Mecanismul de reacție de precipitare al reacției diferă de reacție. Reacția de precipitare (metoda imunologică)
Constând în interacțiunea unui antigen solubil cu un anticorp, urmată de precipitarea unui precipitat cu granulație fină (precipitat).
Reacția de precipitare vă permite să determinați prezența unui antigen necunoscut în materialul de testat prin adăugarea unui anticorp cunoscut sau folosind un antigen cunoscut - un anticorp necunoscut. precipitare mergand mai rauîn lipsa sărurilor. Optimul de precipitații este în intervalul pH=7,0-7,4.
Mecanismul de precipitare este apropiat de cel al aglutinarii. Sub influența sistemului imunitar care a reacționat cu antigenul, gradul de dispersie al acestuia scade. Serul și antigenul trebuie să fie complet transparente. La stabilirea precipitării, la o diluție de ser pot fi adăugate diferite diluții ale antigenului sau invers.
Precipitația se înregistrează mai bine dacă antigenul este suprapus în eprubetă pe anticorp. În acest caz, se observă apariția unui precipitat sub formă de inel - precipitare inelară. Precipitarea inelului se realizează în eprubete speciale cu un diametru de 2,5-3,5 mm. Pentru a determina numărul de antigene din materialul de testat sau diferiți anticorpi din ser, se utilizează reacția de precipitare cu agar: se toarnă 1% agar limpezit în sau pe lame de sticlă. Soluțiile de antigen și anticorpi sunt turnate în diferite godeuri realizate în agar, care difuzează unul spre celălalt, formând linii de precipitare. Reacția de precipitare este utilizată pe scară largă în diagnostic (vezi reacția Ascoli).
Precipitarea în agar permite determinarea toxicității culturilor de difterie.
LA cercetare criminalistica precipitarea servește la stabilirea apartenenței la specii a sângelui, organelor și țesuturilor cu ajutorul serurilor precipitante specifice.
Precipitare - reacția de precipitare a unui complex de antigen (precipitinogen) și anticorpi (precipitină). Precipitația este unul dintre fenomenele imunologice care face posibilă determinarea conținutului de anticorpi (vezi) în serul sanguin al persoanelor bolnave sau vaccinate, precum și în sângele animalelor imunizate. Când se utilizează seruri standard, reacția de precipitare poate fi utilizată pentru a titra antigene solubile de diferite origini (vezi).
În cea mai simplă formă de stabilire a reacției de precipitare, serul de testare într-o serie de diluții multiple este adăugat prin stratificare într-o serie de eprubete cu o cantitate constantă de antigen. După 30-60 min. incubarea la temperatura camerei la limita celor două lichide a format un inel de turbiditate - precipitare inelă. Cantitatea minimă de ser care dă o reacție de precipitare este luată ca titrul antiseric. Când reacția este inversată cu un antiser standard, este posibil să se estimeze concentrația relativă a antigenului în diferite fluide biologice.
Rezultatele titrarii anticorpilor si antigenilor pe baza metodei de mai sus nu au o expresie cantitativa absoluta. Pentru a cuantifica conținutul de anticorpi, Heidelberger, Kabat (M. Heidelberger, E. Kabat) și alții au dezvoltat metoda cantitativă reacție de precipitare, care se bazează pe detectarea așa-numitei zone de echivalență. Când cantități adecvate vârstei de antigen sunt amestecate cu volume constante de antiser, cantitatea de precipitat formată crește inițial și apoi scade din nou datorită creșterii solubilității complexului antigen-anticorp în exces de antigen. Dacă determinăm conținutul de anticorpi din supernatant în toate eprubetele, atunci se dovedește că în eprubetele din mijloc ale unui rând sau chiar într-o singură eprubetă nu există anticorpi în supernatant; totodată aici se formează cel mai mare precipitat. Întrucât în zona de echivalență întregul antigen introdus în amestecul de reactanți este implicat și în precipitat, după scăderea precipitatului proteic antigen din cantitatea de proteină, se obține valoarea exactă a conținutului de anticorpi dintr-un volum dat de ser de testare. Conținutul de proteine al precipitatului după spălarea temeinică cu soluție salină răcită se determină prin azot sau printr-o metodă colorimetrică.
La evaluarea valorii reacţiei de precipitare ca metoda de diagnostic trebuie avut în vedere faptul că anticorpii care nu au proprietățile precipitinelor și, prin urmare, nu formează un precipitat atunci când interacționează cu un antigen, pot fi prezenți în serurile imune. Acestea includ în primul rând anticorpi incompleti, precum și alți anticorpi aparținând grupului de globuline gamma-A.
Capacitatea antiserului de a precipita antigenul poate fi afectată prin încălzire la 65-70 °, tratare cu solvenți organici, reducere în mediu acid [Isliker (N. Isliker), A.Ya. Kuhlberg]. Fenomenul de precipitare cu antiser, conținând cu bună știință precipitine, este posibil doar la o anumită temperatură, concentrație de săruri și ioni de hidrogen. Reacția de precipitare are loc cel mai rapid la 25-37°. O condiție indispensabilă pentru formarea unui precipitat este prezența clorurii de sodiu în concentrații izotonice (soluție NaCl 0,85%). Când concentrația de NaCl este crescută la 15%, precipitatele formate de antigenul de natură polizaharidă se dizolvă parțial, care pot fi utilizate pentru extragerea anticorpilor puri. Reacția de precipitare cu antigeni de natură proteică se desfășoară la aceeași viteză și completitate atât în 0,85%, cât și în 15% soluții de NaCl. Concentrația optimă de ioni de hidrogen pentru formarea unui precipitat corespunde valorilor pH-ului de la 5,0 la 9,0.
În practica de laborator se folosesc diverse modificări ale reacției de precipitare. În special, reacția de termoprecipitare este utilizată pentru a detecta antigenele bacteriene. antrax, botulism etc., nesupus denaturarii termice (coctoantigene). Această reacție diferă de reacția de precipitare în ciclu numai prin aceea că filtratul materialului de testat fiert este utilizat ca antigen (vezi Reacția A).
Când se analizează un amestec complex de antigeni folosind reacția de precipitare, este imposibil să se caracterizeze proprietățile componentelor individuale ale amestecului. Pentru a rezolva această problemă, se recurge la metode de precipitare în agar și imunoelectroforeză. Metoda de precipitare în agar în cea mai comună modificare a Ouchterlony (O. Ouchterlony) se bazează pe faptul că antigenul și antiserul, difuzând unul față de celălalt într-un strat subțire de agar, formează o linie de precipitare atunci când se întâlnesc. După numărul de astfel de linii, se poate aprecia numărul de componente conținute într-un amestec dat de antigeni. Metoda Ouhgerlonu face posibilă compararea diferitelor amestecuri antigenice și determinarea gradului de înrudire a componentelor prezente în ele. Când se analizează un amestec antigenic complex care conține substanțe cu aceleași viteze de difuzie în agar, mare ajutor poate aduce metoda imunoelectroforezei. Amestecul de antigeni este separat preliminar într-un câmp electric într-o placă de agar, după care este dezvoltat componente individuale antiser. Antiserul este introdus într-un șanț realizat în agar paralel cu linia de-a lungul căreia s-au deplasat antigenele în timpul electroforezei. Fiecare dintre antigeni dă un arc de precipitare individual cu antiser. Imunoelectroforeza este utilizată pe scară largă pentru analiză anomalii patologiceîn proteinele serice, precum și în analiza imunologică a antigenelor tisulare și bacteriene.
