Analiza pentru sifilis ELISA - interpretarea analizei. Normă și abateri

În legătură cu dezvoltarea tehnologiilor celulare, biologie moleculară, genetică, fizică, chimie și o serie de alte discipline de înaltă tehnologie, noi metode de înaltă precizie și de înaltă tehnologie sunt introduse în practica de zi cu zi. Aceste tendințe interdisciplinare afectează atât domeniul cunoștințelor medicale, cât și domeniile conexe ale problemelor biologice și biochimice. În ultimii zece ani, o metodă de diagnostic de laborator clinic numită imunotest enzimatic a devenit larg răspândită și introdusă în practica de masă.

În general, tehnologiile de reacții enzimatice și radiologice imunologice au fost utilizate pe scară largă în tiparea celulelor, culturilor celulare și diferitelor țesuturi încă de la începutul anilor 80 ai secolului XX. Cu toate acestea, aceste metode au fost foarte laborioase, nu unificate, nestandardizate, ceea ce a împiedicat utilizarea lor în scopuri de diagnostic și tratament la scară de masă. Astfel de metode au fost folosite doar de laboratoare înguste, cu o mare intensitate de cunoștințe și foarte specializate.

Cu toate acestea, odată cu dezvoltarea tehnologiei, microtehnologiei și producerea diferitelor materiale biopolimerice, a devenit posibil să se producă truse de diagnostic imunosorbente legate de enzime gata făcute, care pot fi utilizate de laboratoarele instituțiilor medicale generale. ELISA este utilizat pe scară largă pentru a diagnostica toate tipurile de infecții (chlamydia, sifilis, citomegalovirus, toxoplasmoză, herpes etc.), atât acute, cât și cronice, precum și forme latente care apar fără simptome clinice.Această metodă este folosită și pentru controlul bolilor cronice. . Să încercăm să ne dăm seama ce fel de metodă este aceasta și ce principii stau la baza ei?

Componentele imunotestului enzimatic - reacție imună și reacție enzimatică

Imunotestul enzimatic, după cum sugerează și numele, constă din două componente diferite - o reacție imună și o reacție enzimatică. Reacția imună produce legarea de molecule biologice, elemente ale unei celule sau microorganism, pe care de fapt încearcă să le detecteze, iar reacția enzimatică vă permite să vedeți și să măsurați rezultatul reacției imunologice. Adică, reacția imună face parte dintr-o tehnică complexă care detectează efectiv microbul dorit. Iar reacția enzimatică este acea parte a unei tehnici complexe care vă permite să convertiți rezultatul reacției imune într-o formă vizibilă pentru ochi și accesibilă pentru măsurare folosind tehnici chimice de rutină. Pe baza acestei structuri a metodei imunologice enzimatice, vom analiza ambele părți separat.

Reacția imună, ce este? Ce este un anticorp sau un antigen?

Ce este un răspuns imun? Ce este un antigen?
În primul rând, să ne uităm la ce sunt reacțiile imune. Reacții imune– acestea sunt reacții specifice de legare a unui antigen la un anticorp cu formarea unui complex imun. Ce înseamnă? Pe suprafața fiecărei celule a oricărui organism există structuri speciale numite antigene. Antigenele în general sunt molecule care transportă informații despre o celulă (similar cu informațiile de pe ecusonul unei persoane, care indică datele de bază ale acelei persoane).

Antigenele individuale și ale speciilor – ce sunt acestea? De ce sunt necesare aceste antigene?

Disponibil antigene individuale, adică inerent numai acestui organism particular. Acești antigeni individuali sunt diferiți pentru toți oamenii; există unii care sunt similari între ei, dar totuși diferiți. Nu există două copii identice ale antigenelor individuale în natură!

Al doilea tip principal de antigen este antigene ale speciilor, adică inerente oricărui tip specific de ființe vii. De exemplu, oamenii au propriul antigen de specie, comun tuturor oamenilor, șoarecii au propriul antigen de specie de șoarece etc. Pe suprafața fiecărei celule este în mod necesar prezent un antigen specific și individual.

Antigenul speciei este folosit de celulele sistemului imunitar pentru a recunoaște „prietenul sau dușmanul”.

Cum are loc recunoașterea antigenului?

