A kész közeg színe és átlátszósága. Urán láncreakció és szenzációs láncreakció

119. Pandey és Nonne – Apelt reakciók

A Pandey-reakció végrehajtásához reagensként tiszta felülúszó folyadékot használnak, amelyet 100 g folyékony karbolsav 1000 ml desztillált vízzel történő erőteljes összerázásával kapunk. Az üledékhez és tiszta folyadék(reagens), ezt a keveréket először termosztátba helyezzük 3-4 órára, majd szobahőmérsékleten tartjuk 2-3 napig.

Helyezzen egy órát vagy tárgylemezt sötét papírra, és cseppentsen rá 2-3 csepp reagenst, majd 1 cseppet gerincvelői folyadék. Ha a csepp zavarossá válik, vagy fonalas zavarosság jelenik meg a szélén, a reakció pozitívnak tekinthető.

A Nonne-Apelt reakció végrehajtásához tiszta kémcsövekre, telített ammónium-szulfát oldatra, desztillált vízre és sötét papírra van szükség. Telített ammónium-szulfát oldatot készítünk a következő módon: 0,5 g vegytiszta semleges ammónium-szulfátot 1000 ml-es lombikba helyezünk, majd 100 ml 95 °C-ra melegített desztillált vizet öntünk rá, rázzuk, amíg a só teljesen fel nem oldódik, és néhány napig szobahőmérsékleten állni hagyjuk. 2-3 nap elteltével az oldatot szűrjük és meghatározzuk a pH-t. A reakciónak semlegesnek kell lennie.

A kapott oldatból 0,5-1 ml-t öntünk a kémcsőbe, és a cső fala mentén óvatosan ugyanennyi agy-gerincvelői folyadékot adunk hozzá. 3 perc elteltével értékelje az eredményt. A fehéres gyűrű megjelenése pozitív reakciót jelez. Ezután a kémcső tartalmát összerázzuk, desztillált vizet tartalmazó kémcsővel összehasonlítva meghatározzuk a zavarosság mértékét. A reakció eredményeit a fekete papír hátterében értékelik.

120. Bordet-Jangu reakció

Értékes diagnosztikai teszt az azonosításban krónikus gonorrhoea krónikus betegek körében gyulladásos betegségek urogenitális rendszer. A szakirodalom szerint azzal helyes használat Ez a módszer a bakterioszkópos vagy bakteriológiai módszerrel nem észlelt gonorrhoeás esetek 80%-át tárja fel.

A Bordet-Jangu reakció nyoma lehet egy korábbi betegség vagy egy gonovaccin diagnosztikai (immunbiológiai provokációs módszer), valamint terápiás (az urogenitális rendszer krónikus gyulladásos folyamatainak kezelése nőknél Baksheev szerint) alkalmazása. célja. Ezért a végrehajtás előtt gondosan össze kell gyűjteni az anamnézist,

A reakció álpozitív lehet a tej hozzáadásával, felhasználásával gyógyászati ​​célokra pirogén.

Ezért a pozitív Bordet-Jangu reakció nem szolgál vitathatatlan bizonyítékként a jelenlétre gonococcus fertőzés, valamint a negatív nem lehet bizonyíték a gonorrhoea hiányára. azonban pozitív eredményeket hosszú ideig orvosnak kell irányítania, hogy keresse a gonokokkusz fertőzés fókuszát a szervezetben.

Antigénként elölt gonokokkusz tenyészetet használnak, amely 1 ml-enként 3-4 milliárd mikrobatestet tartalmaz. A gonokokkusz antigént formaldehid oldattal tartósítják, és 1-5 ml-es ampullákba öntik. A bontatlan ampullák 6 hónapig használhatók, felbontva 2-3 napig tárolható steril kémcsőben, hűtőszekrényben, 3-5 °C-on,

A Borde-Zhang komplementkötési reakciót a Wasserman-reakcióhoz hasonlóan hajtjuk végre (lásd 121. sz.). A Gonococcus antigént izotóniás nátrium-klorid oldattal hígítjuk az ampulla címkéjén feltüntetett titer szerint. A reakciót leggyakrabban 2,5 ml térfogatban hajtják végre, ezért minden kémcsőbe 0,5 ml hígított, 1:5 arányú tesztszérumhoz 0,5 ml hígított antigént adunk. A maradék 1,5 ml 1 ml hemolitikus rendszer és 0,5 ml komplement.

A reakció pozitívnak minősül jelenlétében változó mértékben hemolízis késések a vizsgált szérumban. Kontrollban (vérszérum egészséges emberek) teljes hemolízis figyelhető meg.

121. Wasserman reakció

A szifiliszben szenvedő betegek vérszérumában reaginok és antitestek találhatók. A reaginok képesek a kardiolipin antigénnel rendelkező vegyületekbe lépni. A Treponema pallidum elleni specifikus antitestek specifikus antigénekkel kombinálódnak. A kapott antigén-antitest komplexeket a reakcióhoz hozzáadott komplement szorbeálja. A javallat hemolitikus rendszer (birka eritrociták + hemolitikus szérum) bevezetésével történik.

