Sejtkultúrák használata. Biotechnológiai technológiák: sejtkultúrák

A testen kívül nőtt szervek alapjai (in vitro). A sejtek és szövetek tenyésztése a sterilitás szigorú betartásán és olyan speciális tápközegek használatán alapul, amelyek biztosítják a tenyésztett sejtek élettevékenységének fenntartását, és a lehető legjobban hasonlítanak ahhoz a környezethez, amellyel a sejtek kölcsönhatásba lépnek a szervezetben. A sejt- és szövettenyészet megszerzésének módja az egyik legfontosabb a kísérleti biológiában. A sejt- és szövettenyészetek lefagyaszthatók és hosszú ideig tárolhatók folyékony nitrogén hőmérsékleten (-196°C). Az állati sejtek tenyésztésével kapcsolatos alapvető kísérletet R. Harrison amerikai tudós hajtotta végre 1907-ben, egy békaembrió idegrendszerének egy darabját nyirokrögbe helyezve. A csírasejtek több hétig életben maradtak, idegrostok nőttek ki belőlük. Idővel a módszert továbbfejlesztették A. Carrel (Franciaország), M. Burroughs (USA), A. A. Maksimov (Oroszország) és más tudósok, akik vérplazmát és az embrió szöveteiből származó kivonatot használtak tápközegként. A sejt- és szövettenyészetek előállítása terén tett későbbi előrelépések bizonyos kémiai összetételű táptalajok kifejlesztésével jártak együtt különféle típusú sejtek tenyésztésére. Általában sókat, aminosavakat, vitaminokat, glükózt, növekedési faktorokat, antibiotikumokat tartalmaznak, amelyek megakadályozzák a tenyészet baktériumokkal és mikroszkopikus gombákkal való fertőzését. F. Steward (USA) 1958-ban kezdeményezte egy növényi sejt- és szövettenyésztési módszer megalkotását (egy darab sárgarépa-floémon).

Állati és emberi sejtek tenyésztéséhez különböző eredetű sejtek használhatók: hám (máj, tüdő, emlőmirigy, bőr, hólyag, vese), kötőszövet (fibroblaszt), váz (csont és porc), izom (csontváz, szív- és simaizom), az idegrendszer (gliasejtek és neuronok), hormonokat termelő mirigysejtek (mellékvese, agyalapi mirigy, a Langerhans-szigetek sejtjei), melanociták és különböző típusú daganatsejtek. Termesztésüknek 2 iránya van: sejtkultúra és szervtenyésztés (szerv- és szövettenyésztés). Sejtkultúra - genetikailag homogén, gyorsan burjánzó populáció - előállításához szövetdarabokat (általában kb. 1 mm 3 -es) eltávolítanak a szervezetből, megfelelő enzimekkel kezelik (a sejtközi érintkezések elpusztítására), és a kapott szuszpenziót tápközegbe helyezik. . Az embrionális szövetekből származó tenyészeteket jobb túlélés és aktívabb növekedés jellemzi (a differenciálódás alacsony szintje és az embriók progenitor őssejtek jelenléte miatt), mint a felnőtt szervezetből vett megfelelő szövetek. A normál szövetek korlátozott élettartamú tenyészeteket eredményeznek (ún. Hayflick limit), míg a daganatokból származó tenyészetek korlátlan ideig szaporodhatnak. Egyes sejtek azonban még a normál sejttenyészetben is spontán halhatatlanná válnak, azaz halhatatlanná válnak. Túlélnek, és korlátlan élettartamú sejtvonalakat hoznak létre. Az eredeti sejtvonal nyerhető sejtpopulációból vagy egyetlen sejtből. Ez utóbbi esetben a vonalat klónnak vagy klónnak nevezik. A különböző tényezők hatására történő hosszan tartó tenyésztés során a normál sejtek tulajdonságai megváltoznak, átalakulás következik be, amelynek fő jellemzői a sejtmorfológia megsértése, a kromoszómák számának megváltozása (aneuploidia). Nagyfokú transzformáció esetén az ilyen sejtek állatba juttatása daganat kialakulását okozhatja. A szervkultúrában a szövetek szerkezeti szerveződése, az intercelluláris kölcsönhatások megmaradnak, a szövettani és biokémiai differenciálódás megmarad. A hormonfüggő szövetek megőrzik érzékenységüket és jellegzetes válaszaikat, a mirigysejtek továbbra is specifikus hormonokat választanak ki, és így tovább. Az ilyen tenyészeteket tenyésztőedényben, tutajon (papír, millipore) vagy a tápközeg felületén úszó fémhálón neveljük.

A növényekben a sejttenyésztés általában ugyanazokon az elveken alapul, mint az állatokban. A tenyésztési módszerek közötti különbségeket a növényi sejtek szerkezeti és biológiai jellemzői határozzák meg. A legtöbb növényi szövetsejt totipotens: egy ilyen sejtből bizonyos körülmények között teljes értékű növény fejlődhet ki. Növényi sejttenyészet előállításához bármely szövet (például kallusz) vagy szerv (gyökér, szár, levél) egy darabját felhasználják, amelyben élő sejtek vannak. Ásványi sókat, vitaminokat, szénhidrátokat és fitohormonokat (leggyakrabban citokineket és auxinokat) tartalmazó táptalajra helyezzük. A növénykultúrák 22 és 27°C közötti hőmérsékleten, sötétben vagy fényben is eltarthatók.

A sejt- és szövettenyészeteket széles körben használják a biológia és az orvostudomány különböző területein. A szomatikus sejtek (a nemi sejtek kivételével a szervek és szövetek összes sejtje) testen kívüli tenyésztése meghatározta a magasabb rendű élőlények genetikájának tanulmányozására szolgáló új módszerek kidolgozásának lehetőségét, a klasszikus genetika módszerei mellett molekuláris módszereket is alkalmazva. biológia. Az emlős szomatikus sejtek molekuláris genetikája érte el a legnagyobb fejlődést, ami az emberi sejtekkel való közvetlen kísérletek lehetőségével függ össze. A sejt- és szövettenyésztést olyan általános biológiai problémák megoldására használják, mint a génexpresszió mechanizmusainak tisztázása, a korai embrionális fejlődés, a differenciálódás és proliferáció, a sejtmag és a citoplazma kölcsönhatása, a sejtek a környezettel, a különféle kémiai és fizikai hatásokhoz való alkalmazkodás, az öregedés, rosszindulatú átalakulás stb., örökletes betegségek diagnosztizálására és kezelésére használják. Vizsgálati objektumokként a sejttenyészetek alternatívát jelentenek az állatokkal szemben az új farmakológiai szerek tesztelésében. Ezek szükségesek a transzgenikus növények megszerzéséhez, a klonális szaporításhoz. A sejttenyészetek fontos szerepet játszanak a biotechnológiában a hibridek létrehozásában, a vakcinák és biológiailag aktív anyagok előállításában.

Lásd még a sejttervezést.

Lit.: Sejttenyésztési módszerek. L., 1988; Állati sejtek tenyésztése. Módszerek / Szerk.: R. Freshni. M., 1989; Tenyésztett sejtek biológiája és növényi biotechnológia. M., 1991; Freshney R. I. Állati sejtek tenyésztése: az alapvető technika kézikönyve. 5. kiadás Hoboken, 2005.

O. P. Kisurina-Jevgenyev.

I. Sejttenyészetek

A legelterjedtebbek az egyrétegű sejttenyészetek, amelyek 1) primer (elsősorban tripszinezett), 2) félig transzplantálható (diploid) és 3) transzplantálható sejtkultúrákra oszthatók.

Eredet embrionális, neoplasztikus és kifejlett organizmusok csoportjába sorolhatók; morfogenezis által- fibroblasztokon, hámokon stb.

Elsődleges sejtkultúrák bármely emberi vagy állati szövet sejtjei, amelyek képesek egyrétegűként növekedni egy speciális tápközeggel bevont műanyag vagy üveg felületen. Az ilyen növények élettartama korlátozott. Minden esetben mechanikai őrlés, proteolitikus enzimes kezelés és a sejtek számának standardizálása után nyerik ki a szövetből. A majomvesékből, emberi embrionális vesékből, emberi magzatvízből, csirkeembriókból származó primer tenyészeteket széles körben használják vírusizolációra és -felhalmozásra, valamint vírusvakcinák előállítására.

félig átültethető(vagy diploid ) sejtkultúrák - azonos típusú sejtek, amelyek akár 50-100 átoltást is képesek ellenállni in vitro, miközben megtartják eredeti diploid kromoszómakészletüket. A humán embrionális fibroblasztok diploid törzseit vírusfertőzések diagnosztizálására és vírusvakcinák előállítására egyaránt használják.

átültetett sejtvonalakat potenciális halhatatlanság és heteroploid kariotípus jellemzi.

A transzplantált vonalak forrása primer sejttenyészetek (például SOC, PES, VNK-21 - napos szír hörcsög veséjéből; PMS - tengerimalac veséjéből stb.), amelyek egyes sejtjei a végtelen in vitro szaporodásra való hajlam. Az ilyen tulajdonságok sejtekből történő megjelenéséhez vezető változások halmazát transzformációnak, a transzplantált szövettenyészetek sejtjeit pedig transzformáltnak nevezzük.

Az átültetett sejtvonalak másik forrása a rosszindulatú daganatok. Ebben az esetben a sejttranszformáció in vivo megy végbe. A virológiai gyakorlatban leggyakrabban a következő transzplantált sejtvonalakat használják: HeLa - méhnyakrákból nyert; Ner-2 - a gége karcinómájából; Detroit-6 - a tüdőrák áttétből a csontvelőbe; RH - az emberi veséből.

A sejttenyésztéshez tápközegekre van szükség, amelyeket rendeltetésük szerint növekedési és támogató tápközegekre osztanak. A táptalaj összetételének több tápanyagot kell tartalmaznia annak érdekében, hogy a sejtek aktív szaporodását egyrétegűvé alakítsák. A támogató tápközegnek csak a már kialakult egyrétegű sejtek túlélését kell biztosítania a vírusok sejtben történő szaporodása során.

A szabványos szintetikus médiát, például a szintetikus 199-es médiát és a tűs médiát széles körben használják. A céltól függetlenül minden sejttenyészet tápközeget kiegyensúlyozott sóoldat alapján terveztek. Leggyakrabban Hank megoldása. A legtöbb táptalaj szerves összetevője az állatok (borjú, bika, ló) vérszéruma, amelynek 5-10%-a nélkül a sejtszaporodás és az egyrétegű réteg képződése nem megy végbe. A szérum nem része a karbantartó közegnek.

I. Sejttenyészetek - fogalmak és típusok. Az "I. Sejtkultúrák" kategória besorolása és jellemzői 2017, 2018.

- III. Rádiórelé kommunikáció

II. Vezeték nélküli kommunikáció I. Vezetékes kommunikáció Ø Városi telefonkommunikáció Ø Közvetlen telefonos kommunikáció (választó) Ø Rádiótelefon kommunikáció ("Altai") Ø Induktív kommunikáció (EKV kommunikáció "Diston", "Nalmes") Ø... .

- Anyagfelhasználás 1 km-es úton IV-es típusú aszfaltbeton burkolattal

15. táblázat 14. tábla 13. tábla 12. tábla 11. táblázat Utak kamatos kamatozású forgalom különböző működési években Az m, K0, K0m együtthatók értékei növekvő intenzitással Táblázat... .

- III. Idő 90 perc.

5. lecke Fékrendszer 8. témakör Vezérlési mechanizmusok Az autóipari berendezések elrendezése szerint Csoportos óra levezetése Terv - absztrakt Fedotov S.A. alezredes. "____"... .

- A Zmin és Xmin meghatározása az alákínálás nélküli feltételből

5.9. ábra. A kerekek fogainak levágásáról. Nézzük meg, hogyan viszonyul a fogasléc x nyírási együtthatója a keréken lévő fogasléc által levágható fogak számához. Hagyja, hogy a sín az 1. pozícióba legyen beépítve (5.9. ábra). Ebben az esetben a fogasléc egyenes feje keresztezi az N-N kapcsolódási vonalat t-ben. És ....

- Verbos que terminan en -it, -et

Los verbos irregulares Go - ir Eat - comer Sleep - dormir Want - querer I Go Eat Sleep Want You Go Eat Sleep Do He, She Go Eat Sleep Want We Go Eat Sleep Want You Go Eat Sleep Do They Go...

K.K. - Ezek egy többsejtű szervezet sejtjei, amelyek a testen kívül mesterséges körülmények között élnek és szaporodnak.

A testen kívül élő sejteket vagy szöveteket metabolikus, morfológiai és genetikai jellemzők egész komplexe jellemzi, amelyek élesen eltérnek a szervek és szövetek sejtjeinek in vivo tulajdonságaitól.

Az egyrétegű sejtkultúráknak két fő típusa van: elsődleges és transzplantált sejttenyészet.

Elsősorban tripszinezett. Az „elsődleges” kifejezés közvetlenül emberi vagy állati szövetekből az embrionális vagy posztnatális időszakban nyert sejttenyészetre vonatkozik. Az ilyen növények élettartama korlátozott. Egy bizonyos idő elteltével a nem specifikus degeneráció jelenségei jelennek meg bennük, amely a citoplazma granulációjában és vakuolizációjában, a sejtek lekerekítésében, a sejtek és a szilárd szubsztrát közötti kommunikáció elvesztésében fejeződik ki. A táptalaj időszakos cseréje, az utóbbi összetételének megváltoztatása és egyéb eljárások csak kismértékben növelhetik meg a primer sejttenyészet élettartamát, de nem akadályozhatják meg végső elpusztulását és elpusztulását. Ez a folyamat minden valószínűség szerint az egész szervezetben ható neurohumorális faktorok szabályozásán kívül eső sejtek metabolikus aktivitásának természetes kihalásával jár.

