Examinarea microscopică a scaunului. Diagnosticul intravital al helmintiazelor

Metode directe: depistarea helminților înșiși, a fragmentelor lor, a ouălor, a larvelor în fecale, urină, secreții duodenale, spută, mucus nazal și vaginal, conținutul spațiilor subunguale, bucăți de țesut biopsiate.

La diagnosticare, este imposibil să se identifice ouăle sau larvele tuturor tipurilor de helminți care trăiesc în sistem digestiv persoană. Astfel, atunci când se utilizează metoda de flotație, ouăle de trematode și, în unele cazuri, ouăle de viermi rotunzi nefertilizate nu plutesc în pelicula de suprafață (datorită gravității lor specifice ridicate). Este foarte rar întâlnit în fecale ouă de oxiuri și oncosfere de taeniid, care sunt detectate prin metode speciale de cercetare: răzuire din pliurile perianale pentru oxiuri și taeniide, metode de sedimentare pentru trematode (ouă de opistorhide etc.). Prin urmare, pentru o examinare țintită a unui pacient pentru infecții cu helminți, medicul în sesizare trebuie să indice pe ce helminți trebuie să se concentreze (diagnostic), ceea ce va permite asistentului de laborator să aleagă tehnica adecvată pentru identificarea acestui tip de helminți. Fecale luate din locuri diferite scaunul într-o cantitate de cel puțin 50 de grame (linguriță) într-un recipient de sticlă curat trebuie trimis la laborator în cel mult 24 de ore de la defecare și examinat în ziua primirii.

Dacă este necesar să se păstreze scaunul până când ziua urmatoare se pune la loc rece (0-4°C) sau se umple cu unul dintre conservanti.

Înainte de examinare, fecalele sunt amestecate cu un băț, astfel încât ouăle de helminți să fie distribuite uniform în masa totală.

Dacă în preparat se găsesc ouă de helmint, vizualizarea nu este oprită, deoarece poate exista o invazie dublă sau triplă.

Monitorizarea eficacității tratamentului infecțiilor cu helminți se realizează prin examinarea fecalelor pentru ouă de helminți la 2-3 săptămâni sau la 2-3 luni după tratament, în funcție de helmintul detectat.

Metodele macroscopice sunt utilizate pentru a detecta helminți întregi maturi sau fragmentele acestora în fecale cu ochiul liber sau cu lupa manuală.

Adesea, oxiurii care se târăsc activ pot fi observați pe suprafața fecalelor după defecare; viermii rotunzi sunt excretați în fecale; Uneori, oamenii înșiși observă trecerea helminților. La pacienții cu difilobotriază pot fi eliberate fragmente de strobili de tenia (sub formă de „tăitei”), iar la cei infectați cu taeniide (teniia de porc sau de bovină), segmentele de helminți se desprind adesea cu fecale (sub formă de „alb". decupaje”) sau se târăsc activ din anus.

Metoda macroscopică este principala pentru diagnosticul diferențial al taeniasis și taeniarynchosis (în combinație cu un sondaj).

Dintre metodele macroscopice speciale, se folosește metoda de spălare secvențială a fecalelor.

Fecalele se amestecă în apă pentru a obține o suspensie uniformă, după care iluminare buna sunt examinate cu atenție în porțiuni mici separate în cuve fotografice negre sau pe fundal întunecatîn vase Petri. Folosind o pensetă sau un ac de disecție, îndepărtați toate particulele albe suspecte, formațiunile mari suspecte pentru fragmente de helminți și examinați-le sub o lupă între două lame. Mici helminți sau capete de cestode sunt examinate sub o lupă într-o picătură de glicerină sau la microscop.

Când se utilizează această metodă de diagnosticare a segmentelor de tenia de porc, de bovină și de tenia lată, segmentele spălate sunt plasate între două pahare și, privind lumina sub lupă sau microscop cu mărire mică, specia este determinată de structură. a uterului (într-un segment matur al teniei de porc, 8-12 ramuri laterale și tenia bovină 18-32, mai des 28-32, la tenia lată segmentele sunt mai largi, iar uterul din centru este sub forma unei „rozete”). Dacă uterul este greu de văzut, atunci poate fi mai întâi păstrat pentru o perioadă de timp într-o soluție de glicerină 50%, după care chiar și trunchiurile goale ale uterului pot fi văzute clar.

La identificarea acestor cestode după structura capetelor detașate, ele sunt așezate cu grijă cu gâtul într-o picătură de glicerină între lame (sau acoperite cu o lamelă) și, fără a strânge, examinate la microscop la mărire mică.

Metode microscopice sunt împărțite în simple, complexe și speciale.

Printre cele simple se numără metodele de frotiu nativ, frotiul nativ cu soluție Lugol, metodele de frotiu gros sub celofan după Kato, răsucirea (după Shulman) și răzuirea perianală.

Metode complexe sunt mai eficiente și se bazează pe concentrația de ouă în preparate. Acestea implică pretratarea fecalelor cu reactivi lichizi, în urma cărora ouăle de helminți fie precipită, fie plutesc la suprafața lichidului.

Metodele complexe includ metode de îmbogățire:

a) flotație (când gravitație specifică ouăle au o greutate specifică mai mică soluție salină iar ouăle plutesc pe filmul de suprafață);

b) sedimentare (când greutatea specifică a ouălor este mai mare decât greutatea specifică a soluțiilor saline și ouăle se depun în sediment).

Metodele speciale de detectare a ouălor și a larvelor de helminți, chisturi și forme vegetative ale protozoarelor sunt metode de răzuire, flotare, sedimentare, larvoscopie, protozooscopie, examinare a bilei și metode de colorare a frotiurilor de fecale, spută etc.

Metode simple examenele fecale

Frotiu nativ. O particulă mică de fecale este luată cu un băț de lemn din diferite părți ale porțiunii livrate, frecată bine pe o lamă de sticlă într-o picătură de soluție de glicerol 50% și se face un frotiu subțire pe 2-3 lame de sticlă. Cel puțin 3 preparate sunt examinate la microscop. Dezavantajul metodei: este vizualizată o cantitate mică de material, prin urmare nu este utilizată ca metodă independentă.

Metoda de răsucire(Shulman). 2,0-3,0 g de fecale se pun într-un pahar, se amestecă bine cu o baghetă de sticlă cu un volum de 5 ori de soluție salină sau apă distilată, făcând mișcări rapide timp de 2-3 minute și se scoate rapid tija din amestec. O picătură de amestec de la capătul batonului este transferată pe o lamă de sticlă și examinată la microscop. Principiul forței centrifuge face ca ouăle și larvele să se acumuleze pe băț.

Metoda de frotiu gros Kato cu celofan. Reactivi chimici: glicerina 100%, solutie fenol 6% (100 ml apa + 6 g fenol), solutie verde malachit 3% (2,5 ml apa distilata + 75 ml verde malachit).

Prepararea soluției de lucru: 100 ml de soluție de fenol 6% + 100 ml de glicerină pură + 1,2 ml de soluție de verde malachit 3%.

Prepararea benzilor de celofan: Tăiați benzi de celofan a căror dimensiune corespunde lamei de sticlă. Celofanul trebuie să fie hidrofil (celofanul care arde este potrivit; dacă se topește, este nepotrivit). În soluția de lucru pot fi procesate până la 5 mii de benzi. Perioada de expunere pentru benzile de celofan până când acestea sunt gata de utilizare în soluția de lucru este de cel puțin 24 de ore.

Progresul studiului. 50 mg de fecale (aproximativ de mărimea unui bob de mazăre mare) se aplică pe o lamă de sticlă, se frecă cu un bețișor individual (sticlă, din lemn), se acoperă cu o bandă de celofan și se frecă deasupra cu un dop de cauciuc până când se formează un frotiu gros uniform. obținut. Preparatul se usucă la temperatura camerei timp de o oră sau într-un termostat la 40°C timp de 20-30 de minute și se examinează la microscop (timpul de expunere poate fi crescut la temperatura camerei la 5-6 ore sau mai mult).

Din punct de vedere al eficienței, această metodă este apropiată de metoda de flotație, dar dezvăluie o invazie intensivă și de intensitate medie.

Este utilizat ca metodă independentă de diagnostic și este recomandat pentru screening-ul în masă al populației.

În laboratoarele de diagnostic clinic este utilizat ca metodă unificată de diagnosticare a helminților în absența unor diagnostice specifice în trimiterile medicilor.

Metodele de răzuire perianală și frotiu nativ cu soluție Lugol sunt descrise în secțiunea metode speciale.

Metode sofisticate de îmbogățire a fecalelor

Metodele de îmbogățire se bazează pe diferența dintre greutatea specifică a ouălor de helminți și soluția salină utilizată.

Când se utilizează metoda de flotație, se pot utiliza următoarele soluții de sare:

1. Soluție de azotat de plumb PbNO3 (nitrat de plumb) cu o densitate de 1,5. Preparat la o rată de 650 g de substanță la 1 litru de apă. Sarea se dizolva in portiuni in apa fierbinte intr-un vas emailat, se incalzeste pe aragaz si se amesteca constant pana se dizolva complet. Nu este necesară filtrarea soluției. Soluția se prepară în ziua studiului, deoarece în timp dă un precipitat, iar densitatea sa începe să scadă după 24 de ore.Dacă soluția este preparată în cantități mari, atunci în următoarele zile înainte de studiu este încălzită, amestecând sedimentul. Soluția este preparată într-o hotă, deoarece azotatul de plumb este o sare a unui metal greu.

2. O soluție de azotat de amoniu NH4NO3 (nitrat de amoniu granulat sau obișnuit) cu o densitate de 1,3 se prepară în același mod ca și cea anterioară, dar cu o rată de 1500 g substanță la 1 litru. apa fierbinte.

3. O soluție de azotat de sodiu NaNO3 sau azotat de sodiu cu o densitate de 1,38-1,4 se prepară în proporție de 1000 g de substanță la 1 litru de apă fierbinte.

4. O soluție de tiosulfat de sodiu Na2S2O3×5H2O (hiposulfit de sodiu) cu o densitate de 1,4 se prepară în proporție de 1750 g substanță la 1 litru de apă fierbinte.

5. Se prepară o soluție de sulfat de sodiu Na2SO4 (sare Epsom) cu o densitate de 1,26-1,28 la o rată de 920 g de substanță la 1 litru de apă fierbinte.

6. O soluție de clorură de zinc ZnCl2 (clorură de zinc) cu o densitate de 1,82 se prepară în proporție de 2000 g de substanță la 1 litru de apă fierbinte. Soluția răcită nu cristalizează.

