Анализ за сифилис ELISA - интерпретация на анализа. Норма и отклонения

Във връзка с развитието на клетъчните технологии, молекулярната биология, генетиката, физиката, химията и редица други високотехнологични дисциплини в ежедневната практика се въвеждат нови високопрецизни и високотехнологични методи. Тези интердисциплинарни тенденции засягат както областта на медицинските познания, така и свързаните с тях области на биологични и биохимични проблеми. През последните десет години клинично-лабораторният диагностичен метод, наречен ензимен имуноанализ, стана широко разпространен и въведен в масовата практика.

Като цяло технологиите на имунологичните ензимни и радиологични реакции са широко използвани при типизиране на клетки, клетъчни култури и различни тъкани от началото на 80-те години на 20 век. Тези методи обаче бяха много трудоемки, неунифицирани, нестандартизирани, което изключваше масовото им използване за диагностични и лечебни цели. Такива методи се използват само от тесни, интензивни и високоспециализирани лаборатории.

Въпреки това, с развитието на технологиите, микротехнологиите и производството на различни биополимерни материали, стана възможно да се произвеждат готови ензимно свързани имуносорбентни диагностични комплекти, които могат да се използват от лаборатории на общи медицински институции. ELISA се използва широко за диагностициране на всякакви инфекции (хламидия, сифилис, цитомегаловирус, токсоплазмоза, херпес и др.), както остри, така и хронични, както и латентни форми, които протичат без клинични симптоми.Този метод се използва и за контрол на хронични заболявания . Нека се опитаме да разберем какъв метод е това и какви принципи са в основата му?

Компоненти на имуноензимния анализ - имунна реакция и ензимна реакция

Ензимният имуноанализ, както подсказва името, се състои от два различни компонента - имунна реакция и ензимна реакция. Имунната реакция произвежда свързването на биологични молекули, елементи на клетка или микроорганизъм, които всъщност се опитват да открият, а ензимната реакция ви позволява да видите и измерите резултата от имунологичната реакция. Тоест, имунната реакция е част от сложна техника, която всъщност открива желания микроб. И ензимната реакция е тази част от сложна техника, която ви позволява да преобразувате резултата от имунната реакция във форма, видима за окото и достъпна за измерване с помощта на рутинни химични техники. Въз основа на тази структура на метода за имуноензимен анализ ще анализираме двете му части поотделно.

Имунна реакция, какво е това? Какво е антитяло или антиген?

Какво е имунен отговор? Какво е антиген?
Първо, нека да разгледаме какво представляват имунните реакции. Имунни реакции– това са специфични реакции на свързване на антиген с антитяло с образуването на имунен комплекс. Какво означава? На повърхността на всяка клетка на всеки организъм има специални структури, наречени антигени. Антигените като цяло са молекули, които носят информация за клетка (подобно на информацията върху значката на човек, която показва основните данни на това лице).

Индивидуални и видови антигени – какво представляват? Защо са необходими тези антигени?

На разположение индивидуални антигени, тоест присъщи само на този конкретен организъм. Тези индивидуални антигени са различни за всички хора; има някои, които са подобни един на друг, но все пак са различни. В природата не съществуват две еднакви копия на отделните антигени!

Вторият основен тип антиген е видови антигени, тоест присъщи на всеки конкретен вид живи същества. Например, хората имат свой собствен видов антиген, общ за всички хора, мишките имат собствен миши видов антиген и т.н. На повърхността на всяка клетка задължително присъства специфичен и индивидуален антиген.

Видовият антиген се използва от клетките на имунната система за разпознаване на „приятел или враг“.

Как става разпознаването на антигена?

Имунната клетка се свързва със съмнителната клетка и прави идентификация въз основа на индивидуалния антиген. В паметта на имунната клетка се „записва“ как изглежда „нейният антиген“. По този начин, ако антигенът на подозрителна клетка отговаря на описанието „собствен антиген“, тогава тази собствена клетка на тялото не представлява опасност. Тогава имунната клетка се „отвързва“ и си тръгва. И ако антигенът не отговаря на описанието на „себе си“, тогава имунната клетка идентифицира тази клетка като „чужда“ и следователно потенциално опасна за целия организъм. В този случай имунната клетка не се „разхлабва“, а започва да унищожава опасния обект. Точността на подобно имунологично разпознаване е удивителна – 99,97%. Практически няма грешки!

