție saturată de sulfat de amoniu în felul următor: 0,5 g de sulfat de amoniu neutru chimic pur se pun într-un balon de 1000 ml, apoi se toarnă 100 ml de apă distilată încălzită la 95 ° C, se agită până când sarea este complet dizolvată și se lasă câteva zile la temperatura camerei. După 2-3 zile, soluția se filtrează și se determină pH-ul. Reacția trebuie să fie neutră.

Se toarnă 0,5-1 ml din soluția rezultată în eprubetă și se adaugă cu grijă aceeași cantitate de lichid cefalorahidian de-a lungul peretelui tubului. După 3 minute, evaluați rezultatul. Apariția unui inel albicios indică o reacție pozitivă. Apoi se agită conținutul eprubetei, se determină gradul de turbiditate comparând cu o eprubetă care conține apă distilată. Rezultatele reacției sunt evaluate pe fundalul hârtiei negre.

120. Reacţia Bordet-Jangu

Test diagnostic valoros în identificare gonoree cronică printre persoanele cu cronici boli inflamatorii sistemul genito-urinar. Conform literaturii, cu utilizarea corectă Această metodă relevă până la 80% din cazurile de gonoree nedepistate prin metoda bacterioscopică sau bacteriologică.

Reacția Bordet-Jangu poate fi urmărită ca urmare a unei boli anterioare sau a utilizării unei gonovaccine pentru diagnostic (metodă imunobiologică de provocare), precum și terapeutic (tratamentul proceselor inflamatorii cronice ale sistemului genito-urinar la femei conform lui Baksheev) scop. Prin urmare, înainte de a o efectua, este necesar să colectați cu atenție o anamneză,

Reacția poate fi și fals pozitivă la introducerea laptelui, folosire în scopuri medicinale pirogenă.

Prin urmare, o reacție pozitivă Bordet-Jangu nu servește ca dovadă incontestabilă a prezenței infecție gonococică, precum și negativ nu poate fi dovada absenței gonoreei. in orice caz rezultate pozitive pentru o lungă perioadă de timp ar trebui să fie direcționat de un medic pentru a căuta un focar de infecție gonococică în organism.

Ca antigen, se folosește o cultură gonococică ucisă, care conține 3-4 miliarde de corpuri microbiene la 1 ml. Antigenul gonococic se păstrează cu o soluție de formaldehidă și se toarnă în fiole de 1-5 ml. Fiolele nedeschise sunt potrivite timp de 6 luni, deschise pot fi păstrate 2-3 zile într-o eprubetă sterilă la frigider la o temperatură de 3-5 ° C,

Reacția de fixare a complementului Borde-Zhang este efectuată în mod similar cu reacția Wasserman (vezi nr. 121). Antigenul gonococic se diluează cu soluție izotonică de clorură de sodiu conform titrului indicat pe eticheta fiolei. Reacția se desfășoară cel mai adesea într-un volum de 2,5 ml, prin urmare, la 0,5 ml de ser de testare diluat 1: 5, se adaugă 0,5 ml de antigen diluat în fiecare eprubetă. Restul de 1,5 ml reprezintă 1 ml de sistem hemolitic și 0,5 ml de complement.

Reacția este considerată pozitivă în prezența grade diferiteîntârzierea hemolizei în serul testat. În control (ser de sânge oameni sanatosi) se observă hemoliză completă.

121. Reacția Wasserman

În serul de sânge al pacienților cu sifilis, există reagine și anticorpi. Reaginele au capacitatea de a intra în compuși cu antigen cardiolipin. Anticorpii specifici împotriva Treponema pallidum se combină cu antigeni specifici. Complexele antigen-anticorp rezultate sunt absorbite de complementul adăugat în reacție. Indicatia se face prin introducerea unui sistem hemolitic (eritrocite de oaie + ser hemolitic).

Pentru ca reacția să aibă loc:

a) soluție izotonică de clorură de sodiu;

b) antigene ultrasunete treponemale (pastrate la frigider la +4 °C) si cardiolipin (pastrate la temperatura camerei);

c) complement, care este serul sanguin obţinut prin puncţia cardiacă a 5-10 cobai sănătoşi. Se poate pastra la frigider pana la 2 luni, cu conditia
soluție de conservare 4%. acid boricşi soluţie de sulfat de sodiu 5%;

d) hemolizină - ser hemolitic de iepure imunizat cu eritrocite de oaie cu diferite titruri (pastrat la frigider la o temperatură de 4°C);

e) eritrocite de oaie obţinute prin puncţie vena jugulară. Sângele se colectează într-un borcan steril cu mărgele de sticlă (pentru amestecare), se agită timp de 15 minute. Cheagurile de fibrină sunt separate prin filtrare prin tifon steril. Sângele defibrinat poate fi păstrat la frigider până la 5 zile.