Precipitații criminalistice. Precipitația este folosită în medicina legală pentru a determina speciile de sânge, părți de organe și țesuturi. Într-o serie de cazuri de anchetă se cere să se stabilească tipul de sânge găsit pe instrumentele infracțiunii, hainele infractorului sau victimei etc. Pentru reacția de precipitare, serurile de precipitare obținute prin imunizarea iepurilor, cocoșilor și caprelor. cu proteine de la diverse animale se folosesc. Se prepară de obicei seruri care precipită oameni, cal, pisici, pui, porc, câine, bovine. Acestea trebuie să aibă un titru de cel puțin 1:10.000 și să fie suficient de specifice. Extractele sunt preparate din locul studiat sau crusta de sânge pentru ser fiziologic salin, care sunt apoi testate cu ser de precipitare. Tipul de proteină este considerat a fi stabilit dacă unul dintre serurile care precipită formează un precipitat cu un extract din sângele testat cu o reacție de control adecvată. Reacția de precipitare poate determina, de asemenea, tipul de proteină din țesuturile și organele umane sau animale. De obicei, reacția de precipitare este efectuată în eprubete cu un capăt în formă de con. După primirea extractelor tulburi, reacția de precipitare este efectuată în agar conform Ouchterlon.
Reacția de precipitare (RP) este precipitarea unui antigen solubil sub acțiunea anticorpilor în prezența unui electrolit. Efect de reacție vizibil (fenomen de precipitare) - turbiditate (formarea unui inel tulbure sau a unui sediment - precipitat).
RP este utilizat pentru a detecta un antigen necunoscut într-un număr de boli infecțioase: cu antrax, tularemie, meningita, variola. În medicina legală, este folosit pentru a determina speciile de sânge, spermatozoizi; în cercetările sanitare şi igienice – să stabilească falsificarea Produse alimentare. RP este foarte diferit. sensibilitate crescutăși vă permite să detectați antigenul într-o diluție de 1: 1.000.000 și 1: 10.000.000.
Componentele reacției de precipitare.
1. Antigen (precipitinogen) - este un antigen natura moleculara, care se află într-o stare fin dispersată (solubilă). Precipitinogenii sunt diferite lizate sau extracte de țesut etc. Precipitinogenul diferă de aglutinogen prin dimensiunea particulelor de antigen. Aglutinogen Are dimensiunile celulelor(acestea nu sunt celule întregi distruse), ci dimensiunile precipitatogen pe măsura dimensiunea moleculară(acestea sunt proteinele și complexele lor cu carbohidrați sau lipide). Soluție de precipitatogen transparent.
2. Anticorpi (precipitine) se găsesc în serul uman sau în serurile de precipitare a diagnosticului imun care conţin anticorpi cunoscuţi.
3. Electrolit- soluție izotonică de clorură de sodiu.
Obținerea precipitinogenului.
Se obține prin măcinarea materialului și extragerea antigenelor proteice din acesta prin fierbere sau prin alte mijloace.
Exemple de precipitinogeni: lizate sau extracte diverse corpuriși țesuturi, ser de sânge străin (serul este soluţie, în primul rând, diverse proteine), filtrate de culturi în bulion de microbi, extracte sărate de microbi, autolizate etc.
Obținerea serurilor precipitante.
Obținut prin hiperimunizarea iepurilor cu precipitinogeni corespunzători. Astfel de seruri conțin anticorpi la acei precipitinogeni cu care iepurii au fost imunizați.
Exemple de seruri precipitante: precipitand ser de antrax (conține anticorpi la antigenele antraxului), ser antimeningococic precipitant(conține anticorpi împotriva antigenelor agentului cauzal al meningitei) etc.
Titrul serul de precipitare este cea mai mare diluție de precipitinogen la care serul dă încă o reacție de precipitare.
Modalități de setare a RP.
1. Reacția de precipitare inelară - se efectuează în tuburi speciale de precipitare (diametru - 0,4-0,5 cm, înălțime - 7-8 cm). În eprubetă se adaugă 0,2 - 0,3 ml de ser precipitant și aceeași cantitate de precipitanogen este stratificată cu grijă de-a lungul peretelui cu nasul lung al unei pipete Pasteur. Apoi, cu grijă din poziție orizontală, tuburile sunt așezate vertical.
Contabilizarea rezultatelor reacțiilor realizată prin apariția unui inel alb la marginea antigen-anticorp. Cu o reacție pozitivă se observă un astfel de inel. În acest caz, antigenul corespunde anticorpului și are loc legarea acestora.
Dacă sunt folosite extracte apoase fierte și filtrate de organe și țesuturi ca precipitatogen, atunci reacția se numește reacție precipitații termice (de exemplu, la diagnosticarea antraxului).
2. Reacția de precipitare în gel - se efectuează în vase Petri sau pe lame de sticlă, unde se așează un strat de gel de agar. Când gelul se solidifică, în el sunt tăiate godeuri, în care sunt plasați antigeni sau anticorpi, sau ambii. Distinge 2 metode RP în gel:
o metodă imunodifuzie simplă (radială).: una dintre componentele reacției imune (antigen sau anticorp) se pune în godeu, iar cealaltă componentă se amestecă cu agar; la un rezultat pozitiv (antigenul corespunde unui anticorp) în jurul godeului se formează inel precipitat ;
b) metoda imunodifuzie dublă: atât anticorpul cât și antigenul sunt plasate în godeuri separate, se difuzează în gelul de agar unul către celălalt; cu rezultat pozitiv unde se întâlnesc anticorpii și antigenii linii de precipitații .
Un exemplu de RP într-un gel este reacția de imunodifuzie dublă Ouchterlony în diagnosticul difteriei
Imunoelectroforeza - este o metodă care combină metoda electroforezei și reacția de precipitare. Un amestec de antigeni (de exemplu, proteine serice) este separat în gel folosind electroforeză. Apoi, pentru a găsi și determina proteina dorită (antigen necunoscut), se folosește un ser precipitant diagnostic, care conține anticorpi la această proteină (anticorp cunoscut). Pentru a face acest lucru, serul de diagnostic este introdus în șanțul paralel cu proteinele. Dacă printre proteine există una care corespunde anticorpului din ser, atunci în jurul acestuia se formează linii de precipitații.
reacție de precipitare- RP (de la lat. praeci-pito- precipitat,) este formarea și precipitarea unui complex de antigen molecular solubil cu anticorpi sub formă de turbiditate, numit precipitat. Se formează prin amestecarea antigenelor și anticorpilor în cantități echivalente; un exces al unuia dintre ele reduce nivelul de studii complex imun. Spre deosebire de reacția de aglutinare, antigenul pentru reacția de precipitare este compuși solubili, a căror dimensiune a particulelor se apropie de dimensiunea moleculelor. Acestea pot fi proteine, complexe de proteine cu carbohidrați și lipide, extracte bacteriene, diverse dizatate sau filtrate de culturi microbiene în bulion. Anticorpii implicați în reacția de precipitare se numesc precipitine. Complexul fin antigen-anticorp rezultat este detectat prin anumite metode de stadializare a reacției de precipitare.