7. Soluție saturată de clorură NaCl de sodiu(sare de masă) cu o densitate de 1,18-1,2. Pe! l de apă, se adaugă 400-420 g sare în porții într-o găleată emailată cu apă clocotită, amestecând constant până se dizolvă complet. Pe măsură ce soluția se răcește, cristalele de clorură de sodiu precipită.

Greutatea specifică a soluțiilor de flotație se măsoară cu un aerometru numai după ce soluția s-a răcit complet la temperatura camerei.

Metodele de flotație sunt cele mai eficiente pentru detectarea ouălor de tenie pitic, de viermi bici, de viermi anchilostomatici, de viermi rotunzi și de tenie.

Filmul de suprafață poate fi îndepărtat folosind o buclă de sârmă sau o lamă de sticlă.

Într-o soluție saturată sare de masă filmul poate fi examinat după 30-40 de minute, într-o soluție de azotat de amoniu - după 10-20-30 de minute după decantare.

La îndepărtarea filmului cu o buclă de sârmă, se examinează cel puțin 8 picături.

Diapozitivele îndepărtează mai multe ouă din film decât buclele de sârmă. Sticla trebuie să fie în contact cu soluția de flotație lichidă, care se adaugă în pahar cu o pipetă. După decantare, sticla este îndepărtată și așezată cu suprafața umedă în sus pe sticlă. dimensiune mai mareși examinat la microscop. Lamelele trebuie degresate înainte de utilizare.

Pentru a efectua cercetări trebuie să aveți: lame de sticlă, pahare, bucle de sârmă, cuve, vase Petri, pipete, becuri, tije din sticlă sau lemn.

Progresul studiului. Se toarnă 5 g de fecale cu o cantitate de 10 ori de soluție de flotație (de preferință greutate specifică 1,38-1,40), se amestecă bine, se îndepărtează particulele mari insolubile de deasupra și se lasă suspensia timp de 10-15 minute. Filmul este apoi îndepărtat fie cu o buclă pe o lamă de sticlă, fie cu o lamă de sticlă. Pentru a dilua fecalele, este mai bine să luați pahare cu o capacitate de 30-50 ml, să turnați soluția la nivel cu marginile (sau să umpleți sub 2-3 mm) și să acoperiți amestecul cu o lamă de sticlă, apoi să adăugați soluția de flotație cu o pipetă până când vine în contact cu lama de sticlă. După 10-20 de minute, îndepărtați rapid sticla și microscopați filmul rămas pe el fără un geam de acoperire.

Metode de sedimentare

Metodele de sedimentare sunt folosite pentru a detecta ouăle de geohelminți, biohelminți în fecale și ca metode speciale de testare a opistorhiei.

Metoda Goryachev-Zolotukhin(metoda Goryachev simplificată). Aproximativ 1,5 g de fecale se amestecă într-un pahar în 3-4 ml apă. Suspensia rezultată este filtrată prin două straturi de tifon într-un tub de centrifugă, straturile cu grijă deasupra celor 4-5 ml de soluție saturată de clorură de sodiu prezente în ea. Eprubetele se pun într-un suport timp de 15-20 ore.În acest timp, ouăle de trematode grele se depun. Se obțin două straturi clar delimitate. Sedimentul este examinat microscopic.

Metoda eter-formalină. Este folosit pentru diagnosticarea tuturor invaziilor intestinale și ca metodă specială pentru ouăle de protozoare și opistorhide.

Echipament: centrifugare la 3000 rpm; tuburi gradate centrifuge, pâlnii; strecurator metalic (strecurator de ceai) sau bandaj in doua straturi; lamele și lamele; bețe de lemn (sau sticlă); vată, bandaj.

Reactivi chimici: soluție de formol 10% (1 parte soluție farmaceutică de formol și 4 părți apă distilată); eter etilic (medicinal).

În tuburi de centrifugă se toarnă 7 ml dintr-o soluție de formol 10% și se pune 1 g de fecale (o astfel de cantitate de fecale încât soluția din eprubetă se ridică la 8 ml). Fecalele se amestecă cu formaldehidă până când se formează un amestec omogen, apoi se toarnă printr-o sită metalică (sau tifon dublu strat, bandaj) într-un alt tub de centrifugă (dacă fecalele rămân pe sită, sita trebuie clătită cu formaldehidă). Adăugați 2 ml de eter în acest tub de centrifugă, acoperiți și agitați energic timp de 30 de secunde.

Amestecul este centrifugat la 3000 rpm timp de un minut (sau două minute la 1500 rpm). Datorită reacției eter-formalină, proteinele se coagulează sub forma unui dop în partea de sus a eprubetei, iar ouăle de helminți precipită. Stratul de coagulant este îndepărtat, lichidul supernatant este drenat, sedimentul este aplicat pe o lamă de sticlă direct dintr-o eprubetă sau cu o pipetă Pasteur, acoperit cu o lamă și vizualizat la microscop.

Metoda de precipitare eter-acetică. Principiul sedimentării eter-acetice a ouălor de helminți constă în tratarea secvențială a probelor de fecale cu o soluție apoasă de 10%. acid aceticşi eterul. Acidul acetic este mai bun decât alții compuși chimici emulsionează probele fecale. Pătrunde în particulele nedigerate constând în principal din fibre, care atunci când conținut grozav interferează cu cercetarea prin precipitarea după centrifugare. Adăugarea ulterioară de eter în eprubetă și agitarea conduce la extracția acidului acetic din conținutul eprubetei împreună cu particulele fecale înmuiate în ea. Deoarece greutatea specifică a amestecului de ester și acid acetic este mai mică decât greutatea specifică a apei, probele de scaun tratate cu aceste substanțe plutesc, iar ouăle de helminți, care au o greutate specifică mare, se depun.

Cantitatea de sediment obţinută după precipitarea eter-acetică este de 3-4 ori mai mică decât după precipitarea eter-formalină. Acest lucru facilitează foarte mult detectarea ouălor de helminți în el și vă permite să examinați întregul sediment cu o cantitate cântărită de 0,5-1 g. Toxicitatea metodei eter-acetice este de 5 ori mai mică.

Progresul studiului. Se toarnă 7 ml dintr-o soluție de acid acetic 10% într-un tub de centrifugă gradat și se adaugă o probă de 1 g de fecale (adică, cantitatea de fecale la care soluția de acid acetic crește la 8 ml). Amestecați bine cu un băț de sticlă sau de lemn. Se strecoară printr-o pâlnie cu două straturi de tifon într-un alt tub de centrifugă. Adăugați 2 ml la emulsat eter etilic(adică până la 10 ml). Eprubetele se închid cu un dop de cauciuc (de la o sticlă de penicilină) și se agită timp de 15 secunde. După îndepărtarea dopului, tuburile sunt centrifugate timp de un minut la 3000 rpm timp de 2 minute. Lichidul supernatant din eprubetă este scurs. În unele cazuri, dopul fecal rezultat interferează cu drenajul supernatantului. În acest caz, utilizați o tijă de sticlă sau de lemn pentru a separa dopul de pereții eprubetei. Întregul sediment este pipetat pe o lamă de sticlă și examinat microscopic sub o lamelă la o mărire mică. Sedimentul este de obicei mic și incolor. Ouăle de helminți, în special ouăle mici de trematode, sunt ușor de detectat.

Metoda de sedimentare chimică. Principiul studiului se bazează pe precipitarea ouălor dintr-o probă de fecale într-o soluție salină cu o greutate specifică de 1,15. Esența metodei este centrifugarea directă a unei eprubete în care un dop de fecale emulsionat într-o soluție 1% de acid acetic este stratificat pe o soluție de azotat de sodiu (gravitate specifică 1,16). Greutatea specifică mare a soluției saline și bulele eliberate din cauza reacției chimice care pătrund în stratul de fecale omogenizate împiedică sedimentarea acesteia. Ouăle de helminți precipită cu o cantitate mică de fibre. Sedimentul poate fi curățat de resturile rămase prin tratarea acestuia cu o soluție de 10% acid acetic și eter. În acest caz, rămâne doar un ouă de helmint, ceea ce facilitează foarte mult identificarea acestora.

Progresul studiului. 6 ml de soluție de azotat de sodiu cu o greutate specifică de 1,15 se toarnă într-un tub de centrifugă gradat. 7 ml dintr-o soluție de acid acetic 1% se toarnă într-o altă eprubetă. Adăugați o probă de fecale (până la marcajul de 7,5 ml pentru o probă de 0,5 g și până la 8 ml pentru o probă de 1,0 g). Se amestecă bine proba cu o tijă de sticlă. Se strecoară printr-o pâlnie cu un strat de tifon, punându-l pe o soluție de azotat de sodiu. Tubul cu filtratul stratificat este centrifugat la 1500-2000 rpm timp de 5 minute. Lichidul supernatant este scurs prin răsturnarea rapidă a tubului. Se adaugă 3-4 ml dintr-o soluție 10% de acid acetic și 0,5 ml de eter în eprubeta cu sedimentul, se închide cu un dop de cauciuc și se agită. Se efectuează centrifugarea repetată timp de 1 minut. Aruncați lichidul supernatant. Sedimentul este transferat pe o lamă de sticlă, acoperit cu o lamă și examinat la microscop.

STUDII HELMINTOLOGICE ALE BILEI, CONȚINUTULUI DUODENAL, SPUTĂ, SÂNGE, URINĂ ȘI MUSCHI

Detectarea ouălor și larvelor de helminți în conținutul duodenal și bilă. Se efectuează un studiu al conținutului biliar și duodenal dacă se suspectează helmintiaza hepatică și vezicii biliare (opistorhiază, clonorchiază, dicrocelioză) și duoden(strongiloidiaza).

Progresul studiului. Conținutul duodenal și bila (porțiunile A, B, C) se obțin în mod obișnuit prin intubare. Pentru porțiunea B se recomandă obținerea unui reflex al vezicii biliare prin administrarea unei soluții 33% printr-o sondă. sulfat de magneziu. Din lichidul de testare, fulgii care plutesc în el sunt selectați și examinați la microscop, apoi amestecați cu o cantitate egală de eter sulfuric. Amestecul este agitat bine și centrifugat. Supernatantul este aruncat și întregul sediment este examinat la microscop.

În absența puroiului și a mucusului, conținutul biliar și duodenal este centrifugat fără a se amesteca cu eterul.

Examinarea sputei. În practica helmintologică, examinarea sputei este efectuată în scopul diagnosticului de laborator al paragonimiazei. Uneori sunt detectate ouă de schistozomi, larve de viermi rotunzi și elemente ale vezicii echinococice.

Un frotiu nativ este preparat din spută pe o lamă de sticlă, care este examinată la microscop.

Dacă există o cantitate mare de puroi în spută, acesta se amestecă cu o soluție 0,5% de hidroxid de sodiu sau hidroxid de potasiu, se agită timp de 5 minute și se centrifughează. Sedimentul este examinat microscopic.

