Studiu bacteriologic pentru dizenterie. Diagnosticul de laborator al dizenteriei, amibiazei și balantidiazei

Dizenterie.

dizenterie - infecţie, caracterizată prin intoxicație generală a corpului, scaune moale și o leziune particulară a membranei mucoase a intestinului gros. Este una dintre cele mai frecvente boli intestinale acute din lume. Boala a fost cunoscută din cele mai vechi timpuri sub numele de „diaree cu sânge”, dar natura ei s-a dovedit a fi diferită. În 1875 Omul de știință rus Lesh a izolat o amibă de la un pacient cu diaree sângeroasă Entamoeba histolytica,în următorii 15 ani s-a stabilit independența acestei boli, pentru care a fost păstrată denumirea de amebiază. Agenții cauzali ai dizenteriei propriu-zise sunt un grup mare de bacterii similare biologic, unite în gen Shigelta. Agentul patogen a fost descoperit pentru prima dată în 1888. A. Chantemes și Vidal; în 1891 a fost descris de A.V. Grigoriev, iar în 1898. K. Shiga, folosind serul obținut de la pacient, a identificat agentul patogen la 34 de pacienți cu dizenterie, dovedind în final rolul etiologic al acestei bacterii. Cu toate acestea, în anii următori, au fost descoperiți și alți agenți patogeni ai dizenteriei: în 1900. - S. Flexner, în 1915 - K. Sonne, în 1917 - K. Stutzer și K. Schmitz, în 1932. - J. Boyd, în 1934 - D. Mare, în 1943 - A. Sax.

În prezent genul Shigella include mai mult de 40 de serotipuri. Toate sunt baghete gram-negative scurte, imobile, care nu formează spori sau capsule, care (cresc bine pe obișnuit). medii nutritive, nu creșteți pe un mediu cu citrat ca singură sursă de carbon; nu formează H2S, nu au urază; Reacția Voges-Proskauer este negativă; glucoza și alți carbohidrați sunt fermentați pentru a forma acid fără gaz (cu excepția unor biotipuri Shigella flexneri: S.manchesterȘi ewcastle); De regulă, nu fermentează lactoza (cu excepția Shigella Sonne), adonitol, inozitol, nu lichefiază gelatina, de obicei formează catalază și nu au lizin decarboxilază și fenilalanin deaminază. Conținutul de G+C în ADN este de 49-53% mol%. Shigella sunt anaerobi facultativi, temperatura optimă pentru creștere este de 37 ° C, nu cresc peste 45 ° C, pH-ul optim al mediului este de 6,7-7,2. Coloniile pe medii dense sunt rotunde, convexe, translucide; în caz de asociere, se formează colonii aspre în formă de R. Creșterea pe MPB sub formă de turbiditate uniformă, formele aspre formează un sediment. Culturile proaspăt izolate de Shigella Sonne J4HO formează colonii de două tipuri: mic rotund convex (faza I), mare plat (faza 2). Natura coloniei depinde de prezența (faza I) sau absența (faza II) a unei plasmide cu mm 120 MD, ceea ce determină și virulența Shigella Sonne.

La Shigella s-au găsit antigene O cu specificitate diferită: comune familiei Enterobacteriaceae generice, specii, grupe și tip specifice, precum și antigene K; Nu au N-antigene.

Clasificarea ia în considerare doar antigenele O-specifice de grup și tip. În conformitate cu aceste caracteristici, genul Shigella este împărțit în 4 subgrupe sau 4 specii și include 44 de serotipuri. În subgrupa A (tip Shigella dysenteriae) a inclus Shigella, care nu fermentează manitolul. Specia include 12 serotipuri (1-12). Fiecare stereotip are propriul său antigen de tip specific; legăturile antigenice între serotipuri, precum și cu alte specii de Shigella, sunt slab exprimate. La subgrupa B (tip Shigella flexneri) includ Shigella, care fermentează de obicei manitolul. Shigella acestei specii sunt înrudite serologic între ele: conțin antigene specifice tipului (I-VI), prin care sunt împărțite în serotipuri (1-6) și antigene de grup, care se găsesc în compoziții diferite în fiecare serotip și prin care serotipurile se împart în subserotipuri. În plus, această specie include două variante antigenice - X și Y, care nu au antigene tipice; ele diferă în seturi de antigene de grup. Serotip S.flexneri 6 nu are subserotipuri, dar este împărțit în 3 tipuri biochimice pe baza caracteristicilor de fermentație ale glucozei, manitolului și dulcitolului.

La subgrupa C (tip Shlgella boydll) includ Shigella, care fermentează de obicei manitolul. Membrii grupului sunt diferiți serologic unul de celălalt. Conexiunile antigenice din cadrul speciei sunt slab exprimate. Specia include 18 serotipuri (1-18), fiecare dintre ele având propriul său antigen de tip principal.

În subgrupa D (tip Shlgella sonnel) a inclus Shigella, care fermentează de obicei manitolul și este capabilă să fermenteze lent (după 24 de ore de incubație și mai târziu) lactoza și zaharoza. Vedere S. sonnei include un serotip, dar coloniile de faze I și II au propriile lor antigene specifice tipului. Pentru clasificarea intraspecifică a Shigella Sonne au fost propuse două metode:

1) împărțirea lor în 14 tipuri și subtipuri biochimice în funcție de capacitatea lor de a fermenta maltoză, ramnoză și xiloză;

2) împărțirea în tipuri de fagi în funcție de sensibilitatea la un set de fagi corespunzători.

Aceste metode de tipare au în principal semnificație epidemiologică. În plus, Shigella Sonne și Shigella Flexner sunt tipărite în același scop pe baza capacității lor de a sintetiza colicine specifice (colicinogenotyping) și sensibilitatea la colicine cunoscute (colicinotyping). Pentru a determina tipul de colicine produse de Shigella, J. Abbott și R. Shenon au propus seturi de tulpini standard și indicator de Shigella și pentru a determina sensibilitatea Shigella la tipuri cunoscute colicine folosesc un set de tulpini colicinogene de referință ale P. Frederick.

Rezistenţă. Shigella are o rezistență destul de mare la factorii de mediu. Aceștia supraviețuiesc pe țesături de bumbac și hârtie până la 30-36 de zile, în fecale uscate - până la 4-5 luni, în sol - până la 3-4 luni, în apă - de la 0,5 până la 3 luni, pe fructe și legume - până la 2 alimente, în lapte și produse lactate - până la câteva săptămâni; la 60 °C mor în 15-20 de minute.

Sensibil la soluții de cloramină, clor activ și alți dezinfectanți.

Factori de patogenitate. Cel mai important proprietate biologică Shigella, care determină patogenitatea lor, este capacitatea de a invada celulele epiteliale, de a se multiplica în ele și de a le provoca moartea. Acest efect poate fi detectat folosind un test keratoconjunctival (introducerea unei bucle de cultură Shigella (2-3 miliarde de bacterii) sub pleoapa inferioară a unui cobai provoacă dezvoltarea keratoconjunctivitei seros-purulente), precum și prin infectarea culturilor celulare. (efect citotoxic), sau embrioni de pui (moartea lor), sau intranazal la șoarecii albi (dezvoltarea pneumoniei). Principalii factori de patogenitate ai Shigella pot fi împărțiți în trei grupuri:

1) factori care determină interacțiunea cu epiteliul membranei mucoase;

2) factori care asigură rezistența la mecanismele umorale și celulare de apărare ale macroorganismului și capacitatea Shigella de a se reproduce în celulele sale;

3) capacitatea de a produce toxine și produse toxice care determină dezvoltarea procesului patologic în sine.

Prima grupă include factori de adeziune și colonizare: rolul lor este jucat de pili, proteinele membranei exterioare și LPS. Adeziunea si colonizarea sunt favorizate de enzimele care distrug mucusul - neuraminidaza, hialuronidaza, mucinaza. Al doilea grup include factori de invazie care favorizează pătrunderea Shigella în enterocite și reproducerea lor în ele și în macrofage cu manifestarea simultană a unui efect citotoxic și (sau) enterotoxic. Aceste proprietăți sunt controlate de genele plasmidei cu m.m. 140 MD (codifică sinteza proteinelor membranei exterioare care provoacă invazia) și genele cromozomiale ale Shigella: KSR A (provoacă keratoconjunctivită), cyt (responsabilă de distrugerea celulelor), precum și alte gene neidentificate încă. Protecția Shigella de fagocitoză este asigurată de antigenul K de suprafață, antigenele 3, 4 și lipopolizaharide. În plus, lipida A a endotoxinei Shigella are un efect imunosupresor - suprimă activitatea celulelor memoriei imune.

Al treilea grup de factori de patogenitate include endotoxina și două tipuri de exotoxine găsite în Shigella - Shiga și exotoxine asemănătoare Shiga (SLT-I și SLT-II), ale căror proprietăți citotoxice sunt cele mai pronunțate în S. dysenteriae 1. Shiga și toxine asemănătoare Shiga au fost găsite și în alte serotipuri S. dysenteriae, sunt de asemenea formate S.flexneri, S.sonnei, S.boydii, ETEC și niște salmonele. Sinteza acestor toxine este controlată de genele toxice ale fagilor convertitori. Enterotoxinele de tip LT se găsesc în Shigella Flexner, Sonne și Boyd. Sinteza lor LT este controlată de genele plasmide. Enterotoxina stimulează activitatea adenilat-ciclazei și este responsabilă pentru dezvoltarea diareei. Toxina Shiga, sau neurotoxina, nu reacționează cu sistemul de adenil-ciclază, dar are un efect citotoxic direct. Shiga și toxinele asemănătoare Shiga (SLT-I și SLT-II) au m.m. -70 kDa și constau din subunitățile A și B (cea din urmă din 5 subunități mici identice). Receptorul pentru toxine este un glicolipid al membranei celulare.

Virulența Shigella Sonne depinde și de plasmida cu m.m. 120 MD. Controlează sinteza a aproximativ 40 de polipeptide ale membranei exterioare, șapte dintre ele fiind asociate cu virulență. Shigella Sonne, având această plasmidă, formează colonii de fază I și sunt virulente. Culturile care au pierdut plasmida formează colonii de fază II și sunt lipsite de virulență. Plasmide cu m.m. 120-140 MD au fost găsite la Shigella Flexner și Boyd. Lipopolizaharida Shigella este o endotoxină puternică.

Caracteristicile epidemiologiei. Sursa de infecție este doar oamenii. Niciun animal din natură nu suferă de dizenterie. În condiții experimentale, dizenteria poate fi reprodusă numai la maimuțe. Metoda de infectare este fecal-oral. Căi de transmitere: apă (predominantă pentru Shigella Flexner), alimente, în special lapte și produse lactate (cale predominantă de infecție pentru Shigella Sonne) și contact cu gospodăria, în special pentru specie S. dysenteriae.

O caracteristică a epidemiologiei dizenteriei este o modificare a compoziției speciilor a agenților patogeni, precum și a biotipurilor Sonne și a serotipurilor Flexner în anumite regiuni. De exemplu, până la sfârșitul anilor 30 ai secolului XX, cota S.dysenteriae 1 a reprezentat până la 30-40% din toate cazurile de dizenterie, iar apoi acest serotip a început să apară din ce în ce mai rar și aproape a dispărut. Cu toate acestea, în anii 60-80 S.dysenteriae a reapărut pe arena istorică și a provocat o serie de epidemii care au dus la formarea a trei focare hiperendemice ale acesteia - în America Centrală, Africa Centrală și Asia de Sud (India, Pakistan, Bangladesh și alte țări). Motivele pentru modificarea compoziției speciilor a agenților patogeni de dizenterie sunt probabil asociate cu modificări imunitate de turmăşi cu modificări ale proprietăţilor bacteriilor de dizenterie. În special, întoarcerea S.dysenteriae 1 iar distribuția sa pe scară largă, care a provocat formarea de focare hiperendemice de dizenterie, este asociată cu achiziționarea de plasmide care au cauzat rezistență la mai multe medicamente și virulență crescută.