A reakció bekövetkezéséhez:

a) izotóniás nátrium-klorid oldat;

b) ultrahangos treponemális (hűtőszekrényben +4 °C-on tárolva) és kardiolipin (szobahőmérsékleten tárolva) antigének;

c) komplement, amely 5-10 egészséges tengerimalac szívpunkciójával nyert vérszérum. Hűtőszekrényben akár 2 hónapig is eltartható
konzerv 4%-os oldat bórsavés 5%-os nátrium-szulfát-oldat;

d) hemolizin - különböző titerű birka eritrocitákkal immunizált hemolitikus nyúlvérszérum (hűtőszekrényben, 4 ° C-on tárolva);

e) szúrással nyert birka eritrociták nyaki véna. A vért üveggyöngyökkel ellátott steril edénybe gyűjtjük (keveréshez), 15 percig rázzuk. A fibrinrögöket steril gézen történő szűréssel választjuk el. A defibrinált vér a hűtőszekrényben legfeljebb 5 napig tárolható.

Néha hosszabb ideig kell tárolni a juhvért, ezért speciális tartósítószerrel (6 g glükóz, 4,5 g bórsav, 100 ml izotóniás nátrium-klorid oldat) tartósítják, amelyet vízfürdőben forralnak. napi 20 percig 3 napig 100 ml defibrinált birkavérhez 15 ml tartósítószer szükséges. Az így tartósított defibrinált vért hűtőszekrényben tárolják.

A fő kísérletet több szakasz előzi meg.

Egy betegben cubitalis véna vegyünk 5-10 ml vért és dolgozzuk fel a szérumot. Gyermekeknél vért lehet venni a temporális vénából vagy a sarok bemetszésével. A szúrás steril eszközökkel, fecskendővel és tűvel történik
izotóniás nátrium-klorid oldattal előmosva.

A kutatáshoz szükséges vért éhgyomorra veszik; 3-4 nappal a vizsgálat előtt a betegnek tilos a használata drogok, digitálisz készítmények, szedj alkoholt.

A vizsgálatot nem szabad olyan betegeknél elvégezni, akik emelkedett hőmérséklet test, trauma, műtét, érzéstelenítés, közelmúltbeli fertőző betegségek után, nőknél menstruáció alatt, terhes nőknél (a terhesség utolsó 10 napjában), vajúdó nőknél (a szülés utáni első 10 napban), valamint újszülötteknél az élet első 10 napja).

A steril csőben kapott vért 15-30 percre termosztátba helyezzük 37 °C hőmérsékleten. A keletkezett vérrögöt steril üvegrúddal elválasztjuk a kémcső falától, és egy napra hűtőszekrénybe tesszük. Az elválasztott átlátszó szérumot (a vérrög felett) Pasteur pipettával leszívják gumikörtével, vagy óvatosan egy másik steril csőbe öntik, és 30 percig 56 °C-os vízfürdőben inaktiválják. A kísérlethez így elkészített szérum hűtőszekrényben akár 5-6 napig is eltartható.

Az antigéneket a címkén feltüntetett módszerrel és titerrel hígítjuk.

Készítse elő a hemolitikus rendszert. Ehhez a reakcióhoz szükséges mennyiségű defibrinált vért vagy birka eritrocitákat centrifugálják, a plazmát óvatosan elválasztják, és a csapadékot 5-6 térfogat izotóniás nátrium-klorid oldattal mossák, amíg a felülúszó teljesen színtelenné válik. Az üledékből hármas titer szerint 3%-os vörösvértest-szuszpenziót állítanak elő izotóniás nátrium-klorid-oldatban.

A hemolitikus szérum oldatát és a juh eritrociták szuszpenzióját gyorsan összekeverjük, és 30 percre termosztátba helyezzük.

A száraz komplementet izotóniás nátrium-klorid-oldattal hígítjuk 1:10 arányban, normál inaktivált humán szérumot - 1:5.

A komplementet 30 csőben titráljuk, 3 sorban 10 csöves állványba helyezve. Két sorban két antigén jelenlétében titrálják, a harmadikban - izotóniás nátrium-klorid oldattal. Öt kémcső a kontroll: kettő a megfelelő két antigénhez és egy-egy a komplement, a hemolitikus szérum és az izotóniás nátrium-klorid-oldat hemotoxicitás ellenőrzéséhez; töltse ki őket így:

A csöveket 45 percre termosztátba helyezzük, majd ellenőrizzük. A hemolízis nem lehet kémcsőben.

Az 1:10 hígítású komplementet az állvány 1. sorában lévő 10 kémcsőbe öntjük a következő adagokban: 0,1, 0,16, 0,2, 0,24, 0,3, 0,36, 0,4, 0,44, 0,5 és 0,55 ml. Mindegyik csövek tartalmához adjunk 1 ml-ig terjedő izotóniás nátrium-klorid-oldatot, és alaposan keverjük össze. Mindegyik csőből 0,25 ml keveréket viszünk át a 2. és 3. sor megfelelő kémcsövébe. A kémcsövekkel ellátott állványt felrázzuk, 0,5 ml hemolitikus rendszert adunk a 3. kémcsősorhoz, újra összerázzuk és 45 percre termosztátba helyezzük 37 °C hőmérsékleten. Mind a 30 kémcsőbe 0,25 ml izotóniás nátrium-klorid-oldattal 1:5 arányban hígított normál emberi vérszérumot öntünk.