Какво е антитяло, имунен комплекс?
Какво е антитяло?

Антитялото е специална молекула, разположена на повърхността на имунната клетка. Това е антитялото, което се свързва с антигените на подозрителната клетка. След това антитялото предава информация вътре в клетката, където се извършва разпознаването, и получава обратен сигнал от два вида, „собствен“ или „чужд“. Когато получи "самостоятелен" сигнал, антитялото прекъсва връзката с антигена и освобождава клетката.

Какво е имунен комплекс?
Когато сигналът е „непознат“, ситуацията се развива по различен начин. Антитялото не прекъсва връзката с антигена, а напротив, изпращайки специфични сигнали, предизвиква „подсилване“. Биологично това означава, че други антитела, разположени в друга част на клетката, започват да се придвижват към мястото, откъдето идва сигналът за опасност, и също така образуват връзка между себе си и уловения антиген. В крайна сметка антигенът се оказва обграден от всички страни и здраво закрепен.Този комплекс антиген + антитяло се нарича имунен комплекс. От този момент започва използването на антигена. Но сега не се интересуваме от подробностите на процеса на неутрализация на антигена.

Видове антитела (IgA, IgM, IgG, IgD, IgE)
Антителата са протеинови структури, които съответно имат химично наименование, което се използва като синоним на думата антитяло. Така, антитела = имуноглобулини.

Има 5 вида имуноглобулини (Ig), които се свързват с различни видове антигени на различни места в човешкото тяло (например върху кожата, върху лигавиците, в кръвта и др.). Тоест, антителата имат разделение на труда. Тези имуноглобулини се наричат ​​с буквите от латинската азбука - A, M, G, D, E и се обозначават по следния начин - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

При диагностиката се използва само един вид антитяло, което е най-специфично за откривания микроб. Тоест свързването на този тип антитяло с открития антиген винаги се случва. Най-често използваните са IgG и IgM.

Именно този принцип на имунната реакция (уникалната точност и специфичност на разпознаването на определяния биологичен обект) е в основата на ензимния имуноанализ. Поради високата точност на антителата при разпознаване на антигени, точността на целия метод на ензимен имуноанализ също е най-високата.

Ензимна реакция

Коя реакция е ензимна? Какво са афинитет, субстрат и продукт на реакция?
Нека да преминем към разглеждане на ензимната реакция в работата на метода за имуноензимен анализ.

Какво е ензимна реакция?

Ензимната реакция е химическа реакция, при която едно вещество се превръща в друго чрез действието на ензим. Веществото, върху което действа ензимът, се нарича субстрат. А веществото, което се получава в резултат на действието на ензима, се нарича реакционен продукт. Освен това, особеностите на ензимната реакция са такива, че определен ензим действа само върху определен субстрат. Това свойство на ензима да разпознава „своя“ субстрат се нарича афинитет.

Така всеки ензим извършва само една специфична за него реакция. В биологичния свят има много известни ензими, както и ензимни реакции. При ензимно-свързаната имуносорбентна диагностика се използват само няколко ензимни реакции - не повече от 10. В същото време бяха избрани такива ензимни реакции, чийто продукт са оцветени вещества. Защо продуктите от ензимната реакция трябва да бъдат оцветени? Тъй като за да се изчисли концентрацията на вещество от оцветен разтвор, има прост химичен метод - колориметрия.

Колориметричен метод – същност и принцип

Колориметрияизползва измерването на плътността на цвета на разтвор, а концентрацията на веществото се изчислява от плътността на цвета.В този случай специално устройство - колориметър измерва плътността на цвета на разтвора. В колориметрията има два възможни варианта за зависимост на плътността на цвета от концентрацията на веществото - правопропорционална зависимост или обратно пропорционална зависимост. При пряко пропорционална връзка, колкото по-висока е концентрацията на веществото, толкова по-интензивна е плътността на цвета на разтвора. При обратно пропорционална връзка, колкото по-висока е концентрацията на веществото, толкова по-ниска е плътността на цвета на разтвора. Технически това се случва по следния начин: вземат се няколко разтвора с известна концентрация на вещество, измерва се плътността на тези разтвори и се изгражда графика на зависимостта на концентрацията от плътността на цвета ( диаграма за калибриране).

