Микроскопско изследване на изпражненията. Интравитална диагностика на хелминтози

Директни методи: откриване на самите хелминти, техните фрагменти, яйца, ларви в изпражненията, урината, дуоденалния секрет, храчките, назалната и вагиналната слуз, съдържанието на поднокътните пространства, биопсични парчета тъкан.

При диагностицирането е невъзможно да се идентифицират по един метод яйцата или ларвите на всички видове хелминти, живеещи в храносмилателната системачовек. По този начин, когато се използва методът на флотация, яйцата на трематодите и в някои случаи неоплодените яйца на кръглите червеи не изплуват в повърхностния филм (поради високото специфично тегло). В изпражненията е много рядко да се намерят яйца от острици, тениидни онкосфери, които се откриват чрез специални изследователски методи: изстъргване от перианални гънки за острици и тенииди, методи на утаяване за трематоди (яйца на описторх и др.). Следователно, за целенасочено изследване на пациента за хелминтиаза, лекарят в препратката трябва да посочи на кои хелминти трябва да се обърне основно внимание (диагноза), което ще позволи на лаборанта да избере подходящата техника за идентифициране на този тип хелминти. Изпражнения взети от различни местаизпражненията в количество най-малко 50 грама (чаена лъжичка) в чиста стъклена чиния трябва да бъдат изпратени в лабораторията не по-късно от един ден след дефекацията и изследвани в деня на приемане.

Ако е необходимо, запазете изпражненията до следващия денпоставя се на студено място (0-4°C) или се залива с някой от консервантите.

Преди изследването изпражненията се смесват с пръчка, така че яйцата на хелминтите да се разпределят равномерно в общата маса.

Ако в препарата се открият яйца от хелминти, огледът не се спира, т.к. може да бъде двойна или тройна инвазия.

Мониторингът на ефективността на лечението на хелминтиаза се извършва чрез изследване на изпражненията за хелминтни яйца 2-3 седмици или 2-3 месеца след лечението, в зависимост от открития хелминт.

Макроскопските методи се използват за откриване на цели полово зрели хелминти или техни фрагменти в изпражненията с просто око или с ръчна лупа.

Често на повърхността на изпражненията след дефекация можете да видите активно пълзящи острици; отделя се с изпражнения кръгъл червей; понякога хората сами забелязват отделянето на хелминти. При пациенти с дифилоботриоза могат да се откроят фрагменти от стробили на тения (под формата на "юфка"), а при заразени с тенииди (свинска или говежда тения), сегменти от хелминти често излизат с изпражнения (под формата на „бели порязвания“) или те активно изпълзяват от анус.

Макроскопският метод е основният за диференциална диагноза на тениадоза и тениаринхоза (в комбинация с изследване).

От специалните макроскопски методи се използва методът на последователно измиване на изпражненията.

Изпражненията се смесват във вода до получаване на еднородна суспензия, след което, когато добро осветлениете се изследват внимателно на отделни малки порции в черни фотографски кювети или върху тъмен фонв петриеви панички. С пинсети или дисекционна игла се отстраняват всички съмнителни бели частици, големи образувания, съмнителни за фрагменти от хелминти, и се изследват под лупа между две предметни стъкла. Малки хелминти или глави на цестоди се изследват под лупа в капка глицерин или под микроскоп.

При използване на този метод за диагностика на сегменти от свинска, говежда тения, широка тения, измитите сегменти се поставят между две чаши и при осветяване под лупа или при слабо увеличение на микроскопа се определя видът структурата на матката (в зрял сегмент на свинската тения, 8-12 странични клона и бича тения 18-32, по-често 28-32, при широка тения сегментите са по-широки и матката е в центъра под формата на "розетка"). Ако матката е слабо видима, тогава тя може първо да се задържи известно време в 50% разтвор на глицерин, след което дори изоставените маточни стволове са ясно видими.

Когато се определят тези цестоди по структурата на отделените глави, те се поставят внимателно с гърлото в капка глицерол между предметни стъкла (или се покриват с покривно стъкло) и без да се притискат, се изследват под микроскоп при слабо увеличение.

Микроскопски методиразделени на прости, сложни и специални.

Простите методи включват нативна намазка, нативна намазка с разтвор на Лугол, плътна намазка под целофан по Kato, усукване (по Shulman) и перианално изстъргване.

Комплексни методиса по-ефективни и се основават на концентрацията на яйца в препаратите. Те включват предварителна обработка на изпражненията с течни реактиви, в резултат на което яйцата на хелминтите се утаяват или изплуват на повърхността на течността.

Комплексните методи включват методи за обогатяване:

а) флотация (когато специфично теглояйца по-малко специфично тегло физиологичен разтвори яйцата изплуват на повърхностния филм);

б) утаяване (когато специфичното тегло на яйцата е по-голямо от специфичното тегло на солните разтвори и яйцата се утаяват в утайка).

Специални методи за откриване на яйца и ларви на хелминти, кисти и вегетативни форми на протозои са методите на изстъргване, флотация, утаяване, ларвоскопия, протозооскопия, изследване на жлъчката и методите за оцветяване на петна от изпражнения, храчки и др.

Прости методифекални изследвания

нативна цитонамазка. С дървена пръчица се взема малка частица екскремент от различни части на предадената порция, втрива се добре върху предметно стъкло в капка 50% разтвор на глицерин и се прави тънък намазка върху 2-3 предметни стъкла. Най-малко 3 препарата се изследват под микроскоп. Недостатък на метода: разглежда се малко количество материал, поради което не се използва като независим метод.

Метод на усукване(Шулман). 2,0-3,0 g изпражнения се поставят в чаша, разбъркват се старателно със стъклена пръчка с 5-кратен обем физиологичен разтвор или дестилирана вода, като се правят бързи движения в продължение на 2-3 минути и бързо се отстранява клечката от сместа. Капка от сместа в края на пръчката се прехвърля върху предметно стъкло и се микроскопира. Принципът на центробежната сила причинява натрупването на яйца и ларви върху пръчка.

Като метод на дебело намазване с целофан. Химически реактиви: 100% глицерол, 6% разтвор на фенол (100 ml вода + 6 g фенол), 3% разтвор на малахитово зелено (2,5 ml дестилирана вода + 75 ml малахитово зелено).

Приготвяне на работен разтвор: 100 ml 6% разтвор на фенол + 100 ml чист глицерин + 1,2 ml 3% разтвор на малахитово зелено.

Приготвяне на целофанови ленти: изрязват се целофанови ленти, чийто размер съответства на предметното стъкло. Целофанът трябва да е хидрофилен (целофанът, който гори, е подходящ, ако се топи, тогава не е подходящ). В работния разтвор могат да се обработват до 5 хиляди ленти. Времето за излагане на целофановите ленти до готовност за използване в работния разтвор е минимум 24 часа.

Напредък на изследванията. 50 mg изпражнения (колкото голямо грахово зърно) се нанасят върху предметно стъкло, разтриват се с индивидуална пръчица (стъклена, дървена), покриват се с целофанова лента и се втриват отгоре с гумена запушалка, докато се получи равномерно плътно намазка . Лекарството се изсушава при стайна температура за един час или в термостат при 40 ° C за 20-30 минути и микроскопично (времето на експозиция може да се увеличи при стайна температура до 5-6 часа или повече).

По ефективност този метод се доближава до метода на флотация, но разкрива интензивна и средна интензивност на инвазия.

Използва се като независим диагностичен метод и се препоръчва за масово изследване на населението.

В клиничните диагностични лаборатории се използва като унифициран метод за диагностициране на хелминти при липса на специфични диагнози в указанията на лекарите.

Методите за перианално изстъргване и нативна намазка с разтвор на Лугол са описани в раздела за специални методи.

Усъвършенствани методи за обогатяване на фекалии

Методите за обогатяване се основават на разликата в специфичното тегло на яйцата на хелминтите и използвания солен разтвор.

При прилагане на метода на флотация могат да се използват следните солни разтвори:

1. Разтвор на оловен нитрат PbNO3 (оловен нитрат) с плътност 1,5. Приготвя се в размер на 650 g от веществото на 1 литър вода. Солта се разтваря на части в гореща вода в емайлиран съд, загрява се на котлона и се разбърква непрекъснато, докато се разтвори напълно. Не е необходимо да филтрирате разтвора. Разтворът се приготвя в деня на изследването, тъй като с течение на времето той дава утайка и плътността му започва да пада след 24 часа.Ако разтворът се приготвя в големи количества, тогава в следващите дни преди изследването се нагрява, разбъркване на утайката. Приготвянето на разтвора се извършва в аспиратор, тъй като оловният нитрат е сол на тежък метал.

2. Разтвор на амониев нитрат NH4NO3 (гранулиран или обикновен амониев нитрат) с плътност 1,3 се приготвя по същия начин като предишния, но със скорост 1500 g от веществото на 1 литър топла вода.

3. Приготвя се разтвор на натриев нитрат NaNO3 или натриев нитрат с плътност 1,38-1,4 в размер на 1000 g от веществото на 1 литър гореща вода.

4. Разтвор на натриев тиосулфат Na2S2O3×5H2O (натриев хипосулфит) с плътност 1,4 се приготвя в размер на 1750 g от веществото на 1 литър гореща вода.

5. Приготвя се разтвор на натриев сулфат Na2SO4 (епсомова сол) с плътност 1,26-1,28 в размер на 920 g от веществото на 1 литър гореща вода.

6. Приготвя се разтвор на цинков хлорид ZnCl2 (цинков хлорид) с плътност 1,82 в размер на 2000 g от веществото на 1 литър гореща вода. Охладеният разтвор не кристализира.

7. Наситен хлориден разтвор натриев NaCl(трапезна сол) с плътност 1,18-1,2. На! л вода, добавете 400-420 г сол на порции в емайлирана кофа с вряща вода, като разбърквате непрекъснато, докато се разтвори напълно. Докато разтворът се охлажда, се утаяват кристали от натриев хлорид.