Celula imunitară contactează celula suspectă și face o identificare pe baza antigenului individual. În memoria celulei imune, este „înregistrat” cum arată „antigenul său”. Astfel, dacă antigenul unei celule suspecte se potrivește cu descrierea „auto-antigen”, atunci această celulă proprie a corpului nu reprezintă un pericol. Apoi, celula imunitară „se dezleagă” și pleacă. Și dacă antigenul nu se potrivește cu descrierea „sinelui”, atunci celula imunitară identifică această celulă ca fiind „străină” și, prin urmare, potențial periculoasă pentru întregul organism. În acest caz, celula imunitară nu „se slăbește”, ci începe să distrugă obiectul periculos. Precizia unei astfel de recunoașteri imunologice este uimitoare - 99,97%. Practic nu există greșeli!

Ce este un anticorp, complex imun?
Ce este un anticorp?

Un anticorp este o moleculă specială situată pe suprafața unei celule imunitare. Este anticorpul care se leagă de antigenele celulei suspecte. Apoi, anticorpul transmite informații în interiorul celulei, unde are loc recunoașterea, și primește un semnal de întoarcere de două tipuri, „sine” sau „străin”. Când primește un semnal „auto”, anticorpul rupe legătura cu antigenul și eliberează celula.

Ce este un complex imunitar?
Când semnalul este „străin”, situația se desfășoară diferit. Anticorpul nu rupe legătura cu antigenul, ci, dimpotrivă, prin trimiterea de semnale specifice, provoacă „întărire”. Din punct de vedere biologic, aceasta înseamnă că alți anticorpi localizați într-o altă parte a celulei încep să se deplaseze către locul de unde vine semnalul de pericol și, de asemenea, formează o legătură între ei și antigenul capturat. În cele din urmă, antigenul se dovedește a fi înconjurat pe toate părțile și ferm atașat.Acest complex antigen + anticorp se numește complex imun. Din acest moment începe utilizarea antigenului. Dar acum nu ne interesează detaliile procesului de neutralizare a antigenului.

Tipuri de anticorpi (IgA, IgM, IgG, IgD, IgE)
Anticorpii sunt structuri proteice care, în consecință, au o denumire chimică, care este folosită ca sinonim pentru cuvântul anticorp. Asa de, anticorpi = imunoglobuline.

Există 5 tipuri de imunoglobuline (Ig), care se leagă de diferite tipuri de antigene în diferite locuri ale corpului uman (de exemplu, pe piele, pe membranele mucoase, în sânge etc.). Adică, anticorpii au o diviziune a muncii. Aceste imunoglobuline sunt numite prin literele alfabetului latin - A, M, G, D, E și sunt desemnate după cum urmează - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

În diagnostic, se utilizează un singur tip de anticorp, care este cel mai specific pentru microbul detectat. Adică, legarea acestui tip de anticorp la antigenul detectat are loc întotdeauna. Cele mai frecvent utilizate sunt IgG și IgM.

Acest principiu al reacției imune (se determină acuratețea și specificitatea unică a recunoașterii obiectului biologic) este cel care stă la baza imunotestului enzimatic Datorită preciziei ridicate a anticorpilor în recunoașterea antigenelor, acuratețea întregii metode de imunotest enzimatic este, de asemenea, cel mai inalt.

Reacție enzimatică

Care reacție este enzimatică? Ce sunt afinitatea, substratul și produsul unei reacții?
Să trecem la luarea în considerare a reacției enzimatice în activitatea metodei imunotestare enzimatică.

Ce este o reacție enzimatică?

O reacție enzimatică este o reacție chimică în care o substanță este transformată în alta prin acțiunea unei enzime. Substanța asupra căreia acționează enzima se numește substrat. Și substanța care se obține ca urmare a acțiunii unei enzime se numește produs de reacție. Mai mult, particularitatea reacției enzimatice este de așa natură încât o anumită enzimă acționează numai pe un anumit substrat. Această proprietate a unei enzime de a-și recunoaște substratul se numește afinitate.

Astfel, fiecare enzimă realizează o singură reacție specifică acesteia. Există o mulțime de enzime cunoscute în lumea biologică, precum și reacții enzimatice. În diagnosticul imunosorbent legat de enzime, sunt utilizate doar câteva reacții enzimatice - nu mai mult de 10. În același timp, au fost alese astfel de reacții enzimatice, al căror produs este substanțele colorate. De ce ar trebui colorați produsele unei reacții enzimatice? Deoarece pentru a calcula concentrația unei substanțe dintr-o soluție colorată, există o metodă chimică simplă - colorimetrie.

