A reakció kicsapódási reakciómechanizmusa eltér a reakcióétól. Kicsapási reakció (immunológiai módszer)
Egy oldható antigén és egy antitest kölcsönhatásából áll, amelyet egy finomszemcsés csapadék (csapadék) kicsapódása követ.
A precipitációs reakció lehetővé teszi egy ismeretlen antigén jelenlétének meghatározását a vizsgált anyagban ismert antitest hozzáadásával vagy egy ismert antigén – egy ismeretlen antitest – használatával. csapadék rosszabbul megy sók hiányában. A csapadékoptimum pH=7,0-7,4 tartományban van.
A kicsapódás mechanizmusa közel áll az agglutinációhoz. Az antigénnel reagáló immunrendszer hatására csökken annak diszperziója. A szérumnak és az antigénnek teljesen átlátszónak kell lennie. A precipitáció beállításakor az antigén különböző hígításai adhatók egy szérumhígításhoz, vagy fordítva.
A kicsapódást jobban rögzítik, ha az antigént a kémcsőben az antitestre helyezik. Ebben az esetben gyűrű alakú csapadék megjelenése figyelhető meg - gyűrűs csapadék. A gyűrűs kicsapást speciális, 2,5-3,5 mm átmérőjű kémcsövekben végzik. A vizsgált anyagban lévő antigének vagy a szérumban lévő különböző antitestek számának meghatározásához az agar kicsapási reakciót alkalmazzuk: 1%-os tisztított agart öntünk üveglapokra vagy üveglapokra. Az antigén- és antitest-oldatokat az agarban készített különböző üregekbe öntik, amelyek egymás felé diffundálva kicsapódási vonalakat képeznek. A precipitációs reakciót széles körben alkalmazzák a diagnózisban (lásd Ascoli reakció).
Az agarban történő kicsapás lehetővé teszi a diftéria tenyészetek toxicitásának meghatározását.
NÁL NÉL törvényszéki kutatás A precipitáció a vér, a szervek és a szövetek faji hovatartozásának megállapítását szolgálja specifikus kicsapó szérumok segítségével.
Kicsapódás - antigén (precipitinogén) és antitestek (precipitin) komplex kicsapódásának reakciója. A kicsapódás az egyik olyan immunológiai jelenség, amely lehetővé teszi az antitestek (lásd) meghatározását a betegek vagy oltott emberek vérszérumában, valamint az immunizált állatok vérében. Standard szérumok használata esetén a kicsapási reakciót különböző eredetű oldható antigének titrálására lehet használni (lásd).
A kicsapási reakció beállításának legegyszerűbb módja, hogy a tesztszérumot többszörös hígítások sorozatában állandó mennyiségű antigént tartalmazó kémcsősorozatba rétegezve adják hozzá. 30-60 perc után. szobahőmérsékleten inkubálva a két folyadék határán zavarossági gyűrűt alakítottunk ki - gyűrűs csapadék. Antiszérum titernek azt a minimális mennyiségű szérumot vesszük, amelyik kicsapódási reakciót vált ki. Ha a reakciót egy standard antiszérummal megfordítjuk, megbecsülhető az antigén relatív koncentrációja különböző biológiai folyadékokban.
Az antitestek és antigének fenti módszerrel történő titrálásának eredményei nem rendelkeznek abszolút mennyiségi expresszióval. Az antitestek mennyiségi meghatározására Heidelberger, Kabat (M. Heidelberger, E. Kabat) és mások kifejlesztettek. mennyiségi módszer precipitációs reakció, amely az úgynevezett ekvivalencia zóna kimutatásán alapul. Ha az életkornak megfelelő mennyiségű antigént állandó térfogatú antiszérummal keverjük össze, a képződött csapadék mennyisége kezdetben növekszik, majd ismét csökken, mivel az antigén-antitest komplex oldhatósága megnő az antigénfeleslegben. Ha minden kémcsőben meghatározzuk a felülúszó antitest-tartalmát, akkor kiderül, hogy egy sor középső kémcsövében vagy akár egyetlen kémcsőben nincs ellenanyag a felülúszóban; ugyanakkor itt képződik a legnagyobb csapadék. Mivel az ekvivalencia zónában a reaktánsok keverékébe bevitt teljes antigén is részt vesz a csapadékban, így az antigén fehérje csapadék fehérjemennyiségből való levonása után megkapjuk az adott térfogatú vizsgált szérum antitest-tartalmának pontos értékét. A lehűtött sóoldattal történő alapos mosás után a csapadék fehérjetartalmát nitrogénnel vagy valamilyen kolorimetriás módszerrel határozzuk meg.