Специфичното тегло на флотационните разтвори се измерва с аерометър само след като разтворът е напълно охладен до стайна температура.

Флотационните методи са най-ефективни за откриване на яйца от малка тения, камшичен червей, анкилостома, аскарис и широка тения.

Повърхностният филм може да се отстрани с телена примка или предметно стъкло.

в наситен разтвор трапезна солфилмът може да се изследва след 30-40 минути, в разтвор на амониев нитрат - след 10-20-30 минути след утаяване.

При отстраняване на филма с телена примка се изследват най-малко 8 капки.

Слайдовете премахват повече яйца от филма, отколкото телените бримки. Стъклото трябва да е в контакт с течността от флотационен разтвор, която се добавя към чашата с пипета. След утаяване стъклото се отстранява, поставя се намокрената повърхност върху стъклото по-голям размери се изследват под микроскоп. Предметните стъкла трябва да бъдат обезмаслени преди употреба.

За изследване трябва да имате: предметни стъкла, химически чаши, телени примки, кювети, петриеви панички, пипети, круши, стъклени или дървени пръчици.

Напредък на изследванията. 5 g изпражнения се заливат с 10-кратно количество флотационен разтвор (за предпочитане с плътност 1,38-1,40), разбъркват се старателно, отгоре се отстраняват неразтворимите едри частици и суспензията се оставя за 10-15 минути. След това филмът се отстранява или с примка върху предметно стъкло, или с предметно стъкло. За разреждане на изпражненията е по-добре да вземете чаши с вместимост 30-50 ml, да излеете разтвора наравно с ръбовете (или да напълните 2-3 mm) и да покриете сместа с предметно стъкло и след това да добавите флотационния разтвор с пипетирайте, докато влезе в контакт с предметното стъкло. След 10-20 минути стъклото бързо се отстранява и останалия върху него филм се сканира под микроскоп без покривно стъкло.

Утаително-седиментационни методи

Седиментационните методи се използват за откриване на яйца от геохелминти, биохелминти в изпражненията и като специални методи за изследване на описторхоза.

Метод Горячев-Золотухин(опростен метод на Горячев). Около 1,5 g изпражнения се разбъркват в химическа чаша в 3-4 ml вода. Получената суспензия се филтрира през два слоя марля в центрофужна епруветка, като върху нея внимателно се наслагват 4-5 ml наситен разтвор на натриев хлорид. Епруветките се поставят в стелаж за 15-20 ч. През това време тежките яйца на трематоди се утаяват. Получете два ясно разграничени слоя. Седиментът се изследва под микроскоп.

Етер-формалинов метод.Използва се за диагностика на всички чревни инвазии и като специален метод за яйца на протозои и описторхи.

Оборудване: центрофуга на 3000 об/мин; центрофужни градуирани тръби, фунии; метална цедка (чай) или двуслойна превръзка; предметни стъкла и покривни стъкла; дървени (или стъклени) пръчки; памук, бинт

Химически реактиви: 10% разтвор на формалин (1 част разтвор на фармацевтичен формалин и 4 части дестилирана вода); етилов етер (медицински).

В центрофужни епруветки се наливат 7 ml 10% разтвор на формалин и се поставят 1 g изпражнения (такова количество изпражнения, че разтворът в епруветката да достигне 8 ml). Изпражненията се смесват с формалин, докато се образува хомогенна смес, след което се изсипват през метална цедка (или двуслойна марля, бинт) в друга центрофужна епруветка (ако изпражненията останат върху цедката, тогава цедката трябва да се изплакне с формалин). Добавете 2 ml етер към тази центрофужна епруветка, запушете и разклатете енергично в продължение на 30 секунди.

Сместа се центрофугира при 3000 rpm за една минута (възможно за две минути при 1500 rpm). Поради реакцията на етер-формалин, коагулацията на протеините се извършва под формата на тапа в горната част на епруветката и яйцата на хелминтите се утаяват. Коагулантният слой се отстранява, супернатантата се отцежда, утайката се нанася върху предметно стъкло директно от епруветката или с пастьорска пипета, покрива се с покривно стъкло и се гледа под микроскоп.

Метод на етерно-оцетно утаяване. Принципът на етерно-оцетно утаяване на яйца от хелминти е последователно третиране на фекални проби с 10% воден разтвор оцетна киселинаи етер. Оцетната киселина е по-добра от другите химични съединенияемулгира фекална проба. Прониква в несмлени частици, състоящи се предимно от фибри, които, когато страхотно съдържаниепречат на изследването чрез утаяване след центрофугиране. Последващото добавяне на етер към епруветката и разбъркване води до извличане на оцетна киселина от съдържанието на епруветката заедно с фекални частици, импрегнирани с нея. Тъй като специфичното тегло на сместа от етер и оцетна киселина е по-малко от специфичното тегло на водата, пробите от изпражненията, обработени с тези вещества, плават и яйцата на хелминтите, които имат голямо специфично тегло, се утаяват.

Количеството на утайката, получена след утаяване с етер-оцетна киселина, е 3-4 пъти по-малко, отколкото след утаяване с етер-формалин. Това значително улеснява откриването на яйца от хелминти в него и ви позволява да изследвате утайката като цяло с проба от 0,5-1 г. Токсичността на етерно-оцетния метод е 5 пъти по-ниска.

Напредък на изследванията. 7 ml 10% разтвор на оцетна киселина се излива в градуирана центрофужна епруветка и се добавя 1 g проба от изпражнения (т.е. такова количество изпражнения, при което разтворът на оцетна киселина нараства до 8 ml). Разбъркайте добре със стъклена или дървена клечка. Прецедете през фуния с два слоя марля в друга центрофужна епруветка. Към емулсата се добавят 2 мл етилов етер(т.е. до 10 ml). Епруветките се затварят с гумена запушалка (възможно е от флакон с пеницилин) и се разклащат за 15 секунди. След отстраняване на запушалката, епруветките се центрофугират за една минута при 3000 rpm за 2 минути. Супернатантата се изхвърля от епруветката. В някои случаи образуваната фекална тапа пречи на изхвърлянето на супернатанта. В този случай тапата се отделя от стените на епруветката със стъклена или дървена пръчка. Цялата утайка се пипетира върху предметно стъкло и се микроскопира под покривно стъкло при ниско увеличение. Утайката обикновено е малка и безцветна. Яйцата на хелминтите, особено яйцата на малкия метил, се откриват добре.

Метод на химическо утаяване. Принципът на изследването се основава на утаяването на яйца от фекална проба във физиологичен разтвор със специфично тегло 1,15. Същността на метода се състои в директното центрофугиране на епруветка, в която тапа от изпражнения, емулгирана в 1% разтвор на оцетна киселина, е наслоена върху разтвор на натриев нитрат (сп. тегло 1,16). Високото специфично тегло на физиологичния разтвор и отделените от химическата реакция мехурчета, проникващи в слоя хомогенизирани изпражнения, предотвратяват неговото утаяване. Яйцата на хелминтите се утаяват с малко количество фибри. Утайката може да се почисти от останалия детрит чрез третиране с 10% оцетна киселина и етер. В този случай остава само едно яйце от хелминти, което значително улеснява тяхното идентифициране.

Напредък на изследванията. 6 ml разтвор на натриев нитрат със специфично тегло 1,15 се излива в градуирана центрофужна епруветка. Изсипете 7 ml 1% разтвор на оцетна киселина в друга епруветка. Въвежда се проба от изпражнения (до знака от 7,5 ml за проба от 0,5 g и до 8 ml за проба от 1,0 g). Разбъркайте старателно пробата със стъклена пръчка. Прецежда се през фуния с еднослойна марля, като се наслагва върху разтвор на натриев нитрат. Епруветката с наслоения филтрат се центрофугира при 1500-2000 rpm за 5 минути. Изхвърлете супернатантата чрез бързо обръщане на епруветката. Добавете 3-4 ml 10% разтвор на оцетна киселина и 0,5 ml етер в епруветка с утайка, затворете с гумена запушалка и разклатете. Повторете центрофугирането за 1 минута. Изхвърлете супернатантата. Утайката се прехвърля върху предметно стъкло, покрива се с покривно стъкло и се изследва под микроскоп.

ХЕЛМИНТОЛОГИЧНИ ИЗСЛЕДВАНИЯ НА ЖЛЪЧКА, ДУОДЕНАЛНО СЪДЪРЖАНИЕ, ХРАЧКИ, КРЪВ, УРИНА И МУСКУЛИ

Откриване на яйца и ларви на хелминти в дуоденалното съдържание и жлъчката. Изследването на жлъчката и дуоденалното съдържимо се извършва при съмнение за хелминтиаза на черния дроб и жлъчния мехур (описторхоза, клонорхиаза, дикроцелиаза) и дванадесетопръстника(стронгилоидоза).

Напредък на изследванията. Съдържанието на дванадесетопръстника и жлъчката (порции A, B, C) се получават по обичайния начин чрез сондиране. За порция B се препоръчва да се получи рефлекс на жлъчния мехур чрез въвеждане на 33% разтвор през сонда магнезиев сулфат. От изследваната течност се избират плаващи в нея люспи и се разглеждат под микроскоп, след което се смесва с равно количество серен етер. Сместа се разклаща старателно и се центрофугира. Супернатантата се изхвърля и цялата утайка се изследва под микроскоп.

При липса на гной и слуз жлъчката и дуоденалното съдържание се центрофугират без смесване с етер.

Изследване на храчки. В хелминтологичната практика изследването на храчките се извършва с цел лабораторна диагностика на парагонимиаза. Понякога се откриват шистозомни яйца, ларви на ascaris, елементи на ехинококов пикочен мехур.

