Микроскопско изследване на изпражненията. Интравитална диагностика на хелминтози

Директни методи: откриване на самите хелминти, техните фрагменти, яйца, ларви в изпражнения, урина, дуоденални секрети, храчки, назална и вагинална слуз, съдържание на поднокътни пространства, биопсирани парчета тъкан.

При диагностицирането е невъзможно да се идентифицират яйца или ларви на всички видове хелминти, живеещи в храносмилателната системачовек. По този начин, когато се използва методът на флотация, яйцата на трематодите и в някои случаи неоплодените яйца на кръгли червеи не изплуват в повърхностния филм (поради високото им специфично тегло). Много рядко се откриват яйца от острици и онкосфери от тениди в изпражненията, които се откриват с помощта на специални методи за изследване: изстъргване от перианалните гънки за острици и тенииди, методи на утаяване за трематоди (яйца от описторхид и др.). Следователно, за целенасочен преглед на пациент за хелминтни инфекции, лекарят в препоръката трябва да посочи върху кои хелминти трябва да се насочи (диагноза), което ще позволи на лаборанта да избере подходящата техника за идентифициране на този тип хелминти. Изпражнения взети от различни местаизпражненията в количество най-малко 50 грама (чаена лъжичка) в чист стъклен съд трябва да бъдат изпратени в лабораторията не по-късно от 24 часа след дефекация и изследвани в деня на получаване.

Ако е необходимо да се запазят изпражненията до следващия денпоставя се на студено място (0-4°C) или се залива с някой от консервантите.

Преди изследването изпражненията се смесват с пръчка, така че яйцата на хелминтите да се разпределят равномерно в общата маса.

Ако в препарата се открият яйца от някакъв хелминт, гледането не се спира, т.к може да има двойна или тройна инвазия.

Проследяването на ефективността на лечението на хелминтни инфекции се извършва чрез изследване на изпражненията за хелминтни яйца 2-3 седмици или 2-3 месеца след лечението, в зависимост от открития хелминт.

Макроскопските методи се използват за откриване на цели зрели хелминти или техни фрагменти в изпражненията с просто око или с помощта на ръчна лупа.

Често на повърхността на изпражненията след дефекация могат да се видят активно пълзящи острици; аскаридите се отделят с изпражненията; Понякога хората сами забелязват преминаването на хелминти. При пациенти с дифилоботриоза могат да се отделят фрагменти от стробили на тения (под формата на „юфка“), а при заразени с тении (свинска или говежда тения) сегменти от хелминти често се отделят с изпражнения (под формата на „бяло“ изрезки“) или те активно изпълзяват от анус.

Макроскопският метод е основният за диференциална диагноза на тениаза и тениаринхоза (в комбинация с изследване).

От специалните макроскопски методи се използва методът на последователно измиване на изпражненията.

Изпражненията се смесват във вода до получаване на еднородна суспензия, след което добро осветлениете се изследват внимателно на отделни малки порции в черни фотографски кювети или върху тъмен фонв петриеви панички. С помощта на пинсети или дисекционна игла отстранете всички подозрителни бели частици, големи образувания, подозрителни за фрагменти от хелминти, и ги разгледайте под лупа между две предметни стъкла. Малките хелминти или глави на цестоди се изследват под лупа в капка глицерин или под микроскоп.

Когато се използва този метод за диагностициране на сегментите на свинска тения, говежда тения или широка тения, измитите сегменти се поставят между две чаши и, гледайки на светлина под лупа или микроскоп с малко увеличение, се определя видът от структурата на матката (в зрял сегмент на свинска тения, 8-12 странични клона и говежда тения 18-32, по-често 28-32, при широката тения сегментите са по-широки, а матката в центъра е под формата на "розетка"). Ако матката е трудно да се види, тогава тя може първо да се държи известно време в 50% разтвор на глицерин, след което дори празните стволове на матката могат да се видят ясно.

При идентифициране на тези цестоди по структурата на отделените глави, те се поставят внимателно с шията в капка глицерин между предметните стъкла (или се покриват с покривно стъкло) и, без да се притискат, се изследват под микроскоп при слабо увеличение.

Микроскопски методисе делят на прости, сложни и специални.

Простите включват методите на нативна намазка, нативна намазка с разтвор на Лугол, методи на дебела намазка под целофан по Като, усукване (по Шулман) и перианално изстъргване.

Комплексни методиса по-ефективни и се основават на концентрацията на яйца в препаратите. Те включват предварителна обработка на изпражненията с течни реактиви, в резултат на което яйцата на хелминтите се утаяват или изплуват на повърхността на течността.

Комплексните методи включват методи за обогатяване:

а) флотация (когато специфично теглояйцата имат по-малко специфично тегло физиологичен разтвори яйцата изплуват на повърхностния филм);

б) утаяване (когато специфичното тегло на яйцата е по-голямо от специфичното тегло на солевите разтвори и яйцата се утаяват в утайка).

Специални методи за откриване на яйца и ларви на хелминти, кисти и вегетативни форми на протозои са методи за остъргване, флотация, утаяване, ларвоскопия, протозооскопия, изследване на жлъчката и методи за оцветяване на петна от изпражнения, храчки и др.

Прости методифекални изследвания

Нативна цитонамазка. С дървена пръчица се взема малка частица изпражнения от различни части на доставената порция, втрива се добре върху предметно стъкло в капка 50% разтвор на глицерол и се прави тънка намазка върху 2-3 предметни стъкла. Най-малко 3 препарата се изследват под микроскоп. Недостатък на метода: разглежда се малко количество материал, поради което не се използва като независим метод.

Метод на усукване(Шулман). 2,0-3,0 g изпражнения се поставят в чаша, разбъркват се старателно със стъклена пръчка с 5-кратен обем физиологичен разтвор или дестилирана вода, като се правят бързи движения в продължение на 2-3 минути и бързо се изважда пръчката от сместа. Капка от сместа в края на пръчката се прехвърля върху предметно стъкло и се изследва под микроскоп. Принципът на центробежната сила кара яйцата и ларвите да се натрупват върху пръчката.

Като метод на дебело намазване с целофан. Химически реактиви: 100% глицерин, 6% разтвор на фенол (100 ml вода + 6 g фенол), 3% разтвор на малахитово зелено (2,5 ml дестилирана вода + 75 ml малахитово зелено).

Приготвяне на работен разтвор: 100 ml 6% разтвор на фенол + 100 ml чист глицерин + 1,2 ml 3% разтвор на малахитово зелено.

Приготвяне на целофанови ленти: Нарежете целофанови ленти, чийто размер съответства на предметното стъкло. Целофанът трябва да е хидрофилен (целофанът, който гори, е подходящ, ако се топи, не е подходящ). В работния разтвор могат да се обработват до 5 хиляди ленти. Периодът на експозиция на целофановите ленти до готовността им за използване в работния разтвор е минимум 24 часа.

Напредък на изследването. 50 mg изпражнения (с размер на голямо грахово зърно) се нанасят върху предметно стъкло, разтриват се с индивидуална пръчица (стъклена, дървена), покриват се с целофанова лента и се втриват отгоре с гумена запушалка, докато се получи равномерно дебело петно. получено. Препаратът се суши при стайна температура за 1 час или в термостат при 40°С за 20-30 минути и се изследва под микроскоп (времето на експозиция може да се увеличи при стайна температура до 5-6 часа или повече).

По ефективност този метод е близък до метода на флотация, но разкрива интензивна и средна интензивност на инвазия.

Използва се като самостоятелен диагностичен метод и се препоръчва за масов скрининг на населението.

В клинико-диагностичните лаборатории се използва като унифициран метод за диагностициране на хелминти при липса на специфични диагнози в препоръките на лекарите.

Методите за перианално изстъргване и нативна намазка с разтвор на Лугол са описани в раздела за специални методи.

Сложни методи за обогатяване на изпражненията

Методите за обогатяване се основават на разликата в специфичното тегло на яйцата на хелминтите и използвания физиологичен разтвор.

Когато се използва методът на флотация, могат да се използват следните солни разтвори:

1. Разтвор на оловен нитрат PbNO3 (оловен нитрат) с плътност 1,5. Приготвя се в размер на 650 g вещество на 1 литър вода. Солта се разтваря на части в гореща вода в емайлиран съд, загрява се на котлона и се разбърква непрекъснато до пълното й разтваряне. Не е необходимо да филтрирате разтвора. Разтворът се приготвя в деня на изследването, тъй като с течение на времето той дава утайка и плътността му започва да пада след 24 часа.Ако разтворът се приготвя в големи количества, тогава в следващите дни преди изследването се нагрява, разбъркване на утайката. Разтворът се приготвя в камина, тъй като оловният нитрат е сол на тежък метал.

2. Разтвор на амониев нитрат NH4NO3 (гранулиран или обикновен амониев нитрат) с плътност 1,3 се приготвя по същия начин като предишния, но със скорост 1500 g вещество на 1 литър топла вода.

3. Приготвя се разтвор на натриев нитрат NaNO3 или натриев нитрат с плътност 1,38-1,4 в размер на 1000 g от веществото на 1 литър гореща вода.

4. Разтвор на натриев тиосулфат Na2S2O3×5H2O (натриев хипосулфит) с плътност 1,4 се приготвя в размер на 1750 g вещество на 1 литър гореща вода.

5. Приготвя се разтвор на натриев сулфат Na2SO4 (английска сол) с плътност 1,26-1,28 в размер на 920 g от веществото на 1 литър гореща вода.

6. Приготвя се разтвор на цинков хлорид ZnCl2 (цинков хлорид) с плътност 1,82 в размер на 2000 g вещество на 1 литър гореща вода. Охладеният разтвор не кристализира.

7. Наситен хлориден разтвор натриев NaCl(трапезна сол) с плътност 1,18-1,2. На! л вода, добавете 400-420 g сол на порции в емайлирана кофа с вряща вода, като разбърквате непрекъснато, докато се разтвори напълно. Докато разтворът се охлажда, кристалите на натриев хлорид се утаяват.