Metoda colorimetriei - esență și principiu

Colorimetrie folosește măsurarea densității de culoare a unei soluții, iar concentrația substanței este calculată din densitatea culorii.În acest caz, un dispozitiv special - un colorimetru măsoară densitatea de culoare a soluției. În colorimetrie, există două opțiuni posibile pentru dependența densității culorii de concentrația unei substanțe - o dependență direct proporțională sau o dependență invers proporțională. Cu o relație direct proporțională, cu cât concentrația substanței este mai mare, cu atât densitatea de culoare a soluției este mai intensă. Cu o relație invers proporțională, cu cât concentrația substanței este mai mare, cu atât densitatea de culoare a soluției este mai mică. Din punct de vedere tehnic, acest lucru se întâmplă astfel: se iau mai multe soluții cu o concentrație cunoscută a unei substanțe, se măsoară densitatea acestor soluții și se construiește un grafic al dependenței concentrației de densitatea culorii ( diagrama de calibrare).

În continuare, se măsoară densitatea de culoare a soluției, a cărei concentrație este determinată, iar din graficul de calibrare se găsește valoarea concentrației corespunzătoare nivelului densității de culoare măsurată a soluției.În colorimetrele automate moderne, calibrarea este efectuată o singură dată, apoi dispozitivul în sine construiește o curbă de calibrare, care rămâne în memoria dispozitivului, iar măsurarea are loc automat.

Următoarele enzime sunt cel mai des utilizate în imunotestul enzimatic: peroxidază, fosfatază alcalină, avidină.

Cum sunt combinate reacțiile imunologice și enzimatice într-un imunotest enzimatic? Acum vom trece la considerarea imunotestului enzimatic în sine. Ce etape include și ce se întâmplă în timpul acestor reacții? Imunotestul enzimatic poate fi directe și indirecte.

Imunotestul enzimatic direct - etape de implementare

Într-un imunotest enzimatic direct, sunt utilizați anticorpi la antigenul detectat, combinați cu o etichetă specifică. Această etichetă specifică este substratul reacției enzimatice.

Atașarea antigenelor la suprafața godeului și combinarea antigenului cu anticorpul

Cum se efectuează imunotestul enzimatic direct? Materialul biologic este prelevat (sânge, răzuire de pe mucoase, frotiuri) și plasat în găuri speciale. Materialul biologic este lăsat în godeuri timp de 15-30 de minute, astfel încât antigenele să poată adera la suprafața godeurilor. Apoi, anticorpii la antigenul detectat sunt adăugați în aceste godeuri. Aceasta înseamnă că la detectarea antigenelor, de exemplu, sifilisul, se adaugă anticorpi împotriva antigenelor sifilisului. Acești anticorpi sunt obținuți industrial, iar laboratoarele cumpără truse gata făcute.Acest amestec de material de testat și anticorpi este lăsat ceva timp (de la 30 de minute la 4-5 ore) pentru ca anticorpii să găsească și să contacteze antigenul „lor”. Cu cât eșantionul biologic de antigeni este mai mult, cu atât mai mulți anticorpi se vor lega de ei.

Eliminarea anticorpilor „în plus”.

După cum s-a indicat, anticorpii sunt, de asemenea, asociați cu o etichetă specifică. Deoarece anticorpii sunt adăugați în exces, nu toți se vor lega de antigene, iar dacă nu există antigen în probă, atunci, în consecință, nici un singur anticorp nu se va lega de antigen. antigenul dorit. Pentru a elimina anticorpii „în plus”, conținutul din godeuri este pur și simplu turnat. Ca urmare a acestui fapt, toți anticorpii „extra” sunt îndepărtați, iar cei care s-au legat de antigene rămân, deoarece antigenele sunt „lipite” de suprafața godeurilor. Sondele sunt clătite de mai multe ori cu o soluție specială, care vă permite să spălați toți anticorpii „în plus”.

În continuare, începe a doua etapă - reacția enzimatică. O soluție cu enzimă se adaugă în godeurile spălate și se lasă timp de 30-60 de minute. Această enzimă are o afinitate pentru substanța (marca specifică) de care sunt legați anticorpii. Enzima efectuează o reacție care transformă această etichetă specifică (substrat) într-o substanță (produs) colorată. Apoi, folosind colorimetrie, se găsește concentrația acestei substanțe colorate. Deoarece această etichetă specifică este asociată cu anticorpi, înseamnă că concentrația produsului de reacție colorat este egală cu concentrația de anticorpi. Și concentrația de anticorpi este egală cu concentrația de antigene. Astfel, în urma analizei, primim un răspuns cu privire la concentrația microbului sau hormonului detectat.

Exact așa funcționează imunotestul enzimatic direct. Cu toate acestea, astăzi imunotestul enzimatic indirect este mai des utilizat, deoarece sensibilitatea și acuratețea indirectă este mai mare decât cea directă. Deci, să trecem la imunotestul enzimatic indirect.