Caracteristicile patogenezei și clinicii. Perioada de incubație pentru dizenterie este de 2-5 zile, uneori mai puțin de o zi. Formare focus infectiosîn membrana mucoasă a părții descendente a intestinului gros (sigmoid și rect), unde pătrunde agentul patogen de dizenterie, este de natură ciclică: aderența, colonizarea, introducerea Shigella în citoplasma enterocitelor, reproducerea lor intracelulară, distrugerea și respingerea. a celulelor epiteliale, eliberarea agenților patogeni în lumenul intestinal; după aceasta începe următorul ciclu - aderență, colonizare etc. Intensitatea ciclurilor depinde de concentrația agenților patogeni din stratul parietal al membranei mucoase. Ca urmare a ciclurilor repetate, focarul inflamator crește, ulcerele rezultate, conectându-se, cresc expunerea peretele intestinal, în urma cărora în scaun apar sânge, bulgări mucopurulenți și leucocite polimorfonucleare. Citotoxinele (SLT-I și SLT-II) provoacă distrugerea celulelor, enterotoxina - diaree, endotoxine - intoxicație generală. Tabloul clinic al dizenteriei este determinat în mare măsură de ce tip de exotoxine este produs într-o măsură mai mare de agentul patogen, de gradul efectului său alergen și starea imunitară corp. Cu toate acestea, multe probleme ale patogenezei dizenteriei rămân neclare, în special: caracteristicile cursului dizenteriei la copiii primilor doi ani de viață, motivele tranziției dizenteriei acute la cronice, semnificația sensibilizării, mecanismul a imunității locale a mucoasei intestinale etc.Cele mai tipice manifestari clinice dizenteria este cauzată de diaree, indemnul frecvent- în cazuri severe, de până la 50 sau mai multe ori pe zi, tenesmus (spasme dureroase ale rectului) și intoxicație generală. Natura scaunului este determinată de gradul de deteriorare a intestinului gros. Cea mai severă dizenterie este cauzată de S.dysenteriae 1, cel mai ușor - dizenteria Sonne.

Imunitatea post-infecțioasă. După cum au arătat observațiile maimuțelor, după ce suferă de dizenterie, rămâne imunitatea puternică și destul de de lungă durată. Este cauzată de anticorpi antimicrobieni, antitoxine, activitate crescută a macrofagelor și limfocitelor T. Joacă un rol semnificativ imunitatea locală mucoasa intestinală, mediată de IgAs. Cu toate acestea, imunitatea este specifică tipului; nu are loc o imunitate încrucișată puternică.

Diagnosticul de laborator . Metoda principală este bacteriologică. Materialul pentru cercetare este fecalele. Schema de izolare a agentului patogen: inoculare pe medii de diagnostic diferențial Endo și Ploskirev (în paralel pe mediu de îmbogățire urmată de inoculare pe medii Endo și Ploskirev) pentru izolarea coloniilor izolate, obținerea cultura pura, studiul proprietăților sale biochimice și, ținând cont de acestea din urmă, identificarea folosind seruri aglutinante de diagnostic polivalente și monovalente. Se produc următoarele seruri comerciale:

1. La Shigella, care nu fermentează manitolul: la S.dysenteriae 1 la 2 S.dysenteriae 3-7(polivalent și monovalent), la S.dysenteriae 8-12(polivalent și monovalent).

2. Pentru manitol care fermenta Shigella:

la antigeni tipici S.flexneri I, II, III, IV, V, VI,

pentru a grupa antigenele S.flexneri 3, 4, 6,7,8- polivalent,

la antigeni S.boydii 1-18(polivalent și monovalent),

la antigeni S. sonnei faza I, faza a II-a,

la antigeni S.flexneri I-VI+ S.sonnei- polivalent.

Pentru a detecta antigenele din sânge (inclusiv ca parte a CEC), pot fi utilizate urina și fecalele următoarele metode: RPHA, RSK, reacție de coaglutinare (în urină și fecale), IFM, RPGA (în serul sanguin). Aceste metode sunt extrem de eficiente, specifice și potrivite pentru diagnosticul precoce.

Pentru diagnosticul serologic se pot folosi: RPGA cu corespunzatoare diagnosticul eritrocitar, metoda imunofluorescenței (modificare indirectă), metoda Coombs (determinarea titrului anticorpilor incompleti). Valoarea diagnostica are si un test de alergie cu dizenterină (soluție de fracții proteice de Shigella Flexner și Sonne). Reacția se ia în considerare după 24 de ore.Se consideră pozitivă în prezența hiperemiei și se infiltrează cu diametrul de 10-20 mm.

Tratament. Accentul este pe restabilirea normalității metabolismul apă-sare, alimentație rațională, detoxifiere, antibioticoterapie rațională (ținând cont de sensibilitatea agentului patogen la antibiotice). Efect bun oferă utilizarea timpurie a bacteriofagului polivalent de dizenterie, în special tabletat cu acoperire cu pectină, care protejează fagul de acțiunea sucului gastric HC1; V intestinul subtire pectina se dizolvă, fagii sunt eliberați și își exercită efectul. În scopuri preventive, fagul trebuie administrat cel puțin o dată la trei zile (perioada de supraviețuire a acestuia în intestin).

Problema prevenirii specifice. Pentru a crea imunitatea artificială S-au folosit diverse vaccinuri împotriva dizenteriei: de la bacterii ucise, substanțe chimice, alcool, dar toate s-au dovedit a fi ineficiente și au fost întrerupte. Vaccinurile împotriva dizenteriei Flexner au fost create din Shigella Flexner viu (mutant, dependent de streptomicina); vaccinuri ribozomale, dar nici nu au găsit aplicare largă. Prin urmare, problema prevenirii specifice a dizenteriei rămâne nerezolvată. Principala modalitate de combatere a dizenteriei este îmbunătățirea sistemului de alimentare cu apă și canalizare, asigurarea unor regimuri sanitare și igienice stricte în întreprinderile alimentare, în special în industria lactatelor, în instituțiile de îngrijire a copilului, locurile publice și în menținerea igienei personale.

Microbiologia holerei

Potrivit OMS, holera este o boală caracterizată prin diaree acută, severă, deshidratantă, cu scaun asemănător apei de orez, rezultată din infecția cu Vibrio cholerae. Datorită faptului că se caracterizează printr-o capacitate pronunțată de răspândire largă a epidemiei, curs severși mortalitate ridicată, holera este una dintre cele mai periculoase infecții.

Patria istorică a holerei este India, mai exact, delta râurilor Gange și Brahmaputra (acum India de Est și Bangladesh), unde există din timpuri imemoriale (epidemiile de holeră în această zonă au fost observate încă din 500 ani î.Hr). Existența îndelungată a unei surse endemice de holeră aici se explică prin mai multe motive. Vibrio cholerae nu numai că poate supraviețui în apă mult timp, ci și se poate înmulți în ea în condiții favorabile - temperaturi peste +12 ° C și prezența substanțelor organice. Toate aceste condiții sunt disponibile în India - climat tropical (temperatura medie anuală de la +25 până la +29 °C), abundență de precipitații și mlaștină, densitate mare populația, în special în Delta Gangelui, un numar mare de substanțe organice din apă, poluare continuă a apei pe tot parcursul anului ape uzateși excremente, nivel material scăzut de trai și ritualuri religioase și de cult deosebite ale populației.

Agentul cauzal al holerei Vibrio cholerae a fost deschis în 1883. în timpul celei de-a cincea pandemii de către R. Koch, totuși, vibrionul a fost descoperit pentru prima dată în fecalele pacienților cu diaree încă din 1854. F. Pacini.

V.cholerae aparține familiei Vibrionaceae care include mai multe genuri (Vibrio, Aeromonas, Plesiomonas, Photobacterium). Gen Vibrio din 1985 are peste 25 de specii, dintre care cea mai mare valoare pentru o persoană are V.cholerae, V.parahaemolyticus, V.alginolyticus, dnificusȘi V. fluvialis.

Caracteristicile cheie ale genului Vibrio : scurte, care nu formează spori și capsule, baghete gram-negative curbate sau drepte, 0,5 µm în diametru, 1,5-3,0 µm lungime, mobile ( V.cholerae- monotrich, unele specii au doi sau mai mulți flageli localizați polar); cresc bine și rapid pe medii obișnuite, chemoorganotrofe, fermentează carbohidrații cu formare de acid fără gaz (glucoza este fermentată prin calea Embden-Meyerhof). Oxidaza pozitivă, formează indol, reduc nitrații la nitriți (V.cholerae dă o reacție pozitivă nitrozo-indol), descompun gelatina, adesea dau o reacție Voges-Proskauer pozitivă (adică formează acetilmetilcarbinol), nu au urază, nu formează H S. au lizină și ornitin decarboxilaze, dar nu au arginina dihidrolază.

Vibrio cholerae este foarte nepretențios față de mediile nutritive. Se înmulțește bine și rapid în apă peptonă (PV) 1% alcalină (pH 8,6-9,0) care conține 0,5-1,0% NaCl, depășind creșterea altor bacterii. Pentru a suprima creșterea Proteus, se recomandă adăugarea de telurit de potasiu 4 până la 1% (PV) (diluție finală 1:100.000). 1% PV este cel mai bun mediu de îmbogățire pentru Vibrio cholerae. Pe măsură ce crește, după 6-8 ore pe suprafața PV, formează o peliculă delicată, liberă, cenușie, care, atunci când este agitată, se descompune ușor și cade la fund sub formă de fulgi; PV devine moderat tulbure. . Au fost propuse diferite medii selective pentru izolarea Vibrio cholerae: agar alcalin, agar-sare de gălbenuș, albuminat alcalin, agar sânge alcalin, lactoză-zaharoză și alte medii. Cel mai bun mediu este TCBS (agar tiosulfat citrat-bromotimol zaharoză) și modificările acestuia. Cu toate acestea, cel mai adesea folosesc MPA alcalin, pe care Vibrio cholerae formează colonii netede, în formă de disc, transparente sticloase, cu o consistență vâscoasă, cu o nuanță albăstruie.

La semănat prin injectare într-o coloană de gelatină, vibrio după 2 zile la 22-23 ° C provoacă lichefierea de la suprafață sub formă de bule, apoi în formă de pâlnie și, în final, strat cu strat.

În lapte, vibrionul se înmulțește rapid, determinând coagularea după 24-48 de ore, iar apoi are loc peptonizarea laptelui, iar după 3-4 zile vibrionul moare din cauza unei deplasări a pH-ului laptelui spre partea acidă.

B. Heiberg, pe baza capacității de a fermenta manoza, zaharoza și arabinoza, a împărțit toate vibrionii (holera și asemănător holerei) într-un număr de grupuri, al căror număr este acum 8. Vibrio cholerae aparține primului grup al lui Heiberg.

Vibrionii, asemănători ca caracteristici morfologice, culturale și biochimice cu holera, au fost și sunt denumiți diferit: paracholera, asemănător holerei, NAG-vibrios (vibrioni neaglutinanți); vibrioni care nu aparțin grupului 01. Numele de familie subliniază cel mai precis relația lor cu Vibrio cholerae. După cum a fost stabilit de A. Gardner și K. Venkatraman, holera și vibrionii asemănători holerei au un antigen H comun, dar diferă în antigenele O. Conform antigenului O, holera și vibrioni asemănător holerei sunt în prezent împărțite în 139 de serogrupuri O, dar numărul lor este în continuă creștere. Vibrio cholerae aparține grupului 01. Are un antigen A comun și două antigene specifice tipului - B și C, care disting trei serotipuri V.cholerae- serotipul Ogawa (AB), serotipul Inaba (AS) și serotipul Gikoshima (ABC). Vibrio cholerae în stadiul de disociere are un antigen OR. În acest sens, pentru identificare V.cholerae Se utilizează O-ser, OR-ser și seruri specifice tipului Inaba și Ogawa.

Factori de patogenitate V.cholerae :

1. Mobilitate.

2. Chemotaxie. Cu ajutorul acestor proprietăți, vibrionul depășește stratul mucos și interacționează cu celulele epiteliale. La mutanții Che" (care și-au pierdut capacitatea de a face chimiotaxie), virulența este redusă brusc. Virulența în mutanții Mot" (care și-au pierdut mobilitatea) fie dispare complet, fie este redusă de 100-1000 de ori.

3. Factori de aderență și colonizare, cu ajutorul cărora vibrionul aderă la microvilozități și colonizează membrana mucoasă a intestinului subțire.

4. Enzime: mucinaza, proteaze, neuraminidaza, lecitinaza etc.

Ele favorizează aderența și colonizarea, deoarece distrug substanțele care alcătuiesc mucusul. Neuraminidaza, prin scindarea acidului sialic din glicoproteinele epiteliale, creează un loc de „aterizare” pentru vibrioni. În plus, crește numărul de receptori pentru coleragen prin modificarea tri- și disialogangliozidelor în monosialogangliozide Gm b care servește ca receptor pentru coleragen.