Специфичното тегло на флотационните разтвори се измерва с аерометър само след като разтворът е напълно охладен при стайна температура.

Флотационните методи са най-ефективни за откриване на яйца от тения джудже, камшичен червей, анкилостома, кръгъл червей и тения.

Повърхностният филм може да се отстрани с помощта на телена примка или предметно стъкло.

В наситен разтвор трапезна солфилмът може да се изследва след 30-40 минути, в разтвор на амониев нитрат - след 10-20-30 минути след утаяване.

При отстраняване на филма с телена примка се изследват най-малко 8 капки.

Слайдовете премахват повече яйца от филма, отколкото телените бримки. Стъклото трябва да е в контакт с течността от флотационен разтвор, която се добавя към чашата с пипета. След утаяване стъклото се отстранява и се поставя с намокрената повърхност нагоре върху стъклото. по-голям размери се изследват под микроскоп. Предметните стъкла трябва да бъдат обезмаслени преди употреба.

За провеждане на изследване трябва да имате: предметни стъкла, чаши, телени примки, кювети, петриеви панички, пипети, колби, стъклени или дървени пръчки.

Напредък на изследването. 5 g изпражнения се изсипват с 10-кратно количество флотационен разтвор (за предпочитане специфично тегло 1,38-1,40), разбъркват се старателно, отстраняват се големи неразтворими частици отгоре и се оставя суспензията за 10-15 минути. След това филмът се отстранява или с примка върху предметно стъкло, или с предметно стъкло. За разреждане на изпражненията е по-добре да вземете чаши с вместимост 30-50 ml, изсипете разтвора наравно с ръбовете (или напълнете 2-3 mm) и покрийте сместа с предметно стъкло и след това добавете разтвора за флотация с пипета, докато влезе в контакт с предметното стъкло. След 10-20 минути бързо отстранете стъклото и микроскопирайте останалия върху него филм без покривно стъкло.

Седиментационни методи

Седиментационните методи се използват за откриване на яйца от геохелминти, биохелминти в изпражненията и като специални методи за изследване за описторхоза.

Метод Горячев-Золотухин(опростен метод на Горячев). Около 1,5 g изпражнения се разбъркват в стъкленица в 3-4 ml вода. Получената суспензия се филтрира през два слоя марля в центрофужна епруветка, като внимателно се наслоява върху наличния в нея 4-5 ml наситен разтвор на натриев хлорид. Епруветките се поставят в поставка за 15-20 ч. През това време се утаяват тежки яйца на трематоди. Получават се два ясно разграничени слоя. Седиментът се изследва под микроскоп.

Етер-формалинов метод.Използва се за диагностика на всички чревни инвазии и като специален метод за яйца на протозои и описторхиди.

Оборудване: центрофуга на 3000 об/мин; центрофужни градуирани тръби, фунии; метална цедка (цедка за чай) или двуслойна превръзка; слайдове и покривни стъкла; дървени (или стъклени) пръчици; памучна вата, бинт.

Химически реактиви: 10% разтвор на формалин (1 част разтвор на фармацевтичен формалин и 4 части дестилирана вода); етилов етер (медицински).

В центрофужни епруветки се наливат 7 ml 10% разтвор на формалин и се поставят 1 g изпражнения (такова количество изпражнения, че разтворът в епруветката да достигне 8 ml). Изпражненията се смесват с формалдехид, докато се образува хомогенна смес, след което се изсипват през метална цедка (или двуслойна марля, бинт) в друга центрофужна епруветка (ако върху цедката останат изпражнения, цедката трябва да се изплакне с формалдехид). Добавете 2 ml етер към тази центрофужна епруветка, затворете и разклатете енергично в продължение на 30 секунди.

Сместа се центрофугира при 3000 rpm за една минута (или за две минути при 1500 rpm). Поради реакцията на етер-формалин, протеините коагулират под формата на запушалка в горната част на епруветката и яйцата на хелминтите се утаяват. Коагулантният слой се отстранява, супернатантната течност се отцежда, утайката се нанася върху предметно стъкло директно от епруветка или с пастьорска пипета, покрива се с покривно стъкло и се гледа под микроскоп.

Метод на етерно-оцетно утаяване. Принципът на етерно-оцетното утаяване на хелминтни яйца се състои в последователно третиране на фекални проби с 10% воден разтвор оцетна киселинаи етер. Оцетната киселина е по-добра от другите химични съединенияемулгира фекални проби. Прониква в несмлени частици, състоящи се главно от фибри, които когато страхотно съдържаниепречат на изследването чрез утаяване след центрофугиране. Последващото добавяне на етер в епруветката и разбъркването води до извличане на оцетна киселина от съдържанието на епруветката заедно с фекални частици, напоени с нея. Тъй като специфичното тегло на смес от етер и оцетна киселина е по-малко от специфичното тегло на водата, пробите от изпражнения, обработени с тези вещества, плават и яйцата на хелминтите, които имат високо специфично тегло, се утаяват.

Количеството на утайката, получена след утаяване с етер-оцет, е 3-4 пъти по-малко, отколкото след утаяване с етер-формалин. Това значително улеснява откриването на яйца от хелминти в него и ви позволява да изследвате цялата утайка с претеглено количество от 0,5-1 г. Токсичността на етерно-оцетния метод е 5 пъти по-ниска.

Напредък на изследването. 7 ml от 10% разтвор на оцетна киселина се излива в градуирана центрофужна епруветка и се добавя 1 g проба от изпражнения (т.е. количеството изпражнения, при което разтворът на оцетна киселина нараства до 8 ml). Разбъркайте добре със стъклена или дървена клечка. Прецедете през фуния с два слоя марля в друга центрофужна епруветка. Добавете 2 ml към емулсата етилов етер(т.е. до 10 ml). Епруветките се затварят с гумена запушалка (от бутилка с пеницилин) и се разклащат за 15 секунди. След отстраняване на запушалката, епруветките се центрофугират за една минута при 3000 rpm за 2 минути. Супернатантната течност от епруветката се източва. В някои случаи получената фекална запушалка пречи на дренажа на супернатанта. В този случай използвайте стъклена или дървена пръчка, за да отделите запушалката от стените на епруветката. Цялата утайка се пипетира върху предметно стъкло и се изследва микроскопски под покривно стъкло при ниско увеличение. Утайката обикновено е малка и безцветна. Яйцата на хелминтите, особено малките яйца на трематоди, се откриват лесно.

Метод на химическо утаяване. Принципът на изследването се основава на утаяването на яйца от фекална проба във физиологичен разтвор със специфично тегло 1,15. Същността на метода е директно центрофугиране на епруветка, в която запушалка от изпражнения, емулгирани в 1% разтвор на оцетна киселина, се наслоява върху разтвор на натриев нитрат (специфично тегло 1,16). Високото специфично тегло на физиологичния разтвор и мехурчетата, освободени поради химическата реакция, които проникват в слоя хомогенизирани изпражнения, предотвратяват неговото утаяване. Яйцата на хелминтите се утаяват с малко количество фибри. Утайката може да бъде изчистена от останалия детрит чрез третиране с 10% разтвор на оцетна киселина и етер. В този случай остават само едни хелминтни яйца, което значително улеснява тяхното идентифициране.

Напредък на изследването. 6 ml разтвор на натриев нитрат със специфично тегло 1,15 се излива в градуирана центрофужна епруветка. В друга епруветка се наливат 7 ml 1% разтвор на оцетна киселина. Добавете фекална проба (до знака 7,5 ml за проба от 0,5 g и до 8 ml за проба от 1,0 g). Разбъркайте старателно пробата със стъклена пръчка. Прецежда се през фуния с един слой марля, като се наслоява върху разтвор на натриев нитрат. Епруветката с наслоения филтрат се центрофугира при 1500-2000 rpm за 5 минути. Супернатантната течност се отцежда чрез бързо обръщане на епруветката. Добавете 3-4 ml 10% разтвор на оцетна киселина и 0,5 ml етер в епруветката с утайката, затворете с гумена запушалка и разклатете. Провежда се повторно центрофугиране за 1 минута. Изхвърлете супернатантната течност. Утайката се прехвърля върху предметно стъкло, покрива се с покривно стъкло и се изследва под микроскоп.

ХЕЛМИНТОЛОГИЧНИ ИЗСЛЕДВАНИЯ НА ЖЛЪЧКА, ДУОДЕНАЛНО СЪДЪРЖАНИЕ, ХРАЧКИ, КРЪВ, УРИНА И МУСКУЛИ

Откриване на яйца и ларви на хелминти в съдържанието на дванадесетопръстника и жлъчката. При съмнение за хелминтоза на черния дроб и жлъчния мехур (описторхоза, клонорхиаза, дикроцелиоза) се извършва изследване на жлъчката и дуоденалното съдържание. дванадесетопръстника(стронгилоидоза).

Напредък на изследването. Дуоденалното съдържимо и жлъчката (порции A, B, C) се получават по обичайния начин чрез интубация. За порция B се препоръчва да се получи рефлекс на жлъчния мехур чрез прилагане на 33% разтвор през сонда. магнезиев сулфат. От тестовата течност се избират плаващи в нея люспи и се изследват под микроскоп, след което се смесват с равно количество серен етер. Сместа се разклаща старателно и се центрофугира. Супернатантата се изхвърля и цялата утайка се изследва под микроскоп.

При липса на гной и слуз жлъчката и дуоденалното съдържание се центрофугират без смесване с етер.

Изследване на храчки. В хелминтологичната практика изследването на храчките се извършва с цел лабораторна диагностика на парагонимиаза. Понякога се откриват шистозомни яйца, ларви на кръгли червеи и елементи на ехинококов пикочен мехур.

От храчката се приготвя нативна цитонамазка върху предметно стъкло, което се изследва под микроскоп.