Uneori este nevoie de o păstrare mai lungă a sângelui de oaie și, prin urmare, se păstrează cu un conservant special (6 g glucoză, 4,5 g acid boric, 100 ml soluție izotonică de clorură de sodiu), care se fierbe într-o baie de apă. timp de 20 de minute pe zi timp de 3 zile Pentru 100 ml de sânge defibrinat de oaie sunt necesari 15 ml de conservant. Sângele defibrinat conservat în acest fel este păstrat la frigider.

Experimentul principal este precedat de mai multe etape.

La un pacient din vena cubitală se iau 5-10 ml de sange si se proceseaza serul. La copii, sângele poate fi prelevat din vena temporală sau o incizie în călcâi. Puncția se face cu instrumente sterile, o seringă și un ac
prespălată cu soluție izotonică de clorură de sodiu.

Sângele pentru cercetare se ia pe stomacul gol; Cu 3-4 zile înainte de studiu, pacientului i se interzice utilizarea droguri, preparate digitalice, luați alcool.

Studiul nu trebuie efectuat la pacienții cu temperatură ridicată organism, după traumatisme, intervenții chirurgicale, anestezie, boli infecțioase recente, la femei în timpul menstruației, la femeile însărcinate (în ultimele 10 zile de sarcină), la femei în travaliu (în primele 10 zile după naștere), precum și la nou-născuți (în primele 10 zile de viață).

Sângele obținut într-un tub steril este plasat timp de 15-30 de minute într-un termostat la o temperatură de 37 °C. Cheagul rezultat este separat de pereții eprubetei cu o tijă de sticlă sterilă și plasat la frigider pentru o zi. Serul transparent separat (de deasupra cheagului) este aspirat cu o pipetă Pasteur folosind o peră de cauciuc sau turnat cu grijă într-un alt tub steril și inactivat într-o baie de apă timp de 30 de minute la o temperatură de 56 °C. Serul preparat în acest fel pentru experiment poate fi păstrat la frigider până la 5-6 zile.

Antigenele sunt diluate conform metodei și titrului indicate pe etichetă.

Pregătiți sistemul hemolitic. Pentru a face acest lucru, sângele defibrinat sau eritrocitele de oaie în cantitatea necesară pentru reacție sunt centrifugate, plasma este separată cu grijă, iar precipitatul este spălat cu 5-6 volume de soluție izotonă de clorură de sodiu până când supernatantul devine complet incolor. O suspensie de 3% de eritrocite într-o soluție izotonă de clorură de sodiu se prepară din sediment conform unui titru triplu.

O soluție de ser hemolitic și o suspensie de eritrocite de oaie se amestecă rapid și se pun într-un termostat timp de 30 de minute.

Complementul uscat este diluat cu soluție izotonică de clorură de sodiu într-un raport de 1:10, ser uman normal inactivat - 1:5.

Complementul este titrat în 30 de tuburi plasate într-un rack de 10 tuburi pe 3 rânduri. Pe două rânduri se titrează în prezența a două antigene, în al treilea - cu soluție izotonică de clorură de sodiu. Cinci eprubete sunt de control: două pentru cei doi antigeni corespunzători și câte una pentru controlul complementului, serului hemolitic și soluției izotonice de clorură de sodiu pentru hemotoxicitate; completați-le astfel:

Tuburile se pun într-un termostat timp de 45 de minute, după care se verifică. Hemoliza nu trebuie să fie în nicio eprubetă.

Complementul la o diluție de 1:10 se toarnă în 10 eprubete de pe primul rând al grătarului în doze: 0,1, 0,16, 0,2,0,24, 0,3, 0,36,0,4,0,44, 0,5 și 0,55 ml. La conținutul fiecărui tub se adaugă soluție izotonică de clorură de sodiu până la 1 ml și se amestecă bine. 0,25 ml de amestec din fiecare tub se transferă în eprubetele corespunzătoare din rândurile 2 și 3. Raftul cu eprubete se agită, se adaugă 0,5 ml de sistem hemolitic la al 3-lea rând de eprubete, se agită din nou și se pune timp de 45 de minute într-un termostat la o temperatură de 37 °C. Ser de sânge uman normal diluat cu soluție izotonică de clorură de sodiu într-un raport de 1:5, se toarnă 0,25 ml în toate cele 30 de eprubete.