Az I. antigént (treponemális ultrahang), izotóniás nátrium-klorid-oldattal titerben hígítva, 0,25 ml-t adunk az 1. sor 10 kémcsőjéhez; antigén II (kardiolipin ugyanabban a hígításban és ugyanabban a mennyiségben) - a 2. sor 10 kémcsőjében. 0,25 ml izotóniás nátrium-klorid oldatot öntünk a 3. sor 10 kémcsőébe, a maradék 0,25 ml-t öntjük. Termosztátban történő inkubálás után 0,5 ml hemolitikus rendszert 20 kémcsőbe (1. és 2. sor) adunk, összerázzuk, és ismét termosztátba helyezzük 45 percre.

45 perc elteltével meghatározzuk a komplement munkadózisát, vagyis a titerét 15-20% tartományban.

A komplementtitert úgy tekintjük minimális mennyiség, ami a kos eritrociták teljes hemolízisét okozza antigén és normál emberi vérszérum jelenlétében.

A fő tapasztalat az, hogy minden vizsgált inaktivált szérumot, izotóniás nátrium-klorid oldattal 1:5 arányban hígítva, három kémcsőben 0,25 ml-re öntjük. Adjunk 0,25 ml antigén I-t az első csőbe, 0,25 ml antigén II-t a másodikba, és 0,25 ml izotóniás nátrium-klorid-oldatot a harmadikba (kontroll). Adjunk hozzá 0,25 ml komplementet a munkadózishoz hígítva az összes kémcsőbe. Minden kémcsövet 45 percre termosztátba helyezünk, majd 0,5 ml hemolitikus rendszert adunk hozzá, összerázzuk és 45-50 percre termosztátba helyezzük. A kísérlet eredményét a teljes hemolízis kezdete után rögzítjük a kontrollcsövekben.

A reakció eredményeit pozitívumokkal értékeljük: a hemolízis teljes késése (erősen pozitív reakció) ++++, szignifikáns (pozitív reakció) +++, részleges (gyengén pozitív reakció) ++, jelentéktelen (kétes reakció) - ±, nincs késés a hemolízisben (negatív reakció) - .

Nál nél mennyiségi módszer A Wassermann-reakció végrehajtása során az élményt az izotóniás nátrium-klorid oldattal hígított szérum csökkenő térfogatával állítjuk be.

A Wasserman-reakció fő tapasztalatának lefolytatásának sémája

A Wasserman-reakció klinikai jelentőségét nehéz túlbecsülni. Minden betegnél a kezelés megkezdése előtt elvégzik, de különleges jelentése nála van látens szifilisz, vereség belső szervekés idegrendszer.

A Wasserman-reakció eredményei jellemzik a kezelés minőségét, ami alapot ad a kezelt betegek egy bizonyos időn belüli törlésére.

Primer szifiliszben a Wasserman-reakció általában a fertőzés pillanatától számított 6. hét végén pozitív; másodlagos friss szifilisz esetén az esetek közel 100% -ában pozitív, másodlagos ismétlődő - 98-100% -ban; harmadlagos aktív - 85%-ban; harmadlagos rejtett - az esetek 60% -ában.

A Wasserman reakciót kétszer hajtják végre minden terhes nőnél, szomatikus, ideges, mentális és bőrbetegségek, valamint a lakosság elrendelt kontingensei. Ugyanakkor kritikusan kell kezelni a reakció pozitív és gyengén pozitív eredményeit, mivel ezek lehetnek terhesség végén és szülés után, pajzsmirigy-túlműködéssel, maláriával, leprával, szuvasodással. rosszindulatú daganat, fertőző betegségek, kollagenózisok stb.. Ezért jelenlétében a klinikai megnyilvánulásai betegségeket, elsősorban azokat kell figyelembe venni, a bakterioszkópia adataival együtt.

Ugyanakkor vannak olyan tényezők, amelyek torzíthatják a Wasserman-reakció eredményeinek valódi természetét: rosszul mosott laboratóriumi üvegedények (sav- és lúgnyomok a kémcsövekben), a kutatásra vett vér hosszú távú tárolása, zsírok fogyasztása és a betegek által a vizsgálat előtti alkoholfogyasztás, a menstruáció stb.

Minden esetben kívánatos a beteg átfogó vizsgálata, beleértve a Wassermann-reakción kívül RIBT-t is (lásd 122, 123, 124) stb.

122. Sachs - Vitebsky reakció (citokolikus)

A szifilisz kimutatására használják. Azon alapul, hogy csapadék képződik, amikor a páciens vérszérumát antigénnel keverik.