Csak a populáció egyes sejtjei vagy sejtcsoportjai képesek megőrizni növekedési és szaporodási képességét a sejtréteg nagy részének degenerációjának hátterében. Ezek a sejtek, miután megtalálták a végtelen szaporodás képességét in vitro, előidézik átültetett sejtkultúrák.

A transzplantálható sejtvonalak fő előnye bármely elsődleges tenyészethez képest a testen kívüli korlátlan szaporodási lehetőség, valamint a viszonylagos autonómia, amely közelebb hozza őket a baktériumokhoz és az egysejtű protozoákhoz.

Felfüggesztési kultúrák- folyékony tápközegben szuszpenzióban növesztett egyedi sejtek vagy sejtcsoportok. Ezek egy viszonylag homogén sejtpopuláció, amelyek könnyen ki vannak téve vegyszereknek.

A szuszpenziós tenyészeteket széles körben használják modellrendszerként a másodlagos anyagcsere-útvonalak, az enzimindukció és génexpresszió, az idegen vegyületek lebontásának, a citológiai vizsgálatok stb.

A "jó" vonal jele a sejtek anyagcsere-átrendezõdési képessége és a szaporodás magas üteme meghatározott tenyésztési körülmények között. Egy ilyen vonal morfológiai jellemzői:

nagyfokú szétesés (csoportonként 5-10 sejt);

a sejtek morfológiai egységessége (kis méret, gömb vagy ovális forma, sűrű citoplazma);

Tracheid-szerű elemek hiánya.

Diploid sejttörzsek. Ezek ugyanolyan típusú sejtek, amelyek akár 100 osztódásra is képesek in vitro, miközben megőrzik az eredeti diploid kromoszómakészlet meghibásodását (Hayflick, 1965). Az emberi embriókból származó fibroblasztok diploid törzseit széles körben használják a diagnosztikai virológiában és vakcinagyártásban, valamint kísérleti vizsgálatokban. Nem szabad megfeledkezni arról, hogy a vírusgenom egyes jellemzői csak azokban a sejtekben valósulnak meg, amelyek megtartják a normális differenciálódási szintet.

130. Bakteriofágok. Morfológia és kémiai összetétel

A bakteriofágok (fágok) (más görög szóból φᾰγω - „elnyelem”) olyan vírusok, amelyek szelektíven fertőzik meg a baktériumsejteket. Leggyakrabban a bakteriofágok a baktériumok belsejében szaporodnak, és lízisüket okozzák. A bakteriofág általában egy fehérjehéjból és egy egyszálú vagy kétszálú nukleinsav (DNS vagy ritkábban RNS) genetikai anyagából áll. A részecskeméret körülbelül 20-200 nm.

A különböző bakteriofágok részecskéinek - virionjainak - szerkezete eltérő. Az eukarióta vírusokkal ellentétben a bakteriofágoknak gyakran van egy speciális kapcsolódási szerve a baktériumsejt felszínéhez, vagy egy faroknyúlvány, amelyek különböző bonyolultságúak, de egyes fágoknak nincs faroknyúlványa. A kapszid tartalmazza a fág genetikai anyagát, genomját. A különböző fágok genetikai anyagát különböző nukleinsavak képviselhetik. Egyes fágok genetikai anyagaként DNS-t, mások RNS-t tartalmaznak. A legtöbb fág genomja kétszálú DNS, néhány viszonylag ritka fág genomja pedig egyszálú DNS. Egyes fágok DNS-molekuláinak végein "ragadós területek" (egyszálú komplementer nukleotidszekvenciák) vannak, más fágokban nincsenek ragadós területek. Egyes fágok egyedi génszekvenciákkal rendelkeznek a DNS-molekulákban, míg más fágok génpermutációkkal rendelkeznek. Egyes fágokban a DNS lineáris, másokban gyűrűbe záródik. Egyes fágokban több gén terminális ismétlődése található a DNS-molekula végén, míg más fágokban ezt a terminális redundanciát viszonylag rövid ismétlődések biztosítják. Végül néhány fágban a genomot több nukleinsav-fragmens halmaza képviseli.

Evolúciós szempontból az ilyen különböző típusú genetikai anyagot használó bakteriofágok sokkal nagyobb mértékben különböznek egymástól, mint az eukarióta szervezetek bármely más képviselője. Ugyanakkor a genetikai információhordozók - a nukleinsavak - szerkezetében és tulajdonságaiban fennálló ilyen alapvető különbségek ellenére a különböző bakteriofágok sok tekintetben hasonlóságot mutatnak, elsősorban az arra érzékeny baktériumok fertőzése után a sejtanyagcserébe való beavatkozás jellegében.

A sejtek produktív fertőzését előidézni képes bakteriofágok, pl. életképes utódot eredményező fertőzés nem hibásnak minősül. Minden nem hibás fágnak két állapota van: egy extracelluláris vagy szabad fág állapota (ezt néha érett fágnak is nevezik) és egy vegetatív fág állapota. Egyes úgynevezett mérsékelt égövi fágok esetében a próféták állapota is lehetséges.

Az extracelluláris fágok olyan részecskék, amelyek az erre a fágtípusra jellemző szerkezettel rendelkeznek, amely biztosítja a fág genomjának megőrzését a fertőzések között és a következő érzékeny sejtbe való bejuttatását. Az extracelluláris fág biokémiailag közömbös, míg a vegetatív fág, a fág aktív („élő”) állapota érzékeny baktériumok fertőzése vagy profág indukálása után következik be.

Néha az érzékeny sejtek nem hibás fággal való fertőzése nem eredményez életképes utódképzést. Ez két esetben fordulhat elő: abortív fertőzés során, vagy a sejt lizogén állapota miatt mérsékelt égövi fággal való fertőzés során.

A fertőzés abortív jellegének oka lehet bizonyos sejtrendszerek aktív beavatkozása a fertőzés során, például a baktériumba bevitt fággenom elpusztulása, vagy valamilyen, a fertőzéshez szükséges termék hiánya a sejtben. a fág fejlődése stb.

A fágokat általában három típusba sorolják. A típust a produktív fágfertőzésnek a fertőzött sejt sorsára gyakorolt ​​hatásának természete határozza meg.

Első típus valóban virulens fágok. Egy sejt virulens fággal való fertőzése elkerülhetetlenül a fertőzött sejt pusztulásához, pusztulásához és az utódfág felszabadulásához vezet (kivéve az abortív fertőzés eseteit). Az ilyen fágokat valóban virulensnek nevezik, hogy megkülönböztessék őket a virulens mérsékelt égövi fágmutánsoktól.

Második típus- mérsékelt égövi fágok. Egy sejt mérsékelt égövi fággal történő produktív fertőzése során két alapvetően eltérő fejlődési mód lehetséges: lítikus, általában (eredményében) hasonló a virulens fágok lítikus ciklusához, és lizogén, amikor egy mérsékelt fág genomja speciális állapotba kerül - profágba. A profágot hordozó sejtet lizogénnek vagy egyszerűen lizogénnek nevezik (mert bizonyos körülmények között fáglítikus fejlődésen megy keresztül). Azokat a mérsékelt égövi fágokat, amelyek a profág állapotban reagálnak egy indukáló faktor alkalmazására a lítikus fejlődés megindulásával, indukálhatónak, az így nem reagáló fágokat pedig nem indukálhatónak nevezzük. Virulens mutánsok előfordulhatnak mérsékelt övi fágokban. A virulenciamutációk az operátorrégiók nukleotidszekvenciájának ilyen változásához vezetnek, ami a represszor iránti affinitás elvesztésében nyilvánul meg.

A harmadik típusú fágok a fágok, amelyek produktív fertőzése nem vezet a baktériumok pusztulásához. Ezek a fágok képesek elhagyni a fertőzött baktériumot anélkül, hogy fizikai pusztulást okoznának. Az ilyen fággal fertőzött sejt állandó (permanens) produktív fertőzés állapotában van. A fág fejlődése a baktériumok osztódási sebességének némi lassulását eredményezi.

A bakteriofágok kémiai szerkezetükben, a nukleinsav típusában, morfológiájában és a baktériumokkal való kölcsönhatásban különböznek egymástól. A bakteriális vírusok százszor és ezerszer kisebbek, mint a mikrobiális sejtek.

Egy tipikus fágrészecske (virion) egy fejből és egy farokból áll. A farok hossza általában a fej átmérőjének 2-4-szerese. A fej genetikai anyagot - egyszálú vagy kétszálú RNS-t vagy DNS-t tartalmaz a transzkriptáz enzimmel inaktív állapotban, fehérje vagy lipoprotein héjjal körülvéve - egy kapszid, amely megőrzi a genomot a sejten kívül.

A nukleinsav és a kapszid együtt alkotják a nukleokapszidot. A bakteriofágok ikozaéderes kapsziddal rendelkezhetnek, amely egy vagy két specifikus fehérje több másolatából áll össze. Általában a sarkok a fehérje pentamereiből állnak, és mindkét oldal támasztéka ugyanazon vagy hasonló fehérje hexamereiből áll. Ezenkívül a fágok lehetnek gömb alakúak, citrom alakúak vagy pleomorf alakúak. A farok fehérjecső - a fej fehérjehéjának folytatása, a farok tövében egy ATPáz található, amely regenerálja az energiát a genetikai anyag befecskendezéséhez. Vannak rövid folyamatú, folyamat nélküli, fonalas bakteriofágok is.

A fágok fő alkotóelemei a fehérjék és a nukleinsavak. Fontos megjegyezni, hogy a fágok, más vírusokhoz hasonlóan, csak egyféle nukleinsavat tartalmaznak, dezoxiribonukleinsavat (DNS) vagy ribonukleinsavat (RNS). Ebben a tulajdonságban a vírusok különböznek azoktól a mikroorganizmusoktól, amelyek sejtjeikben mindkét típusú nukleinsav megtalálható.

A nukleinsav a fejben található. Kis mennyiségű fehérjét (körülbelül 3%) találtak a fágfej belsejében is.

Így a kémiai összetétel szerint a fágok nukleoproteinek. Nukleinsavuk típusától függően a fágokat DNS-re és RNS-re osztják. A fehérje és a nukleinsav mennyisége a különböző fágokban eltérő. Egyes fágokban a tartalmuk közel azonos, és ezen komponensek mindegyike körülbelül 50%. Más fágokban ezeknek a főkomponenseknek az aránya eltérő lehet.

Ezeken a fő összetevőkön kívül a fágok kis mennyiségű szénhidrátot és néhány túlnyomórészt semleges zsírt tartalmaznak.

1. ábra: Egy fágrészecske szerkezetének diagramja.

A második morfológiai típus összes ismert fágja RNS. A harmadik morfológiai típusú fágok között RNS és DNS formák is megtalálhatók. Más morfológiai típusú fágok DNS típusúak.

131. Interferon. Ami?

Beavatkozni ról ről n(a lat. inter - kölcsönösen, egymás között és ferio - hit, hit), védőfehérje, amelyet emlősök és madarak szervezetében, valamint sejtkultúrák termelnek a vírusfertőzésükre válaszul; gátolja a vírusok szaporodását (replikációját) a sejtben. Az I.-t 1957-ben A. Isaacs és J. Lindenman angol tudósok fedezték fel fertőzött csirkék sejtjeiben; később kiderült, hogy baktériumok, rickettsia, toxinok, nukleinsavak, szintetikus polinukleotidok is okozzák az I. képződését. Az I. nem egyedi anyag, hanem alacsony molekulatömegű (25 000-110 000 molekulatömegű) fehérjék csoportja, amelyek széles pH-zónában stabilak, nukleázokkal szemben ellenállóak, és proteolitikus enzimek hatására lebonthatók. Az I. sejtekben a képződés egy vírus kifejlődésével jár együtt, vagyis a sejt reakciója egy idegen nukleinsav behatolására. A fertőző vírus sejtjéből való eltűnése után és a normál sejtekben És. nem található. Hatásmechanizmusa szerint az I. alapvetően különbözik az antitestektől: nem specifikus a vírusfertőzésekre (különböző vírusok ellen hat), nem semlegesíti a vírus fertőzőképességét, de gátolja szaporodását a szervezetben, gátolja a szintézist. vírusos nukleinsavak. Amikor vírusfertőzés kialakulása után bejut a sejtekbe, az I. nem hatásos. Emellett az And. általában az azt alkotó sejtekre jellemző; például a csirkesejtek I.-ja csak ezekben a sejtekben aktív, de nem gátolja a vírus szaporodását nyúl- vagy emberi sejtekben. Úgy gondolják, hogy nem maga az I. fejti ki hatását a vírusokra, hanem egy másik, a hatása alatt termelődő fehérje. Bíztató eredmények születtek a vírusos betegségek (herpetikus szemfertőzés, influenza, citomegalia) megelőzésére és kezelésére szolgáló I. vizsgálat során. Az I. széles körben elterjedt klinikai alkalmazását azonban korlátozza a gyógyszer beszerzésének nehézsége, a szervezetbe való ismételt beadás szükségessége és fajspecifikussága.