5. Principalul factor de patogenitate V.cholerae este un exotoxină-colerogen, care determină patogeneza holerei. Molecula de colerogeni are un m.m. 84 kDa și este format din două fragmente - A și B. Fragmentul A este format din două peptide - A1 și A2 - și are proprietatea specifică a toxinei holerice. Fragmentul B este format din 5 subunități identice și îndeplinește două funcții: 1) recunoaște receptorul (monosialogangliozid) al enterocitului și se leagă de acesta;

2) formează un canal hidrofob intramembranar pentru trecerea subunității A. Peptida A 2 Cl este utilizată pentru conectarea fragmentelor A și B. Funcția toxică propriu-zisă este îndeplinită de peptida A t. Interacționează cu NAD, provoacă hidroliza acestuia, iar ADP-riboza rezultată se leagă de subunitatea de reglare a adenilat-ciclazei. Acest lucru duce la inhibarea hidrolizei GTP. Complexul GTP + adenilat ciclază rezultat determină hidroliza ATP cu formarea cAMP. (O altă modalitate de a acumula cAMP este suprimarea enzimei care hidrolizează cAMP la 5-AMP de către colerogeni).

6. Pe langa coleragen, Vibrio cholerae sintetizeaza si secreta un factor care creste permeabilitatea capilara.

7. În Vibrio cholerae s-au găsit și alte exotoxine, în special tipurile LT, ST și SLT.

8. Endotoxina. Lipopolizaharidă V.cholerae are proprietăți endotoxice puternice. Este responsabil pentru intoxicația generală a corpului și vărsături. Anticorpii formați împotriva endotoxinei au un efect vibriocid pronunțat (dizolvă vibrionii în prezența complementului) și sunt o componentă importantă a imunității post-infecțioase și post-vaccinare.

Capacitatea vibriorilor care nu aparțin grupului 01 de a provoca boli diareice sporadice sau de grup la oameni este asociată cu prezența enterotoxinelor de tip LT sau ST, care stimulează fie sistemele adenilat, fie respectiv guanilat ciclază.

Sinteza colerogenului - cea mai importantă proprietate V.cholerae. Genele care controlează sinteza fragmentelor A și B ale colerogenelor sunt combinate în operonul vctAB sau ctxB; ele sunt localizate pe cromozomul vibrio. Unele tulpini de Vibrio cholerae au doi astfel de operoni non-tandem. Funcția operonului este controlată de două gene reglatoare. Gena toxR oferă control pozitiv; mutațiile acestei gene duc la o reducere de 1000 de ori a producției de toxine. Gena htx exercită control negativ; mutațiile acestei gene cresc producția de toxine de 3-7 ori.

Următoarele metode pot fi utilizate pentru a detecta colerogenii:

1. Teste biologice pe iepuri. Când vibrionii holeric sunt injectați intraintestinal la iepuri de alăptare (nu mai mult de 2 săptămâni), aceștia dezvoltă un sindrom colerogenic tipic: diaree, deshidratare și moartea iepurelui. La autopsie - o injecție ascuțită a vaselor stomacului și mici
intestine, uneori se acumulează lichid limpede în el. Dar modificările din intestinul gros sunt deosebit de caracteristice - este mărit și umplut cu un lichid complet transparent, de culoarea paiului, cu fulgi și bule de gaz. Când vibrionii de holeră sunt introduși în zona legată a intestinului subțire la iepurii adulți, aceștia experimentează aceleași modificări în intestinul gros ca atunci când iepurii de alăptare sunt infectați.

2. Detectarea directă a colerogenilor folosind metode imunofluorescente sau imunosorbente legate de enzime sau o reacție de hemoliză imună pasivă (colerogenul se leagă de Gm1 al eritrocitelor și sunt lizate cu adăugarea de anticorpi antitoxici și complement).

3. Stimularea adenilat-ciclazei celulare în culturi celulare.

4. Utilizarea unui fragment de cromozom ca sondă ADN V.cholerae, purtând un operoncolerogen.

În timpul celei de-a șaptea pandemii, tulpinile au fost izolate V.cholerae Cu grade diferite virulență: colerogen (virulent), slab colerogen (scăzut virulent) și non-colerogen (non-virulent). Non-colerogenic V.cholerae, de regulă, au activitate hemolitică, nu sunt lizate de fagul de diagnostic al holerei 5 (CDF-5) și nu provoacă boli umane.

Pentru tastarea fagilor V.cholerae(inclusiv V.eltor) S. Mukherjee a propus seturi corespunzătoare de fagi, care au fost apoi completate cu alți fagi din Rusia. Setul de astfel de fagi (1-7) face posibilă distingerea între V.cholerae 16 fagotipuri. HDF-3 lizează selectiv Vibrio cholerae tip clasic, HDF-4 - vibrionii El Tor și HDF-5 lizează numai vibrionii colerogeni (virulenți) de ambele tipuri și nu lizează vibrionii non-colerogeni.

Vibrionii colerogeni, de regulă, nu au activitate hemolitică, sunt lizați de HDF-5 și provoacă holera la om.

Rezistența agenților patogeni holeric. Vibrios cholerae supraviețuiește bine la temperaturi scăzute: în gheață rămân viabile până la 1 lună; în apă de mare - până la 47 de zile, în apă de râu - de la 3-5 zile până la câteva săptămâni, în apă fiartă apă minerală persistă mai mult de 1 an, în sol - de la 8 zile la 3 luni, în fecale proaspete - până la 3 zile, pe alimente fierte (orez, tăiței, carne, cereale etc.) supraviețuiesc 2-5 zile, pe crude. legume - 2- 4 zile, pe fructe - 1-2 zile, în lapte și produse lactate - 5 zile; atunci când sunt depozitate la rece, perioada de supraviețuire crește cu 1-3 zile: pe lenjeria contaminată cu fecale, durează până la 2 zile, iar pe materialul umed - o săptămână. Vibrionii holerei mor la 80 °C în 5 minute, la 100 °C - instantaneu; foarte sensibil la acizi; sub influența cloraminei și a altor dezinfectanți mor în 5-15 minute. Sunt sensibili la uscare și direct razele de soare, dar persistă bine și mult timp și chiar se înmulțesc în rezervoare deschise și în apele uzate, bogate în substanțe organice, având un pH alcalin și o temperatură peste 10-12 ° C. Foarte sensibil la clor: o doză de clor activ de 0,3-0,4 mg/l de apă în 30 de minute determină o dezinfecție sigură de Vibrio cholerae.

Caracteristicile epidemiologiei. Principala sursă de infecție este doar o persoană - o persoană cu holeră sau un purtător de vibrio, precum și apa contaminată de acestea. Niciun animal din natură nu suferă de holeră. Metoda de infectare este fecal-oral. Căi de infectare: a) principal - prin apă utilizată pentru băut, scăldat și nevoile casnice; b) contact și gospodărie și c) prin alimentație. Toate epidemiile și pandemiile majore de holeră au fost transmise prin apă în natură. Vibrios cholerae au astfel de mecanisme de adaptare care asigură existența populațiilor lor atât în ​​corpul uman, cât și în anumite ecosisteme ale corpurilor de apă deschise. Diareea abundentă cauzată de Vibrio cholerae duce la curățarea intestinelor de bacteriile concurente și contribuie la distribuirea pe scară largă a agentului patogen în mediu, în primul rând în apele uzate și în corpurile de apă deschise unde sunt evacuate. O persoană cu holeră secretă agentul patogen în un număr imens- de la 100 milioane la 1 miliard la 1 ml de fecale, purtătorul de vibrioni eliberează 100-100.000 de vibrioni la 1 ml, doza infecțioasă este de aproximativ 1 milion de vibrioni. Durata excreției vibrionului holeric la purtătorii sănătoși variază de la 7 la 42 de zile și de la 7-10 zile la cei care și-au revenit după boală. Descărcarea mai lungă este extrem de rară.

Particularitatea holerei este că după aceasta, de regulă, nu există transport pe termen lung și nu se formează focare endemice persistente. Cu toate acestea, după cum sa menționat deja mai sus, din cauza poluării corpurilor de apă deschise cu ape uzate care conțin cantități mari materie organică, detergenți și sare de masă, vara, vibrionul holeric nu numai că supraviețuiește în ele mult timp, ci chiar se înmulțește.

De o mare semnificație epidemiologică este faptul că vibrionii holeric din grupa 01, atât netoxigeni, cât și toxigeni, pot persista mult timp în diverse ecosistemelor acvatice sub formă de forme necultivate. Folosind reacția în lanț a polimerazei, cu studii bacteriologice negative, au fost descoperite gene veterinare de forme necultivate într-o serie de zone endemice ale CSI în diferite corpuri de apă. V.cholerae.

Când apar boli de holeră, se realizează un set de măsuri antiepidemice, printre care activează cea de conducere și decisivă. detectarea în timp utilși izolarea (interne, tratament) a pacienților în stare acută și formă atipicăși purtători de vibrio sănătoși; se iau măsuri pentru suprimarea posibilelor modalități de răspândire a infecției; o atenție deosebită se acordă alimentării cu apă (clorinare bând apă), respectarea regimului sanitar și igienic la întreprinderile alimentare, în instituțiile de îngrijire a copilului și în locurile publice; Controlul strict, inclusiv controlul bacteriologic, se efectuează asupra corpurilor de apă deschise, se realizează imunizarea populației etc.

Caracteristicile patogenezei și clinicii. Perioada de incubație pentru holeră variază de la câteva ore până la 6 zile, cel mai adesea 2-3 zile. Odată ajuns în lumenul intestinului subțire, vibrionii holeric sunt direcționați către mucus datorită motilității și chemotaxiei către membrana mucoasă. Pentru a pătrunde prin ea, vibrionii produc o serie de enzime: neuraminidaza, mucinaza, proteazele, lecitinaza, unele distrug substanțele conținute în mucus și facilitează mișcarea vibrionilor către celulele epiteliale. Prin aderență, vibrionii se atașează de glicocalixul epiteliului și, pierzând mobilitatea, încep să se înmulțească intens, colonizând microvilozitățile intestinului subțire și, în același timp, producând cantități mari de exotoxină-colerogen. Moleculele de colerogen se leagă de monosialogangliozida Gm1 și pătrund în membrana celulară, activează sistemul de adenil-ciclază, iar acumularea de cAMP provoacă hipersecreția de lichid, cationi și anioni Na +, HCO 3 ~, K +, SG din enterocite, ceea ce duce la diaree holeră, corp de deshidratare și desalinizare. Există trei tipuri de boli:

1. boală diareică violentă, deshidratantă severă, care duce la decesul pacientului în câteva ore;

2. curs mai puțin sever, sau diaree fără deshidratare;

3. cursul asimptomatic al bolii (transport vibrio).

În formele severe de holeră, pacienții dezvoltă diaree, scaunele devin mai frecvente, mișcările intestinale devin mai abundente, devin apoase, își pierd mirosul fecal și arată ca apa de orez (un lichid tulbure cu reziduuri de mucus și celule epiteliale care plutesc în el). Apoi urmează vărsăturile debilitante, mai întâi cu conținut intestinal, iar apoi vărsăturile capătă aspectul apei de orez. Temperatura pacientului scade sub normal, pielea devine albăstruie, încrețită și rece - holeră algidă. Ca urmare a deshidratării, sângele se îngroașă și se dezvoltă cianoza. lipsa de oxigen, funcția rinichilor suferă brusc, apar convulsii, pacientul își pierde cunoștința și apare moartea. Rata mortalității pentru holeră în timpul celei de-a șaptea pandemii a variat de la 1,5% în țările dezvoltate la 50% în țările în curs de dezvoltare.

Imunitatea post-infecțioasă bolile durabile, de lungă durată, recurente sunt rare. Imunitatea antitoxică și antimicrobiană este cauzată de anticorpi (antitoxinele durează mai mult decât anticorpii antimicrobieni), celulele cu memorie imunitară și fagocite.

Diagnosticul de laborator. Principal și metoda decisiva Diagnosticul holerei este bacteriologic. Materialul de cercetare de la pacient este fecalele și vărsăturile; fecalele sunt examinate pentru transportul vibrionilor; de la persoanele care au murit de holeră, se iau pentru cercetare un segment legat al intestinului subțire și al vezicii biliare; Dintre obiectele de mediu, apa din rezervoare deschise și apele uzate sunt cel mai des studiate.

La efectuarea unui studiu bacteriologic, trebuie respectate următoarele trei condiții:

1) inoculați materialul de la pacient cât mai repede posibil (vibrio holera rămâne în fecale Pe termen scurt);

2) recipientul în care este preluat materialul să nu fie dezinfectat cu substanțe chimice și să nu conțină urme ale acestora, deoarece Vibrio cholerae este foarte sensibil la acestea;

3) excludeți posibilitatea contaminării și infectarii altora.