Antigenul I (ecografia treponemică), diluat în titru cu soluție izotonică de clorură de sodiu, se adaugă 0,25 ml la 10 eprubete de pe primul rând; antigenul II (cardiolipină în aceeași diluție și în aceeași cantitate) - în 10 eprubete din rândul 2. Se toarnă 0,25 ml soluție izotonică de clorură de sodiu în 10 eprubete din al 3-lea rând, restul de 0,25 ml se toarnă. După incubarea într-un termostat, se adaugă 0,5 ml de sistem hemolitic în 20 de eprubete (primul și al doilea rând), se agită și se plasează din nou într-un termostat timp de 45 de minute.

După 45 de minute, se determină doza de lucru de complement, adică titrul acestuia cu o doză în intervalul 15-20%.

Titrul de complement este considerat a fi cantitate minimă, provocând hemoliza completă a eritrocitelor de berbec în prezența antigenului și a serului sanguin uman normal.

Experiența principală este că fiecare ser inactivat testat, diluat într-un raport de 1: 5 cu soluție izotonică de clorură de sodiu, este turnat în 0,25 ml în trei eprubete. Se adaugă 0,25 ml de antigen I în primul tub, 0,25 ml de antigen II în al doilea și 0,25 ml de soluție izotonică de clorură de sodiu în al treilea (martor). Se adaugă 0,25 ml de complement diluat la doza de lucru în toate eprubetele. Toate eprubetele se pun într-un termostat timp de 45 de minute, apoi se adaugă 0,5 ml de sistem hemolitic, se agită și se pun într-un termostat timp de 45-50 de minute. Rezultatul experimentului este înregistrat după debutul hemolizei complete în tuburile de control.

Rezultatele reacției sunt evaluate cu plusuri: întârziere completă a hemolizei (reacție puternic pozitivă) ++++, semnificativă (reacție pozitivă) +++, parțială (reacție slab pozitivă) ++, nesemnificativă (reacție îndoielnică) - ±, fără întârziere a hemolizei (reacție negativă) - .

La metoda cantitativă la efectuarea reacției Wassermann, experiența se stabilește cu volume descrescătoare de ser diluat cu soluție izotonică de clorură de sodiu.

Schema de desfășurare a experienței principale a reacției Wasserman

Semnificația clinică a reacției Wasserman este greu de supraestimat. Se efectuează pentru toți pacienții înainte de începerea tratamentului, dar sens special ea are la sifilis latent, înfrângere organe interne si sistemul nervos.

Rezultatele reacției Wasserman caracterizează calitatea tratamentului, ceea ce dă motive pentru anularea înregistrării pacienților tratați într-o anumită perioadă de timp.

În sifilisul primar, reacția Wasserman este de obicei pozitivă la sfârșitul săptămânii a 6-a din momentul infecției; cu sifilis proaspăt secundar, este pozitiv în aproape 100% din cazuri, cu recidivă secundară - în 98-100%; activ terțiar - în 85%; terțiar ascuns – în 60% din cazuri.

Reacția Wasserman este efectuată de două ori pentru toate femeile însărcinate, pacienții cu probleme somatice, nervoase, mentale și boli de piele, precum și contingentele decretate ale populației. În același timp, rezultatele pozitive și slab pozitive ale reacției ar trebui tratate critic, deoarece pot fi la sfârșitul sarcinii și după naștere, cu hipertiroidism, malarie, lepră, carie. tumoare maligna, boli infecțioase, colagenoze etc. Prin urmare, în prezența manifestari clinice boli, acestea trebuie luate în considerare, împreună cu datele bacterioscopiei, în primul rând.

În același timp, există factori care pot distorsiona adevărata natură a rezultatelor reacției Wasserman: sticlă de laborator prost spălată (urme de acid și alcali în eprubete), depozitarea pe termen lung a sângelui prelevat pentru cercetare, consumul de grăsimi. și alcool de către pacienți înainte de examinare, perioada de menstruație etc.

În toate cazurile, este de dorit să se efectueze o examinare cuprinzătoare a pacientului, inclusiv, pe lângă reacția Wassermann, și RIBT (vezi 122, 123, 124) etc.

122. Reacția lui Sachs - Vitebsky (citocolică)

Folosit pentru a detecta sifilisul. Se bazează pe formarea unui precipitat atunci când serul sanguin al pacientului este amestecat cu un antigen.

Pentru a pregăti antigenul, mușchii mai multor inimi de bovine sunt curățați de tendoane, fascie, grăsime, tocați într-o mașină de tocat carne și extrași cu un volum de 5 ori de etanol 96% timp de 15 zile cu agitare zilnică de 20 de minute. Extractul obtinut se evapora pe baie de apa intr-o cana de portelan sub vid. La reziduu se adaugă alcool etilic 96% fierbinte (masă galben aprins de lipoide) în cantitate de 1/3 din volumul mușchilor prelevați pentru extracție.