Imunotestul enzimatic indirect - etape de implementare

Există două etape în imunotestul enzimatic indirect. În timpul primei etape, sunt utilizați anticorpi nemarcați la antigenii detectați, iar în a doua etapă, anticorpi marcați sunt utilizați pentru primii anticorpi nemarcați. Adică, nu este legarea directă a unui anticorp la un antigen, ci un control dublu: legarea anticorpilor la un antigen, urmată de legarea anticorpilor secunde la complexul anticorp + antigen. De regulă, anticorpii pentru prima etapă sunt șoarecele, iar pentru a doua - capră.

Fixarea antigenelor pe suprafața godeului și legarea antigenului la un anticorp nemarcat
La fel ca în cazul imunotestului enzimatic direct, se colectează material biologic - sânge, răzuire, frotiuri. Materialul biologic studiat este introdus în godeuri și lăsat timp de 15-30 minute pentru ca antigenele să adere la suprafața godeurilor. Apoi anticorpii nemarcați la antigeni sunt adăugați în godeuri și lăsați pentru o perioadă de timp (1-5 ore), astfel încât anticorpii să se lege de antigenele „lor” și să formeze un complex imun ( Primul pas). După aceea, anticorpii „extra” nelegați sunt îndepărtați prin turnarea conținutului godeurilor. Se spală cu o soluție specială pentru a elimina complet toți anticorpii nelegați.

Legarea anticorpului marcat la complexul antigen + anticorp nemarcat
După care iau al doilea anticorpi marcați, îi adaugă în godeuri și lasă din nou timp - 15-30 de minute ( a doua fază). În acest timp, anticorpii marcați se leagă de primii - cei nemarcați - și formează un complex - anticorp + anticorp + antigen. Cu toate acestea, atât anticorpii marcați, cât și cei nemarcați sunt adăugați în godeuri în exces. Prin urmare, este necesar să se elimine din nou anticorpii „extra” deja marcați care nu s-au legat de anticorpi nemarcați. Pentru a face acest lucru, repetați procedura de turnare a conținutului godeurilor și spălare cu o soluție specială.

Reacție enzimatică - formarea unui compus colorat
După aceea, se adaugă o enzimă care realizează reacția de transformare a „etichetei” într-o substanță colorată. Culoarea se dezvoltă în 5-30 de minute. Apoi se efectuează colorimetria și se calculează concentrația substanței colorate. Deoarece concentrația substanței colorate este egală cu concentrația de anticorpi marcați, iar concentrația de anticorpi marcați este egală cu concentrația de anticorpi nemarcați, care, la rândul său, este egală cu concentrația de antigen. Astfel, obținem concentrația antigenului detectat.
Acest dublu control sub forma utilizării a două tipuri de anticorpi a făcut posibilă creșterea sensibilității și specificității metodei de imunotest enzimatic. În ciuda prelungirii timpului de analiză și a includerii unor etape suplimentare, aceste pierderi sunt compensate de acuratețea rezultatului. De aceea, în prezent, marea majoritate a metodelor de imunotestare enzimatică sunt imunotestele enzimatice indirecte.

Ce boli sunt detectate prin imunotestul enzimatic?

Să trecem la considerarea ce boli și ce substanțe biologic active sunt detectate prin imunotestul enzimatic. Substanțele detectate prin imunotestul enzimatic sunt prezentate în tabel.

Hormoni și markeri ai bolii tiroidiene	peroxidaza tiroidiană (TPO)
	Tiroglobulina (TG)
	Hormonul de stimulare a tiroidei (TSH)
	Tiroxina (T4)
	Triiodotironina (T3)
	Tiroxină liberă (T4)
	Triiodotironina liberă (T3)
Diagnosticul funcției de reproducere	Hormonul luteinizant (LH)
	Hormonul foliculostimulant (FSH)
	Prolactina
	Progesteron
	Estradiol
	Testosteron
	cortizolul
	Globulina care leagă steroizii (SBG)
	Alfafetoproteina (AFP)
Markeri tumorali	Gonadotropină corionică (CG)
	Antigenul specific prostatic (PSA)
	SA – 125
	SA – 19.9
	CYFRA-21-1
	M – 12 (SA – 15,3)
	MUC – 1 (M – 22)
	MUC1 (M – 20)
	Alveomucina
	K – lanț
	L – lanț
	Factorul de necroză tumorală (TNFα)
	γ – interferon
	Antigenul carcinoembrionar (CEA)
Diagnosticul bolilor infecțioase

ELISA este un test de laborator modern care caută anticorpi specifici în sânge (sau antigene) pentru anumite boli pentru a identifica nu numai etiologia, ci și stadiul bolii.