Приготвя се нативна цитонамазка от храчка върху предметно стъкло, което се изследва под микроскоп.

При обилно съдържание на гной в храчката се смесва с 0,5% разтвор на сода каустик или калий каустик, разклаща се в продължение на 5 минути и се центрофугира. Седиментът се изследва под микроскоп.

Изследване на кръвта. Кръвта се изследва, ако пациентът има съмнение за филариаза.

Поради факта, че при някои видове филариаза (лоаоза, вухерериоза, причинена от субпериодичен щам), ларвите (микрофиларии) са в периферната кръв само през деня, а при някои (бругиаза, вухерериоза, причинена от периодичен щам) - само през нощта, съответно, по това време вземете кръв за анализ.

Техниката на вземане на кръвни проби, подготовката на препарати (тънка намазка и дебела капка), тяхното оцветяване (по Романовски) и изследването са подобни на тези при лабораторната диагностика на малария.

Микрофилариите от различни видове се различават по дължина, ширина, извивка на тялото, наличие или отсъствие на капачка, форма на опашния край, местоположение на ядреното вещество в тялото и опашната област на ларвите.

Напредък на изследванията. След това урината се защитава поне 30 минути горен слойотцежда се, оставяйки 10-15 ml утайка, която се изсипва в центрофужни епруветки и се центрофугира за 1-2 минути. След източване на супернатанта, утайката се прехвърля върху предметно стъкло и се изследва под микроскоп.

ИЗСЛЕДВАНЕ НА МУСКУЛНА БИОПТИЯ

Метод на трихинелоскопия. Необходимостта от изследване на биопсични проби от мускулите на пациента възниква при съмнение за трихинелоза.

Биопсията се извършва съгласно общите правила. Делтоидният мускул обикновено се биопсира. При патологоанатомичен преглед е възможно да се направи биопсия на мускулите на диафрагмата, хранопровода, езика, дъвкателните и междуребрените мускули, флексорите на крайниците, мускулите. очна ябълка, тъй като най-интензивно се поразяват от ларвите на трихинела.

В лабораторията биопсирано парче мускул се нарязва на много малки парчета (микротом), които се поставят между две стъкла, смачкващи мускулните влакна, и се изследват под микроскоп. В момента за тази цел широко се използват специални микроскопи, трихинелоскопи.

В случай на трихинелоза, трихинелоскопията по мускулните влакна разкрива рязко изпъкнали овална форма(подобно на лимон) трихинелоза капсули. средна стойносткапсули при хора е 0,4 x 0,26 mm. Капсулата, като правило, съдържа една трихинела, спирално сгъната на 2,5 оборота. При висок интензитет на инвазия една капсула може да съдържа 2 или 3 ларви. Мускулните влакна, съседни на капсулата, губят своята напречна набразденост и придобиват хомогенен вид.

По същия начин се изследва месото или месните продукти, причинили инфекцията.

Метод на мускулно храносмилане. Методът е по-ефективен.

Напредък на изследванията. Изследваните мускули са фино натрошени и запълнени с изкуствени стомашен сокв съотношение 1:15-20. Получената смес се поставя в термостат при 37°С за 12-16 ч. След този период утайката се микроскопира, в която сред масата остатъци от смлени мускулни влакна се намират свободни ларви на трихинела.

Изкуственият стомашен сок може да бъде закупен в аптека или приготвен в лаборатория. За да направите това, добавете 10 ml концентрирана солна киселина към 1 литър дестилирана вода; преди употреба 30 g пепсин се добавят към 1 литър разредена киселина.

КОЛИЧЕСТВЕНИ МЕТОДИ НА ИЗСЛЕДВАНЕ

Количествени методиизследванията се използват за определяне на интензивността на инвазията, оценка на ефективността на различни антихелминтни лекарства, определяне на качеството на обезпаразитяване, наблюдение на текущите масови терапевтични и превантивни мерки и др.

Количественото определяне на яйца от хелминти се извършва по два метода: метода на Stoll и метода на Krasilnikov и Volkova (1974).

Метод на Стол. За да проведете изследването, трябва да имате микроскоп, стъклена колба с маркировка от 56 и 60 ml, измервателен цилиндър, стъклени перли, гумена запушалка за колбата, градуирани пипети, предметни стъкла и 0,4% разтвор на натриев хидроксид.

Напредък на изследванията. Изсипете децинормален разтвор на натриев хидроксид (приблизително 0,4% концентрация) в колбата с мерителен цилиндър до марката 56 ml и добавете изпражнения, докато нивото на течността достигне 60 ml (т.е. 4 ml изпражнения). Сместа се разклаща добре със стъклени перли за 1 минута, като съдът се затваря с гумена запушалка (може и с клечка). Веднага след разклащане с градуирана пипета се събират 0,075 ml от сместа (съдържа 0,005 ml фецес), прехвърлят се върху предметно стъкло и броят на яйцата в препарата се преброява под микроскоп. За да се определи броят на яйцата в 1 g изпражнения, намереният брой се умножава по 200.

Сравнението на броя на яйцата в препарата, открити в пациента преди и след лечението, ни позволява да преценим ефективността на обезпаразитяването.

Методът на Stoll е прост, дава сравними резултатис всички хелминтиази, чиито патогени систематично отделят яйца в червата на пациента. Недостатъкът на този метод обаче е неговата относителна ниска чувствителност, особено при ниска интензивност на инвазията.

Метод Красилников-Волкова. При изследване на този метод най-малко 1 g изпражнения се смесват в стъклена колба или голяма епруветка с 1% разтвор на Lotus (или 1,5% разтвор на Extra) в съотношение 1:10. Суспензията се разклаща старателно, докато се образува хомогенна суспензия, след което 0,1 ml от суспензията (еквивалентно на 0,01 g изпражнения) бързо се събира с градуирана пипета и се прехвърля върху предметно стъкло. Препаратът се покрива с покривно стъкло или целофанова плоча (20 х 30 mm), отлежава най-малко един ден при 50% воден разтворглицерин.

Пребройте броя на яйцата в целия препарат. За да се изчисли броят на яйцата в 1 g изпражнения, полученото число трябва да се умножи по 100.

Този метод има редица предимства пред метода на Stoll. Първо, той е по-чувствителен и ви позволява да откривате хелминти, когато ниска степеннашествия. Второ, много е удобно за масови прегледи, тъй като детергентните разтвори, като консерванти за яйца от хелминти, позволяват да се провеждат изследвания на не съвсем свеж материал. въпреки това предпоставкатова е събирането на фекалии директно в разтвора на препарата.

За количествени изследванияможе да се използва всеки от описаните унифицирани качествени методи, базирани на принципа на плаващите яйца. Но в този случай трябва да се вземе за анализ същото количество изпражнения, същият обем флотационен разтвор. Изчисляването на степента на инвазия може да се направи, като се знае броят на яйцата в 1 g изпражнения, съгласно таблицата по-долу.

Интензивността на инвазията зависи от броя на яйцата на хелминтите

в 1 g фекалии

СЕРОЛОГИЧНА ДИАГНОСТИКА

Тези методи, базирани на откриването на специфични антитела в кръвния серум, се използват за диагностични и скринингови цели.

Серологичните методи включват:

Реакция на пръстеновидно утаяване (RCP) (трихинелоза, цистицеркоза);

Реакция на пръстеновидно утаяване в епруветки на студено (трихинелоза, цистицеркоза);

Реакция на микропреципитация върху живи ларви (трихинелоза, аскаридоза);

Реакцията на непряка хемаглутинация (RIHA) (трихинелоза, ехинококоза, алвеококоза, цистицеркоза и др.);

Реакция на латекс аглутинация (RAL) (ехинококоза, алвеококоза, трихинелоза, тениаринхоза и др.);

Реакция на свързване на комплемента (RCC) (трихинелоза, ехинококоза, цистицеркоза);

Реакцията на ензимно белязани антитела (REMA) (ехинококоза, онхоцеркоза, шистозомиаза, трихинелоза, токсокароза);

Свързан имуносорбентен анализ(ELISA) (трихинелоза, описторхоза, токсокароза, токсоплазмоза и др.).

За установяване на серологични реакции се произвеждат стандартни антигени или се приготвят самостоятелно (например от ехинококови мехури на овце), произвеждат се специални тест системи за ELISA.

Специални методиизследване на ентеробиоза, тениаринхоз, тениаза

Остъргване от перианалните гънки. За да получите изстъргване от перианалните гънки, можете да използвате дървена шпатула, целофанова лента, целулозна хартия или лента, клечки за очи със специален адхезивен слой:

а) изстъргване с дървена шпатула (шпатула е сплескана клечка или клечка), навлажнена с 1% разтвор на глицерин (или 0,5% разтвор сода за пиене), се извършва чрез леко остъргване от повърхността на перианалните гънки по цялата обиколка на ануса. Полученото изстъргване се прехвърля с ръба на покривното стъкло от края на шпатулата върху предметно стъкло в капка 50% разтвор на глицерол, покрива се със същото покривно стъкло и се микроскопира. Недостатък на метода е недостатъчното откриване на яйца и дразнещ ефект;

б) по метода на Торгушин, измиването се извършва с памучен тампон върху дървена или друга шпатула, навлажнена с 50% разтвор на глицерин, и се приготвя намазка върху предметно стъкло в капка глицерин;

в) по метода на Кеворкова около 5 ml се изсипват в центрофужна епруветка сварена вода, поставете шпатула (пръчка) с памучен тампон в нея. Преди вземане на материала тампонът се притиска леко към вътрешната стена на епруветката, с него се избърсват перианалните гънки и шпатулата с тампона се вкарва в епруветката. Тампонът в епруветката се разклаща добре, промивката се центрофугира в продължение на 3 минути и получената утайка се изследва под микроскоп;

г) изстъргване с лейкопласт по Греъм. Част от самозалепваща лента (прозрачна полиетиленова лента със залепващ слой за детско творчество, но е по-добре да използвате операционния филм LPO-1, LPO-2) с дължина 8-10 cm, залепен с лепкав слой към перианалните гънки на кожата, като държите краищата и след това го прехвърлете върху предметното стъкло с лепкав слой надолу (краищата на лентата, които излизат извън ръбовете на стъклото, се отрязват), очилата се номерират и данните на пациента и номерът на стъклото се записват в дневника. В лабораторията тиксото се отлепва от единия край на голямо разстояние, капват се под него 1-2 капки вазелиново маслоили глицерин (за отстраняване на оптични дефекти) и микроскопски;

д) изстъргване със стъклени клечки за очи, чиято повърхност е намазана със специално лепило. Пръчките за очи са монтирани в специален статив. Материалът се взема чрез контакт на плоската част на шпатулата с кожата на перианалния отвор. След това пръчката се фиксира отново в статив за транспортиране. Микроскопията се извършва директно върху шпатулата от двете страни (без предметни стъкла и покривни стъкла) с предварително закрепване в касети при ниско увеличение (окуляр х 10, обектив х 8). В края на работата пръчките се дезинфекцират чрез кипене в сапунен разтвор, а стативът и касетите се третират със спирт и се измиват със сапунен разтвор на сода. Състав на лепилото: клеол - 10 g, рициново масло- 2,5 g, етилов етер - 5 g, етанол 96% - 2,5 g.

