हेल्मिंथोलॉजिकल तरीके। एंटरोबियासिस और टेनियासिस के लिए परीक्षण

कृमि के टुकड़ों का पता लगाने के लिए, मल की नग्न आंखों से जांच की जाती है, फिर पानी के साथ मिलाया जाता है और एक अंधेरे पृष्ठभूमि के खिलाफ पेट्री डिश में छोटे भागों में जांच की जाती है। सभी संदिग्ध कणों को पानी की एक बूंद में कांच की स्लाइड पर रखा जाता है और एक आवर्धक कांच के नीचे जांच की जाती है। आप 5-10 गुना पानी मिलाकर एक दैनिक भाग को सिलेंडर में रख सकते हैं। हिलाने के बाद, बर्तन को तब तक छोड़ दिया जाता है जब तक कि निलंबित कण पूरी तरह से बैठ न जाएं। सतह परततरल पदार्थ को सूखा दिया जाता है और साफ पानी डाला जाता है। धुले हुए तलछट की जांच छोटे भागों में नग्न आंखों से या आवर्धक कांच के नीचे की जाती है। अंडों का पता लगाने के लिए सूक्ष्म परीक्षण विधियों का उपयोग किया जाता है।

देशी धब्बा विधि. नहीं एक बड़ी संख्या कीसे मल अलग - अलग जगहेंपरीक्षण भाग को 50% ग्लिसरॉल घोल, आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल या पानी की एक बूंद में कांच की स्लाइड पर डाला जाता है। मिश्रण को कवरस्लिप से ढक दिया जाता है और माइक्रोस्कोप के नीचे देखा जाता है।

फुलबॉर्न फ्लोटिंग विधि। मल का एक भाग संतृप्त सोडियम क्लोराइड घोल के 20 भाग के साथ मिलाया जाता है ( विशिष्ट गुरुत्व 1.18), छोटे भागों में जोड़ा गया। सतह पर तैरने वाले बड़े कणों को तुरंत हटा दिया जाता है, और मिश्रण को 45 मिनट के लिए छोड़ दिया जाता है। इस समय के दौरान, हेल्मिंथ अंडे, सोडियम क्लोराइड समाधान की तुलना में कम विशिष्ट गुरुत्व वाले, सतह पर तैरते हैं। सतह की फिल्म को लगभग 1 सेमी व्यास वाले तार के लूप से हटा दिया जाता है और माइक्रोस्कोप के तहत जांच के लिए एक ग्लास स्लाइड में स्थानांतरित कर दिया जाता है।

कालांतरायण विधि. सोडियम क्लोराइड को सोडियम नाइट्रेट के संतृप्त घोल से बदलने पर फ्लोटिंग विधि की प्रभावशीलता बढ़ जाती है। ऐसे में मिश्रण को 10-15 मिनट तक रखा जाता है.

सोडियम क्लोराइड या सोडियम नाइट्रेट के घोल के साथ मल के मिश्रण को जमने के बाद बनी सतह की फिल्म को कांच की स्लाइड से भी हटाया जा सकता है। इस प्रयोजन के लिए, मल और नमक के घोल के मिश्रण से भरे एक जार को कांच की स्लाइड से ढक दिया जाता है ताकि इसकी निचली सतह तरल के संपर्क में रहे। जमने के बाद, कांच को हटा दिया जाता है और, जिस सतह पर फिल्म स्थित होती है, उसे तेजी से ऊपर की ओर मोड़कर माइक्रोस्कोप के नीचे जांच की जाती है।

स्पेरियनल सिलवटों को खुरचना (पिनवॉर्म अंडे और ओंकोस्फीयर की पहचान करने के लिए)। गोजातीय फीताकृमि) सुबह शौचालय जाने से पहले करें। पानी या 50% ग्लिसरीन के घोल में भिगोए हुए लकड़ी के स्पैटुला का उपयोग करके, गुदा के चारों ओर खुरचें। परिणामी सामग्री को पानी की एक बूंद या 50% ग्लिसरॉल समाधान में एक ग्लास स्लाइड में स्थानांतरित किया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के नीचे देखा जाता है। स्पैटुला को एक नम कपास झाड़ू से बदला जा सकता है, जिसका उपयोग पेरिअनल क्षेत्र को पोंछने के लिए किया जाता है, फिर पानी में अच्छी तरह से कुल्ला किया जाता है। पानी को सेंट्रीफ्यूज किया जाता है और तलछट की जांच माइक्रोस्कोप के तहत की जाती है।

बेहरमन विधि (लार्वा की पहचान के लिए)। एक धातु की जाली जिस पर 5-6 ग्राम मल लगा होता है, एक तिपाई में डाली गई कांच की फ़नल पर लगाई जाती है। क्लैंप के साथ एक रबर ट्यूब को फ़नल के निचले सिरे पर रखा जाता है। फ़नल को t° 50° तक गरम पानी से भर दिया जाता है, ताकि नीचे के भागमल युक्त जाली पानी के संपर्क में आ गई। लार्वा सक्रिय रूप से पानी में चले जाते हैं और रबर ट्यूब के निचले हिस्से में जमा हो जाते हैं। 4 घंटे के बाद, तरल को सेंट्रीफ्यूज ट्यूबों में डाला जाता है, सेंट्रीफ्यूज किया जाता है, और तलछट की माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है।

थूक, नाक के बलगम और का विश्लेषण योनि स्रावफुफ्फुसीय ट्रेमेटोड पैरागोनिमस के अंडे, राउंडवॉर्म और हुकवर्म लार्वा, पिनवॉर्म अंडे और इचिनोकोकल मूत्राशय के टुकड़ों की पहचान करने के लिए। बलगम (डिस्चार्ज) के परीक्षण भाग को कांच पर लगाया जाता है और एक काले और सफेद पृष्ठभूमि के खिलाफ मैक्रोस्कोपिक रूप से देखा जाता है, और फिर एक माइक्रोस्कोप के नीचे देखा जाता है। आप परीक्षण सामग्री में 25% एंटीफॉर्मिन घोल मिला सकते हैं, अच्छी तरह हिला सकते हैं और बलगम को घुलने के लिए 1-1.5 घंटे के लिए छोड़ सकते हैं। मिश्रण को सेंट्रीफ्यूज किया जाता है और अवक्षेप की माइक्रोस्कोप से जांच की जाती है।

लिवर फ्लूक्स, हुकवर्म और स्ट्रॉन्गिलोइड्स लार्वा के अंडों का पता लगाने के लिए ग्रहणी और गैस्ट्रिक जूस का विश्लेषण। प्राप्त ग्रहणी सामग्री के सभी तीन भागों को सेंट्रीफ्यूज किया जाता है और तलछट की माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है। वे शोध भी कर रहे हैं.

ऊतक अनुसंधान. ट्राइचिनेला लार्वा की पहचान करने के लिए, बायोप्सीड मांसपेशियों के टुकड़ों को सावधानीपूर्वक फाइबर में विभाजित किया जाता है, कंप्रेसर ग्लास (स्क्रू के साथ मोटे ग्लास) के बीच निचोड़ा जाता है और एक अंधेरे प्रकाश के साथ माइक्रोस्कोप के नीचे जांच की जाती है। सिस्टीसेरसी की पहचान करने के लिए, मांसपेशियों को विच्छेदन करने वाली सुइयों से विच्छेदित किया जाता है, पृथक पुटिका को आसपास के ऊतकों से साफ किया जाता है, दो ग्लास स्लाइडों के बीच निचोड़ा जाता है और एक आवर्धक कांच के नीचे जांच की जाती है।

रक्त परीक्षण (फाइलेरिया लार्वा का पता लगाने के लिए)। वैसलीन लगे कवर ग्लास पर लटकी हुई बूंद की जांच करें। आप 0.3 मिली रक्त को 3% घोल की 10 गुना मात्रा में मिला सकते हैं। मिश्रण को सेंट्रीफ्यूज किया जाता है और अवक्षेप की माइक्रोस्कोप से जांच की जाती है। औषधियों के संवर्धन हेतु 1 मि.ली नसयुक्त रक्त 2% फॉर्मेलिन घोल के 3 मिलीलीटर या 5% फॉर्मेलिन घोल के 95 मिलीलीटर, 5 मिलीलीटर वाले तरल की 5 गुना मात्रा मिलाएं। एसीटिक अम्लऔर हेमेटोक्सिलिन का 2 मिली सांद्र अल्कोहल घोल। मिश्रण को सेंट्रीफ्यूज किया जाता है, अवक्षेप को आसुत जल से धोया जाता है और माइक्रोस्कोप के नीचे जांच की जाती है। भेदभाव के लिए अलग - अलग प्रकारफाइलेरिया की जांच गिएम्सा-रोमानोव्स्की विधि का उपयोग करके दागे गए स्मीयरों द्वारा की जाती है।

तरीकों प्रतिरक्षाविज्ञानी निदान. संबंधित प्रकार के हेल्मिंथ (एग्लूटिनेशन, पूरक निर्धारण) के साथ एलर्जी निदान परीक्षण (देखें) का भी उपयोग किया जाता है।

हेल्मिंथोलॉजिकल तरीकेअनुसंधान। चावल। हेल्मिंथ अंडे. 1-10 - अंडे गोल(नेमाटोड): 1 - 3 - राउंडवॉर्म (1 - निषेचित अंडा, 2 - बिना एल्बुमेन के निषेचित अंडा, 3 - अनिषेचित अंडा); 4 - बिल्ली राउंडवॉर्म; 5 - मांसाहारी राउंडवॉर्म; 5 - पिनवर्म; 7 - व्हिपवर्म; 8 - टोमिनक्स; 9 - हुकवर्म; 10 - ट्राइकोस्ट्रॉन्गिलिड। 11-15 - अंडे फीता कृमि(सेस्टोड्स): 11 - गोजातीय टैपवार्म; 12 - बौना टेपवर्म; 13 - चूहा टेपवर्म; 14 - कद्दू टेपवर्म; 15 चौड़ा टेप. 16 - 24 - फ्लूक के अंडे (ट्रेमेटोड्स): 16 - ट्रैमेटोड (शिस्टोसोम्स) जापानी; 17 - ट्रेमेटोड्स (शिस्टोसोम्स) मूत्र - यौन; 18 - ट्रेमेटोड्स (शिस्टोसोम्स) मुनसन; 19 - ट्रेमेटोड्स (पेरोगोनिमस) फुफ्फुसीय; 20 - ट्रेमेटोड्स (ऑपिसथोर्चिस) साइबेरियन (बिल्ली के समान); 21 - ट्रेमेटोड्स (क्लोनोर्किस) चिनेंसिस; 22 - आंतों का कंपकंपी (मेटागोनिमस); 23 - यकृत के कंपकंपी (फासीओलास); 24 - ट्रेमेटोड्स (डाइक्रोसेलियम) लांसोलेट।