След това се измерва плътността на цвета на разтвора, чиято концентрация се определя, и от графиката за калибриране се намира стойността на концентрацията, съответстваща на нивото на измерената плътност на цвета на разтвора.В съвременните автоматични колориметри калибрирането е се извършва само веднъж, след което уредът сам изгражда калибровъчна крива, която остава в паметта на уреда и измерването става автоматично.

Най-често в ензимния имуноанализ се използват следните ензими: пероксидаза, алкална фосфатаза, авидин.

Как се комбинират имунологичните и ензимните реакции в ензимен имуноанализ? Сега ще преминем към разглеждане на самия ензимен имуноанализ. Какви етапи включва и какво се случва по време на тези реакции? Ензимен имуноанализ може да бъде преки и непреки.

Директен имуноензимен анализ - етапи на изпълнение

При директен ензимен имуноанализ се използват антитела към открития антиген, комбинирани със специфичен етикет. Този специфичен етикет е субстратът на ензимната реакция.

Прикрепване на антигени към повърхността на ямката и комбиниране на антиген с антитяло

Как се извършва директен ензимен имуноанализ? Взима се биологичен материал (кръв, изстъргвания от лигавиците, петна) и се поставя в специални отвори. Биологичният материал се оставя в ямките за 15-30 минути, за да могат антигените да полепнат по повърхността на ямките. След това към тези ямки се добавят антитела към открития антиген. Това означава, че при откриване на антигени, например сифилис, се добавят антитела срещу антигени на сифилис. Тези антитела се получават промишлено и лабораториите купуват готови комплекти.Тази смес от тестовия материал и антитела се оставя за известно време (от 30 минути до 4-5 часа), за да могат антителата да намерят и да се свържат с "своя" антиген. Колкото повече в биологичната проба антигени, толкова повече антитела ще се свържат с тях.

Премахване на „допълнителни“ антитела

Както е посочено, антителата също са свързани със специфичен етикет. Тъй като антителата се добавят в излишък, не всички от тях ще се свържат с антигени и ако няма антиген в пробата, тогава, съответно, нито едно антитяло няма да се свърже с желан антиген. За да се отстранят „допълнителните“ антитела, съдържанието на ямките просто се излива. В резултат на това всички "допълнителни" антитела се отстраняват и тези, които са се свързали с антигените, остават, тъй като антигените са "залепени" към повърхността на ямките. Ямките се изплакват няколко пъти със специален разтвор, който ви позволява да отмиете всички „допълнителни“ антитела.

След това започва вторият етап - ензимната реакция. Разтвор с ензим се добавя към измитите ямки и се оставя за 30-60 минути. Този ензим има афинитет към веществото (специфичен етикет), към което са свързани антителата. Ензимът извършва реакция, която превръща този специфичен етикет (субстрат) в оцветено вещество (продукт). След това с помощта на колориметрия се намира концентрацията на това оцветено вещество. Тъй като този специфичен етикет е свързан с антитела, това означава, че концентрацията на оцветения реакционен продукт е равна на концентрацията на антителата. А концентрацията на антитела е равна на концентрацията на антигени. Така в резултат на анализа получаваме отговор каква е концентрацията на открития микроб или хормон.

Точно така работи директният ензимен имуноанализ. Днес обаче индиректният ензимен имуноанализ се използва по-често, тъй като чувствителността и точността на индиректния е по-висока от директния. И така, нека да преминем към индиректния ензимен имуноанализ.

Индиректен имуноензимен анализ - етапи на изпълнение

Индиректният ензимен имуноанализ има два етапа. През първия етап се използват небелязани антитела към откритите антигени, а през втория етап се използват белязани антитела към първите небелязани антитела. Тоест, това не е директно свързване на антитяло с антиген, а двоен контрол: свързване на антитела с антиген, последвано от свързване на втори антитела към комплекса антитяло + антиген. По правило антителата за първия етап са миши, а за втория - кози.