Test de sange. Sângele este examinat dacă un pacient este suspectat de filarioză.

Datorită faptului că, în unele tipuri de filarioză (loiază, wuchererioză cauzată de o tulpină subperiodică), larvele (microfilariile) sunt prezente în sângele periferic doar în timpul zilei, iar în unele (brugioză, wuchereroza cauzată de o tulpină periodică) - doar noaptea, respectiv la această oră se prelevează sânge pentru analiză.

Tehnica de recoltare a sângelui, prepararea preparatelor (frătire subțire și picătură groasă), colorare (după Romanovsky) și testare sunt similare cu cele pentru diagnosticul de laborator al malariei.

Microfilariile diferitelor specii se disting prin lungime, lățime, curbura corpului, prezența sau absența unui capac, forma capătului cozii, locația substanței nucleare în corp și regiunea caudală a larvelor.

Progresul studiului. Apoi, urina este lăsată să stea cel puțin 30 de minute strat superior se scurge, lasand 10-15 ml de sediment, care se toarna in tuburi de centrifuga si se centrifugheaza 1-2 minute. După scurgerea supernatantului, sedimentul este transferat pe o lamă de sticlă și examinat la microscop.

STUDIUL BIOPTILOR MUSCALE

Metoda trichinoscopiei. Necesitatea examinării biopsiilor musculare ale pacientului apare atunci când se suspectează trichineloza.

Biopsia se efectuează după reguli generale. De obicei se face o biopsie a mușchiului deltoid. În timpul unui examen patologic, se poate face o biopsie a mușchilor diafragmei, esofagului, limbii, mușchilor masticatori și intercostali, flexorilor membrelor, mușchilor. globul ocular, deoarece sunt cel mai intens afectate de larvele de Trichinella.

În laborator, o bucată de mușchi biopsiată este tăiată în bucăți foarte mici (cu un microtom), care sunt plasate între două pahare, zdrobind fibrele musculare și examinate la microscop. În prezent, microscoape speciale - trichineloscoape - sunt utilizate pe scară largă în acest scop.

În cazul trichinelozei, trichinoscopia dezvăluie semne puternic proeminente de-a lungul fibrelor musculare. forma ovala capsule de trichineloză (asemănătoare lămâiei). valoarea medie capsule la om este de 0,4 x 0,26 mm. Capsula, de regulă, conține o Trichinella încolăcită în spirală în 2,5 spire. Cu o intensitate mare de invazie, pot exista 2 sau 3 larve într-o capsulă. Fibrele musculare adiacente capsulei își pierd striațiile încrucișate și capătă un aspect omogen.

Carnea sau produsele din carne care au provocat infecția sunt examinate în același mod.

Metoda de digestie musculara. Metoda este mai eficientă.

Progresul studiului. Mușchii studiați sunt măcinați fin și umpluți cu artificial suc gastricîn raport de 1:15-20. Amestecul rezultat se pune într-un termostat la 37°C timp de 12-16 ore.După această perioadă se examinează microscopic sedimentul, în care larvele de Trichinella se găsesc în stare liberă printre masa de resturi de fibre musculare digerate.

Sucul gastric artificial poate fi achiziționat de la o farmacie sau preparat într-un laborator. Pentru a face acest lucru, adăugați 10 ml de acid clorhidric concentrat la 1 litru de apă distilată; Înainte de utilizare, adăugați 30 g de pepsină la 1 litru de acid diluat.

METODE CANTITATIVE DE CERCETARE

Metode cantitative cercetarea este utilizată pentru a determina intensitatea invaziei, a evalua eficacitatea diferitelor medicamente antihelmintice, a determina calitatea deparazitării, a monitoriza tratamentul în masă și măsurile preventive în curs etc.

Determinarea cantitativă a ouălor de helminți se realizează prin două metode: metoda Stoll și metoda Krasilnikov și Volkova (1974).

Metoda Stoll. Pentru a efectua studiul, trebuie să aveți un microscop, un balon de sticlă cu marcajul de 56 și 60 ml, un cilindru gradat, mărgele de sticlă, un dop de cauciuc pentru balon, pipete gradate, lame de sticlă și soluție de hidroxid de sodiu 0,4%.

Progresul studiului. Soluția de hidroxid de sodiu decinormală (concentrație de aproximativ 0,4%) se toarnă în balon cu ajutorul unui cilindru gradat până la marcajul de 56 ml și se adaugă fecale până când nivelul lichidului atinge 60 ml (adică 4 ml fecale). Amestecul se agită bine cu mărgele de sticlă timp de 1 minut, închizând vasul cu un dop de cauciuc (puteți amesteca și cu un băț). Imediat după agitare, se iau 0,075 ml din amestec cu o pipetă gradată (conține 0,005 ml fecale), se transferă pe o lamă de sticlă și se numără numărul de ouă din preparat la microscop. Pentru a determina numărul de ouă în 1 g de fecale, numărul detectat este înmulțit cu 200.

Comparația numărului de ouă din preparat găsite la pacient înainte și după tratament permite să se judece eficacitatea deparazitării.

Metoda lui Stoll este simplă, dă rezultate comparabile pentru toate helmintiaza, ai căror agenți patogeni eliberează sistematic ouă în intestinele pacientului. Cu toate acestea, dezavantajul metodei este că este relativ sensibilitate scăzută, mai ales cu intensitate scăzută a invaziei.

Metoda Krasilnikov-Volkova. Când se studiază cu această metodă, cel puțin 1 g de fecale este amestecat într-un balon de sticlă sau o eprubetă mare cu o soluție Lotus 1% (sau 1,5% soluție Extra) într-un raport de 1:10. Suspensia se agită bine până se formează o suspensie omogenă, apoi se iau rapid 0,1 ml suspensie (egal cu 0,01 g fecale) cu o pipetă gradată și se transferă pe o lamă de sticlă. Preparatul se acoperă cu o sticlă de acoperire sau o placă de celofan (20 x 30 mm), ținută cel puțin o zi la 50% soluție apoasă glicerină.

Numărați numărul de ouă din întregul preparat. Pentru a calcula numărul de ouă din 1 g de fecale, numărul rezultat trebuie înmulțit cu 100.

Această metodă are o serie de avantaje față de metoda Stoll. În primul rând, este mai sensibil și vă permite să detectați helminții când grad slab infestări. În al doilea rând, este foarte convenabil pentru examinări în masă, deoarece soluțiile de detergent, fiind conservanți pentru ouăle de helminți, fac posibilă efectuarea cercetărilor asupra materialului care nu este complet proaspăt. in orice caz condiție prealabilă Aceasta implică colectarea fecalelor direct într-o soluție de detergent.

Pentru cercetare cantitativă Puteți utiliza oricare dintre metodele calitative unificate descrise, bazate pe principiul ouălor plutitoare. Dar, în acest caz, aceeași cantitate de fecale și același volum de soluție de flotație trebuie luate pentru analiză. Gradul de invazie poate fi calculat cunoscand numarul de oua in 1 g de fecale, conform tabelului de mai jos.

Intensitatea invaziei în funcție de numărul de ouă de helminți

în 1 g de fecale

METODE DE DIAGNOSTIC SEROLOGIC

Aceste metode, bazate pe detectarea anticorpilor specifici în serul sanguin, sunt utilizate în scopuri de diagnostic și screening.

Metodele serologice includ:

Reacția de precipitare în ciclu (RCR) (trichineloză, cisticercoză);

Reacția de precipitare a inelului în eprubete la rece (trichineloză, cisticercoză);

Reacție de microprecipitare asupra larvelor vii (trichineloză, ascariază);

Reacția de hemaglutinare indirectă (IRHA) (trichineloză, echinococoză, alveococoză, cisticercoză etc.);

Reacția de aglutinare a latexului (LAR) (echinococoză, alveococoză, trichineloză, teniarinchiază etc.);

Reacția de fixare a complementului (FFR) (trichineloză, echinococoză, cisticercoză);

Reacția cu anticorpi marcați cu enzime (ERA) (echinococoză, oncocercoză, schistosomiază, trichineloză, toxocaroză);

Test imunosorbant legat(ELISA) (trichineloză, opistorhiază, toxocariază, toxoplasmoză etc.).

Pentru a efectua reacții serologice, se produc antigene standard sau se prepară independent (de exemplu, din vezica echinococică de oaie) și se produc sisteme speciale de testare pentru ELISA.

Metode speciale studii pentru enterobiaza, teniarinhoz, taeniasis

Razuire din pliurile perianale. Pentru a obține răzuire din pliurile perianale, puteți folosi o spatulă de lemn, o bandă de celofan, hârtie sau bandă de celuloză, bețișoare pentru ochi cu un strat adeziv special:

a) răzuire cu o spatulă de lemn (o spatulă este un chibrit sau un băț turtit), umezit cu o soluție de glicerină 1% (sau o soluție de 0,5%) bicarbonat de sodiu), se realizează prin răzuire ușoară de pe suprafața pliurilor perianale de-a lungul întregii circumferințe a anusului. Răzuirea rezultată este transferată cu marginea unui capac de sticlă de la capătul unei spatule pe o lamă de sticlă într-o picătură de soluție de glicerol 50%, acoperită cu aceeași sticlă de acoperire și microscopată. Dezavantajul acestei metode este detectarea insuficientă a ouălor și efect iritant;

b) conform metodei Torgushin, se face o clătire cu un tampon de vată pe o spatulă de lemn sau altă spatulă umezită cu o soluție de glicerină 50% și se prepară un frotiu pe o lamă de sticlă într-o picătură de glicerină;

c) conform metodei lui Kevorkova, se toarnă aproximativ 5 ml într-un tub de centrifugă apa fiarta, puneți în ea o spatulă (băț) cu un tampon de bumbac. Înainte de a lua materialul, tamponul este apăsat ușor pe peretele interior al eprubetei, pliurile perianale sunt șters cu acesta, iar spatula cu tamponul este introdusă în eprubetă. Tamponul este agitat bine într-o eprubetă, spălarea este centrifugată timp de 3 minute și sedimentul rezultat este examinat la microscop;

d) răzuire cu bandă adezivă după Graham. O bucată de bandă adezivă (bandă de polietilenă transparentă cu un strat adeziv pentru creativitatea copiilor, dar este mai bine să folosiți folie chirurgicală LPO-1, LPO-2) 8-10 cm lungime, lipiți-o cu un strat adeziv pe pliurile perianale ale pielii, ținându-l de capete, apoi transferați-l într-un pahar. glisați cu stratul adeziv în jos (capetele benzii care se extind dincolo de marginile paharului sunt tăiate), ochelarii sunt numerotați, iar datele pacientului și numărul sticlei sunt înregistrate în jurnal. În laborator, banda este dezlipită de la un capăt pe o distanță lungă și se picura sub ea 1-2 picături. Ulei de vaselină sau glicerina (pentru a elimina defectele optice) si microscop;

e) răzuire cu tije de ochi de sticlă, a căror suprafață este acoperită cu o compoziție adezivă specială. Bețișoarele pentru ochi sunt instalate într-un trepied special. Materialul este colectat prin atingerea părții plate a spatulei de pielea deschiderii perianale. Bagheta este apoi reatașată la trepied pentru transport. Microscopia se realizează direct pe spatulă pe ambele părți (fără lame și ochelari de acoperire) cu montare preliminară în casete la mărire redusă (ocular x 10, obiectiv x 8). La sfârșitul lucrării, bețișoarele se dezinfectează prin fierbere într-o soluție de săpun, iar trepiedul și casetele se tratează cu alcool și se spală cu o soluție de săpun-sodă. Compoziția lipiciului: cleol – 10 g, Ulei de ricin– 2,5 g, eter etilic – 5 g, etanol 96% - 2,5 g.