हेल्मिंथोलॉजिकल अनुसंधान का एक प्रभावी और सुविधाजनक तरीका है काटो के अनुसार गाढ़े स्मीयर का अध्ययन, जिसका सार मल के गाढ़े टुकड़े में हेल्मिंथ अंडे का पता लगाना है, जिसे ग्लिसरीन से साफ किया जाता है और मैलाकाइट हरे रंग से रंगा जाता है। काटो मिश्रण की संरचना - 6 मिली 3% जलीय घोलमैलाकाइट ग्रीन, 500 मिली ग्लिसरीन, 500 मिली 6% फिनोल घोल। समाधान स्थिर है और इसे कमरे के तापमान पर संग्रहीत किया जा सकता है। तैयारी तैयार करने के लिए, मटर के आकार के मल के टुकड़ों को एक ग्लास स्लाइड पर लगाया जाता है, 24 घंटे के लिए काटो मिश्रण में रखे हाइड्रोफिलिक सिलोफ़न की एक फिल्म के साथ कवर किया जाता है, और ग्लास पर दबाया जाता है वर्दी वितरणसामग्री। 40-60 मिनट तक साफ किए गए स्मीयरों की जांच माइक्रोस्कोप के तहत की जाती है। पाए गए हेल्मिंथ अंडों की गिनती की जाती है और रूपात्मक विशेषताएँउनकी प्रजाति निर्धारित करें. यह विधि आपको राउंडवॉर्म, व्हिपवर्म, सेस्टोड, ट्रेमेटोड और कुछ हद तक हुकवर्म और बौने टेपवर्म के अंडों की पहचान करने की अनुमति देती है।

व्यापक रूप से उपयोग भी किया जाता है संवर्धन के तरीके. प्लवनशीलता विधियों का सिद्धांत मल को खारे घोल में निलंबित करना है, जिसमें हेल्मिंथ अंडों की तुलना में अधिक सापेक्ष घनत्व होता है, जिसके परिणामस्वरूप वे सतह पर तैरते हैं। सतह फिल्म की सामग्री की जांच माइक्रोस्कोप के तहत की जाती है। निम्नलिखित समाधानों का उपयोग संवर्धन मिश्रण के रूप में किया जाता है: टेबल नमक - 1 लीटर पानी में 400 ग्राम (फुलबॉर्न के अनुसार सापेक्ष घनत्व -1.18); सोडियम नाइट्रेट - 1 किलो 1 लीटर पानी में (सापेक्षिक घनत्व "कलनटारियन-1.38 के अनुसार); सोडियम नाइट्रेट - 900 ग्राम और पोटेशियम नाइट्रेट - 400 ग्राम 1 लीटर पानी में (ब्रुडास्टोव और क्रास्नोनोस-1.48 के अनुसार सापेक्ष घनत्व)। तैयार किया गया घोल को उबालकर ठंडा किया जाता है।
शोध के लिए एक गिलास या मिट्टी के गिलास में 5-10 ग्राम मल डालें, इसमें 100-200 मि.ली. नमकीन घोलऔर अच्छी तरह हिलाएं. फिर तैरते हुए बड़े कणों को लकड़ी के स्पैटुला या कागज या कार्डबोर्ड से बने स्कूप से हटा दिया जाता है और तुरंत सतह फिल्म पर एक चौड़ी स्लाइड लगा दी जाती है ताकि खारा घोल और स्लाइड पूरी तरह से संपर्क में रहें। मिश्रण को 30-40 मिनट तक रहने देने के बाद, स्लाइड को हटा दिया जाता है, फिल्म को ऊपर की ओर करके माइक्रोस्कोप के नीचे रखा जाता है, और पूरी सतह की सावधानीपूर्वक जांच की जाती है। सूखने से बचाने के लिए, आप 50% ग्लिसरीन घोल की 2-3 बूंदें मिला सकते हैं। सतह की फिल्म को वायर लूप से भी हटाया जा सकता है। जैसे-जैसे नमकीन घोल का सापेक्ष घनत्व बढ़ता है, प्लवनशीलता विधियों की दक्षता बढ़ती जाती है। इन विधियों का उपयोग करके नेमाटोड, सेस्टोड और ट्रेमेटोड के अंडों का पता लगाना संभव है।

मल में अंडों का पता लगाने के लिए कसीसिलनिकोव अवसादन विधि का उपयोग किया जाता है. मल को 1% डिटर्जेंट घोल में मिलाया जाता है ( कपड़े धोने का पाउडरनिलंबन बनने तक 1:10 के अनुपात में "कमल", आदि)। डिटर्जेंट के प्रभाव में, मल के विभिन्न घटक (प्रोटीन, वसा, ऊतक तत्व) घुल जाते हैं। 30 मिनट के बाद, ट्यूब की सामग्री को 1-2 मिनट के लिए हिलाया जाता है, जिसके बाद उन्हें 5 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। तलछट से तैयारियां की जाती हैं और माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है।
में क्षेत्र की स्थितियाँ, साथ ही हेल्मिंथ संक्रमण के लिए आबादी की सामूहिक जांच के दौरान, काटो मोटी स्मीयर विधि का उपयोग करना सुविधाजनक है। में रोगी की स्थितियाँरोगियों की जांच करते समय, सबसे प्रभावी प्लवनशीलता विधियों का उपयोग करना बेहतर होता है। माइक्रोस्कोपी के दौरान इन विधियों का उपयोग करते समय, तैयारी में पाए गए अंडों की गिनती करने की सलाह दी जाती है। यदि मल के अध्ययन के लिए लिया गया नमूना या मात्रा मानकीकृत है (उदाहरण के लिए, 1 चम्मच या बड़ा चम्मच), और खारे घोल की एक समान मात्रा, तो कोई मोटे तौर पर आक्रमण की तीव्रता का अनुमान लगा सकता है। यह मात्रात्मक लेखांकन निर्धारित उपचार को उचित ठहराने और कृमि मुक्ति की प्रभावशीलता का आकलन करने में उपयोगी हो सकता है। इसके अलावा, संक्रमण की तीव्रता को स्थापित करने के लिए अन्य अधिक सटीक मात्रात्मक तरीकों, विशेष रूप से स्टोल विधि का उपयोग किया जा सकता है।

टेनियारिन्चोसिस और एंटरोबियासिस के निदान के लिएपेरिअनल-रेक्टल स्क्रैपिंग का अध्ययन करने की विधि का उपयोग किया जाता है। 50% ग्लिसरीन के घोल में भिगोए हुए लकड़ी के स्पैटुला का उपयोग करके, सुबह शौच से पहले परिधि में पेरिअनल सिलवटों को खुरचें। गुदाऔर निचला भागमलाशय. परिणामी सामग्री को एक कवर ग्लास के किनारे से एक स्पैटुला से साफ किया जाता है, 50% ग्लिसरॉल समाधान की एक बूंद में एक ग्लास स्लाइड पर रखा जाता है, एक कवर ग्लास के साथ कवर किया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है। आप सेलूलोज़ टेप की एक पट्टी की भी जांच कर सकते हैं, जिसे पहले चिपकने वाले पक्ष से पेरिनाल सिलवटों पर दबाया जाता है, फिर एक ग्लास स्लाइड पर रखा जाता है और सूक्ष्मदर्शी रूप से जांच की जाती है।

बर्मन विधि का उपयोग करके मल में नेमाटोड लार्वा का पता लगाना. यह विधि लार्वा के थर्मोट्रोपिक गुण पर आधारित है। शोध के लिए, 1 बड़ा चम्मच मल लें और इसे धातु की जाली या तार के फ्रेम पर धुंध की कई परतों वाली जाली में रखें। जाल को एक तिपाई पर लगे फ़नल में स्थापित किया गया है। क्लैंप के साथ एक रबर ट्यूब फ़नल से जुड़ी होती है। जाल को उठाने के बाद, फ़नल को पानी (तापमान +40°...+50°C) से भर दिया जाता है ताकि जाल का निचला हिस्सा पानी में डूब जाए। मल से लार्वा सक्रिय रूप से पलायन करते हैं गर्म पानीऔर, बसते हुए, फ़नल के निचले हिस्से में जमा हो जाते हैं। 2-4 घंटों के बाद, क्लैंप खोला जाता है, पानी को एक सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में डाला जाता है और 2-3 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। फिर सतह पर तैरनेवाला तरल सूखा जाता है, तलछट को एक ग्लास स्लाइड में स्थानांतरित किया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है, जहां स्ट्रांगाइलोइडियासिस के प्रेरक एजेंट के मोबाइल लार्वा पाए जाते हैं।

हरदा विधि और मोरी हुकवर्म और नेकेटर लार्वा के बीच अंतर करना संभव बनाता है। हुकवर्म लार्वा को फिल्टर पेपर पर संवर्धित किया जाता है। इस प्रयोजन के लिए, शौच के 1 घंटे के भीतर रोगी से लिया गया 0.5 ग्राम ताजा मल, 12X1.5 सेमी मापने वाले फिल्टर पेपर की पट्टियों पर लगाया जाता है, जिससे पट्टी के दोनों सिरे साफ हो जाते हैं। पट्टी के एक सिरे को परखनली में डुबोया जाता है, जिसके एक चौथाई हिस्से में पानी भरा होता है और दूसरे सिरे को डाट से जकड़ दिया जाता है। टेस्ट ट्यूबों को थर्मोस्टेट में +26...+28°C के तापमान पर रखा जाता है। अंडों से विकसित होने वाले लार्वा फिल्टर पेपर के माध्यम से उतरते हैं और टेस्ट ट्यूब के निचले भाग में बस जाते हैं। 5-6 दिनों के बाद, कागज की पट्टी हटा दी जाती है, और परखनली में बचे तरल की जांच एक आवर्धक कांच या सेंट्रीफ्यूज के नीचे की जाती है। सेंट्रीफ्यूजेशन के दौरान बनने वाले अवक्षेप की जांच प्रकाश सूक्ष्मदर्शी से की जाती है। टेस्ट ट्यूब के बजाय टेट्राहेड्रल ग्लास जार (आकार में 15xxx7 सेमी) का उपयोग करते समय, दीवारों से जुड़ी 4 पेपर स्ट्रिप्स के साथ, विश्लेषण की दक्षता बढ़ जाती है (जी.एम. मारुशविली एट अल।, 1966)।