Az antigén elkészítéséhez több szarvasmarha szív izmait megtisztítják az inaktól, a fasciától és a zsírtól, húsdarálóban felaprítják és 5-szörös térfogatú 96%-os etanollal 15 napig extrahálják, napi 20 perces rázás mellett. A kapott kivonatot porcelánpohárban vízfürdőn vákuumban bepároljuk. A maradékhoz (a lipoidok élénksárga tömegéhez) forró 96%-os etil-alkoholt adunk az extrahálásra vett izmok térfogatának 1/3-a mennyiségben.

A kivonatot 3 napig szobahőmérsékleten tartjuk, szűrjük (in hideg víz) és adjunk hozzá 0,3-0,6%-os kristályos koleszterin oldatot, a pozitív és negatív szérummal végzett titrálás eredményétől függően. Tárolja a citokól antigént szobahőmérsékleten lezárt ampullákban vagy lezárt kémcsövekben.

Módszertan. 2 ml izotóniás nátrium-klorid oldathoz gyorsan 1 ml citokol antigént öntünk, és 15 percig szobahőmérsékleten hagyjuk, amíg pelyhek nem jelennek meg. Adjunk hozzá 0,1 ml antigén emulziót 0,2 ml inaktivált szérumhoz, rázzuk 3 percig, hagyjuk 30 percig békén, majd adjunk hozzá 1 ml izotóniás nátrium-klorid oldatot.

Az antigént tartalmazó kontrollcsőbe 1,2 ml izotóniás nátrium-klorid oldatot és 0,1 ml antigén emulziót adunk. A kontrollban nem lehetnek pelyhek. A reakció eredményeit vizuálisan vagy nagyítóval figyelembe veszik, és a kihullott pelyhek mennyiségétől függően pluszjelekkel (++++, +++, ++) jelzik. Negatív reakció esetén nem keletkeznek pelyhek, de a cső tartalma enyhén opálos lehet.

1931-ben P. Sachs és E. Witebsky javasolta ennek a technikának a módosítását, amely abból áll, hogy az antigént két fázisban hígítják: 2 rész izotóniás nátrium-klorid oldatot adnak az antigén 1 részéhez, és 5 percig szobahőmérsékleten tartják. és további 9 rész izotóniás oldatot adunk hozzá nátrium-kloridot. Az antigén 2%-os nátrium-klorid oldattal történő hígítása is javasolt, ami a szerzők szerint növeli a reakció érzékenységét. A reakció mennyiségi módosítása szérumhígítással is lehetséges (1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64 stb.).

A reakció meglehetősen érzékeny, rövid ideig tart (kb. 1 óra), és az eredmény azonnal leolvasható.

123. Halvány treponema immobilizációs reakció (RIBT)

A szifiliszben szenvedő betegek vérszérumában lévő reakció segítségével antitesteket és komplementet észlelnek, amelyek rögzítik a halvány treponemát.

Primer szifilisz esetén a RIBT túlnyomórészt negatív, másodlagos - pozitív az esetek 92-96% -ában, harmadlagos - 92-100%, idegrendszeri szifilisz és veleszületett - az esetek 86-89% -ában.

A RIBT pozitív eredményeit sarcoidban, erythematosisban, cukorbetegségben, rosszindulatú daganatokban, vírusos hepatitisz, májzsugorodás, malária, lepra, fertőző mononukleózis, egyes forró országok betegségei (pint, yaws stb.).

Az antigén halvány treponema szuszpenziója, amelyet szifilisszel fertőzött nyúl heréiből vettek úgy, hogy a herékbe 0,75-1 ml halvány treponema szuszpenziót juttatnak izotóniás nátrium-klorid oldatban (látómezőnként 50 egyed).

A hereanyagot az állat fertőzése után 6-8 nappal kell venni. Az antigén bevétele előtt a nyulat kivéreztetéssel (szívpunkció ill. nyaki ütőér). A hereszövetet összetörjük, és izotóniás nátrium-klorid-oldattal hígított egészséges nyúlvérszérummal megtöltjük, -30 percig rázatjuk, majd 10 percig centrifugáljuk (1000 fordulat/perc). A felülúszót mikroszkóppal megvizsgáljuk. Minden látómezőben legalább 10-15 halvány treponemának kell lennie.

Kiegészítés készül a szokásos módon tengerimalacok véréből.

A RIBT-hez szüksége van: 1,2 ml 0,2% -os zselatin oldatra, 2,8 ml 5% -os albumin oldatra, 1,6 ml halvány treponema szuszpenzióra; közepes pH - 7,2. Ehhez a keverékhez 0,15 ml komplementet (koktél) adunk. Ezzel párhuzamosan két mintát teszünk: aktív (kísérleti) és reaktív (kontroll) komplementerekkel.

A vizsgált szérumot az „1”-es jelig a melanzúrokba gyűjtjük, majd a „2”-es jelzésig összegyűjtjük a koktélt és steril gumigyűrűvel lezárjuk.

Ugyanakkor hasonló reakciót hajtanak végre nyilvánvalóan pozitív és nyilvánvalóan negatív szérummal.

A melangereket megszámozzuk, és 18-20 órára 35 °C-os termosztátba helyezzük, majd páronként kivesszük a termosztátból (kísérlet - kontroll), és a tartalmat a megfelelő kémcsövekbe öntik. 2 cseppet csepegtetünk a tárgylemezre: bal oldalon - tapasztalat, jobb oldalon - kontroll, fedőlemezzel letakarva és sötét látómezőben mikroszkóppal.