Extractul se păstrează 3 zile la temperatura camerei, se filtrează (in apă rece) si se adauga 0,3-0,6% solutie de colesterol cristalin, in functie de rezultatele titrarii cu seruri pozitive si negative. Depozitați antigenul citocolic la temperatura camerei în fiole sigilate sau eprubete sigilate.

Metodologie. La 2 ml de soluție izotonică de clorură de sodiu se toarnă rapid 1 ml de antigen citocol și se lasă la temperatura camerei timp de 15 minute până când apar fulgi. Se adaugă 0,1 ml de emulsie antigenică la 0,2 ml de ser inactivat, se agită timp de 3 minute și se lasă în pace 30 de minute, apoi se adaugă 1 ml soluție izotonică de clorură de sodiu.

În tubul de control cu ​​antigen se adaugă 1,2 ml soluție izotonică de clorură de sodiu și 0,1 ml emulsie antigenică. Nu ar trebui să existe fulgi în control. Rezultatele reacției sunt luate în considerare vizual sau cu lupa și sunt indicate în funcție de cantitatea de fulgi care au căzut cu plusuri (++++, +++, ++). Cu o reacție negativă, nu există fulgi, dar conținutul tubului poate fi ușor opalescent.

În 1931, P. Sachs și E. Witebsky au propus o modificare a acestei tehnici, care constă în diluarea antigenului în două faze: la 1 parte de antigen se adaugă 2 părți soluție izotonică de clorură de sodiu, ținută la temperatura camerei timp de 5 minute. , iar alte 9 părți de soluție izotonă se adaugă clorură de sodiu. De asemenea, se recomandă diluarea antigenului cu soluție de clorură de sodiu 2%, ceea ce, potrivit autorilor, crește sensibilitatea reacției. De asemenea, este posibilă o modificare cantitativă a reacției cu diluarea serului (1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64 etc.).

Reacția este destul de sensibilă, durează puțin (aproximativ 1 oră), iar rezultatele ei sunt citite imediat.

123. Reacția de imobilizare a treponemului palid (RIBT)

Cu ajutorul unei reacții în serul sanguin al pacienților cu sifilis, sunt detectați anticorpi și complement care imobilizează treponemul palid.

Cu sifilisul primar, RIBT este predominant negativ, cu secundar - pozitiv în 92-96% din cazuri, cu terțiar - în 92-100%, cu sifilis al sistemului nervos și congenital - în 86-89% din cazuri.

Rezultate pozitive ale RIBT au fost observate în sarcoide, eritematoză, diabet, tumori maligne, hepatita virala, ciroză hepatică, malarie, lepră, mononucleoză infecțioasă, unele boli ale țărilor fierbinți (halbă, iacă etc.).

Antigenul este o suspensie de treponem pal prelevat din testiculele unui iepure infectat cu sifilis prin introducerea în testicul a 0,75-1 ml dintr-o suspensie de treponem pal în soluție izotonică de clorură de sodiu (50 de indivizi pe câmp vizual).

Materialul testicular trebuie luat la 6-8 zile după infectarea animalului. Înainte de a lua antigenul, iepurele este sacrificat prin exsanguinare (puncție cardiacă sau artera carotida). Țesutul testicular este zdrobit și umplut cu ser de sânge de iepure sănătos diluat cu soluție izotonică de clorură de sodiu, agitat timp de -30 minute și apoi centrifugat timp de 10 minute (1000 rpm). Supernatantul este examinat microscopic. Ar trebui să existe cel puțin 10-15 treponeame palide în fiecare câmp vizual.

Complementul este în curs de pregătire în mod obișnuit din sângele cobaiului.

Pentru RIBT, aveți nevoie de: 1,2 ml soluție de gelatină 0,2%, 2,8 ml soluție de albumină 5%, 1,6 ml suspensie de treponem palid; pH mediu - 7,2. La acest amestec se adaugă 0,15 ml de complement (cocktail). În paralel se pun două probe: cu complemente active (experiment) și reactive (de control).

Serul studiat este colectat în melangeuri până la marcajul „1”, apoi cocktailul este colectat până la marcajul „2” și se închid cu un inel de cauciuc steril.

În același timp, se realizează o reacție similară cu seruri evident pozitive și evident negative.

Melangerii se numerotează și se pun într-un termostat la o temperatură de 35°C timp de 18-20 ore, după care se scot din termostat în perechi (experiment - control) iar conținutul este turnat în eprubetele corespunzătoare. Se aplică 2 picături pe lama de sticlă: în stânga - experiență, în dreapta - control, acoperit cu o lamă și microscopat într-un câmp vizual întunecat.