शिस्टोसोमियासिस के लिए परीक्षण विधियाँ . मल की जांच - मल के एक हिस्से को 250 मिलीलीटर पानी के साथ मिलाया जाता है, धुंध की 3 परतों के माध्यम से एक शंक्वाकार बर्तन में फ़िल्टर किया जाता है, जिसे ऊपर तक पानी से भर दिया जाता है। 30 मिनट के बाद, तरल परत को सूखा दिया जाता है, और पानी का एक ताजा हिस्सा तलछट में जोड़ा जाता है। अवक्षेप को तब तक धोया जाता है जब तक कि एक स्पष्ट सतह पर तैरनेवाला प्राप्त न हो जाए और माइक्रोस्कोप के नीचे उसकी जांच न कर ली जाए।

लारवोस्कोपी विधि - 20-25 ग्राम मल को एर्लेनमेयर फ्लास्क में ऊपर की ओर इशारा करते हुए एक ग्लास ट्यूब के साथ रखा जाता है, और धोया जाता है नल का जल. फिर फ्लास्क को गहरे रंग के कागज से ढक दिया जाता है और एक सोल्डर ग्लास ट्यूब को +25...+30°C के तापमान पर प्रकाश में छोड़ दिया जाता है। रची हुई मिरासिडिया पार्श्व ट्यूब में मेनिस्कस पर केंद्रित होती हैं, जहां उन्हें एक आवर्धक कांच या नग्न आंखों से देखा जा सकता है। मूत्र परीक्षण - सुबह 10 बजे से दोपहर 2 बजे के बीच या दैनिक भाग में एकत्र किए गए 100 मिलीलीटर मूत्र को व्यवस्थित किया जाता है और फिर 1500 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। परिणामी तलछट को कांच की स्लाइड पर लगाया जाता है और माइक्रोस्कोप के नीचे जांच की जाती है। WHO संपूर्ण मूत्र नमूने को फ़िल्टर करने की एक विधि की अनुशंसा करता है। निस्पंदन के बाद, फिल्टर को फॉर्मेल्डिहाइड से उपचारित किया जाता है या गर्म किया जाता है (अंडे को मारने के लिए) और फिर निनहाइड्रिन के जलीय घोल से सिक्त किया जाता है। सूखी तैयारियों में, अंडे के भ्रूण बैंगनी रंग प्राप्त कर लेते हैं।

इम्यूनोलॉजिकल का अनुप्रयोग शिस्टोसोमियासिस के निदान के लिए अनुसंधान विधियां कठिनाइयों से जुड़ी हैं, क्योंकि वयस्क शिस्टोसोम और उनके अंडों में बड़ी संख्या में एंटीजन होते हैं जो इसका कारण बनते हैं प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाएं, जो प्रजाति-विशिष्ट नहीं हैं (डी. ब्रैडली, 1979)।

हमारे देश में, हेल्मिंथियासिस के लिए प्रतिरक्षाविज्ञानी प्रतिक्रियाओं का मंचन करने के लिए इसका उत्पादन किया जाता है पूरी लाइनमानक निदान. प्रायोगिक उपयोगएलर्जी है त्वचा परीक्षणइचिनोकोकोसिस और एल्वोकॉकोसिस के लिए, इचिनोकोकल एंटीजन के साथ आरएलए, ठंड में आरएससी, विभिन्न संशोधनों में ठंड में वर्षा की प्रतिक्रिया (रिंग वर्षा, टेस्ट ट्यूब या केशिकाओं में वर्षा, जो ट्राइकिनोसिस, सिस्टीसर्कोसिस और माइग्रोस्कारियासिस एंटीजन के साथ रखी जाती है)। उपर्युक्त सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं को करने के लिए मानक डायग्नोस्टिक किट बैक्टीरिया की तैयारी करने वाले उद्यमों द्वारा उत्पादित किए जाते हैं। निर्माता उत्पादित डायग्नोस्टिक किट के साथ शामिल है विस्तृत निर्देशभंडारण नियमों, दवा के शेल्फ जीवन और प्रतिक्रिया के चरण निर्धारण की तकनीक के साथ प्रासंगिक एंटीजन के उपयोग पर निर्देश।

में पिछले साल काहेल्मिंथियासिस के निदान के लिए उपयोग की जाने वाली सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं की सूची में काफी विस्तार हुआ है। इन उद्देश्यों के लिए, निम्नलिखित प्रतिक्रियाओं का उपयोग किया जाता है: आरआईजीए, अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस (आरआईएफ), जेल में इम्यूनोडिफ्यूजन (आरआईडी), काउंटर इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस (सीआईईएफ), सीईएमए। इन प्रतिक्रियाओं का उपयोग एस्कारियासिस, टॉक्सोकेरियासिस, ट्राइकिनोसिस, हुकवर्म रोग, फाइलेरियासिस, इचिनोकोकोसिस और एल्वोकॉकोसिस, ओपिसथोरकियासिस, शिस्टोसोमियासिस, पैरागोनिमियासिस के लिए किया जा सकता है। हालाँकि, हमारे देश में इन प्रतिक्रियाओं के लिए मानक नैदानिक ​​परीक्षण जारी नहीं किए जाते हैं और उनके निदान की तकनीक को विनियमित नहीं किया जाता है। व्यक्तिगत प्रयोगशालाएँ, मुख्य रूप से वैज्ञानिक प्रयोगशालाएँ, स्वतंत्र रूप से विशिष्ट एंटीजन तैयार करती हैं और उन्हें विभिन्न संशोधनों में उपयोग करती हैं। इन विधियों का विवरण साहित्य में व्यापक रूप से प्रस्तुत किया गया है और कड़ाई से एकीकृत नहीं है। इम्यूनोलॉजिकल विश्लेषण डेटा की व्याख्या, इस्तेमाल की गई प्रत्येक विधि की विशिष्टता और संवेदनशीलता के स्तर को ध्यान में रखते हुए, प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की गतिशीलता का अध्ययन करने पर आधारित होनी चाहिए। सीरोलॉजिकल प्रतिक्रिया. इसलिए, निदान करते समय, साथ ही जनसंख्या के सेरोएपिडेमियोलॉजिकल सर्वेक्षण के दौरान, कई सबसे संवेदनशील प्रतिक्रियाओं का उपयोग करने की सलाह दी जाती है। इस दृष्टिकोण से, VIEF और REMA की प्रतिक्रियाएं, जो भिन्न हैं, ने खुद को अच्छी तरह साबित कर दिया है उच्च संवेदनशीलऔर काफी उच्च विशिष्टता (पी. एम्ब्रोज़-थॉमस, 1978; आई.ई. बैलाड, 1979; जी.एम. नेग्रीनु, 1980; ए.एम. पोनोमेरेवा, 1981; ए. हां. लिसेंको, 1978, आदि)। आरईएमए की प्रभावशीलता का परीक्षण अमीबियासिस, लीशमैनियासिस, ट्रिपैनोसोमियासिस और टॉक्सोप्लाज्मोसिस (जी. ए. एर्मोलिन, 1980) के लिए किया गया है।

अध्याय III. हेल्मिंथियासिस का निदान और हेल्मिंथोलॉजिकल अनुसंधान के तरीके

आवेदन करने वाले सभी रोगियों की हेल्मिंथियासिस की जांच करना आवश्यक है चिकित्सा देखभाल, और विशेष रूप से वे मरीज जो साइड इफेक्ट की शिकायत लेकर बाल रोग विशेषज्ञ, चिकित्सक और न्यूरोलॉजिस्ट के पास जाते हैं जठरांत्र पथ, तंत्रिका तंत्रऔर एनीमिया के साथ। यदि डॉक्टर हमेशा प्रयोगशाला अनुसंधान विधियों का उपयोग करने में सक्षम नहीं होता है, तो आउट पेशेंट क्लिनिक या अस्पताल में देखभाल प्रदान करने वाले प्रत्येक चिकित्सा कर्मचारी को हेल्मिंथ के अलगाव के बारे में रोगी से साक्षात्कार करना आवश्यक है।

यदि संबंधित अध्यायों में नैदानिक ​​संकेत दिए गए हैं, तो निदान का उपयोग करके स्पष्ट किया जाना चाहिए प्रयोगशाला के तरीकेहेल्मिंथियासिस के लिए अध्ययन.

प्रबलता के कारण आंतों के कृमिरोगमहानतम व्यवहारिक महत्वमल परीक्षण होता है।

हेल्मिंथियासिस के लिए मल परीक्षण के तरीके

मल को एक साफ कांच के कंटेनर में प्रयोगशाला में पहुंचाया जाता है (एक हिस्से में विभिन्न स्थानों से लिया गया लगभग एक चौथाई कप मल); नियमित जांच के दौरान, माचिस या स्प्लिंट बॉक्स में मल को प्रयोगशाला में पहुंचाने की अनुमति है।

कृमि मुक्ति को नियंत्रित करने के लिए, प्रशासन के बाद एकत्र किए गए मल का पूरा हिस्सा वितरित किया जाता है (जैसा कि डॉक्टर द्वारा निर्धारित किया गया है)। कृमिनाशकऔर रेचक (बड़े बंद कांच के जार, बाल्टियों में)।

आंतों के हेल्मिंथियासिस के निदान में मल की सूक्ष्म जांच बुनियादी है; बड़े सेस्टोड, पिनवॉर्म, राउंडवॉर्म आदि के खंडों का पता लगाने के लिए हमेशा मल की सामान्य मैक्रोस्कोपिक जांच से पहले होना चाहिए।

मल ताजा या डिब्बाबंद (5% फॉर्मेल्डिहाइड घोल में) होना चाहिए, क्योंकि सूखने से अंडों की संरचना नाटकीय रूप से बदल जाती है। इसके अलावा, जब मल खड़ा होता है, तेजी से विकासकुछ कृमियों के अंडे (उदाहरण के लिए, हुकवर्म), जिससे निदान मुश्किल हो जाता है।

यूएसएसआर स्वास्थ्य मंत्रालय के निर्देशों के अनुसार, फुलबॉर्न विधि और देशी स्मीयर का उपयोग करके मल की एक साथ जांच करना आवश्यक है।

देशी धब्बा

देशी स्मीयर: मल का एक छोटा टुकड़ा (मटर के आकार के बारे में), वितरित हिस्से में विभिन्न स्थानों से माचिस, कांच या लकड़ी की छड़ी के साथ लिया जाता है, 50% ग्लिसरॉल समाधान की एक बूंद में कांच की स्लाइड पर अच्छी तरह से पीस लिया जाता है या खारे घोल में या पानी में. कवरस्लिप से कवर करें, बाद वाले पर हल्के से दबाएं (विच्छेदन सुई के साथ)। स्मीयर पतला, पारदर्शी और एक समान होना चाहिए। इसका उपयोग केवल अन्य तरीकों के अतिरिक्त के रूप में किया जाता है जो दवा को समृद्ध बनाते हैं। कम से कम दो दवाओं की समीक्षा की जानी चाहिए.