132. Disjunktív mód. Ami?

1.A produktív vírusfertőzés 3 periódusban fordul elő:

· kezdeti időszak magában foglalja a vírus sejten történő adszorpcióját, a sejtbe való behatolást, a vírus szétesését (fehérjementesítését) vagy „levetkőzését”. A vírus nukleinsavat a megfelelő sejtstruktúrákba juttatták, és a lizoszómális sejtenzimek hatására felszabadulnak a védő fehérjeburokból. Ennek eredményeként egyedi biológiai szerkezet alakul ki: egy fertőzött sejt 2 genomot (saját és vírusos) és 1 szintetikus apparátust (sejt) tartalmaz;

Utána indul második csoport vírusszaporodási folyamatok, beleértve átlagosés utolsó időszakok, amely során a sejt elnyomása és a vírusgenom expressziója következik be. A sejtgenom elnyomását kis molekulatömegű szabályozó fehérjék, például hisztonok biztosítják, amelyek bármely sejtben szintetizálódnak. Vírusfertőzéssel ez a folyamat fokozódik, most a sejt olyan szerkezet, amelyben a genetikai apparátust a vírusgenom, a szintetikus apparátust pedig a sejt szintetikus rendszerei képviselik.

2. Az események további menete a sejtben irányította vírus nukleinsav replikációjához(új virionok genetikai anyagának szintézise) és a benne foglalt genetikai információ megvalósítása(fehérjekomponensek szintézise új virionokhoz). A DNS-tartalmú vírusokban, mind a prokarióta, mind az eukarióta sejtekben, a vírus DNS-replikációja a sejtes DNS-függő DNS-polimeráz részvételével megy végbe. Ebben az esetben először egyszálú DNS-t tartalmazó vírusok alakulnak ki kiegészítő szál - az úgynevezett replikatív forma, amely sablonként szolgál a leány DNS-molekulák számára.

3. A DNS-ben lévő vírus genetikai információinak megvalósítása a következőképpen történik: DNS-függő RNS polimeráz részvételével mRNS-ek szintetizálódnak, amelyek bejutnak a sejt riboszómáiba, ahol a vírusspecifikus fehérjék szintetizálódnak. A kétszálú DNS-tartalmú vírusokban, amelyek genomja a gazdasejt citoplazmájában íródik át, ez a saját genomi fehérje. Azok a vírusok, amelyek genomja a sejtmagban íródik át, az ott található sejtes DNS-függő RNS polimerázt használják.

Nál nél RNS vírusok folyamatokat replikáció genomjuk, a genetikai információ transzkripciója és transzlációja más módon történik. A vírus RNS replikációja, mind a mínusz, mind a plusz szálak, az RNS replikatív (az eredetivel komplementer) formáján keresztül megy végbe, amelynek szintézisét az RNS-függő RNS-polimeráz biztosítja, egy genomi fehérje, amellyel minden RNS-tartalmú vírus rendelkezik. . A mínusz szálú vírusok RNS-ének replikatív formája (plusz-szál) nemcsak templátként szolgál a leányvírus RNS-molekulák (mínusz-szálak) szintéziséhez, hanem az mRNS funkcióit is ellátja, azaz a riboszómákba jut és biztosítja a vírusfehérjék szintézise (adás).

Nál nél plusz-szál Az RNS-tartalmú vírusok kópiáinak transzlációs funkcióját látják el, amelyek szintézise a replikatív formán (negatív szálon) keresztül történik, vírus RNS-függő RNS-polimerázok részvételével.

Egyes RNS-vírusok (reovírusok) teljesen egyedi transzkripciós mechanizmussal rendelkeznek. Ezt egy specifikus vírus enzim biztosítja - reverz transzkriptáz (reverz transzkriptáz)és fordított transzkripciónak nevezik. Lényege abban rejlik, hogy először a vírus RNS-mátrixán reverz transzkripció részvételével transzkriptum keletkezik, amely egy DNS-szál. Rajta a sejtes DNS-függő DNS polimeráz segítségével szintetizálódik a második szál, és kétszálú DNS-transzkriptum jön létre. Ebből a szokásos módon, az i-RNS képződésén keresztül valósul meg a vírusgenom információja.

A leírt replikációs, transzkripciós és transzlációs folyamatok eredménye a képződés leánymolekulák vírusos nukleinsav és vírusfehérjék a vírus genomjában kódolják.

Utána jön harmadik, utolsó periódus kölcsönhatás a vírus és a sejt között. A sejt citoplazmatikus retikulumának membránjain a szerkezeti komponensekből (nukleinsavak és fehérjék) új virionok állnak össze. Az a sejt, amelynek genomját elnyomták (elnyomták), általában elpusztul. újonnan képződött virionok passzívan(sejthalál miatt) ill aktívan(bimbózás útján) elhagyják a sejtet és a környezetében találják magukat.

Ily módon vírus nukleinsavak és fehérjék szintézise és új virionok összeállítása meghatározott sorrendben (időben elkülönülve) és különböző sejtszerkezetekben (térben elkülönülve) fordulnak elő, amihez kapcsolódóan elnevezték a vírusok szaporodásának módját szétválasztó(összefüggéstelen). Veszélyes vírusfertőzés esetén a vírus és a sejt kölcsönhatásának folyamata valamilyen okból megszakad, mielőtt a sejtgenom elnyomása megtörténne. Nyilvánvaló, hogy ebben az esetben a vírus genetikai információja nem valósul meg, és a vírus szaporodása sem történik meg, a sejt pedig változatlanul megőrzi funkcióit.

A látens vírusfertőzés során mindkét genom egyidejűleg működik a sejtben, míg a vírus által kiváltott átalakulások során a vírusgenom a sejt részévé válik, azzal együtt működik és öröklődik.

133. Camelpox vírus

Himlő (Variola)- fertőző fertőző betegség, amelyet láz, valamint a bőrön és a nyálkahártyákon megjelenő papuláris-pustuláris kiütés jellemez.
A betegség kórokozói a himlőfélék (Poxviridae) családjába tartozó vírusok különböző nemzetségéhez és típusaihoz tartoznak. Független fajok a vírusok: természetes tehén yuspa, vaccinia (Orthopoxvirus nemzetség), természetes bárányhimlő, kecske (Carpipoxvirus nemzetség), sertés (Suipoxvirus nemzetség), madarak (Avipoxvirus nemzetség), három fő fajjal (csirkék, galambok és a himlő kórokozói). kanárik).
Himlőkórokozók a különböző állatfajok morfológiailag hasonlóak. Ezek olyan DNS-tartalmú vírusok, amelyeket viszonylag nagy méret (170 - 350 nm), epiteliotrópia és elemi, lekerekített zárványok kialakítására való képesség jellemez a sejtekben (Paschen, Guarnieli, Bollinger testek), amelyek Morozov-festés után fénymikroszkóppal láthatóak. a filogenetikai A himlő kórokozói között erős kapcsolat van a különböző állatfajokban, a patogenitás spektruma nem azonos, az immunogén kapcsolatok nem minden esetben maradnak fenn. A juhok, kecskék, sertések és madarak Variola vírusai csak a megfelelő fajokra patogének, és természetes körülmények között mindegyik önálló (eredeti) himlőt okoz. A Variola tehénhimlő és a vaccinia vírusok patogenitása széles spektrummal rendelkezik, beleértve a szarvasmarhákat, bivalyokat, csónakokat, szamarakat, öszvéreket, tevéket, nyulakat, majmokat és embereket.

Tevehimlő VARIOLA CAMELINA fertőző betegség, amely a bőrön és a nyálkahártyákon jellegzetes göbös-pustuláris himlőkiütések kialakulásával fordul elő. A himlő Variola elnevezése a latin Varus szóból származik, ami görbe (pockmark) jelentésű.

A betegség epizootológiája. Minden korú teve fogékony a himlőre, de a fiatal állatok gyakrabban és súlyosabban betegek. Himlőproblémákkal küzdő helyhez kötött területeken a felnőtt tevék ritkán betegszenek meg, mivel szinte mindegyikük fiatalon kap himlőt. Vemhes tevéknél a himlő vetélést okozhat.

Más fajokhoz tartozó állatok természetes körülmények között nem fogékonyak az eredeti tevehimlővírusra. A tehenek és tevék mellett a bivalyok, a lovak, a szamarak, a sertések, a nyulak és a himlővel szemben nem immunis emberek fogékonyak a tehénhimlővírusra és a vakciniára. A laboratóriumi állatok közül a tengerimalacok érzékenyek a tehénhimlőre és a vaccinia vírusokra, miután a vírust a szemek szaggatott szaruhártyájára juttatták (FA Petunii, 1958).

A himlővírusok fő forrásai a himlő állatok és az oltásban szenvedő emberek, akik a vaccinia vírussal végzett immunizálást követően túlérzékenységből felépülnek himlőborjú detritusban. Beteg állatok és emberek a vírust a külső környezetben, elsősorban a vírust tartalmazó bőr és nyálkahártya kilökődött hámjával terjesztik. A vírus az abortált magzatokkal is kikerül a külső környezetbe (K. N. Buchnev és R. G. Sadykov, 1967). A himlő kórokozóját mechanikusan hordozhatják a himlőre immunis házi- és vadon élő állatok, köztük a madarak, valamint a himlőre immunis emberek a vakcinával oltott gyermekektől.

Természetes körülmények között az egészséges tevék megfertőződnek a vírussal fertőzött területen lévő beteg állatokkal való érintkezés útján, fertőzött vízen, takarmányon, helyiségeken és gondozási eszközökön keresztül, valamint aerogén módon, a beteg állatok vírustartalmú kiáramlását permetezve. A tevék gyakrabban fertőződnek meg, amikor a vírus a bőrön és a nyálkahártyán keresztül bejut a szervezetbe, különösen akkor, ha épségüket megsértik, vagy ha A-vitamin-hiány lép fel.

Járványos állathimlő a tevékben körülbelül 20-25 évente fordul elő. Ebben az időben a fiatal állatok különösen súlyosan betegek. A himlő szempontjából stacionárius zónákban a járványok közötti időszakban a tevék körében a himlő enzootikus és szórványos megbetegedések formájában fordul elő, amelyek többé-kevésbé rendszeresen 3-6 évente fordulnak elő, főként a 2-4 éves állatok körében. Ilyenkor az állatok viszonylag könnyen megbetegednek, főleg a meleg évszakban. Hideg időben a himlő súlyosabb, hosszabb és szövődményekkel jár, különösen fiatal állatoknál. Kis gazdaságokban szinte minden fogékony teve 2-4 héten belül megbetegszik. Nem szabad megfeledkezni arról, hogy a tevék körében a himlőjárványt mind az eredeti, mind a tehénhimlővírus okozhatja, amelyek nem hoznak létre immunitást egymással szemben. Ezért a különböző himlővírusok által okozott járványok követhetik egymást, vagy egyidejűleg is előfordulhatnak.

Patogenezis a kórokozó kifejezett epitheliotropizmusa határozza meg. Az állat szervezetébe kerülve a vírus elszaporodik és behatol a vérbe (viremia), a nyirokcsomókba, a belső szervekbe, a bőr hámrétegébe és a nyálkahártyákba, és ezekben specifikus exantémák és enantémek képződését idézi elő, a súlyosság amelyek közül a szervezet reakcióképességétől és a vírus virulenciájától, a szervezetbe való behatolás útjaitól és a hámréteg állapotától függ. A pockok szekvenciálisan, szakaszosan fejlődnek ki: a csomós roseolától a kéreg- és hegképződéssel rendelkező pustuláig.

Tünetek. A lappangási idő a tevék életkorától, a vírus tulajdonságaitól és a szervezetbe jutásának módjától függően 3-15 nap: fiatal állatoknál 4-7, felnőtteknél 6-15 nap. A nem immunis tevéktől származó tevék a születés után 2-5 nappal megbetegedhetnek. A legrövidebb lappangási idő (2-3 nap) a tevéknél a vaccinia vírussal való megfertőződés után következik be.

A prodromális időszakban beteg tevéknél a testhőmérséklet 40-41 ° C-ra emelkedik, letargia és a táplálkozás megtagadása jelentkezik, a kötőhártya és a száj és az orr nyálkahártyája hiperémiás. Ezek a jelek azonban gyakran láthatók, különösen a betegség kezdetén a gazdaságban.

A tevék himlőjének lefolyása koruktól függően szintén eltérő: fiatal állatoknál, különösen újszülötteknél, gyakrabban akut (legfeljebb 9 napig); felnőtteknél - szubakut és krónikus, néha látens, gyakrabban terhes tevéknél. A tevék himlőjének legjellemzőbb formája a bőr, a betegség szubakut lefolyásával (1. ábra).

A betegség szubakut lefolyásában a szájból és az orrból tiszta, később zavaros, szürkés-piszkos nyálka szabadul fel. Az állatok a fejüket csóválják, szipognak és horkolnak, és kidobják a vírus által érintett hámréteget a vírust tartalmazó nyálkahártyával együtt. Hamarosan duzzanat képződik az ajkak, orrlyukak és szemhéjak területén, amely időnként átterjed az intermaxilláris régióra, a nyakra, sőt a harmatfedő területére is. A submandibularis és az alsó nyaki nyirokcsomók megnagyobbodnak. Az állatok étvágya csökkent, a szokásosnál gyakrabban és hosszabb ideig fekszenek, és nagy nehézségek árán kelnek fel. Ekkor már vörösesszürke foltok jelennek meg az ajkak, az orr és a szemhéj bőrén, a száj és az orr nyálkahártyáján; alattuk sűrű csomók képződnek, amelyek megnövekedve szürke papulákká, majd borsó- és babnagyságú pustulákká alakulnak, amelyeknek középpontja süllyed, szélei mentén hengerszerű megvastagodással.

A pustulák meglágyulnak, szétrepednek, és világosszürke színű ragacsos folyadék szabadul fel belőlük. A fej duzzanata ekkorra eltűnik. 3-5 nap elteltével a megnyílt pustulákat kéreg borítja. Ha nem sérti meg őket a durva takarmány, akkor a betegség ezzel véget is ér. Az eltávolított vagy lehullott elsődleges kéregek fordított kráterszerű pustulák formájában jelennek meg. A foltok helyén hegek maradnak. Mindezek a bőrelváltozások 8-15 napon belül kialakulnak.