Reacția de precipitare a inelului a fost propusă pentru prima dată de Ascoli. Este utilizat în diagnosticul antraxului, ciumei, tularemiei, meningitei. Metoda este simplă și accesibilă.
Un ser specific imun precipitant este turnat în tuburi înguste de precipitare și antigenul este foarte atent stratificat pe el. Ca antigen, de exemplu, la diagnosticarea antraxului, se iau bucăți de piele, lână, piei de animal căzut etc.. Se fierb, lichidul este filtrat și folosit ca antigen. Apariția unui inel - un precipitat la limita a două lichide - indică prezența antigenului corespunzător.
Reacția de precipitare a gelului de agar, sau metoda de precipitare prin difuzie, face posibilă studierea în detaliu a compoziției amestecurilor antigenice complexe solubile în apă. Pentru a stabili reacția, se folosește un gel (agar semi-lichid sau mai gros). Fiecare componentă care alcătuiește antigenul difuzează către anticorpul corespunzător cu o viteză diferită. Prin urmare, complexele diferitelor antigene și anticorpii corespunzători sunt localizate în zone diferite gel, unde se formează linii de precipitare. Fiecare dintre linii corespunde unui singur complex antigen-anticorp. Reacția de precipitare este de obicei stabilită la temperatura camerei.
Metoda de imunoelectroforeză primită utilizare largăîn anul trecutîn studiul structurii antigenice a microbilor. Complexul de antigene este plasat în godeu, care este situat în centrul gelului de agar, turnat pe placă. Apoi, un curent electric este trecut prin gelul de agar, în urma căruia diferitele antigene incluse în complex se deplasează în câmp. curent electricîn funcţie de mobilitatea lor electroforetică. După terminarea electroforezei, un ser imun specific este introdus în șanțul situat de-a lungul marginii plăcii și plasat într-o cameră umedă. În locurile în care se formează complexul antigen-anticorp apar linii de precipitare.
Reacții de precipitare a puneîn eprubete (reacție de precipitare inelară),în geluri, medii nutritive etc. Lat distributie primita varietăți de reacție de precipitare într-un gel semi-lichid de agar sau agaroză: imunodifuzie dublă conform Ouchterlony. imunodifuzie radială, imunoelectroforeză si etc
Reacție de imunodifuzie radială. Serul imunitar cu gel de agar topit este turnat uniform pe pahar. După solidificare în gel, se fac godeuri în care antigenul este plasat în diferite diluții. Antigenul, difuzând în gel, formează cu anticorpi zone de precipitare în inel în jurul godeurilor (Fig. 13.7). Diametrul inelului de precipitare este proporțional cu concentrația de antigen. Reacția este utilizată pentru a determina nivelurile sanguine ale imunoglobulinelor din diferite clase, componente ale sistemului complement etc.
Imunoelectroforeza- o combinație a metodei de electroforeză și imunoprecipitare: un amestec de antigeni este introdus în godeurile gelului și separat în gel prin electroforeză. Apoi, paralel cu zonele de electroforeză, în șanț se introduce un ser imun, ai cărui anticorpi, difuzând în gel, se formează la punctul de întâlnire cu antigenul liniei de precipitare.
Microscopia electronică imunitară- microscopia electronică a microbilor, mai des viruși, tratați cu anticorpi corespunzători. Virușii tratați cu ser imun formează agregate imunitare (microprecipitate). În jurul virionilor se formează o „corolă” de anticorpi, în contrast cu acidul fosfotungstic sau cu alte preparate dense electron-optic.
123. Reacția de precipitare într-un gel pentru determinarea toxicității microorganismelor, mecanism, metode de priză.
Reacția de precipitare (RP)- aceasta este formarea si precipitarea unui complex de antigen molecular solubil cu anticorpi sub forma de turbiditate, numit precipitat. Se formează prin amestecarea antigenelor și anticorpilor în cantități echivalente; un exces al unuia dintre ele reduce nivelul de formare a complexului imun.
În 1946, J. Oudin a propus metoda simplă de difuzie, conform căreia una dintre componentele reacției de precipitare, de obicei ser, se află în gel, iar cealaltă - antigenul - este stratificat pe primul sub formă de soluţie.
Antigenul, difuzând în gel, formează linii albe de precipitare în el cu anticorpi, care sunt clar vizibili la iluminarea laterală. În 1948, J. Ouchterlonu a dezvoltat o metodă și mai simplă și mai convenabilă de contradifuzie bidimensională, care permite compararea directă a diferitelor antigene și seruri. Această metodă este, de asemenea, foarte valoroasă în studiul reacțiilor încrucișate.
Pentru stabilirea reacției conform Ouchterlon se folosește agar 1% preparat în soluție salină fiziologică, care se toarnă în vase Petri cu un strat de 0,5 cm în jurul circumferinței la o distanță de 1-2 cm de centru. Serul de precipitare diagnostic este turnat în godeul central și o soluție de omoloage și antigene în comparație cu acesta este turnată în godeurile periferice. Rezultatele sunt înregistrate după 24, 48 și 72 de ore de incubare la temperatura camerei.
Anticorpii și antigenii difuzează unul spre celălalt, iar în zonele în care sunt create concentrațiile lor echivalente, se formează benzi de precipitare arcuite. Dacă benzile de precipitare care provin din două godeuri adiacente se îmbină, aceasta indică prezența mai multor componente antigenice în fluidul de testat. Reacția de contradifuzie conform lui Ouchterlohn este adesea folosită pentru a determina toxigenitatea bacteriilor, cum ar fi difteria.
O altă dezvoltare a metodei de precipitare pe gel este imunoelectroforeza. Acest termen se referă la o metodă care combină separarea electroforetică a unui amestec de antigeni și contradifuzia Ouchterlohn pe aceeași placă de gel de agar. Serul precipitat este apoi turnat într-un canal tăiat în gel paralel cu direcția de separare electroforetică.
Liniile de precipitare formate în urma reacţiei au forma unor arce alungite în direcţia mişcării electroforetice a fracţiilor antigenului. Imunoelectroforeza face posibilă determinarea compoziției amestecurilor complexe de antigene solubile care conțin până la 30 de componente și, prin urmare, este o metodă de diagnosticare valoroasă.
Reacția de precipitare(RP) se numește precipitare dintr-o soluție de Ag (precipitinogen) atunci când este expusă serului imun (precipitină) și electrolit.
Prin intermediul RP, un antigen poate fi detectat în diluții de 1:100.000 și chiar 1:1.000.000, adică în cantități atât de mici care nu pot fi detectate chimic.
Precipitinogenii sunt particule ultramicroscopice de proteine-PS naturale: extracte din microni, organe și TC, material pat; produsele de degradare ale unei celule bacteriene, lizatele lor, filtratele. Precipitinogenii sunt stabili termic; prin urmare, pentru a le obține, materialul este supus fierberii.