În cazurile în care există V.cholerae nu 01-grupuri, acestea trebuie să fie tipizate folosind seruri aglutinante adecvate ale altor serogrupuri. externare de la un pacient cu diaree (inclusiv asemănătoare holerei) V.cholerae nu 01-grup necesită aceleași măsuri antiepidemice ca și în cazul izolării V.cholerae 01-grupe. Dacă este necesar, capacitatea de a sintetiza coleragenul sau prezența genelor de holera în vibrioni holeric izolați este determinată folosind o sondă ADN folosind una dintre metode.

Diagnosticul serologic al holerei este auxiliar. În acest scop, poate fi utilizată o reacție de aglutinare, dar este mai bine să se determine titrul de anticorpi vibriocizi sau antitoxine (anticorpii de colerogen sunt determinați prin metode imunosorbente sau imunofluorescente legate de enzime).

Tratament pentru pacienții cu holeră ar trebui să conțină în primul rând rehidratarea și restabilirea metabolismului normal apă-sare. În acest scop, se recomandă utilizarea soluțiilor saline, de exemplu, din următoarea compoziție: NaCl - 3,5; NaHC03-2,5; KS1 - 1,5 și glucoză - 20,0 g la 1 litru de apă. Un astfel de tratament bazat pe patogenetic în combinație cu terapia rațională cu antibiotice poate reduce rata mortalității în holeră la 1% sau mai puțin.

Prevenirea specifică. Au fost propuse diferite vaccinuri pentru a crea imunitate artificială, inclusiv tulpinile Inaba și Ogawa ucise; Toxoid colerogen pentru uz subcutanat și vaccin enteral chimic bivalent, sos

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL DISENTERIE, AMOEBIAZE SI BALANTIDIAZE

În condițiile moderne, în cazuri izolate sau în mici focare focale de boli intestinale, care apar adesea cu simptome neclare, metodele de cercetare de laborator capătă o importanță practică importantă.

Studiile efectuate în scop de diagnosticare trebuie efectuate cu respectarea strictă a recomandărilor stabilite și cât mai devreme posibil.

Colectie fecale pentru cercetare, produceți în vase curate (vaze de noapte, paturi) care nu conțin dezinfectanți reziduali; materialul pentru cercetare este prelevat din mucoasa rectală cu tampoane în timpul sigmoidoscopiei.

Pentru a confirma diagnosticul din punct de vedere bacteriologic, este mai bine să luați scaun de la pacienții cu dizenterie înainte de tratamentul cu antibiotice și sulfonamide și să determinați transportul bacterian - după tratamentul cu aceste medicamente.

Semănatul pe vase Petri trebuie făcut imediat după preluarea materialului.

În primul rând, se efectuează o examinare macroscopică a scaunului, care poate detecta: resturi alimentare - bucăți de carne, reziduuri de grăsime, planteaza mancareși impurități patologice - mucus de consistență vâscoasă sub formă de bulgări (netransparent în dizenterie și transparent în amebiază); sângele neschimbat de dizenterie şi leziune ulceroasă partea inferioară a colonului de o etiologie diferită și o culoare schimbată („jeleu de zmeură”) cu amebiază, balantidiază; puroiul este detectat în formele severe prelungite de dizenterie.

Examinarea microscopică a fecalelor este utilizată pentru a detecta elementele celulare ale sângelui, amebe, balantidia și chisturile acestora. Preparatul nativ se prepară astfel: pe o lamă de sticlă se așează un bulgăre de fecale cu o buclă și alături o picătură de soluție izotonică de clorură de sodiu, se amestecă și se acoperă cu o lamă. Soluția de Lugol este folosită pentru colorarea protozoarelor.

Pentru a diferenția elementele celulare ale sângelui, preparatele sunt tratate cu colorant Romanovsky-Giemsa sau azur-eozină. În dizenterie, într-un preparat preparat din mucus, multe granulocite neutrofile (peste 90% din toate elementele celulare), granulocite unice eozinofile (eozinofile) și cantitate diferită globule rosii; în amebiază, există puține elemente celulare, a căror masă principală este formată din celule alterate cu un nucleu picnotic și o margine îngustă de protoplasmă. Se găsesc granulocite eozinofile și cristale Charcot-Leiden.

Formele tisulare ale amibei (Entamoeba histolytica) într-un preparat necolorat sunt incolore, mobile (cu ajutorul pseudopodiilor), în stare alungită ajung la 50-60 microni, se găsesc adesea în endoplasmă cu eritrocite și spre periferie - nucleu. Prezența globulelor roșii în celulă face posibilă distingerea Entamoeba histolutica de formele nepatogene (E. hartmani, E. coli.).

Forma luminală a amebei este mai mică (până la 20 de microni), inactivă și nu conține globule roșii. Chisturile sunt și mai mici ca dimensiune (10-12 microni), forma rotunda, nemișcat; în stadiile incipiente de dezvoltare conțin 2 nuclei, iar cei maturi - 4. În preparatele colorate cu soluție de Lugol, nucleii de amibe și chisturile lor sunt de culoare maro deschis (Fig. 6).

Balantidia(Balantidium coli) sunt ciliati mari, ajungand uneori la 200 microni lungime si 50-70 microni in diametru, mobili, datorita prezentei cililor, si au deschideri bucale (peristom) si anale (citopigote). În endoplasmă, sunt vizibile nucleele mari (macronucleos) și mici (micronucleos), vacuolele și eritrocitele prinse. Chisturile Balantidia sunt imobile, de formă rotundă, cu diametrul de 50-60 µm, au o înveliș cu dublu circuit și conțin macronucleoze și vacuole în interior (Fig. 7).

Examinarea bacteriologică a scaunului pentru dizenteria bacteriană se face cel mai bine imediat după defecare, iar materialul (mucus și puroi) trebuie luat din ultimele porțiuni de scaun. Materialul de testat este inoculat cu o ansă pe vase Petri cu mediu electiv (Ploskireva, Ploskireva + cloramfenicol, Levin) și plasat într-un termostat timp de 18-24 ore la o temperatură de +37° C. A doua zi, suspect (incolor) coloniile sunt subcultivate pe mediu Ressel și eprubete plasate într-un termostat timp de o zi la o temperatură de +370 C. În a treia zi, după ce au primit o cultură pură, frotiurile sunt pregătite pentru microscopie și studiul motilității (Shigella este imobil). Se efectuează o reacție de aglutinare pe sticlă cu seruri specifice tipului, mai întâi una orientativă cu seruri față de tipurile predominante în zonă, apoi se extinde și se inoculează pe rândul „pestriț” pentru a determina proprietăți biochimice cultura selectată.

Agenții cauzali ai dizenteriei nu fermentează lactoza și zaharoza (cu excepția Sonne), descompun glucoza (în acid) și nu formează hidrogen sulfurat.

Răspunsul final în timpul examinării bacteriologice este dat în a 5-a zi. Uneori sunt izolate tulpini atipice ale agentului patogen, culturi care și-au pierdut capacitatea de aglutinare și cu alte caracteristici. În astfel de cazuri, cercetările continuă pe perioade mai lungi.

Există și metode bacteriologice accelerate - reînsămânțarea coloniilor suspecte din cutii Petri la 18-20 ore de la începerea studiului în 2 tuburi cu mediu Ressel (agar înclinat cu 1% lactoză și 0,1% glucoză - într-una și 1% zaharoză și 0,1% manitol – în altul). După 4 ore poate apărea deja creșterea coloniilor din care se prepară frotiuri, se colorează cu Gram, se studiază motilitatea și se realizează o reacție aproximativă de aglutinare cu seruri împotriva celor mai des întâlniți agenți patogeni din zonă. Astfel, deja în a doua zi se poate da un răspuns preliminar. Răspunsul final este dat în a treia zi după luarea în considerare a rezultatelor semănării pe rândul „pestriț” și o reacție detaliată de aglutinare.

Rata de inoculare a agenților patogeni de dizenterie nu este întotdeauna aceeași; depinde de mulți factori - metoda de colectare a materialului pentru cercetare, calitatea mediului și alte motive, dintre care unul este numărul de agenți patogeni pe unitatea de volum de fecale. S-a dovedit că agenții patogeni de dizenterie sunt semănați în cazurile în care un gram de fecale conține cel puțin sute de milioane de corpuri microbiene. ÎN în cazuri rare Este posibil să se izoleze agentul cauzal al dizenteriei din sânge.

În prezența unui microscop fluorescent și a serurilor specifice cu fluorocromi, studenților li se arată metoda de fluorescență directă a anticorpilor.

De asemenea, este posibilă efectuarea unei reacții de aglutinare cu serul sanguin al pacientului și testele de diagnostic, totuși titrurile de anticorpi la pacienții cu dizenterie sunt scăzute și, în plus, fenomenele de paraaglutinare sunt frecvente, ceea ce face dificilă obținerea. rezultate de încredere. Mai sensibilă este reacția de hemaglutinare indirectă (IRHA) cu diagnosticul standard al eritrocitelor. Prin metoda auxiliara Studiul este un test de alergie intradermică cu dizenterină conform D. A. Tsuverkalov, care se ia în considerare după 24 de ore în funcție de dimensiunea papulei rezultate.

Orientări pentru studenți pentru lecția practică nr. 28.

Subiectul lecției:

Ţintă: Studierea metodelor de diagnostic microbiologic, terapie etiotropă și prevenirea shigelozei.

Modulul 2 . Microbiologie specială, clinică și de mediu.

Subiectul 5: Metode de diagnostic microbiologic al dizenteriei.

Relevanța subiectului:Shigeloza este larg răspândită și pune o problemă serioasă în țările cu un nivel cultural sanitar scăzut și o incidență ridicată a alimentației insuficiente și de proastă calitate. În țările în curs de dezvoltare, răspândirea infecției este facilitată de igiena precară, igiena personală precară, supraaglomerare și o proporție mare de copii în rândul populației. În Ucraina, focarele de shigeloză sunt mai frecvente în grupuri închise pe fundal nivel scăzut salubritate și igienă, de exemplu în creșe și grădinițe, pe bărci turistice, în clinici de psihiatrie sau adăposturi pentru persoane cu dizabilități. Shigella a fost cauza diareei la călători și la turiști.

Cauza bolilor de grup poate fi considerată consumul de produse alimentare contaminate din cauza neglijenței lucrătorilor de vânzări care sunt purtători de Shigella. Există focare asociate cu consumul de apă potabilă; înotul în corpurile de apă contaminate a dus, de asemenea, la infecție. Cu toate acestea, căile de transmitere a alimentelor și apei par să joace un rol mai mic în răspândirea shigelozei în comparație cu holera și febra tifoidă, care necesită de obicei doze mari agenți patogeni. În țările în curs de dezvoltare, unde răspândirea bolii este predominant de la persoană la persoană, purtătorii pot fi un rezervor important al agentului infecțios. La pacienții care nu au luat medicamente antibacteriene, excreția Shigella în fecale continuă de obicei timp de 1×4 săptămâni, dar într-o proporție mică de cazuri continuă semnificativ mai mult.

Shigeloza este o infecție bacteriană acută a intestinelor cauzată de unul dintre cele patru tipuri de Shigella. Spectrul formelor clinice de infecție include diaree ușoară, apoasă și dizenterie severă, care se caracterizează prin dureri de crampe în abdomen, tenesmus, febră și semne de intoxicație generală.

Etiologie.

Genul Shigella (numit după K. Shiga, care în 1898 a studiat și descris în detaliu agentul cauzal izolat al dizenteriei bacteriene de către A.V. Grigoriev) din familia Enterobacteriaceae este format dintr-un grup de specii strâns înrudite de bacterii cu următoarele proprietăți:

eu. Morfologic: Shigella - bastoane mici cu capete rotunjite. Ele diferă de alți reprezentanți ai familiei Enterobacteriaceae prin absența flagelilor (imobili), nu au spori sau capsule și sunt gram-negative.

II. Cultural: Shigella sunt aerobe sau anaerobe facultative; conditii optime de cultivare: temperatura 37°C, pH 7,27,4. Ele cresc pe medii nutritive simple (MPA, MPB) sub formă de colonii mici, strălucitoare, translucide, cenușii, rotunde, de 1,5 x 2 mm. S formă. Excepție este Shigella Sonne, care adesea se disociază, formând colonii mari, plate, tulburi, cu margini zimțate. R forme (coloniile au aspectul unei „frunze de strugure”). În mediile nutritive lichide, Shigella produce turbiditate uniformă, R formele formează un precipitat. Mediul lichid de îmbogățire este bulionul selenit.