În primul rând, se studiază rezultatele controlului: se determină procentul de treponeame palide mobile și imobile. Formula de numărare: X = (A - B) / A * 100, unde A este numărul de treponeame palide mobile din martor; B - numărul de treponeame palide mobile din experiment.

Exemplu: (24 - 19) / 24 * 100 = 21%.

Estimări ale rezultatelor RIBT: sub 20% - negativ. 21-30% - îndoielnic, 31-50% - slab pozitiv, peste 50% - pozitiv.

Antigen, complement și auxiliar, indicator sau sistem hemolitic - ser hemolitic și eritrocite de oaie.

Dacă în primul sistem se formează un complex specific antigen + anticorp, atunci complementul este adsorbit (combinat cu acest complex) și hemoliza nu are loc în al doilea sistem.

Reacția necesită:

1. Ser de testare, care se obține din sângele prelevat prin puncția venei cubitale a pacientului. După coagularea sângelui, serul este aspirat într-un tub separat și inactivat timp de 30 de minute la 56 °C într-o baie de apă.

2. Antigen - o suspensie de gonococi uciși.

3. Eritrocitele de oaie sunt obținute din sânge defibrinat steril. Se spală prin centrifugare de 3 ori cu porții noi de ser fiziologic. În reacție se folosește o suspensie de eritrocite de 3%.

4. Serul hemolitic se prepară în prealabil prin imunizarea iepurilor cu eritrocite de berbec. Serul este titrat înainte de utilizare.

5. Complement – ​​ser proaspăt de cobai. Sângele este aspirat din inima unui cobai cu o seringă, după coagulare, serul este separat. Înainte de experiment, doza de lucru de complement este titrată. Pentru a face acest lucru, luați diluția principală a complementului 1:10 și turnați-o în eprubete de la 0,1 la 0,5, după care volumul din fiecare eprubetă este ajustat cu soluție salină la 1,5 ml.

În același timp, se prepară un sistem hemolitic - diluat într-un titru triplu, ser hemolitic + 3% suspensie de eritrocite de oaie. Ambele ingrediente sunt în volume diferite și ținute într-un termostat timp de 30 de minute (sensibilizarea amestecului), după care amestecul se adaugă în 1 ml în eprubete și se pune într-un termostat timp de 30 de minute. 2 eprubete servesc drept control:

1. 1 ml sistem hemolitic + 1,5 ml ser fiziologic;

2. 0,5 ml complement 1:10 + 0,5 ml suspensie eritrocitară + 1,5 ml ser fiziologic.

Titrul de complement este cantitatea minimă la care mai are loc hemoliza. Pentru a stabili reacția, se ia o doză de lucru de complement, crescută față de titru cu 20-25%, adică, de obicei, cantitatea de complement care se află în penultima eprubetă cu hemoliză. O creștere a dozei de complement este necesară deoarece în reacție, activitatea complementului poate fi oarecum suprimată de alte ingrediente ale reacției (antigen, ser).
43) RSK Wasserman

Folosit pentru a diagnostica sifilisul pentru a detecta anticorpi, precum și pentru a determina eficacitatea terapie specifică. Se bazează pe principiul reacției de fixare a complementului Borde-Gangou. O diferență semnificativă în reacția Wasserman este nespecificitatea antigenului: extracte lipoide din organe normale animalelor

Pentru a stabili reacția Wasserman, este necesar să aveți serul pacientului, diagnostice, antigene cu reacție încrucișată nr. 1, nr. 2, complement, ser hemolitic, eritrocite de berbec, salină.

Diagnosticum nr. 1 - specific, treponemal.

Diagnosticum nr. 2 - nespecific, antigenul cardiolipin, care sunt extracte de inimă de bovine foarte purificate, care au o compoziție chimică constantă de lipoide. Lipoidele, de compoziție chimică sunt apropiate de lipoizii treponema pallidum, prin urmare, deși nu sunt specifici, fixează anticorpi împotriva spirochetelor.

Acești antigeni sunt produși central și utilizați în reacție diluați conform titrului indicat pe etichetă.

Concomitent cu experimentul principal se plasează 2 martori: cu ser evident negativ și cu ser evident pozitiv.