हेल्मिंथ लार्वा (साथ ही उनके अंडे) का पता लगाने के लिए, एक देशी स्मीयर इस प्रकार बनाया जाता है (शुलमैन के अनुसार): 2-3 ग्राम मल को एक कांच की छड़ को पांच-पांच के साथ इमल्शन में "घुमा" कर अच्छी तरह मिलाया जाता है। साफ पानी या खारेपन की मात्रा गुना। हिलाने के दौरान, लार्वा कांच की छड़ के पास जमा हो जाता है, इसलिए हिलाने की समाप्ति के तुरंत बाद, इमल्शन की एक बूंद को कांच की छड़ के साथ जल्दी से कांच की स्लाइड पर स्थानांतरित किया जाता है, कवरस्लिप से ढक दिया जाता है और जांच की जाती है। एस. डी. ल्युबचेंको (1936) ने साबित किया कि ट्विस्टिंग विधि स्मीयर विधि की तुलना में अधिक प्रभावी है, खासकर राउंडवॉर्म अंडों के संबंध में। एस. डी. ल्यूबचेंको के काम के आधार पर, हम स्मीयर विधि को ट्विस्टिंग विधि से बदलने की सलाह देते हैं।

फुलबॉर्न विधि

फुलबॉर्न विधि: विभिन्न स्थानों से लिए गए 5-10 ग्राम मल को 50-100 मिलीलीटर की क्षमता वाले जार में रखा जाता है और एक संतृप्त घोल में कांच या लकड़ी की छड़ी से अच्छी तरह से रगड़ा जाता है। टेबल नमक(इस नमक के 400 ग्राम को 1 लीटर पानी में घोल दिया जाता है, उबालने के लिए गर्म किया जाता है और रूई या धुंध की एक परत के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है; घोल का उपयोग ठंडा किया जाता है: विशिष्ट गुरुत्व 1.2)। एक समान निलंबन प्राप्त होने तक घोल को धीरे-धीरे मिलाया जाता है, और मिलाए गए घोल की कुल मात्रा लगभग 20 गुना होनी चाहिए अधिक मात्रामल. मल को मिलाने के लिए, फुलबॉर्न ने चाय के गिलास का उपयोग करने की सिफारिश की, लेकिन प्रत्येक विश्लेषण के लिए दो जार (या 100 मिलीलीटर की क्षमता वाले कप में) का उपयोग करके 50-100 मिलीलीटर की क्षमता वाले मलहम जार में निलंबन तैयार करना अधिक सुविधाजनक है।

निलंबन तैयार करने के तुरंत बाद, सतह पर तैरने वाले बड़े कणों को एक स्पैटुला, एक धातु स्कूप या साफ कागज के टुकड़े के साथ सतह से हटा दिया जाता है ( पौधों का निर्माण, बिना पचा भोजन रह जाना आदि), जिसके बाद मिश्रण को 1-1.5 घंटे के लिए छोड़ दिया जाता है। इस समय के बाद, एक समकोण पर मुड़े हुए 1 सेमी से अधिक व्यास वाले तार या प्लैटिनम लूप (फ्लैट) को छूकर पूरी फिल्म को मिश्रण की सतह से हटा दिया जाता है; फिल्म को कांच की स्लाइड पर हिलाया जाता है और कवरस्लिप से ढक दिया जाता है। प्रत्येक कवर स्लिप (18x18 मिमी) के नीचे 3-4 बूंदें रखें। कुल मिलाकर, कम से कम 4 तैयारियां तैयार की जानी चाहिए (प्रत्येक तैयारी के लिए एक कवर ग्लास)। लूप को आग पर गर्म किया जाता है और प्रत्येक विश्लेषण के बाद पानी से धोया जाता है।

फुलबॉर्न विधि का उपयोग करके, सभी नेमाटोड के अंडे (अनिषेचित राउंडवॉर्म अंडे को छोड़कर) और बौने टेपवर्म अंडे का जल्दी और आसानी से पता लगाया जाता है।

बर्मन विधि का उपयोग हेल्मिंथ लार्वा (स्ट्रॉन्गिलोइडियासिस के लिए) के लिए मल की जांच करने के लिए किया जाता है। यह विधि इस प्रकार है: एक धातु की जाली पर 5 ग्राम मल (एक दूध की छलनी इस उद्देश्य के लिए सुविधाजनक है) को एक तिपाई से जुड़े कांच की कीप पर रखा जाता है। क्लैंप के साथ एक रबर ट्यूब को फ़नल के निचले सिरे पर रखा जाता है।

मल वाली जाली को उठा लिया जाता है और लगभग 50° तक गर्म किया गया पानी फ़नल में डाला जाता है ताकि मल वाली जाली का निचला हिस्सा पानी में डूब जाए। लार्वा सक्रिय रूप से पानी में चले जाते हैं और रबर ट्यूब के निचले हिस्से में जमा हो जाते हैं। 2-4 घंटों के बाद, क्लैंप खोला जाता है और तरल को एक या दो सेंट्रीफ्यूज ट्यूबों में डाला जाता है।

1-2 मिनट तक सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद सबसे ऊपर का हिस्सातरल को जल्दी से सूखा दिया जाता है, और तलछट को कांच की स्लाइडों पर बूंदों में रखा जाता है और कवरस्लिप्स या स्प्रेड के नीचे जांच की जाती है पतली परत 2-3 बड़े गिलासों पर और फिर बिना ढके गिलासों के जांच करें।

हुकवर्म लार्वा की उपस्थिति के लिए मिट्टी का परीक्षण करने के लिए बर्मन विधि का भी उपयोग किया जाता है।

स्टॉल विधि

आक्रमण की तीव्रता निर्धारित करने के लिए स्टोल विधि का उपयोग किया जाता है। कास्टिक सोडा का एक डेसीनॉर्मल घोल एक विशेष ग्लास फ्लास्क में 56 सेमी 3 के निशान तक डाला जाता है, और तब तक मल मिलाया जाता है जब तक कि तरल स्तर 60 सेमी 3, यानी 4 सेमी 3 तक नहीं पहुंच जाता। कांच के मोतियों से हिलाने के बाद, मिश्रण का 0.075 मिलीलीटर जांच के लिए लिया जाता है और एक या दो साधारण कवरस्लिप के नीचे जांच की जाती है। मल के 1 सेमी 3 में निहित अंडों की संख्या प्राप्त करने के लिए परिणामी मात्रा को 200 से गुणा किया जाता है।

ग्रहणी सामग्री का अध्ययन

ग्रहणी रस और मूत्राशय पित्त, जांच का उपयोग करके सामान्य तरीके से प्राप्त किया जाता है (और मूत्राशय पित्त और पित्ताशय से प्रतिवर्त के बाद), समान मात्रा में अच्छी तरह मिलाया जाता है इथाइल ईथर; मिश्रण को सेंट्रीफ्यूज किया जाता है, जिसके बाद तलछट की माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है। तलछट के अलावा, सूक्ष्मदर्शी द्वारा परीक्षणतरल में तैरते हुए गुच्छे, जिनमें कृमि के अंडे हो सकते हैं, आवश्यक रूप से उजागर हो जाते हैं। हेल्मिंथ अंडे के लिए गैस्ट्रिक जूस और उल्टी का परीक्षण करते समय, आप उसी तकनीक का उपयोग कर सकते हैं।

संदेह होने पर ग्रहणी रस और पेट की सामग्री की जांच की जानी चाहिए कृमि रोगयकृत, पित्ताशय (ऑपिसथोरकियासिस, फैसीओलियासिस, डाइक्रोसेलियोसिस) और ग्रहणी(स्ट्रॉन्गिलोइडियासिस)।

बलगम जांच

थूक को एक कांच की प्लेट पर पीसा जाता है, एक अन्य कांच की प्लेट से कसकर ढक दिया जाता है और प्रकाश और काली पृष्ठभूमि के साथ-साथ प्रसारित प्रकाश में एक आवर्धक कांच के नीचे नग्न आंखों से जांच की जाती है। थूक के अलग-अलग टुकड़े ("जंग लगे" संचय, ऊतक के टुकड़े, आदि) को एक पतली परत में एक कांच की स्लाइड पर लगाया जाता है, एक कवरस्लिप के साथ कसकर कवर किया जाता है और कम तापमान पर जांच की जाती है। उच्च आवर्धनमाइक्रोस्कोप

क) त्वचीय सिस्टीसर्कोसिस का निदान करने के लिए, चमड़े के नीचे ऊतकया मांसपेशी, संबंधित ऊतक के सड़न रोकनेवाला रूप से निकाले गए टुकड़े की पहले नग्न आंखों से जांच की जाती है। दृश्य को प्रकट करने के लिए ऊतक के क्षेत्रों को विच्छेदन सुइयों का उपयोग करके अलग किया जाता है नंगी आँखों सेपुटिका - सिस्टीसर्कस (फोटो ए); इसकी लंबाई 6-20 मिमी, चौड़ाई 5-10 मिमी है। जब सिस्टीसर्कस के लिए संदिग्ध पुटिका का पता चलता है, तो इसे दो ग्लास स्लाइडों के बीच कुचल दिया जाता है और माइक्रोस्कोप के नीचे जांच की जाती है। सिस्टीसर्कस (सिस्टीसर्कस सेलुलोसे) चार सकर और हुक के एक कोरोला के साथ एक स्कोलेक्स की उपस्थिति से निर्धारित होता है (फोटो बी)।