Spatulele se scufundă în soluția de lipici, apoi se usucă în aer la temperatura camerei. Filmul adeziv format la suprafață durează câteva zile.

Metoda este convenabilă pentru screening-ul în masă al copiilor pentru enterobiază și al adulților pentru taeniasis.

Pe lângă metoda de răzuire pentru teniarinchoză și taeniasis, se mai folosesc metoda sondajului și metoda macroscopică descrise mai sus (la identificarea segmentelor).

Metode speciale de cercetare pentru strongiloidiaza

Metoda eter-acetică este folosită pentru a detecta ouăle (vezi mai sus) și metoda Berman pentru a detecta larvele în fecale.

metoda Berman. Examinați scaunul proaspăt, de preferință după ce ați luat un laxativ. O probă de fecale de 5 g este plasată pe o sită metalică (plasa din interior este căptușită cu două straturi de tifon) într-o pâlnie de sticlă montată într-un suport. Un tub de cauciuc cu o clemă (aparatul Berman) este plasat pe capătul inferior al pâlniei.

Plasa cu fecale este ridicată și apă încălzită la 40-50°C este turnată în pâlnie, astfel încât Partea de jos plasa a fost scufundată în apă și fecalele au fost complet acoperite cu apă. După 2-4 ore, clema de pe tubul de cauciuc se deschide rapid și lichidul este scurs într-un tub de centrifugă. După centrifugare (1-2 minute), partea superioară a lichidului se scurge rapid, iar sedimentul în cantitate de 1 ml este aplicat într-un strat subțire pe o lamă de sticlă și microscopat la microscop cu mărire mică.

Metoda IMP și TM. O porțiune de fecale de mărimea unei nuci se pune într-un pahar, se toarnă cu soluție salină caldă la 40°C, astfel încât fecalele să fie acoperite cu soluția și se lasă timp de 20 de minute. După 20 de minute, lichidul este turnat într-un vas Petri și vizualizat la un microscop binocular MBS.

Pentru a diagnostica strongiloidiaza, în special pentru a monitoriza eficacitatea tratamentului, se recomandă combinarea metodei Berman cu studiul conținutului duodenal.

Metode speciale de cercetare pentru nematozi

Nematoze

ascariaza

Istoria atrage atenția asupra atitudinii față de grădinărit și horticultură. Consumul de legume crude și salate făcute din aceste legume.

Manifestari clinice faza timpurie Ascariaza este cauzată de modificări alergice ale organismului. Stadiul larvar precoce sau migrator al ascariazei apare adesea în prezența febrei cu o temperatură corporală de până la 38° și peste, cu un complex de simptome de afectare pulmonară și prezența unei eozinofilii sanguine pronunțate. În majoritatea cazurilor, la copii, primele semne ale bolii sunt starea de rău, slăbiciune, dureri de cap periodice, transpirații și uneori dureri musculare și articulare. Adesea apare o erupție cutanată abundentă, cum ar fi urticaria, cu mâncărime severă sau moderată. Diagnosticul fazei precoce este confirmat de studiile cu raze X pentru prezența substanțelor volatile în plămâni infiltrate eozinofile Leffler. Frotiurile de spută proaspăt secretată conțin adesea celule eozinofile, globule roșii, cristale Charcot-Leyden și larve de viermi rotunzi.

În stadiul imaginar intestinal al ascariazei, o combinație de gastrointestinale și sindroame astenice, enterocolitic simptome de durere. Copiii experimentează adesea pierderea în greutate, uneori destul de semnificativ. Greață, salivație crescută, iritabilitate, dezvoltare psihomotorie întârziată, scăderea inteligenței.

Pentru diagnosticul de laborator al st. intestinale.

Protozoarele sunt împărțite în 4 clase:

Când este enchistat, microorganismul dobândește formă rotunjităși acoperit cu o carcasă de protecție. Sub formă de chist, protozoarele devin mai puțin sensibile la factori nefavorabili mediu inconjurator.

Următoarele pot face obiectul cercetării:

Notă:Există multe tipuri de diagnostice; vom lua în considerare acele tipuri care sunt cele mai comune în practica clinică de laborator.

Tipuri private de diagnosticare

În fiecare caz specific, asistentul de laborator are sarcina de a găsi un anumit agent patogen; uneori, alții sunt descoperiți împreună cu cel principal.

Există 6 specii ale acestui microorganism capabile să trăiască în intestinul uman. Numai ameba dizenterică, care apare sub formă vegetativă și sub formă de chisturi, are semnificație clinică.

În plus, se folosesc metode imunologice:

• imunofluorescență indirectă;
• aglutinare indirectă (INA);
• imunodifuzie radială.

Notă: metode serologice sunt neinformative și sunt folosite doar ca adaos la cele principale în cazuri îndoielnice.

Diagnosticarea ciliatelor (ciliatelor)

Forma patogenă a microorganismelor din acest gen este balantidium. Acesta este un microb care provoacă balantidiaza, o boală însoțită de un proces ulcerativ al intestinului gros. Agentul patogen este detectat în frotiul nativ sub forma unei forme vegetative și a unui chist. Materialul pentru frotiu (fecale și mucus) este prelevat în timpul unui examen sigmoidoscopic și semănat pe medii speciale.

Diagnosticul flagelaților (Leishmania, Giardia, Trypanosomes, Trichomonas)

Leishmania, tripanozomii, lamblia și trichomonas sunt periculoase pentru oameni.

Leishmania- microbi, provocând leishmanioză, sunt examinate în frotiuri de sânge, materiale măduvă osoasă, zgârieturi de la infiltrate cutanate. În unele cazuri, la diagnosticarea leishmaniei, se utilizează cultura pe medii nutritive.

Tripanozomi– agenți patogeni boala somnului(Tripanosomiaza americană/africană sau boala Chagas).

Varianta africană este definită în perioada initialaîn studiul sângelui periferic. Pe măsură ce boala progresează, microbii patologici se găsesc în materialul puncțiilor ganglionilor limfatici, iar în stadii avansate - în lichidul cefalorahidian.

Pentru a diagnostica tripanozomii dacă se suspectează boala Chagas, materialul examinat este examinat la microscop la o mărire mică. În acest caz, frotiurile și picătura groasă sunt pre-pătate.

Trichomonas(intestinale, orale) sunt detectate prin microscopie a materialelor prelevate din mucoasele afectate.

Identificarea sporozoarelor (plasmodul malaric, agentul cauzal al coccidozei etc.)

Cea mai comună și periculoasă specie pentru oameni este plasmodiumul malaric, care are 4 tipuri principale de agenți patogeni: patogen malaria tertiana, malarie de patru zile, malarie tropicalăși ovalul malariei.

Dezvoltarea sexuală a Plasmodium (sporogonie) are loc la țânțarii Anopheles. Asexual (schizogonie tisulară și eritrocitară) - în țesutul și eritrocitele hepatice umane. Aceste caracteristici ale ciclului de viață trebuie luate în considerare la diagnosticarea plasmodiului malaric.

Astfel, în sângele unui pacient nou bolnav, pot fi detectate celule germinale ale ciclului de sporogonie. Dar la apogeul atacurilor de malarie, schizoții apar în număr mare în sânge.

Mai mult, în diferite faze febra malarica apărea diverse forme plasmodium:

• în perioada de frig, sângele se umple cu merozoiți, un tip de schizont;
• la temperaturi ridicate, trofozoiții în formă de inel se acumulează în eritrocite;
• o scădere a temperaturii se caracterizează printr-o predominanță a trofozoiților asemănătoare amibei;
• în perioadele de stare normală, sângele conține forme adulte de schizonți.

Studiul agentului cauzal al malariei (plasmodul malaric) se efectuează într-un frotiu și într-o picătură groasă.

Notă:Diagnosticul malariei prin examinarea frotiurilor și a picăturilor groase de sânge este uneori eronat. Trombocitele din sânge în unele cazuri pot fi atribuite în mod eronat agentului patogen al malariei. De asemenea, uneori fragmente de leucocite și alte celule simulează plasmodiul.

Metode de bază pentru studiul protozoarelor

Să ne uităm pe scurt la cele mai comune metode de cercetare pentru prezența protozoarelor.

Diagnosticul protozoarelor folosind un frotiu nativ și un frotiu colorat cu soluție de Lugol (în scaun)

Medicamentul este preparat dintr-o emulsie de fecale într-o soluție izotonă. Două picături de clor de sodiu și soluție Lugol sunt aplicate pe o lamă de sticlă. Materialul de testat este adăugat la ambele compoziții cu un băț de lemn și, după acoperire cu sticlă, este vizualizat la diferite rezoluții de microscop.

Protozoarele găsite sunt înregistrate pe baza anumitor caracteristici. Pentru acuratețe, pregătiți 2-3 preparate din același material. În cazurile îndoielnice, analiza se repetă de mai multe ori pe parcursul a 2-3 săptămâni.

Metoda poate detecta formele vegetative și chistice:

• lamblia;
• balantidiu;
• ameba dizenterică.

Alături de formele patogene sunt identificate și protozoarele nepatogene. Tot la purtătorii sănătoși există forme luminale și chistice.

Important:cercetarea ar trebui efectuată în mod repetat pentru a evita inexactitățile și erorile.

Rezultatul diagnosticării protozoarelor folosind metoda frotiului nativ și colorat ar trebui să conțină o descriere a formei agentului patogen (luminal, chist, țesut).