Először a kontroll eredményeit tanulmányozzuk: meghatározzuk a mozgékony és mozdulatlan halvány treponemák százalékos arányát. Számlálási képlet: X = (A - B) / A * 100, ahol A a mobil halvány treponemák száma a kontrollban; B - a mobil halvány treponemák száma a kísérletben.

Példa: (24 - 19) / 24 * 100 = 21%.

A RIBT eredményeire vonatkozó becslések: 20% alatt - negatív. 21-30% - kétséges, 31-50% - gyengén pozitív, 50% felett - pozitív.

Antigén, komplement és segéd, indikátor vagy hemolitikus rendszer - hemolitikus szérum és birka eritrociták.

Ha az első rendszerben specifikus antigén + antitest komplex képződik, akkor a komplement adszorbeálódik (ezzel a komplexszel kombinálódik), és a második rendszerben nem megy végbe hemolízis.

A reakcióhoz szükséges:

1. Tesztszérum, amelyet a páciens cubitalis vénájának punkciójával vett vérből nyernek. A véralvadás után a szérumot külön csőbe szívjuk, és 30 percig 56 °C-on vízfürdőben inaktiváljuk.

2. Antigén - elölt gonococcusok szuszpenziója.

3. A birka vörösvértesteit steril defibrinált vérből nyerik. Háromszori centrifugálással mossuk új adag sóoldattal. A reakcióhoz 3%-os eritrocita-szuszpenziót használunk.

4. A hemolitikus szérumot előzetesen úgy készítik el, hogy nyulakat kos eritrocitákkal immunizálnak. A szérumot használat előtt titráljuk.

5. Komplement - friss tengerimalac szérum. A tengerimalac szívéből fecskendővel szívják ki a vért, alvadás után a szérumot leválasztják. A kísérlet előtt a komplement munkadózisát titráljuk. Ehhez vegye be a komplement fő hígítását 1:10 arányban, és öntse 0,1 és 0,5 közötti kémcsövekbe, majd az egyes kémcsövek térfogatát sóoldattal 1,5 ml-re állítjuk be.

Ugyanakkor hemolitikus rendszert készítenek - hármas titerben hígítva, hemolitikus szérum + 3% birka eritrociták szuszpenziója. Mindkét összetevő különböző térfogatú, és 30 percig termosztátban tartjuk (a keverék érzékenyítése), majd a keveréket 1 ml-ben kémcsövekbe adjuk, és 30 percre termosztátba helyezzük. 2 kémcső szolgál kontrollként:

1. 1 ml hemolitikus rendszer + 1,5 ml sóoldat;

2. 0,5 ml komplement 1:10 + 0,5 ml eritrocita szuszpenzió + 1,5 ml sóoldat.

A komplementtiter az a minimális mennyiség, amelynél a hemolízis még mindig előfordul. A reakció felállításához a komplement munkadózisát veszik be, a titerhez képest 20-25%-kal növelve, azaz általában azzal a komplementmennyiséggel, amely az utolsó előtti hemolízises kémcsőben van. A komplement dózisának növelése azért szükséges, mert a reakcióban a komplementaktivitást valamelyest elnyomhatják a reakció egyéb összetevői (antigén, szérum).
43) RSK Wasserman

A szifilisz diagnosztizálására használják az antitestek kimutatására, valamint a hatékonyság meghatározására specifikus terápia. A Borde-Gangou komplement rögzítési reakció elvén alapul. Jelentős különbség a Wasserman-reakcióban az antigén nem specifikussága: lipoid kivonatok a normál szervekállatokat

A Wasserman-reakció felállításához szükséges a páciens széruma, diagnosztikája, keresztreagáló 1-es, 2-es antigénjei, komplementje, hemolitikus széruma, kos eritrocitái, sóoldat.

Diagnosticum No. 1 - specifikus, treponemális.

Diagnosticum No. 2 - nem specifikus, kardiolipin antigén, amelyek nagy tisztaságú szarvasmarha szívkivonatok, amelyek állandó kémiai összetételű lipoidokat tartalmaznak. Lipoidok, szerző: kémiai összetétel közel állnak a treponema pallidum lipoidokhoz, ezért bár nem specifikusak, de rögzítik a spirocheták elleni antitesteket.

Ezeket az antigéneket központilag állítják elő, és a címkén feltüntetett titernek megfelelően hígítva használják fel a reakcióban.

A fő kísérlettel egyidejűleg 2 kontrollt helyezünk el: nyilvánvalóan negatív és nyilvánvalóan pozitív szérummal.