तस्वीर।ए - स्कोलेक्स के साथ सिस्टिसिरसी बाहर की ओर निकला हुआ; बी - पोर्क टेपवर्म का सिर।

बी) ट्राइकिनोसिस का निदान करने के लिए, मांसपेशियों के एक सड़न रोकनेवाला टुकड़े (बाइसेप्स या गैस्ट्रोकनेमियस) को विच्छेदन सुइयों का उपयोग करके 50% ग्लिसरीन समाधान में सावधानीपूर्वक कुचलकर बेहतरीन फाइबर में बदल दिया जाता है। कुचली हुई मांसपेशियों को दो ग्लास स्लाइडों के बीच दबाया जाता है और एक अंधेरे क्षेत्र में कम-शक्ति वाले माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है। बीमारी के 8वें दिन से पहले ट्राइकिनोसिस के लिए मांसपेशियों का परीक्षण करने की सिफारिश की जाती है। ट्राइचिनेला लार्वा मांसपेशियों में कुंडलित स्थिति में पाए जाते हैं: वे नींबू के आकार के कैप्सूल में बंद होते हैं।

तस्वीर।ए - मांसपेशियों में त्रिचिनेला लार्वा; बी - ट्राइचिनेला के कैल्सीफाइड कैप्सूल।

एक्स-रे

अक्सर, फ्लोरोस्कोपी का उपयोग इचिनोकोकोसिस और, कम सामान्यतः, सिस्टिकिकोसिस के निदान के लिए किया जाता है। कैल्सीफिकेशन के बाद ही फ्लोरोस्कोपी द्वारा सिस्टीसेरसी का पता लगाया जाता है (मामलों में)। दीर्घकालिक बीमारी). हाल के वर्षों में, प्रारंभिक लार्वा चरण और आंशिक रूप से, आंतों के चरण में एस्कारियासिस का निदान करने के लिए फ्लोरोस्कोपी का भी उपयोग किया गया है।

राउंडवॉर्म (और हुकवर्म) लार्वा के प्रवास की अवधि के दौरान, फेफड़ों में अस्थिर, कभी-कभी कई सूजन वाले फॉसी पाए जाते हैं; उसी समय, रक्त में महत्वपूर्ण ईोसिनोफिलिया प्रकट होता है।

प्रभावित व्यक्तियों की आंतों की फ्लोरोस्कोपी पर यौन रूप से परिपक्व राउंडवॉर्म स्पष्ट रूप से दिखाई देते हैं। इस विधि को, इसकी जटिलता और बोझिलता के बावजूद, नकारात्मक स्कैटोलॉजिकल विश्लेषण वाले मामलों में एस्कारियासिस के निदान के लिए एक अतिरिक्त विधि के रूप में उपयोग किया जाना चाहिए। ई. एस. गेसेलेविच के अनुसार, फ्लोरोस्कोपी द्वारा पहचाने गए एस्कारियासिस के 180 रोगियों में से 54 के मल में कोई एस्केरिस अंडे नहीं पाए गए (देखें)।

हेल्मिन्थोलॉजिकल अनुसंधान विधियाँ. हेल्मिन्थ संक्रमण के निदान के तरीकों को सीधे हेल्मिन्थ या उनके टुकड़ों के साथ-साथ हेल्मिन्थ लार्वा और अंडों (मल, मूत्र, पित्त और ग्रहणी सामग्री, थूक, रक्त और ऊतकों, सामग्री की जांच के लिए तरीके) के प्रत्यक्ष पता लगाने के आधार पर विभाजित किया गया है। पेरिअनल क्षेत्र और उपनगरीय स्थानों से स्क्रैप करके प्राप्त किया जाता है), और अप्रत्यक्ष, जिसकी सहायता से वे प्रकट होते हैं द्वितीयक परिवर्तन, मानव शरीर में कृमि की महत्वपूर्ण गतिविधि के परिणामस्वरूप उत्पन्न होता है (रक्त की रूपात्मक संरचना का अध्ययन, प्रतिरक्षाविज्ञानी तरीकेहेल्मिंथियासिस का निदान, एक्स-रे परीक्षाएं, आदि)। प्रत्यक्ष तरीकों में से, सबसे आम स्कैटोलॉजिकल हैं, जिन्हें मैक्रो- और माइक्रोहेल्मिन्थोस्कोपिक में विभाजित किया गया है। कुछ मामलों में, विशेष तरीकों का उपयोग किया जाता है।

मैक्रोहेल्मिटोस्कोपिक अनुसंधान विधियाँइसका उद्देश्य हेल्मिंथ या उनके टुकड़ों (स्कोलेक्स, खंड, सेस्टोड्स के स्ट्रोबिला के हिस्से) की खोज करना है। उनका उपयोग उन हेल्मिंथियासिस के निदान के लिए किया जाता है जिसमें अंडे रोगी के मल में उत्सर्जित नहीं होते हैं या कम मात्रा में उत्सर्जित होते हैं और हमेशा नहीं (उदाहरण के लिए, एंटरोबियासिस के साथ, मल में पिनवर्म पाए जाते हैं, टेनियासिस - खंडों के साथ)।

मल में पिनवॉर्म या सेस्टोड खंडों का पता लगाने के लिए, मल की नग्न आंखों से जांच की जाती है। के लिए क्रमानुसार रोग का निदानटेनियासिस, पानी से पतला मल को अलग-अलग छोटे भागों में काले फोटोग्राफिक क्यूवेट में या गहरे रंग की पृष्ठभूमि के खिलाफ पेट्री डिश में देखने की सिफारिश की जाती है। दो स्लाइडों के बीच एक आवर्धक कांच के नीचे हेल्मिंथ के टुकड़ों के लिए संदिग्ध बड़ी संरचनाओं की जांच की जाती है। यदि अनुसार नैदानिक ​​संकेतउपचार के बाद छोटे हेल्मिंथ या सेस्टोड हेड का पता लगाने का सुझाव दिया जाता है, फिर संदिग्ध कणों की जांच ग्लिसरीन की एक बूंद में एक आवर्धक कांच के नीचे की जाती है, और यदि आवश्यक हो, तो एक माइक्रोस्कोप के तहत की जाती है।

माइक्रोहेल्मिन्थोस्कोपिक अनुसंधान विधियाँ(गुणात्मक) का उद्देश्य हेल्मिंथ अंडे और लार्वा की पहचान करना है। काटो के अनुसार सिलोफ़न कवर प्लेट के साथ मोटी स्मीयर विधि का उपयोग किया जाता है। काटो मिश्रण में 6 होते हैं एमएलमैलाकाइट ग्रीन का 3% जलीय घोल, 500 एमएलग्लिसरीन और 500 एमएल 6% फिनोल समाधान। काटो प्लेट्स (हाइड्रोफिलिक सिलोफ़न को 20´ 40 मापने वाले टुकड़ों में काटा जाता है मिमी) 24 के लिए विसर्जित एचकाटो मिश्रण में डालें ताकि वे एक-दूसरे से सटे रहें (3-5)। एमएलकाटो घोल प्रति 100 प्लेट)। 100 एमजीकाटो के अनुसार मल को कांच की स्लाइड पर लगाया जाता है, सिलोफ़न कवर प्लेट से ढक दिया जाता है और नीचे दबाया जाता है ताकि मल सिलोफ़न प्लेट की सीमा के भीतर कांच की स्लाइड पर लग जाए। स्मीयर को कमरे के तापमान पर 40-50 तक हल्का होने के लिए छोड़ दिया जाता है मिनट,और फिर माइक्रोस्कोप के नीचे जांच की गई। गर्मी के मौसम में, तैयारी को सूखने से बचाने के लिए, तैयार तैयारी की प्लेट पर एक नम स्पंज रखें।

सभी प्रकार के कृमियों का पूर्ण पता लगाने के लिए, सिलोफ़न कवर प्लेट के साथ काटो मोटी स्मीयर विधि का उपयोग संवर्धन विधियों में से एक के साथ संयोजन में किया जाना चाहिए। उनमें से सबसे आम कलंतार्यन विधि और फुलबॉर्न विधि हैं।

कलंतार्यन विधि: 100 की मात्रा वाली चौड़े मुंह वाली बोतलों में एमएलकांच की छड़ से अच्छी तरह हिलाएं 5 जीमल, धीरे-धीरे संतृप्त सोडियम नाइट्रेट समाधान जोड़ना (1 किलोग्रामसोडियम नाइट्रेट प्रति 1 एल(पानी उबलने पर) गिलास के किनारे तक। सतह पर तैरने वाले बड़े कणों को पेपर स्कूप से हटा दिया जाता है। नमकीन घोल की सतह पर एक ग्लास स्लाइड लगाई जाती है (खारा घोल तब तक डाला जाता है जब तक कि मिश्रण ग्लास स्लाइड के पूर्ण संपर्क में न आ जाए)। 20-30 में मिनस्लाइड को हटा दिया जाता है और माइक्रोस्कोप के तहत फिल्म की जांच की जाती है। इस नमक की अनुपस्थिति में, आप फॉलबॉर्न (400) के अनुसार टेबल नमक के संतृप्त घोल का उपयोग कर सकते हैं जी 1 में नमक एलउबला पानी)।

इस तथ्य के कारण कि बड़े विशिष्ट गुरुत्व वाले अंडे (राउंडवॉर्म के अनिषेचित अंडे, ट्रेमेटोड के अंडे और बड़े सेस्टोड) तैरते नहीं हैं, फुलबॉर्न विधि का उपयोग करते समय तरल की सतह परत की जांच करने के अलावा, जांच करना आवश्यक है एक माइक्रोस्कोप के तहत तलछट से 2-4 तैयारी।