Фиксиране на антигени върху повърхността на ямката и свързване на антигена с небелязано антитяло
Както при директния имуноензимен анализ, се събира биологичен материал - кръв, остъргвания, намазки. Изследваният биологичен материал се въвежда в ямките и се оставя за 15-30 минути, за да се залепят антигените към повърхността на ямките. След това към ямките се добавят небелязани антитела към антигените и се оставят за определен период от време (1-5 часа), така че антителата да се свържат със „своите“ антигени и да образуват имунен комплекс ( Първа стъпка). След това „допълнителните“ несвързани антитела се отстраняват чрез изливане на съдържанието на ямките. Измийте със специален разтвор, за да премахнете напълно всички несвързани антитела.

Свързване на белязано антитяло с комплекс антиген + небелязано антитяло
След това вземат вторите белязани антитела, добавят ги към ямките и отново оставят за известно време - 15-30 минути ( втора фаза). През това време белязаните антитела се свързват с първите – небелязаните – и образуват комплекс – антитяло + антитяло + антиген. Въпреки това, както белязани, така и небелязани антитела се добавят към ямките в излишък. Поради това е необходимо отново да се отстранят „допълнителните“ вече маркирани антитела, които не са се свързали с небелязани антитела. За да направите това, повторете процедурата за изливане на съдържанието на ямките и измиване със специален разтвор.

Ензимна реакция - образуване на оцветено съединение
След това се добавя ензим, който извършва реакцията на превръщане на „етикета“ в оцветено вещество. Цветът се развива в рамките на 5-30 минути. След това се извършва колориметрия и се изчислява концентрацията на оцветеното вещество. Тъй като концентрацията на оцветеното вещество е равна на концентрацията на белязаните антитела, а концентрацията на белязаните антитела е равна на концентрацията на небелязаните антитела, което от своя страна е равно на концентрацията на антигена. Така получаваме концентрацията на открития антиген.
Този двоен контрол под формата на използване на два вида антитела направи възможно повишаването на чувствителността и специфичността на метода за ензимен имуноанализ. Въпреки удължаването на времето за анализ и включването на допълнителни етапи, тези загуби се компенсират от точността на резултата. Ето защо понастоящем по-голямата част от методите за ензимен имуноанализ са индиректни ензимни имуноанализи.

Какви заболявания се откриват чрез имуноензимен анализ?

Нека да преминем към разглеждане на какви заболявания и какви биологично активни вещества се откриват чрез ензимен имуноанализ. Веществата, открити чрез ензимен имуноанализ, са представени в таблицата.

Хормони и маркери на заболяване на щитовидната жлеза	Тироидна пероксидаза (TPO)
	Тиреоглобулин (TG)
	Тиреоид-стимулиращ хормон (TSH)
	тироксин (Т4)
	Трийодтиронин (Т3)
	Свободен тироксин (Т4)
	Свободен трийодтиронин (Т3)
Диагностика на репродуктивната функция	Лутеинизиращ хормон (LH)
	Фоликулостимулиращ хормон (FSH)
	Пролактин
	Прогестерон
	Естрадиол
	тестостерон
	кортизол
	Стероид свързващ глобулин (SBG)
	Алфафетопротеин (AFP)
Туморни маркери	Хорионгонадотропин (CG)
	Простатно-специфичен антиген (PSA)
	SA – 125
	SA – 19.9
	CYFRA-21-1
	M – 12 (SA – 15.3)
	MUC – 1 (M – 22)
	MUC1 (M – 20)
	Алвеомуцин
	К – верига
	L – верига
	Фактор на туморна некроза (TNFα)
	γ – интерферон
	Карциноембрионален антиген (CEA)
Диагностика на инфекциозни заболявания

ELISA е модерен лабораторен тест, който търси специфични антитела в кръвта (или антигени) към специфични заболявания, за да идентифицира не само етиологията, но и стадия на заболяването.