A fő élmény beállítása

Először az inaktivált és hígított 1:5 arányú tesztszérumot öntjük 4 kémcsőbe. Ezután az antigéneket (1., 2. sz.) 2 kémcsőbe öntjük, a 3. kémcsőbe pedig fiziológiás sóoldatot öntünk. Ezt követően minden csőbe egy munkadózis komplementet adunk. Az összetevők összekeverése után a kémcsövekkel ellátott állványt 37 °C-os termosztátba helyezzük 30 percre. Termosztátban tartás után minden kémcsőhöz hemolitikus rendszert adnak. A csöveket ismét termosztátba helyezzük 2 órára, majd szobahőmérsékleten hagyjuk. Másnap feljegyzik az eredményt.A reakció intenzitásának mértékét becsülik, négy plusz (++++), három (+++), kettő (++) és egy (+) - az intenzitástól függően a folyadék színétől és az alján lévő eritrocita üledék méretétől. A teljes hemolízist (-) mínusz jelzi. Ha éles eltérés van a különböző antigénekkel kapott eredmények között, a kísérletet megismételjük egy új vérrészlettel.
44) RIT-r. Halvány treponema immobilizálása.

Ezt a reakciót használják diagnosztikai célokraés az elismerésért hamis pozitív eredmények standard szerológiai reakciók, különösen látens szifilisz esetén.

A RIBT abban rejlik, hogy immobilizinok jelenlétében a szifiliszben szenvedő betegek szérumában és az aktív komplementben a halvány treponemák elvesztik mobilitásukat.

A RIBT steril dobozokba kerül. A reakcióban részt vesz a tesztszérum, a komplement és az antigén.

A RIBT-ben az antigén egy nyúlheréből származó halvány treponema szuszpenziója korai időpontok(7-8 nappal a fertőzés után) szifilitikus orchitis. Egy speciális szuszpenziós közeg legalább egy napig megőrzi a halvány treponema életképességét. A RIBT-ben a kiegészítést használják tengerimalacok. A RIBT anaerob körülmények között halad. Az összetevőket tartalmazó kémcsöveket mikroaerosztátba helyezzük, amelyből légköri levegőés gázkeveréket fecskendezünk be (95 rész nitrogén és 5 rész szén-dioxid). A kémcsövekkel ellátott mikroanaerosztátot termosztátba (35°C) helyezzük 18-20 órára.

A reakció megfogalmazásával párhuzamosan kontroll vizsgálatok korábbi tapasztalatokból vett pozitív és negatív vérszérummal.

Az RIBT eredményeit a kémcsövek termosztátról való eltávolítása után (azaz 18-20 óra tapasztalat után) értékeljük. Pasteur pipettával a kémcső tartalmából egy cseppet egy tárgylemezre csepegtetünk, amelyet fedőlemezzel letakarva mikroszkóp sötét mezőjében (40. objektív, 10. okulár) vizsgáljuk. A halvány treponemák legfeljebb 20% -ának immobilizálásával a reakció negatívnak tekinthető, 21-30% - kétséges, 31-50% gyengén pozitív, 51-100% - pozitív. A sápadt treponema immobilizációjának százalékos arányát egy speciális táblázat szerint határozzák meg.

45) Opson-fagocita reakció

Mechanizmus: a mikrobiális sejtek fokozott fagocitózisa az antitestek, az immunszérum és a komplement baráti hatásának hatására.

A reakció összetevői:

1) antigén - napi mikrobatenyészet;

3) komplement - friss tengerimalac szérum;

4) fagociták - leukocita szuszpenzió.

Az opszoninok olyan antitestek, amelyek normál és immunszérumban találhatók, és mikrobákat készítenek fel a fagocitózishoz.

A reakcióelegyet speciális kémcsövekbe helyezzük t=37° percnél. Ezután minden csőből kenetet készítünk, 100 fagocitát megszámolunk, és meghatározzuk a fagocitált mikrokontrollok számát.

Opsonic index = fagocita index. normál szérum szérum/fagocita indexe

Minél magasabb a vizsgált szérum opszonikus indexe (>1 legyen), tehát annál magasabb! brucellózis).

Opszoninok – a leukociták fagocita aktivitását serkentő antitestek – meghatározására szolgál, azaz. fertőzések, például brucellózis szerodiagnózisa.

A fagocitózis fokozódása az aktív centrumokkal rendelkező opszoninok (Pav-fragmentum) bakteriális determinánsokhoz, majd a Pc-fragmensek segítségével a fagociták Pc-receptoraihoz való kötődése miatt következik be. A normál szérum kis mennyiségű opszonint tartalmaz, amelyek komplement jelenlétében hatnak. Az immunszérumban több opszonin található, és aktivitásuk kevésbé függ a komplementtől.

Alkatrészek:

Vizsgált szérum

normál szérum

Napi mikrobatenyésztés (pl. staphylococcus)

Fagociták - a neutrofilek szuszpenziója

Inkubálás 37 °C-on 30 percig. Minden csőből kenetet készítünk, Romanovsky-Giemsa szerint megfestjük, és mikroszkóp alatt megszámoljuk a mikrobák számát, 100 vagy több neugrofilben, azaz. meghatározza a fagocita indexet.

Fagocitikus index - az egy neutrofil által elnyelt mikrobák száma.

Opsonic index fagocitikus index az immunrendszer (tesztelt) szérum / normál szérum fagocita indexe.

Minél magasabb az opsonic index (> 1-nek kell lennie), annál nagyobb az immunitás.