Configurarea experienței principale

Mai întâi, serul de testare inactivat și diluat 1:5 este turnat în 4 eprubete. Apoi, antigenele (nr. 1, nr. 2) sunt turnate în 2 eprubete, soluție salină fiziologică este turnată în a treia eprubetă. După aceea, în toate tuburile se adaugă o doză de lucru de complement. După amestecarea ingredientelor, grătarul cu eprubete este plasat într-un termostat la 37 °C timp de 30 de minute. După păstrarea într-un termostat, se adaugă un sistem hemolitic în toate eprubetele. Tuburile se pun din nou într-un termostat timp de 2 ore, apoi se lasă la temperatura camerei. A doua zi se noteaza rezultatul.Se estimeaza gradul de intensitate al reactiei, patru plusuri (++++), trei (+++), doi (++) si unul (+) - in functie de intensitate a culorii lichidului și a mărimii sedimentului eritrocitar din fund. Hemoliza completă este indicată prin minus (-). Cu o discrepanță puternică între rezultatele cu antigeni diferiți, experimentul se repetă cu o nouă porțiune de sânge.
44) RIT-r. Imobilizarea treponemului palid.

Această reacție este utilizată în scopuri de diagnostic, și pentru recunoaștere rezultate fals pozitive reacții serologice standard, în special cu sifilisul latent.

RIBT constă în faptul că, în prezența imobilizinelor în serul pacienților cu sifilis și complement activ, treponeamele palide își pierd mobilitatea.

RIBT este plasat în cutii sterile. Serul de testat, complementul și antigenul participă la reacție.

În RIBT, antigenul este o suspensie de treponem palid dintr-un testicul de iepure în întâlniri timpurii(7-8 zile după infectare) orhită sifilitică. Un mediu special de suspensie păstrează viabilitatea treponemului palid cel puțin o zi. Complementul este folosit în RIBT porcușori de Guineea. RIBT se desfășoară în condiții anaerobe. Eprubete cu ingrediente sunt plasate într-un microaerostat, din care aerul atmosfericși se injectează un amestec de gaz (95 părți azot și 5 părți dioxid de carbon). Microanaerostatul cu eprubete se pune într-un termostat (35°C) timp de 18-20 ore.

În paralel cu formularea reacției, studii de control cu ser de sânge pozitiv și negativ prelevat din experiența anterioară.

Rezultatele RIBT sunt evaluate după scoaterea eprubetelor din termostat (adică după 18-20 de ore de experiență). Cu o pipetă Pasteur, o picătură din conținutul eprubetei este aplicată pe o lamă de sticlă, care este acoperită cu o lamă și examinată în câmpul întunecat al unui microscop (obiectiv 40, ocular 10). Cu imobilizarea de până la 20% din treponeamele palide, reacția este considerată negativă, de la 21 la 30% - îndoielnică, de la 31 la 50% slab pozitivă, de la 51 la 100% - pozitivă. Procentul de imobilizare a treponemului palid se determină conform unui tabel special.

45) Reacția opson-fagocitară

Mecanism: creșterea fagocitozei celulelor microbiene sub influența efectelor prietenoase ale anticorpilor, serului imunitar și complementului.

Componente de reacție:

1) antigen - cultura microbiana zilnica;

3) complement - ser proaspăt de cobai;

4) fagocite - suspensie de leucocite.

Opsoninele sunt anticorpi găsiți în serurile normale și imune și pregătesc microbii pentru fagocitoză.

Reacția se pune în eprubete speciale la t=37° minute. Apoi se prepară frotiuri din fiecare tub, se numără 100 de fagocite și se determină numărul de microcontroale fagocitate.

Index opsonic = indice fagocitar. ser/indice fagocitar al serului normal

Cu cât este mai mare indicele opsonic (ar trebui să fie >1) al serului studiat și, prin urmare, cu atât este mai mare! bruceloză).

Se utilizează pentru determinarea opsoninelor - anticorpi care stimulează activitatea fagocitară a leucocitelor, adică. serodiagnosticul infecțiilor precum bruceloza.

Îmbunătățirea fagocitozei are loc datorită atașării opsoninelor cu centrii activi (fragmentul Pav) la determinanții bacterieni, iar apoi, cu ajutorul fragmentelor Pc, la receptorii Pc ai fagocitelor. Serul normal conține cantități mici de opsonine, care acționează în prezența complementului. Există mai multe opsonine în serul imunitar, iar activitatea lor este mai puțin dependentă de complement.

Componente:

Ser în studiu

ser normal

Cultură microbiană zilnică (de exemplu, stafilococică)

Fagocite - suspensie de neutrofile

Incubare la 37°C timp de 30 minute. Din fiecare tub se prepară frotiuri, colorate conform Romanovsky-Giemsa, iar numărul de microbi este numărat la microscop, în 100 sau mai mulți neugrofili, adică. determina indicele fagocitar.

Indicele fagocitar - numărul de microbi absorbiți de un neutrofil.

Index opsonic indice fagocitar al serului imun (testat) / indice fagocitar al serului normal.

Cu cât indicele opsonic este mai mare (ar trebui să fie > 1), cu atât imunitatea este mai mare.