III. Enzimatic: principalele caracteristici biochimice necesare pentru identificarea Shigella la izolarea unei culturi pure sunt următoarele:

1. absența formării gazelor în timpul fermentației glucozei;
2. lipsa producției de hidrogen sulfurat;
3. fără fermentare a lactozei timp de 48 de ore.

În total, cele patru specii sunt împărțite în continuare în aproximativ 40 de serotipuri. După caracteristicile principalelor antigene somatice (O) și proprietățile biochimice, se disting următoarele patru specii sau grupuri: S. dysenteriae (grupa A, include: Grigoriev-Shigi, Stutzer-Schmitz, Large-Sachs), S. flexneri (grupa B), S. boydii (grupa C) și S. sonnei (grupa D).

În ceea ce privește manitolul, toate Shigella sunt împărțite în manitol de scindare (Shigella Flexner, Boyd, Sonne) și manitol nedivizabil (Shigella Grigoriev-Shiga, Stutzer-Schmitz, Large-Sachs).

IV. Factori de patogenitate:

1. Plasmidă de invazieasigură capacitatea Shigella de a provoca invazie cu răspândire intercelulară ulterioară și reproducere în epiteliul mucoasei colonului;
2. Formarea toxinelor: Shigella are o endotoxină lipopolizaharidă, care este similară din punct de vedere chimic și biochimic cu endotoxinele altor membri ai familiei Enterobacteriaceae. În plus, S. dysenteriae tip I (bacilul Shiga) produce o exotoxină. De la descoperirea acestuia din urmă, s-a constatat că are activitate de enterotoxină și poate provoca secreție intestinală, precum și are un efect citotoxic îndreptat împotriva celulelor epiteliale intestinale; prevede efect neurotoxic care se observă la copiii cu shigeloză. Toxina Shiga, care intră în sânge, împreună cu deteriorarea endoteliului submucos, afectează și glomerulii rinichiului, drept urmare, pe lângă diareea cu sânge, sindromul hemolitic uremic se dezvoltă odată cu dezvoltarea insuficienței renale.

V. Structura antigenică:Toate Shigella au un O-antigen somatic, în funcție de structura căreia sunt împărțite în serovare.

VI. Rezistenţă: Temperatura 100 0 C o ucide pe Shigella instantaneu. Shigella este rezistentă la temperaturi scăzute în apa râului durează până la 3 luni, pe legume și fructe - până la 15 luni.În condiții favorabile, Shigella este capabilă să se reproducă în produsele alimentare (salate, vinegrete, carne fiartă, carne tocată, pește fiert, lapte și produse lactate, compoturi și jeleu), în special Shigella Sonne.

Epidemiologie.

1. Sursa de infectare:O persoană care suferă de forme acute și cronice de shigeloză; purtător de bacterii.

2. Căi de transmisie:

• De calitate alimentară (în principal pentru S. sonnei)
• Acvatic (în principal pentru S. flexneri)
• Contactați gospodăria (în principal pentru S. dysenteriae)

3. Poarta de intrareinfecția servește tract gastrointestinal.

Patogenie și modificări patologice.

După ingerare, Shigella colonizează secțiunile superioare intestinul subțire și se înmulțesc acolo, provocând posibil secreție crescută în stadiu timpuriu infectii. Shigella pătrunde apoi prin celulele M în submucoasă, unde este absorbită de macrofage. Acest lucru duce la moartea unor Shigella, ducând la eliberarea de mediatori inflamatori, care inițiază inflamația în submucoasa. Apoptoza fagocitelor permite unei alte părți a Shigella să supraviețuiască și să pătrundă în celulele epiteliale ale mucoasei prin membrana bazala. Shigella se înmulțește și se răspândește intercelular în interiorul enterocitelor, ducând la dezvoltarea eroziunilor. Când Shigella moare, sunt eliberate toxine Shiga și Shiga, a căror acțiune duce la intoxicație. Deteriorarea membranei mucoase este însoțită de umflături, necroză și hemoragie, care provoacă apariția sângelui în scaun. În plus, toxina afectează sistemul nervos central, ceea ce duce la tulburări trofice.

Manifestari clinice.

Gama de manifestări clinice ale shigelozei este foarte largă, de la diaree ușoară până la dizenterie severă cu dureri de crampe în abdomen, tenesmus, febră și intoxicație generală.

Perioadă incubațievariază de la câteva ore până la 7 zile, cel mai adesea 2-3 zile.Inițial, pacienții experimentează scaun apos, febră (până la 41°C), dureri abdominale difuze, greață și vărsături. Odată cu aceasta, pacienții se plâng de mialgie, frisoane, dureri de spate și durere de cap. În zilele următoare de la debutul bolii apar semne de dizenterie: tenesme, scaune frecvente, rare, sângero-mucoase. Temperatura corpului scade treptat, durerea poate fi localizată în cadranele inferioare ale abdomenului. Intensitatea diareei atinge maximul în jurul sfârșitului primei săptămâni de boală. Dizenteria cu scaune cu sânge este mai frecventă și apare mai devreme în boala cauzată de S. dysenteriae tip I decât în ​​alte forme de shigeloză.

Pentru shigeloza Sonne Este caracteristică o evoluție mai blândă a bolii (varianta gastroenterică sau gastroenterocolitică). Perioada febrilă este mai scurtă, simptomele intoxicației sunt de scurtă durată, iar modificările distructive ale mucoasei intestinale nu sunt tipice.

Shigeloza lui FlexnerPractic, sunt caracteristice două variante ale cursului clinic - gastroenterocolitic și colitic.

Complicații extraintestinale în shigelozărar:

1. O complicație a shigelozei poate fi dezvoltarea disbiozei intestinale.
2. Odată cu durerile de cap, pot apărea semne de meningită și convulsii.
3. Neuropatia periferică a fost raportată în infecțiile cu S. dysenteriae de tip I, iar sindromul Guillain-Barré (polinevrita) a fost raportat în timpul unui focar de gastroenterită cu S. boydii.
4. Cu excepția copiilor care suferă de distrofie, diseminarea hematogenă a agentului patogen este relativ rară; au fost descrise și cazuri de abcese de shigeloză și meningită.
5. În cazul shigelozei, este posibilă dezvoltarea sindromului Reiter cu artrită, conjunctivită sterilă și uretrită; aceasta apare de obicei la 1-4 săptămâni după debutul diareei la pacienți.
6. La copii, shigeloza este însoțită de sindrom hemolitic-uremic, adesea în combinație cu reacții asemănătoare leucemiei, colită severă și circulație a endotoxinelor, dar bacteriemia nu este de obicei detectată.
7. Destul de rar, keratoconjunctivita purulentă este cauzată de Shigella, care a intrat în ochi ca urmare a autoinfectării cu degetele contaminate.
8. Șoc hipovolemic și sindrom de coagulare intravasculară diseminată.
9. Peritonită, cangrenă intestinală, sângerare intestinală.

Imunitate: Oamenii au rezistență naturală la infecția cu Shigella. După boală trecută imunitatea nu este stabilă, iar după shigeloză Sonne este practic absent. În cazul unei boli cauzate de Shigella Grigoriev Shiga, se dezvoltă o imunitate antitoxică mai stabilă. În protecția împotriva infecțiilor, rolul principal îi revine secretorului IgA , prevenirea aderenței și a activității dependente de anticorpi citotoxici a limfocitelor intraepiteliale, care, împreună cu secretorii IgA distruge Shigella.

Diagnostice si teste de laborator.

Scopul studiului: detectarea și identificarea Shigella pentru diagnostic; identificarea purtătorilor de bacterii; detectarea Shigella în produsele alimentare.

Material pentru cercetare: fecale, material secţional, produse alimentare.

Metode de diagnostic:microbiologic (bacteriologic, microscopic (luminiscent); serologic; biologic; test de alergie.

Progresul studiului:

1 zi de studiu:Culturile trebuie făcute din fecale proaspăt excretate sau folosind tampoane rectale (tub rectal); Dacă nu sunt disponibile condiții adecvate, materialul trebuie plasat într-un mediu de transport. Pentru a face acest lucru, utilizați agar intestinal (mediu MacConkey sau Shigella-Salmonella), agar dezoxicolat cu xiloză-lizină moderat selectiv, KLD) și bulion nutritiv (bulion selenit). Dacă timpul dintre colectare și inoculare depășește 2 ore, atunci trebuie utilizate soluții de conservare: bulion de bilă 20%, mediu Kauffmann combinat.

• Fecalele din amestecul de glicerină sunt emulsionate, o picătură de emulsie se aplică pe mediu și se freacă cu o spatulă. Mediile diferențiale pentru Shigella sunt Ploskirev, Endo și EMS (agar eozină cu albastru de metilen). Mediul Ploskirev (mediul include: MPA, lactoză, săruri acizi biliariși indicatorul verde strălucitor) este, de asemenea, un mediu electiv pentru Shigella, deoarece inhibă creșterea Escherichia coli.
• În paralel cu însămânțarea directă materialul colectat inoculat pe mediu de îmbogățire bulion selenit.
• Toate culturile sunt plasate într-un termostat.

Ziua 2 a studiului:

• Vasele sunt îndepărtate de pe termostat, coloniile suspecte sunt eliminate pe mediul Ressel (mediu nutritiv care include: agar-agar, indicator Andrede, 1% lactoză, 0,1% glucoză) și manitol. Inocularea se efectuează cu lovituri pe o suprafață teșită și o injecție într-o coloană de agar. Mediul Ressel inoculat se pune într-un termostat timp de 18-24 ore (în același timp, reînsămânțarea din mediul selenit se face în medii de diagnostic diferenţial).
• Se fac frotiuri (colorație Gram) și se examinează la microscop.
• Preparatele sunt pregătite ca o picătură „atârnată” sau „zdrobită”.
• Stabilirea RA tentativă cu seruri de Shigella diagnostic polivalente.
• Semănatul de colonii suspecte pe agar-agar.

Ziua 3 a studiului:

• Microscopia materialului din agar-agar.
• Culturile care nu au fermentat lactoza pe mediu Ressel sunt supuse unui studiu suplimentar: se fac frotiuri (colorație Gram) și se verifică puritatea culturii. În prezența bastonașelor gram-negative, inocularea se efectuează pe medii Hiss, bulion cu hârtie indicatoare (pentru a detecta indol și hidrogen sulfurat) și lapte de turnesol.
• Mediile inoculate sunt plasate într-un termostat timp de 18-24 ore.

Ziua 4 a studiului:

• Luarea în considerare a unui scurt „rând pestriț”.
• Culturile suspecte pentru proprietățile lor enzimatice și culturale în raport cu Shigella sunt supuse identificării serologice. Declarație de RA pe sticlă (seruri de diagnostic tipice și de grup). Configurarea unui RA desfășurat.

La fel de metode accelerate folosit pentru shigelozamicroscopie cu fluorescențăȘi proba biologica(introducerea tulpinilor virulente de Shigella în sacul conjunctival (sub pleoapa inferioară) al cobaii; conjunctivita se dezvoltă până la sfârșitul primei zile).

Testul de alergie Tsuverkalovtest de alergie intradermică cu dizenterină (injectarea a 0,1 ml dizenterină în antebraț reacție pozitivă în caz de infiltrație și hiperemie). Diagnosticarea alergiilor practic nu este utilizată în prezent. Testul lui Tsurvekalov nu este specific, reacțiile pozitive sunt înregistrate nu numai pentru shigeloză, ci și pentru salmoneloză, escherichioză, yersinioză etc. OKI și uneori la indivizi sănătoși.

Tratament și prevenire.Pentru tratament și prevenire conform indicațiilor epidemiologice se utilizează bacteriofag administrare orală, antibiotice după determinarea antibiogramei; în cazul disbacteriozei preparate probiotice pentru corectarea microflorei. Pentru a reface pierderea de lichide și electroliți, administrați în interior o soluție de glucoză-electroliți.

Obiective specifice:

Interpretați proprietățile biologice ale agenților patogeni de shigeloză.

Familiarizați-vă cu clasificarea Shigella.

Învață să interpretezi tiparele patogenetice ale procesului infecțios cauzat de Shigella.

Determinarea metodelor de diagnostic microbiologic, terapie etiotropă și prevenirea shigelozei.