Ако в храчката има голямо количество гной, тя се смесва с 0,5% разтвор на натриев хидроксид или калиев хидроксид, разклаща се в продължение на 5 минути и се центрофугира. Седиментът се изследва под микроскоп.

Кръвен тест. Кръвта се изследва, ако пациентът има съмнение за филариаза.

Поради факта, че при някои видове филариоза (лоиаза, вухерериоза, причинена от субпериодичен щам), ларвите (микрофиларии) присъстват в периферната кръв само през деня, а при някои (бругиоза, вухерериоза, причинена от периодичен щам) - само през нощта, съответно по това време се взема кръв за анализ.

Техниката за вземане на кръв, приготвянето на препарати (тънка намазка и дебела капка), оцветяването им (според Романовски) и тестването са подобни на тези за лабораторна диагностика на малария.

Микрофилариите от различни видове се различават по дължина, ширина, извивка на тялото, наличие или отсъствие на капачка, форма на опашния край, местоположение на ядреното вещество в тялото и опашната област на ларвите.

Напредък на изследването. След това урината се оставя да престои поне 30 минути горен слойотцежда се, оставяйки 10-15 ml утайка, която се изсипва в центрофужни епруветки и се центрофугира за 1-2 минути. След източване на супернатантата, утайката се прехвърля върху предметно стъкло и се изследва под микроскоп.

ИЗСЛЕДВАНЕ НА МУСКУЛНИ БИОПТИ

Метод на трихинелоскопия. Необходимостта от изследване на мускулни биопсии на пациента възниква при съмнение за трихинелоза.

Биопсията се извършва съгласно общите правила. Обикновено се прави биопсия на делтоидния мускул. При патологоанатомично изследване може да се направи биопсия на мускулите на диафрагмата, хранопровода, езика, дъвкателните и междуребрените мускули, флексорите на крайниците, мускулите очна ябълка, тъй като те са най-интензивно засегнати от ларвите на трихинела.

В лабораторията биопсирано парче мускул се нарязва на много малки парчета (с микротом), които се поставят между две стъкла, смачкващи мускулните влакна и се изследват под микроскоп. Понастоящем за тази цел широко се използват специални микроскопи - трихинелоскопи.

При трихинелозата трихинелоскопията разкрива рязко изпъкнали белези по протежение на мускулните влакна. овална форма(подобни на лимон) трихинелоза капсули. средна стойносткапсули при хора е 0,4 x 0,26 mm. Капсулата, като правило, съдържа една трихинела, спирално навита на 2,5 оборота. При висок интензитет на инвазия в една капсула може да има 2 или 3 ларви. Мускулните влакна, съседни на капсулата, губят напречните си набраздявания и придобиват хомогенен вид.

По същия начин се изследва и месото или месните продукти, причинили инфекцията.

Метод на мускулно храносмилане. Методът е по-ефективен.

Напредък на изследването. Изследваните мускули са фино смлени и напълнени с изкуствени стомашен сокв съотношение 1:15-20. Получената смес се поставя в термостат при 37°С за 12-16 ч. След този период се извършва микроскопско изследване на утайката, в която се откриват ларви на трихинела в свободно състояние сред масата остатъци от разградени мускулни влакна.

Изкуственият стомашен сок може да бъде закупен в аптека или приготвен в лаборатория. За да направите това, добавете 10 ml концентрирана солна киселина към 1 литър дестилирана вода; Преди употреба добавете 30 g пепсин към 1 литър разредена киселина.

КОЛИЧЕСТВЕНИ МЕТОДИ НА ИЗСЛЕДВАНЕ

Количествени методиизследването се използва за определяне на интензивността на инвазията, оценка на ефективността на различни антихелминтни лекарства, определяне на качеството на обезпаразитяване, наблюдение на текущото масово лечение и превантивни мерки и др.

Количественото определяне на хелминтни яйца се извършва по два метода: методът на Stoll и методът на Krasilnikov и Volkova (1974).

Метод на Стол. За да извършите изследването, трябва да имате микроскоп, стъклена колба с маркировка от 56 и 60 ml, градуиран цилиндър, стъклени перли, гумена запушалка за колбата, градуирани пипети, предметни стъкла и 0,4% разтвор на натриев хидроксид.

Напредък на изследването. Децинормален разтвор на натриев хидроксид (приблизително 0,4% концентрация) се излива в колбата с помощта на градуиран цилиндър до марката 56 ml и се добавят изпражнения, докато нивото на течността достигне 60 ml (т.е. 4 ml изпражнения). Сместа се разклаща добре със стъклени перли за 1 минута, като съдът се затваря с гумена запушалка (може и с клечка). Веднага след разклащане с градуирана пипета се вземат 0,075 ml от сместа (съдържа 0,005 ml фецес), прехвърля се върху предметно стъкло и се преброяват яйцата в препарата под микроскоп. За да се определи броят на яйцата в 1 g изпражнения, откритият брой се умножава по 200.

Сравнението на броя на яйцата в препарата, открити при пациента преди и след лечението, позволява да се прецени ефективността на обезпаразитяването.

Методът на Stoll е прост, той дава сравними резултатиза всички хелминтиази, чиито патогени систематично отделят яйца в червата на пациента. Недостатъкът на метода обаче е, че е относително ниска чувствителност, особено при ниска интензивност на инвазията.

Метод Красилников-Волкова. При изследване с този метод най-малко 1 g фекалии се смесват в стъклена колба или голяма епруветка с 1% разтвор на Lotus (или 1,5% разтвор на Extra) в съотношение 1:10. Суспензията се разклаща старателно, докато се образува хомогенна суспензия, след което 0,1 ml от суспензията (равняващи се на 0,01 g фецес) бързо се вземат с градуирана пипета и се прехвърлят върху предметно стъкло. Препаратът се покрива с покривно стъкло или целофанова плоча (20 х 30 mm), престоява най-малко един ден при 50% воден разтворглицерин.

Пребройте броя на яйцата в целия препарат. За да се изчисли броят на яйцата в 1 g изпражнения, полученото число трябва да се умножи по 100.

Този метод има редица предимства пред метода на Stoll. Първо, той е по-чувствителен и ви позволява да откривате хелминти, когато слаба степеннашествия. Второ, много е удобно за масови прегледи, тъй като детергентните разтвори, като консерванти за яйца от хелминти, позволяват да се провеждат изследвания върху не съвсем свеж материал. въпреки това предпоставкаТова включва събиране на изпражнения директно в разтвор на детергент.

За количествени изследванияМожете да използвате някой от описаните унифицирани качествени методи, базирани на принципа на плаващите яйца. Но в този случай за анализ трябва да се вземе същото количество изпражнения и същия обем флотационен разтвор. Степента на инвазия може да се изчисли, като се знае броят на яйцата в 1 g изпражнения, съгласно таблицата по-долу.

Интензивността на инвазията зависи от броя на яйцата на хелминтите

в 1 g изпражнения

СЕРОЛОГИЧНИ МЕТОДИ ЗА ДИАГНОСТИКА

Тези методи, базирани на откриването на специфични антитела в кръвния серум, се използват за диагностични и скринингови цели.

Серологичните методи включват:

Реакция на пръстеновидно утаяване (RCR) (трихинелоза, цистицеркоза);

Реакция на пръстеновидно утаяване в епруветки на студено (трихинелоза, цистицеркоза);

Реакция на микропреципитация върху живи ларви (трихинелоза, аскаридоза);

Реакция на индиректна хемаглутинация (IRHA) (трихинелоза, ехинококоза, алвеококоза, цистицеркоза и др.);

Реакция на латекс аглутинация (LAR) (ехинококоза, алвеококоза, трихинелоза, тениаринхиаза и др.);

Реакция на свързване на комплемента (FFR) (трихинелоза, ехинококоза, цистицеркоза);

Реакция на ензимно белязани антитела (ERA) (ехинококоза, онхоцеркоза, шистозомиаза, трихинелоза, токсокароза);

Свързан имуносорбентен анализ(ELISA) (трихинелоза, описторхоза, токсокароза, токсоплазмоза и др.).

За извършване на серологични реакции се произвеждат стандартни антигени или се приготвят самостоятелно (например от ехинококови мехури на овце) и се произвеждат специални тест системи за ELISA.

Специални методиизследвания за ентеробиоза, тениаринхоз, тениоза

Остъргване от перианалните гънки. За да получите изстъргване от перианалните гънки, можете да използвате дървена шпатула, целофанова лента, целулозна хартия или лента, клечки за очи със специален адхезивен слой:

а) изстъргване с дървена шпатула (шпатула е сплескана клечка или клечка), навлажнена с 1% разтвор на глицерин (или 0,5% разтвор сода за хляб), се извършва чрез леко остъргване от повърхността на перианалните гънки по цялата обиколка на ануса. Полученото остъргване се прехвърля с ръба на покривно стъкло от края на шпатула върху предметно стъкло в капка от 50% разтвор на глицерол, покрива се със същото покривно стъкло и се микроскопира. Недостатъкът на този метод е недостатъчното откриване на яйца и дразнещ ефект;

б) по метода на Торгушин се прави изплакване с памучен тампон върху дървена или друга шпатула, навлажнена с 50% разтвор на глицерин, и се приготвя намазка върху предметно стъкло в капка глицерин;

в) по метода на Кеворкова около 5 ml се изсипват в центрофужна епруветка сварена вода, поставете в него шпатула (пръчка) с памучен тампон. Преди вземане на материала тампонът се притиска леко към вътрешната стена на епруветката, перианалните гънки се избърсват с него и шпатулата с тампона се вкарва в епруветката. Тампонът се разклаща добре в епруветка, промивната течност се центрофугира в продължение на 3 минути и получената утайка се изследва под микроскоп;

г) изстъргване с лейкопласт по Греъм. Парче самозалепваща лента (прозрачна полиетиленова лента със залепващ слой за детско творчество, но е по-добре да използвате хирургически филм LPO-1, LPO-2) с дължина 8-10 см, залепете го с адхезивен слой към перианалните гънки на кожата, като го държите за краищата и след това го прехвърлете в стъкло плъзнете с адхезивния слой надолу (краищата на лентата, излизащи отвъд ръбовете на стъклото, се отрязват), очилата се номерират и данните на пациента и номерът на стъклото се записват в дневника. В лабораторията тиксото се отлепва от единия край на голямо разстояние, като под него се капват 1-2 капки. вазелиново маслоили глицерин (за отстраняване на оптични дефекти) и микроскоп;

д) изстъргване с помощта на стъклени пръчки за очи, чиято повърхност е покрита със специален адхезивен състав. Пръчките за очи са монтирани в специален статив. Материалът се събира чрез докосване на плоската част на шпатулата до кожата на перианалния отвор. След това палката се прикрепя отново към статива за транспортиране. Микроскопията се извършва директно върху шпатула от двете страни (без предметни стъкла и покривни стъкла) с предварително монтиране в касети при ниско увеличение (окуляр х 10, обектив х 8). В края на работата пръчките се дезинфекцират чрез кипене в сапунен разтвор, а стативът и касетите се третират със спирт и се измиват със сапунено-содов разтвор. Състав на лепилото: клеол - 10 g, рициново масло– 2,5 g, етилов етер – 5 g, етанол 96% - 2,5 g.