1. căutarea de anticorpi specifici oricărei boli infecțioase;
2. căutarea antigenelor oricăror boli infecțioase;
3. studiul stării hormonale a pacientului;
4. screening pentru prezența bolilor autoimune.

Ca orice metodă de diagnosticare de laborator, ELISA are avantajele și dezavantajele sale. Avantajele metodei includ:

1. specificitatea și sensibilitatea ridicată a metodei (mai mult de 90%);
2. capacitatea de a determina boala și de a urmări dinamica procesului, adică de a compara numărul de anticorpi în diferite perioade de timp;
3. accesibilitatea și viteza acestei cercetări;
4. metodă neinvazivă de colectare a materialului, nu cercetare;

Dezavantajul metodei este faptul că în timpul analizei este posibil să se identifice nu agentul cauzal al bolii în sine, ci doar răspunsul imun la aceasta (anticorpi).

Esența metodei ELISA

Exista mai multe tipuri de ELISA: directa, indirecta, metoda blocante, competitiva. Cu toate acestea, în practică, testul imunosorbent heterogen legat de enzime, sau ELISA, este cel mai des utilizat.

Baza imunotestului enzimatic este reacția imună a unui antigen și a unui anticorp cu formarea unui complex imun, care are ca rezultat o modificare a activității enzimatice a semnelor specifice de pe suprafața anticorpilor.

În esență, acest proces poate fi împărțit în mai multe etape:

1. pe suprafața godeurilor tabletei sistemului de testare există un antigen purificat al unui agent patogen specific. Când se adaugă ser din sânge animal, are loc o reacție specifică între acest antigen și anticorpul dorit;
2. În continuare, se adaugă în godeu un cromogen special (conjugat marcat cu peroxidază). Are loc o reacție enzimatică, care are ca rezultat formarea unei substanțe colorate în godeul plăcii. Intensitatea culorii sale depinde de cantitatea de imunoglobuline (anticorpi) conținute în serul animalului;
3. Apoi rezultatul este evaluat. Folosind un spectrofotometru multicanal, densitatea optică a materialului de testat este comparată cu densitatea optică a probelor de control, iar rezultatele sunt procesate matematic. Cantitatea de anticorpi la un pacient depinde direct de înălțimea densității optice a unui godeu dat.

Trebuie reținut: pentru fiecare sistem de testare, sunt dezvoltați indicatori individuali pentru a înregistra rezultatele, indicatorii de normalitate și patologie („valori de referință”). Acest lucru trebuie luat în considerare atunci când se evaluează rezultatele fiecărui studiu specific.

Este incorect interpretarea rezultatelor unui laborator pe baza „valorilor de referință” ale altui laborator. De asemenea, este incorect să comparăm rezultatele diferitelor laboratoare între ele.

Atunci când se evaluează rezultatele pentru infecții specifice, clasa de anticorpi detectați și cantitatea acestora sunt importante. Nu numai problema etiologiei infecției depinde de aceasta, ci și stadiul așteptat al bolii (acut, cronic), precum și prezența unei infecții active (acută sau exacerbarea cronică) în momentul examinării.

Care este intervalul de timp aproximativ pentru apariția anticorpilor?

Cei mai timpurii anticorpi sunt IgM. Ele pot fi detectate la 1-3 săptămâni după posibila infecție, care caracterizează faza acută a procesului infecțios. A doua situație pentru apariția anticorpilor IgM este o exacerbare a unui proces cronic. IgM circulă în medie aproximativ 3 luni, apoi cantitatea lor dispare treptat. Cu toate acestea, la unii pacienți, urme de IgM pot fi detectate în decurs de 1-2 ani de la infecție.

Din a 4-a săptămână după infectare, încep să apară anticorpi IgG. La majoritatea infecțiilor, titrul lor crește treptat cu un maxim în momente diferite (în medie după 1,5-2 luni), apoi titrul rămâne la un nivel scăzut și indică imunitatea. În unele boli, nivelurile de IgG nu sunt ridicate.

Opțiuni de detectare a anticorpilor

• Detectarea izolată a anticorpilor IgM sugerează prezența unei infecții primare.
• Detectarea simultană a IgM și IgG în sânge este tipică pentru infecția primară în ultimele 2-3 luni, precum și în timpul exacerbării unei boli cronice.
• Detectarea IgG izolate poate indica atât imunitatea la boală, cât și infecția cronică. În a doua situație, atât cantitatea de anticorpi (titru) cât și modificarea acestui titru în timp sunt importante. De obicei, studiile sunt efectuate la intervale de 2-4-6 săptămâni.