În RP, se folosesc Ags lichid transparente.
Serurile precipitante se obțin de obicei prin hiperimunizarea iepurilor în cicluri de câteva luni, introducându-le cu suspensii bacteriene, filtrate de cultură în bulion, autolizate, extracte sărate ale microorganismelor și proteine din zer.
Organizat de RP Ascoli.Într-o eprubetă îngustă cu o cantitate mică de ser precipitat nediluat, ținându-l într-o poziție înclinată, același volum de Ag este stratificat încet de-a lungul peretelui cu o pipetă.
Pentru a nu amesteca cele doua lichide, eprubeta este asezata cu grija pe verticala. Cu o reacție pozitivă într-o eprubetă, un inel alb-gri apare după 5-10 minute la granița dintre ser și extractul studiat. Reacția este însoțită în mod necesar de controale serice și antigen.
Reacția Ascoli este utilizată pentru identificarea antraxului, tularemiei, ciuma Ag.
De asemenea, a găsit aplicație în medicina legală pentru determinarea speciei unei proteine, în special a petelor de sânge, în practica sanitară în detectarea falsificării cărnii, peștelui, produse din făină, impurități din lapte. Dezavantajul acestui RP este instabilitatea precipitatului (inelului), care dispare chiar și cu scuturare ușoară. Mai mult, nu poate fi folosit pentru a determina compoziţia cantitativă Ag implicat în formarea precipitatului.
Reacția de precipitare Ouchterlony. Reacția este pusă pe vase Petri în godeurile de gel de agar.
Gelul transparent bine spălat este folosit ca gel. Ag și serul sunt introduse în gelul de agar astfel încât godeurile care le conțin să fie la o anumită distanță. Difuzia unul către celălalt și conectându-se unul cu celălalt, anticorpul și antigenul formează un complex imun sub forma unei benzi albe în 24-48 de ore.
În prezența unui precipitinogen complex, apar mai multe benzi. În același timp, benzile de antigene înrudite serologic se contopesc împreună, iar benzile celor eterogene se intersectează, ceea ce face posibilă determinarea detaliilor structurii antigenice a substanțelor studiate.
Este utilizat pe scară largă pentru a diagnostica bolile cauzate de viruși și bacterii care produc exotoxine.
3.Reacția de hemaglutinare indirectă (RNGA). Este folosit pentru a detecta polizaharide, proteine, extracte de bacterii, micoplasme, rickettsie și virusuri, ale căror complexe imune cu aglutinine nu pot fi observate în RA clasică convențională, sau pentru a detecta anticorpi în serul pacienților la aceste substanțe foarte dispersate și la cele mai mici microorganisme. .
RNGA pentru serodiagnosticul bolilor infecțioase. Folosind RNHA pentru a detecta anticorpi în serul pacienților, sunt pregătite diagnostice cu antigenul eritrocitar.
reacție de precipitare.
Pentru a face acest lucru, eritrocitele sunt tratate timp de 15 minute cu o soluție de tanin la o diluție de 1:20.000–1:200.000, ceea ce le conferă stabilitate și le crește capacitatea de adsorbție. Apoi se amestecă cu un antigen cunoscut și se incubează timp de 2 ore la o temperatură de 37 ° C. Eritrocitele sensibilizate la antigen se spală de 2-3 ori cu soluție izotonică de clorură de sodiu și se adaugă la ser, se diluează și se toarnă în godeurile panouri.
Suspensiile de eritrocite intacte și încărcate cu antigen, care sunt adăugate în ser, dau reacții în mod evident pozitive și negative, servesc drept control.
Rezultatele reacției se iau în considerare la 2 ore după incubare într-un termostat și se evaluează cu plusuri: "++++" - eritrocitele acoperă godeul sub forma unei umbrele cu margini zimțate; "-" - acumulare de eritrocite sub forma unui "buton"
Informații conexe:
Cautare site:
Reacția de precipitare inelară
Reacția de aderență a inelului este una dintre cele mai simple metode serologice. Se realizează în tuburi de precipitare înguste. În primul rând, o soluție limpede de antigen luată în mai multe diluții (1:2; 1:4; 1:8; 1:16) este turnată în mod egal în toate eprubetele.
Legătura dintre antigene și anticorpi are loc la limita de contact a reactivilor. Ca urmare a acestei interacțiuni, în cazurile pozitive (când antigenul corespunde anticorpului), după un timp, se formează un precipitat sub forma unui inel opalescent.
Reacția găsită aplicare largăîn practică medicală pentru a detecta antigenul antraxului în lână, piele, carnea animalelor (reacția Ascoli); pentru a detecta alți agenți patogeni ai bolilor infecțioase în materialul patologic obținut de la pacienți sau în obiecte Mediul extern, precum și în examen medico-legal pentru a determina speciile unei proteine, în special, o proteină din sânge sau alte fluide biologice.
Imunodifuzia Ouchterlony
Reacția de precipitare poate fi efectuată pe un gel de agar.
Metoda se bazează pe faptul că particulele de antigene și anticorpi, datorită dimensiunilor lor diferite, difuzează în gel la viteze diferite și, ca urmare, se deplasează la distanțe diferite. Acest lucru face posibilă separarea sistemelor individuale de antigene atunci când acestea sunt într-un amestec și, prin urmare, face posibilă studierea structurii antigenice a bacteriilor și a proteinelor complexe, a serurilor și a țesuturilor animale.
vizuale şi metoda eficienta Precipitarea pe gel a fost sugerată de Ouchterlony.
Se fac puțuri mici pe vase Petri cu agar, tăiate la o oarecare distanță unele de altele. Antigenul este turnat într-una dintre ele, ser în altele. Componentele reacției difuzează în gel între ele și formează o linie vizibilă de precipitare unde antigenele se întâlnesc cu concentrații optime de anticorpi specifici pentru aceasta. Deoarece reactivii difuzează concentric în afara godeurilor, pot fi efectuate teste multiple prin plasarea mai multor godeuri cu antigeni diferiți (sau diluții diferite ale aceluiași antigen) în jurul unui godeu de anticorp.
Reacția Ouchterlony face posibilă tragerea unei concluzii despre natura antigenului dintr-un ser cunoscut și, invers, dintr-un antigen cunoscut, se determină natura anticorpilor.
Avantajul metodei este că permite compararea componentelor antigenice ale amestecurilor complexe și evaluarea comunității sau diferențelor acestora. Pentru a compara comunitatea antigenelor, se prepară un agar cu godeuri: se toarnă antiser într-una, iar antigenele comparate sunt turnate în celelalte. Dacă antigenii sunt diferiți, atunci benzile de precipitare sunt situate inegal.
Imunoelectroforeza
În ultimii ani, metoda imunoelectroforezei a fost folosită pentru studii imunologice fine. Metoda a fost descrisă pentru prima dată de P.