A beteg tevék pockjai gyakran először a fejen jelennek meg. Egy-négy éves korban a tevék általában könnyen megbetegednek. Az elváltozások a fejbőrön lokalizálódnak, főleg az ajkakban és az orrban. A tevéknél a tőgy gyakran érintett. Néhány nappal a fej területén a primer pustulák megnyílása után himlős elváltozások képződnek a bőrön és a test más alacsony szőrű területein (mell, hónalj, gát és herezacskó területén, a végbélnyílás környékén, belül az alkar és a comb), valamint tevéknél a hüvely nyálkahártyáján is. Ebben az időben a tevék testhőmérséklete általában ismét emelkedik, néha 41,5 ° -ra, és a tevék a terhesség utolsó hónapjában koraszülött és fejletlen tevéket hoznak, amelyek általában hamarosan elpusztulnak.

Egyes állatoknál a szem szaruhártya (tövis) zavarossá válik, ami átmeneti vakságot okoz az egyik szemen 5-10 napig, tevéknél gyakrabban mindkét szemen. Azok a teveborjak, akik röviddel születésük után megbetegszenek, hasmenést okoznak. Ebben az esetben a betegség után 3-9 napon belül elpusztulnak.

A himlő viszonylag jóindulatú szubakut lefolyása esetén és általában a vaccinia vírussal való fertőzés után az állatok 17-22 napon belül felépülnek.

Felnőtt tevéknél a szájnyálkahártyán felnyíló pustulák gyakran összeolvadnak és vérzik, különösen, ha durva takarmány miatt megsérülnek. Ez megnehezíti az etetést, az állatok lefogynak, a gyógyulási folyamat akár 30-40 napig is elhúzódik, a betegség krónikussá válik.

A himlőfolyamat általánossá válásával időnként pyemia és szövődmények (tüdőgyulladás, gastroenteritis, necrobacteriosis stb.) alakulnak ki, ilyen esetekben a betegség akár 45 napig vagy tovább is elhúzódik. Vannak olyan esetek, amikor a gyomor és a belek működésének zavarai atóniával és székrekedéssel járnak. Egyes beteg állatoknál a végtagok duzzanata figyelhető meg.

A lappangó himlő lefolyású tevéknél (a betegség jellegzetes klinikai tünetei nélkül, csak láz esetén) a csikózás előtt 1-2 hónappal vetélés történik (legfeljebb 17-20%).

A betegség prognózisa felnőtt tevékben kedvező, akut lefolyású tevéknél különösen 15-20 napos korban és nem immunistól himlőig született tevéknél kedvezőtlen. A tevék súlyosan betegek, és 30-90%-uk elpusztul. A tevék 1-3 éves korukban könnyebben megbetegszenek himlőben, idősebb korban pedig, bár súlyosan megbetegednek, kifejezett generalizált folyamat jeleivel, alacsony a halálozási arány (4-7%).

A kóros elváltozásokat a bőr, a nyálkahártya és a szem szaruhártya fent leírt elváltozásai jellemzik. Pontos vérzések figyelhetők meg az epicardiumon és a bélnyálkahártyán. A mellkasi üregben a mellhártyán a kölesszemtől a szürke és szürkésvörös színű, alvó tartalmú lencsékig terjedő kis vérzések és csomók is láthatók néha. A nyelőcső nyálkahártyáját köles nagyságú csomók borítják, amelyeket gerincszerű kiemelkedések vesznek körül. A heg nyálkahártyáján (néha a hólyagban) hasonló vérzések és szaggatott szélű csomók, valamint kis fekélyek találhatók, amelyeknek közepén rózsaszínű, süllyedt. A papulákban olyan elemi testek mutathatók ki, mint például a Paschen-testek, amelyek diagnosztikai értékkel bírnak, ha a kenetkészítményt hagyományos fénymikroszkóppal merítés alatt mikroszkóppal vizsgálják.

A diagnózis a klinikai és járványos adatok elemzésén (figyelembe véve a tevék embertől való fertőzésének lehetőségét), a kóros elváltozásokon, a mikroszkópos vizsgálat pozitív eredményein (friss papulákból származó kenet Morozov-féle ezüstözési módszerrel történő feldolgozásakor) vagy elektronoszkópián alapul, mint pl. valamint a himlőre fogékony állatokon végzett biológiai vizsgálatok. Lehetőség van a vírus izolálására a himlős tevék abortált magzatainak szerveiből. A himlő diagnosztizálása során szintén javasolt a diffúziós precipitációs reakció alkalmazása agar gélben, illetve a neutralizációs reakció alkalmazása aktív specifikus szérumok vagy globulinok jelenlétében.

A differenciáldiagnózist kétes esetekben végezzük (figyelembe véve a klinikai és járványos jellemzőket). A himlőt a necrobacteriosistól a kóros anyagból származó kenet mikroszkópos vizsgálatával és a rá fogékony fehér egerek fertőzésével kell megkülönböztetni; ragadós száj- és körömfájásból - tengerimalacok fertőzése kóros anyag szuszpenziójával a hátsó lábak bőrének talpi felszínén; gombás fertőzésektől és rühtől - a megfelelő kórokozók megtalálásával az érintett bőrterületekről vett vizsgált kaparékban; abortuszok, vetélések és koraszülött csikók brucellózisától - tevék RA és RSK vérszérumának vizsgálatával és magzatok bakteriológiai vizsgálatával táptalajon mikrobiológiai tenyészet izolálásával és mikroszkóppal (szükség esetén tengerimalacokon bioassay, majd bakteriológiai vizsgálat) valamint a vér és a szérum szerológiai vizsgálatai).

A tevék himlőjének diagnosztizálása során ki kell zárni egy nem fertőző, de időnként széles körben elterjedt betegséget is, amely az ajkak és az orr bőrelváltozásaival fordul elő - yantak-bash (turkm.), Jantak-bas (kazah), amely a teve tövisnek nevezett cserjék (yantak, jantak, Alhagi) evésénél megsérülni. Ez a betegség általában ősszel figyelhető meg fiatal tevéken, főként egy éves kor alatt. A felnőtt tevéket csak kis mértékben érinti a teve tövis. A yantak-bash esetén a szájnyálkahártyán a himlővel ellentétben általában nincsenek csomók vagy papuláris elváltozások. A yantak-bash-nél megjelenő szürkés bevonat viszonylag könnyen eltávolítható. Figyelembe kell azonban venni, hogy a yantak-bash hozzájárul a tevék himlőbetegségéhez, és gyakran azzal egyidejűleg is jelentkezik.

A himlővírus izolálásakor meg kell határozni annak típusát (eredeti, tehénhimlő vagy vaccinia), a Szovjetunió Egészségügyi Minisztériumának 1968. évi utasításában meghatározott módszerekkel. A tehénhimlő megelőzéséről emberekben, a olyan tevék fertőzése (izolált körülmények között), akiknél himlő vaccinia vírus és izolált kórokozók voltak.

A beteg tevék kezelése főként tüneti jellegű. Az érintett területeket kálium-permanganát oldattal (1:3000) kezeljük, majd szárítás után 10%-os jódotinktúra és glicerin (1:2 vagy 1:3) keverékével kenjük meg. A himlő felnyitása után dúsított halolajon készült 5%-os synthomycin emulzióval kezeljük, amelyhez 1:15-1:20 arányban jód tinktúrát adunk; kenőcsök - cink, ichtiol, penicillin stb. Használhat 2% szalicil- vagy bórtartalmú kenőcsöt és 20-30% propolisz kenőcsöt vazelinre. Meleg időben 3%-os kreolin kenőcs, kátrány és hexaklórán port jeleznek. Az érintett területeket napi 2-3 alkalommal emulziókkal és kenőcsökkel átitatott tamponokkal kenik.

A szájüreg érintett nyálkahártyáját naponta 2-3 alkalommal 10% -os kálium-permanganát-oldattal vagy 3% -os hidrogén-peroxid-oldattal, vagy zsálya, kamilla és egyéb fertőtlenítő- és összehúzószerekkel mossuk. Kötőhártya-gyulladás esetén a szemet 0,1% -os cink-szulfát oldattal mossák.

A másodlagos mikrobiális fertőzés kialakulásának és az esetleges szövődmények megelőzése érdekében javasolt a penicillin és a sztreptomicin intramuszkuláris injekciója. Általános gyengeség és szövődmények esetén kardiális gyógymódok javasoltak.

A betegség súlyos eseteiben a speciális kezelési eszközök közül a himlőben szenvedő tevék szérumát vagy vérét használhatja (szubkután, 1-2 ml/1 kg állati tömeg). Az injekció beadási helyeit előzetesen gondosan ki kell vágni, és jódtinktúrával letörölni.

A beteg és lábadozó tevéknek gyakran tiszta vizet, korpa- vagy árpalisztet, puha kékfű- vagy finom lucernaszénát, vagy árpaliszttel ízesített gyapothéjat kapnak. Hideg időben a beteg állatokat, különösen a tevéket tiszta, száraz és meleg helyiségben tartják, vagy takaróval letakarják.

A természetben megbetegedett himlős tevék immunitása 20-25 évig tart, vagyis majdnem egy életen át. Az immunitás természete bőr-humorális, ezt bizonyítja a semlegesítő antitestek jelenléte a felépült állatok vérszérumában, valamint a tevék immunitása a homológ himlővírussal szembeni újbóli fertőzéssel szemben. A himlős tevékből született tevék nem érzékenyek arra a típusú himlőre, mint a tevék, különösen az első három évben, vagyis a pubertásig. Azok a teveborjak, amelyek a járványos időszakban a méh alatt vannak, általában nem kapnak himlőt, és nem is betegszenek meg viszonylag könnyen és rövid ideig.

Megelőző és ellenőrző intézkedések az összes állat-egészségügyi, egészségügyi és karantén intézkedés szigorú betartása, a betegség időben történő diagnosztizálása és a vírus típusának meghatározása. Az oltás alatt és az oltást követő időszakban nem szabad tevékről gondoskodni mindaddig, amíg ők (vagy gyermekeik) teljesen be nem fejezik a himlő elleni vakcinázásra adott klinikailag kifejezett reakciót. A gazdaságba belépő valamennyi tevét, tehenet és lovat 30 napig elkülönítő cellában kell tartani.

Ha a himlő tevék, tehenek és lovak körében jelentkezik, a kerületi végrehajtó bizottság külön határozata alapján azt a területet, települést vagy járást, legelőt, ahol ezt a betegséget találják, himlő szempontjából kedvezőtlennek nyilvánítják és karanténba helyezik, korlátozó és egészségügyi intézkedéseket tesznek.

A himlő megjelenését haladéktalanul jelenteni kell a magasabb állat-egészségügyi szervezeteknek, a szomszédos gazdaságoknak és a körzeteknek, hogy megtegyék a megfelelő intézkedéseket a betegség további terjedésének megakadályozása érdekében.

A tevék tehénhimlővel való megfertőződésének megelőzése érdekében javasolt egy gyógyászati ​​készítmény - himlőtörmelék - alkalmazása, mely minden klinikailag egészséges teve immunizálására szolgál, függetlenül azok korától, nemétől és fiziológiai állapotától (terhes és szoptató tevék) hátrányos helyzetű, ill. fenyegetett tehénhimlőfarmokat. Ehhez a teve nyakának alsó harmadában a gyapjút levágják, alkohol-éterrel vagy 0,5% -os karbolsavoldattal kezelik, vattával szárazra törölik vagy megszárítják, a bőrt súrolják és vastag tűvel felhordják, szike vagy súroló vége 2-3 sekély párhuzamos karcolás, 2 hossza -4 cm A feloldott vakcinából 3-4 cseppet a frissen súrolt bőrfelületre csepegtetünk és spatulával enyhén dörzsöljük. Oldja fel a vakcinát az ampullák és ampulladobozok címkéjén jelzett módon. A hígított és fel nem használt oltóanyagot és az oltóanyag-ampullákat forralással fertőtlenítik és megsemmisítik. Az oltáshoz használt eszközöket 3%-os karbolsavoldattal vagy 1%-os formaldehidoldattal mossuk, majd forralással sterilizálják.

Ha a teve nem volt immunis a tehénhimlőre, akkor az oltás utáni 5-7. napon papuláknak kell megjelenniük a karifikáció helyén. Ha nincsenek jelen, az oltást meg kell ismételni, de a nyak másik oldalán és egy másik sorozatú vakcinával. A himlővel szemben immunis és a személyes higiéniai szabályokat ismerő személyek oltott és beteg tevéket ápolhatnak. A fiatal állatok, különösen a gyengébb csoportból, néha erősen reagálnak a vakcinázásra, és a himlő kifejezett tüneteivel megbetegedhetnek.

A beteg és erősen reagáló tevéket elkülönítik és kezelik (lásd fent). A himlővírussal fertőzött állattartó épületeket és helyek fertőtlenítését 2-4%-os forró nátronlúg és kálium-oldattal, 3%-os kén-karbol keverék vagy 2-3%-os kénsav oldattal vagy derített oldattal javasolt fertőtleníteni. 2-6% aktív klórt tartalmazó fehérítő, amely 2-3 órán belül inaktiválja a himlővírust (O. Trabaev, 1970). Használhat 3-5%-os klóramin és 2%-os formaldehid oldatot is. A trágyát elégetni vagy biotermikusan fertőtleníteni kell. A himlő klinikai tüneteivel elesett tevék holttestét el kell égetni. Beteg és himlőgyanús tevékből származó tej, ha nem tartalmaz gennyszennyeződést és más okból nem ellenjavallt, csak 5 perces forralás vagy 85 ° -30 perces pasztőrözés után fogyasztható. A bajban elejtett tevék gyapjúját és bőrét a himlőtelepeken az állati eredetű alapanyagok fertőtlenítési előírásai szerint dolgozzák fel.