Cerințe de cercetare:

• materialul luat pentru analiză (fecale lichide) este examinat nu mai târziu de 30 de minute după defecare;
• scaunul formalizat trebuie diagnosticat în 2 ore după defecare;
• materialul nu trebuie să conțină impurități ( dezinfectante, apă, urină);
• pentru a lucra cu materialul, folosiți numai bețe de lemn, cele de sticlă nu sunt potrivite din cauza alunecării mucusului;
• Bețișoarele trebuie arse imediat după utilizare.

Metoda de conservare (examenul scaunului) pentru diagnosticarea protozoarelor

Studiul se realizează prin fixarea protozoarelor cu un conservant. Diferența dintre această metodă și cea anterioară este că conservanții vă permit să păstrați medicamentul pentru o perioadă lungă de timp.

Conservanti folositi:

• Barrow. Conține ingrediente conservante: 0,7 ml clorură de sodiu, 5 ml formol, 12,5 ml alcool 96%, 2 g fenol și 100 ml apă distilată. Compoziție colorantă: 0,01% soluție de tionină (azura).
• Soluția lui Safarliev. Ingrediente: 1,65 g sulfat de zinc, 10 ml formol, 2,5 g fenol cristalin, 5 ml acid acetic, 0,2 g albastru de metilen, 100 ml apă. Acest conservant este utilizat în cazurile în care materialul trebuie păstrat mai mult de o lună.

Sticlele goale sunt umplute cu un conservant, materialul este transferat în ele într-un raport de 3:1, apoi se adaugă colorant dacă este necesar. Rezultatele sunt evaluate prin studierea a 2-3 medicamente.

Metoda de îmbogățire cu formol-eter (analiza prezenței protozoarelor în fecale)

Această metodă de diagnosticare vă permite să separați și să concentrați chisturile protozoare. Pentru analiză sunt necesare următoarele ingrediente: formol (10 ml), 0,85 g soluție izotonă, apă distilată, eter sulfuric, soluție Lugol.

Amestecul de biomaterial cu lichidele enumerate este amestecat și centrifugat. Sedimentul obținut la fundul eprubetei este colorat cu soluție de Lugol și examinat pentru prezența chisturilor și a formelor vegetative.

Metoda de detectare a Leishmania (frotiul de măduvă osoasă)

Pentru a diagnostica leishmanioza, se folosesc următorii reactivi: amestec Nikiforov (eter sulfuric și alcool etilic), tampon fosfat, Azur-eozin conform Romanovsky.

Substanța măduvei osoase se așează foarte atent pe o lamă de sticlă după o pregătire specială. Se folosește un microscop cu sistem de imersie.

ÎN perioada acuta boala, un numar mare de leishmanie se gasesc in punctat.

Notă:Uneori celule de sânge poate semăna cu Leishmania prelucrată, de aceea este foarte important ca tehnicianul de laborator să fie atent și să aibă suficientă experiență pentru a efectua cercetări independente.

Metodă de depistare a leishmaniei într-un frotiu de infiltrat cutanat

Reactivii necesari sunt similari cu analiza anterioara.

Materialul de testat este obținut din conținutul de tuberculi sau ulcerații existente. Dacă se suspectează leishmanioza, răzuirea se face foarte atent cu bisturiul, fără sânge. Apoi preparatul se prepară pe sticlă. Pentru a asigura acuratețea rezultatelor obținute, sunt examinate simultan mai multe preparate.

În prezența bolii, leishmania este detectată și printre macrofage, fibroblaste și celule limfoide prezente în materialul de testat.

Metodă de izolare a unei culturi pure de Leishmania obţinută prin răzuirea ţesuturilor patologice

Cu această metodă de diagnosticare a protozoarelor, răzuirea țesuturilor sunt plasate într-un mediu nutritiv special în care Leishmania se înmulțește activ.

Înainte de a lua răzuirea, pielea este tratată temeinic cu alcool, apoi se face o incizie în tubercul, de pe fundul căreia se scoate conținutul și se pune într-o eprubetă cu mediu. Materialul este luat de mai multe ori, după care este pus în diferite eprubete. Apoi cultivarea are loc într-un termostat la o temperatură de 22-24 de grade. Rezultatele sunt evaluate la microscop. Această metodă este utilizată atunci când alte metode mai ieftine și mai rapide de diagnosticare a protozoarelor sunt ineficiente.

Puteți vedea cum testele pentru prezența protozoarelor folosind o picătură de sânge sunt descifrate în practică, urmărind recenzia video:

Lotin Alexander, editorialist medical

Scaunele sunt examinate folosind două metode:

1. Macroscopic – detectează helminții, capetele acestora, segmentele, fragmentele de strobila. Porțiuni mici de fecale sunt amestecate cu apă într-o tavă plată sau în vase Petri și privite la lumină bună pe un fundal întunecat, folosind o lupă dacă este necesar. Toate formațiunile suspecte sunt transferate cu o pensetă într-o altă cană cu apă sau pe o lamă de sticlă într-o picătură de glicerol diluat.

Cu metoda apărând Porțiunea de fecale testată este amestecată cu apă într-un cilindru de sticlă, iar după decantare, stratul superior de apă este scurs. Acest lucru se repetă de mai multe ori. Când lichidul devine transparent, acesta este scurs și sedimentul este examinat într-o cutie Petri.

2. Microscopic – pentru a detecta ouăle și larvele de helminți. Există multe metode de cercetare.

1). Frotiu nativ – cea mai comună și mai accesibilă metodă de cercetare tehnic. Ouăle și larvele tuturor helminților pot fi detectate. Cu toate acestea, cu un număr mic de ouă nu este întotdeauna posibil să le găsiți. Prin urmare, se utilizează metoda de îmbogățire.

1). metoda Fülleborg – aceasta este o metodă de îmbogățire bazată pe plutirea ouălor de helmintiază într-o soluție saturată de NaCl (1,2 – densitate; 400 g NaCl la 1 litru de apă; soluție NaCl 40%). Metoda este mai eficientă decât frotiul nativ. 2-5 g de fecale se pun în borcane de sticlă și se umplu cu soluție de NaCl, se agită și după 45 de minute se îndepărtează filmul rezultat cu o buclă de metal, se pune o picătură de glicerină pe o lamă de sticlă. Examinați la microscop. Dezavantajul metodei este apariția lentă a ouălor diverșilor helminți, tenia pitică - după 15-20 de minute, viermi rotunzi - 1,5 ore, viermi bici - 2-3 ore.

2) Metoda Kalantariană – tot o metodă de îmbogățire, dar se folosește o soluție saturată de NaNO 3 (densitate 1,38). Majoritatea ouălor plutesc; testarea sedimentelor nu este necesară. Dezavantajul este că păstrarea ouălor în soluție pentru o lungă perioadă de timp duce la faptul că unele ouă încep să se umfle și să se așeze pe fund, dispărând din pelicula de suprafață.

3. Metoda Goriaciov – pe principiul depunerii ouălor, detectarea ouălor mici de trematode. O soluție saturată de NaCl este utilizată ca soluție și 3-4 ml de soluție de fecale sunt stratificate cu grijă deasupra. După 15-20 de ore, ouăle de trematode se așează pe fund. Lichidul este scurs și sedimentul este plasat pe o lamă de sticlă și la microscop.

4. Metoda de răsucire Shulman – pentru a detecta larvele de helminți în fecale. Sunt examinate doar fecalele proaspăt excretate. Se pun 2-3 g într-un borcan de sticlă și se adaugă o cantitate de apă de 5 ori, se amestecă rapid cu un bețișor fără a atinge pereții borcanului - 20-30 de minute, apoi se scoate rapid bățul și o picătură de lichidul la final este transferat pe o lamă de sticlă și microscopat.

5. Metoda Berman – se bazează pe capacitatea larvelor de helminți de a migra spre căldură și servește la identificarea lor în fecale.

6. Metoda Harada și Mori (metoda de creștere a larvelor) și este recomandată pentru testarea infecțiilor cu anchilostoma. Metoda se bazează pe faptul că la căldură și pe hârtie filtrată umedă, ouăle de anchilostoma se dezvoltă în larve filariforme, care pot fi ușor depistate. Pe mijlocul unei benzi de hârtie filtrată se aplică 15 g de fecale; hârtia cu fecale se pune într-un borcan, astfel încât capătul inferior să fie scufundat în apă, iar capătul superior să fie fixat cu un dop. Borcanul se tine intr-un termostat la 28 0 C timp de 5-6 zile. Larvele filariforme se dezvoltă în acest timp și coboară în apă. Lichidul este examinat sub o lupă. Dacă este dificil de detectat, lichidul este centrifugat, ucizând mai întâi larvele prin încălzire la 60 0. Asistentul de laborator trebuie să poarte mănuși.

7. Metode pentru enterobiaza – identificarea ouălor de oxiuri și a teniei bovine.

a) răzuire din pliurile perianale – cu un tampon de vată înfășurat strâns pe un băț de lemn și umezit cu o soluție de glicerină 50%. În laborator, tamponul este spălat cu 1-2 picături dintr-o soluție apoasă 50% de glicerină.

b) metoda acarienilor lipicios (metoda Graham)

Banda adezivă este aplicată pe pliurile perianale, apoi stratul adeziv este aplicat pe o lamă de sticlă și examinat la microscop.

C) răzuire folosind tije pentru ochi (metoda Rabinovich). Pentru răzuirea perianală se folosesc tije pentru ochi de sticlă, a căror parte largă este acoperită cu un adeziv special, care permite reținerea ouălor de oxiuri.

Examinarea sângelui, bilei, sputei și mușchilor

Microscopia sângelui dezvăluie larve de filaria.

Examinarea sputei - ouă de paraganim, larve de viermi rotunzi, necator, strongiloid, elemente ale vezicii echinococice.

Examenul muscular - dacă se suspectează trichineloza, se examinează mușchii pacientului sau cadavrul, precum și carnea care probabil a provocat infectarea persoanei. În scopul trichinoscopiei, mușchiul este tăiat în bucăți mici și plasat într-un compresor, acestea sunt două pahare largi și groase care zdrobesc mușchii, iar larvele de Trichinella se găsesc sub formă de capsule - o metodă de compresie.

Metoda de digestie - mușchii sunt umpluți cu suc gastric artificial (soluție de acid clorhidric și pepsină). Mușchii sunt digerați, iar larvele sunt ușor de identificat. Determinarea intensității invaziei: număr de larve până la 200 la 1 g tesut muscular– intensitate moderată a invaziei; până la 500 – intens; peste 500 – invazie superintensiva.

Metode serologice

Capitolul III. Diagnosticul helmintiazelor și metodele de cercetare helmintologică

Este necesar să se examineze pentru helmintiază toți pacienții care caută ajutor medical și, în special, pacienții care apelează la un pediatru, terapeut și neurolog cu plângeri de fenomene din tractul gastrointestinal, sistem nervos si cu anemie. Dacă medicul nu este întotdeauna capabil să utilizeze metode de cercetare de laborator, atunci fiecare lucrător medical care oferă îngrijiri într-o clinică ambulatorie sau într-un spital este obligat să intervieveze pacientul cu privire la izolarea helminților.