Indicele opsono-fagocitar este un indicator digital = numărul de fagocite x scorul de fagocitoză (în funcție de numărul de microbi ingerați). Scorul maxim este -75.

46) RN pe șoareci pentru a stabili exotoxina

Această reacție se bazează pe capacitatea unui ser antitoxic specific de a neutraliza exotoxina.

Anticorpii serici imunitari sunt capabili să neutralizeze efectul dăunător al microbilor sau al toxinelor acestora asupra celulelor și țesuturilor sensibile, care este asociat cu blocarea antigenelor microbiene de către anticorpi, adică neutralizarea acestora.

Reacția de neutralizare (RN) se realizează prin introducerea unui amestec antigen-anticorp în animale sau în obiecte de testare sensibile (cultură celulară, embrioni). În absența efectului dăunător al microorganismelor sau al antigenelor acestora, al toxinelor la animale și al obiectelor de testat, se vorbește despre efectul neutralizant al serului imun și, prin urmare, despre specificitatea interacțiunii complexului antigen-anticorp.

Pentru a efectua reacția, materialul de testat, în care este de așteptat prezența exotoxinei, este amestecat cu ser antitoxic, tinut in termostat si administrat la animale (cobai, soareci). Animalele de control sunt injectate cu filtratul materialului de testat, netratat cu ser. În cazul în care are loc neutralizarea exotoxinei cu ser antitoxic, animalele din lotul experimental vor rămâne în viață. Animalele de control vor muri ca urmare a acțiunii exotoxinei.

Reacția de neutralizare a exotoxinei are loc atunci când aceasta interacționează cu serul antitoxic (anticorpi-antitoxine). Ca urmare a formării complexului antigen-anticorp, toxina își pierde proprietățile toxice.

Reacția de neutralizare se efectuează pentru a detecta și titra toxine, toxoizi sau antitoxine.

Toxinele sunt obținute prin filtrarea lichidului mediu de creștere sau material de testare în care bacteriile toxice au proliferat. Atunci când este prelucrată cu formol timp de 30-45 de zile la o temperatură de 37°C, toxina se transformă în anatoxină, care este folosită pentru imunizarea animalelor pentru a obține ser antitoxic.

Reacția de neutralizare in vivo. Pentru a determina tipul de toxină, aceasta este amestecată cu un ser antitoxic de diagnostic și acest amestec este administrat șoarecilor albi. Când toxina este neutralizată cu ser antitoxic, șoarecii nu mor.

Reacția de neutralizare este utilizată pentru a determina imunitatea antitoxică la copiii cu difterie (testul lui Schick) și scarlatina (testul lui Dick). Pentru a face acest lucru, o anumită cantitate din toxina corespunzătoare (1/40 DLM) este injectată intradermic în zona antebrațului. Dacă în organism există antitoxine, toxina va fi neutralizată și reacția va fi negativă. În absența antitoxinelor în organism, răspuns inflamator la locul injectării.
47) RN (reacție de neutralizare) pe șoareci pentru a identifica virusul encefalită transmisă de căpușe

Virusul TBE este patogen pentru o serie de animale de laborator și sălbatice. Nou-născuții și șoarecii albi tineri sunt cei mai sensibili. După infectarea creierului, intraperitoneal, intramuscular, aceste animale dezvoltă encefalită, care se termină cu moartea animalelor. Dintre animalele de fermă, caprele sunt cele mai sensibile la virusul TBE, oile și vacile sunt mai puțin sensibile, iar caii sunt slab sensibili. Virusul TBE are un efect citopatogenic (CPE), provocând modificări citopatice în culturile primare și transplantate de celule renale embrionare porcine (SPEV și RPE) și se înmulțește fără CPE pronunțat în multe altele. culturi celulare. În creierul șoarecilor infectați și în fluidul cultural al culturilor infectate se acumulează virusul TBE și antigenele virale specifice: fixatoare de complement, hemaglutinant, precipitant etc.

Virusul TBE perioadă lungă de timp conservat la temperaturi scăzute ( modul optim-60 de grade. C și mai jos), tolerează bine liofilizarea, în stare uscată rămâne mulți ani, dar se inactivează rapid la temperatura camerei. Fierberea îl omoară după 2 minute, iar în lapte fierbinte la 60 de grade. C moare după 20 de minute.

Formalina, fenolul, alcoolul și alți dezinfectanți, radiațiile ultraviolete au, de asemenea, un efect de inactivare.

Reacția de neutralizare se bazează pe capacitatea serurilor imune specifice de a stinge efectul infecțios al virusurilor. Se aplică în două direcții:

1) pentru tiparea virușilor izolați;

2) pentru titrarea anticorpilor în serurile pacienţilor recuperaţi.