विभिन्न कृमिरोगों के परीक्षण के लिए विशेष प्रयोगशाला विधियाँ।

7.7. हेल्मिंथ अंडे और लार्वा की व्यवहार्यता निर्धारित करने के तरीके

हेल्मिंथ अंडों की व्यवहार्यता किसके द्वारा निर्धारित की जाती है? उपस्थिति, महत्वपूर्ण रंगों से रंगकर, खेती की जाती है इष्टतम स्थितियाँऔर एक जैविक नमूना स्थापित करना।

7.7.1. उपस्थिति के आधार पर हेल्मिंथ अंडे या लार्वा की व्यवहार्यता का निर्धारण करना

हेल्मिंथ अंडों को पहले कम आवर्धन पर, फिर उच्च आवर्धन पर सूक्ष्मदर्शी से जांचा जाता है। विकृत और मृत हेल्मिंथ अंडों में, खोल फटा हुआ या अंदर की ओर मुड़ा हुआ होता है, प्लाज्मा धुंधला और ढीला होता है। खंडित अंडों में असमान आकार की क्रशिंग बॉल्स (ब्लास्टोमेरेस) होती हैं, अनियमित आकार, अक्सर एक ध्रुव पर स्थानांतरित हो जाता है। कभी-कभी असामान्य अंडे होते हैं जो बाहरी विकृति के बावजूद सामान्य रूप से विकसित होते हैं। जीवित राउंडवॉर्म लार्वा में, बारीक दानेदारता केवल शरीर के मध्य भाग में मौजूद होती है; जैसे ही वे मरते हैं, यह पूरे शरीर में फैल जाती है, बड़े चमकदार हाइलिन रिक्तिकाएं, तथाकथित "मोतियों की माला" दिखाई देती हैं।

राउंडवॉर्म, व्हिपवर्म और पिनवॉर्म के परिपक्व अंडों की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए, आपको कॉल करना चाहिए सक्रिय हलचलेंतैयारी को हल्के से गर्म करके (37 डिग्री सेल्सियस से अधिक नहीं तापमान पर) लार्वा। अंडे के छिलके से अलग होने के बाद राउंडवॉर्म और व्हिपवर्म लार्वा की व्यवहार्यता का निरीक्षण करने के लिए तैयारी के कवर ग्लास पर एक विच्छेदन सुई या चिमटी के साथ दबाव डालना अधिक सुविधाजनक होता है।

आक्रामक राउंडवॉर्म लार्वा में, एक आवरण अक्सर सिर के अंत में छीलता हुआ देखा जाता है, और व्हिपवर्म लार्वा में, जिन्होंने अंडे में विकास पूरा कर लिया है, उच्च आवर्धन पर इस स्थान पर एक स्टाइललेट पाया जाता है। मृत हेल्मिंथ लार्वा में, चाहे उनका स्थान कुछ भी हो (अंडे में या उसके बाहर), शरीर का क्षय देखा जाता है। इस मामले में, लार्वा की आंतरिक संरचना अवरुद्ध या दानेदार हो जाती है, और शरीर बादलदार और अपारदर्शी हो जाता है। शरीर में रिक्तिकाएँ पाई जाती हैं, और छल्ली पर विराम पाए जाते हैं।

टैनिड ऑन्कोस्फीयर (गोजातीय, पोर्क टेपवर्म, आदि) की व्यवहार्यता उनके संपर्क में आने पर भ्रूण की गति से निर्धारित होती है। पाचक एंजाइम. अंडों को कुत्ते के गैस्ट्रिक रस या कृत्रिम ग्रहणी रस के साथ एक वॉच ग्लास पर रखा जाता है। उत्तरार्द्ध की संरचना: पैनक्रिएटिन - 0.5 ग्राम, सोडियम बाइकार्बोनेट - 0.09 ग्राम, आसुत जल - 5 मिली। अंडे वाले वॉच ग्लास को थर्मोस्टेट में 36 - 38 डिग्री सेल्सियस पर 4 घंटे के लिए रखा जाता है। इस मामले में, जीवित भ्रूण अपनी झिल्लियों से मुक्त हो जाते हैं। जीवित ओंकोस्फीयर के गोले भी अम्लीय पेप्सिन और में घुल जाते हैं क्षारीय घोल 38 डिग्री सेल्सियस पर थर्मोस्टेट में 6-8 घंटे के बाद ट्रिप्सिन।

यदि आप टेनिड अंडों को सोडियम सल्फाइड के 1% घोल या सोडियम हाइपोक्लोराइड के 20% घोल या क्लोरीन पानी के 1% घोल में 36 - 38 डिग्री सेल्सियस पर रखते हैं, तो परिपक्व और जीवित भ्रूण झिल्ली से निकल जाते हैं और नहीं 1 दिन के दौरान परिवर्तन. अपरिपक्व और मृत ओंकोस्फियर सिकुड़ते या सूजते हैं और तेजी से बड़े होते हैं, और फिर 10 मिनट से 2 घंटे के भीतर "विघटित" हो जाते हैं। जीवित टैनिड भ्रूण भी 1% सोडियम क्लोराइड घोल, 0.5% सोडियम बाइकार्बोनेट घोल और पित्त के मिश्रण में 36 - 38 डिग्री सेल्सियस पर सक्रिय रूप से चलते हैं।

पौधों और जल निकायों की अन्य वस्तुओं पर एकत्र किए गए एडोलसेरिया फैसीओली की व्यवहार्यता को हीटिंग चरण के साथ माइक्रोस्कोप के तहत शारीरिक समाधान में एक ग्लास स्लाइड पर जांच करके जांच की जाती है। जब ट्रेमेटोड लार्वा को गर्म किया जाता है, तो वे हिलना शुरू कर देते हैं।

बौने टेपवर्म अंडों की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए, सबसे सरल विधि एन.एस. आयोनिना है: जीवित अंडों में, भ्रूणीय हुकों की मध्य जोड़ी या तो पार्श्व वाले हुकों के समानांतर होती है, या बाद वाले आधार पर मध्यिका के साथ एक कोण बनाते हैं। 45°. मृत अंडों में, पार्श्व युग्म 45° से अधिक के आधार पर मध्य युग्म के साथ एक कोण बनाते हैं, या हुक बेतरतीब ढंग से बिखरे हुए होते हैं (उनकी युग्मित व्यवस्था खो जाती है); कभी-कभी भ्रूण सिकुड़ जाता है और दाने बन जाते हैं। एक अधिक सटीक विधि तापमान में तेज बदलाव के दौरान ऑन्कोस्फियर के आंदोलनों की उपस्थिति पर आधारित है: 5 - 10 डिग्री से 38 - 40 डिग्री सेल्सियस तक।

अपरिपक्व नेमाटोड अंडों की व्यवहार्यता का निर्धारण एक आर्द्र कक्ष (पेट्री डिश) में किया जाना चाहिए, 24 - 30 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान में तैयार 3% फॉर्मेल्डिहाइड समाधान में राउंडवॉर्म अंडे रखकर, व्हिपवॉर्म अंडे को एक में रखना चाहिए। 3% समाधान हाइड्रोक्लोरिक एसिड का 30 - 35 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर; 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान में पिनवॉर्म अंडे। बेहतर वातायन के लिए पेट्री डिश को सप्ताह में 1-2 बार खोलना चाहिए और फिल्टर पेपर को दोबारा गीला करना चाहिए। साफ पानी.

हेल्मिंथ अंडों के विकास का अवलोकन सप्ताह में कम से कम 2 बार किया जाता है। 2-3 महीनों के भीतर विकास के संकेतों की अनुपस्थिति उनकी अव्यवहार्यता को इंगित करती है। हेल्मिंथ अंडों के विकास के लक्षण सबसे पहले अंडे की सामग्री को अलग-अलग ब्लास्टोमेरेस में विभाजित करने, कुचलने के चरण हैं। पहले दिनों के दौरान, 16 ब्लास्टोमेरेस विकसित होते हैं, जो दूसरे चरण में चले जाते हैं - मोरुला, आदि।

हुकवर्म अंडों को एक डाट से बंद कांच के सिलेंडर (50 सेमी ऊंचे और 7 सेमी व्यास) में संवर्धित किया जाता है। का एक मिश्रण समान मात्राबाँझ रेत, लकड़ी का कोयलाऔर हुकवर्म अंडे के साथ मल, अर्ध-तरल स्थिरता के लिए पानी से पतला, एक ग्लास ट्यूब का उपयोग करके सिलेंडर के तल पर सावधानीपूर्वक डाला जाता है। 25 - 30 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर अंधेरे में बसने के 1 - 2 दिनों के दौरान, अंडों से रबडीटिफ़ॉर्म लार्वा निकलते हैं, और 5 - 7 दिनों के बाद वे फ़ाइलारिफ़ॉर्म बन जाते हैं: लार्वा सिलेंडर की दीवारों पर रेंगते हैं, जहां वे होते हैं नग्न आंखों से भी दिखाई देता है.