1. търсене на специфични антитела към всяко инфекциозно заболяване;
2. търсене на антигени на всякакви инфекциозни заболявания;
3. изследване на хормоналния статус на пациента;
4. скрининг за наличие на автоимунни заболявания.

Както всеки метод за лабораторна диагностика, ELISA има своите предимства и недостатъци. Предимствата на метода включват:

1. висока специфичност и чувствителност на метода (повече от 90%);
2. способността за определяне на заболяването и проследяване на динамиката на процеса, т.е. сравняване на броя на антителата в различни периоди от време;
3. достъпност и бързина на това изследване;
4. неинвазивен метод за събиране на материал, а не изследване;

Недостатъкът на метода е фактът, че по време на анализа е възможно да се идентифицира не самият причинител на заболяването, а само имунният отговор към него (антитела).

Същността на метода ELISA

Има няколко вида ELISA: директен, индиректен, блокиращ метод, конкурентен. На практика обаче най-често се използва хетерогенният ензимно-свързан имуносорбентен анализ или ELISA.

Основата на ензимния имуноанализ е имунната реакция на антиген и антитяло с образуването на имунен комплекс, което води до промяна в ензимната активност на специфични белези на повърхността на антителата.

По същество този процес може да бъде разделен на няколко етапа:

1. на повърхността на ямките на таблетката с тестова система има пречистен антиген на специфичен патоген. Когато се добави животински кръвен серум, настъпва специфична реакция между този антиген и желаното антитяло;
2. След това към ямката се добавя специален хромоген (конюгат, белязан с пероксидаза). Протича ензимна реакция, която води до образуване на оцветена субстанция в ямката на плаката. Интензивността на цвета му зависи от количеството имуноглобулини (антитела), съдържащи се в серума на животното;
3. След това се оценява резултатът. С помощта на многоканален спектрофотометър оптичната плътност на тестовия материал се сравнява с оптичната плътност на контролните проби и резултатите се обработват математически. Количеството антитела в пациента зависи пряко от височината на оптичната плътност на дадено гнездо.

Трябва да се помни: за всяка тестова система са разработени индивидуални индикатори за записване на резултатите, показатели за нормалност и патология („референтни стойности“). Това трябва да се има предвид при оценката на резултатите от всяко конкретно изследване.

Неправилно е резултатите от една лаборатория да се тълкуват въз основа на „референтните стойности“ на друга лаборатория. Също така е некоректно да се сравняват резултатите от различни лаборатории една с друга.

При оценката на резултатите за специфични инфекции класът на откритите антитела и тяхното количество са важни. От това зависи не само въпросът за етиологията на инфекцията, но и очакваният стадий на заболяването (остър, хроничен), както и наличието на активна инфекция (остра или обостряне на хронична) по време на изследването.

Какъв е приблизителният срок за появата на антитела?

Най-ранните антитела са IgM. Те могат да бъдат открити 1-3 седмици след евентуална инфекция, което характеризира острата фаза на инфекциозния процес. Втората ситуация за появата на IgM антитела е обостряне на хроничен процес. IgM циркулират средно около 3 месеца, след което количеството им постепенно изчезва. Въпреки това, при някои пациенти следи от IgM могат да бъдат открити в рамките на 1-2 години след инфекцията.

От 4-та седмица след инфекцията започват да се появяват IgG антитела. При повечето инфекции техният титър постепенно се увеличава с максимум в различно време (средно след 1,5-2 месеца), след което титърът остава на ниско ниво и показва имунитет. При някои заболявания нивата на IgG не са високи.

Опции за откриване на антитела

• Изолираното откриване на IgM антитела предполага наличието на първична инфекция.
• Едновременното откриване на IgM и IgG в кръвта е характерно за първична инфекция през предходните 2-3 месеца, както и по време на обостряне на хронично заболяване.
• Откриването на изолиран IgG може да показва както имунитет към болестта, така и хронична инфекция. Във втората ситуация е важно както количеството антитела (титър), така и промяната в този титър във времето. Обикновено изследванията се провеждат на интервали от 2-4-6 седмици.

ELISA анализът е съвременна лабораторна диагностична техника за значителен брой различни заболявания. Съкращението означава ензимен имуноанализ. Същността на техниката е да се определи титърът (активността) на антителата.