A kiválási reakció értékének értékelésekor mint diagnosztikai módszer figyelembe kell venni, hogy olyan antitestek is jelen lehetnek az immunszérumban, amelyek nem rendelkeznek precipitin tulajdonságokkal, és ezért nem képeznek csapadékot, amikor kölcsönhatásba lépnek egy antigénnel. Ide tartoznak elsősorban a hiányos antitestek, valamint néhány más, a gamma-A globulinok csoportjába tartozó antitest.
Az antiszérum azon képessége, hogy kicsapja az antigént, rontható 65-70 °C-ra való melegítéssel, szerves oldószerekkel való kezeléssel, savas közegben való redukálással [Isliker (N. Isliker), A.Ya. Kuhlberg]. A tudatosan precipitint tartalmazó antiszérummal történő kicsapódás csak bizonyos hőmérsékleten, sók és hidrogénionok koncentrációja mellett lehetséges. A kicsapódási reakció leggyorsabban 25-37°-on megy végbe. A csapadék képződésének elengedhetetlen feltétele a nátrium-klorid izotóniás koncentrációjú jelenléte (0,85%-os NaCl-oldat). Ha a NaCl koncentrációját 15%-ra emeljük, a poliszacharid jellegű antigén által képződött csapadék részben feloldódik, amivel tiszta antitesteket lehet kivonni. A fehérje jellegű antigénekkel végzett precipitációs reakció 0,85%-ban és 15%-ban is azonos sebességgel és teljességgel megy végbe. NaCl oldatok. A hidrogénionok optimális koncentrációja a csapadékképződéshez 5,0 és 9,0 közötti pH-értékeknek felel meg.
A laboratóriumi gyakorlatban a kicsapási reakció különféle módosításait alkalmazzák. A termoprecipitációs reakciót különösen bakteriális antigének kimutatására használják. lépfene, botulizmus stb., amelyek nincsenek kitéve termikus denaturációnak (koktoantigének). Ez a reakció csak abban különbözik a gyűrűs kicsapási reakciótól, hogy a forralt vizsgálati anyag szűrletét használjuk antigénként (lásd az A reakciót).
Az antigének összetett keverékének kicsapási reakcióval történő elemzésekor lehetetlen jellemezni a keverék egyes komponenseinek tulajdonságait. A probléma megoldásához az agarban történő kicsapás és az immunelektroforézis módszereit kell alkalmazni. Az Ouchterlony (O. Ouchterlony) leggyakoribb változatában az agarban történő kicsapás módja azon alapul, hogy az antigén és az antiszérum, vékony agarrétegben egymás felé diffundálva, találkozásukkor kicsapódási vonalat alkotnak. Az ilyen vonalak számából meg lehet ítélni az antigének adott keverékében található komponensek számát. Az Ouhgerlonu-módszer lehetővé teszi a különböző antigénkeverékek összehasonlítását és a bennük lévő komponensek rokonsági fokának meghatározását. Az agarban azonos diffúziós sebességű anyagokat tartalmazó összetett antigénkeverék elemzésekor, nagy segítség hozhatja az immunelektroforézis módszerét. Az antigének keverékét elektromos térben előzetesen szétválasztják egy agarlemezen, majd előhívják. egyedi komponensek antiszérum. Az antiszérumot az agarban készített árokba vezetjük, párhuzamosan azzal a vonallal, amely mentén az antigének az elektroforézis során mozogtak. Mindegyik antigén egyedi kicsapási ívet ad az antiszérummal. Az immunelektroforézist széles körben használják elemzésre kóros rendellenességek szérumfehérjékben, valamint szöveti és bakteriális antigének immunológiai elemzésében.