Grabar și K. A. Williams în 1953. Este o combinație de electroforeză pe gel de agar pe plăci de sticlă cu imunodifuzie. La început, se efectuează o separare electroforetică a antigenului, care este adesea un amestec de proteine sau alte molecule. Pentru a face acest lucru, antigenul este introdus într-o tăietură în prealabil în agar, iar placa de agar este plasată pentru ceva timp într-o zonă de curent electric continuu.
din cauza viteză diferită mișcarea moleculelor este separarea antigenului în părțile sale componente. După aceea, serul imun precipitant este introdus în canalul tăiat în direcția paralelă cu fluxul curent.
Antigenul și antiserul difuzează în gel unul spre celălalt.
precipitare
Fiecare antigen dă o zonă de precipitare sub formă de arc cu anticorpi corespunzători acestuia. Numărul, poziția și forma acestor linii oferă o idee despre compoziția amestecului original de antigen.
reacție de floculare
Metoda a fost propusă de Ramon în 1924.
Se bazează pe faptul că un amestec de toxină cu ser antitoxic în anumite condiții dă turbiditate și precipitare. În acest caz, reacția are loc mai devreme în acele eprubete în care cantitatea de antitoxină corespunde dozei care neutralizează complet această cantitate de toxină.
Prin urmare, dacă puterea toxinei este cunoscută, atunci cantitatea de antitoxină din serul de testare necunoscut poate fi determinată. Pentru a face acest lucru, se prepară mai multe diluții ale serului de testare, la fiecare diluție se adaugă aceleași cantități dintr-o toxină cunoscută, după care se observă care dintre eprubete va flocula mai întâi (turbiditatea soluției). Determinați floculația inițială. Apoi se face calculul.
De exemplu, este necesar să se determine concentrația de anticorpi anti-difteriei în serul de testat. Reacția folosește toxină difterice care conține 50 Lf per 1 ml (Lf este cantitatea minimă de toxină care este neutralizată de 1 unitate antitoxică (UA) de antiser.
Să presupunem că flocularea inițială este observată într-o eprubetă care conține 0,2 ml din acest ser și 2 ml dintr-o toxină cunoscută cu o activitate de 100 Lf (50 Lf x 2).
Deci 0,2 ml de ser au neutralizat această toxină. Prin urmare, 0,2 ml de ser conțin 100 UA, iar în 1 ml din acest ser, concentrația de anticorpi corespunde la 500 UA (100 AU x 5).
Printr-o metodă similară, reacția de floculare poate fi utilizată în scopul opus - pentru a determina proprietățile de imunizare ale toxoizilor.
Acest lucru necesită un ser antitoxic standard.
Reacția de neutralizare
Reacția este utilizată în diagnosticarea intoxicațiilor bacteriene alimentare pentru a determina toxine bacteriene din materialul de testat. În plus, poate fi pus în studiul unor obiecte ale mediului extern pentru conținut bacterii patogene producând toxine, de exemplu, la examinarea solului pentru prezența agenților patogeni ai tetanosului sau a gangrenei gazoase.
Se știe că toxina amestecată cu ser antitoxic omolog nu-și arată acțiune toxică pe măsură ce toxina este neutralizată. Reacția interacțiunii unei toxine cu o antitoxină, de regulă, este strict specifică, prin urmare, pentru a stabili o reacție de neutralizare pentru a determina tipul de toxină, este necesar să existe seruri de diagnostic specifice fiecărui tip. și tipul de toxină. Un amestec de 2-3 seruri antitoxice și mai mult poate fi utilizat simultan dacă se preconizează că mai multe toxine sunt prezente în materialul de testat.
Reacția de neutralizare vă permite să determinați tipul și tipul de toxină patogenă.
Materialul de testat poate fi un filtrat de produse alimentare care ar fi provocat otrăviri, spălări din vase în care se aflau aceste produse etc.
Se efectuează neutralizarea preliminară a presupusei toxine. Pentru a face acest lucru, se adaugă un ser de diagnostic antitoxic (conține anticorpi la toxina dorită) în eprubeta cu materialul de testare (eprubetă experimentală); se adaugă un volum egal de ser fiziologic într-o altă eprubetă (martor).
După o scurtă incubare, conținutul eprubetelor este introdus în două grupe de șoareci albi (experimental și martor).
Rezultatele reacției de neutralizare sunt luate în considerare imediat după moartea animalelor martor. În acest caz, faptul de supraviețuire a animalelor care au primit ser antitoxicîmpreună cu materialul de testat, indică prezența unei toxine în acesta, corespunzătoare serului injectat.
Avantajul reacției de neutralizare este fiabilitatea ridicată a rezultatelor obținute.
Cu toate acestea, în sensibilitatea și viteza de obținere a unui răspuns, este inferior altor metode de cercetare.
Reacții de liză
Reacțiile de liză se numesc de obicei dizolvarea antigenelor corpusculare sub acțiunea anticorpilor specifici acestui antigen în prezența complementului.
Din reacții imune pe baza fenomenului de liză a bacteriilor și a altor antigene corpusculare, se folosesc în principal reacții de bacterioliză și hemoliză.
reacție de bacterioliză
Reacția are loc atât in vitro, cât și in vivo. Aceasta din urmă este cunoscută ca reacția lui V.I. Isaev - Pfeiffer.
Acești oameni de știință au demonstrat că dacă porcușori de Guineea preimunizat cu antigeni holeric, apoi introducerea sa ulterioară în cavitatea abdominală a unei culturi foarte virulente de vibrio cholerae nu provoacă infecția animalelor, deoarece în cavitate abdominală agentul patogen este dizolvat sub influența anticorpilor specifici.
Mai tarziu eu.
I. Mechnikov a dovedit că o dizolvare similară a vibrionului holeric sub influența serului imun are loc într-o eprubetă, dacă la componentele principale se adaugă ser proaspăt, o sursă de complement. Dizolvarea bacteriilor sub acțiunea anticorpilor specifici în prezența complementului se numește reacție de bacterioliză.
La stabilirea reacției de bacterioliză, se prepară mai întâi o serie de diluții de 10 ori ale serului de testare. Apoi, în fiecare eprubetă se adaugă aceeași cantitate (1-2 picături) de suspensie microbiană. Complementul este adăugat la amestec. După incubare la 37 °C, amestecul este inoculat din fiecare tub pe un mediu nutritiv pentru a determina prezența sau absența bacteriilor viabile.
Reacția poate fi utilizată pentru a detecta anticorpi folosind un microorganism cunoscut sau pentru a determina tipul de microbi folosind un ser imunitar de diagnostic.
LA munca practica bacteriologii folosesc rar această reacție, în principal pentru diferențierea holerei și vibrioanele asemănătoare holerei.
Reacția de hemoliză
Mecanismul hemolizei este similar cu cel al bacteriolizei.
Eritrocitele utilizate în reacție sunt antigenul. Sursa de anticorpi este serul antieritrocitar (de exemplu, dacă în reacție se folosesc eritrocite de oaie, atunci serul necesar cu anticorpi antieritrocitari specifici se obține de la iepuri imunizați cu eritrocite de oaie).
Serul sanguin de cobai este cel mai adesea folosit ca complement în reacțiile de liză, deoarece conține semnificativ mai mult complement decât în serurile altor animale.