A himlő számára kedvezőtlen korlátozásokat a háztartásokból, településekről legkorábban minden himlős állat és ember gyógyulását követően 20 nappal, alapos végső fertőtlenítést követően javasolt megszüntetni.

134. A vírusok kémiai összetétele és biokémiai tulajdonságai

1.1 A virionok szerkezete és kémiai összetétele.

A legnagyobb vírusok (variola vírusok) méretükben közel állnak a kisméretű baktériumokhoz, a legkisebbek (encephalitis, gyermekbénulás, ragadós száj- és körömfájás kórokozói) a vér hemoglobin molekuláihoz irányított nagy fehérjemolekulákhoz. Más szóval, a vírusok között vannak óriások és törpék. A vírusok méréséhez nanométernek (nm) nevezett feltételes értéket használnak. Egy nm a milliméter egy milliomod része. A különböző vírusok mérete 20 nm-től több száz nm-ig terjed.

Az egyszerű vírusok fehérjékből és nukleinsavakból állnak. A vírusrészecske legfontosabb része, a nukleinsav a genetikai információ hordozója. Ha az emberek, állatok, növények és baktériumok sejtjei mindig kétféle nukleinsavat tartalmaznak - dezoxiribonukleinsav DNS-t és ribonukleinsav RNS-t, akkor a különböző vírusokban csak egyféle DNS-t vagy RNS-t találtak, ami az osztályozásuk alapja. A virion második kötelező komponense, a fehérjék különböző vírusokban különböznek, ami lehetővé teszi azok felismerését immunológiai reakciók segítségével.

A bonyolultabb szerkezetű vírusok a fehérjéken és nukleinsavakon kívül szénhidrátokat és lipideket is tartalmaznak. Minden víruscsoportnak megvan a maga fehérje-, zsír-, szénhidrát- és nukleinsav-készlete. Egyes vírusok enzimeket tartalmaznak. A virionok minden egyes összetevője bizonyos funkciókat lát el: a fehérjehéj megvédi őket a káros hatásoktól, a nukleinsav felelős az örökletes és fertőző tulajdonságokért, és vezető szerepet játszik a vírusok variabilitásában, szaporodásukban pedig enzimek vesznek részt. Általában a nukleinsav a virion közepén helyezkedik el, és fehérjehéj (kapszid) veszi körül, mintha bele lenne öltözve.

A kapszid hasonló, meghatározott módon elrendezett fehérjemolekulákból (kapszomerekből) áll, amelyek a vírus nukleinsavával (nukleokapszid) a helyükön szimmetrikus geometriai alakzatokat alkotnak. A nukleokapszid köbös szimmetriája esetén a nukleinsav szál golyóvá tekercselődik, és a kapszomerek szorosan köré tömörülnek. Így a gyermekbénulás vírusai, a ragadós száj- és körömfájás stb.

A nukleokapszid spirális (rúd alakú) szimmetriájával a vírusszál spirál formájában van megcsavarodva, mindegyik tekercsét kapsomerek borítják, amelyek sötéten szomszédosak egymással. A kapszomerek szerkezete és a virionok megjelenése elektronmikroszkóppal figyelhető meg.

A legtöbb emberben és állatban fertőzést okozó vírus köbös szimmetria típusú. A kapszid szinte mindig ikozaéder alakú, szabályos húszoldalú hatszög alakú, tizenkét csúcsgal és egyenlő oldalú háromszögek lapjaival.

Sok vírusnak van egy külső héja a fehérjekapszidon kívül. A vírusfehérjéken és glikoproteineken kívül a gazdasejt plazmamembránjából kölcsönzött lipideket is tartalmaz. Az influenzavírus egy példa a köbös szimmetriájú, spirális burokkal rendelkező virionra.

A vírusok modern osztályozása nukleinsavuk típusán és alakján, a szimmetria típusán, valamint a külső héj meglétén vagy hiányán alapul.

Biokémiai tulajdonságok - lásd. kézikönyv!!!

135. Olyan szervdarabok, amelyek in vitro megőrzik funkcionális és proliferációs aktivitásukat

Sejttenyésztés

bármely állati szövet sejtjei, amelyek mesterséges körülmények között egyrétegű formában képesek növekedni speciális tápközeggel töltött üveg vagy műanyag felületen. A sejtek forrása a frissen nyert állati szövet - elsődleges sejtek, laboratóriumi sejttörzsek - átültetett to-ry. sejteket. Az embrionális és tumorsejtek a legjobban képesek mesterséges körülmények között növekedni. Az emberi és majomsejtek diploid to-ra korlátozott számban passzálódik, ezért néha ún. félig átültethető sejtraj. A sejtek tory befogadásának szakaszai: egy forrás összezúzása; tripszin kezelés; felszabadulás a törmelékből; a tápközegben antibiotikumokkal szuszpendált sejtek számának standardizálása; kémcsövekbe vagy fiolákba öntve, amelyekben a sejtek a falakra vagy az aljára telepednek, és elkezdenek szaporodni; az egyrétegű réteg kialakulásának ellenőrzése. To-ry sejteket használnak a vírus izolálására a vizsgálatból. anyag, a vírusszuszpenzió felhalmozódására, a St. in tanulmányozására. A közelmúltban a bakteriológiában alkalmazzák.

136. Parasztéziák. Ami?

PARESTÉZIA(görögül para-közel, annak ellenére és aisthesis-feeling), néha dysesthesiának is nevezik, zsibbadás, bizsergés, libabőr (myrmeciasis, myrmecismus, formicatio), égő érzés, viszketés, fájdalmas megfázás (azaz nem külső irritáció okozta) ) n. psychroesthesia), mozgások stb., érzések a látszólag megőrzött végtagokban amputáltaknál (pseudomelia paraesthetica). A P. okai eltérőek lehetnek. A P. előfordulhat lokális vérkeringési változások következtében, Renaud-kórban, erythromelalgiában, acroparesthesiában, endarteritisben, spontán gangréna kezdeti tüneteként. Néha előfordulnak idegrendszeri károsodással, traumás ideggyulladással (vö. tipikus P. a n. ulnaris zúzódásával a sulcus olecrani területén), toxikus és fertőző ideggyulladással, radiculitissel, gerincvelői pachymeningitissel (a a gyökerek), akut és hron. myelitis, különösen a gerincvelő kompressziójával (a gerincvelő daganatai) és a tabes dorsalisszal. Diagnosztikai értékük ezekben az esetekben megegyezik a fájdalom, érzéstelenítés és hiperesztézia diagnosztikus értékével: bizonyos területeken, egyik vagy másik perifériás ideg traktusa mentén, vagy egyik vagy másik radikuláris beidegzés területén megjelenve értékes jelzéseket ad a patológia helyére vonatkozóan. folyamat. Az agykárosodás megnyilvánulásaként is előfordulhatnak tételek. Tehát kérgi epilepszia esetén a rohamok gyakran P.-vel kezdődnek, amely abban a végtagban lokalizálódik, amelytől a görcsök kezdődnek. Gyakran agyi érelmeszesedésben vagy agyi szifiliszben is megfigyelhetők, esetenként apoplecticus stroke előhírnökei - Külön pozíciót foglalnak el az ún. mentális P., azaz pszichogén, hipochondriális eredetű P., amelyre különösen jellemző, hogy nem elemi, mint organikus, hanem összetett jellegük van - "férgek mászkálása a fejbőr alatt", "labda felemelése a hasból" a nyakig” (Oppenheim) stb. Diagnosztikai értékük természetesen teljesen más, mint a szerves P-é

137. A vírustartalmú anyagokkal való munkavégzés és biztonsági óvintézkedések szabályai

138. Fertőző szarvasmarha-rhinotracheitis vírus

Fertőző rhinotracheitis(lat. - Rhinotracheitis infectiosa bovum; angolul - Infectious bovine rhinotracheites; IRT, hólyagos bőrkiütés, fertőző vulvovaginitis, fertőző nátha, "orrvörös", fertőző felső légúti hurut) a szarvasmarhák akut fertőző betegsége, főként hurutos. a légutak nekrotikus elváltozásai, láz, általános depresszió és kötőhártya-gyulladás, valamint pustuláris vulvovaginitis és abortusz.

Az IRT kórokozója - Herpesvirus bovis 1, a herpeszvírusok családjába tartozik, DNS-tartalmú, a virion átmérője 120 ... 140 nm. Ennek a vírusnak 9 szerkezeti fehérjét izoláltak és jellemeztek.

Az RTI vírus könnyen tenyészthető számos sejttenyészetben, ami CPP-t okoz. A vírus szaporodását a mitotikus sejtosztódás elnyomása és az intranukleáris zárványok kialakulása kíséri. Hemagglutináló tulajdonságokkal és tropizmussal is rendelkezik a légző- és szaporodási szervek sejtjei számára, és a nyálkahártyákról a központi idegrendszerbe vándorol, képes megfertőzni a magzatot a terhesség első és második felének végén.

-60 ... -70 ° C-on a vírus 7 ... 9 hónapig túlél, 56 ° C-on 20 perc múlva inaktiválódik, 37 ° C-on - 4 ... 10 nap múlva, 22 ° C-on - 50 nap után. 4 " A vírus aktivitása enyhén csökken. A fagyasztás és felolvasztás csökkenti virulenciáját és immunogén aktivitását.

Formalin oldatok 1: 500 inaktiválják a vírust 24 óra elteltével, 1: 4000 - 46 óra elteltével, 1: 5000 - 96 óra elteltével Savas környezetben a vírus gyorsan elveszíti aktivitását, hosszú ideig megmarad (maximum 9 hónap) pH 6,0 ... 9,0 és 4 °C hőmérsékleten. Vannak információk a vírus túléléséről a szárazjég hőmérsékleten 4 ... 12 hónapig, folyékony nitrogénben pedig 1 évig tárolt bikaspermében. A bikasperma vírusinaktiválódásának lehetőségét 0,3%-os tripszin oldattal kezelve mutatták ki.

A fertőzés kórokozójának forrásai a beteg állatok és a látens vírushordozók. Virulens törzzsel való fertőzés után minden állat a vírus látens hordozójává válik. A tenyészbikák nagyon veszélyesek, mert megbetegedést követően 6 hónapig kiválasztják a vírust, és párzás közben megfertőzhetik a teheneket. A vírus orrváladékkal, szem- és nemi szervek váladékkal, tejjel, vizelettel, széklettel és ondóval kerül a környezetbe. Úgy gondolják, hogy a gnú az RTI vírus hordozója az afrikai országokban. Ezenkívül a vírus képes szaporodni a kullancsokban is, amelyek fontos szerepet játszanak a szarvasmarhák betegségének előidézésében.

A vírus átvitelének tényezői a levegő, a takarmány, a sperma, a járművek, a gondozási eszközök, a madarak, a rovarok, valamint az ember (mezőgazdasági dolgozók). Az átvitel módjai - érintkezés, légi, fertőző, táplálék.

A fogékony állatok a szarvasmarhák, nemtől és kortól függetlenül. A betegség legsúlyosabb a húsmarháknál. A kísérlet során juhokat, kecskéket, sertéseket és szarvasokat sikerült megfertőzni. Az állatok általában 10...15 nappal azután betegszenek meg, hogy bekerültek egy rosszul működő telepre.

Az RTI incidenciája 30...100%, a halálozás - 1...15%, magasabb lehet, ha a betegséget egyéb légúti fertőzések bonyolítják.

Az elsődleges gócokban a betegség szinte az egész állatállományt érinti, míg a mortalitás eléri a 18%-ot. Az IRT gyakran előfordul ipari típusú gazdaságokban, amikor különböző gazdaságokból származó állatcsoportokat állítanak össze.

A légutak vagy a nemi szervek nyálkahártyájába jutva a vírus behatol a hámsejtekbe, ahol elszaporodik, ezek halálát és hámlásukat okozva. Ezután a légutak nyálkahártyájának felületén fekélyek, a nemi szervekben csomók, pustulák alakulnak ki. Az elsődleges elváltozásokból a vírus levegővel a hörgőkbe, a felső légutakból pedig a kötőhártyába juthat, ahol az érintett sejtekben degeneratív elváltozásokat okoz, ami a szervezet gyulladásos reakcióját váltja ki. Ezután a vírus a leukocitákon adszorbeálódik és a nyirokcsomókon keresztül terjed, majd onnan a vérbe jut. A virémiát az állat általános depressziója, láz kíséri. Borjakban a vírus a vérrel a parenchymás szervekbe kerülhet, ahol elszaporodik, degeneratív elváltozásokat okozva. Amikor a vírus átjut a vér-agy és a placenta gáton, kóros elváltozások jelennek meg az agyban, a méhlepényben, a méhben és a magzatban. A kóros folyamat nagymértékben függ a mikroflóra okozta szövődményektől is.

A lappangási idő átlagosan 2-4 nap, nagyon ritkán több. Alapvetően a betegség akut. Az IRT-nek öt formája van: felső légúti fertőzések, hüvelygyulladás, agyvelőgyulladás, kötőhártya-gyulladás és ízületi gyulladás.