Törvényszéki csapadék. A csapadékot a törvényszéki orvostudományban használják a vér fajtájának, a szervek és szövetek részeinek meghatározására. Számos nyomozati ügyben meg kell határozni a bűncselekmény eszközein, az elkövető, áldozat ruházatán stb. talált vér típusát. A kicsapási reakcióhoz nyulak, kakasok, kecskék immunizálásával nyert kicsapó szérumok különböző állatokból származó fehérjékkel. Általában olyan szérumokat készítenek, amelyek kicsapják az embert, lovat, macskát, csirkét, disznót, kutyát, marha. A titerüknek legalább 1:10 000-nek kell lennie, és kellően specifikusnak kell lennie. A vizsgált helyből vagy vérkéregből kivonatokat készítenek fiziológiás sóoldat, amelyeket azután kicsapó szérummal tesztelnek. A fehérje típusa akkor tekinthető megállapítottnak, ha az egyik kicsapó szérum a tesztvérből származó kivonattal csapadékot képez megfelelő kontroll reakcióval. A kicsapódási reakció meghatározhatja a fehérje típusát is az emberi vagy állati szövetekben és szervekben. A kicsapási reakciót jellemzően kúp alakú végű kémcsövekben hajtják végre. A zavaros kivonatok beérkezését követően a kicsapási reakciót agarban hajtjuk végre Ouchterlon szerint.
A precipitációs reakció (RP) egy oldható antigén kicsapódása antitestek hatására elektrolit jelenlétében. Látható reakcióhatás (csapadék jelenség) - zavarosság (zavaros gyűrű vagy üledék képződése - kicsapódik).
Az RP-t számos fertőző betegségben ismeretlen antigén kimutatására használják: lépfenével, tularémiával, agyhártyagyulladással, himlővel. A törvényszéki orvostanban a vér, a spermiumok fajának meghatározására használják; egészségügyi és higiéniai kutatásokban - hamisítás megállapítására élelmiszer termékek. Az RP nagyon más. nagy érzékenységés lehetővé teszi az antigén kimutatását 1: 1 000 000 és 1: 10 000 000 hígításban.
A kicsapódási reakció összetevői.
1. Antigén (precipitinogén) - ez egy antigén molekuláris természet, amely finoman diszpergált (oldható) állapotban van. A precipitinogén különféle szöveti lizátumok vagy kivonatok stb. A precipitogén az antigén részecskék méretében különbözik az agglutinogéntől. Agglutinogén Megvan sejtméretek(ezek nem elpusztult egész sejtek), hanem a méretek kicsapógén arányos molekulaméret(ezek fehérjék és szénhidrátokkal vagy lipidekkel alkotott komplexeik). Precipitinogén oldat átlátszó.
2. Antitestek (precipitin) megtalálhatók a humán szérumban vagy az immundiagnosztikai kiváltó szérumokban, amelyek ismert antitesteket tartalmaznak.
3. Elektrolit- izotóniás nátrium-klorid oldat.
Prepitinogén kinyerése.
Úgy nyerik, hogy az anyagot megőrlik, és fehérje antigéneket forralással vagy más módon extrahálnak belőle.
Példák a precipitingogénekre: lizátumok vagy kivonatok különféle testekés szövetek, idegen vérszérum (szérum megoldás, először is különféle fehérjék), mikrobák húsleves tenyészeteinek szűrletei, mikrobák sókivonatai, autolizátumok stb.
Kicsapódó szérum kinyerése.
Nyulak megfelelő precipitinogénekkel végzett hiperimmunizálásával nyertük. Az ilyen szérumok antitesteket tartalmaznak azon precipitinogénekkel szemben, amelyekkel a nyulakat immunizáltuk.