În acele cazuri în care anticorpii în prezența complementului distrug eritrocitele, hemoglobina este eliberată din ele, iar amestecul de reacție dintr-o suspensie tulbure de eritrocite se transformă într-un lichid roșu transparent (sânge lac).
Această reacție se numește hemoliză. În practica de laborator, este folosit ca indicator al adsorbției complementului în reacția de fixare a complementului.
Informații conexe:
Cautare site:
Planul cursului: Subiect și o scurtă istorie a dezvoltării microbiologiei. Proprietățile generale ale microorganismelor și poziția lor în natură. reacție de precipitare
Microbiologia veterinară și sarcinile acesteia
mir.zavantag.com > Biologie > Prelegere
1 … 7 8 9 10 11 12 13 14 15
| ^
RA a fost dezvoltat pentru prima dată de M. Gruber în 1896. Esența reacției este interacțiunea anticorpului cu antigenul, rezultând lipirea (aglutinarea) microbilor cu formarea de fulgi, bulgări vizibile cu ochiul liber. RA este utilizat pe scară largă pentru diagnostic serologic mulți infecții bacteriene(bruceloza, muca, salmoneloza, colibaciloza etc.) si pentru identificarea serologica a speciilor si tipurilor de microorganisme izolate. Există mai multe metode de stabilire a RA: eprubetă (volumică), picurare (placă), picătură de sânge, reacție inelă cu lapte, reacție de hemaglutinare și variantele acesteia (RHGA, RNHA), testul antiglobulinic al lui Coombs etc. ^ – în loc de ser se ia sânge. Setarea reacției plăcii. Diagnosticați pulloroza puilor și curcanilor, micoplasmozei puilor. Reacția Coombs permite detectarea anticorpilor incompleti. Acestea din urmă sunt monovalente și, prin urmare, inhibă formarea aglutinatului. Metoda se bazează pe utilizarea serului antiglobulinic, care servește ca intermediar pentru conectarea anticorpilor incompleti fixați pe antigenele corpusculare (eritrocite, bacterii). ^ - nu se aplică reacțiilor serologice și precise din punct de vedere diagnostic, cu toate acestea, vă permite să detectați antigenul - hemaglutinină și să stabiliți proprietăți hemaglutinante (capacitatea de a aglutina globulele roșii) în unele bacterii și micoplasme. RNGA- în ultimii ani a ocupat unul dintre locurile de frunte în serodinamică. Esența sa constă în faptul că moleculele proteice ale antigenului agentului patogen sau anticorpului corespunzător sunt pre-adsorbite pe eritrocitele unei oi sau ale unui alt animal tratat cu tanin. Se pune apoi reacția prin amestecarea eritrocitelor sensibilizate cu serurile de sânge ale animalelor bolnave sau în al doilea caz cu antigenul studiat. În prezența spec. serului. Anticorpii la acest antigen (sau invers) are loc aglutinarea eritrocitară - reacția este pozitivă. Propus de R. Kraus în 1897. Precipitația este un fenomen observat în timpul interacțiunii anticorpi-precipitine și antigen-precipitinogen. Esența reacției este modificarea dispersității coloizilor antigenului și precipitarea acestora sub influența anticorpilor specifici din serul imunitar. RP poate fi plasat în eprubete într-un mediu lichid (reacție de precipitare în ciclu) sau în gel de agar (RDP lamelar). Reacția de precipitare inelă a fost propusă pentru prima dată de Ascoli (1910), este cea mai utilizată pentru diagnosticul antraxului. La conducere expertiza veterinara RP este o metodă de determinare a falsificării cărnii, făinii și a altor produse. Sens special această reacție are un examen medico-legal în determinarea tipului de sânge. Folosirea reacției de precipitare într-un mediu lichid nu permite totuși să se caracterizeze eterogenitatea antigenelor, adică. numărul și concentrația de antigene din preparat. Aceste informații pot fi obținute prin plasarea RP într-un gel (de obicei, agar). Având o viteză de mișcare, diferiți antigeni ai medicamentului difuzează diferit, formând precipitate în grosimea gelului transparent la locul în care se întâlnesc cu anticorpul omolog. Localizarea și concentrația liniilor de precipitină vor fi caracteristice pentru fiecare componentă a preparatului antigenic, care servește drept criteriu pentru calitatea acestuia. Prin diluarea preparatului, este posibil să se caracterizeze conținutul relativ de antigene din acesta. Au fost dezvoltate mai multe metode de stabilire a RDP: metoda difuziei directe unidimensionale după Uden (1946), metoda imunodifuziei radiale simple după Mancini (1963), metoda difuziei duble în gel de agar după Ouchterlony (1948). ), etc. ^
(PH) pe model toxine tetaniceși antitoxine. Esența RN constă în capacitatea anticorpilor omologi ai serului imun de a suprima (neutraliza) proprietățile infecțioase ale agentului cauzal al bolii sau ale produselor metabolice ale acesteia. Pentru a stabili rezultatul reacției cu un amestec de antigen-anticorp infectează animalele de laborator, CC, EC. Un indicator pozitiv al pH-ului este absența morții sistemelor de testare biologică. LA practica bacteriana RN este utilizat în diagnosticul enterotoxemiei anaerobe, botulismului etc. RN se efectuează pentru a detecta și titra toxine, toxoide sau antitoxine. Folosit pentru a detecta anticorpi în serul sanguin și pentru a detecta antigenul în materialul de testat (pentru bruceloză, mucă, rickettsioză, tuberculoză etc.). Această reacție aparține reacției indirecte cu două sisteme. Are 5 componente:
Componentele 3,4,5 alcătuiesc sistemul de indicatori. Dacă antigenul și anticorpul serului de testare corespund între ele altul, apare un complex imun antigen-anticorp, care leagă și extrage complementul din mediul în care are loc reacția. În absența anticorpilor corespunzători antigenului din serul de testat, complexul specificat nu se formează - complementul rămâne liber. Deoarece acestea sunt procese invizibile, pentru a rezolva întrebarea ce sa întâmplat cu complementul, componentele sistemului hemolitic sunt introduse în eprubetă ca indicator - ser hemolitic + eritrocite. Dacă complementul este legat în sistemul bacteriologic, hemoliza eritrocitelor nu va avea loc, rezultatul este pozitiv - serul conține anticorpi. Prezența hemolizei servește ca un indicator al prezenței complementului liber în sistemul bacteriologic, ceea ce este posibil numai în absența anticorpilor în serul de testare - rezultatul este negativ. RSC procedează în condiții stricte rapoarte cantitative componente. Acest lucru se realizează prin titrarea lor preliminară (complementul și serul hemolitic sunt titrate în ziua reacției; antigenul microbian - o dată în 2-3 luni). Titrarea este determinarea celei mai mici cantități dintr-unul sau altul din reacție pentru a efectua reacția, un exces sau deficiență este o denaturare a rezultatelor. RDSC este o variantă a CSC, dar diferă prin aceea că prima fază a reacției se desfășoară timp de 16-18 ore la rece (40C), ceea ce crește sensibilitatea datorită adsorbției mai lungi a complementului de către complexul antigen-anticorp. |
7 8 9 10 11 12 13 14 15
Similar:
| Definiția „microbiologie de mediu” Microbiologie generală, studiind relația microorganismelor între ele, cu obiectele mediului extern și cu macroorganismul |
Cele mai generale și fundamentale concepte care reflectă esențialul, ... Filosofia este o știință, care studiază cel mai mult Dispoziții generale despre om, natură și cunoaștere |
||
| Planul Subiectul și metoda disciplinei „Relații economice internaționale”... Subiectul și metoda disciplinei „Relații economice internaționale” și istoria dezvoltării relațiilor economice internaționale |
Întrebări pentru examenul la cursul „psihologie juridică” Pentru studenți... Conceptul de psihologie juridică. Subiectul, sarcinile și istoria dezvoltării psihologiei juridice |
||
| 1. Subiectul și metoda istoriei doctrinelor politice și juridice > Subiectul ... Acest lucru se datorează faptului că în cadrul acestei discipline juridice este investigat și acoperit un subiect specific - istoria apariției ... |
1.