Техниката ELISA в момента придобива значителна популярност. Използва се в клиничната медицина за диагностика на различни патологии, както и в експериментални изследвания, които изискват точно определяне на концентрацията на различни съединения в изследваната среда.

Принципът на техниката ELISA

Ензимният имуноанализ е имунологична реакция. Основава се на добавянето на специфични антитела
или антигени в тестовата среда (най-често кръвта, която се изследва), последвано от ензимно определяне на концентрацията на получените комплекси антиген-антитяло. Въз основа на концентрацията на комплекса може да се прецени нивото или активността на съединението, което се определя в тестовата среда.

Определянето на концентрацията на комплексите антиген-антитяло обикновено се извършва с помощта на специално оборудване, използвайки хроматографски метод.

Показания за употреба

ELISA анализът се извършва за различни показания, основните в клиничната медицина са:

• Диагностика на инфекциозна патология с предимно сексуално предаване (ППИ), която включва хламидия, микоплазмоза, уреаплазмоза, трихомониаза, като същевременно се идентифицират специфични антитела към инфекциозния агент.
• Диагностика на инфекциозни заболявания с различна локализация за определяне на етапа на патологичния процес, предимно в процеса на диагностициране на парентерален вирусен хепатит и ХИВ.
• Определяне на концентрацията на хормони за диагностика на различни патологии на органите на ендокринната система (ендокринни жлези).
• Определяне на различни съединения за диагностициране на причината за интоксикация на тялото в случай на отравяне, ухапване от насекоми или змии.

За тези медицински показания се извършва кръвен тест ELISA. Тази техника се използва активно и в експерименталната медицина по време на различни клинични проучвания при разработването на нови лекарства и ваксини за имунопрофилактика.

Как се провежда изследването

Кръвен тест с помощта на ELISA се извършва в специализирана лаборатория. За да се извърши, първо се взема венозна кръв, обикновено от кубиталната вена в обем от 5-10 ml, която след това се изпраща в лабораторията. Средно резултатът от теста може да бъде получен още на следващия ден, което е важен момент за своевременно предписване на лечение след диагностициране на заболяването.

Как да се подготвим за ELISA

За да получите надеждни резултати от изследването с помощта на ензимен имуноанализ, трябва да следвате няколко прости подготвителни препоръки, които включват:

• В деня преди теста трябва да спрете да ядете мазни храни (месо, пушено месо) и алкохол.
• Материалът за изследването трябва да бъде предаден сутрин на празен стомах.
• В деня на изследването е препоръчително да се избягва физически и психо-емоционален стрес.
• Преди изследването трябва да се опитате да не пушите.

Повечето фалшиво положителни резултати от ензимно-свързан имуносорбентен тест се дължат на неправилно изпълнение на подготвителните препоръки. Това в повечето случаи се свързва с приема на мазни храни, което води до повишаване на концентрацията на триглицериди (мазнини) в кръвната плазма, което намалява специфичността на ELISA.

Декодиране на резултатите

Кръвният тест за антитела с помощта на ELISA има 2 модификации - качествено и количествено определяне. При
При качествено определяне на антитела резултатът може да бъде положителен (откриват се антитела, което показва възможно наличие на патологичен процес, причинен от инфекциозен агент) или отрицателен (няма антитела, което показва липса на инфекциозен процес).

Липсата на антитела не винаги е 100% показател за липсата на инфекциозен процес. Това се дължи на факта, че след инфекцията антителата не се образуват веднага, а през определен период от време (поне около 2 седмици). Следователно, за да се потвърди липсата на инфекция, ELISA може да се повтори след известно време.

Количественият ELISA се използва за определяне на титъра (активността) на антителата, както и техните класове. В повечето случаи за диагностициране на инфекциозни заболявания се определят антитела от класове IgG (имуноглобулин G) и IgM (имуноглобулин М), които се образуват в тялото на различни интервали след инфекцията, така че дешифрирането на резултата от теста може да има няколко значения:

• Увеличаването на активността на IgM и липсата на IgG е доказателство за скорошна инфекция и остър ход на инфекциозния процес.
• Увеличаването на активността на IgM и IgG е обостряне на инфекциозния процес по време на хроничния му ход и продължителна инфекция.
• Високата активност на IgG и липсата на IgM е хроничен ход на инфекциозния процес на фона на дългогодишна инфекция, след която са изминали повече от шест месеца (времето, необходимо за образуване на антитела от клас IgG).