Az opszono-fagocita index egy digitális indikátor = a fagociták száma x a fagocitózis pontszám (a lenyelt mikrobák számától függően). A maximális pontszám -75.

46) RN egereken az exotoxin megállapítása céljából

Ez a reakció egy specifikus antitoxikus szérum azon képességén alapul, hogy semlegesíti az exotoxint.

Az immunszérum antitestek képesek semlegesíteni a mikrobák vagy toxinjaik károsító hatását az érzékeny sejtekre, szövetekre, ami a mikrobiális antigének antitestek általi blokkolásával, azaz semlegesítésével jár.

A közömbösítési reakciót (RN) úgy hajtják végre, hogy állatokba vagy érzékeny vizsgálati tárgyakba (sejtkultúra, embriók) antigén-antitest keveréket juttatnak. A mikroorganizmusok vagy antigénjeik, a toxinok állatokban és kísérleti tárgyakban károsító hatásának hiányában az immunszérum semlegesítő hatásáról, ezáltal az antigén-antitest komplex kölcsönhatásának specifitásáról beszélnek.

A reakció végrehajtásához összekeverjük azt a vizsgálati anyagot, amelyben exotoxin jelenléte várható antitoxikus szérum, termosztátban tartva és állatoknak (tengerimalacoknak, egereknek) adják. A kontroll állatokat a vizsgálati anyag szűrletével fecskendezzük be, és nem kezeljük szérummal. Abban az esetben, ha az exotoxin antitoxikus szérummal történő semlegesítése megtörténik, a kísérleti csoport állatai életben maradnak. A kontroll állatok elpusztulnak az exotoxin hatására.

Az exotoxin semlegesítési reakciója akkor következik be, amikor kölcsönhatásba lép antitoxikus szérummal (antitestek-antitoxinok). Az antigén-antitest komplex képződése következtében a toxin elveszti toxikus tulajdonságait.

A semlegesítési reakciót toxinok, toxoidok vagy antitoxinok kimutatására és titrálására hajtják végre.

A toxinokat a folyadék szűrésével nyerik növekedési közeg vagy olyan vizsgálati anyag, ahol toxikus baktériumok elszaporodtak. Ha 30-45 napig formalinnal kezelik 37°C-on, a toxin anatoxinná alakul, amelyet állatok immunizálására használnak fel antitoxikus szérum előállítására.

Semlegesítési reakció in vivo. A toxin típusának meghatározásához diagnosztikai antitoxikus szérummal keverik össze, és ezt a keveréket adják be fehér egereknek. Ha a toxint antitoxikus szérummal semlegesítik, az egerek nem pusztulnak el.

A semlegesítési reakciót diftériában (Schick-teszt) és skarlátban (Dick-teszt) szenvedő gyermekek antitoxikus immunitásának meghatározására használják. Ehhez bizonyos mennyiségű megfelelő toxint (1/40 DLM) intradermálisan injektálnak az alkar területére. Ha antitoxinok vannak a szervezetben, a toxin semlegesítve lesz, és a reakció negatív lesz. Ha nincs antitoxin a szervezetben, gyulladásos válasz az injekció beadásának helyén.
47) RN (neutralizációs reakció) egereken a vírus azonosítására kullancs által terjesztett agyvelőgyulladás

A TBE vírus számos laboratóriumi és vadon élő állat számára patogén. Az újszülöttek és a fiatal fehér egerek a legérzékenyebbek. Az agyban, intraperitoneálisan, intramuszkulárisan történő fertőzés után ezeknél az állatoknál agyvelőgyulladás alakul ki, amely az állatok halálával végződik. A haszonállatok közül a kecskék a leginkább fogékonyak a TBE-vírusra, a juhok és tehenek kevésbé, a lovak pedig gyengén fogékonyak. A TBE vírus citopatogén hatással (CPE) rendelkezik, amely citopátiás elváltozásokat okoz sertés embrionális vesesejtek primer és transzplantált tenyészeteiben (SPEV és RPE), és sok más esetben kifejezett CPE nélkül szaporodik. sejttenyészetek. A fertőzött egerek agyában és a fertőzött tenyészetek tenyészfolyadékában a TBE vírus és a specifikus vírusantigének felhalmozódnak: komplementfixáló, hemagglutináló, precipitáló stb.

TBE vírus hosszú idő alacsony hőmérsékleten tárolva ( optimális üzemmód-60 fok. C és az alatt), jól tolerálja a liofilizálást, szárított állapotban sok évig megmarad, de szobahőmérsékleten gyorsan inaktiválódik. Forralás után 2 perc múlva megöli, forró tejben pedig 60 fokon. C 20 perc múlva meghal.

A formalin, a fenol, az alkohol és más fertőtlenítőszerek, az ultraibolya sugárzás is inaktiváló hatású.

A semlegesítési reakció azon alapul, hogy a specifikus immunszérumok képesek kioltani a vírusok fertőző hatását. Két irányban alkalmazzák:

1) izolált vírusok tipizálására;

2) a felépült betegek szérumában lévő antitestek titrálására.