Istoria filozofiei ca știință. Subiectul și metoda sa |
||
| Ministerul Educației și Științei din Republica Kazahstan Alianța Studenților... Acest regulament privind competiția republicană „Studentul Anului-2011” (denumit în continuare concurs) stabilește scopurile și obiectivele sale, participanții ... |
Definiția termenilor „microbiologie” și „microorganism” … |
||
| Întrebări pentru pregătirea testului la disciplina „conflictologie” Conflictologia ca știință: subiect, scopuri, obiective, probleme curente, semnificație asupra stadiul prezent dezvoltarea societatii |
Despre concursul regional de clipuri video "k-roly-k!" Dispoziții generale Prezentul Regulament stabilește scopurile, obiectivele, principiile Concursului, procedura de organizare și desfășurare a acestuia, procedura de participare și determinare... |
Adăugați un buton pe site-ul dvs.:
Materiale școlare
www.mir.zavantag.com
reacție de precipitare
Precipitarea și aglutinarea sunt reacții destul de asemănătoare care diferă în principal pe baza proprietăți fizice AG.
În primul caz, se prezintă în solubil, în al doilea - în forme corpusculare. RP se bazează pe formarea unui precipitat în timpul reacției AG-AT. RP este foarte specific și sensibil.
Ingrediente de reacție:
1. antigen sau haptenă solubilă (precipititogen);
2. AT - precipitine (ser precipitant imun; obţinut prin imunizarea iepurilor cu soluţii adecvate de antigene);
reacție de precipitare
soluție izotonică de clorură de sodiu sau gel de agar.
Metode de setare RP:
1) RP în soluții - r.
precipitare inelară;
2) RP în gel.
Reacția de precipitare inelară este pusă în tuburi de precipitare înguste în care se toarnă serul de precipitare.
Apoi se toarnă soluția de precipitinogen. Cu o reacție pozitivă, la interfața ingredientelor apare un inel de precipitare tulbure.Un exemplu al acestei metode de configurare a RP este reacția de termoprecipitare Ascoli, care este utilizată pentru a detecta o haptenă termostabilă a agentului patogen antrax, extras din organele animalelor, piele și lână prin extracție în timpul fierberii.Una dintre soiurile de RP din gel (reacția Ouchterlony) vă permite să determinați toxicitatea bacilul difteric cu ser antitoxic.
Într-o cutie Petri cu mediu nutritiv se pune o fâșie de hârtie de filtru impregnată cu ser antidifteric antitoxic și se inoculează cu culturile studiate sub formă de lovituri perpendiculare pe fâșia de hârtie. Incubat la 37 PS în timpul zilei. În prezența unei culturi toxigenice se formează linii de precipitare la locul interacțiunii toxinei cu antitoxina.Reacția de precipitare în gel se numește imunodifuzie.
Adesea prin foreză în gel - imunoelectroforeză. Principiul metodei: antigenul studiat este fracţionat electroforetic. fractiile obtinute se analizeaza prin metoda dublei difuzii folosind antiser.
Reacția Ascoli este utilizată pentru a diagnostica antraxul pentru a detecta antigenul bacililor antraxului. Pentru a stabili o reacție de precipitare, trebuie să aveți: precipitinogen - haptenă B.
Antrahis (extract de țesut), precipitină (ser care precipită antraxul) și soluție salină.
Prepararea termoprecipitinogenului.
1. Se toarnă 10 ml de ser fiziologic într-un balon care conține 1 g de piele zdrobită sau 1 ml de cultură de B. anthracis.
2. Puneți balonul într-o baie de fierbere timp de 30-45 de minute.
3. Filtrați prin azbest. Filtratul trebuie să fie complet limpede. Pentru reacția de precipitare, filtratul este diluat de 100 de ori sau mai mult.
Stabilirea reacției de precipitare a inelului.
1) În tubul de precipitare se toarnă 0,3 ml de ser de precipitare întreg sau diluat 1:5, 1:10.
2) Un precipitinogen este stratificat cu grijă de-a lungul peretelui tubului.Reacția este considerată pozitivă dacă un inel tulbure de proteină precipitată se formează la limita a două lichide nu mai târziu de 5-15 minute.
La configurarea reacției de precipitare, se folosesc următoarele controale:
a) antigen și soluție salină;
b) ser specific şi fizic.
c) antigen şi ser nespecific.
Nu trebuie să existe turbiditate în toate tuburile de control.Pentru reacția de precipitare se folosesc tuburi speciale de precipitare de 40-60 mm înălțime și 4-5 mm în diametru, precipitarea în tuburi înguste are loc mult mai rapid și se manifestă mai clar decât în eprubetele obișnuite. , sunt bine spălate și uscate, astfel încât paharul lor să fie complet transparent și uscat.
În reacția de precipitare se precipită un complex imun specific, constând dintr-un antigen solubil (lizat, extract, haptenă) și un anticorp specific în prezența electroliților.
Inelul tulbure sau precipitatul format ca urmare a acestei reacții se numește precipitat. Această reacție diferă de reacția de aglutinare în principal prin dimensiunea particulelor de antigen.
Reacția de precipitare este utilizată de obicei pentru determinarea antigenului în diagnosticul unui număr de infecții (antrax, meningită etc.); în medicina legală - pentru a determina speciile de sânge, spermatozoizi etc.; în studii sanitare și igienice - la stabilirea falsificării produselor; cu ajutorul ei determină relația filogenetică dintre animale și plante. Pentru reacție aveți nevoie de:
1. Anticorpi (precipitine) - ser imunitar cu un titru ridicat de anticorpi (nu mai mic de 1:100.000). Titrul serului precipitat este determinat de cea mai mare diluție a antigenului cu care reacționează. Serul este folosit de obicei nediluat sau diluat 1:5 -1:10.
2. Antigen - substanțe dizolvate de natură proteică sau lipoid polizaharidă (antigene și haptene complete).
3. Soluție izotonică.
Principalele metode de realizare a reacției de precipitare sunt: reacția de precipitare în ciclu și reacția de precipitare în agar (gel).
Atenţie! Toate componentele implicate în reacția de precipitare trebuie să fie complet transparente.