Шпатулите се потапят в лепилния разтвор, след което се сушат на въздух при стайна температура. Лепилният филм, образуван на повърхността, се задържа няколко дни.

Методът е удобен за масов скрининг на деца за ентеробиоза и възрастни за тениоза.

В допълнение към метода на изстъргване за тениаринхоза и тениаза, се използват и методът на изследване и макроскопският метод, описан по-горе (при идентифициране на сегменти).

Специални методи за изследване на стронгилоидоза

Етерно-оцетният метод се използва за откриване на яйца (виж по-горе) и методът на Берман за откриване на ларви в изпражненията.

Метод на Берман. Изследвайте пресни изпражнения, за предпочитане след прием на слабително. Фекална проба от 5 g се поставя върху метално сито (вътрешната мрежа е покрита с два слоя марля) в стъклена фуния, монтирана в стойка. В долния край на фунията се поставя гумена тръба със скоба (апарат на Берман).

Мрежата с изпражненията се повдига и във фунията се налива вода, загрята до 40-50°C, така че Долна частмрежата беше потопена във вода и изпражненията бяха напълно покрити с вода. След 2-4 часа скобата на гумената тръба бързо се отваря и течността се източва в центрофужна тръба. След центрофугиране (1-2 минути) горната част на течността бързо се отцежда, а утайката в количество 1 ml се нанася на тънък слой върху предметно стъкло и се микроскопира под микроскоп с малко увеличение.

IMP и TM метод. Част от изпражненията с размер на орех се поставят в чаша, заливат се с топъл 40°C физиологичен разтвор, така че изпражненията да са покрити с разтвора, и се оставят за 20 минути. След 20 минути течността се излива в петриево блюдо и се наблюдава под MBS бинокулярен микроскоп.

За диагностициране на стронгилоидоза, особено за наблюдение на ефективността на лечението, се препоръчва комбинирането на метода на Берман с изследването на дуоденалното съдържание.

Специални методи за изследване на нематоди

Нематози

аскаридоза

Историята обръща внимание на отношението към градинарството и градинарството. Яденето на сурови зеленчуци и салати от тях.

Клинични проявления ранна фазаАскаридозата се причинява от алергични промени в тялото. Ранният или мигриращият ларвен стадий на аскаридозата често се проявява при наличие на треска с телесна температура до 38 ° и по-висока, със симптомен комплекс от увреждане на белите дробове и наличието на изразена еозинофилия в кръвта. В повечето случаи при децата първите признаци на заболяването са неразположение, слабост, периодично главоболие, изпотяване, понякога болки в мускулите и ставите. Често се появява обилен обрив като уртикария със силен или умерен сърбеж. Диагнозата на ранната фаза се потвърждава от рентгенови изследвания за наличие на летливи вещества в белите дробове еозинофилни инфилтратиЛефлър. Намазките от прясно отделена храчка често съдържат еозинофилни клетки, червени кръвни клетки, кристали на Charcot-Leyden и ларви на кръгли червеи.

В чревния имагинален стадий на аскаридоза, комбинация от стомашно-чревни и астенични синдроми, ентероколит симптоми на болка. Децата често губят тегло, понякога доста значително. Гадене, повишено слюноотделяне, раздразнителност, забавено психомоторно развитие, намалена интелигентност.

За лабораторна диагностика на чревни ст.

Протозоите са разделени на 4 класа:

При енцистиране микроорганизмът придобива заоблена формаи покрити със защитна обвивка. Под формата на киста протозоите стават по-малко податливи на неблагоприятни факторизаобикаляща среда.

Следното може да бъде обект на изследване:

Забележка:Има много видове диагностика, ще разгледаме тези видове, които са най-често срещани в клиничната лабораторна практика.

Индивидуални видове диагностика

Във всеки конкретен случай лаборантът има за задача да открие конкретен патоген, понякога заедно с основния се откриват и други.

Има 6 вида от този микроорганизъм, способен да живее в червата на човека. Клинично значение има само дизентерийната амеба, която се среща във вегетативна форма и под формата на цисти.

Освен това се използват имунологични методи:

• индиректна имунофлуоресценция;
• индиректна аглутинация (INA);
• радиална имунодифузия.

Забележка: серологични методиса неинформативни и се използват само като допълнение към основните в съмнителни случаи.

Диагностика на ресничести (ресничести)

Патогенната форма на микроорганизмите от този род е балантидий. Това е микроб, който причинява балантидиаза, заболяване, придружено от язвен процес на дебелото черво. Патогенът се открива в нативната намазка под формата на вегетативна форма и киста. Материалът за намазката (изпражнения и слуз) се взема по време на сигмоидоскопско изследване и се засява върху специални среди.

Диагностика на камшичести (лайшмания, лямблия, трипанозома, трихомонада)

Лайшманията, трипанозомите, ламблиите и трихомонадите са опасни за хората.

Лайшмания– микроби, причиняващи лайшманиоза, се изследват в кръвни натривки, материали костен мозък, изстъргвания от кожни инфилтрати. В някои случаи при диагностициране на лейшмания се използва култура върху хранителни среди.

Трипанозоми– патогени сънна болест(Американска/африканска трипанозомоза или болест на Шагас).

Африканският вариант е дефиниран в начален периодпри изследване на периферна кръв. С напредване на заболяването патологични микроби се откриват в материала от пункции на лимфни възли, а в напреднал стадий - в цереброспиналната течност.

За диагностициране на трипанозоми, ако има съмнение за болест на Chagas, изследваният материал се изследва под микроскоп при ниско увеличение. В този случай петната и дебелата капка се оцветяват предварително.

Трихомонада(чревни, орални,) се откриват чрез микроскопия на материали, взети от засегнатите лигавици.

Идентифициране на спорозои (малариен плазмодий, причинител на кокцидоза и др.)

Най-често срещаният и опасен вид за хората е маларийният плазмодий, който има 4 основни вида патогени: патоген терциална малария, четиридневна малария, тропическа маларияи малария овална.

Сексуалното развитие на плазмодия (спорогония) протича при комарите Anopheles. Безполов (тъканна и еритроцитна шизогония) – в чернодробната тъкан и еритроцитите на човека. Тези характеристики на жизнения цикъл трябва да се вземат предвид при диагностицирането на малариен плазмодий.

По този начин в кръвта на новоболен пациент могат да бъдат открити зародишни клетки от спорогониевия цикъл. Но в разгара на маларийните атаки шизонтите се появяват в големи количества в кръвта.

Освен това, в различни фази маларийна трескасе появи различни формиплазмодий:

• по време на студения период кръвта се изпълва с мерозоити, вид шизонт;
• при повишени температури в еритроцитите се натрупват пръстеновидни трофозоити;
• понижаването на температурата се характеризира с преобладаване на амебоподобни трофозоити;
• в периоди на нормално състояние кръвта съдържа възрастни форми на шизонти.

Изследването на причинителя на маларията (маларичен плазмодий) се извършва в намазка и в дебела капка.

Забележка:Диагнозата на малария чрез изследване на петна и дебели капки кръв понякога е погрешна. Тромбоцитите в кръвта в някои случаи могат погрешно да бъдат приписани на маларийния патоген. Също така понякога фрагменти от левкоцити и други клетки симулират плазмодий.

Основни методи за изследване на протозоите

Нека разгледаме накратко най-често срещаните методи за изследване на наличието на протозои.

Диагностика на протозои чрез нативна цитонамазка и цитонамазка, оцветена с разтвор на Лугол (в изпражнения)

Лекарството се приготвя от емулсия на изпражнения в изотоничен разтвор. Две капки натриев хлор и разтвор на Лугол се нанасят върху предметно стъкло. Тестовият материал се добавя към двата състава с дървена пръчица и след покриване със стъкло се разглежда при различни разделителни способности на микроскопа.

Намерените протозои се записват въз основа на определени характеристики. За точност пригответе 2-3 препарата от един и същи материал. В съмнителни случаи анализът се повтаря няколко пъти в продължение на 2-3 седмици.

Методът може да открие вегетативни и кистозни форми:

• ламблия;
• балантидий;
• дизентерийна амеба.

Наред с патогенните форми се идентифицират и непатогенни протозои. Също така при здрави носители има луминални и кистозни форми.

Важно:изследванията трябва да се извършват многократно, за да се избегнат неточности и грешки.

Резултатът от диагностицирането на протозои с помощта на нативния и оцветен метод на намазка трябва да съдържа описание на формата на патогена (луминал, киста, тъкан).