Като цяло дешифрирането на резултатите от ELISA за всеки инфекциозен процес има определени характеристики. По-точното определяне на наличието на инфекциозно заболяване, както и етапа на неговото протичане, се извършва от лекар.

Понастоящем ELISA е методът на избор за диагностициране на повечето инфекциозни заболявания. Въз основа на резултатите от такова изследване лекарят има възможност да установи точна диагноза и да определи етапа на патологичния процес, за да предпише последващо адекватно и ефективно лечение.

Съвременните диагностични техники позволяват да се идентифицира конкретно заболяване в лаборатория с помощта на специални тестове. Един от тях е ензимно-свързан имуносорбентен кръвен тест, който може да потвърди предварително поставена диагноза.

Ензимният имуноанализ ELISA е един от най-ефективните и съвременни методи за идентифициране на нарушения, свързани с имунен и хормонален дисбаланс, както и онкологични процеси. По време на теста в кръвта могат да бъдат открити антитела, произведени при наличие на инфекция в тялото. Като се вземе предвид този нюанс, болестта може да бъде открита дори в най-ранния стадий на нейното развитие.

Каква е основата на техниката?

Резултатите от ELISA анализа се основават на получаване на химични реакции към ензими, които служат като специални идентификационни знаци за разпознаване на антитела. Следователно, по време на имунохимичните реакции, антителата започват да взаимодействат с определени антигени. Всичко това дава основание да се твърди, че фалшивите резултати при кръводаряване на ELISA са минимални.

Проучването ви позволява да определите броя на имунните клетки, техните свойства, както и наличието на необходимите антитела

Резултатът се счита за положителен, когато се открие оцветяване на разтвора. Цветът показва, че антигените взаимодействат с антитялото. Ако нищо подобно не се случи, резултатът е отрицателен.

За цялостна оценка на защитните функции на организма се провежда ензимно-свързан имуносорбентен тест (ELISA). По време на изследването се определя броят и свойствата на имунните клетки и наличието на необходимите антитела. Кръвният тест ELISA се извършва за диагностициране на инфекциозни, хематологични, автоимунни заболявания, първични и вторични имунодефицити. Нека да разгледаме какво е кръвен тест ELISA и какви индикации съществуват за провеждането на това изследване.

Какво е

Кръвният тест по метода ELISA е лабораторен метод, с който се определят антитела или антигени в кръвна проба. Това изследване се използва за определяне на нивото на имуноглобулини, имунологични комплекси и хормони.

Показания за анализ

Съществуват следните показания за предписване на кръвен тест ELISA:

• диагностика на полово предавани инфекции - уреаплазма, микоплазма, хламидия, трихомонада, сифилис;
• диагностика на вирусни заболявания - цитомегаловирус, херпес, хепатит, вирус на Епщайн-Бар;
• определяне на хормоналните нива;
• диагностика на онкологични заболявания;
• определяне на имунодефицит;
• диагностика на алергии;
• предоперативен цялостен преглед преди трансплантация на органи;
• оценка на ефективността на терапията.

Принцип на метода

Принципът на действие на метода за ензимен имуноанализ се основава на определянето на специфични протеини на антитела в кръвта - имуноглобулини. Имуноглобулините се произвеждат от човешката имунна система, когато антигени (чужди микроорганизми) навлязат в тялото. Такива имунни молекули се свързват с различни инфекциозни патогени в тялото и ги неутрализират.

Имуноглобулините имат важна характеристика - специфичност. Благодарение на това те могат да се свържат със специфичен антиген, образувайки комплекс антиген-антитяло. По време на кръвен тест ELISA именно този комплекс се определя качествено и количествено.

Има пет класа имуноглобулини. Но обикновено се определят три класа - имуноглобулини A, M, G. Тези антитела се натрупват в тялото по различно време от момента на инфекцията.