Analiza ELISA este o tehnică modernă de diagnostic de laborator pentru un număr semnificativ de boli diferite. Abrevierea înseamnă imunotest enzimatic. Esența tehnicii este de a determina titrul (activitatea) anticorpilor.

Tehnica ELISA câștigă în prezent o popularitate semnificativă. Este utilizat în medicina clinică pentru diagnosticarea diferitelor patologii, precum și în studii experimentale care necesită determinarea precisă a concentrației diferiților compuși în mediile studiate.

Principiul metodei ELISA

Imunotestul enzimatic este o reacție imunologică. Se bazează pe adăugarea de anticorpi specifici
sau antigene în mediul de testare (cel mai adesea sângele testat), urmată de determinarea enzimatică a concentrației complexelor antigen-anticorp rezultate. Pe baza concentrației complexului, se poate aprecia nivelul sau activitatea compusului care este determinat în mediul de testare.

Determinarea concentrației complexelor antigen-anticorp se efectuează de obicei folosind echipamente speciale folosind metoda cromatografică.

Indicatii de utilizare

Analiza ELISA se efectuează pentru diverse indicații, principalele în medicina clinică sunt:

• Diagnosticul patologiei infecțioase cu transmitere predominant sexuală (ITS), care include chlamydia, micoplasmoza, ureaplasmoza, trichomonaza, identificând în același timp anticorpii specifici pentru agentul infecțios.
• Diagnosticul bolilor infecțioase de diferite localizări pentru a determina stadiul procesului patologic, în primul rând în procesul de diagnosticare a hepatitei virale parenterale și HIV.
• Determinarea concentrațiilor hormonale pentru diagnosticul diferitelor patologii ale organelor sistemului endocrin (glandele endocrine).
• Determinarea diverșilor compuși pentru a diagnostica cauza intoxicației organismului în caz de otrăvire, mușcături de insecte sau șarpe.

Pentru aceste indicații medicale se efectuează un test de sânge ELISA. Această tehnică este, de asemenea, utilizată în mod activ în medicina experimentală în timpul diferitelor studii clinice în timpul dezvoltării de noi medicamente și vaccinuri pentru imunoprofilaxie.

Cum se desfășoară cercetarea

Un test de sânge folosind ELISA este efectuat într-un laborator specializat. Pentru a-l realiza, se prelevează mai întâi sânge venos, de obicei din vena cubitală într-un volum de 5-10 ml, care este apoi trimis la laborator. În medie, rezultatul testului poate fi obținut chiar a doua zi, ceea ce reprezintă un punct important pentru prescrierea promptă a tratamentului după diagnosticarea bolii.

Cum să vă pregătiți pentru ELISA

Pentru a obține rezultate fiabile ale cercetării folosind imunotestul enzimatic, ar trebui să urmați câteva recomandări pregătitoare simple, care includ:

• Cu o zi înainte de test, ar trebui să nu mai consumați alimente grase (carne, carne afumată) și alcool.
• Materialul pentru studiu trebuie depus dimineața pe stomacul gol.
• În ziua studiului, este indicat să evitați stresul fizic și psiho-emoțional.
• Înainte de studiu, ar trebui să încercați să nu fumați.

Majoritatea rezultatelor fals pozitive ale unui test imunosorbent legat de enzime se datorează implementării necorespunzătoare a recomandărilor pregătitoare. Acest lucru este asociat în cele mai multe cazuri cu consumul de alimente grase, ceea ce duce la o creștere a concentrației de trigliceride (grăsimi) în plasma sanguină, care reduc specificitatea ELISA.

Decodificarea rezultatelor

Un test de sânge pentru anticorpi folosind ELISA are 2 modificări - determinare calitativă și cantitativă. La
La o determinare calitativă a anticorpilor, rezultatul poate fi pozitiv (se detectează anticorpi, indicând posibila prezență a unui proces patologic cauzat de un agent infecțios) sau negativ (nu există anticorpi, indicând absența unui proces infecțios).

Absența anticorpilor nu este întotdeauna un indicator 100% al absenței unui proces infecțios. Acest lucru se datorează faptului că, după infecție, anticorpii nu se formează imediat, ci pe o anumită perioadă de timp (cel puțin aproximativ 2 săptămâni). Prin urmare, pentru a confirma absența infecției, ELISA poate fi repetat după ceva timp.