Dacă este disponibil, prezentat în capitolele relevante indicatii clinice Diagnosticul trebuie clarificat folosind metode de laborator pentru testarea helmintiazelor.

Datorita predominantei helmintiazele intestinale cel mai mare semnificație practică are o examinare a scaunului.

Metode de testare a scaunului pentru helmintiază

Scaunul este livrat la laborator într-un recipient de sticlă curat (aproximativ un sfert de cană de scaun luat din diferite locuri într-o singură porție); În timpul unei examinări de rutină, este permisă livrarea scaunului în laborator în cutii de chibrituri sau cutii cu atele.

Pentru a controla deparazitarea, se livrează întreaga porțiune de fecale colectată după administrare (așa cum este prescris de medic). antihelminticși laxativ (în borcane mari de sticlă închise, găleți).

Examenul microscopic al scaunului este de bază în diagnosticul helmintiazelor intestinale; ar trebui să fie întotdeauna precedată de o examinare macroscopică generală a fecalelor pentru a detecta segmente de cestode mari, oxiuri, viermi rotunzi etc.

Scaunul trebuie să fie proaspăt sau conservat (într-o soluție de formaldehidă 5%), deoarece uscarea schimbă dramatic structura ouălor. În plus, când fecalele stau, dezvoltare rapidă ouă ale unor helminți (de exemplu, viermi anchilostomi), ceea ce face diagnosticul dificil.

Conform instrucțiunilor Ministerului Sănătății al URSS, este necesar să se examineze scaunul simultan folosind metoda Fulleborn și frotiul nativ.

Frotiu nativ

Frotiu nativ: o bucată mică de fecale (aproximativ de mărimea unui bob de mazăre), luată cu un chibrit, sticlă sau bețișon de lemn din diferite locuri din porțiunea livrată, este măcinată temeinic pe o lamă de sticlă într-o picătură de soluție de glicerol 50% sau în soluție salină sau în apă. Acoperiți cu o lametă, apăsând ușor pe acesta din urmă (cu un ac de disecție). Frotiul trebuie să fie subțire, transparent și uniform. Este utilizat doar ca o completare la alte metode care asigură îmbogățirea medicamentului. Cel puțin două medicamente ar trebui revizuite.

Pentru a detecta larvele de helminți (precum și ouăle acestora), se face un frotiu nativ. în felul următor(după Shulman): 2-3 g de fecale sunt bine amestecate prin „răsucirea” unei baghete de sticlă într-o emulsie cu de cinci ori mai multă apă curată sau soluție salină. În timpul amestecării, larvele se acumulează în apropierea tijei de sticlă, așa că imediat după terminarea amestecării, o picătură de emulsie este transferată rapid cu o tijă de sticlă pe o lamă de sticlă, acoperită cu o lamă și examinată. S. D. Lyubchenko (1936) a dovedit că metoda răsucirii este mai eficientă decât metoda frotiului, în special în ceea ce privește ouăle de viermi rotunzi. Pe baza lucrării lui S. D. Lyubchenko, considerăm că este recomandabil să înlocuim metoda frotiului cu metoda răsucirii.

Metoda Fulleborn

Metoda Fulleborn: 5-10 g de fecale prelevate din diferite locuri se pun intr-un borcan cu o capacitate de 50-100 ml si se freaca bine cu o bagheta de sticla sau lemn intr-o solutie saturata de sare de masa (400 g din aceasta sare se dizolva în 1 litru de apă, se încălzește până la fierbere și se filtrează printr-un strat de vată sau tifon; soluția se folosește la rece: greutate specifică 1,2). Soluția se adaugă treptat până se obține o suspensie uniformă, iar cantitatea totală de soluție adăugată trebuie să fie de aproximativ 20 de ori mai mare decât cantitatea de fecale. Pentru amestecarea fecalelor, Fulleborn a recomandat folosirea paharelor de ceai, dar este mai convenabil să se pregătească o suspensie în borcane cu unguent cu o capacitate de 50-100 ml, folosind două borcane pentru fiecare analiză (sau în căni cu o capacitate de 100 ml).

Imediat după prepararea suspensiei, particulele mari care au plutit la suprafață sunt îndepărtate de pe suprafață cu o spatulă, o linguriță de metal sau o bucată de hârtie curată ( formatiuni vegetale, rămân alimente nedigerate etc.), după care amestecul se lasă să stea 1-1,5 ore. După acest timp, întregul film este îndepărtat de pe suprafața amestecului atingând o sârmă sau buclă de platină (plată) cu un diametru de cel mult 1 cm, îndoită în unghi drept; Filmul este scuturat pe o lamă de sticlă și acoperit cu o lamă. Puneți 3-4 picături sub fiecare lamelă (18x18 mm). În total, trebuie pregătite cel puțin 4 preparate (un pahar de acoperire pentru fiecare preparat). Bucla este încălzită la foc și spălată cu apă după fiecare analiză.

Folosind metoda Fulleborn, ouăle tuturor nematodelor (cu excepția ouălor de viermi rotunzi nefertilizate) și ouăle de tenie pitice sunt detectate rapid și ușor.

Metoda Berman este utilizată pentru a examina fecalele pentru larvele de helminți (pentru strongiloidiază). Această metodă este următoarea: 5 g de fecale pe o plasă metalică (o strecurătoare de lapte este convenabilă în acest scop) se așează pe o pâlnie de sticlă atașată la un trepied. Un tub de cauciuc cu o clemă este plasat la capătul inferior al pâlniei.

Plasa cu fecale este ridicată și apă încălzită la aproximativ 50° este turnată în pâlnie, astfel încât partea inferioară a plasei cu fecale să fie scufundată în apă. Larvele se deplasează activ în apă și se acumulează în partea inferioară a tubului de cauciuc. După 2-4 ore, clema este deschisă și lichidul este drenat într-una sau două tuburi de centrifugă.

După centrifugare timp de 1-2 minute, partea superioară a lichidului se scurge rapid, iar sedimentul se aplică în picături pe lamele de sticlă și se examinează sub lamele de acoperire sau se distribuie într-un strat subțire pe 2-3 pahare mari și apoi se examinează fără capac. aluneca.

Metoda Berman este, de asemenea, folosită pentru a testa solul pentru prezența larvelor de vierme.

Metoda Stoll

Metoda Stoll este folosită pentru a determina intensitatea invaziei. O soluție decinormală de sodă caustică este turnată într-un balon special de sticlă până la marcajul de 56 cm 3, apoi se adaugă fecale până când nivelul lichidului atinge 60 cm 3, adică 4 cm 3. După agitarea cu perle de sticlă, 0,075 ml de amestec sunt luate pentru examinare și examinate sub una sau două lame obișnuite. Cantitatea rezultată se înmulțește cu 200 pentru a obține numărul de ouă conținute în 1 cm 3 de fecale.

Studiul conținutului duodenal

Sucul duodenal și bila vezicii, obținute în mod obișnuit prin sondare (și bila vezicii după un reflex din vezica biliară), sunt bine amestecate cu un volum egal de eter etilic; amestecul este centrifugat, dupa care sedimentul este examinat la microscop. Pe lângă sedimente, examinare microscopica fulgii care plutesc în lichid, care pot conține ouă de helminți, sunt în mod necesar expuși. Când testați sucul gastric și vărsăturile pentru ouă de helminți, puteți utiliza aceeași tehnică.

Examinarea sucului duodenal și a conținutului stomacului trebuie efectuată dacă există suspiciunea de boli helmintice ficat, vezica biliară (opistorhiază, fascioliază, dicrocelioză) și duoden (strongiloidiază).

Examinarea sputei

Sputa este măcinată pe o placă de sticlă, acoperită strâns cu o altă placă de sticlă și examinată cu ochiul liber pe un fundal deschis și negru, precum și sub lupă în lumină transmisă. Bucăți individuale de spută (acumulări „ruginite”, resturi de țesut etc.) sunt aplicate într-un strat subțire pe o lamă de sticlă, acoperite strâns cu o lamă și examinate la microscop cu mărire mică și mare.

a) Pentru a diagnostica cisticercoza pielii, țesutului subcutanat sau mușchiului, se examinează mai întâi cu ochiul liber o bucată excizată aseptic din țesutul relevant. Zonele de țesut sunt îndepărtate folosind ace de disecție pentru a detecta o veziculă vizibilă cu ochiul liber - un cisticerc (foto A); lungimea sa este de 6-20 mm, lățimea 5-10 mm. Când este detectată o veziculă suspectă pentru cisticerc, aceasta este zdrobită între două lame de sticlă și examinată la microscop. Cisticercul (Cistycercus cellulosae) este determinat de prezența unui scolex cu patru ventuze și o corolă de cârlige (foto B).

Fotografie. A - cisticerci cu scolex întors spre exterior; B - Cap de tenia de porc.

b) Pentru a diagnostica trichineloza, o bucată de mușchi excizată aseptic (biceps sau gastrocnemius) este zdrobită cu grijă într-o soluție de glicerină 50% în cele mai fine fibre folosind ace de disecție. Mușchii zdrobiți sunt comprimați între două lame de sticlă și examinați la un microscop de putere redusă într-un câmp vizual întunecat. Se recomandă testarea mușchilor pentru trichineloză nu mai devreme de a 8-a zi a bolii. Larvele de Trichinella se găsesc în mușchi în poziție încolăcită: sunt închise în capsule în formă de lămâie.

Fotografie. A - Larve de Trichinella în mușchi; B — Capsule calcificate de Trichinella.

Raze X

Cel mai adesea, fluoroscopia este utilizată pentru a diagnostica echinococoza și, mai rar, cisticercoza. Cisticercii sunt detectați prin fluoroscopie numai după calcificare (în cazuri boala de lunga durata). În ultimii ani, fluoroscopia a fost folosită și pentru a diagnostica ascariaza atât în ​​stadiul larvar incipient, cât și, parțial, în stadiul intestinal.

În perioada de migrare a larvelor de viermi rotunzi (și anchilostomii), în plămâni sunt detectate focare inflamatorii instabile, uneori multiple; în același timp, în sânge apare o eozinofilie semnificativă.

Viermii rotunzi maturi din punct de vedere sexual sunt clar vizibili la fluoroscopia intestinelor persoanelor afectate. Această metodă, în ciuda complexității și a greutății sale, ar trebui utilizată ca metodă suplimentară pentru diagnosticarea ascariazei în cazurile cu o analiză scatologică negativă. Potrivit lui E. S. Geselevich, din 180 de pacienți cu ascariază identificați prin fluoroscopie, 54 nu aveau ouă de ascaris găsite în scaun (vezi).