ट्रैमेटोड के अंडे जो स्वाभाविक रूप से पानी में विकसित होते हैं, उदाहरण के लिए ओपिसथोर्चिस, डिफाइलोबोथ्रिडे, फासिओले और अन्य, एक वॉच ग्लास, पेट्री डिश या अन्य बर्तन पर रखे जाते हैं, और साधारण पानी की एक छोटी परत डाली जाती है। फासिओला अंडों की खेती करते समय इस बात का ध्यान रखना चाहिए कि वे अंधेरे में तेजी से विकसित होते हैं, जबकि जीवित अंडों में 22 - 24 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर मिरासिडियम 9 - 12 दिनों में बनता है। जब ट्रेमेटोड अंडों को विकसित करने वाली सूक्ष्मदर्शी से जांच की जाती है, तो मिरासिडियम की गतिविधियां स्पष्ट रूप से दिखाई देती हैं। मिरासिडियम फासिओला केवल प्रकाश में ही अंडे के छिलके से निकलता है।

फुलबॉर्न विधि. हुकवर्म और स्ट्रांगाइलिड लार्वा को जानवरों के कोयले के साथ पेट्री डिश में आगर पर संवर्धित किया जाता है। थर्मोस्टेट में 25 - 30 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 5 - 6 घंटे तक रखने के बाद, लार्वा बैक्टीरिया का रास्ता छोड़कर अगर में रेंगता है।

हरदा और मोरी विधि. एक रैक में रखी टेस्ट ट्यूब में 7 मिलीलीटर आसुत जल डालें। एक लकड़ी की छड़ी का उपयोग करके, 0.5 ग्राम मल लें और बाएं किनारे से 5 सेमी की दूरी पर फिल्टर पेपर (15 x 150 मिमी) पर एक धब्बा बनाएं (यह ऑपरेशन प्रयोगशाला बेंच की सतह की रक्षा के लिए कागज की एक शीट पर किया जाता है)। फिर स्मीयर वाली पट्टी को टेस्ट ट्यूब में डाला जाता है ताकि स्मीयर से मुक्त बायां सिरा टेस्ट ट्यूब के नीचे तक पहुंच जाए। ऊपरी सिरे को सिलोफ़न के एक टुकड़े से ढँक दें और इसे एक इलास्टिक बैंड से कसकर लपेट दें। जिस व्यक्ति की जांच की जा रही है उसका नंबर और उपनाम टेस्ट ट्यूब पर लिखा होता है। इस अवस्था में, ट्यूबों को 28 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 8 - 10 दिनों के लिए संग्रहीत किया जाता है। लार्वा का अध्ययन करने के लिए, सिलोफ़न कवर हटा दें और चिमटी से फ़िल्टर पेपर की एक पट्टी हटा दें। ऐसा करते समय सावधानी बरतनी चाहिए क्योंकि छोटी संख्या में संक्रामक लार्वा फिल्टर पेपर के ऊपरी सिरे या ट्यूब के किनारे तक जा सकते हैं और सिलोफ़न की सतह के नीचे घुस सकते हैं।

टेस्ट ट्यूब को गर्म में रखा जाता है पानी का स्नान 15 मिनट के लिए 50 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर, जिसके बाद उनकी सामग्री को हिलाया जाता है और लार्वा को तलछट करने के लिए जल्दी से 15 मिलीलीटर टेस्ट ट्यूब में डाला जाता है। सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद, सतह पर तैरनेवाला हटा दिया जाता है, और तलछट को एक ग्लास स्लाइड में स्थानांतरित कर दिया जाता है, एक कवरस्लिप के साथ कवर किया जाता है, और कम आवर्धन के तहत सूक्ष्मदर्शी से जांच की जाती है।

के लिए क्रमानुसार रोग का निदानफाइलेरिफॉर्म लार्वा, आपको तालिका 3 में डेटा का उपयोग करना चाहिए।

टेबल तीन

ए. डुओडेनेल, एन. अमेरिकन, एस. स्टेरकोरेलिस, ट्राइकोस्ट्रॉन्गिलस एसपी के फाइलेरियाइड लार्वा के विभेदक निदान।

लार्वा	DIMENSIONS	चारित्रिक लक्षण
ए. ग्रहणी	शरीर की लंबाई लगभग 660 µm, आवरण की लंबाई - 720 एनएम	टोपी की धारियाँ कम स्पष्ट होती हैं, मौखिक उभार कम ध्यान देने योग्य होता है, शरीर का अगला सिरा (लेकिन टोपी नहीं) कुंद होता है, आंत्र नली का व्यास ग्रासनली बल्ब से छोटा होता है, दुम का सिरा कुंद होता है
एन. अमेरिकन	शरीर की लंबाई लगभग 590 माइक्रोन, म्यान की लंबाई - 660 एनएम	टोपी स्पष्ट रूप से धारीदार है, विशेष रूप से शरीर के दुम भाग में, मौखिक उभार गहरा दिखाई देता है, शरीर का पूर्वकाल सिरा (लेकिन टोपी नहीं) एक संकीर्ण सिरे की तरह गोल होता है मुर्गी का अंडा, आंतों की नली के अग्र भाग का व्यास ग्रासनली बल्ब के समान होता है, दुम का सिरा तेजी से नुकीला होता है
एस. स्टेरकोरेलिस	शरीर की लंबाई लगभग 500 माइक्रोन	लार्वा बिना आवरण का होता है, ग्रासनली शरीर की लंबाई से लगभग आधी होती है, पूंछ कुंद या शाखायुक्त होती है
ट्राइकोस्ट्रॉन्गिलस एसपी।	शरीर की लंबाई लगभग 750 µm	आंतों का लुमेन सीधा नहीं है, बल्कि टेढ़ा है, पूंछ का सिरा गोल है और बटन के आकार का है

7.7.2. हेल्मिंथ अंडे और लार्वा को धुंधला करने के तरीके

अधिकांश मामलों में मृत ऊतक जीवित ऊतकों की तुलना में रंगों को अधिक तेजी से समझते हैं। इन विशेषताओं का उपयोग हेल्मिन्थोलॉजी में हेल्मिन्थ अंडे और लार्वा की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए किया जाता है। हालाँकि, कुछ मामलों में, कुछ पेंट मृत ऊतकों की तुलना में जीवित ऊतकों द्वारा बेहतर समझे जाते हैं।

जीवित और मृत अंडे और लार्वा के बीच अंतर करने के लिए निम्नलिखित पेंट और विधियों का उपयोग किया जाता है।

ल्यूकोबेस मेथिलीन ब्लू का उपयोग अक्सर जीवित और मृत ऊतकों को दागने के लिए किया जाता है। लिविंग सेलया ऊतक मेथिलीन ब्लू को रंगहीन ल्यूकोबेस में बदल देता है, मृत ऊतक में यह क्षमता नहीं होती है, इसलिए वह रंग प्राप्त कर लेता है।

अंडे की स्थिति का मानदंड भ्रूण का रंग है, लेकिन खोल नहीं। यह क्षमता उन परिस्थितियों से जुड़ी होती है जिनके तहत अंडा मर जाता है। ऐसे मामलों में जहां मृत अंडे में रेशेदार झिल्ली अपने अर्ध-पारगम्य गुणों को नहीं खोती है, यह रंगों को गुजरने की अनुमति नहीं देगी, और इसलिए मृत भ्रूण पर दाग नहीं पड़ेगा। रंगीन भ्रूण हमेशा अंडे की मृत्यु का संकेत देता है।

राउंडवॉर्म अंडों को रंगने के लिए, आप कास्टिक क्षार (0.05 ग्राम मेथिलीन ब्लू, 0.5 ग्राम सोडियम हाइड्रॉक्साइड, 15 मिली लैक्टिक एसिड) के साथ लैक्टिक एसिड के घोल में मेथिलीन ब्लू का उपयोग कर सकते हैं। जीवित अंडे रंग नहीं पहचानते; में चित्रित हैं नीला रंगमृत अंडे के भ्रूण. 1:10000 की सांद्रता पर ब्रिलियंटक्रेसिल ब्लू पेंट के मूल समाधान के साथ राउंडवॉर्म लार्वा का धुंधलापन निम्नानुसार किया जाता है: राउंडवॉर्म अंडे के साथ तरल की एक बूंद और मूल पेंट समाधान की एक बूंद को कांच की स्लाइड पर लगाया जाता है। तैयारी को एक कवरस्लिप के साथ कवर किया गया है, जिसे एक विच्छेदन सुई के साथ हल्के से टैप करते हुए स्लाइड पर कसकर दबाया जाता है। उभरते हुए लार्वा की संख्या और उनके धुंधला होने की डिग्री को माइक्रोस्कोप के नीचे देखा जाता है; जिसके बाद 2 - 3 घंटे बाद उसी दवा की दोबारा जांच की जाती है। केवल विकृत लार्वा जिन पर 2 घंटे तक दाग न लगा हो, उन्हें जीवित माना जाता है। मृत लार्वा या तो अंडों से नहीं निकलते हैं, या जब खोल टूट जाता है (आंशिक रूप से या पूरी तरह से) तो रंगीन हो जाते हैं।

एवियन राउंडवॉर्म अंडों की व्यवहार्यता का निर्धारण करते समय, तैयारी को 5% से दागना संभव है शराब समाधानयोडा। जब इसे तैयारी पर लगाया जाता है, तो मृत एस्केरिडिया अंडों के रोगाणु 1 - 3 सेकंड के भीतर हो जाते हैं। नारंगी रंग से रंगे गए हैं.

मृत ओपिसथोर्चिस अंडे और गोजातीय टेपवर्म ऑन्कोस्फीयर को टोल्यूडीन ब्लू (1:1000) के घोल से रंगा जाता है, और मृत गोजातीय टेपवर्म ऑन्कोस्फीयर को ब्रिलियंट क्रेसिल ब्लू (1:10000) के घोल से रंगा जाता है। इसी समय, मृत और जीवित दोनों अंडों के भ्रूण और खोल रंग प्राप्त कर लेते हैं। इसलिए, धुंधला होने के बाद, अंडे और ओंकोस्फीयर को धोया जाता है साफ पानीऔर इसके अतिरिक्त उन्हें सैफ्रानिन (अल्कोहल 10 डिग्री सेल्सियस में 1:10000 पतला) के साथ दाग दें। अल्कोहल शेल से पेंट हटा देता है, और सफ़्रैनिन इसे लाल कर देता है। परिणामस्वरूप, जीवित अंडे लाल हो जाते हैं; मृत भ्रूण वाले अंडे नीले हो जाते हैं, लेकिन खोल लाल रहता है। गोजातीय टेपवर्म के मृत भ्रूण कुछ ही मिनटों में जल्दी ही चमकीले लाल या लाल रंग में बदल जाते हैं गुलाबी रंग 1:4000 के तनुकरण पर सैफ्रानिन या नीला ब्रिलियंट क्रिसिल ब्लू, या 1:1000 - 1:2000 के तनुकरण पर इंडिगो कारमाइन। इन पेंट के प्रभाव में जीवित भ्रूण 2 - 7 घंटे के बाद भी नहीं बदलते हैं।

बौने टेपवर्म अंडों की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए, निम्नलिखित पेंट का उपयोग करने की अनुशंसा की जाती है:

1. ब्रिलियंटक्रेसिल नीला (1:8000) - 1 घंटे के बाद, मृत अंडों का ऑन्कोस्फियर विशेष रूप से चमकीले रंग का हो जाता है, जो अंडे के बाकी हिस्सों की पीली या रंगहीन पृष्ठभूमि के मुकाबले तेजी से खड़ा होता है।

2. सफ़्रैनिन (2 घंटे के लिए उजागर होने पर 1:8000 और 3 - 5 घंटे के लिए 1:5000)।

3. 1:2 के तनुकरण में पाइरोगेलिक एसिड का 50% घोल - 29 - 30 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 1 घंटे के लिए उजागर होने पर (तापमान जितना कम होगा, रंगाई प्रक्रिया उतनी ही लंबी होगी)।

7.7.3. हेल्मिंथ अंडे और लार्वा का अध्ययन करने के लिए ल्यूमिनसेंट विधि

फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी अंडे को नुकसान पहुंचाए बिना जीवित और मृत वस्तुओं के बीच अंतर करना संभव बनाती है। प्रतिदीप्ति के लिए उपयोग नहीं किया जाता पराबैंगनी किरण, और दृश्य प्रकाश का नीला-बैंगनी हिस्सा, एक पारंपरिक माइक्रोस्कोप और ग्लास स्लाइड के साथ; OI-18 इलुमिनेटर में जोड़ा गया विशेष सेटरंग फिल्टर.