ELISA cantitativ este utilizat pentru a determina titrul (activitatea) anticorpilor, precum și clasele acestora. În cele mai multe cazuri, pentru a diagnostica bolile infecțioase, se determină anticorpi din clasele IgG (imunoglobulină G) și IgM (imunoglobulină M), care se formează în organism la diferite intervale după infectare, astfel încât descifrarea rezultatului testului poate avea mai multe semnificații:

• O creștere a activității IgM și absența IgG este dovada unei infecții recente și a unui curs acut al procesului infecțios.
• O creștere a activității IgM și IgG este o exacerbare a procesului infecțios în timpul cursului său cronic și a infecției de lungă durată.
• Activitatea ridicată a IgG și absența IgM este un curs cronic al procesului infecțios pe fondul unei infecții de lungă durată, după care au trecut mai mult de șase luni (timpul necesar pentru formarea anticorpilor din clasa IgG).

În general, descifrarea rezultatelor ELISA pentru fiecare proces infecțios are anumite caracteristici. O determinare mai precisă a prezenței unei boli infecțioase, precum și a stadiului cursului acesteia, este efectuată de un medic.

ELISA este în prezent metoda de alegere pentru diagnosticarea majorității bolilor infecțioase. Pe baza rezultatelor unui astfel de studiu, medicul are posibilitatea de a stabili un diagnostic precis și de a determina stadiul procesului patologic pentru a prescrie un tratament adecvat și eficient ulterior.

Tehnicile moderne de diagnostic fac posibilă identificarea unei anumite boli într-un laborator folosind teste speciale. Unul dintre acestea este un test de sânge imunosorbant legat de enzime, care poate confirma un diagnostic pus anterior.

Testul imunoenzimatic ELISA este una dintre cele mai eficiente și moderne metode de identificare a tulburărilor asociate dezechilibrelor imunitare și hormonale, precum și a proceselor oncologice. În timpul testului, anticorpii produși atunci când există o infecție în organism pot fi detectați în sânge. Ținând cont de această nuanță, boala poate fi detectată chiar și în stadiul incipient al dezvoltării sale.

Care este baza tehnicii?

Rezultatele analizei ELISA se bazează pe obținerea de reacții chimice la enzime, care servesc drept mărci de identificare speciale pentru recunoașterea anticorpilor. În consecință, în timpul reacțiilor imunochimice, anticorpii încep să interacționeze cu anumiți antigeni. Toate acestea dau motive pentru a afirma că rezultatele false la donarea de sânge la ELISA sunt minime.

Studiul vă permite să determinați numărul de celule imunitare, proprietățile acestora, precum și prezența anticorpilor necesari

Rezultatul este considerat pozitiv atunci când este detectată colorarea soluției. Culoarea indică faptul că antigenele interacționează cu anticorpul. Dacă nu se întâmplă așa ceva, rezultatul este negativ.

Un test imunosorbent legat de enzime (ELISA) este efectuat pentru o evaluare cuprinzătoare a funcțiilor de protecție ale organismului. În timpul studiului, se determină numărul și proprietățile celulelor imune și prezența anticorpilor necesari. Un test de sânge ELISA este efectuat pentru a diagnostica boli infecțioase, hematologice, autoimune, imunodeficiențe primare și secundare. Să luăm în considerare ce este un test de sânge ELISA și ce indicații există pentru realizarea acestui studiu.

Ce este

Un test de sânge folosind metoda ELISA este o metodă de laborator prin care se determină anticorpii sau antigenii într-o probă de sânge. Acest studiu este utilizat pentru a determina nivelul de imunoglobuline, complexe imunologice și hormoni.

Indicații pentru analiză

Există următoarele indicații pentru prescrierea unui test de sânge ELISA:

• diagnosticul infecțiilor cu transmitere sexuală - ureaplasmă, micoplasmă, chlamydia, trichomonas, sifilis;
• diagnosticul bolilor virale - citomegalovirus, herpes, hepatită, virus Epstein-Barr;
• determinarea nivelului hormonal;
• diagnosticul bolilor oncologice;
• determinarea imunodeficienței;
• diagnosticarea alergiilor;
• examinare preoperatorie cuprinzătoare înainte de transplantul de organe;
• evaluarea eficacității terapiei.

Principiul metodei

Principiul de funcționare al metodei imunotestare enzimatică se bazează pe determinarea proteinelor specifice anticorpilor din sânge - imunoglobuline. Imunoglobulinele sunt produse de sistemul imunitar uman atunci când antigenele (microorganisme străine) intră în organism. Astfel de molecule imune se leagă de o varietate de agenți patogeni infecțioși din organism și îi neutralizează.

Imunoglobulinele au o caracteristică importantă – specificitatea. Datorită acestui fapt, se pot lega de un antigen specific, formând un complex antigen-anticorp. În timpul unui test de sânge ELISA, acest complex este determinat calitativ și cantitativ.