• Имуноглобулини клас M (IgM)се появяват в кръвта най-напред на петия ден от момента на заразяването. Те остават в тялото в продължение на 5-6 седмици, след което изчезват от кръвния поток. IgM антителата показват остър период на заболяването или обостряне на заболяването по време на хроничния му ход.
• Приблизително 3-4 седмици след инфекцията имуноглобулините се появяват в кръвта клас G (IgG). Те могат да съществуват в човешката кръв в продължение на няколко месеца или дори години. Според интерпретацията на кръвния тест ELISA, ако в две кръвни проби, взети последователно след две седмици, количеството на IgG имуноглобулини е повишено, те говорят за текуща инфекция или реинфекция - повторно заразяване със същата инфекция.
• Имуноглобулини клас А (IgA)могат да бъдат открити чрез този изследователски метод 2-4 седмици след инфекция или обостряне на инфекциозно заболяване. От тях само 20% циркулират в кръвта, останалите са в секрецията на лигавиците. IgA антителата изчезват от кръвния поток 2-8 седмици след унищожаването на инфекциозните агенти. Изчезването на тези имуноглобулини означава излекуване на инфекцията. Ако след края на заболяването се установи наличието на IgA антитела в кръвта, това означава, че заболяването е навлязло в хроничен стадий.

Подготовка за анализ

За извършване на кръвен тест по метода ELISA най-често се използва човешка кръв. Но можете също да изследвате съдържанието на стъкловидното тяло, цереброспиналната течност и околоплодната течност.

Кръвна проба за изследване се взема от антекубиталната вена на пациента. Препоръчително е да дарявате кръв на празен стомах (трябва да са минали поне 12 часа от последното хранене). Необходимо е да информирате лекаря, ако пациентът приема лекарства, тъй като някои от тях могат да променят резултата от теста. Надеждността на резултатите от изследването се влияе от употребата на алкохол и наркотици.

Декодиране

Формулярът за резултат от този тест показва положителния (+) или отрицателния (-) резултат от определянето на всеки клас имуноглобулини.

Нека разгледаме тълкуването на възможна интерпретация на кръвния тест ELISA.

• Отрицателен резултат за IgM, IgG, IgA означава липса на имунитет към инфекция.
• Отрицателен резултат за IgM, IgA и положителен резултат за IgG е постинфекциозен или следваксинален имунитет.
• Отрицателен или положителен резултат на IgG, IgA и положителен резултат на IgM – остра инфекция.
• Положителен резултат за IgM, IgG, IgA е обостряне на хронично инфекциозно заболяване.
• Отрицателен IgM резултат и отрицателен или положителен IgG резултат, IgA – хронична инфекция.
• Отрицателен IgM резултат и IgG, IgA не се откриват - възстановяване.

Предимства на метода

Кръвният тест ELISA има много предимства. Основните могат да бъдат идентифицирани:

• относително висока точност (чувствителност);
• възможност за ранна диагностика;
• способността да се наблюдава динамиката на инфекциозния процес;
• високо ниво на унификация, което позволява масови прегледи;
• кратък период от време, необходим за получаване на резултата от анализа;
• лекота на използване;
• автоматизация на всички етапи на анализа;
• относително ниска цена.

недостатъци

Недостатъкът на метода ELISA е, че понякога дава фалшиво отрицателни или фалшиво положителни резултати. В допълнение към техническите грешки по време на изследването, причината за фалшивите резултати може да бъде ревматоидният фактор на пациента, наличието на хронични заболявания (при които се произвеждат антитела), метаболитни нарушения или употребата на определени лекарства.

• аскаридоза;
• трихинелоза - анализът се извършва няколко пъти, максималното ниво на антитела се определя 4-12 седмици след инфекцията;
• цистицеркоза;
• тениоза;
• фасциолиаза - антитела се откриват в острия стадий на заболяването;
• описторхоза - диференциална диагноза се извършва между хронична и остра форма на заболяването;
• лямблиоза;
• висцерална и кожна лайшманиоза;
• амебиаза;
• токсоплазмоза.

4.2 4.20 от 5 (5 гласа)