Шпатулите се потапят в разтвор на лепило, след което се сушат на въздух при стайна температура. Лепилният филм, образуван на повърхността, остава няколко дни.

Методът е удобен за масово изследване на детското население за ентеробиоза и възрастното население за тениидози.

В допълнение към метода на остъргване за тениаринхоза и тениаза се използват и методът на изследване и макроскопският метод, описан по-горе (когато се открият сегменти).

Специални методи за изследване на стронгилоидоза

Етер-оцетният метод се използва за откриване на яйца (виж по-горе), а методът на Берман за откриване на ларви в изпражненията.

Метод на Берман. Изследвайте пресни изпражнения, по-добре след приемане на слабително. Проба от фекалии от 5 g се поставя върху метално сито (мрежата е покрита с два слоя марля отвътре) в стъклена фуния, фиксирана в статив. На долния край на фунията се поставя гумена тръба със скоба (апарат на Берман).

Мрежата с изпражненията се повдига и във фунията се излива вода, загрята до 40-50 ° C, така че Долна частмрежата беше потопена във вода и изпражненията бяха напълно покрити с вода. След 2-4 часа скобата на гумената тръба бързо се отваря и течността се спуска в центрофужната тръба. След центрофугиране (1-2 min) горната част на течността бързо се отцежда, а утайката в количество 1 ml се нанася на тънък слой върху предметно стъкло и се микроскопира при слабо увеличение на микроскопа.

IMP и TM метод. Част от изпражненията с размер на ядка се поставят в химическа чаша, изсипват се с топъл 40 ° C физиологичен разтвор, така че изпражненията да се покрият с разтвор, оставят се за 20 минути. След 20 минути течността се излива в петриево блюдо и се наблюдава под бинокулярния микроскоп MBS.

За диагностика на стронгилоидоза, особено за проследяване на ефективността на лечението, се препоръчва комбинирането на метода на Берман с изследване на дуоденалното съдържание.

Специални методи за изследване на нематоди

Нематози

аскаридоза

В анамнезата се обръща внимание на отношението към градинарството, градинарството. Яденето на сурови зеленчуци, салати от тези зеленчуци.

Клинични проявления ранна фазааскаридозата се причинява от алергични промени в тялото. Ранният или мигриращ ларвен стадий на аскаридоза често се проявява при наличие на треска с телесна температура до 38 ° и по-висока, със симптомен комплекс от белодробно увреждане и наличие на тежка еозинофилия в кръвта. В повечето случаи при децата първите признаци на заболяването са неразположение, слабост, повтарящи се главоболия, изпотяване, понякога болки в мускулите и ставите. Често има обилен обрив тип уртикария със силен или умерен сърбеж. Диагнозата на ранната фаза се потвърждава от рентгенови изследвания за наличие на летливи частици в белите дробове. еозинофилни инфилтратиЛефлър. Прясно изолирани натривки от храчки често показват еозинофилни клетки, червени кръвни клетки, кристали на Charcot-Leiden и ларви на Ascaris.

В чревния имагинален стадий на аскаридоза има комбинация от прояви от стомашно-чревния тракт и астенични синдроми, ентероколит симптоми на болка. При децата често има намаляване на теглото, понякога доста значително. Гадене, повишено слюноотделяне, раздразнителност, забавено психомоторно развитие, намалена интелигентност.

За лабораторна диагностика на чревни ст

Най-простите са разделени на 4 класа:

По време на енцистацията микроорганизмът придобива кръгла формаи покрит със защитна обвивка. Под формата на киста протозоите стават по-малко податливи на неблагоприятни факторизаобикаляща среда.

Изследването може да включва:

Забележка:Има много разновидности на диагностика, ще разгледаме тези видове, които са най-често срещани в клиничната лабораторна практика.

Индивидуални видове диагностика

Във всеки конкретен случай лаборантът има за задача да открие конкретен патоген, понякога заедно с основния се откриват и други.

Има 6 вида от този микроорганизъм, способен да живее в червата на човека. Клинично значение има само дизентерийната амеба, която се среща във вегетативна форма и под формата на цисти.

Освен това се използват имунологични методи:

• индиректна имунофлуоресценция;
• индиректна аглутинация (PHA);
• радиална имунодифузия.

Забележка: серологични методиса неинформативни и се използват само като допълнение към основните в съмнителни случаи.

Диагностика на цилиарни (ресничести)

Патогенната форма на микроорганизмите от този род е балантидия. Това е микроб, който причинява балантидиаза - заболяване, придружено от язвен процес на дебелото черво. Причинителят се открива в нативна цитонамазка под формата на вегетативна форма и киста. Материалът за намазката (изпражнения и слуз) се взема по време на сигмоидоскопско изследване и се засява върху специални среди.

Диагностика на камшичести (лейшмания, лямблия, трипанозоми, трихомонади)

Лайшмания, трипанозома, ламблия, трихомонади са опасни за хората.

Лайшмания- микроби причиняващи лайшманиоза, се изследват в кръвни натривки, материали костен мозък, изстъргвания от кожни инфилтрати. В някои случаи при диагностицирането на лейшмания се използва сеитба върху хранителни среди.

Трипанозоми– патогени сънна болест(Американска/африканска трипанозомоза или болест на Шагас).

Африканската версия е дефинирана в начален периодпри изследване на периферна кръв. Патологичните микроби по време на прогресията на заболяването се откриват в материала от пункции на лимфните възли, в напредналите стадии - в цереброспиналната течност.

За диагностициране на трипанозоми в случай на съмнение за болест на Chagas, материалът за изследване се изследва под микроскоп при ниско увеличение. В този случай петна и дебела капка са предварително оцветени.

Трихомонада(чревни, орални,) се откриват чрез микроскопия на материали, взети от засегнатите лигавици.

Идентифициране на спорозои (малариен плазмодий, причинител на кокцидоза и др.)

Най-често срещаният и опасен вид за хората е маларийният плазмодий, който има 4 основни разновидности на патогена: патоген тридневна малария, четиридневна малария, тропическа маларияи малария овална.

Сексуалното развитие на плазмодия (спорогония) протича при комарите Anopheles. Асексуални (тъканна и еритроцитна шизогония) – в чернодробната тъкан и човешките еритроцити. Тези характеристики на жизнения цикъл трябва да се вземат предвид при диагностицирането на малариен плазмодий.

Така че в кръвта на новоболен пациент могат да бъдат открити зародишни клетки от цикъла на спорогония. Но в разгара на маларийните атаки шизонтите се появяват в големи количества в кръвта.

Освен това, в различни фази маларийна трескасе появи различни формиплазмодий:

• по време на периода на студ кръвта е пълна с мерозоити, вид шизонт;
• при висока температура в еритроцитите се натрупват пръстеновидни трофозоити;
• намаляването на температурата се характеризира с преобладаване на амебоидни трофозоити;
• в периоди на нормално състояние кръвта съдържа възрастни форми на шизонти.

Изследването на причинителя на маларията (маларичен плазмодий) се извършва в намазка и в дебела капка.

Забележка:диагнозата малария при изследване на петна и дебели капки кръв понякога е погрешна. Кръвните тромбоцити в някои случаи могат погрешно да бъдат класифицирани като малариен патоген. Също така фрагменти от левкоцити и други клетки понякога симулират плазмодий.

Основни методи за изследване на протозоите

Нека да разгледаме накратко най-често срещаните методи за изследване на наличието на протозои.

Диагностика на протозои чрез нативна цитонамазка и цитонамазка, оцветена с разтвор на Лугол (в изпражнения)

Лекарството се приготвя от емулсия на изпражнения в изотоничен разтвор. Две капки натриев хлорид и разтвор на Лугол се нанасят върху предметно стъкло. Тестовият материал се добавя към двата състава с дървена пръчица и след като се покрие със стъкло, се гледа при различни разделителни способности на микроскопа.

По определени признаци се регистрират откритите протозои. За точност се приготвят 2-3 препарата от един материал. В съмнителни случаи анализът се повтаря няколко пъти в продължение на 2-3 седмици.

Методът може да открие вегетативни и кистозни форми:

• ламблия;
• балантидия;
• дизентерийна амеба.

Заедно с патогенните форми се определят и непатогенни протозои. Здравите носители също имат луминални и кистозни форми.

Важно:изследванията трябва да се извършват многократно, за да се избегнат неточности и грешки.

Резултатът от диагностицирането на протозои чрез метода на нативна и оцветена намазка трябва да съдържа описание на формата на патогена (полупрозрачен, киста, тъкан).