A reakció beállítása:

1. Laboratóriumi állatokon. A vírus jelenlétének kritériumai

a laboratóriumi állatok halála. LD50 kiszámítva

A vírusszuszpenzió maximális hígítása, amely

a fertőzött állatok 50%-ának halálát okozta. Mert

a kullancs-encephalitis vírus azonosítását végzik el

fehér egerek intracerebrális fertőzése.

2. Szövettenyészetekben. Az eredmények elszámolása megtörténik

Citopátiás hatás (CPE) révén

Színváltozáson alapuló színvizsgálati módszerrel

Hemadszorpcióval.

3. A csirkeembrióban. Az eredmények elszámolása szerint történik

foltok megjelenése a chorioallantois membrán mentén.

48) RTGA

Ezt a reakciót a virológiai gyakorlatban használják:

A vírus típusának meghatározása (üvegen);

A betegek szérumában történő kimutatáshoz (behelyezve).

A közelítő hemagglutinációs gátlási reakció felállításakor 1 csepp típusspecifikus immunszérumot csepegtetünk az üvegre, majd 1 csepp vizsgálandó anyagot és 1 csepp 5%-os eritrocita szuszpenziót.

Az eredmények számbavétele: a vírus típusát az a szérum határozza meg, amellyel a reakció nem fordult elő, mivel az izolált vírusra specifikus immunszérum elnyomja a hemagglutináló aktivitását, és az eritrociták nem agglutinálódnak.
49) RIF

Világító fluorokróm festékeket (fluoriszcein-izotiocianát stb.) használnak jelölésként.

A RIF-nek különféle módosításai vannak. A fertőző betegségek expressz diagnosztikájára - a mikrobák vagy antigénjeik kimutatására a vizsgálati anyagban a Koons szerinti RIF-et használják.

Koons szerint két RIF-módszer létezik: közvetlen és közvetett.

Közvetlen RIF komponensek:

1) a vizsgált anyag (a nasopharynx által elválasztott bélmozgás stb.);

2) jelölt specifikus immunszérum, amely AT-la-t tartalmaz a kívánt antigénhez;

3) izotóniás nátrium-klorid oldat.

A vizsgálati anyagból származó kenetet jelölt antiszérummal kezeljük.

AG-AT reakció lép fel. A lumineszcens mikroszkópos vizsgálat azon a területen, ahol az AG-AT komplexek lokalizálódnak, fluoreszcenciát - lumineszcenciát mutat.

Közvetett RIF összetevők:

1) a vizsgált anyag;

2) specifikus antiszérum;

3) antiglobulin szérum (AT-la immunglobulin ellen), fluorokrómmal jelölt;

4) Izotóniás nátrium-klorid oldat.

A tesztanyagból származó kenetet először immunszérummal kezeljük a kívánt antigénnel, majd jelölt antiglobulin szérummal.

A világító AG-AT komplexeket – a jelölt AT-t fluoreszcens mikroszkóppal detektáljuk.

Az indirekt módszer előnye, hogy nincs szükség fluoreszcens specifikus szérumok széles választékának elkészítésére, és csak egy fluoreszcens antiglobulin szérumot használnak.

Az indirekt RIF egy 4 komponensű változatát is izolálják, ha kiegészítést (tengerimalac szérumot) adnak be. Pozitív reakció esetén AG-AT komplex keletkezik - jelölt - AT-komplement.

A reakció arra utal szerológiai reakciók jelölt antigének vagy antitestek bevonásával.

Közvetlen és közvetett módszerekkel hajtják végre.

Nál nél közvetlen módszer antigén kimutatása a páciensből származó anyagban. Diagnosztikai fluoreszcens szérumot használnak, amely immunszérumokból izolált és fluorokrómokkal jelölt immunglobulinokat tartalmaz.

A specifikus antigén élénkzöld lumineszcens konglomerátumok formájában található meg, és a készítmény háttere narancsvörösre változik.

A közvetlen immunfluoreszcens reakció összetevői:

1) a vizsgált anyag;

2) specifikus lumineszcens szérum;

3) lumineszcens mikroszkóp.

Az influenza diagnosztizálása során differenciálás történik a parainfluenza kórokozóitól és adenovírus fertőzés. A nasopharyngealis tampont fluoreszcens influenzaszérummal vagy influenza immunglobulinnal kezeljük.

"+" eredmény zöld fény formájában 3 óra elteltével érhető el.

Az indirekt módszerrel specifikus antitesteket mutatnak ki és titrálnak. A szérumtiter a maximális hígítás, amelynél a fluoreszcenciát a "+ +"-nál jegyezzük.

Az indirekt immunfluoreszcens reakció összetevői

Antigén keresése az expressz diagnosztikában:

1) vizsgálati anyag (antigén);

2) specifikus szérum;

3) antiglobulin lumineszcens szérum

4) lumineszcens mikroszkóp.

/ fázisspecifikus

A szérum antitestek adszorbeálódnak az antigénhez.

// nem specifikus fázis

Fluorokrómmal jelölt antiglobulin szérumot használnak. Antigén + antitest komplex (I) + antiglobulin szérum (II) képződik, ami világít.