Példák a kicsapódó szérumokra: kicsapódó lépfene szérum (antrax antigének elleni antitesteket tartalmaz), kicsapó antimeningococcus szérum(az agyhártyagyulladás kórokozójának antigénjei elleni antitesteket tartalmaz) stb.
Titer kicsapó szérum a precipitinogén legmagasabb hígítása, amelynél a szérum még kicsapódási reakciót ad.
Az RP beállításának módjai.
1. Gyűrűs kicsapódási reakció - speciális kicsapócsövekben végezzük (átmérő - 0,4-0,5 cm, magasság - 7-8 cm). 0,2-0,3 ml kicsapó szérumot adunk a kémcsőbe, és egy Pasteur-pipetta hosszú orrával óvatosan a fal mentén rétegezzük ugyanennyi precipitinogént. Ezután óvatosan vízszintes helyzetből a csöveket függőlegesen helyezzük el.
A reakció eredményeinek elszámolása fehér gyűrű megjelenésével az antigén-antitest határán. Pozitív reakcióval olyan gyűrű figyelhető meg. Ebben az esetben az antigén megfelel az antitestnek, és megtörténik a kötődésük.
Ha a szervek és szövetek forralt és szűrt vizes kivonatait csapadékképző anyagként használjuk, akkor a reakciót reakciónak nevezzük. hőre melegedő csapadék (például lépfene diagnosztizálása során).
2. Kicsapódási reakció gélben - Petri-csészékben vagy tárgylemezeken végezzük, ahová egy réteg agargélt helyezünk. Amikor a gél megszilárdul, lyukakat vágnak ki belőle, amelyekbe antigéneket vagy antitesteket, vagy mindkettőt helyeznek. Megkülönböztetni 2 módszer RP gélben:
egy metódus egyszerű (radiális) immundiffúzió: az immunreakció egyik komponensét (antigén vagy antitest) a lyukba helyezzük, a másik komponenst agarral keverjük össze; nál nél pozitív eredmény (az antigén egy antitestnek felel meg) a lyuk körül képződik csapadékgyűrű ;
b) módszer kettős immundiffúzió: mind az antitest, mind az antigén külön lyukakba kerül, az agargélben egymás felé diffundálnak; pozitív eredménnyel ahol az antitestek és az antigének találkoznak csapadékvonalak .
Példa az RP-re egy gélben az Ouchterlony kettős immundiffúziós reakció a diftéria diagnózisában
Immunelektroforézis - ez egy olyan módszer, amely egyesíti az elektroforézis módszerét és a kicsapási reakciót. Az antigének keverékét (például szérumfehérjéket) elektroforézissel választják el a gélben. Ezután a kívánt fehérje (ismeretlen antigén) megtalálásához és meghatározásához egy diagnosztikai kicsapó szérumot használnak, amely e fehérje ellen antitesteket tartalmaz (ismert antitest). Ehhez diagnosztikai szérumot vezetnek be a barázdába a fehérjékkel párhuzamosan. Ha a fehérjék között van olyan, amely megfelel a szérumban lévő antitestnek, akkor körülötte képződik csapadékvonalak.
csapadék reakció- RP (tól lat. praeci-pito- csapadék,) egy oldható molekuláris antigén komplexének kialakulása és kicsapódása az antitestekkel zavarosság formájában, ún. kicsapódik. Antigének és antitestek egyenértékű mennyiségben történő összekeverésével jön létre; az egyik túllépése csökkenti az iskolai végzettséget immunkomplex. Az agglutinációs reakcióval ellentétben a precipitációs reakció antigénje oldható vegyületek, amelyek részecskéinek mérete megközelíti a molekulák méretét. Ezek lehetnek fehérjék, fehérjék szénhidrátokkal és lipidekkel alkotott komplexei, bakteriális kivonatok, mikrobiális táptalajtenyészetek különféle diszátumai vagy szűrletei. A precipitációs reakcióban részt vevő antitesteket precipitineknek nevezzük. Az így létrejövő finom antigén-antitest komplexet a precipitációs reakció szakaszának bizonyos módszereivel detektálják.