A légzőszervek vereségével krónikus savós-gennyes tüdőgyulladás lehetséges, amelyben a borjak körülbelül 20% -a elpusztul. Nemi formában a külső nemi szervek érintettek, teheneknél időnként endometritis, az apáknál orchitis alakul ki, ami meddőséget okozhat. Mesterséges megtermékenyítésre használt bikáknál az IRT visszatérő bőrgyulladásban nyilvánul meg a perineumban, a fenékben, a végbélnyílás környékén, esetenként a farkon, a herezacskóban. A vírussal fertőzött sperma méhnyálkahártya-gyulladást és terméketlenséget okozhat teheneknél.

Az abortuszt és a magzat méhen belüli halálát a fertőzés után 3 héttel észlelik, ami egybeesik a vemhes lábadozó tehenek vérében az antitestek titerének növekedésével, amelyek jelenléte nem akadályozza meg az abortuszt és a magzati halált az anyaméhben.

Az IRT látens lefolyásra való hajlamát figyelték meg genitális forma. A hüvely nyálkahártyájának hámjában, előcsarnokában és szeméremtestében számos különböző méretű pustula képződik (pustularis vulvovaginitis). Helyükön eróziók és sebek jelennek meg. A fekélyes elváltozások gyógyulása után a hiperémiás csomók hosszú ideig a nyálkahártyán maradnak. Beteg bikáknál a folyamat a prepucán és a péniszen lokalizálódik. Jellemző a pustulák és hólyagok kialakulása. A vemhes tehenek kis részében előfordulhat abortusz, magzat felszívódása vagy korai ellés. Az elvetélt állatok rendszerint korábban rhinotracheitisben vagy kötőhártya-gyulladásban szenvedtek. Az elvetélt tehenek körében a metritis és a magzati bomlás miatti halálos kimenetel nem zárható ki. A tehén méh nyálkahártyájának gyulladásos folyamatainak hiányában azonban nem ritkák az abortuszok. Az IRT esetében vannak akut tőgygyulladás esetei. A tőgy élesen gyulladt és megnagyobbodott, tapintásra fájdalmas. A tejhozam erősen csökken.

Nál nél meningoencephalitis az elnyomás mellett a motoros funkciók zavara és egyensúlyhiány is megfigyelhető. A betegséget izomremegés, lemerülés, fogcsikorgatás, görcsök, nyálfolyás kíséri. A betegség ezen formája elsősorban a 2-6 hónapos borjakat érinti.

Légzőszervi forma a fertőzést a testhőmérséklet hirtelen emelkedése 41 ... 42 °C-ig, az orrnyálkahártya, a nasopharynx és a légcső hiperémiája, depresszió, száraz, fájdalmas köhögés, bőséges savós-nyálkás váladék az orrból (nátha) és habos nyálfolyás jellemzi. A betegség kialakulása során a nyálka megvastagodik, a légutakban nyálkahártya-dugók és nekrózis gócok képződnek.A betegség súlyos eseteiben fulladás jelei figyelhetők meg.A hiperémia az orrtükörig terjed ("piros orr"). Az IRT vírus etiológiai szerepe fiatal szarvasmarhák tömeges keratoconjunctivitisében bizonyított. Fiatal szarvasmarháknál a betegség olykor úgy nyilvánul meg, agyvelőgyulladás. Hirtelen felindultsággal, lázadással és agresszióval, a mozgáskoordináció zavarával kezdődik. A testhőmérséklet normális. Fiatal borjakban az RTI vírus egyes törzsei akut gyomor-bélrendszeri betegséget okoznak.

Általában beteg állatoknál a légzőszervi forma klinikailag egyértelműen kifejeződik, a genitális forma gyakran észrevétlen marad.

Az akut légúti formában elhullott vagy elhullott állatok boncolása általában savós kötőhártya-gyulladás, hurutos-gennyes nátha, gége- és légcsőgyulladás jeleit, valamint a melléküregek nyálkahártyájának károsodását tárja fel. A turbinák nyálkahártyája ödémás és hiperémiás, nyálkahártya-gennyes rétegekkel borított. Helyenként különböző formájú és méretű eróziós elváltozások tárulnak fel. A gennyes váladék felhalmozódik az orrüregben és a melléküregekben. A gége és a légcső nyálkahártyáján petechiális vérzések és eróziók. Súlyos esetekben a légcső nyálkahártyája fokális nekrózison megy keresztül, elhullott állatokban bronchopneumonia lehetséges. A tüdőben az atelectasia fókuszterületei vannak. Az érintett területeken az alveolusok és hörgők lumenét savós-gennyes váladék tölti ki. Az intersticiális szövet súlyos duzzanata. A szem érintettsége esetén a szemhéj kötőhártyája hiperémiás, ödéma, amely a szemgolyó kötőhártyájára is kiterjed. A kötőhártyát faggyús lepedék borítja. Gyakran körülbelül 2 mm-es papilláris gumók, kis eróziók és sebek képződnek rajta.

A genitális formában a hüvely és a szeméremtest erősen gyulladt nyálkahártyáján pustulák, eróziók és sebek láthatók a fejlődés különböző szakaszaiban. A vulvovaginitis mellett szero-catarrális vagy gennyes méhnyakgyulladás, méhnyálkahártya-gyulladás, sokkal ritkábban proktitis is kimutatható. Apákban súlyos esetekben a phimosis és a paraphimosis csatlakozik a pustularis balanoposthitishez.

A frissen abortált magzatok általában ödémásak, kisebb autolitikus jelenségekkel. Kis vérzések a nyálkahártyákon és a savós membránokon. A magzat halálát követő hosszabb idő elteltével a változások súlyosabbak; az izomközi kötőszövetben és a testüregekben sötétvörös folyadék halmozódik fel, a parenchymalis szervekben - nekrózis gócok.

A tőgy érintettsége esetén savós-gennyes diffúz tőgygyulladást észlelnek. A vágási felület ödémás, az érintett lebenyek növekedése miatt kifejezetten granulált. Megnyomva felhős, gennyszerű titok árad belőle. A ciszterna nyálkahártyája hiperémiás, duzzadt, vérzésekkel. Az agyban lévő encephalitis esetén az erek hiperémiája, a szövetek duzzanata és kis vérzések észlelhetők.

Az IRT-t klinikai és járványtani adatok, a szervek és szövetek kóros elváltozásai alapján diagnosztizálják, laboratóriumi módszerekkel kötelezően megerősítve. A látens fertőzést csak laboratóriumi vizsgálatok állapítják meg.

A laboratóriumi diagnosztika a következőket foglalja magában: 1) a vírus izolálása sejttenyészetben lévő kóros anyagból és azonosítása RN-ben vagy RIF-ben; 2) RTI vírus antigének kimutatása patológiás anyagban RIF segítségével; 3) antigének kimutatása beteg és felépült állatok vérszérumában (retrospektív diagnózis) RN-ben vagy RIGA-ban.

Virológiai vizsgálathoz beteg állatoktól nyálkát vesznek az orrüregből, szemből, hüvelyből, prepucából; az erőszakosan megölt és elesettekből - az orrsövény, légcső, tüdő, máj, lép, agy, regionális nyirokcsomók darabjai, legkésőbb a halál után 2 órával. Vérszérumot is vesznek retrospektív szerológiai diagnózis céljából. Laboratóriumi diagnosztikához IRT használjon szarvasmarha IRT diagnosztikai készletet és egy vörösvértest diagnosztikai készletet a fertőzés szerodiagnosztizálására RIGA-ban.

Az IRT diagnózisát a parainfluenza-3, az adenovírus-fertőzés, a légúti syncytialis fertőzés és a vírusos hasmenés anyagának vizsgálatával párhuzamosan végzik.

Az IRT előzetes diagnózisa szarvasmarháknál a kóros anyagban végzett antigén kimutatás pozitív eredményei alapján történik. ZÁTONY figyelembe véve a járványtani és klinikai adatokat, valamint a kóros elváltozásokat. A végső diagnózist a RIF eredményeinek és a vírus izolálásának és azonosításának egybeesése alapján állapítják meg.

A fertőző rhinotracheitis differenciáldiagnózisában ki kell zárni a ragadós száj- és körömfájást, a rosszindulatú hurutos lázat, a parainfluenza-3-at, az adenovírus- és chlamydia fertőzéseket, a vírusos hasmenést, a légúti syncytialis fertőzést, a paszteurellózist.

A betegséghez tartós és hosszan tartó immunitás társul, amely kolosztrum antitestekkel továbbadható az utódoknak. A felépült állatok immunitása legalább 1,5...2 évig tart, azonban még a kifejezett humorális immunitás sem akadályozza meg a vírus perzisztenciáját lábadozó állatokban, ezért más állatok potenciális fertőzési forrásaként kell őket tekinteni. Ezért minden olyan állatot, amely RTI-ellenes antitestekkel rendelkezik, a látens vírus hordozójának kell tekinteni.

139. A fejlődő madárembriók tápanyag-tárolója az

Tekintettel a madarak embriogenezisének összetett és meglehetősen hosszadalmas folyamatára, speciális ideiglenes extra embrionális - ideiglenes szervek kialakítására van szükség. Ezek közül az első alkotja a tojássárgája zsákot, majd a többi ideiglenes szervet: a magzathártyát (amnion), savós membránt, allantoist. A korábbi evolúció során a sárgájazsákot csak a tokhalfélékben találták meg, amelyek élesen telolecitális sejttel rendelkeznek, és az embriogenezis folyamata összetett és hosszadalmas. A tojássárgája zsák kialakulása során megfigyelhető a sárgája levélrészekkel való elszennyeződése, amit extraembrionális leveleknek vagy extraembrionális anyagnak nevezünk. De az extraembrionális endoderma elkezd nőni a tojássárgája szélén. Az extra embrionális mezoderma 2 rétegre tagolódik: zsigeri és parietális, míg a zsigeri lap az extraembrionális endodermával, a parietális pedig az extra embrionális ektodermával szomszédos.

Az embrion kívüli ektoderma félretolja a fehérjét, és a sárgáját is túlnői. Fokozatosan a tojássárgája tömegét teljesen körülveszi az extra embrionális endoderma és az extra embrionális mezoderma zsigeri rétege - kialakul az első ideiglenes szerv, a tojássárgája.

A tojássárgája zsák funkciói. A tojássárgája zsák endoderma sejtjei hidrolitikus enzimeket kezdenek kiválasztani, amelyek lebontják a tojássárgája tömegét. A hasítási termékek felszívódnak és az ereken keresztül eljutnak az embrióba. A tojássárgája tehát trofikus funkciót biztosít. A zsigeri mezodermából kialakulnak az első erek és az első vérsejtek, így a tojássárgája is vérképző funkciót lát el. Madarakban és emlősökben a tojássárgája zsák sejtjei között korán megtalálhatók a genitális rügy sejtjei, a gonoblaszt.

140. Újraaktiválás. Ami?

A genotípus megváltoztatásával a mutációkat pontokra (az egyes génekben lokalizálódó) és génekre (a genom nagyobb részeit érintő) osztják.
Az érzékeny sejtek vírusfertőzése többszörös jellegű, pl. egyszerre több virion lép be a sejtbe. Ebben az esetben a replikációs folyamatban lévő vírusgenomok együttműködhetnek vagy interferálhatnak. A vírusok közötti kooperatív kölcsönhatásokat genetikai rekombináció, genetikai reaktiváció, komplementáció és fenotípusos keveredés képviseli.
A genetikai rekombináció gyakrabban fordul elő DNS-tartalmú vírusokban vagy RNS-tartalmú, fragmentált genommal rendelkező vírusokban (influenzavírus). A genetikai rekombináció során csere történik a vírusgenomok homológ régiói között.
Genetikai reaktiváció figyelhető meg a rokon vírusok genomjai között, amelyekben különböző gének mutációi vannak. A genetikai anyag újraelosztása során teljes értékű genom alakul ki.
A komplementáció akkor következik be, amikor a sejtet megfertőző vírusok egyike egy mutáció eredményeként nem működő fehérjét szintetizál. A vad típusú vírus, amely egy komplett fehérjét szintetizál, pótolja annak hiányát a mutáns vírusban.

A szövetek és szervek testen kívüli életének fenntartása tenyésztéssel lehetséges. Harrion 1907-ben, Carrel pedig 1912-ben tett először kísérletet az emberi és állati sejtek létfontosságú tevékenységének laboratóriumi körülmények közötti fenntartására. J. Monod azonban csak 1942-ben javasolta a modern in vitro tenyésztési módszereket.

Sejttenyésztés genotipikusan azonos típusú sejtek populációja, amelyek in vitro működnek és osztódnak. A célzott vagy véletlenszerű mutációkkal nyert sejttenyészeteket ún sejtvonalak .

A sejttenyészetek in vitro növekedése összetett. Általában a következő fázisokat különböztetjük meg:

1. Indukciós periódus (lag fázis). A késleltetési fázisban nem figyelhető meg a sejtek számának vagy a termékek képződésének növekedése. Ezt a fázist általában a sejttenyészet átjutása után figyeljük meg. Ebben a sejtek alkalmazkodnak az új táptalajhoz, újraépül a sejtanyagcsere.

2. Az exponenciális növekedés fázisa. Jellemzője a biomassza és a sejttenyészetek salakanyagainak gyors felhalmozódása. Ebben a fázisban a mitózisok a leggyakoribbak a többi növekedési fázishoz képest. De ebben a fázisban az exponenciális növekedés nem folytatódhat a végtelenségig. Átmegy a következő fázisba.

Rizs. 4.2. Sejttenyésztés Hep-2, 48 óra tenyésztés, mitózisok láthatók.

3. A lineáris növekedés fázisa. mitózisok számának csökkenése jellemez

4. lassú növekedési szakasz. Ebben a fázisban a sejttenyészet növekedése lelassul a mitózisok számának csökkenése miatt.