Изисквания за изследване:

• материалът, взет за анализ (течни изпражнения), се изследва не по-късно от 30 минути след дефекацията;
• формираните изпражнения трябва да бъдат диагностицирани в рамките на 2 часа след дефекация;
• материалът не трябва да съдържа примеси ( дезинфектанти, вода, урина);
• за работа с материала се използват само дървени пръчки, стъклените не са подходящи поради изплъзване на слузта;
• Пръчките трябва да се изгорят веднага след употреба.

Консервационен метод (изследване на изпражнения) в диагностиката на протозои

Изследването се провежда чрез фиксиране на протозоите с консервант. Разликата между този метод и предишния е, че консервантите ви позволяват да запазите лекарството за дълъг период от време.

Използвани консерванти:

• Бароу. Съдържа консерванти: 0,7 ml натриев хлорид, 5 ml формалин, 12,5 ml 96% алкохол, 2 g фенол и 100 ml дестилирана вода. Състав на оцветителя: 0,01% разтвор на тионин (лазур).
• Решението на Сафарлиев. Състав: 1,65 g цинков сулфат, 10 ml формалин, 2,5 g кристален фенол, 5 ml оцетна киселина, 0,2 g метиленово синьо, 100 ml вода. Този консервант се използва в случаите, когато материалът трябва да се съхранява повече от месец.

Празните бутилки се пълнят с консервант, материалът се прехвърля в тях в пропорции 3: 1, след което, ако е необходимо, се добавя оцветител. Оценката на резултатите се извършва при изследването на 2-3 лекарства.

Метод за обогатяване на формалин-етер (анализ за наличие на протозои в изпражненията)

Този диагностичен метод ви позволява да отделите и концентрирате протозойни кисти. За анализ са необходими следните съставки: формалин (10 ml), 0,85 g изотоничен разтвор, дестилирана вода, серен етер, разтвор на Лугол.

Смес от биоматериал с изброените течности се смесва и центрофугира. Получената утайка на дъното на епруветката се оцветява с разтвор на Лугол и се изследва за наличие на кисти и вегетативни форми.

Метод за откриване на лайшмания (намазка от костен мозък)

За диагностика на лайшманиоза се използват реагенти: смес от Никифоров (сярен етер и етилов алкохол), фосфатен буфер, азур-еозин по Романовски.

Субстанцията от костен мозък се поставя много внимателно върху предметно стъкло след специална подготовка. Използва се микроскоп с имерсионна система.

IN остър периодзаболявания в пунктата открити голям брой Leishmania.

Забележка:Понякога кръвни клеткиможе да прилича на преработена лайшмания, така че е много важно лаборантът да бъде внимателен и да има достатъчно опит за самоизследване.

Метод за откриване на лайшмания в цитонамазка от кожен инфилтрат

Необходимите реагенти са подобни на предишния анализ.

Материалът за изследване се получава от съществуващото туберкулозно или язвено съдържание. Остъргването със съмнение за лайшманиоза се извършва много внимателно със скалпел, без кръв. След това препаратът се приготвя върху стъкло. За точността на получените резултати се изследват едновременно няколко препарата.

При наличие на заболяване сред макрофагите, фибробластите и лимфоидните клетки, присъстващи в тестовия материал, се определя и Leishmania.

Метод за изолиране на чиста култура от лайшмания, получена чрез изстъргване на патологични тъкани

С този метод за диагностициране най-простите тъканни изстъргвания се поставят в специална хранителна среда, в която Leishmania активно се възпроизвежда.

Преди да вземете остъргване, кожата се третира внимателно с алкохол, след това се прави разрез в туберкула, от дъното на което се отстранява съдържанието и се поставя в епруветка със средата. Материалът се взема няколко пъти, след което се поставя в различни епруветки. След това в термостат при температура 22-24 градуса се извършва култивиране. Резултатите се оценяват под микроскоп. Този метод се използва, когато други, по-евтини и по-бързи методи за диагностициране на протозои са неефективни.

Можете да видите как тестовете за наличие на протозои се дешифрират на практика чрез капка кръв, като гледате видео преглед:

Лотин Александър, медицински колумнист

Изпражненията се изследват по два начина:

1. Макроскопичен - намерете хелминти, техните глави, сегменти, остатъци от стробили. Малки порции изпражнения се смесват с вода в плоска вана или петриево блюдо и се разглеждат при добра светлина на тъмен фон, като се използва лупа, ако е необходимо. Всички подозрителни образувания се прехвърлят с пинсети в друга чаша с вода или върху предметно стъкло в капка разреден глицерин.

С метода поддържанеизследваната част от изпражненията се разбърква с вода в стъклен цилиндър, след утаяване горният слой вода се отцежда. Това се повтаря няколко пъти. Когато течността стане прозрачна, тя се отцежда и утайката се гледа в петриево блюдо.

2. Микроскопични - за откриване на яйца и ларви на хелминти. Има много методи за изследване.

1). нативна цитонамазка - най-често срещаният и технически достъпен метод за изследване. Можете да намерите яйца и ларви на всички хелминти. Въпреки това, с малък брой яйца, те не винаги се намират. Затова се използва методът на обогатяване.

1). Метод на Фюлеборг - това е метод за обогатяване, базиран на появата на хелминтозни яйца в наситен разтвор на NaCl (1,2 - плътност; 400 g NaCl на 1 литър вода; 40% разтвор на NaCl). Методът е по-ефективен от нативната цитонамазка. 2-5 g изпражнения се поставят в стъклени буркани и се пълнят с разтвор на NaCl, разбъркват се и след 45 минути образуваният филм се отстранява с метална примка, върху предметно стъкло се поставя капка глицерин. Разгледайте под микроскоп. Недостатъкът на метода е забавянето на появата на яйца от различни хелминти, джудже тения - след 15-20 минути, кръгли червеи - 1,5 часа, камшичести червеи - 2-3 часа.

2) Метод на Калантарян - също метод за обогатяване, но се използва наситен разтвор на NaNO 3 (плътност 1,38). Повечето от яйцата плуват, не е необходимо изследване на утайката. Недостатъкът е, че яйцата се държат в разтвор за дълго време, което води до факта, че някои яйца започват да набъбват и се утаяват на дъното, изчезвайки от повърхностния филм.

3. Метод на Горячев - базиран на принципа на отлагане на яйца, откриване на малки трематодни яйца. Като разтвор се използва наситен разтвор на NaCl и отгоре внимателно се наслояват 3-4 ml разтвор на фекалии. След 15-20 часа яйцата на трематодите се утаяват на дъното. Течността се отцежда, утайка върху предметно стъкло и под микроскоп.

4. Метод на усукване на Шулман – за откриване на ларви на хелминти в изпражненията. Изследвайте само прясно изолирани изпражнения. 2-3 гр. се поставят в стъклен буркан и се налива 5 пъти по-голямо количество вода, бързо се разбърква с клечка, без да се докосват стените на буркана - 20-30 минути, след което клечката бързо се отстранява и се капва капка. течността в края се прехвърля върху предметно стъкло и се микроскопира.

5. Метод на Берман - въз основа на способността на ларвите на хелминтите да мигрират към топлина и служи за идентифицирането им в изпражненията.

6. Метод на Харада и Мори (метод на отглеждане на ларви) и се препоръчва за изследване за анкилостомия. Методът се основава на факта, че при топлина и върху влажна филтрирана хартия яйцата на анкилостомите се развиват във филариформни ларви, които могат лесно да бъдат открити. В средата на лента от филтрирана хартия се нанасят 15 г изпражнения, хартията с изпражненията се поставя в буркан, като долният край се потапя във вода, а горният край се закрепва с тапа. Бурканът се държи в термостат при 28 0 С за 5-6 дни. Филариформните ларви се развиват през това време и се спускат във водата. Течността се изследва под лупа. Ако е трудно да се открие, течността се центрофугира, след унищожаване на ларвите чрез нагряване до 60 0. Лаборантът трябва да носи ръкавици.

7. Методи за ентеробиоза – идентифициране на яйца на острици и говежди тения.

а) остъргване от перианалните гънки - с памучен тампон, плътно навит върху дървена пръчка и навлажнен с 50% разтвор на глицерин. В лабораторията тампонът се измива с 1-2 капки 50% воден разтвор на глицерол.

б) метод на лепкави акари (метод на Греъм)

Адхезивната лента се поставя върху перианалните гънки, след това с лепкав слой върху предметното стъкло и се микроскопира.

В) остъргване с пръчици за очи (метод на Рабинович). За перианални остъргвания се използват стъклени клечки за очи, чиято най-широка част е покрита със специално лепило, което позволява да се задържат яйца от острици.

Изследване на кръв, жлъчка, храчки и мускули

Микроскопия на кръвта - откриват се ларви на филарии.

Изследване на храчки - яйца на параганим, ларви на аскариди, некатор, стронгилоид, елементи от ехинококов мехур.

Изследване на мускулите - при съмнение за трихинелоза се изследват мускулите на болния или трупа, както и месото, за което се предполага, че е причинило заразяването на човека. За целите на трихинелоскопията мускулът се нарязва на малки парчета и се поставя в компресори, това са две широки дебели стъкла, които смачкват мускулите и се намират ларви на трихинела под формата на капсули - методът на компресия.

Метод на храносмилане - мускулите се обливат с изкуствен стомашен сок (разтвор на солна киселина и пепсин). Мускулите се усвояват и ларвите се откриват лесно. Определяне на интензивността на инвазията: броят на ларвите до 200 на 1 g мускулна тъкан– умерена интензивност на инвазията; до 500 - интензивно; над 500 - суперинтензивна инвазия.