Există cinci clase de imunoglobuline. Dar de obicei sunt definite trei clase - imunoglobulinele A, M, G. Acești anticorpi se acumulează în organism în momente diferite din momentul infecției.

• Imunoglobuline clasa M (IgM) apar în sânge foarte întâi în a cincea zi din momentul infecției. Ele rămân în organism timp de 5-6 săptămâni, apoi dispar din fluxul sanguin. Anticorpii IgM indică o perioadă acută a bolii sau o exacerbare a bolii în cursul ei cronic.
• La aproximativ 3-4 săptămâni după infecție, imunoglobulinele apar în sânge clasa G (IgG). Ele pot exista în sângele uman timp de câteva luni sau chiar ani. Conform interpretării testului de sânge ELISA, dacă în două probe de sânge prelevate succesiv după două săptămâni, cantitatea de imunoglobuline IgG este crescută, se vorbește despre o infecție curentă sau reinfecție - reinfecție cu aceeași infecție.
• Imunoglobuline clasa A (IgA) poate fi detectat prin această metodă de cercetare la 2-4 săptămâni după infectarea sau exacerbarea unei boli infecțioase. Dintre acestea, doar 20% circulă în sânge, restul sunt în secreția mucoaselor. Anticorpii IgA dispar din sânge la 2-8 săptămâni după distrugerea agenților infecțioși. Dispariția acestor imunoglobuline înseamnă un remediu pentru infecție. Dacă, după terminarea bolii, se determină prezența anticorpilor IgA în sânge, înseamnă că boala a intrat în stadiul cronic.

Pregătirea pentru analiză

Pentru a efectua un test de sânge folosind metoda ELISA, cel mai des este folosit sânge uman. Dar puteți examina și conținutul corpului vitros, lichidul cefalorahidian și lichidul amniotic.

O probă de sânge pentru testare este prelevată din vena antecubitală a pacientului. Se recomandă donarea sângelui pe stomacul gol (trebuie să fi trecut cel puțin 12 ore de la ultima masă). Este necesar să informați medicul dacă pacientul ia medicamente, deoarece unele dintre ele pot modifica rezultatul testului. Fiabilitatea rezultatelor studiului este afectată de consumul de alcool și droguri.

Decodare

Forma rezultatului acestui test indică rezultatul pozitiv (+) sau negativ (-) al determinării fiecărei clase de imunoglobuline.

Să luăm în considerare interpretarea unei posibile interpretări a testului de sânge ELISA.

• Un rezultat negativ pentru IgM, IgG, IgA înseamnă lipsa imunitații la infecție.
• Un rezultat negativ pentru IgM, IgA și un rezultat pozitiv pentru IgG este imunitatea post-infecțioasă sau post-vaccinare.
• Rezultat negativ sau pozitiv al IgG, IgA și rezultat pozitiv al IgM – infecție acută.
• Un rezultat pozitiv pentru IgM, IgG, IgA este o exacerbare a unei boli infecțioase cronice.
• Rezultat IgM negativ și rezultat IgG negativ sau pozitiv, IgA – infecție cronică.
• Rezultatul IgM negativ și IgG, IgA nu sunt detectate - recuperare.

Avantajele metodei

Testul de sânge ELISA are multe avantaje. Cele principale pot fi identificate:

• precizie relativ mare (sensibilitate);
• posibilitatea diagnosticării precoce;
• capacitatea de a monitoriza dinamica procesului infecțios;
• nivel ridicat de unificare, care permite examene în masă;
• o perioadă scurtă de timp necesară pentru a obține rezultatul analizei;
• ușurință în utilizare;
• automatizarea tuturor etapelor de analiză;
• cost relativ mic.

Defecte

Dezavantajul metodei ELISA este că uneori dă rezultate fals negative sau fals pozitive. Pe lângă erorile tehnice din timpul studiului, cauza rezultatelor false poate fi factorul reumatoid al pacientului, prezența unor boli cronice (în care se produc anticorpi), tulburările metabolice sau utilizarea anumitor medicamente.

• ascariaza;
• trichineloză - analiza se efectuează de mai multe ori, nivelul maxim de anticorpi este determinat la 4-12 săptămâni după infecție;
• cisticercoză;
• taeniasis;
• fascioliaza – anticorpii sunt detectați în stadiul acut al bolii;
• opistorhia – diagnosticul diferențial se realizează între formele cronice și acute ale bolii;
• giardioza;
• leishmanioză viscerală și cutanată;
• amibiaza;
• toxoplasmoza.

4.2 4,20 din 5 (5 voturi)