7.7. Metode de determinare a viabilității ouălor și larvelor de helminți

Viabilitatea ouălor de helminți este determinată de aspectul lor, prin colorarea cu vopsele vitale, prin cultivarea în conditii optimeși stabilirea unei probe biologice.

7.7.1. Determinarea viabilității ouălor sau larvelor de helminți după aspect

Ouăle de helminți sunt microscopate mai întâi la mic, apoi la mare mărire. În ouăle de helminți deformate și moarte, coaja este ruptă sau îndoită spre interior, plasma este tulbure și slăbită. În ouăle segmentate, bilele de zdrobire (blastomerii) sunt inegale ca mărime, de formă neregulată și adesea mutate la un singur pol. Uneori există ouă anormale care, în ciuda deformărilor externe, se dezvoltă normal. La larvele vii de viermi rotunzi, granularitatea fină este prezentă numai în partea mijlocie a corpului; pe măsură ce acestea mor, se răspândește în tot corpul, apar vacuole mari hialine strălucitoare, așa-numitele „șiruri de perle”.

Pentru a determina viabilitatea ouălor mature de viermi rotunzi, viermi bici și oxiuri, ar trebui să apelați mișcări active larvelor prin încălzirea ușoară a preparatului (la o temperatură care nu depășește 37 °C). Este mai convenabil să se observe viabilitatea larvelor de viermi rotunzi și tricoceluși după ce acestea sunt izolate din coaja de ou prin apăsarea pe paharul preparatului cu un ac de disecție sau o pensetă.

La larvele invazive de viermi rotunzi, se observă adesea o teacă desprinzându-se la capătul capului, iar la larvele de viermi bici care s-au dezvoltat complet în ou, se găsește un stilt în acest loc la o mărire mare. La larvele de helminți moarte, indiferent de locația lor (în ou sau în afara acestuia), se observă degradarea corpului. în care structura interna Larva devine aglomerată sau granulară, iar corpul devine tulbure și opac. Vacuolele se găsesc în corp, iar rupturi se găsesc pe cuticulă.

Viabilitatea oncosferelor taeniide (bovine, tenia de porc etc.) este determinată de mișcarea embrionilor atunci când sunt expuși la enzimele digestive. Ouăle se pun pe sticla de ceas cu suc gastric de câine sau suc duodenal artificial. Compoziția acestuia din urmă: pancreatină - 0,5 g, bicarbonat de sodiu - 0,09 g, apă distilată - 5 ml. Paharele de ceas cu ouă se pun într-un termostat la 36 - 38 ° C timp de 4 ore. În acest caz, embrionii vii sunt eliberați de membranele lor. Cojile oncosferelor vii se dizolvă, de asemenea, în pepsină acidulată și în soluție alcalină tripsina după 6 - 8 ore într-un termostat la 38 ° C.

Dacă puneți ouă de teniide într-o soluție de 1% de sulfură de sodiu sau o soluție de 20% de hipoclorură de sodiu sau într-o soluție de 1% de apă cu clor la 36 - 38 ° C, embrionii maturi și vii sunt eliberați din membrane și nu schimbare pe parcursul unei zile. Oncosferele imature și moarte se micșorează sau se umflă și se măresc brusc, apoi se „dizolvă” în decurs de 10 minute până la 2 ore. De asemenea, embrionii vii de taeniid se mișcă activ într-un amestec de soluție de clorură de sodiu 1%, soluție de bicarbonat de sodiu 0,5% și bilă la 36 - 38 °C.

Viabilitatea Adolescaria fascioli colectată pe plante și alte obiecte ale corpurilor de apă este verificată prin examinarea lor pe o lamă de sticlă în soluție fiziologică la microscop cu o etapă de încălzire. Când larvele trematode sunt încălzite, ele încep să se miște.

Pentru a determina viabilitatea ouălor de tenie pitic, cea mai simplă metodă este a lui N.S. Ionina: la ouăle vii, perechea mediană de cârlige embrionare este fie paralelă cu cele laterale, fie acestea din urmă formează un unghi cu mediana de la bază mai mică de 45°. La ouăle moarte, perechile laterale formează un unghi cu perechea mediană la bază de mai mult de 45°, sau cârligele sunt împrăștiate aleatoriu (dispunerea lor pereche se pierde); Uneori, embrionul se micșorează și se formează granule. O metodă mai precisă se bazează pe apariția mișcărilor oncosferei în timpul unei schimbări bruște a temperaturii: de la 5 - 10 ° la 38 - 40 ° C.

Determinarea viabilității ouălor imature de nematod ar trebui studiată într-o cameră umedă (cube Petri), plasând ouă de viermi rotuși într-o soluție de formaldehidă 3% preparată într-o soluție izotonă de clorură de sodiu la o temperatură de 24 - 30 ° C, ouă de vierme într-un soluție de acid clorhidric 3% la o temperatură de 30 - 35 °C; ouă de oxiuri într-o soluție izotonă de clorură de sodiu la o temperatură de 37 °C. Vasele Petri trebuie deschise de 1 - 2 ori pe săptămână pentru o mai bună aerare, iar hârtia de filtru trebuie re-umedată apă curată.

Observațiile dezvoltării ouălor de helminți se efectuează de cel puțin 2 ori pe săptămână. Absența semnelor de dezvoltare în 2 - 3 luni indică non-viabilitatea acestora. Semnele dezvoltării ouălor de helminți sunt mai întâi etapele zdrobirii, împărțind conținutul oului în blastomere separate. În primele zile se dezvoltă până la 16 blastomeri, care trec în a doua etapă - morula etc.

Ouăle de anchilostoma se cultivă într-un cilindru de sticlă (50 cm înălțime și 7 cm în diametru) închis cu dop. Un amestec de volume egale nisip steril, cărbune și fecale cu ouă de vierme, diluate cu apă până la o consistență semi-lichidă, se toarnă cu grijă pe fundul cilindrului folosind un tub de sticlă. În 1 - 2 zile de așezare în întuneric la o temperatură de 25 - 30 ° C, larvele rabditiforme eclozează din ouă, iar după 5 - 7 zile devin filariforme: larvele se târăsc pe pereții cilindrului, unde se află. vizibil chiar și cu ochiul liber.

Ouăle de trematode care se dezvoltă în mod natural în apă, de exemplu opisthorchis, diphyllobothriidae, fasciolae și altele, sunt așezate pe un pahar de ceas, vas Petri sau alt vas și se toarnă un strat mic de apă obișnuită. La cultivarea ouălor de Fasciola, trebuie avut în vedere faptul că acestea se dezvoltă mai repede în întuneric, în timp ce în ouăle vii la o temperatură de 22 - 24 ° C, miracidiul se formează în 9 - 12 zile. La microscopia ouălor trematode în curs de dezvoltare, mișcările miracidiului sunt clar vizibile. Miracidium fasciola iese din coaja ouă numai în lumină.

Metoda Fulleborn. Larvele de anchilostoma și strongilid sunt cultivate pe agar într-o cutie Petri cu cărbune animal. După ținerea într-un termostat la o temperatură de 25 - 30 ° C timp de 5 - 6 ore, larvele se târăsc prin agar, lăsând în urmă o cale de bacterii.

metoda Harada și Mori. Adăugați 7 ml de apă distilată în eprubetele plasate într-un suport. Cu ajutorul unui bețișor de lemn, luați 0,5 g de fecale și faceți un frotiu pe hârtie de filtru (15 x 150 mm) la 5 cm de marginea stângă (această operațiune se realizează pe o foaie de hârtie pentru a proteja suprafața bancului de laborator). Apoi banda cu frotiu este introdusă în eprubetă, astfel încât capătul din stânga liber de frotiu să ajungă la fundul eprubetei. Acoperiți capătul superior cu o bucată de celofan și înfășurați-l strâns cu o bandă elastică. Pe eprubetă sunt scrise numărul și prenumele persoanei examinate. În această stare, tuburile sunt păstrate timp de 8 - 10 zile la o temperatură de 28 °C. Pentru a studia larvele, scoateți capacul din celofan și îndepărtați o bandă de hârtie de filtru cu penseta. Trebuie avut grijă atunci când faceți acest lucru, deoarece un număr mic de larve infecțioase se pot deplasa la capătul superior al hârtiei de filtru sau pe partea laterală a tubului și poate pătrunde sub suprafața celofanului.

Tuburile sunt plasate într-o baie de apă fierbinte la 50 °C timp de 15 minute, după care conținutul este agitat și turnat rapid într-un tub de 15 ml pentru a sedimenta larvele. După centrifugare, supernatantul este îndepărtat, iar sedimentul este transferat pe o lamă de sticlă, acoperit cu o lamă și examinat microscopic la mărire mică.

Pentru diagnosticul diferențial al larvelor filariforme, este necesar să se utilizeze datele din tabelul 3.

Tabelul 3

DIAGNOSTICUL DIFERENȚIAL AL ​​LARVELOR FILARIOIDE DE A. DUODENALE, N. AMERICANUS, S. STERCORALIS, TRICHOStrONGYLUS SP.

Larvele	Dimensiuni	Semne caracteristice
A. duodenale	Lungimea corpului aproximativ 660 µm, lungimea tecii - 720 nm	Striația calotei este mai puțin pronunțată, proeminența bucală este mai puțin vizibilă, capătul anterior al corpului (dar nu și capacul) este tocit, diametrul tubului intestinal este mai mic decât bulbul esofagian, capătul caudal este tocit.
N. americanus	Lungimea corpului aproximativ 590 microni, lungimea tecii - 660 nm	Calota este vizibil striată, în special în partea caudală a corpului, protuberanța bucală apare întunecată, capătul anterior al corpului (dar nu și capacul) este rotunjit ca un capăt îngust. ou de gaina, partea anterioară a tubului intestinal are același diametru ca și bulbul esofagian, capătul caudal este ascuțit
S. stercoralis	Lungimea corpului aproximativ 500 microni	Larva este fără teacă, esofagul are aproximativ jumătate din lungimea corpului, coada este tocită sau ramificată
Trichostrongylus sp.	Lungimea corpului aproximativ 750 µm	Lumenul intestinal nu este drept, ci în zig-zag, capătul cozii este rotunjit și în formă de nasture

7.7.2. Metode de colorare a ouălor și a larvelor de helminți

Țesuturile moarte în majoritatea cazurilor percep vopselele mai repede decât cele vii. Aceste caracteristici sunt folosite în helmintologie pentru a determina viabilitatea ouălor și larvelor de helminți. Cu toate acestea, în unele cazuri, unele vopsele sunt mai bine percepute de țesuturile vii decât de cele moarte.