Изисквания за изследване:

• материалът, взет за анализ (течни изпражнения), се изследва не по-късно от 30 минути след дефекацията;
• формализираните изпражнения трябва да бъдат диагностицирани в рамките на 2 часа след дефекация;
• материалът не трябва да съдържа примеси ( дезинфектанти, вода, урина);
• за работа с материала използвайте само дървени пръчки, стъклените не са подходящи поради подхлъзване на слуз;
• Пръчките трябва да се изгорят веднага след употреба.

Метод за запазване (изследване на изпражненията) за диагностициране на протозои

Изследването се извършва чрез фиксиране на протозои с консервант. Разликата между този метод и предишния е, че консервантите ви позволяват да запазите лекарството за дълъг период от време.

Използвани консерванти:

• Бароу. Съдържа консерванти: 0,7 ml натриев хлорид, 5 ml формалин, 12,5 ml 96% алкохол, 2 g фенол и 100 ml дестилирана вода. Състав на оцветителя: 0,01% разтвор на тионин (азура).
• Решението на Сафарлиев. Състав: 1,65 g цинков сулфат, 10 ml формалин, 2,5 g кристален фенол, 5 ml оцетна киселина, 0,2 g метиленово синьо, 100 ml вода. Този консервант се използва в случаите, когато материалът трябва да се съхранява повече от месец.

Празните бутилки се пълнят с консервант, материалът се прехвърля в тях в съотношение 3:1, след което се добавя оцветител, ако е необходимо. Резултатите се оценяват чрез изследване на 2-3 лекарства.

Метод за обогатяване на формалин-етер (анализ за наличие на протозои в изпражненията)

Този диагностичен метод ви позволява да отделите и концентрирате протозойни кисти. За анализа са необходими следните съставки: формалин (10 ml), 0,85 g изотоничен разтвор, дестилирана вода, серен етер, разтвор на Лугол.

Сместа от биоматериал с изброените течности се смесва и центрофугира. Получената утайка на дъното на епруветката се оцветява с разтвор на Лугол и се изследва за наличие на цисти и вегетативни форми.

Метод за откриване на лайшмания (намазка от костен мозък)

За диагностициране на лейшманиоза се използват следните реактиви: смес на Никифоров (серен етер и етилов алкохол), фосфатен буфер, азур-еозин по Романовски.

Субстанцията от костен мозък се поставя много внимателно върху предметно стъкло след специална подготовка. Използва се микроскоп с имерсионна система.

IN остър периодзаболяване, голям брой лайшмании се откриват в пунктата.

Забележка:Понякога кръвни клеткиможе да наподобява преработена лайшмания, така че е много важно лабораторният техник да бъде внимателен и да има достатъчно опит за провеждане на независими изследвания.

Метод за откриване на лайшмания в цитонамазка от кожен инфилтрат

Необходимите реактиви са подобни на предишния анализ.

Материалът за изследване се получава от съществуващото туберкулозно или язвено съдържание. При съмнение за лайшманиоза изстъргването се прави много внимателно със скалпел, без кръв. След това препаратът се приготвя върху стъкло. За да се гарантира точността на получените резултати, няколко препарата се изследват едновременно.

При наличие на заболяването лейшмания се открива и сред макрофагите, фибробластите и лимфоидните клетки, присъстващи в тестовия материал.

Метод за изолиране на чиста култура от лайшмания, получена чрез изстъргване на патологични тъкани

С този метод за диагностициране на протозои тъканните изстъргвания се поставят в специална хранителна среда, в която Leishmania активно се размножава.

Преди да вземете остъргването, кожата се третира старателно с алкохол, след което се прави разрез на туберкула, от дъното на което се отстранява съдържанието и се поставя в епруветка със среда. Материалът се взема няколко пъти, след което се поставя в различни епруветки. След това се извършва култивиране в термостат при температура 22-24 градуса. Резултатите се оценяват под микроскоп. Този метод се използва, когато други, по-евтини и по-бързи методи за диагностициране на протозои са неефективни.

Можете да видите как тестовете за наличие на протозои с помощта на капка кръв се дешифрират на практика, като гледате видео прегледа:

Лотин Александър, медицински колумнист

Изпражненията се изследват по два метода:

1. Макроскопичен – откриване на хелминти, техните глави, сегменти, фрагменти от стробили. Малки порции изпражнения се смесват с вода в плоска тава или петриево блюдо и се разглеждат при добра светлина на тъмен фон, като се използва лупа, ако е необходимо. Всички подозрителни образувания се прехвърлят с пинсети в друга чаша с вода или върху предметно стъкло в капка разреден глицерол.

С метода защитавайкиЧастта от изпражненията, която се изследва, се смесва с вода в стъклен цилиндър и след утаяване горният слой вода се отцежда. Това се повтаря няколко пъти. Когато течността стане прозрачна, тя се отцежда и утайката се изследва в петриево блюдо.

2. Микроскопични – за откриване на яйца и ларви на хелминти. Има много методи за изследване.

1). Нативна цитонамазка – най-разпространеният и технически достъпен метод за изследване. Могат да бъдат открити яйца и ларви на всички хелминти. Въпреки това, с малък брой яйца не винаги е възможно да ги намерите. Затова се използва методът на обогатяване.

1). Метод на Фюлеборг – това е метод за обогатяване, базиран на плаване на хелминтозни яйца в наситен разтвор на NaCl (1,2 – плътност; 400 g NaCl на 1 литър вода; 40% разтвор на NaCl). Методът е по-ефективен от нативната цитонамазка. 2-5 g изпражнения се поставят в стъклени буркани и се пълнят с разтвор на NaCl, разбъркват се и след 45 минути се отстранява полученият филм с метална примка, капка глицерин се поставя върху предметно стъкло. Разгледайте под микроскоп. Недостатъкът на метода е бавното появяване на яйца от различни хелминти, тения джудже - след 15-20 минути, кръгли червеи - 1,5 часа, камшичести червеи - 2-3 часа.

2) Метод на Калантарян – също метод за обогатяване, но се използва наситен разтвор на NaNO 3 (плътност 1,38). Повечето яйца плават; не е необходимо изследване на утайката. Недостатъкът е, че задържането на яйца в разтвор за дълго време води до факта, че някои яйца започват да набъбват и се утаяват на дъното, изчезвайки от повърхностния филм.

3. Метод на Горячев – на принципа на отлагане на яйца, откриване на малки яйца на трематоди. Като разтвор се използва наситен разтвор на NaCl и върху него внимателно се наслояват 3-4 ml разтвор на фекалии. След 15-20 часа яйцата на трематодите се утаяват на дъното. Течността се отцежда и утайката се поставя върху предметно стъкло и под микроскоп.

4. Метод на усукване на Шулман – за откриване на ларви на хелминти в изпражненията. Изследват се само прясно отделени изпражнения. 2-3 г се поставят в стъклен буркан и се добавя 5-кратно количество вода, бързо се разбърква с клечка, без да се докосват стените на буркана - 20-30 минути, след което клечката бързо се отстранява и се капва капка течността в края се прехвърля върху предметно стъкло и се микроскопира.

5. Метод на Берман – се основава на способността на ларвите на хелминтите да мигрират към топлината и служи за идентифицирането им в изпражненията.

6. Метод на Харада и Мори (метод за отглеждане на ларви) и се препоръчва за тестване за инфекции с анкилостоми. Методът се основава на факта, че при топлина и върху влажна филтрирана хартия яйцата на анкилостомите се развиват във филариформни ларви, които могат лесно да бъдат открити. В средата на лента от филтрирана хартия се нанасят 15 g изпражнения, хартията с изпражнения се поставя в буркан, така че долният край да се потопи във вода, а горният край да се закрепи със запушалка. Бурканът се държи в термостат при 28 0 С за 5-6 дни. Филариформните ларви се развиват през това време и се спускат във водата. Течността се изследва под лупа. Ако е трудно да се открие, течността се центрофугира, като първо се убиват ларвите чрез нагряване до 60 0. Лаборантът трябва да носи ръкавици.

7. Методи за ентеробиоза – идентифициране на яйца на острици и говежди тения.

а) остъргване от перианалните гънки – с памучен тампон, плътно навит на дървена пръчка и навлажнен с 50% разтвор на глицерин. В лабораторията тампонът се измива с 1-2 капки 50% воден разтвор на глицерин.

б) метод на лепкави акари (метод на Греъм)

Адхезивната лента се поставя върху перианалните гънки, след което адхезивният слой се нанася върху предметно стъкло и се изследва под микроскоп.

В) остъргване с очни пръчки (метод на Рабинович). За перианално остъргване се използват стъклени пръчки за очи, чиято широка част е покрита със специално лепило, което позволява да се задържат яйца на острици.

Изследване на кръв, жлъчка, храчки и мускули

Микроскопията на кръвта разкрива ларви на филарии.

Изследване на храчки - яйца на параганим, ларви на кръгли червеи, некатор, стронгилоид, елементи от ехинококов мехур.

Изследване на мускулите - при съмнение за трихинелоза се изследват мускулите на болния или трупа, както и месото, от което се предполага, че е причинило заразата. За целите на трихинелоскопията мускулът се нарязва на малки парчета и се поставя в компресориум, това са две широки дебели стъкла, които смачкват мускулите и се намират ларви на трихинела под формата на капсули - компресионен метод.

Метод на храносмилане - мускулите се пълнят с изкуствен стомашен сок (разтвор на солна киселина и пепсин). Мускулите се усвояват и ларвите се идентифицират лесно. Определяне на интензивността на инвазията: брой ларви до 200 на 1 g мускулна тъкан– умерена интензивност на инвазията; до 500 – интензивен; над 500 – супер интензивна инвазия.

Серологични методи

Глава III. Диагностика на хелминтоза и методи за хелминтологично изследване

Необходимо е да се изследват за хелминтоза всички пациенти, търсещи медицинска помощ, и особено пациенти, които се обръщат към педиатър, терапевт и невролог с оплаквания от явления от стомашно-чревния тракт, нервна системаи с анемия. Ако лекарят не винаги може да използва лабораторни методи за изследване, тогава всеки медицински работник, който предоставя грижи в амбулаторна клиника или болница, е длъжен да интервюира пациента за изолирането на хелминти.