Configurarea reacției:

1. Pe animale de laborator. Criterii pentru prezența unui virus

este moartea animalelor de laborator. Se calculează LD50

Diluția maximă a suspensiei virale, care

a provocat moartea a 50% dintre animalele infectate. Pentru

se realizează identificarea virusului encefalitei transmise de căpușe

infecția intracerebrală a șoarecilor albi.

2. În culturi de țesuturi. Se efectuează contabilizarea rezultatelor

Prin acțiune citopatică (CPE)

Prin metoda de testare a culorii bazată pe schimbarea culorii

Prin hemadsorbție.

3. În embrionul de pui. Contabilitatea rezultatelor se efectuează conform

apariția urmelor de-a lungul membranei corioalantoide.

48) RTGA

Această reacție este utilizată în practica virologică:

Pentru a determina tipul de virus (pe sticlă);

Pentru detectarea în serul pacienților (desfășurat).

La stabilirea unei reacții aproximative de inhibare a hemaglutinării, se aplică pe sticlă 1 picătură de ser imun specific tipului, apoi se adaugă 1 picătură de material de testat și 1 picătură dintr-o suspensie 5% de eritrocite.

Luarea în considerare a rezultatelor: tipul de virus este determinat de serul cu care nu a avut loc reacția, deoarece serul imunitar specific virusului izolat îi suprimă activitatea hemaglutinantă, iar eritrocitele nu se aglutinează.
49) RIF

Coloranții fluorocromi luminoși (izotiocianat de fluorisceină etc.) sunt utilizați ca etichetă.

Există diverse modificări ale RIF-ului. Pentru diagnosticarea expresă a bolilor infecțioase - pentru a detecta microbii sau antigenele acestora în materialul de testat, se utilizează RIF conform Koons.

Există două metode de RIF conform lui Koons: directă și indirectă.

Componente RIF directe:

1) materialul studiat (o mișcare intestinală separată de nazofaringe etc.);

2) ser imun specific marcat care conţine AT-la la antigenul dorit;

3) soluție izotonică de clorură de sodiu.

Un frotiu din materialul de testat este tratat cu antiser marcat.

Are loc o reacție AG-AT. Examenul microscopic luminescent în zona în care sunt localizați complexele AG-AT relevă fluorescență - luminescență.

Componente RIF indirecte:

1) materialul studiat;

2) antiser specific;

3) ser antiglobulinic (AT-la împotriva imunoglobulinei) marcat cu fluorocrom;

4) Soluție izotonică de clorură de sodiu.

Un frotiu din materialul de testat este tratat mai întâi cu ser imunitar la antigenul dorit și apoi cu ser antiglobulină marcat.

Complexele luminoase AG-AT - marcate AT sunt detectate cu ajutorul unui microscop fluorescent.

Avantajul metodei indirecte este că nu este nevoie să se pregătească o gamă largă de seruri specifice fluorescente și se folosește un singur ser antiglobulinic fluorescent.

De asemenea, este izolată o varietate de 4 componente de RIF indirect, atunci când complementul (ser de cobai) este introdus suplimentar. Cu o reacție pozitivă, se formează un complex AG-AT - etichetat - complement AT.

Reacția se referă la reacții serologice implicând antigeni sau anticorpi marcați.

Se realizează prin metode directe și indirecte.

La metoda directa detecta antigenul din materialul de la pacient. Se folosește un ser fluorescent de diagnostic, care conține imunoglobuline izolate din serurile imune și marcate cu fluorocromi.

Antigenul specific se găsește sub formă de conglomerate luminiscente de culoare verde strălucitor, iar fundalul preparatului devine portocaliu-roșu.

Componentele reacției directe de imunofluorescență:

1) materialul studiat;

2) ser luminiscent specific;

3) microscop luminiscent.

La diagnosticarea gripei, diferențierea este efectuată de agenții patogeni ai paragripalului și infecție cu adenovirus. Tamponul nazofaringian este tratat cu ser gripal fluorescent sau imunoglobulină gripală.

Rezultatul „+” sub forma unei străluciri verzi se obține după 3 ore.

În metoda indirectă, anticorpii specifici sunt detectați și titrați. Titrul seric este diluția sa maximă, la care fluorescența este notă la „+ +”.

Componentele reacției indirecte de imunofluorescență

Pentru a căuta un antigen în diagnosticul expres:

1) material de testare (antigen);

2) ser specific;

3) ser luminescent antiglobulinic

4) microscop luminiscent.

/ specific de fază

Anticorpii serici se adsorb la antigen.

// faza nespecifica

Se utilizează ser antiglobulinic marcat cu fluorocrom. Se formează un complex antigen + anticorp (I) + ser antiglobulină (II), care strălucește.