Pentru a diferenția între ouăle și larvele vii și cele moarte, se folosesc următoarele vopsele și metode.

Albastrul de metilen leucobază este adesea folosit pentru a colora țesuturile vii și moarte. Celulă vie sau țesutul reduce albastrul de metilen în leucobază incoloră, țesutul mort nu are această capacitate, deci capătă culoare.

Criteriul pentru starea unui ou este colorarea embrionului, dar nu și coaja. Această abilitate este asociată cu condițiile în care oul moare. În cazurile în care membrana fibroasă dintr-un ou mort nu își pierde proprietățile semi-permeabile, nu va permite coloranților să treacă și, prin urmare, embrionul mort nu va fi pătat. Un embrion colorat indică întotdeauna moartea oului.

Pentru a colora ouăle de viermi rotunzi, puteți folosi albastru de metilen într-o soluție de acid lactic cu alcali caustic (0,05 g albastru de metilen, 0,5 g hidroxid de sodiu, 15 ml acid lactic). Ouăle vii nu percep culoarea; sunt pictate în Culoarea albastră embrioni de ouă moarte. Colorarea larvelor de viermi rotunzi cu o soluție de bază de vopsea albastru brillant cresyl la o concentrație de 1:10000 se efectuează după cum urmează: o picătură de lichid cu ouă de viermi rotuși și o picătură de soluție de vopsea de bază sunt aplicate pe o lamă de sticlă. Preparatul este acoperit cu o lamelă, care este presată strâns pe lamă în timp ce se bate ușor cu un ac de disecție. Numărul de larve care apar și gradul de colorare a acestora sunt observate la microscop; după care același medicament este din nou examinat după 2 - 3 ore. Numai larvele neformate care nu s-au pătat timp de 2 ore sunt considerate vii. Larvele moarte fie nu ies din ouă, fie devin colorate atunci când coaja se rupe (parțial sau complet).

La determinarea viabilității ouălor de viermi rotunzi aviari, este posibilă colorarea preparatelor cu 5% soluție alcoolică Yoda. Când este aplicat pe preparat, germenii ouălor moarte de Ascaridia apar în 1 - 3 secunde. sunt vopsite portocaliu.

Ouăle moarte de opistorhis și oncosferele de teniei de bovine sunt colorate cu o soluție de albastru de toluidină (1:1000), iar oncosferele de tenii de bovine moarte cu o soluție de albastru de cresil strălucitor (1:10000). În același timp, embrionii și cojile ouălor moarte și vii capătă culoare. Prin urmare, după colorare, ouăle și oncosferele sunt spălate apă curatăși apoi colorați-le cu safranină (diluată 1:10000 în alcool 10 °C). Alcoolul îndepărtează vopseaua de pe cochilii, iar safranina o înroșește. Ca rezultat, ouăle vii devin roșii; ouăle cu embrioni morți devin albastre, dar coaja rămâne roșie. Embrionii morți de oncosfere de tenia bovine sunt colorați rapid, în câteva minute, în roșu aprins sau roz cu safranină sau albastru cu albastru cresyl strălucitor la o diluție de 1:4000 sau cu indigo carmin la o diluție de 1:1000 - 1:2000 . Embrionii vii nu se schimba sub influenta acestor vopsele nici dupa 2 - 7 ore.

Pentru a determina viabilitatea ouălor de tenia pitici, se recomandă utilizarea următoarelor vopsele:

1. Albastru de creasil strălucitor (1:8000) - după 1 oră, oncosfera ouălor moarte devine deosebit de viu colorată, care iese în evidență puternic pe fundalul pal sau incolor al restului oului.

2. Safranină (1:8000 când este expus timp de 2 ore și 1:5000 pentru 3 - 5 ore).

3. Soluție 50% de acid pirogalic într-o diluție de 1:2 - atunci când este expus timp de 1 oră la o temperatură de 29 - 30 ° C (cu cât temperatura este mai mică, cu atât procesul de vopsire este mai lung).

7.7.3. Metodă luminiscentă pentru studierea ouălor și larvelor de helminți

Microscopia fluorescentă face posibilă diferența dintre obiectele vii și cele moarte fără a deteriora oul. Nu este folosit pentru fluorescență raze ultraviolete, și partea albastru-violet a luminii vizibile, cu un microscop convențional și lamele de sticlă; Un set special de filtre de culoare este adăugat la iluminatorul OI-18.

Ouăle vii și moarte de viermi rotunzi, oxiuri, tenii pitici, tenia bovine, tenii late și alți helminți fluoresc diferit. Acest fenomen se observă atât în ​​timpul luminiscenței primare fără utilizarea coloranților, cât și atunci când se colorează cu fluorocromi (acridină portocalie, corifosfină, primulină, aurolină, berlerina sulfat, tripaflavină, rivanol, acrină etc.).

Ouăle de viermi rotunzi necolorate, vii, nesegmentate strălucesc în verde strălucitor cu o nuanță gălbuie; în ouăle moarte coaja radiază lumina verde mult mai strălucitoare decât partea embrionară verde închis; În ouăle de viermi rotunzi cu o larvă, apare doar coaja, iar în ouăle moarte, atât coaja, cât și larva sunt galbene strălucitoare.

Ouăle vii nepigmentate și nesegmentate de oxiuri și tenii pitici emit o lumină galben-verzuie; coaja ouălor moarte luminesce intens pe fundalul unei mase embrionare de culoare verde închis.

Cu luminiscență secundară (atunci când este colorată cu portocaliu de acridină la o diluție de 1:10.000 și 1:50.000 de la 30 de minute la 2 ore), coaja nematodelor, trematodelor și cestodelor vii și morți luminesce diferit.

Cojile ouălor vii și moarte ale viermilor rotunzi, toxocara, oxiurii, teniei pitici, teniei de șobolan, teniei taurului și teniei sunt de culoare portocalie-roșu. Embrionii de ouă vii de viermi rotunzi, toxascari, tenii de șobolan, tenii late și oncosferelor de viermi teniei bovine au fluorescentă verde închis mac sau culoare gri-verde. Ouăle embrionare moarte ale acestor helminți emit o culoare roșu-portocaliu „arzătoare”. Larvele vii de oxiuri și toxocara (coji de ouă eliberate) emit o lumină de culoare gri-verde; atunci când mor, culoarea se schimbă de la capătul capului la un verde deschis „arzător”, apoi galben, portocaliu și în final portocaliu strălucitor.

Când sunt colorate cu fluorocromi - coryphosphylum, primulina, ouăle moarte de viermi rotunzi și tricocemii prezintă o strălucire de la galben-liliac la roșu-cupru. Ouăle viabile nu luminesc, ci sunt vopsite în verde închis.

Ouăle vii ale trematodelor (paragonimus și clonorchis) nu luminesc atunci când sunt colorate cu portocaliu de acridină, dar ouăle moarte produc o culoare verde-gălbuie.

Metoda luminiscenței poate fi folosită și pentru a determina viabilitatea larvelor de helminți. Astfel, larvele de strongilat și rhabditatus fluorocromate cu o soluție de portocală de acridină (1:2000) strălucesc: cele vii - verzi (cu nuanță), cele moarte - cu o lumină portocalie strălucitoare.

Miracidiile vii care ies din coajă emit o lumină slabă albăstruie cu o corolă galben deschis a cililor abia vizibilă, dar la 10 - 15 minute după moarte apar cu o lumină verde deschis „arzătoare” și apoi lumină portocalie-roșie.

7.7.4. Metoda probei biologice

De exemplu, pentru a determina viabilitatea ouălor de ascaride (viermi rotunzi de porc, viermi rotunzi umani, Toxocara, Toxascaris etc.) per animal (cobai, șoareci) aveți nevoie de cel puțin 100 - 300 de ouă cu larve dezvoltate. Ouăle de Ascaris într-o soluție izotonă de clorură de sodiu sunt pipetate prin gura unui șoarece sau cobai. După 6-7 zile, animalul este sacrificat, ficatul și plămânii acestuia sunt deschise și examinate separat pentru prezența larvelor de ascaridat. Pentru a face acest lucru, ficatul și plămânii sunt tăiați în bucăți mici cu foarfecele și examinați folosind metoda Berman sau Supryaga (secțiunea 6.1.2).

Dacă animalele au fost infectate cu ouă invazive vii, atunci la autopsie, larvele de ascarid migratoare sunt găsite în ficat și plămâni.

În caz de infecție, ouăle de Fasciola din fecalele animalelor de laborator pot fi detectate la iepuri după 2 luni, în porcușori de Guineea- după 50 de zile, la șoareci - după 35 - 40 de zile.

Pentru a obține un răspuns mai rapid, animalele de laborator sunt deschise după 20 - 30 de zile și ficatul este examinat pentru prezența fasciolilor tineri.

Pentru a determina viabilitatea ouălor de tenie pitic, se recomandă, de asemenea, hrănirea acestora la șoareci albi neinfectați anterior, urmată de deschiderea animalelor după 92-96 de ore și identificarea cisticercoizilor din vilozitățile intestinale sau cestodele din lumenul intestinal.

Pentru a determina viabilitatea ouălor de opistorhis se recomandă o metodă (German S.M., Baer S.A., 1984), bazată pe activarea fizico-chimică a glandei de ecloziune miracidium și stimularea activitate motorie larve, ceea ce duce la deschiderea capacului de ou și eliberarea activă de miracidiu în condiții experimentale.

Suspensia de ouă de opisthorchis în apă este prerăcită la 10 - 12 °C (toate operațiunile ulterioare se efectuează la temperatura camerei 19 - 20 °C). Se adaugă 1 picătură de suspensie care conține 100 - 150 de ouă într-un tub de centrifugă. Eprubeta se pune într-un suport timp de 5 - 10 minute. În acest timp, toate ouăle reușesc să se scufunde în fund. Apoi, excesul de apă este aspirat cu atenție cu o bandă de hârtie de filtru și se adaugă 2 picături dintr-un mediu special în eprubetă. Mediul este preparat în tampon Tris-HCI 0,005 M; se adaugă în tampon o soluție de etanol 12 - 13% și un colorant (fucsin, safranină, eozină, albastru de metilen etc.). Se agită eprubeta, se pipetează conținutul pe o lamă de sticlă și se lasă timp de 10 minute, agitând ușor. Apoi adăugați 2 picături din mediul specificat. Preparatul este gata pentru microscopie sub un microscop cu lumină convențional la mărire de 20x.

În acest timp, capacul larvelor viabile se deschide, iar miracidiul iese activ în mediul specificat. Datorită prezenței etanolului în el, acestea sunt imobilizate după 2 - 5 minute și apoi vopsite cu un colorant. Ele pot fi ușor detectate și numărate prin microscopie.