Ако е налично, дадено в съответните глави клинични показанияДиагнозата трябва да се изясни с помощта на лабораторни методи за изследване на хелминтиаза.

Поради преобладаването чревни хелминтиазинай велик практическо значениеима преглед на изпражненията.

Методи за изследване на изпражненията за хелминтиаза

Изпражненията се доставят в лабораторията в чист стъклен съд (около четвърт чаша изпражнения, взети от различни места в една порция); По време на рутинен преглед е разрешено да се доставят изпражнения в лабораторията в кибритени кутии или кутии за шини.

За контрол на обезпаразитяването се доставя цялата порция изпражнения, събрана след приложението (по предписание на лекаря). противоглистно средствои слабително (в големи затворени стъклени буркани, кофи).

Микроскопското изследване на изпражненията е основно при диагностицирането на чревни хелминтози; винаги трябва да се предхожда от общо макроскопско изследване на изпражненията за откриване на сегменти от големи цестоди, острици, кръгли червеи и др.

Изпражненията трябва да са пресни или консервирани (в 5% разтвор на формалдехид), тъй като сушенето драматично променя структурата на яйцата. Освен това, когато изпражненията стоят, бързо развитиеяйца на някои хелминти (например анкилостоми), което затруднява диагнозата.

Съгласно инструкциите на Министерството на здравеопазването на СССР е необходимо едновременно да се изследват изпражненията по метода на Фулеборн и нативната цитонамазка.

Нативна цитонамазка

Нативна цитонамазка: малко парче фецес (с големината на грахово зърно), взето с кибрит, стъклена или дървена клечка от различни места в доставената порция, се стрива старателно върху предметно стъкло в капка 50% разтвор на глицерол или в солен разтвор или във вода. Покрийте с покривно стъкло, като го натиснете леко (с дисекционна игла). Намазката трябва да е тънка, прозрачна и еднородна. Използва се само като допълнение към други методи, които осигуряват обогатяване на лекарството. Най-малко две лекарства трябва да бъдат прегледани.

За откриване на ларви на хелминти (както и техните яйца) се прави нативна цитонамазка по следния начин(според Shulman): 2-3 g изпражнения се разбъркват старателно чрез „усукване“ на стъклена пръчка в емулсия с петкратно количество чиста вода или физиологичен разтвор. По време на разбъркване ларвите се натрупват близо до стъклената пръчица, така че веднага след края на разбъркването една капка от емулсията бързо се прехвърля със стъклена пръчка върху предметно стъкло, покрива се с покривно стъкло и се изследва. С. Д. Любченко (1936) доказва, че методът на усукване е по-ефективен от метода на намазката, особено по отношение на яйцата на аскаридите. Въз основа на работата на С. Д. Любченко считаме за препоръчително да заменим метода на намазката с метода на усукване.

Метод на Фуллеборн

Метод на Фуллеборн: 5-10 g изпражнения, взети от различни места, се поставят в буркан с вместимост 50-100 ml и се стриват добре със стъклена или дървена пръчица в наситен разтвор на готварска сол (400 g от тази сол се разтварят). в 1 литър вода, загрята до кипене и се филтрира през слой памук или марля; разтворът се използва студен: специфично тегло 1,2). Разтворът се добавя постепенно до получаване на еднородна суспензия, като общото количество на добавения разтвор трябва да бъде приблизително 20 пъти количеството на изпражненията. За смесване на изпражненията Fulleborn препоръчва използването на чаши за чай, но е по-удобно да се приготви суспензия в буркани с мехлем с вместимост 50-100 ml, като се използват два буркана за всеки анализ (или в чаши с вместимост 100 ml).

Веднага след приготвяне на суспензията, големите частици, изплували на повърхността, се отстраняват от повърхността с помощта на шпатула, метална лъжичка или парче чиста хартия ( растителни образувания, остатъци от несмляна храна и др.), след което сместа се оставя да престои 1-1,5 часа. След това време целият филм се отстранява от повърхността на сместа чрез докосване на тел или платинен контур (плосък) с диаметър не повече от 1 см, огънат под прав ъгъл; Филмът се разклаща върху предметно стъкло и се покрива с покривно стъкло. Поставете 3-4 капки под всяко покривно стъкло (18x18 mm). Общо трябва да се приготвят поне 4 препарата (по едно покривно стъкло за всеки препарат). Примката се нагрява на огън и се измива с вода след всеки анализ.

С помощта на метода на Фулеборн бързо и лесно се откриват яйца на всички нематоди (с изключение на неоплодените яйца на аскариди) и яйца на тения джудже.

Методът на Берман се използва за изследване на изпражненията за ларви на хелминти (за стронгилоидоза). Този метод е следният: 5 g изпражнения върху метална мрежа (за целта е удобна цедка за мляко) се поставят върху стъклена фуния, закрепена на статив. В долния край на фунията се поставя гумена тръба със скоба.

Мрежата с изпражненията се повдига и във фунията се налива вода, загрята до около 50 °, така че долната част на мрежата с изпражнения да се потопи във вода. Ларвите активно се движат във водата и се натрупват в долната част на гумената тръба. След 2-4 часа скобата се отваря и течността се източва в една или две центрофужни епруветки.

След центрофугиране за 1-2 минути, горната част на течността бързо се отцежда, а утайката се нанася на капки върху предметни стъкла и се изследва под покривни стъкла или се разпределя на тънък слой върху 2-3 големи чаши и след това се изследва без капак фишове.

Методът на Берман също се използва за изследване на почвата за наличие на ларви на анкилостоми.

Метод на Стол

Методът Stoll се използва за определяне на интензивността на инвазията. Децинормален разтвор на сода каустик се излива в специална стъклена колба до марката 56 cm 3 и след това се добавят изпражнения, докато нивото на течността достигне 60 cm 3, т.е. 4 cm 3. След разклащане със стъклени перли се взема 0,075 ml от сместа за изследване и се изследва под едно или две обикновени покривни стъкла. Полученото количество се умножава по 200, за да се получи броят на яйцата, съдържащи се в 1 cm 3 изпражнения.

Изследване на съдържанието на дванадесетопръстника

Дуоденалният сок и жлъчката от пикочния мехур, получени по обичайния начин чрез сондиране (и жлъчката от пикочния мехур и след рефлекс от жлъчния мехур), се смесват старателно с равен обем етилов етер; сместа се центрофугира, след което утайката се изследва под микроскоп. В допълнение към утайката, микроскопско изследванелюспите, плаващи в течността, които могат да съдържат яйца от хелминти, задължително се излагат. Когато изследвате стомашния сок и повърнатото за яйца на хелминти, можете да използвате същата техника.

Изследване на дуоденален сок и стомашно съдържимо трябва да се извърши при съмнение за хелминтни заболяваниячерния дроб, жлъчния мехур (описторхоза, фасциолиаза, дикроцелиоза) и дванадесетопръстника (стронгилоидоза).

Изследване на храчки

Храчките се стриват върху стъклена пластина, плътно се покриват с друга стъклена пластина и се изследват с невъоръжено око на светъл и черен фон, както и под лупа в пропускаща светлина. Отделни парчета храчка („ръждиви” натрупвания, остатъци от тъкани и др.) се нанасят на тънък слой върху предметно стъкло, плътно се покриват с покривно стъкло и се изследват под микроскоп с ниско и голямо увеличение.

а) За диагностициране на цистицеркоза на кожата, подкожната тъкан или мускула първо с невъоръжено око се изследва асептично изрязано парче от съответната тъкан. Участъци от тъкан се раздалечават с помощта на дисекционни игли, за да се открие везикула, видима с просто око - цистицерк (снимка А); дължината му е 6-20 мм, ширината 5-10 мм. При откриване на везикула, съмнителна за цистицерк, тя се раздробява между две предметни стъкла и се изследва под микроскоп. Cysticercus (Cistycercus cellulosae) се определя от наличието на сколекс с четири издънки и венче от куки (снимка B).

снимка.А - цистицерки със сколекс, обърнат навън; Б - Глава на свинска тения.

б) За диагностициране на трихинелоза, асептично изрязано парче мускул (бицепс или гастрокнемиус) внимателно се раздробява в 50% разтвор на глицерин в най-фините влакна с помощта на дисекционни игли. Смачканите мускули се притискат между две предметни стъкла и се изследват под микроскоп с ниска мощност в затъмнено зрително поле. Препоръчително е да се изследват мускулите за трихинелоза не по-рано от 8-ия ден от заболяването. Ларвите на трихинелата се намират в мускулите в навито положение: те са затворени в капсули с форма на лимон.

снимка.А - ларви на трихинела в мускулите; Б — Калцирани капсули от трихинела.

Рентгенов

Най-често флуороскопията се използва за диагностициране на ехинококоза и по-рядко цистицеркоза. Цистицерките се откриват чрез флуороскопия само след калцификация (в случаите дългосрочно заболяване). През последните години флуороскопията също се използва за диагностициране на аскариаза както в ранния ларвен стадий, така и отчасти в чревния стадий.

По време на периода на миграция на ларвите на кръгли червеи (и анкилостоми) в белите дробове се откриват нестабилни, понякога множество възпалителни огнища; в същото време се появява значителна еозинофилия в кръвта.

Полово зрелите кръгли червеи са ясно видими при флуороскопия на червата на засегнатите индивиди. Този метод, въпреки неговата сложност и тромавост, трябва да се използва като допълнителен метод за диагностициране на аскаридоза в случаи с отрицателен скатологичен анализ. Според E. S. Geselevich, от 180 пациенти с аскариаза, идентифицирани чрез флуороскопия, 54 не са намерили яйца от ascaris в изпражненията (виж).