Reacția de precipitare inelară.În tubul de precipitare se adaugă 0,2 - 0,3 ml (5-6 picături) de ser cu ajutorul unei pipete Pasteur (serul nu trebuie să cadă pe pereții tubului). Antigenul este stratificat cu grijă pe ser în același volum, turnându-l cu o pipetă Pasteur subțire de-a lungul peretelui eprubetei. Eprubeta este ținută în poziție înclinată. Cu o stratificare adecvată, trebuie să se obțină o limită clară între ser și antigen. Cu grijă, pentru a nu amesteca lichidul, puneți eprubeta într-un trepied. Cu un rezultat pozitiv al reacției, se formează un „inel” tulbure la granița antigenului și anticorpului - un precipitat.
Reacția de precipitare în agar(gel). Particularitatea reacției este că interacțiunea dintre antigen și anticorp are loc într-un mediu dens, adică în gel. Precipitatul rezultat dă o bandă tulbure în grosimea mediului. Absența unei benzi indică o nepotrivire între componentele reacției. Această reacție este utilizată pe scară largă în cercetarea biomedicală, în special în studiul formării toxinelor în agentul cauzal al difteriei.
Reacția de liză (citoliza imună)
liză imună- aceasta este dizolvarea celulelor sub influența anticorpilor cu participarea obligatorie a complementului. Pentru reacție aveți nevoie de:
1. Antigenul microbi, eritrocite sau alte celule.
2. Anticorp(lizina) - ser imunitar, rareori serul pacientului. Serul bacteriolitic contine anticorpi implicati in liza bacteriilor; hemolitic - hemolisine care contribuie la liza globulelor roșii; pentru liza spirochetelor sunt necesare spirochetolizine, celule - itolizine etc.
3. Completa. Cele mai multe completează în serul cobaiului. Acest ser (amestec de la mai multe animale) este folosit de obicei ca complement.
4. Soluție izotonică.
reacție de precipitare.
| Numele parametrului | Sens |
| Subiect articol: | reacție de precipitare. |
| Rubrica (categoria tematica) | Educaţie |
Reacția de precipitare (RP) - ϶ᴛᴏ precipitarea unui antigen solubil sub acțiunea anticorpilor în prezența unui electrolit. Efect de reacție vizibil (fenomen de precipitare) - turbiditate (formarea unui inel tulbure sau a unui sediment - precipitat).
RP este utilizat pentru a detecta un antigen necunoscut într-un număr de boli infecțioase: cu antrax, tularemie, meningita, variola. În medicina legală, este folosit pentru a determina tipul de sânge, material seminal; în cercetările sanitare şi igienice – să stabilească falsificarea produselor alimentare. RP este foarte sensibil și poate detecta antigenul în diluții de 1:1.000.000 și 1:10.000.000.
Componentele reacției de precipitare.
1. Antigen (precipitinogen) - este un antigen de natură moleculară, care se află într-o stare fin dispersată (solubilă). Precipitinogeni - ϶ᴛᴏ diverse lizate sau extracte tisulare etc.
Găzduit pe ref.rf
Un precipitinogen diferă de un aglutinogen prin dimensiunea particulelor de antigen. Aglutinogen Are dimensiunile celulelor(acestea nu sunt celule întregi distruse), ci dimensiunile precipitatogen pe măsura dimensiunea moleculară(acestea sunt proteinele și complexele lor cu carbohidrați sau lipide). Soluție de precipitatogen transparent.
2. Anticorpi (precipitine) se găsesc în serul uman sau în serurile de precipitare a diagnosticului imun care conţin anticorpi cunoscuţi.
3. Electrolit- soluție izotonică de clorură de sodiu.
Obținerea precipitinogenului.
Se obține prin măcinarea materialului și extragerea antigenelor proteice din acesta prin fierbere sau prin alte mijloace.
Exemple de precipitinogeni: lizate sau extracte din diverse organe și țesuturi, ser de sânge străin (serul este soluţie, în primul rând, diverse proteine), filtrate de culturi în bulion de microbi, extracte sărate de microbi, autolizate etc.
Obținerea serurilor precipitante.
Obținut prin hiperimunizarea iepurilor cu precipitinogeni corespunzători. Astfel de seruri conțin anticorpi la acei precipitinogeni cu care iepurii au fost imunizați.
Exemple de seruri precipitante: ser de antrax precipitant(conține anticorpi la antigenele antraxului), ser antimeningococic precipitant(conține anticorpi împotriva antigenelor agentului cauzal al meningitei) etc.
Titrul ser de precipitare - ϶ᴛᴏ cea mai mare diluție de precipitinogen, la care serul dă încă o reacție de precipitare.
Modalități de setare a RP.
1. Reacția de precipitare inelară - se efectuează în tuburi speciale de precipitare (diametru - 0,4-0,5 cm, înălțime - 7-8 cm). În eprubetă se adaugă 0,2 - 0,3 ml de ser precipitant și aceeași cantitate de precipitanogen este stratificată cu grijă de-a lungul peretelui cu nasul lung al unei pipete Pasteur. În continuare, cu grijă pozitie orizontala tuburile sunt plasate vertical.
Contabilizarea rezultatelor reacțiilor realizată prin apariția unui inel alb la marginea antigen-anticorp. Cu o reacție pozitivă se observă un astfel de inel. În acest caz, antigenul corespunde anticorpului și are loc legarea acestora.
Dacă se fierbe și se filtrează extracte apoase organe și țesuturi, atunci reacția se numește de obicei reacție precipitații termice (de exemplu, în diagnosticul de antrax).
2. Reacția de precipitare a gelului - se efectuează în vase Petri sau pe lame de sticlă, unde se așează un strat de gel de agar. Când gelul se solidifică, în el sunt tăiate godeuri, în care sunt plasați antigeni sau anticorpi, sau ambii. Distinge 2 metode RP în gel:
o metodă imunodifuzie simplă (radială).: una dintre componentele reacției imune (antigen sau anticorp) se pune în godeu, iar cealaltă componentă se amestecă cu agar; cu rezultat pozitiv (antigenul corespunde unui anticorp) în jurul godeului se formează inel precipitat ;
b) metoda imunodifuzie dublă: atât anticorpul cât și antigenul sunt plasate în godeuri separate, se difuzează în gelul de agar unul către celălalt; cu rezultat pozitiv unde se întâlnesc anticorpii și antigenii linii de precipitații.
Un exemplu de RP în gel este reacția de imunodifuzie dublă Ouchterlony în diagnosticul difteriei
Imunoelectroforeza - este o metodă care combină metoda electroforezei și reacția de precipitare. Un amestec de antigeni (de exemplu, proteine din serul sanguin) este separat într-un gel folosind electroforeză. Apoi, pentru a găsi și determina proteina dorită (antigen necunoscut), se folosește un ser precipitant diagnostic, care conține anticorpi la această proteină (anticorp cunoscut). Pentru a face acest lucru, serul de diagnostic este introdus în șanțul paralel cu proteinele. Dacă printre proteine există una care corespunde anticorpului din ser, atunci în jurul acestuia se formează linii de precipitații.
reacție de precipitare. - concept și tipuri. Clasificarea și caracteristicile categoriei „Reacția de precipitare”. 2017, 2018.