Серологични методи

Глава III. Диагностика на хелминтози и методи за хелминтологично изследване

Необходимо е да се изследват за хелминтиази всички пациенти, търсещи медицинска помощ, и особено пациенти, които се обръщат към педиатър, интернист и невропатолог с оплаквания от явления от стомашно-чревния тракт, нервна системаи с анемия. Ако лекарят не винаги може да приложи лабораторни методи за изследване, тогава всеки медицински работник, който оказва помощ в амбулаторна клиника или болница, е длъжен да интервюира пациента за освобождаването на хелминти от него.

При наличие на дадените в съответните гл клинични показаниядиагнозата трябва да се изясни с помощта на лабораторни изследвания за хелминтиаза.

Поради преобладаването чревни хелминтиазинай велик практическа стойностима изследване на движението на червата.

Методи за изследване на изпражненията за хелминтози

Изпражненията се доставят в лабораторията в чисти стъклени съдове (около четвърт чаша изпражнения, взети от различни места в една порция); по време на рутинен преглед е разрешено доставяне на изпражнения в лабораторията в кибритени кутии или популярни отпечатъци.

За контрол на обезпаразитяването се доставя цялата порция изпражнения, събрана след приема (по лекарско предписание). антихелминтнии слабително (в големи затворени стъклени буркани, кофи).

Микроскопското изследване на изпражненията е основното в диагностиката на чревните хелминтиази; винаги трябва да се предхожда от общо макроскопско изследване на изпражненията за откриване на сегменти от големи цестоди, острици, кръгли червеи и др.

Изпражненията трябва да са пресни или консервирани (в 5% разтвор на формалин), тъй като изсушаването драстично променя структурата на яйцата. Освен това, когато стои изпражнения възниква бързо развитиеяйца на някои хелминти (например анкилостома), което затруднява диагнозата.

Съгласно инструкциите на Министерството на здравеопазването на СССР е необходимо да се изследват изпражненията едновременно по метода на Fülleborn и нативна намазка.

нативна цитонамазка

Нативна цитонамазка: малка част от изпражненията (с размер на грахово зърно), взета с кибрит, стъклена или дървена пръчица от различни места на доставената порция, внимателно се стрива върху предметно стъкло в капка 50% разтвор на глицерол или във физиологичен разтвор или във вода. Покрива се с покривно стъкло, като се притиска леко (с дисекционна игла). Намазката трябва да е тънка, прозрачна и еднородна. Използва се само като допълнение към други методи, които дават обогатяване на лекарството. Трябва да се видят поне два препарата.

За откриване на ларви на хелминти (както и техните яйца) се прави нативна цитонамазка по следния начин(по Шулман): 2-3 g изпражнения се разбъркват старателно чрез „усукване“ със стъклена пръчица в емулсия с петкратно количество чиста вода или физиологичен разтвор. По време на разбъркване ларвите се натрупват на стъклената пръчка, поради което веднага след края на разбъркването капка от емулсията бързо се прехвърля със стъклена пръчка върху предметно стъкло, покрива се с покривно стъкло и се изследва. S. D. Lyubchenko (1936) доказва, че методът на усукване е по-ефективен от метода на намазката, особено по отношение на яйцата на Ascaris. Въз основа на работата на С. Д. Любченко считаме за целесъобразно да заменим метода на намазката с метода на усукване.

Метод на Фюлеборн

Метод на Fülleborn: 5-10 g изпражнения, взети от различни места, се поставят в буркан с вместимост 50-100 ml и се стриват добре със стъклена или дървена пръчица в наситен разтвор на натриев хлорид (400 g от тази сол се разтварят в 1 литър вода, загрята до кипене и филтрирана през слой памук или марля; разтворът се използва студен: специфично тегло 1,2). Разтворът се налива постепенно до получаване на еднородна суспензия, като общото количество на излятия разтвор трябва да бъде приблизително 20 пъти количеството на изпражненията. Fülleborn препоръчва използването на чаени чаши за смесване на изпражненията, но е по-удобно суспензията да се приготвя в 50-100 ml буркани за мехлем, като се използват два буркана за всеки анализ (или в 100 ml чаши).

Непосредствено след приготвянето на суспензията, големите частици, изплували на повърхността, се отстраняват от повърхността с шпатула, метална лъжичка или парче чиста хартия ( растителни образувания, несмлени остатъци от храна и др.), след което сместа се оставя да престои 1-1,5 часа. След това време целият филм се отстранява от повърхността на сместа чрез докосване на тел или платинен контур (плосък) с диаметър не повече от 1 cm, огънат под прав ъгъл; Филмът се изтръсква върху предметно стъкло и се покрива с покривно стъкло. Под всяко покривно стъкло (18х18 mm) се поставят 3-4 капки. Общо трябва да се приготвят поне 4 препарата (по едно покривно стъкло за всеки препарат). Примката се калцинира на огън и се измива с вода след всеки анализ.

По метода на Fülleborn бързо и лесно се откриват яйца на всички нематоди (с изключение на неоплодените яйца на кръгли червеи) и яйца на тения джудже.

Методът на Берман се използва за изследване на изпражненията за ларви на хелминти (със стронгилоидоза). Този метод е следният: 5 g фекалии върху метална решетка (за тази цел е удобна цедка за мляко) се поставят върху стъклена фуния, закрепена на статив. В долния край на фунията се поставя гумена тръба със скоба.

Мрежата с изпражненията се повдига и във фунията се излива вода, загрята до приблизително 50 °, така че долната част на мрежата с изпражнения да се потопи във вода. Ларвите активно се движат във водата и се натрупват в долната част на гумената тръба. След 2-4 часа скобата се отваря и течността се спуска в една или две центрофужни епруветки.

След центрофугиране за 1-2 минути, горната част на течността бързо се отцежда, а утайката се нанася на капки върху предметни стъкла и се изследва под покривни стъкла или се разпределя на тънък слой върху 2-3 големи предметни стъкла и след това се изследва без покривни стъкла.

Методът на Берман се използва и за изследване на почвата за наличие на ларви на анкилостома.

Метод на Стол

Методът Stoll се използва за определяне на интензивността на инвазията. Децинормален разтвор на натриев хидроксид се излива в специална стъклена колба до марката 56 cm 3 и след това се добавят изпражнения, докато нивото на течността достигне 60 cm 3, т.е. 4 cm 3. След разклащане със стъклени перли се взема 0,075 ml от сместа за изследване и се изследва под едно или две обикновени покривни стъкла. Полученото количество се умножава по 200, за да се получи броят на яйцата, съдържащи се в 1 cm 3 изпражнения.

Изследване на съдържанието на дванадесетопръстника

Дуоденален сок и кистозна жлъчка, получени по обичайния начин чрез сондиране (и кистозна жлъчка и след рефлекс от жлъчния мехур), се смесват старателно с равен обем етилов етер; сместа се центрофугира, след което утайката се изследва под микроскоп. В допълнение към утайката микроскопско изследванелюспите, плаващи в течността, които могат да съдържат яйца от хелминти, задължително се излагат. При изследване на яйца от хелминти от стомашен сок и повръщане можете да използвате същата техника.

При съмнение трябва да се направи изследване на дуоденален сок и стомашно съдържимо хелминтни заболяваниячерния дроб, жлъчния мехур (описторхоза, фасциолиаза, дикроцелиоза) и дванадесетопръстника (стронгилоидоза).

Изследване на храчки

Храчките се разтриват върху стъклена пластина, плътно се покриват с друга стъклена пластина и се изследват с невъоръжено око на светъл и черен фон, както и под лупа в пропускаща светлина. Отделни парчета храчки ("ръждиви" натрупвания, остатъци от тъкани и др.) се нанасят в тънък слой върху предметно стъкло, плътно се покриват с покривно стъкло и се изследват при ниско и голямо увеличение на микроскопа.

а) За диагностициране на цистицеркоза на кожата, подкожната тъкан или мускулите първо се изследва с невъоръжено око асептично изрязано парче от съответната тъкан. Тъканните срезове се раздалечават с помощта на дисекционни игли, за да се открие везикула, видима с просто око - цистицерк (снимка А); дължината му е 6-20 мм, ширината е 5-10 мм. Когато се открие мехурче, което е съмнително за цистицерк, то се смачква между две предметни стъкла и се изследва под микроскоп. Cysticercus (Cistycercus cellulosae) се определя от наличието на сколекс с четири издънки и ореол от куки (снимка B).

снимка.А - цистицерки със сколекси, обърнати навън; B - Глава на свинска тения.

б) За диагностициране на трихинелоза, асептично нарязано парче мускул (бицепс или гастрокнемиус) внимателно се натрошава в 50% разтвор на глицерол в най-тънките влакна с помощта на дисекционни игли. Натрошените мускули се притискат между две предметни стъкла и се изследват при ниско увеличение на микроскопа в затъмнено зрително поле. Изследването на мускулите за трихинелоза се препоръчва да се извърши не по-рано от 8-ия ден от заболяването. Ларвите на трихинелата са в мускулите в навита позиция: те са затворени в капсули с форма на лимон.

снимка.А - ларви на трихинела в мускулите; Б - Калцирани капсули от трихинела.

Флуороскопия

Най-често флуороскопията се използва за диагностициране на ехинококоза и по-рядко цистицеркоза. Цистицерките се откриват чрез флуороскопия само след калцификация (в случаите продължително боледуване). През последните години флуороскопията също се използва за диагностициране на аскаридоза както в ранния ларвен стадий, така и отчасти в чревния стадий.

По време на миграцията на ларвите на ascaris (и анкилостома) в белите дробове се откриват нестабилни, понякога множество възпалителни огнища; в същото време се появява значителна еозинофилия в кръвта.

Полово зрелите кръгли червеи са ясно видими при флуороскопия на червата на засегнатите индивиди. Този метод, въпреки неговата сложност и тромавост, трябва да се използва като допълнителен метод за диагностициране на аскаридоза в случаи с отрицателен скатологичен анализ. Според E. S. Geselevich, от 180 пациенти с аскариаза, идентифицирани чрез флуороскопия, 54 яйца от ascaris не са открити в изпражненията (виж).