5. Állófázis . A növekedési retardációs fázis után figyelhető meg, miközben a sejtek száma gyakorlatilag nem változik. Ebben a fázisban vagy megszűnik a mitotikus sejtosztódás, vagy az osztódó sejtek száma megegyezik a haldokló sejtek számával.

6. A haldokló kultúra fázisa, amelyekben a sejthalál folyamatai dominálnak és mitotikus osztódások gyakorlatilag nem figyelhetők meg.

Az 1-es fázisból a 6-os fázisba való egymást követő átmenetek nagymértékben megfigyelhetők a sejtpopuláció növekedéséhez szükséges szubsztrátok kimerülése, vagy a létfontosságú tevékenységük mérgező termékeinek felhalmozódása miatt. A sejttenyészetek növekedését korlátozó szubsztrátumokat ún korlátozó .

Olyan körülmények között, ahol a sejtnövekedéshez szükséges szubsztrátok és egyéb komponensek koncentrációja állandó, a sejtek számának növelésének folyamata autokatalitikus. Ezt a folyamatot a következő differenciálegyenlet írja le:

ahol N a sejtek száma, μ a fajlagos növekedési sebesség.

Rizs. 4.3. Sejtkultúra RD, humán rhabdomyosarcoma. Egyrétegű, élő festetlen sejtek.

Az 1-es fázisból a 6-os fázisba való egymást követő átmenetek nagymértékben megfigyelhetők a sejtpopuláció növekedéséhez szükséges szubsztrátok kimerülése, vagy a létfontosságú tevékenységük mérgező termékeinek felhalmozódása miatt.

A sejtek tenyészetben való életének fenntartása érdekében számos kötelező feltételt be kell tartani:

Kiegyensúlyozott tápközeg szükséges;

A legszigorúbb sterilitás;

Optimális hőmérséklet;

Időben történő áthaladás, azaz új tápközegbe történő átvitel.

J. Monod először hívta fel a figyelmet arra, hogy a sejttenyészet növekedési folyamatait enzimatikus reakciók szubsztrátjai korlátozzák. A sejtpopulációk növekedését korlátozó szubsztrátumokat nevezzük korlátozó.

Szinte minden sejtpopulációra jellemző a növekedési sebesség változása inhibitorok és aktivátorok hatására. Léteznek DNS-re ható inhibitorok (nalidixonsav), RNS-re ható gátlók (aktinomicin D), fehérjeszintézis gátlók (levomicetin, eritromicin, tetraciklin), sejtfalszintézist gátlók (penicillin), membránaktív anyagok (toluol, kloroform) , az energiafolyamatok gátlói (2,4 - dinitrofenol), a limitáló enzim gátlói.

A sejtnövekedés kinetikáját meghatározó egyik legfontosabb tényező a hidrogénionok. Sok sejttenyészet szűk pH-tartományban nő; a pH változása növekedési ütemük lelassulásához vagy a növekedés teljes leállásához vezet

A populációnövekedés-korlátozás jelenségének leírására az egyik első kísérletet P. Ferhgulst tette 1838-ban. Felvetette, hogy az élőlények szaporodási folyamata mellett megfigyelhető a „zsúfoltság” miatti elpusztulás is. azaz Ez a folyamat akkor következik be, amikor két személy találkozik.

Bármely sejtpopuláció fejlődésében eljön a sejtnövekedés és a sejthalál leállásának időszaka. Nyilvánvaló, hogy a növekedés leállása és a sejthalál nem kevésbé fontos, mint szaporodásuk és növekedésük. Ezek a folyamatok különösen fontosak a többsejtű szervezetek számára. Az egyes sejtek ellenőrizhetetlen és kontrollálatlan növekedése az onkológiai megbetegedések okozója, a csökevényesség, az öregedés és a sejthalál a szervezet egészének öregedésének és elhalásának.

A különböző populációk és különböző sejtek egészen eltérően viselkednek. A baktériumsejtek és az egysejtű szervezetek sejtjei külsőleg „halhatatlannak” tűnnek. Ha megfelelő, kényelmes környezetnek vannak kitéve korlátozó szubsztrát feleslegével, a sejtek aktívan szaporodni kezdenek. Növekedésük korlátozását a szubsztrát fogyasztása, az inhibitor termékek felhalmozódása, valamint a növekedéskorlátozás sajátos mechanizmusa határozza meg, amit "progresszív inkompetenciának" neveznek.

A többsejtű szervezetek sejtjei egészen másként viselkednek. A differenciált sejtek szervek és szövetek alkotják, növekedésük és szaporodásuk alapvetően korlátozott. Ha a növekedésszabályozó mechanizmus meghibásodik, egyedi sejtek jönnek létre, amelyek korlátlanul növekednek. Ezek a sejtek alkotják a rákos sejtek populációját, növekedésük a szervezet egészének halálához vezet.

A többsejtű élőlények "normális" sejtjeinek öregedésének problémájával kapcsolatos kutatások nagyon érdekes múltra tekintenek vissza. Először a nagy német biológus, August Weismann fogalmazta meg 1881-ben azt az elképzelést, hogy az állatok és az emberek normális szomatikus sejtjei determinisztikusan elveszítik osztódási és elhalálozási képességüket. Körülbelül ugyanebben az időben a tudósok megtanulták az állati és emberi sejtek átvitelét. a kultúrába. A század elején a híres sebész, az in vitro sejttenyésztési technika egyik megalapítója, a Nobel-díjas Alexis Carrel 34 évig tartó kísérletet állított fel. Ebben az időszakban egy csirke szívéből nyert fibroblaszt sejteket tenyésztett. A kísérletet leállították, mert a szerző biztos volt abban, hogy a sejtek örökké tenyészthetők. Ezek az eredmények meggyőzően bizonyították, hogy az öregedés nem a sejtszinten lezajló folyamatok tükröződése.

Ez a következtetés azonban tévesnek bizonyult. A "halhatatlan" olyan újjászületett (transzformált) sejtek, amelyek elvesztették a növekedés kontrollját, és rákos sejtekké változtak. Csak 1961-ben L. Hayflick, visszatérve A. Carrel kísérleteihez, kimutatta, hogy a normál "nem átalakult" humán fibroblasztok körülbelül 50 osztódást képesek végrehajtani, és teljesen leállítják a szaporodást. Jelenleg nem kétséges, hogy a normál szomatikus sejtek korlátozott replikációs potenciállal rendelkeznek.

A "programozott" öregedés és a sejthalál folyamatainak összességének meghatározására a kifejezés "apoptózis". Az apoptózist meg kell különböztetni elhalás - sejthalál véletlenszerű események vagy külső méreganyagok hatására. A nekrózis a sejttartalomnak a környezetbe való felszabadulásához vezet, és általában gyulladásos reakciót okoz. Az apoptózis a sejt tartalmának belülről történő feldarabolása, amelyet speciális intracelluláris enzimek hajtanak végre, amelyek indukciója és aktiválása akkor következik be, amikor a sejt külső jelet kap, vagy amikor a sejtet erőszakkal injektálják enzimekkel - az apoptotikus aktivátorokkal. gép", vagy ha a sejtet olyan külső tényezők károsítják, amelyek nem vezetnek elhaláshoz, de képesek apoptózist elindítani (ionizáló sugárzás, reverzibilis túlmelegedés stb.).

A kutatók érdeklődése az apoptózis iránt jelenleg igen nagy, ezt az apoptózis sejtpopulációk viselkedésében betöltött fontos szerepének tudatosítása határozza meg, hiszen szerepe nem kisebb, mint a sejtek növekedési és szaporodási folyamatainak szerepe.

A „programozott” sejthalál fogalma nagyon sokáig létezett, de csak 1972-ben, Kerr, Willy és Currier munkája után, amelyben kimutatták, hogy számos „programozott” és „nem programozott” sejtfolyamat. A halálozás meglehetősen közel van, az apoptózis iránti érdeklődés jelentősen megnőtt. Miután kiderült a DNS-degradációs folyamatok szerepe az apoptózisban, és sok esetben az RNS és a specifikus fehérjék szükséges de novo szintézise, ​​az apoptózis a biokémia és a molekuláris biológia tárgyává vált.

Az apoptózis molekuláris biológiája igen változatos. Az apoptózist a sejtekben végbemenő morfológiai változások, a fehérjéket "keresztkötő" transzglutamináz-termékek indukciója, aktivitása és megjelenése, DNS-fragmentáció, a kalciumfluxusok változása, valamint a foszfatidil-szerin membránon történő megjelenése tanulmányozzák.

1982-ben S.R. Umansky azt javasolta, hogy az eukarióta sejthalál program egyik funkciója a folyamatosan felbukkanó, onkogén tulajdonságokkal rendelkező sejtek eliminálása. Ezt a hipotézist megerősíti a p53 fehérje, az apoptózist indukáló és tumorszuppresszor felfedezése. A p53 fehérje egy transzkripciós szabályozó, amely képes specifikus DNS-szekvenciákat felismerni. A p53 gén számos olyan gént aktivál, amelyek késleltetik a sejtosztódást a G 1 fázisban. A DNS-t károsító tényezők (sugárzás, ultraibolya sugárzás) hatására a p53 gén expressziója a sejtekben jelentősen megnövekszik. A p53 hatására a többszörös DNS-töréssel rendelkező sejtek a G 1 fázisban késleltetik, és ha az S fázisba kerülnek (például tumortranszformáció esetén), akkor apoptózison mennek keresztül.

A p53 gén mutációja lehetővé teszi a sérült DNS-sel rendelkező sejtek számára a mitózis befejezését, megőrzi a tumortranszformáción átesett sejteket, miközben rezisztensek a sugárzással és a kemoterápiával szemben. A p53 fehérje mutáns formája nem képes megállítani a sejtciklust.

A "programozott" öregedés leggyakoribb koncepciója jelenleg a telomer fogalmán alapul. A tény az, hogy a DNS-polimeráz nem képes replikálni a DNS-templát 3 / - végének „farkát” - több nukleotidot a 3 / - végén. A sejtreprodukció során előforduló többszörös DNS-replikáció ebben az esetben az olvasási régió lerövidüléséhez vezet. Ez a rövidülés oka lehet az öregedésnek és a replikációs potenciál csökkenésének, a kromoszómák működésének romlásának. Ennek a folyamatnak a megakadályozására a specifikus telomeráz enzim szintetizálja a többször ismétlődő TTAGGG hexanukleotidot a nukleáris DNS végein, amely egy kiterjesztett DNS-szakaszt, az úgynevezett telomerát alkotja. A telomeráz enzimet 1971-ben A. Olovnikov jósolta meg, 1985-ben pedig Greider és Blackburn fedezte fel.

A normál emberi szövetek legtöbb sejtjében a telomeráz inaktív, ezért a sejtek 50-100 osztódás után apoptózison mennek keresztül, az őssejtekből való képződésüktől számítva. A rosszindulatú daganatsejtekben a telomeráz gén aktív. Ezért a rosszindulatú sejtek élettartama az eltelt sejtciklusok számát és a DNS-szerkezetben bekövetkezett nagyszámú mutációs változás felhalmozódását tekintve "idős koruk" ellenére szinte korlátlan. A genom rövidülésének és öregedésének leküzdéséhez ezen elképzelések szerint a sejtnek aktiválnia kell a telomeráz gént, és több telomerázt kell kifejeznie.

A sejtpopulációk növekedését számos tényező korlátozza, amelyek a sejtbiomassza felhalmozódásának korlátjához vezetnek. Az állati és növényi sejtek számára a növekedés korlátozása létfontosságú; a többsejtű szervezetek növekedése korlátozott. A sejtpopulációk növekedését korlátozó legfontosabb tényezők a következők:

1. A rendszer kimerülése a korlátozó hordozó által;

2. Az osztódási képességet elvesztett sejtek megjelenése a populációban.

3. Erős növekedésgátló termékek felhalmozódása.

A sejtpopuláció növekedésének korlátozása a programozott hiba sajátos természetével járhat. A sejtburjánzást megállító biokémiai mechanizmusok más jellegűek. Ma már világos, hogy számos esetben a növekedés leállása a sejtek környezeti növekedési faktorokkal szembeni érzékenységének csökkenésével jár. Példaként említhetjük a limfocitapopuláció növekedési faktorok által kiváltott növekedésének jellemzőit. Például a növekedési faktor receptor megjelenésének és eltűnésének dinamikáját a T-limfociták sejtmembránján az a tény jellemzi, hogy a receptor gyors expresszióját annak elvesztésének szakasza váltja fel. Lehetséges, hogy a növekedési faktor receptor „deszenzitizációja” összefüggésben áll a reakció során bekövetkező inaktiválódási mechanizmussal.

A tenyészet előállításához a legjobb, ha friss sejteket használunk felnőtt, embrió szöveteiből, sőt rosszindulatú daganatokból is. Jelenleg a tüdő, a bőr, a vese, a szív, a máj és a pajzsmirigy sejtkultúráit nyerték. A sejteket szilárd vagy folyékony tápközegen termesztik egyrétegű tenyészet formájában, például üvegen, vagy szuszpenzióként fiolákban vagy speciális eszközökben - fermentorokban.

Jelenleg a sejtpopulációk növekedésének és fejlődésének hátterében álló mechanizmusok tanulmányozására egyre gyakrabban alkalmazzák a számítástechnikát alkalmazó matematikai modellezési módszereket. Ezek a megközelítések egyrészt lehetővé teszik a folyamatok dinamikájának alapvető vizsgálatát, figyelembe véve a populációnövekedést bonyolító hatások összességét, másrészt lehetővé teszik a technológiai rezsimek ésszerű felkutatását és a sejtnövekedési folyamat finom szabályozását. .