A fi capabil să:

• Inoculați materialul de testat pe medii nutritive.
  • Pregătiți frotiuri și colorație Gram.
  • Efectuați microscopia preparatelor folosind un microscop cu imersie.
  • Analizați caracteristicile morfologice, culturale, enzimatice ale Shigella.

Întrebări teoretice:

1. Caracteristicile agenților patogeni de shigeloză. Proprietăți biologice.

2. Clasificarea Shigella. Principiile care stau la baza acestuia.

3. Epidemiologie, patogeneză și caracteristici clinice Shigeloza

4. Diagnosticare de laborator.

5. Principii de tratament și prevenire a shigelozei.

Sarcini practice efectuate în clasă:

1. Microscopia preparatelor demonstrative din culturi pure de agenți patogeni de shigeloză.

2. Lucrări privind diagnosticul bacteriologic al shigelozei: studiul culturilor fecale pe mediul lui Ploskirev.

3. Subcultura coloniilor suspecte pe mediul Ressel și MPB pentru a determina formarea de indol și H 2 S.

4. Schițarea preparatelor demonstrative și a diagramelor de diagnostic microbiologic ale shigelozei în protocolul lecției.

5. Întocmirea protocolului.

Literatură:

1. Korotyaev A.I., Babichev S.A., Microbiologie medicală, imunologie și virologie / Manual pentru universități medicale, Sankt Petersburg „Literatura specială”, 1998. - 592 p.

2. Timakov V.D., Levashev V.S., Borisov L.B. Microbiologie / Manual.-ed. a II-a, revăzută. Și suplimentar - M.: Medicină, 1983, - 512 p.

3. Pyatkin K.D. Krivoshein Yu.S. Microbiologie cu virologie și imunologie.- Kiev: Şcoala V i scha, 1992. - 431 p.

4. Microbiologie medicală / Editat de V.I. Pokrovsky.-M.:GEOTAR-MED, 2001.-768p.

5. Ghid pentru orele practiceîn microbiologie, imunologie și virologie. Ed. M.P. Zykova. M. „Medicina”. 1977. 288 p.

6. Cherkes F.K., Bogoyavlenskaya L.B., Belskan N.A. Microbiologie. /Ed. F.K. Cerchez. M.: Medicină, 1986. 512 p.

7. Note de curs.

Literatură suplimentară:

1. Makiyarov K.A. Microbiologie, virologie și imunologie. Alma-Ata, „Kazahstan”, 1974. 372 p.

2. Titov M.V. Boli infectioase. - K., 1995. 321 p.

3. Shuvalova E.P. Boli infecțioase. - M.: Medicină, 1990. - 559 p.

4. BME, T. 1, 2, 7.

5. Pavlovich S.A. Microbiologie medicală în grafice: Manual. indemnizatie medicala Inst. Mn.: Mai sus. şcoală, 1986. 255 p.

Scurt instrucțiuni să lucreze la o lecție practică.

La începutul lecției se verifică nivelul de pregătire al elevilor pentru lecție.

Munca independentă constă în studierea clasificării Shigella, analizarea schemei patogenetice și semne clinice Shigeloza Studiul metodelor de diagnostic de laborator al shigelozei. Elevii inoculează biomaterial pe medii nutritive. Apoi se prepară microlamele, se colorează cu Gram, se efectuează microscopia, se schițează microlamele și se dau explicațiile necesare. Munca independentă include, de asemenea, microscopia preparatelor demonstrative și schițarea acestora în protocolul de lecție.

La sfârșitul lecției, se efectuează un test de control și o analiză a rezultatelor finale ale muncii independente ale fiecărui elev.

Harta tehnologica pentru desfasurarea unei lectii practice.

p/p	Etape	Timp în minute	Modalitati de invatare	Echipamente	Locație
	Verificarea și corectarea nivelului inițial de pregătire pentru lecție		Sarcini de testare de bază	Tabele, atlas	Cameră de studiu
	Muncă independentă		Graficul structurii logice	Microscop de imersie, coloranți, lame de sticlă, bucle bacteriologice, medii nutritive, mediu Ploskirev, mediu Ressel, „Seria pestriță Hiss”
	Verificare personală si corectarea maiestriei materiale		Sarcini de învățare direcționate
	Controlul de testare		Teste
	Analiza rezultatelor muncii

Sarcini de formare vizate:

1. Fecalele care conțin mucus și puroi au fost obținute de la un copil cu ACI (recoltarea scaunului a fost efectuată folosind un tub rectal). Ce metodă de diagnosticare expresă ar trebui utilizată?

A. ELISA.

B. RECIF.

C. RA.

D. RSK.

E. RIA.

1. Agentul cauzal al dizenteriei a fost izolat de la un copil bolnav cu o infecție intestinală acută. Care caracteristici morfologice caracteristică agentului patogen?

A . Tija Gram-negativă imobilă.

B . Tija mobilă Gram-pozitivă.

C . Formează o capsulă pe un mediu nutritiv.

D . Formează spori în mediul extern.

E . Streptobacili Gram pozitivi.

3. Un pacient care s-a îmbolnăvit în urmă cu trei zile și se plânge de o temperatură de 38°C, dureri abdominale, frecvente scaun liber, prezența sângelui în scaun a fost diagnosticată clinic de medic dizenteria bacilară. Ce metodă de diagnostic microbiologic este recomandabil să folosiți în acest caz și ce material trebuie luat de la pacient pentru a confirma diagnosticul?

A. Cal. bacterioscopic.

B. Cal. bacteriologic.

C. Sânge bacterioscopic.

D. Urina bacteriologică.

E. Sânge serologic.

4. Shigella Sonne a fost izolată din fecalele pacientului. Ce trebuie făcut cercetări suplimentare pentru a determina sursa infecției?

A . Se efectuează tiparea fagică a culturii pure izolate.

B . Determinați antibiograma.

C . Stabiliți o reacție de precipitare.

D . Efectuați o reacție de fixare a complementului.

E . Stabiliți o reacție de neutralizare.

5. Dintre un grup de turiști (27 de persoane) care au folosit apa lacului pentru băut, după două zile, 7 persoane au dezvoltat simptome diaree acută. Ce material este necesar pentru stabilirea etiologiei? a acestei boli trebuie trimis la un laborator bacteriologic?

A. Apa, fecalele pacienților.

B. Apa, sângele pacienţilor.

C. Produse alimentare.

D. fac pipi.

E. Sputa.

6. Un dezavantaj semnificativ al metodei de diagnostic microscopic pentru infecțiile intestinale acute este lipsa conținutului de informații din cauza identității morfologice a bacteriilor din familie. Enterobacteriaceae . Ce face această metodă mai informativă?

A . Radioimunotest.

B . Reacția Coombs.

C . Test imunosorbent legat.

D . Reacție de opsonizare.

E . Reacția de imunofluorescență.

7. Un pacient de 29 de ani a fost internat cu atacuri de vărsături, diaree și tenesmus. Fecale cu bucăți de mucus și puțin sânge. Un studiu bacteriologic al bacteriilor din colonii pe mediul lui Ploskirev a relevat bastonașe imobile, gram-negative, care nu fermentează lactoza. Numiți agentul cauzal al procesului infecțios.

A. Shigella flexneri.

B. Vibrio eltor.

C. E. Coli.

D. Proteus mirabilis.

E. Salmonella enteritidis.

8. Salata verde a fost livrata la laboratorul de microbiologie, care este probabil cauza acute infecție intestinală. Ce medii nutritive sunt folosite pentru însămânțarea primară?

A . Agar cu sare de gălbenuș, MPB.

B. MPA, MPB.

C . Bulion de selenită, Endo, Ploskireva.

D . Bulion de ficat, mediu Roux.

E . Agar sânge, agar alcalin.

9. În cadrul unui studiu microbiologic al cărnii tocate au fost izolate bacterii aparținând genului Shigella. Studiul ce proprietăți ale microbilor a condus la această concluzie?

A . Cultural, tinctorial.

B . Antigenic, cultural.

C . Zaharolitic, proteolitic.

D . Antigenic, imunogen.

E . Morfologic, antigenic.

10. Când examinare microscopica vărsături luate de la un pacient cu simptome de infecție intestinală acută, s-au găsit bețișoare nemișcate. În ce frotiu sau preparat ar putea fi studiată mobilitatea bacteriilor?

A . Într-un frotiu colorat cu Gram.

B . Într-un frotiu pătat după Ziehl-Neelsen.

C . Preparatul conține o „picătură groasă”.

D . Într-un frotiu pătat după Neisser.

E . Preparatul conține o „picătură zdrobită”.

Algoritm munca de laborator:

1. Studiul proprietăților biologice ale Shigella.

2. Familiarizarea cu clasificarea Shigella.

3. Analiza schemei manifestărilor patogenetice și clinice ale shigelozei.

4. Studiul metodelor de diagnostic de laborator al shigelozei.

5. Studiul principiilor de bază ale terapiei și prevenirii shigelozei.

1. Prepararea preparatelor fixe din cultura bacteriană.
2. Colorare microlame după Gram.
3. Microscopia microlamelor Cu folosind un microscop cu imersie, analiza și înregistrarea acestora în protocolul de lecție.
4. Mi croscopia și analiza preparatelor demonstrative din culturi pure de Shigella.
5. Desenarea preparatelor demonstrative și a diagramelor de diagnostic de laborator ale shigelozei în protocol.
6. Întocmirea protocolului.

Dizenterie este o infecție dureroasă însoțită de diaree cu eliberare de sânge, puroi și mucus, dureri abdominale și simptome de intoxicație generală, care apar cu o leziune predominantă a colonului, cauzată de tipuri diferite un fel de Shigella(bacteriile de dizenterie).

Agenții patogeni ai dizenteriei aparțin departamentului Gracilicutes, familie Enterobacteriaceae, familie Shigella.
Dizenterie , numit Shigella dysenteriae, este mai severă decât bolile cauzate de alte Shigella, deoarece pe lângă endotoxină, care provoacă inflamație intestinală, acest tip de bacterii produce o exotoxină puternică care acționează ca o neurotoxină.

Dizenteria bacteriană , sau shigeloza, este o boală infecțioasă cauzată de bacterii din acest gen Shigella,

Dizenterie.Morfologie și proprietăți tinctoriale.
Shigella sunt baghete gram-negative cu capete rotunjite, lungi de 2-3 microni, grosime de 0,5-7 microni, nu formează spori, nu au flageli și sunt imobile. În multe tulpini se găsesc vilozități de tip general și pili sexuali. Unele Shigella au o microcapsulă.

Dizenterie. Cultivare.
Bacilii dizenteriei sunt anaerobi facultativi. Sunt nepretențioși față de mediile nutritive și cresc bine la o temperatură de 37 °C și un pH de 7,2-7,4. Pe medii dense formează mici colonii transparente, în medii lichide - turbiditate difuză. Bulionul selenit este cel mai adesea folosit ca mediu de îmbogățire pentru cultivarea Shigella.

Dizenterie.Activitatea enzimatică.
Shigella are o activitate enzimatică mai mică decât alte enterobacterii. Fermentează carbohidrații pentru a forma acid. O caracteristică importantă care permite diferențierea Shigella este relația lor cu manitol: S. dysenteriae nu fermentează manitolul, reprezentanții grupelor B, C, D sunt manitol-pozitivi. Cele mai active din punct de vedere biochimic sunt S. sonnei, care poate fermenta lent (în decurs de 2 zile) lactoza. Pe baza relației dintre S. sonnei și ramnoză, xiloză și maltoză, se disting 7 variante biochimice.

Dizenterie.Structura antigenică.
Shigella are un O-antigen, eterogenitatea sa face posibilă distingerea serovarilor și subserovarurilor în cadrul grupurilor; Unii membri ai genului prezintă antigen K.

Dizenterie.Factori de patogenitate.
Toți bacilii de dizenterie formează endotoxina, care are un efect enterotrop, neurotrop și pirogen. În plus, S. dysenteriae - Shigella Grigoriev-Shiga - secretă o exotoxină care are un efect enterotoxic, neurotoxic, citotoxic și nefrotoxic asupra organismului, care perturbă în consecință metabolismul apă-sare și activitatea sistemului nervos central, ducând la moarte. a celulelor epiteliale ale intestinelor de colon, afectarea tubilor renali.

Formarea unei exotoxine este asociată cu un curs mai sever de dizenterie cauzată de acest agent patogen. Exotoxina poate fi produsă și de alte specii de Shigella. A fost descoperit factorul de permeabilitate RF, care provoacă leziuni ale vaselor de sânge. Factorii de patogenitate includ, de asemenea proteine ​​invazive, facilitând pătrunderea lor în celulele epiteliale, precum și în pili și proteinele membranei exterioare responsabile de aderență și o microcapsulă.