7.7. Методи за определяне на жизнеспособността на яйца и ларви на хелминти

Жизнеспособността на яйцата на хелминтите се определя от външния им вид, чрез оцветяване с витални багрила, чрез култивиране в оптимални условияи създаване на биологична проба.

7.7.1. Определяне на жизнеспособността на яйца или ларви на хелминти по външен вид

Яйцата на хелминтите се микроскопират първо при ниско увеличение, след това при голямо увеличение. При деформирани и мъртви яйца на хелминти черупката е разкъсана или огъната навътре, плазмата е мътна, разхлабена. В сегментираните яйца топчетата за разцепване (бластомерите) са различни по размер, с неправилна форма и често изместени към единия полюс. Понякога има анормални яйца, които, имайки външни деформации, се развиват нормално. В живите ларви на кръгли червеи фината грануларност присъства само в средната част на тялото, докато умират, тя се разпространява по цялото тяло, появяват се големи блестящи хиалинови вакуоли, така наречените "низи от перли".

За да определите жизнеспособността на зрели яйца на кръгли червеи, камшични червеи, острици, трябва да се обадите активни движенияларви чрез леко нагряване на препарата (до температура не по-висока от 37 ° C). По-удобно е да се наблюдава жизнеспособността на ларвите на ascaris и камшичен червей, след като са изолирани от черупката на яйцето чрез натискане върху покривното стъкло на препарата с дисекционна игла или пинсети.

При инвазивните ларви на ascarids често се вижда капачка, която се е ексфолирала в края на главата, а при ларвите на камшичестите червеи, които са завършили развитието си в яйцето, при голямо увеличение на това място се открива стилет. Мъртвите ларви на хелминти, независимо от тяхното местоположение (в яйцето или извън него), забелязват разпадането на тялото. При което вътрешна структураларвата става бучка или гранулирана, а тялото е мътна и непрозрачна. В тялото се намират вакуоли, а на кутикулата се откриват счупвания.

Жизнеспособността на тениидните онкосфери (говежда, свинска тения и др.) се определя от движението на ембрионите, когато са изложени на храносмилателни ензими. Яйцата се поставят върху часовниково стъклос кучешки стомашен сок или изкуствен дуоденален сок. Съставът на последния: панкреатин - 0,5 g, натриев бикарбонат - 0,09 g, дестилирана вода - 5 ml. Часовникови стъкла с яйца се поставят в термостат при 36 - 38°С за 4 часа. В този случай живите ембриони се освобождават от мембраните. Обвивките на живите онкосфери също се разтварят в подкиселен пепсин и в алкален разтвортрипсин след 6-8 часа в термостат при 38 °C.

Ако яйцата на тениите се поставят в 1% разтвор на натриев сулфид или 20% разтвор на натриев хипохлорит, или в 1% разтвор на хлорна вода при 36 - 38 ° C, зрелите и живи ембриони се освобождават от черупките и не промяна за 1 ден. Незрелите и мъртви онкосфери се свиват или набъбват и се уголемяват драматично и след това се "разтварят" в рамките на 10 минути до 2 часа. Живите ембриони на тениидите също се движат активно в смес от 1% разтвор на натриев хлорид, 0,5% разтвор на натриев бикарбонат и жлъчка при 36 - 38 ° C.

Жизнеспособността на fasciolia adolescariae, събрана от растения и други обекти от водни обекти, се проверява чрез изследването им върху предметно стъкло във физиологичен разтвор под микроскоп с нагряващ етап. При нагряване ларвите на трематодите в кистата започват да се движат.

За да се определи жизнеспособността на яйцата на малката тения, методът на Ionina N.S. е най-простият: в живите яйца средната двойка ембрионални куки е или успоредна на страничните, или последните образуват ъгъл в основата на по-малко от 45 ° с медианата. В мъртвите яйца страничните двойки образуват ъгъл в основата със средна двойка повече от 45 ° или куките са произволно разпръснати (тяхното сдвоено разположение е загубено); понякога има набръчкване на ембриона, образуване на грануларност. По-точен метод се основава на появата на движения на онкосферата по време на рязка промяна на температурата: от 5 - 10 ° до 38 - 40 ° C.

Определянето на жизнеспособността на незрели яйца на нематоди трябва да се изследва във влажна камера (блюда на Петри), поставяйки яйца на ascaris в 3% разтвор на формалин, приготвен в изотоничен разтвор на натриев хлорид при температура 24 - 30 ° C, яйца на камшичен червей в 3 % разтвор на солна киселина при температура 30 - 35 ° С; яйца на острици в изотоничен разтвор на натриев хлорид при 37 °C. Петриевите блюда трябва да се отварят 1 - 2 пъти седмично за по-добра аерация и повторно навлажняване на филтърната хартия чиста вода.

Наблюденията за развитието на яйцата на хелминтите се извършват най-малко 2 пъти седмично. Липсата на признаци на развитие в рамките на 2-3 месеца показва тяхната нежизнеспособност. Признаци за развитието на хелминтни яйца са първо етапите на раздробяване, разделянето на съдържанието на яйцето на отделни бластомери. През първите дни се развиват до 16 бластомера, които преминават във втори стадий - морула и т.н.

Яйцата на анкилостомите се култивират в стъклен цилиндър (висок 50 cm и диаметър 7 cm), затворен със запушалка. Смес от равни обемистерилен пясък, въглен и изпражнения с яйца от анкилостоми, разредени с вода до полутечна консистенция, внимателно се изсипват върху дъното на цилиндъра с помощта на стъклена тръба. По време на 1 - 2 дни утаяване на тъмно при температура 25 - 30 ° C, рабдитоидните ларви се излюпват от яйцата и след 5 - 7 дни те вече стават филариформени: ларвите пълзят нагоре по стените на цилиндъра, където се се виждат дори с просто око.

Яйцата на трематоди, които естествено се развиват във вода, като описторхис, дифилоботрииди, фасциоли и други, се поставят върху часовниково стъкло, петриево блюдо или в друг съд и се излива малък слой обикновена вода. При култивиране на яйца на фасциола трябва да се има предвид, че те се развиват по-бързо на тъмно, докато мирацидият се образува в живи яйца при температура 22–24 ° C след 9–12 дни. При микроскопия на развиващите се трематодни яйца ясно се виждат движенията на мирацидия. Fasciola miracidium излиза от черупките на яйцата само на светлина.

Метод на Фуллеборн. Ларвите на анкилостомата и стронгилида се култивират върху агар в петриево блюдо с животински въглен. След задържане в термостат при температура 25 - 30 ° C в продължение на 5 - 6 часа, ларвите се разпространяват върху агара, оставяйки след себе си пътека от бактерии.

Метод на Харада и Мори. 7 ml дестилирана вода се добавят към епруветките, поставени в стойка. Вземете 0,5 g изпражнения с дървена клечка и направете намазка върху филтърна хартия (15 х 150 mm) на 5 cm от левия ръб (тази операция се извършва върху лист хартия, за да се предпази повърхността на лабораторната маса). След това лентата с петна се вкарва в епруветката така, че левият край, свободен от петна, да достигне дъното на епруветката. Покрийте горния край с парче целофан и го увийте плътно с ластик. На епруветката напишете номера, името на предмета. В това състояние епруветките се съхраняват 8-10 дни при температура 28 °С. За да изследвате ларвите, отстранете и отстранете целофановото покритие и отстранете лента от филтърна хартия с пинсети. В този случай трябва да се внимава, тъй като малък брой инфекциозни ларви могат да се придвижат до горния край на филтърната хартия или до стената на епруветката и да проникнат под повърхността на целофана.

Епруветките се поставят в гореща водна баня при 50°C за 15 минути, след което съдържанието се разклаща и бързо се излива в 15 ml епруветка за утаяване на ларви. След центрофугиране, супернатантата се отстранява и утайката се прехвърля върху предметно стъкло, покрива се с покривно стъкло и се микроскопира при слабо увеличение.

За диференциална диагноза на филариформени ларви е необходимо да се използват данните в таблица 3.

Таблица 3

ДИФЕРЕНЦИАЛНА ДИАГНОСТИКА НА ФИЛАРИИРАНИ ЛАРВОИ НА A. DUODENALE, N. AMERICANUS, S. STERCORALIS, triCHOStrONGYLUS SP.

Ларви	Размери	Характерни особености
A. duodenale	Дължина на тялото около 660 микрона, шапка - 720 nm	Набраздяването на капачката е по-слабо изразено, изпъкналостта на устата е по-малко забележима, предният край на тялото (но не и капачката) е тъп, диаметърът на чревната тръба е по-малък от луковицата на хранопровода, опашният край е тъп
N. americanus	Дължина на тялото около 590 μm, шапка - 660 nm	Обвивката е забележимо набраздена, особено в опашната част на тялото, устата изглежда тъмна, предният край на тялото (но не обвивката) е закръглен като тесен край. кокоше яйце, предната част на чревната тръба с диаметър като луковицата на хранопровода, опашният край е остро заострен
S. stercoralis	Дължина на тялото около 500 µm	Ларва без капачка, хранопроводът е около половината от дължината на тялото, опашката е тъпа или разклонена
Trichostrongylus sp.	Дължина на тялото около 750 микрона	Чревният лумен не е прав, а зигзагообразен, каудалният край е заоблен и има формата на копче

7.7.2. Методи за оцветяване на яйца и ларви на хелминти

Мъртвите тъкани в повечето случаи възприемат цветовете по-бързо от живите. Тези характеристики се използват в хелминтологията за определяне на жизнеспособността на яйцата и ларвите на хелминтите. В някои случаи обаче някои бои се възприемат по-добре от живите тъкани, отколкото от мъртвите.