Egyes sejttörzsek élettartama a tenyészetben elérheti a 25 évet is. Hayflick (1965) szerint azonban a sejtek élettartama a tenyészetben nem haladja meg annak az organizmusnak az élettartamát, amelyből származnak. A tenyészetben hosszú ideig tartó sejttartalom mellett rákos sejtekké degenerálódhatnak. Például a diploid humán fibroblasztok öregedése szövettenyészetben megfelel az egész szervezet öregedésének. Könnyebb fenntartani a rosszul differenciált vagy differenciálatlan szövetek sejtkultúráját - limfociták sejtjeit, fibroblasztjait, egyes hámsejteket. A belső szervek (máj, szívizom, stb.) erősen differenciált és magasan specializálódott sejtjei rosszul szaporodnak tápközegen.

A szövettenyésztés módszere nagy jelentőséggel bír a rosszindulatú daganatok tanulmányozásában és diagnosztikájában, a regeneráció mintázatainak vizsgálatában (proliferáció, regenerációs faktorok stb.), a sejtaktivitás tiszta termékének (enzimek, hormonok, gyógyszerek) kinyerésében. ), örökletes betegségek diagnosztizálására. A sejttenyésztést széles körben alkalmazzák a géntechnológiában (gének izolálása és átvitele, géntérképezés, monoklonális antitestek előállítása stb.). Sejttenyészetekkel vizsgálják különböző kémiai és biológiai vegyületek, gyógyszerek stb. mutagenitását, rákkeltő hatását.

Jelenleg lehetetlen elképzelni a vírusok izolálását és tanulmányozását sejtkultúrák használata nélkül. Az első jelentés a poliovírus sejttenyészetekben történő szaporodásáról 1949-ben jelent meg (Enders J.F. et al.). A virológiai sejttenyészeteket a következő célokra használják: 1) vírusok izolálása és azonosítása; 2) vírusfertőzés kimutatása a párosított szérumokban lévő antitestek számának jelentős növekedésével; 3) antigének és antitestek előkészítése szerológiai vizsgálatokhoz. Az egyrétegű tenyészetek előállításához a szövetek fő forrásai állati szövetek, például majomvesék, humán rosszindulatú daganatok, emberi embrionális szövetek.

A makrofágrendszer vizsgálatában fontos szerepet játszik a mesterséges termesztés módszere is. Ennek a rendszernek a szerepe a fertőzési folyamatban, az antitestek képződésében, a vér pigmentanyagcseréjében, a lipid anyagcsere zavarokban, a kemoterápiás gyógyszerek metabolizmusában, biokémiai és biofizikai tulajdonságaiban, valamint e sejtek daganatos képességében, tanulmányozás alatt áll. E tanulmányok többségét Nelson monográfiája foglalja össze (Nelson D.S., 1969). Tiszta kultúrában a makrofágokat először 1921-ben Carrel és Ebeling izolálta csirkevérből. Mivel a makrofágokon végzett számos vizsgálat az emberi fiziológiai és patológiai problémákhoz kapcsolódik, kívánatos, hogy ilyen vizsgálatokat végezzenek emberi vagy emlős makrofágok tenyészetén, bár az emlős makrofágok nem szaporodnak mesterséges tápközegen. A vér a makrofágok elérhető forrásaként szolgálhat, de a makrofágok hozama alacsony. A makrofágok legszélesebb körben használt forrása a peritoneális folyadék. Sok makrofágot tartalmaz, és általában mentes más sejtektől. Sok szabad makrofág van jelen a tüdőben (alveoláris makrofágok). Ezeket a nyúl alveolusaiból és légutakból történő mosással nyerik.

Az emberi kariotípus elemzése lehetetlen sejttenyészet alkalmazása nélkül. Ebből a célból vér limfocitákat, lépet, nyirokcsomókat, csontvelősejteket, humán fibroblasztokat és magzatvíz sejteket vizsgálnak. A limfociták mitózisának serkentésére fitohemagglutinint adnak a táptalajhoz. A sejtnövekedés 48-72 óráig tart. 4-6 órával a tenyésztés vége előtt kolchicint adunk a táptalajhoz, ami leállítja a sejtek osztódását a metafázisban, mert gátolja az orsó kialakulását. A kromoszómák jó eloszlása ​​érdekében a metafázisos lemezeken a sejteket hipotóniás nátrium-klorid-oldattal (0,17%) vagy más oldatokkal kezeljük.

Az elmúlt években a transzabdominális amniocentézissel nyert embrionális sejttenyészetet széles körben alkalmazták az embrió számos biokémiai és citogenetikai hibájának diagnosztizálására. Az amniocentézist 15-18 hét között végezzük. terhesség. A magzatvíz sejtpopulációja ebben az időszakban főként ektodermális eredetű hámló sejtekből áll: magzatvíz sejtekből, bőrhámból, valamint a verejték- és faggyúmirigyek hámjából, a szájüregből és részben az emésztőrendszerből és a húgyutakból, ill. az embrió más részei. 1956-ban jelentések jelentek meg a magzat kromoszómális nemének meghatározásáról a magzatvíz sejtjeiben található nemi kromatin vizsgálata alapján. 1963-ban Fuchs és Philip megszerezte a magzatvíz sejtkultúráját. Jelenleg számos módszert alkalmaznak a magzatvíz sejtkultúrák előállítására. Általában 10 ml folyékony mintát veszünk elemzésre, centrifugáljuk, a sejtüledéket újraszuszpendáljuk, és speciális tápközegben műanyag fiolákba vagy Petri-csészékbe oltjuk. A növekedés néhány nap múlva észrevehető. Az újraoltás után a 14–21. napon a sejtszuszpenziót használják metafázisos lemezek előállítására.

A molekuláris biológia, a molekuláris genetika és a géntechnológia modern ismereteinek nagy részét a mikroorganizmusok sejtkultúráinak tanulmányozása során nyertük. Ezt meghatározza, hogy a mikroorganizmusok és sejtvonalak viszonylag könnyen tenyészthetők, az új generáció létrehozásának folyamata több tíz perctől több óráig is tart a makroorganizmusokhoz képest, amelyek növekedése évekig, évtizedekig tart. Ugyanakkor a fejlődési forgatókönyvek hasonlóak minden zárt rendszerben fejlődő populációra.

sejttenyészetek

A sejttenyésztési technológia a sejtek élő szervezeteken kívüli termesztéséből áll.

Növényi sejtkultúrák

A növényi sejttenyészetek nemcsak a transzgénikus növények létrehozásának fontos lépései, hanem környezetbarát és gazdaságilag megvalósítható terápiás tulajdonságokkal rendelkező természetes termékek forrása, mint például a paklitaxel (paclitaxel), amelyet a tiszafa tartalmaz, és Taxol (Taxol) nevű kemoterápiás gyógyszerként állítják elő. A növényi sejttenyészeteket az élelmiszeripar által ízesítőként és színezékként használt anyagok előállítására is használják.

Rovarsejttenyészetek

A rovarsejtkultúrák tanulmányozása és alkalmazása kiterjeszti a rovarkártevőket elpusztító, de a jótékony hatású rovarok életképességét nem befolyásoló, és a környezetben sem felhalmozódó biológiai szerek ember általi fejlesztésének és felhasználásának lehetőségeit. Bár a kártevőirtás biológiai módszereinek előnyei régóta ismertek, az ilyen biológiailag aktív anyagok és kórokozók ipari mennyiségben történő előállítása a rovarok és mikroorganizmusok számára igen nehéz. A rovarsejtkultúrák használata teljesen megoldhatja ezt a problémát. Ezenkívül a növényi sejtekhez hasonlóan a rovarsejtek is felhasználhatók gyógyszerek szintetizálására. Ezt a perspektívát jelenleg aktívan vizsgálják. Emellett vizsgálják annak lehetőségét, hogy a rovarsejteket VLP-vakcinák (VLP - vírusszerű részecske - vírusszerű részecskék) előállítására használják fel olyan fertőző betegségek kezelésére, mint a SARS és az influenza. Ez a technika nagymértékben csökkentheti a költségeket és kiküszöbölheti a hagyományos csirketojás módszerrel kapcsolatos biztonsági aggályokat.

Emlős sejtkultúrák

Az emlős sejtkultúrák több mint egy évtizede az állattenyésztéssel foglalkozó szakemberek egyik fő eszköze. Laboratóriumi körülmények között a kiemelkedő minőségű tehenek tojásait az adott bikák spermiumával termékenyítik meg. Az így létrejött embriókat több napig kémcsőben növesztik, majd pótmama tehenek méhébe ültetik be. Ugyanez a technika az emberi in vitro megtermékenyítés alapja.

Jelenleg az emlős sejtkultúrák alkalmazása messze túlmutat a mesterséges megtermékenyítésen. Az emlőssejtek kiegészíthetik, és talán egy nap felválthatják az állatok felhasználását az új gyógyszerek biztonságosságának és hatékonyságának tesztelésére. Ezen túlmenően, csakúgy, mint a növényi és rovarsejtek, az emlőssejtek is felhasználhatók gyógyszerek szintetizálására, különösen egyes állati fehérjék előállítására, amelyek túl bonyolultak ahhoz, hogy genetikailag módosított mikroorganizmusok szintetizálják őket. Például a monoklonális antitesteket emlős sejttenyészetek szintetizálják.

A tudósok azt is fontolgatják, hogy emlőssejteket használnak fel vakcinák előállítására. 2005-ben az Egyesült Államok Egészségügyi és Humánszolgáltatási Minisztériuma 97 millió dolláros szerződést kötött a Sanofi Pasteurrel. A cég szakembereinek feladata az emlőssejtek tenyésztésére szolgáló módszerek kidolgozása az influenza elleni védőoltások kifejlesztésének felgyorsítása és ennek megfelelően az emberiség világjárványra való felkészültségének növelése érdekében.

Kultúra alapú terápiák felnőtt őssejtek egyes testszövetekben (csontvelő, zsírszövet, agy stb.) megtalálhatóak is hamarosan elfoglalják méltó helyüket a klinikai gyakorlatban. A kutatók azt találták, hogy az őssejteket a szervezet felhasználhatja a sérült szövetek helyreállítására. A felnőtt vérképző őssejteket régóta használják csontvelő-transzplantációként. Szükségesek minden típusú vérsejt érési és képződési folyamatainak helyreállításához. Ilyen sejteket nagy mennyiségben lehet nyerni köldökzsinórvérből, de izolálásuk meglehetősen bonyolult folyamat.

A kutatók jelenleg olyan módszereken dolgoznak, amelyek segítségével izolálhatják az őssejteket a méhlepényből és a zsírszövetből. Számos szakember foglalkozik a sejtek újraprogramozási módszereinek kifejlesztésével - a test érett sejtjeinek, például a bőrsejteknek a differenciálatlan állapotba való visszaállításával, és ezt követően stimulálják differenciálódásukat a kívánt típusú szövet sejtjeivé.

Embrionális őssejtek

Használat embrionális őssejtek számos betegség lehetséges terápiás módszerének is tekinthető. Ahogy a név is sugallja, a magzati sejteket embriókból nyerik, különösen azokból, amelyek petesejtekből fejlődnek ki, in vitro megtermékenyítik (in vitro fertilizációs klinikák), és a donorok beleegyezésével tudományos felhasználásra adományozzák a kutatóknak. Általában blasztocisztákat használnak - 4-5 napos embriókat, amelyek mikroszkóp alatt golyóknak tűnnek, és több száz sejtből állnak.

Az emberi embrionális őssejtek izolálásához a blasztociszta belső sejttömege tápanyagban gazdag táptalajba kerül, ahol a sejtek aktív osztódásnak indulnak. Néhány napon belül a sejtek befedik a tenyésztőlemez teljes felületét. Ezt követően a kutatók összegyűjtik az osztódó sejteket, részekre osztják és új lemezekre helyezik. A sejtek új lemezekbe történő mozgatásának folyamatát ún újravetésés sok hónapon keresztül sokszor megismételhető. A sejtpasszázs ciklust ún átjáró, átkelés. Azokat az embrionális őssejteket, amelyek hat vagy több hónapig léteznek tenyészetben differenciálódás nélkül (azaz pluripotensek maradnak - képesek a test bármely szövetének sejtjévé differenciálódni) és megtartják a normális génkészletet, az ún. embrionális őssejtvonal.

A tenyésztőlemez belső felületét gyakran olyan egérembriók bőrsejtjei borítják, amelyeket genetikailag úgy módosítottak, hogy nem osztódnak. Ezek a sejtek tápláló réteget képeznek - egy "tápanyag szubsztrátot", amelynek köszönhetően az embrionális sejtek a felülethez kapcsolódnak. A tudósok igyekeznek javítani a meglévő módszert, és kiküszöbölni az egérsejtek alkalmazásának szükségességét, mivel jelenlétük mindig azzal a kockázattal jár, hogy vírusrészecskék és egérfehérjék kerülnek be az emberi sejttenyészetbe, ami allergiás reakciót válthat ki.

Az őssejtterápia és a szövetsebészet maximális értéke akkor érhető el, ha a terápiás őssejtek és a belőlük növesztett szövetek genetikailag azonosak a befogadó sejteivel. Ezért, ha nem maga a beteg a forrásuk, akkor az őssejteket módosítani kell úgy, hogy genetikai anyagukat a recipiens génjeivel helyettesítik, és csak ezt követően kell meghatározott típusú sejtekké differenciálni. A genetikai anyag pótlására és az újraprogramozásra irányuló eljárás jelenleg csak embrionális őssejtekkel végezhető sikeresen.