7.7. Методи за определяне на жизнеспособността на яйца и ларви на хелминти

Жизнеспособността на яйцата на хелминтите се определя от външния им вид, чрез оцветяване с витални бои, чрез култивиране в оптимални условияи създаване на биологична проба.

7.7.1. Определяне на жизнеспособността на яйца или ларви на хелминти по външен вид

Яйцата на хелминтите се микроскопират първо при ниско, след това при голямо увеличение. При деформирани и мъртви яйца на хелминти черупката е разкъсана или огъната навътре, плазмата е мътна и разхлабена. При сегментираните яйца раздробяващите топки (бластомери) са с различни размери, неправилна форма и често изместени към единия полюс. Понякога има анормални яйца, които въпреки външните деформации се развиват нормално. В живите ларви на кръгли червеи фината грануларност присъства само в средната част на тялото; докато умират, тя се разпространява по цялото тяло, появяват се големи блестящи хиалинови вакуоли, така наречените „низи от перли“.

За да определите жизнеспособността на зрели яйца на кръгли червеи, камшични червеи и острици, трябва да се обадите активни движенияларви чрез леко нагряване на препарата (до температура не по-висока от 37 °C). По-удобно е да се наблюдава жизнеспособността на ларвите на аскариди и червеи след изолирането им от черупката на яйцето чрез натискане върху покривното стъкло на препарата с дисекционна игла или пинсети.

При инвазивните ларви на кръгли червеи често се вижда обвивка, която се отлепва в края на главата, а при ларвите на камшичен червей, които са завършили развитието си в яйцето, на това място се открива стилет при голямо увеличение. При мъртвите ларви на хелминти, независимо от тяхното местоположение (в яйцето или извън него), се забелязва разпадане на тялото. При което вътрешна структураЛарвата става бучка или гранулирана, а тялото става мътна и непрозрачна. В тялото се намират вакуоли, а на кутикулата се откриват счупвания.

Жизнеспособността на тениидните онкосфери (говежда, свинска тения и др.) се определя от движението на ембрионите, когато са изложени на храносмилателни ензими. Яйцата се поставят върху часовниково стъклос кучешки стомашен сок или изкуствен дуоденален сок. Съставът на последния: панкреатин - 0,5 g, натриев бикарбонат - 0,09 g, дестилирана вода - 5 ml. Часовникови стъкла с яйца се поставят в термостат при 36 - 38°С за 4 часа. В този случай живите ембриони се освобождават от мембраните си. Обвивките на живите онкосфери също се разтварят в подкиселен пепсин и в алкален разтвортрипсин след 6 - 8 часа в термостат при 38 ° C.

Ако поставите яйца на тенииди в 1% разтвор на натриев сулфид или 20% разтвор на натриев хипохлорид, или в 1% разтвор на хлорирана вода при 36 - 38 °C, зрелите и живи ембриони се освобождават от мембраните и не промяна за 1 ден. Незрелите и мъртви онкосфери се свиват или набъбват и се уголемяват рязко и след това се „разтварят“ в рамките на 10 минути до 2 часа. Живите ембриони на тенидите също се движат активно в смес от 1% разтвор на натриев хлорид, 0,5% разтвор на натриев бикарбонат и жлъчка при 36 - 38 °C.

Жизнеспособността на Adolescaria fascioli, събрана върху растения и други обекти от водни обекти, се проверява чрез изследването им върху предметно стъкло във физиологичен разтвор под микроскоп с нагряващ етап. Когато ларвите на трематодите се нагреят, те започват да се движат.

За да се определи жизнеспособността на яйцата на тения джудже, най-простият метод е на N.S. Ionina: в живите яйца средната двойка ембрионални куки е или успоредна на страничните, или последните образуват ъгъл с медианата в основата по-малък от 45°. В мъртвите яйца страничните двойки образуват ъгъл със средната двойка в основата от повече от 45° или куките са произволно разпръснати (подреждането им по двойки се губи); Понякога ембрионът се свива и се образуват гранули. По-точен метод се основава на появата на движения на онкосферата по време на рязка промяна на температурата: от 5 - 10 ° до 38 - 40 ° C.

Определянето на жизнеспособността на незрели яйца на нематоди трябва да се изследва във влажна камера (блюда на Петри), като яйцата на кръглите червеи се поставят в 3% разтвор на формалдехид, приготвен в изотоничен разтвор на натриев хлорид при температура 24 - 30 ° C, яйцата на червеите в 3% разтвор на солна киселина при температура 30 - 35 ° C; яйца на острици в изотоничен разтвор на натриев хлорид при температура 37 °C. Петриевите панички трябва да се отварят 1-2 пъти седмично за по-добра аерация и филтърната хартия трябва да се намокри отново чиста вода.

Наблюденията за развитието на яйцата на хелминтите се извършват най-малко 2 пъти седмично. Липсата на признаци на развитие в рамките на 2-3 месеца показва тяхната нежизнеспособност. Признаци за развитието на яйца от хелминти са първите етапи на раздробяване, разделяне на съдържанието на яйцето на отделни бластомери. През първите дни се развиват до 16 бластомера, които преминават във втори стадий - морула и т.н.

Яйцата на анкилостомите се култивират в стъклен цилиндър (висок 50 cm и диаметър 7 cm), затворен със запушалка. Смес от равни обемистерилен пясък, въглен и изпражнения с яйца от анкилостоми, разредени с вода до полутечна консистенция, внимателно се изсипват върху дъното на цилиндъра с помощта на стъклена тръба. По време на 1 - 2 дни утаяване на тъмно при температура 25 - 30 ° C, рабдитиформните ларви се излюпват от яйцата и след 5 - 7 дни те стават филариформени: ларвите пълзят нагоре по стените на цилиндъра, където се намират видими дори с невъоръжено око.

Яйцата на трематоди, които естествено се развиват във вода, например opisthorchis, diphyllobothriidae, fasciolae и други, се поставят върху часовниково стъкло, петриево блюдо или друг съд и се излива малък слой обикновена вода. При култивирането на яйцата на Fasciola трябва да се има предвид, че те се развиват по-бързо на тъмно, докато в живите яйца при температура 22 - 24 ° C мирацидият се образува за 9 - 12 дни. При микроскопиране на развиващите се яйца на трематоди движенията на мирацидиума са ясно видими. Miracidium fasciola излиза от черупката на яйцето само на светлина.

Метод на Фуллеборн. Ларвите на анкилостомата и стронгилида се култивират върху агар в петриево блюдо с животински въглен. След задържане в термостат при температура 25 - 30 ° C в продължение на 5 - 6 часа, ларвите пълзят по агара, оставяйки след себе си пътека от бактерии.

Метод Харада и Мори. Добавете 7 ml дестилирана вода към епруветките, поставени в стойка. С помощта на дървена пръчка се вземат 0,5 g изпражнения и се прави петно ​​върху филтърна хартия (15 х 150 mm) на 5 cm от левия ръб (тази операция се извършва върху лист хартия, за да се предпази повърхността на лабораторната маса). След това лентата с цитонамазката се вкарва в епруветката така, че левият край, свободен от цитонамазката, да стига до дъното на епруветката. Покрийте горния край с парче целофан и го увийте плътно с ластик. Върху епруветката се изписват номерът и фамилията на изследваното лице. В това състояние епруветките се съхраняват 8 - 10 дни при температура 28 °С. За да изследвате ларвите, отстранете целофановото покритие и отстранете лента от филтърна хартия с пинсети. Трябва да се внимава, когато се прави това, тъй като малък брой инфекциозни ларви могат да се преместят в горния край на филтърната хартия или отстрани на тръбата и да проникнат под повърхността на целофана.

Епруветките се поставят в гореща водна баня при 50 °C за 15 минути, след което съдържанието се разклаща и бързо се излива в епруветка от 15 ml, за да се утаят ларвите. След центрофугиране супернатантата се отстранява и утайката се прехвърля върху предметно стъкло, покрива се с покривно стъкло и се изследва под микроскоп при слабо увеличение.

За диференциална диагноза на филариформени ларви е необходимо да се използват данните в таблица 3.

Таблица 3

ДИФЕРЕНЦИАЛНА ДИАГНОСТИКА НА ФИЛАРИОИДНИ ЛАРВИ НА A. DUODENALE, N. AMERICANUS, S. STERCORALIS, TRICHOStrONGYLUS SP.

Ларви	Размери	Характерни признаци
A. duodenale	Дължина на тялото около 660 µm, дължина на обвивката - 720 nm	Набраздяването на капачката е по-слабо изразено, оралната изпъкналост е по-малко забележима, предният край на тялото (но не и капачката) е тъп, диаметърът на чревната тръба е по-малък от луковицата на хранопровода, каудалният край е тъп
N. americanus	Дължина на тялото около 590 микрона, дължина на обвивката - 660 nm	Шапката е забележимо набраздена, особено в опашната част на тялото, устната издатина изглежда тъмна, предният край на тялото (но не и капачката) е заоблен като тесен край кокоше яйце, предната част на чревната тръба има същия диаметър като луковицата на хранопровода, опашният край е остро заострен
S. stercoralis	Дължина на тялото около 500 микрона	Ларвата е без обвивка, хранопроводът е около половината от дължината на тялото, опашката е тъпа или разклонена
Trichostrongylus sp.	Дължина на тялото около 750 µm	Чревният лумен не е прав, а зигзагообразен, опашният край е заоблен и оформен като копче

7.7.2. Методи за оцветяване на яйца и ларви на хелминти

Мъртвите тъкани в повечето случаи възприемат боите по-бързо от живите. Тези характеристики се използват в хелминтологията за определяне на жизнеспособността на яйцата и ларвите на хелминтите. В някои случаи обаче някои бои се възприемат по-добре от живите тъкани, отколкото от мъртвите.

За разграничаване на живи от мъртви яйца и ларви се използват следните бои и методи.