За диференциалното определяне на живи и мъртви яйца и ларви се използват следните бои и методи.

Метилен синьо левкобаза често се използва за оцветяване на живи и мъртви тъкани. жива клеткаили тъканта редуцира метиленово синьо до безцветна левкобаза, мъртвата тъкан няма тази способност и следователно придобива цвят.

Критерият за състоянието на яйцето е оцветяването на ембриона, но не и на черупката. Тази способност е свързана с условията на смърт на яйцеклетката. В случаите, когато влакнестата обвивка в мъртвото яйце не губи своите полупропускливи свойства, тя няма да премине багрила, следователно мъртвият ембрион няма да бъде оцветен. Оцветеният ембрион винаги показва смъртта на яйцето.

За оцветяване на яйца на Ascaris можете да използвате метиленово синьо в разтвор на млечна киселина с каустик алкали (метиленово синьо 0,05 g, сода каустик 0,5 g, млечна киселина - 15 ml). Живите яйца не възприемат цвят; са боядисани в Син цвятембриони от мъртви яйца. Ларвите на Ascaris се оцветяват с основен разтвор на брилянтно-крезилова синя боя в концентрация 1:10 000, както следва: капка течност с яйца на ascaris и капка основен разтвор на боята се нанасят върху предметно стъкло. Препаратът се покрива с покривно стъкло, което се притиска плътно към предметното стъкло с леко почукване с дисекционна игла. Под микроскоп се наблюдават броят на излюпените ларви и степента на тяхното оцветяване; след което същото лекарство се преразглежда отново след 2 до 3 часа. Само недеформирани ларви, които не са оцветени в продължение на 2 часа, се считат за живи. Мъртвите ларви или не излизат от яйцата, или се оцветяват, когато черупката се счупи (частично или напълно).

При определяне на жизнеспособността на яйцата на птиците Ascaridia е възможно препаратите да се оцветят с 5% алкохолен разтворйод. Когато се прилага към лекарството, ембрионите на мъртвите яйца на ascarid за 1 - 3 секунди. са боядисани в оранжево.

Мъртвите яйца на описторхиса и онкосферите на говежди тения се оцветяват с разтвор на толуидиново синьо (1: 1000), а мъртвите онкосфери на говежди тения се оцветяват с разтвор на брилянтно-крезилово синьо (1: 10 000). В същото време ембрионите и черупките на мъртвите и живите яйца придобиват цвят. Следователно, след оцветяване, яйцата и онкосферите се измиват чиста водаи допълнително ги оцветете със сафранин (в разреждане 1:10 000 алкохол 10 ° C). Алкохолът премахва боята от черупките, а сафранинът оцветява в червено. В резултат на това живите яйца стават червени; яйца с мъртви ембриони - в синьо, а черупката остава червена. Мъртвите ембриони на онкосфери от говежди тения бързо, в рамките на няколко минути, се оцветяват в яркочервено или розово със сафранин или синьо с брилянтно-крезилово синьо при разреждане 1:4000 или с индигокармин при разреждане 1:1000 - 1 :2000. Живите ембриони не се променят под въздействието на тези цветове дори след 2 - 7 часа.

За да се определи жизнеспособността на яйцата на малката тения, се препоръчва използването на следните бои:

1. Брилянтно creasyl blue (1:8000) - след 1 час онкосферата на мъртвите яйца е особено ярко оцветена, което се откроява рязко на бледия или безцветен фон на останалата част от яйцето.

2. Сафранин (1:8000 за 2 часа и 1:5000 за 3 до 5 часа).

3. 50% разтвор на пирогалова киселина в разреждане 1: 2 - при излагане в продължение на 1 час при температура 29 - 30 ° C (колкото по-ниска е температурата, толкова по-дълъг е процесът на оцветяване).

7.7.3. Луминесцентен метод за изследване на яйца и ларви на хелминти

Флуоресцентната микроскопия дава възможност да се разграничат живи и мъртви обекти, без да се повреди яйцето. Не се използва за флуоресценция ултравиолетови лъчи, и синьо-виолетовата част на видимата светлина, с обикновен микроскоп и предметни стъкла; към осветителя OI-18 се добавя специален набор от цветни филтри.

Живите и мъртвите яйца на кръгли червеи, острици, малки тении, говежди тении, тении и други хелминти светят по различен начин. Това явление се наблюдава както по време на първична луминесценция без използване на багрила, така и при оцветяване с флуорохроми (акридин оранжево, корифосфин, примулин, ауролин, берлерин сулфат, трипафлавин, риванол, хинакрин и др.).

Неоцветени, живи несегментирани яйца на кръгли червеи светят ярко зелено с жълтеникав оттенък; в мъртвите яйца черупката излъчва зелена светлинамного по-ярка от тъмнозелената зародишна част; при яйцата на кръгли червеи с ларва се появява само черупката, докато при мъртвите и черупката, и ларвата са ярко жълти.

Непигментираните и несегментираните живи яйца на острици и тении джуджета излъчват зеленикаво-жълта светлина; в мъртвите яйца черупката интензивно свети на фона на тъмнозелена ембрионална маса.

С вторична луминесценция (при оцветяване на акридиново оранжево при разреждане 1: 10 000 и 1: 50 000 от 30 минути до 2 часа) черупката на живи и мъртви нематоди, трематоди и цестоди луминесцира по различен начин.

Черупката на живи и мъртви яйца на аскариди, токсокар, острици, малки тении, плъхове тении, бичи тении, тении става оранжево-червена. Ембрионите на живи яйца на ascaris, toxascaris, плъши тения, широка тения и онкосфера на говежда тения луминесцират с матово тъмнозелено или сиво-зелено. Мъртвите ембриони от яйца на тези хелминти излъчват "горящ" оранжево-червен цвят. Живите ларви на острици и токсокари (яйчени черупки) излъчват матова сиво-зелена светлина, когато умрат, цветът се променя от края на главата до "горящо" светлозелено, след това жълто, оранжево и накрая до ярко оранжево.

При оцветяване с флуорохроми - корифосфилум, примулин, мъртвите яйца на аскариди и червеи показват блясък от лилаво-жълто до медно-червено. Жизнеспособните яйца не луминесцират, а стават тъмнозелени.

Живите яйца на трематодите (Paragonimus и Clonorchis) не луминесцират след оцветяване с акридиново оранжево, а от мъртвите яйца идва жълтеникаво-зелен цвят.

Методът на луминесценция може да се използва и за определяне на жизнеспособността на ларвите на хелминтите. И така, флуорохромирани с разтвор на акридин оранжев (1: 2000) ларви на стронгилат, рабдита светят: живи - зелени (с нюанс), мъртви - ярко оранжева светлина.

Живите мирацидии, които са излезли от черупката, излъчват слаба синкава светлина с едва забележимо светло жълто венче от реснички, но 10-15 минути след смъртта те се появяват като ярка "горяща" светлозелена, а след това оранжево-червена светлина.

7.7.4. биологичен метод за изследване

Например, за да се определи жизнеспособността на яйцата от аскариди (аскариди, прасета, хора, токсокари, токсаскари и др.) На животно (морски свинчета, мишки) са необходими най-малко 100 - 300 яйца с развита ларва. Яйцата Ascaris в изотоничен разтвор на натриев хлорид се пипетират през устата на мишка или морско свинче. След 6-7 дни животното се заколва, отваря се и отделно се изследват черния и белия дроб за наличие на ларви на аскарис. За целта черният дроб и белите дробове се нарязват на малки парчета с ножица и се изследват по метода на Берман или Супряга (точка 6.1.2).

Ако животните са били заразени с живи инвазивни яйца, тогава при аутопсия в черния дроб и белите дробове се откриват мигриращи ларви на Ascaris.

В случай на инфекция, яйцата на Fasciola във фекалиите на лабораторни животни могат да бъдат открити при зайци след 2 месеца, в морски свинчета- след 50 дни, при мишки - след 35 - 40 дни.

За по-бърза реакция лабораторните животни се отварят след 20-30 дни и черният дроб се изследва за наличие на млади фасциоли.

За да се определи жизнеспособността на яйцата на малката тения, се препоръчва също така да се хранят с тях незаразени преди това бели мишки, последвано от аутопсия на животните след 92-96 часа и откриване на цистицеркоиди в чревните въси или цестоди в чревния лумен.

За определяне на жизнеспособността на яйцата на описторхиса се препоръчва метод (German S.M., Beer S.A., 1984), базиран на физикохимичното активиране на жлезата за люпене на мирацидиум и стимулация двигателна активностларви, което води до отваряне на капака на яйцето и активно освобождаване на мирацидий при експериментални условия.

Суспензия от яйца на описторхис във вода се охлажда предварително до 10 - 12 ° C (всички последващи операции се извършват при стайна температура 19 - 20 ° C). 1 капка суспензия, съдържаща 100-150 яйца, се добавя към центрофужна епруветка. Епруветката се поставя в статив за 5-10 минути. През това време всички яйца имат време да потънат на дъното. След това с лента от филтърна хартия внимателно се изсмуква излишната вода и в епруветката се добавят 2 капки специална среда. Средата се приготвя в 0.005 М Tris-HCl буфер; Към буфера се добавят 12 - 13% разтвор на етанол и багрило (магента, сафранин, еозин, метиленово синьо и др.). Епруветката се разклаща, съдържанието й се прехвърля с пипета върху предметно стъкло и се оставя за 10 минути при леко разклащане. След това добавете 2 капки от посочената среда. Препаратът е готов за микроскопиране под конвенционален светлинен микроскоп при 20x увеличение.

През това време капакът на жизнеспособните ларви се отваря и мирацидиумът активно навлиза в посочената среда. Поради наличието на етанол в него, те се обездвижват след 2-5 минути и след това се оцветяват с багрило. Те могат лесно да бъдат открити и преброени под микроскоп.