राउंडवॉर्म, पिनवॉर्म, बौना टेपवर्म, बोवाइन टेपवर्म, ब्रॉड टेपवर्म और अन्य हेल्मिंथ के जीवित और मृत अंडे अलग-अलग तरीके से चमकते हैं। यह घटना रंगों के उपयोग के बिना प्राथमिक ल्यूमिनेसेंस के दौरान और फ्लोरोक्रोम (एक्रिडीन ऑरेंज, कोरिफोस्फीन, प्रिमुलिन, ऑरोलिन, बेर्लेरिन सल्फेट, ट्रिपाफ्लेविन, रिवानॉल, एक्रिन, आदि) के साथ दागने पर देखी जाती है।

बिना रंग वाले, सजीव, खंडित राउंडवॉर्म अंडे पीले रंग की टिंट के साथ चमकीले हरे रंग में चमकते हैं; मृत अंडों में खोल विकिरण करता है हरी बत्तीगहरे हरे भ्रूणीय भाग की तुलना में बहुत अधिक चमकीला; लार्वा वाले राउंडवॉर्म अंडों में, केवल खोल दिखाई देता है, और मृत अंडों में, खोल और लार्वा दोनों चमकीले पीले होते हैं।

पिनवर्म और बौने टेपवर्म के अप्रकाशित और अखंडित जीवित अंडे एक हरे-पीले प्रकाश का उत्सर्जन करते हैं; मृत अंडों का खोल गहरे हरे रंग के भ्रूण द्रव्यमान की पृष्ठभूमि के खिलाफ तीव्रता से चमकता है।

द्वितीयक चमक के साथ (जब 30 मिनट से 2 घंटे तक 1:10,000 और 1:50,000 के तनुकरण पर एक्रिडीन ऑरेंज से रंगा जाता है), जीवित और मृत नेमाटोड, ट्रेमेटोड और सेस्टोड के खोल अलग-अलग तरह से चमकते हैं।

राउंडवॉर्म, टोक्सोकारा, पिनवॉर्म, बौना टेपवर्म, चूहा टेपवर्म, बैल टेपवर्म और टैपवर्म के जीवित और मृत अंडों के छिलके नारंगी-लाल रंग के होते हैं। राउंडवॉर्म, टॉक्सास्करिस, चूहे के टेपवर्म, चौड़े टेपवर्म और बोवाइन टेपवर्म के ओंकोस्फीयर के जीवित अंडों के भ्रूण फ्लोरोसेंट गहरे हरे रंग के या भूरा-हरा रंग. इन कृमियों के मृत भ्रूण अंडे एक "जलता हुआ" नारंगी-लाल रंग उत्सर्जित करते हैं। जीवित पिनवर्म और टोक्सोकारा लार्वा (अंडे के छिलके मुक्त) एक फीकी धूसर-हरी रोशनी उत्सर्जित करते हैं; जब वे मर जाते हैं, तो सिर के सिरे से रंग बदलकर "जलता हुआ" हल्का हरा, फिर पीला, नारंगी और अंत में चमकीला नारंगी हो जाता है।

जब फ्लोरोक्रोम से रंगा जाता है - कोरिफोस्फिलम, प्रिमुलिन, राउंडवॉर्म और व्हिपवर्म के मृत अंडे बकाइन-पीले से तांबे-लाल तक की चमक दिखाते हैं। व्यवहार्य अंडे चमकते नहीं हैं, लेकिन रंगीन होते हैं गहरा हरा रंग.

ट्रेमेटोड्स (पैरागोनिमस और क्लोनोरचिस) के जीवित अंडे एक्रिडीन नारंगी रंग से रंगे जाने पर चमकते नहीं हैं, लेकिन मृत अंडे पीले-हरे रंग का उत्पादन करते हैं।

हेल्मिंथ लार्वा की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए ल्यूमिनसेंस विधि का भी उपयोग किया जा सकता है। इस प्रकार, स्ट्रांगाइलेट और रबडिटैटस लार्वा फ्लोरोक्रोम एक्रिडीन ऑरेंज (1:2000) के घोल से चमकते हैं: जीवित - हरे (एक टिंट के साथ), मृत - एक उज्ज्वल नारंगी रोशनी के साथ।

खोल से निकलने वाले जीवित मिरासिडिया सिलिया के बमुश्किल ध्यान देने योग्य हल्के पीले रंग के कोरोला के साथ एक मंद नीली रोशनी उत्सर्जित करते हैं, लेकिन मृत्यु के 10 - 15 मिनट बाद वे चमकदार "जलती हुई" हल्के हरे रंग और फिर नारंगी-लाल रोशनी के साथ दिखाई देते हैं।

7.7.4. जैविक नमूना विधि

उदाहरण के लिए, प्रति जानवर (गिनी सूअर, चूहे) एस्केरिड अंडे (सुअर राउंडवॉर्म, मानव राउंडवॉर्म, टोक्सोकारा, टोक्सास्कारिस, आदि) की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए आपको विकसित लार्वा के साथ कम से कम 100 - 300 अंडे की आवश्यकता होती है। आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल में एस्केरिस अंडे को चूहे या गिनी पिग के मुंह के माध्यम से पिपेट किया जाता है। 6-7 दिनों के बाद, जानवर का वध कर दिया जाता है, उसके जिगर और फेफड़ों को खोला जाता है और एस्केरिडेट लार्वा की उपस्थिति के लिए अलग से जांच की जाती है। ऐसा करने के लिए, लीवर और फेफड़ों को कैंची से छोटे टुकड़ों में काट दिया जाता है और बर्मन या सुप्रियागा विधि (धारा 6.1.2) का उपयोग करके जांच की जाती है।

यदि जानवर जीवित आक्रामक अंडों से संक्रमित थे, तो शव परीक्षण पर, यकृत और फेफड़ों में प्रवासी एस्केराइड लार्वा पाए जाते हैं।

संक्रमण के मामले में, प्रयोगशाला जानवरों के मल में फासिओला अंडे 2 महीने के बाद खरगोशों में पाए जा सकते हैं। गिनी सूअर- 50 दिनों के बाद, चूहों में - 35-40 दिनों के बाद।

अधिक शीघ्रता से उत्तर प्राप्त करने के लिए, 20-30 दिनों के बाद प्रयोगशाला जानवरों को खोला जाता है और युवा फैसीओली की उपस्थिति के लिए यकृत की जांच की जाती है।

बौने टेपवर्म अंडों की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए, उन्हें पहले से असंक्रमित सफेद चूहों को खिलाने की भी सिफारिश की जाती है, इसके बाद 92-96 घंटों के बाद जानवरों को खोला जाता है और आंतों के विल्ली या आंतों के लुमेन में सेस्टोड में सिस्टिकेरोइड्स की पहचान की जाती है।

ओपिसथोर्चिस अंडों की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए, एक विधि की सिफारिश की जाती है (जर्मन एस.एम., बेयर एस.ए., 1984), जो मिरासिडियम हैचिंग ग्रंथि के भौतिक रासायनिक सक्रियण और उत्तेजना पर आधारित है। मोटर गतिविधिलार्वा, जो प्रयोगात्मक स्थितियों के तहत अंडे की टोपी के खुलने और मिरासिडियम की सक्रिय रिहाई की ओर जाता है।

पानी में ओपिसथोर्चिस अंडे के निलंबन को 10 - 12 डिग्री सेल्सियस तक पहले से ठंडा किया जाता है (बाद के सभी ऑपरेशन कमरे के तापमान 19 - 20 डिग्री सेल्सियस पर किए जाते हैं)। 100 - 150 अंडों वाले सस्पेंशन की 1 बूंद को सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में डाला जाता है। टेस्ट ट्यूब को 5-10 मिनट के लिए स्टैंड में रखा जाता है। इस दौरान सभी अंडे नीचे डूबने में कामयाब हो जाते हैं। फिर अतिरिक्त पानी को फिल्टर पेपर की एक पट्टी से सावधानीपूर्वक खींच लिया जाता है और एक विशेष माध्यम की 2 बूंदें टेस्ट ट्यूब में डाली जाती हैं। माध्यम 0.005 एम ट्रिस-एचसीएल बफर में तैयार किया जाता है; बफर में 12 - 13% इथेनॉल घोल और एक डाई (फुचिन, सफ्रानिन, ईओसिन, मेथिलीन ब्लू, आदि) मिलाया जाता है। टेस्ट ट्यूब को हिलाया जाता है, इसकी सामग्री को कांच की स्लाइड पर पाइप से डाला जाता है और थोड़ा हिलाते हुए 10 मिनट के लिए छोड़ दिया जाता है। फिर निर्दिष्ट माध्यम की 2 बूंदें डालें। 20x आवर्धन पर एक पारंपरिक प्रकाश माइक्रोस्कोप के तहत माइक्रोस्कोपी के लिए तैयारी तैयार है।

इस समय के दौरान, व्यवहार्य लार्वा का ढक्कन खुल जाता है, और मिरासिडियम सक्रिय रूप से निर्दिष्ट वातावरण में बाहर निकल जाता है। इसमें इथेनॉल की उपस्थिति के कारण, उन्हें 2 - 5 मिनट के बाद स्थिर कर दिया जाता है और फिर डाई से रंग दिया जाता है। इन्हें माइक्रोस्कोपी द्वारा आसानी से पहचाना और गिना जा सकता है।