Leukobase метиленово синьо често се използва за оцветяване на живи и мъртви тъкани. Жива клеткаили тъканта редуцира метиленово синьо в безцветна левкобаза, мъртвата тъкан няма тази способност, така че придобива цвят.

Критерият за състоянието на едно яйце е оцветяването на ембриона, но не и черупката. Тази способност е свързана с условията, при които яйцеклетката умира. В случаите, когато фиброзната мембрана в мъртво яйце не губи своите полупропускливи свойства, тя няма да позволи на багрилата да преминат през нея и следователно мъртвият ембрион няма да бъде оцветен. Оцветеният ембрион винаги показва смъртта на яйцето.

За оцветяване на яйца от кръгли червеи можете да използвате метиленово синьо в разтвор на млечна киселина с каустик алкали (0,05 g метиленово синьо, 0,5 g натриев хидроксид, 15 ml млечна киселина). Живите яйца не възприемат цвят; са боядисани в Син цвятембриони от мъртви яйца. Оцветяването на ларви на кръгли червеи с основен разтвор на брилянтно-крезил синя боя в концентрация 1: 10 000 се извършва, както следва: капка течност с яйца на кръгли червеи и капка основен разтвор на боя се нанасят върху предметно стъкло. Препаратът се покрива с покривно стъкло, което се притиска плътно към предметното стъкло при леко почукване с дисекционна игла. Броят на появяващите се ларви и степента на тяхното оцветяване се наблюдават под микроскоп; след което същото лекарство се изследва отново след 2 - 3 часа. Само недеформирани ларви, които не са оцветени в продължение на 2 часа, се считат за живи. Мъртвите ларви или не излизат от яйцата, или се оцветяват, когато черупката се счупи (частично или напълно).

При определяне на жизнеспособността на яйца от птичи аскариди е възможно препаратите да се оцветят с 5% алкохолен разтворйод. При нанасяне върху препарата зародишите на мъртвите яйца на Ascaridia стават за 1 - 3 секунди. са боядисани в оранжево.

Мъртвите яйца на описторхиса и онкосферите на говежди тения се оцветяват с разтвор на толуидиново синьо (1:1000), а мъртвите онкосфери на говежди тения с разтвор на брилянтно крезилово синьо (1:10000). В същото време ембрионите и черупките на мъртвите и живите яйца придобиват цвят. Следователно, след оцветяване, яйцата и онкосферите се измиват чиста водаи допълнително ги оцветете със сафранин (разреден 1:10000 в алкохол 10 °C). Алкохолът премахва боята от черупките, а сафранинът ги оцветява в червено. В резултат на това живите яйца стават червени; яйцата с мъртви ембриони стават сини, но черупката остава червена. Мъртвите ембриони на онкосфери от говежда тения бързо, в рамките на няколко минути, се оцветяват в яркочервено или розово със сафранин или синьо с брилянтно крезилово синьо в разреждане 1:4000 или с индигокармин в разреждане 1:1000 - 1:2000 . Живите ембриони не се променят под въздействието на тези бои дори след 2 - 7 часа.

За да се определи жизнеспособността на яйцата на тения джудже, се препоръчва използването на следните бои:

1. Brilliantcreasyl blue (1:8000) - след 1 час онкосферата на мъртвите яйца става особено ярко оцветена, което се откроява рязко на бледия или безцветен фон на останалата част от яйцеклетката.

2. Сафранин (1:8000 при експозиция за 2 часа и 1:5000 за 3 - 5 часа).

3. 50% разтвор на пирогалова киселина в разреждане 1: 2 - при излагане в продължение на 1 час при температура 29 - 30 ° C (колкото по-ниска е температурата, толкова по-дълъг е процесът на боядисване).

7.7.3. Луминесцентен метод за изследване на яйца и ларви на хелминти

Флуоресцентната микроскопия позволява да се прави разлика между живи и мъртви обекти, без да се повреди яйцето. Не се използва за флуоресценция ултравиолетови лъчи, и синьо-виолетовата част на видимата светлина, с конвенционален микроскоп и предметни стъкла; Към осветителя OI-18 е добавен специален комплект цветни филтри.

Живите и мъртвите яйца на кръгли червеи, острици, тении джуджета, говежди тении, широки тении и други хелминти флуоресцират по различен начин. Това явление се наблюдава както по време на първична луминесценция без използване на багрила, така и при оцветяване с флуорохроми (акридин оранжево, корифосфин, примулин, ауролин, берлерин сулфат, трипафлавин, риванол, акрин и др.).

Неоцветени, живи, несегментирани яйца на кръгли червеи светят ярко зелено с жълтеникав оттенък; в мъртвите яйца черупката излъчва зелена светлинамного по-ярка от тъмнозелената ембрионална част; При яйцата на кръглите червеи с ларва се появява само черупката, а при мъртвите яйца и черупката, и ларвата са ярко жълти.

Непигментираните и несегментираните живи яйца от острици и джуджета тения излъчват зеленикаво-жълта светлина; черупката на мъртвите яйца интензивно свети на фона на тъмнозелена ембрионална маса.

С вторична луминесценция (при оцветяване с акридиново оранжево в разреждане 1: 10 000 и 1: 50 000 от 30 минути до 2 часа) черупката на живи и мъртви нематоди, трематоди и цестоди луминесцира по различен начин.

Черупките на живи и мъртви яйца на кръгли червеи, токсокари, острици, тении джуджета, тении на плъхове, тении и тении са оцветени в оранжево-червено. Ембрионите на живи яйца на кръгли червеи, токсаскариси, тении на плъхове, широки тении и онкосфери на говежди тении флуоресцират в матово тъмнозелено или сиво-зелен цвят. Мъртвите ембрионални яйца на тези хелминти излъчват "горящ" оранжево-червен цвят. Живите ларви на острици и токсокара (освободени яйчни черупки) излъчват матова сиво-зелена светлина; когато умрат, цветът се променя от края на главата до „горящо“ светлозелено, след това жълто, оранжево и накрая ярко оранжево.

При оцветяване с флуорохроми - корифосфилум, примулин, мъртвите яйца на кръгли червеи и камшични червеи показват блясък от лилаво-жълто до медно-червено. Жизнеспособните яйца не луминесцират, а са боядисани в тъмно зелено.

Живите яйца на трематодите (paragonimus и clonorchis) не луминесцират, когато се оцветят с акридиново оранжево, но мъртвите яйца произвеждат жълтеникаво-зелен цвят.

Методът на луминесценция може да се използва и за определяне на жизнеспособността на ларвите на хелминтите. По този начин ларвите на стронгилат и рабдитатус, флуорохромирани с разтвор на акридиново оранжево (1: 2000), светят: живи - зелени (с оттенък), мъртви - с ярко оранжева светлина.

Живите мирацидии, излизащи от черупката, излъчват слаба синкава светлина с едва забележимо светло жълто венче от реснички, но 10 - 15 минути след смъртта те се появяват с ярка „горяща“ светлозелена, а след това оранжево-червена светлина.

7.7.4. Метод на биологични проби

Например, за да се определи жизнеспособността на яйцата от аскариди (свински аскариди, човешки аскариди, токсокара, токсаскарис и др.) на животно (морски свинчета, мишки) са необходими поне 100 - 300 яйца с развити ларви. Яйцата Ascaris в изотоничен разтвор на натриев хлорид се пипетират през устата на мишка или морско свинче. След 6-7 дни животното се заколва, черният дроб и белите му дробове се отварят и се изследват отделно за наличие на ларви на аскаридата. За да направите това, черният дроб и белите дробове се нарязват на малки парченца с ножица и се изследват по метода на Берман или Супряга (точка 6.1.2).

Ако животните са били заразени с живи инвазивни яйца, тогава при аутопсия в черния дроб и белите дробове се откриват мигриращи ларви на аскариди.

В случай на инфекция, яйцата на Fasciola в изпражненията на лабораторни животни могат да бъдат открити при зайци след 2 месеца, в морски свинчета- след 50 дни, при мишки - след 35 - 40 дни.

За по-бързо получаване на отговор лабораторните животни се отварят след 20 - 30 дни и черният дроб се изследва за наличие на млади фасциоли.

За да се определи жизнеспособността на яйцата на тения джудже, се препоръчва също така да се хранят с тях неинфектирани преди това бели мишки, последвано от отваряне на животните след 92-96 часа и идентифициране на цистицеркоиди в чревните въси или цестоди в чревния лумен.

За определяне на жизнеспособността на яйцата на описторхиса се препоръчва метод (German S.M., Baer S.A., 1984), базиран на физикохимичното активиране на жлезата за люпене на мирацидиум и стимулация двигателна активностларви, което води до отваряне на капачката на яйцето и активно освобождаване на мирацидий при експериментални условия.

Суспензията от яйца на opisthorchis във вода се охлажда предварително до 10 - 12 ° C (всички последващи операции се извършват при стайна температура 19 - 20 ° C). 1 капка суспензия, съдържаща 100 - 150 яйца, се добавя към центрофужна епруветка. Епруветката се поставя в поставка за 5 - 10 минути. През това време всички яйца успяват да потънат на дъното. След това излишната вода внимателно се изсмуква с лента от филтърна хартия и в епруветката се добавят 2 капки специална среда. Средата се приготвя в 0.005 М Tris-HCl буфер; 12 - 13% разтвор на етанол и багрило (фуксин, сафранин, еозин, метиленово синьо и др.) се добавят към буфера. Епруветката се разклаща, съдържанието й се пипетира върху предметно стъкло и се оставя за 10 минути при леко разклащане. След това добавете 2 капки от посочената среда. Препаратът е готов за микроскопиране под конвенционален светлинен микроскоп при 20x увеличение.

През това време капакът на жизнеспособните ларви се отваря и мирацидиумът активно излиза в определената среда. Благодарение на наличието на етанол в него, те се обездвижват след 2 - 5 минути и след това се боядисват с боя. Те могат лесно да бъдат открити и преброени чрез микроскопия.