Dizenterie.Rezistenţă.
Shigella are rezistență scăzută la diverși factori. S. sonnei, care in apă de la robinet durează până la 2,5 luni; în apă deschisă supraviețuiesc până la 1,5 luni. S. sonnei nu numai că poate supraviețui destul de mult timp, dar se poate reproduce și în produse, în special în produse lactate.

Dizenterie.Epidemiologie.
Dizenteria este o infecție antroponotică: sursa sunt bolnavii și purtătorii. Mecanismul de transmitere a infecțiilor este fecal-oral. Căile de transmitere pot fi diferite - cu dizenteria Sonne predomină calea alimentară, cu dizenteria Flexner - apă, pentru dizenteria Grigoriev-Shiga calea de contact și gospodărie este tipică.

Dizenterie găsite în multe țări ale lumii. ÎN anul trecut A existat o creștere bruscă a incidenței acestei infecții. Oamenii de toate vârstele sunt afectați, dar copiii cu vârsta cuprinsă între 1 și 3 ani sunt cei mai susceptibili la dizenterie. Numărul de pacienți crește în iulie - septembrie. Diferite tipuri de Shigella sunt distribuite inegal în regiuni individuale.

Dizenterie.Patogeneza.
Shigella intră în tractul gastrointestinal prin gură și ajunge în colon. Posedând tropism pentru epiteliul său, agenții patogeni se atașează la celule cu ajutorul piliului și proteinelor membranei exterioare. Datorită factorului invaziv, ele pătrund în interiorul celulelor, se înmulțesc acolo, drept urmare celulele mor.

În peretele intestinal se formează ulcerații, în locul cărora apoi se formează cicatrici. Endotoxina, eliberată atunci când bacteriile sunt distruse, provoacă intoxicație generală, motilitate intestinală crescută și diaree. Sângele din ulcerele rezultate intră în fecale. Ca urmare a acțiunii exotoxinei, se observă o tulburare mai pronunțată a metabolismului apă-sare, a activității sistemului nervos central și a afectarii rinichilor.

Dizenterie.Tabloul clinic.
Perioada de incubație durează de la 1 la 5 zile. Boala începe acut cu o creștere a temperaturii corpului la 38-39 ° C, apar dureri abdominale și diaree. Există un amestec de sânge și mucus în scaun. Dizenteria Grigoriev-Shiga este cea mai gravă.

Dizenterie.Imunitate.
După o boală, imunitatea este specifică speciei și specifică variantei. Este de scurtă durată și fragilă. Adesea boala devine cronică. Bolile repetate au fost observate chiar și într-un singur sezon.

Dizenterie.Laborator diagnostice.
Fecalele pacientului sunt luate ca material de testare. Baza diagnosticului este metoda bacteriologică, care permite identificarea agentului patogen, determinarea sensibilității acestuia la antibiotice și efectuarea identificării intraspecifice (determinarea variantei biochimice, serovar sau colicinogenovar). În caz de curs prelungit de dizenterie, poate fi folosit ca auxiliar metoda serologica, care constă în diagnosticarea RA, RNGA (diagnosticul poate fi confirmat prin creșterea titrului de anticorpi atunci când reacția se repetă).

Dizenterie.Tratament.
Pacienții cu forme severe de dizenterie Grigoriev-Shish și Flexner sunt tratați cu antibiotice gamă largă acțiuni cu luarea în considerare obligatorie a antibiogramei, deoarece printre Shigella există adesea nu numai forme rezistente la antibiotice, ci și forme dependente de antibiotice. Pentru formele ușoare de dizenterie, antibioticele nu sunt utilizate, deoarece utilizarea lor duce la disbacterioză, ceea ce agravează boala. proces patologic, și întreruperea proceselor de regenerare în membrana mucoasă a colonului.

Dizenterie.Prevenirea.
Singurul medicament care poate fi utilizat în focarele de infecție în scop profilactic este bacteriofagul de dizenterie. Prevenirea nespecifică joacă rolul principal.

Prevenirea nespecifică presupune aranjarea sanitară și igienă adecvată a vieții oamenilor, aprovizionându-le cu apă și hrană de calitate.

În mediul pacientului, trebuie luate măsuri pentru a preveni răspândirea agentului patogen.

Microbiologia dizenteriei

Dizenteria este o boală infecțioasă caracterizată prin intoxicație generală a corpului, diaree și o leziune particulară a membranei mucoase a intestinului gros. Este una dintre cele mai frecvente boli intestinale acute din lume. Boala a fost cunoscută din cele mai vechi timpuri sub numele de „diaree cu sânge”, dar natura ei s-a dovedit a fi diferită. În 1875, omul de știință rus F.A. Lesh a izolat o amibă de la un pacient cu diaree cu sânge. Entamoeba histolytica, în următorii 15 ani s-a stabilit independența acestei boli, pentru care s-a păstrat denumirea de amebiază.

Agenții cauzali ai dizenteriei propriu-zise sunt un grup mare de bacterii similare biologic, unite în gen Shigella. Agentul patogen a fost descoperit pentru prima dată în 1888 de A. Chantemes și F. Vidal; în 1891 a fost descrisă de A.V.Grigoriev, iar în 1898 K. Shiga, folosind serul obţinut de la un pacient, a identificat agentul patogen la 34 de pacienţi cu dizenterie, dovedind în final rolul etiologic al acestei bacterii. Cu toate acestea, în anii următori, au fost descoperiți și alți agenți cauzali ai dizenteriei: în 1900 - de S. Flexner, în 1915 - de K. Sonne, în 1917 - de K. Stutzer și K. Schmitz, în 1932 - de J. Boyd, în 1934 - D. Mare, în 1943 - A. Sax. În prezent genul Shigella include mai mult de 40 de serotipuri. Toate acestea sunt baghete gram-negative scurte, nemotile, care nu formează spori sau capsule, care cresc bine pe medii nutritive obișnuite și nu cresc pe medii de foame cu citrat sau malonat ca unică sursă de carbon; nu formează H2S, nu au urează; reacția Voges–Proskauer este negativă; glucoza și alți carbohidrați sunt fermentați pentru a forma acid fără gaz (cu excepția unor biotipuri Shigella flexneri: S. manchesterȘi S. newcastle); De regulă, nu fermentează lactoza (cu excepția Shigella Sonne), adonitol, salicină și inozitol, nu lichefiază gelatina, de obicei formează catalază și nu au lizin decarboxilază și fenilalanin deaminază. Conținutul de G + C în ADN este de 49 – 53 mol%. Shigella sunt anaerobi facultativi, temperatura optimă pentru creștere este de 37 °C, nu cresc la temperaturi peste 45 °C, pH-ul optim al mediului este de 6,7 - 7,2. Coloniile pe medii dense sunt rotunde, convexe, translucide; în caz de disociere, se formează colonii rugoase în formă de R. Creșterea pe MPB sub formă de turbiditate uniformă, formele aspre formează un sediment. Culturile proaspăt izolate de Shigella Sonne formează de obicei colonii de două tipuri: mici, rotunde, convexe (faza I), plate mari (faza II). Natura coloniei depinde de prezența (faza I) sau absența (faza II) a unei plasmide cu o greutate moleculară de 120 MD, ceea ce determină și virulența Shigella Sonne.

Clasificarea internațională a Shigella se bazează pe caracteristicile biochimice ale acestora (manitol-nefermentant, manitol-fermentant, Shigella cu fermentație lentă a lactozei) și caracteristicile structurii antigenice (Tabelul 37).

La Shigella s-au găsit antigene O cu specificitate diferită: comune familiei Enterobacteriaceae, generic, specific de specie, grup și tip, precum și antigenele K; Nu au N-antigene.

Tabelul 37

Clasificarea genului de bacterii Shigella

Clasificarea ia în considerare doar antigenele O-specifice de grup și tip. În conformitate cu aceste caracteristici, genul Shigella este împărțit în 4 subgrupe sau 4 specii și include 44 de serotipuri. În subgrupa A (tip Shigella dysenteriae) a inclus Shigella, care nu fermentează manitolul. Specia cuprinde 12 serotipuri (1 – 12). Fiecare serotip are propriul său antigen de tip specific; legăturile antigenice între serotipuri, precum și cu alte specii de Shigella, sunt slab exprimate. La subgrupa B (tip Shigella flexneri) includ Shigella, care fermentează de obicei manitolul. Shigella acestei specii sunt înrudite serologic între ele: conțin antigene specifice tipului (I – VI), prin care sunt împărțite în serotipuri (1 – 6) și antigene de grup, care se găsesc în compoziții diferite în fiecare serotip și prin care serotipurile se împart în subserotipuri. În plus, această specie include două variante antigenice - X și Y, care nu au antigene tipice; ele diferă în seturi de antigene de grup. Serotip S. flexneri 6 nu are subserotipuri, dar este împărțit în 3 tipuri biochimice în funcție de caracteristicile fermentației glucozei, manitolului și dulcitolului (Tabelul 38).

Tabelul 38

Biotipuri S. flexneri 6

Notă. K – fermentație cu formare numai de acid; CG – fermentație cu formare de acid și gaz; (–) – fără fermentație.

Antigenul lipopolizaharidic O din toate Shigella Flexner conține antigenul de grup 3, 4 ca principală structură primară, sinteza sa este controlată de o genă cromozomială localizată în apropierea locului his. Antigenele specifice de tip I, II, IV, V și antigenele de grup 6, 7, 8 sunt rezultatul modificării antigenelor 3, 4 (glicozilare sau acetilare) și sunt determinate de genele profagelor de conversie corespunzătoare, locul de integrare. dintre care se află în regiunea lac - pro a cromozomului Shigella.

A apărut în țară în anii 80. secolul XX și un nou subserotip care a devenit larg răspândit S. flexneri 4(IV:7, 8) diferă de subserotipul 4a (IV:3, 4) și 4b (IV:3, 4, 6), a apărut dintr-o variantă S. flexneri Y(IV:3, 4) din cauza lizogenizării prin profagile sale de conversie IV și 7, 8.

La subgrupa C (tip Shigella boydii) includ Shigella, care fermentează de obicei manitolul. Membrii grupului sunt diferiți serologic unul de celălalt. Conexiunile antigenice din cadrul speciei sunt slab exprimate. Specia include 18 serotipuri (1 – 18), fiecare dintre ele având propriul său antigen de tip principal.

În subgrupa D (tip Shigella sonnei) au inclus Shigella, care fermentează de obicei manitolul și sunt capabile să fermenteze lent (după 24 de ore de incubație și mai târziu) lactoza și zaharoza. Vedere S. sonnei include un serotip, dar coloniile de faze I și II au propriile lor antigene specifice tipului. Pentru clasificarea intraspecifică a Shigella Sonne au fost propuse două metode:

1) împărțirea lor în 14 tipuri și subtipuri biochimice în funcție de capacitatea lor de a fermenta maltoză, ramnoză și xiloză; 2) împărțirea în tipuri de fagi în funcție de sensibilitatea la un set de fagi corespunzători.

Aceste metode de tipare au în principal semnificație epidemiologică. În plus, Shigella Sonne și Shigella Flexner sunt tipărite în același scop pe baza capacității lor de a sintetiza colicine specifice (colicinogenotyping) și sensibilitatea la colicine cunoscute (colicinotyping). Pentru a determina tipul de colicine produse de Shigella, J. Abbott și R. Chenon au propus seturi de tulpini standard și indicator de Shigella și pentru a determina sensibilitatea Shigella la tipuri cunoscute de colicine, un set de tulpini colicinogene standard de P. Frederick. este folosit.

Rezistenţă. Shigella are o rezistență destul de mare la factorii de mediu. Aceștia supraviețuiesc pe țesătură de bumbac și hârtie până la 30 - 36 de zile, în fecale uscate - până la 4 - 5 luni, în sol - până la 3 - 4 luni, în apă - de la 0,5 la 3 luni, pe fructe și în legume – până la 2 săptămâni, în lapte și produse lactate – până la câteva săptămâni; la o temperatură de 60 °C mor în 15 – 20 de minute. Sensibil la soluții de cloramină, clor activ și alți dezinfectanți.

Factori de patogenitate. Cea mai importantă proprietate biologică a Shigella, care le determină patogenitatea, este capacitatea de a invada celulele epiteliale, de a se multiplica în ele și de a le provoca moartea. Acest efect poate fi detectat utilizând un test keratoconjunctival (introducerea unei bucle de cultură Shigella (2-3 miliarde de bacterii) sub pleoapa inferioară a cobaiului determină dezvoltarea keratoconjunctivitei seros-purulente), precum și prin infecția celulelor. culturi (efect citotoxic) sau embrioni de pui (moartea lor) sau intranazal la șoareci albi (dezvoltarea pneumoniei). Principalii factori de patogenitate ai Shigella pot fi împărțiți în trei grupuri:

1) factori care determină interacțiunea cu epiteliul membranei mucoase;

2) factori care asigură rezistența la mecanismele umorale și celulare de apărare ale macroorganismului și capacitatea Shigella de a se reproduce în celulele sale;

3) capacitatea de a produce toxine și produse toxice care determină dezvoltarea procesului patologic în sine.

Prima grupă include factori de adeziune și colonizare: rolul lor este jucat de pili, proteinele membranei exterioare și LPS. Adeziunea si colonizarea sunt favorizate de enzimele care distrug mucusul - neuraminidaza, hialuronidaza, mucinaza. Al doilea grup include factori de invazie care favorizează pătrunderea Shigella în enterocite și reproducerea lor în ele și în macrofage cu manifestarea simultană a unui efect citotoxic și (sau) enterotoxic. Aceste proprietăți sunt controlate de genele unei plasmide cu o greutate moleculară de 140 MD (codifică sinteza proteinelor membranei exterioare care provoacă invazia) și genele cromozomiale ale Shigella: kcp A (provoacă keratoconjunctivită), cyt (responsabilă de distrugerea celulelor). ), precum și alte gene neidentificate încă. Protecția Shigella de fagocitoză este asigurată de antigenul K de suprafață, antigenele 3, 4 și lipopolizaharide. În plus, lipida A a endotoxinei Shigella are un efect imunosupresor: suprimă activitatea celulelor memoriei imune.

Al treilea grup de factori de patogenitate include endotoxina și două tipuri de exotoxine găsite în Shigella - Shiga și exotoxine asemănătoare Shiga (SLT-I și SLT-II), ale căror proprietăți citotoxice sunt cele mai pronunțate în S. dysenteriae 1. Shiga și toxine asemănătoare Shiga au fost găsite și în alte serotipuri S. dysenteriae, se formează și ele S. flexneri, S. sonnei, S. boydii, EHEC și niște salmonele. Sinteza acestor toxine este controlată de genele toxice ale fagilor convertitori. Enterotoxinele de tip LT se găsesc în Shigella Flexner, Sonne și Boyd. Sinteza lor LT este controlată de genele plasmide. Enterotoxina stimulează activitatea adenilat-ciclazei și este responsabilă pentru dezvoltarea diareei. Toxina Shiga, sau neurotoxina, nu reacționează cu sistemul de adenil-ciclază, dar are un efect citotoxic direct. Toxinele Shiga și Shiga-like (SLT-I și SLT-II) au o greutate moleculară de 70 kDa și constau din subunități A și B (cea din urmă dintre 5 subunități mici identice). Receptorul pentru toxine este un glicolipid al membranei celulare.

Virulența Shigella Sonne depinde și de o plasmidă cu o greutate moleculară de 120 MD. Controlează sinteza a aproximativ 40 de polipeptide ale membranei exterioare, șapte dintre ele fiind asociate cu virulență. Shigella Sonne, având această plasmidă, formează colonii de fază I și sunt virulente. Culturile care au pierdut plasmida formează colonii de fază II și sunt lipsite de virulență. Plasmide cu o greutate moleculară de 120–140 MD au fost găsite la Shigella Flexner și Boyd. Lipopolizaharida Shigella este o endotoxină puternică.

Caracteristicile epidemiologiei. Sursa de infecție este doar oamenii. Niciun animal din natură nu suferă de dizenterie. În condiții experimentale, dizenteria poate fi reprodusă numai la maimuțe. Metoda de infectare este fecal-oral. Căi de transmitere: apă (predominantă pentru Shigella Flexner), alimente, în special lapte și produse lactate (cale predominantă de infecție pentru Shigella Sonne) și contact cu gospodăria, în special pentru specie S. dysenteriae.

O caracteristică a epidemiologiei dizenteriei este o modificare a compoziției speciilor a agenților patogeni, precum și a biotipurilor Sonne și a serotipurilor Flexner în anumite regiuni. De exemplu, până la sfârșitul anilor 30. secolul XX la o cotă S. dysenteriae 1 a reprezentat până la 30–40% din toate cazurile de dizenterie, iar apoi acest serotip a început să apară din ce în ce mai rar și aproape a dispărut. Cu toate acestea, în anii 1960 - 1980. S. dysenteriae a reapărut pe arena istorică și a provocat o serie de epidemii care au dus la formarea a trei focare hiperendemice ale acesteia - în America Centrală, Africa Centrală și Asia de Sud (India, Pakistan, Bangladesh și alte țări). Motivele modificării compoziției speciilor agenților patogeni de dizenterie sunt probabil asociate cu modificări ale imunității colective și modificări ale proprietăților bacteriilor de dizenterie. În special, întoarcerea S. dysenteriae 1 iar distribuția sa pe scară largă, care a provocat formarea de focare hiperendemice de dizenterie, este asociată cu achiziționarea de plasmide care au cauzat rezistență la mai multe medicamente și virulență crescută.

Caracteristicile patogenezei și clinicii. Perioada de incubație pentru dizenterie este de 2-5 zile, uneori mai puțin de o zi. Formarea unui focar infecțios în membrana mucoasă a părții descendente a intestinului gros (sigmoid și rect), unde pătrunde agentul patogen de dizenterie, este de natură ciclică: aderența, colonizarea, introducerea Shigella în citoplasma enterocitelor, intracelulară a acestora. reproducerea, distrugerea și respingerea celulelor epiteliale, eliberarea agenților patogeni în lumenul intestinului; după aceasta începe următorul ciclu - aderență, colonizare etc. Intensitatea ciclurilor depinde de concentrația agenților patogeni din stratul parietal al membranei mucoase. Ca urmare a ciclurilor repetate, focarul inflamator crește, ulcerele rezultate, conectându-se, cresc expunerea peretelui intestinal, ca urmare a faptului că în fecale apar sânge, bulgări mucopurulenți și leucocite polimorfonucleare. Citotoxinele (SLT-I și SLT-II) provoacă distrugerea celulelor, enterotoxina – diaree, endotoxine – intoxicație generală. Tabloul clinic al dizenteriei este determinat în mare măsură de ce tip de exotoxină este produsă într-o măsură mai mare de agentul patogen, de gradul efectului său alergenic și de starea imunitară a organismului. Cu toate acestea, multe întrebări privind patogeneza dizenteriei rămân neclare, în special: caracteristicile cursului dizenteriei la copiii primilor doi ani de viață, motivele tranziției dizenteriei acute la cronice, semnificația sensibilizării, mecanismul. a imunității locale a mucoasei intestinale etc. Cele mai tipice manifestări clinice ale dizenteriei sunt diareea, impulsul frecvent: în cazuri severe, de până la 50 sau mai multe ori pe zi, tenesmul (spasme dureroase ale rectului) și intoxicația generală. Natura scaunului este determinată de gradul de deteriorare a intestinului gros. Cea mai severă dizenterie este cauzată de S. dysenteriae 1, cel mai ușor - dizenteria Sonne.

Imunitatea post-infecțioasă. După cum au arătat observațiile maimuțelor, după ce suferă de dizenterie, rămâne imunitatea puternică și destul de de lungă durată. Este cauzată de anticorpi antimicrobieni, antitoxine, activitate crescută a macrofagelor și limfocitelor T. Imunitatea locală a mucoasei intestinale, mediată de IgAs, joacă un rol semnificativ. Cu toate acestea, imunitatea este specifică tipului; nu are loc o imunitate încrucișată puternică.

Diagnosticul de laborator. Metoda principală este bacteriologică. Materialul pentru cercetare este fecalele. Schema de izolare a agentilor patogeni: inoculare pe medii de diagnostic diferential Endo si Ploskirev (in paralel pe mediu de imbogatire urmata de inoculare pe medii Endo si Ploskirev) pentru izolarea coloniilor izolate, obtinerea unei culturi pure, studierea proprietatilor biochimice a acesteia si, tinand cont de acestea din urma, identificarea folosind seruri aglutinante de diagnostic polivalente și monovalente. Sunt produse următoarele seruri comerciale.

1. La Shigella, care nu fermentează manitolul:

La S. dysenteriae 1Și 2

La S. dysenteriae 3 – 7(polivalent și monovalent),

La S. dysenteriae 8 – 12(polivalent și monovalent).

2. Pentru manitol care fermenta Shigella:

la antigeni tipici S. flexneri I, II, III, IV, V, VI,

pentru a grupa antigenele S. flexneri 3, 4, 6, 7, 8- polivalent,

la antigeni S. boydii 1 – 18(polivalent și monovalent), la antigeni S. sonnei faza I, faza a II-a,

la antigeni S. flexneri I–VI+ S. sonnei– polivalent.

Pentru a identifica rapid Shigella, se recomandă următoarea metodă: o colonie suspectă (lactoză negativă pe mediu Endo) este subcultivată pe mediu TSI (engleză. fier de zahăr triplu) – agar cu trei zaharuri (glucoza, lactoza, zaharoza) cu fier pentru determinarea productiei de H2S; sau într-un mediu care conține glucoză, lactoză, zaharoză, fier și uree. Orice organism care descompune ureea după 4 până la 6 ore de incubație este cel mai probabil un membru al genului Proteusși poate fi exclus. Un microorganism care produce H2S sau care are o articulație formatoare de urază sau acid (fermente lactoză sau zaharoză) poate fi exclus, deși tulpinile producătoare de H2S ar trebui investigate ca posibili membri ai genului. Salmonella. În toate celelalte cazuri, cultura crescută pe aceste medii trebuie examinată și, dacă glucoza fermentează (schimbarea culorii), izolată în formă pură. În același timp, poate fi studiat într-o reacție de aglutinare a sticlei cu antiseruri adecvate genului Shigella. Dacă este necesar, se efectuează alte teste biochimice pentru a verifica apartenența la gen. Shigellași, de asemenea, studiază mobilitatea.

Pentru a detecta antigenele din sânge (inclusiv ca parte a CEC), urină și fecale, pot fi utilizate următoarele metode: RPGA, RSK, reacție de coaglutinare (în urină și fecale), IFM, RAGA (în serul sanguin). Aceste metode sunt extrem de eficiente, specifice și potrivite pentru diagnosticul precoce.

Pentru diagnosticul serologic se pot utiliza: RPHA cu diagnosticarea eritrocitară corespunzătoare, metoda imunofluorescenței (modificare indirectă), metoda Coombs (determinarea titrului anticorpilor incompleti). Un test de alergie cu dizenterină (o soluție de fracții proteice din Shigella Flexner și Sonne) are, de asemenea, valoare diagnostică. Reacția se ia în considerare după 24 de ore.Se consideră pozitivă în prezența hiperemiei și se infiltrează cu diametrul de 10–20 mm.

Tratament. Atenția principală se acordă restabilirii metabolismului apă-sare normal, alimentație rațională, detoxifiere, terapie rațională cu antibiotice (ținând cont de sensibilitatea agentului patogen la antibiotice). Un efect bun este obținut prin utilizarea timpurie a unui bacteriofag polivalent de dizenterie, în special tablete cu un strat de pectină, care protejează fagul de acțiunea sucului gastric HCl; În intestinul subțire, pectina se dizolvă, fagii sunt eliberați și își exercită efectul. În scopuri preventive, fagul trebuie administrat cel puțin o dată la trei zile (perioada de supraviețuire a acestuia în intestin).

Problema prevenirii specifice. Pentru a crea imunitate artificială împotriva dizenteriei, s-au folosit diferite vaccinuri: din bacterii ucise, substanțe chimice, alcool, dar toate s-au dovedit a fi ineficiente și au fost întrerupte. Vaccinurile împotriva dizenteriei Flexner au fost create din Shigella Flexner viu (mutant, dependent de streptomicina); vaccinuri ribozomale, dar nici ele nu au găsit o utilizare pe scară largă. Prin urmare, problema prevenirii specifice a dizenteriei rămâne nerezolvată. Principala modalitate de combatere a dizenteriei este îmbunătățirea sistemului de alimentare cu apă și canalizare, asigurarea unor regimuri sanitare și igienice stricte în întreprinderile alimentare, în special în industria lactatelor, în instituțiile de îngrijire a copilului, locurile publice și în menținerea igienei personale.