A gyűrűs kicsapási reakciót először Ascoli javasolta. Anthrax, pestis, tularémia, agyhártyagyulladás diagnosztizálására használják. A módszer egyszerű és hozzáférhető.
Egy specifikus immunkicsapó szérumot szűk kicsapócsövekbe öntünk, és az antigént nagyon óvatosan rétegezzük rá. Antigénként például lépfene diagnosztizálásánál bőrdarabkákat, gyapjút, elesett állat bőrét stb. vesznek, felforralják, a folyadékot leszűrik és antigénként használják fel. A gyűrű megjelenése - két folyadék határán csapadék - a megfelelő antigén jelenlétét jelzi.
Az agargél precipitációs reakció vagy diffúziós precipitációs módszer lehetővé teszi komplex vízoldható antigénkeverékek összetételének részletes tanulmányozását. A reakció beállításához gélt (félfolyékony vagy sűrűbb agart) használunk. Az antigént alkotó minden egyes komponens eltérő sebességgel diffundál a megfelelő antitest felé. Ezért különböző antigének komplexei és a megfelelő antitestek találhatók benne különböző területeken gél, ahol csapadékvonalak képződnek. Mindegyik vonal csak egy antigén-antitest komplexnek felel meg. A kicsapási reakciót általában szobahőmérsékletre állítjuk be.
Az immunelektroforézis módszere kapott széleskörű felhasználás ban ben utóbbi évek a mikrobák antigén szerkezetének vizsgálatában. Az antigének komplexét az agar-gél közepén található lyukba helyezzük, és a lemezre öntjük. Ezután az agargélen elektromos áramot vezetnek át, melynek eredményeként a komplexben lévő különféle antigének a mezőbe kerülnek. elektromos áram elektroforetikus mobilitásuktól függően. Az elektroforézis befejezése után specifikus immunszérumot vezetnek be a lemez széle mentén elhelyezkedő árokba, és egy nedves kamrába helyezik. Azokon a helyeken, ahol az antigén-antitest komplex képződik, kicsapódási vonalak jelennek meg.
Kicsapódási reakciók fel kémcsövekben (gyűrűs kicsapódási reakció), gélekben, tápközegben stb. Széles elosztás érkezett a kicsapási reakció fajtái félig folyékony agar- vagy agarózgélben: kettős immundiffúzió Ouchterlony szerint. radiális immundiffúzió, immunelektroforézis satöbbi
Radiális immundiffúziós reakció. Az olvadt agargéllel készült immunszérumot egyenletesen az üvegre öntjük. A gélben való megszilárdulás után lyukakat készítünk, amelyekbe az antigént különféle hígításokban helyezzük. Az antigén a gélbe diffundálva antitestekkel gyűrűs kicsapódási zónákat képez a lyukak körül (13.7. ábra). A kicsapógyűrű átmérője arányos az antigénkoncentrációval. A reakció segítségével meghatározzák a különböző osztályokba tartozó immunglobulinok vérszintjét, a komplementrendszer komponenseit stb.
Immunelektroforézis- az elektroforézis és az immunprecipitáció módszerének kombinációja: antigének keverékét vezetik be a gél üregeibe, és elektroforézissel elválasztják a gélben. Ezután az elektroforézis zónáival párhuzamosan a barázdába immunszérumot vezetnek be, amelynek antitestei a gélbe diffundálva a csapadékvonal antigénjével találkozási ponton képződnek.
Immun elektronmikroszkópia- megfelelő antitestekkel kezelt mikrobák, gyakrabban vírusok elektronmikroszkópos vizsgálata. Az immunszérummal kezelt vírusok immunaggregátumokat (mikroprecipitátumokat) képeznek. A virionok körül antitestek "korolla" képződik, szemben a foszfovolfrámsavval vagy más elektronoptikailag sűrű preparátumokkal.
123. Precipitációs reakció gélben a mikroorganizmusok toxicitásának meghatározására, mechanizmusa, kötésmódja.
Kicsapási reakció (RP)- ez egy oldható molekuláris antigén és az antitestek komplexének kialakulása és kicsapódása zavaros formában, amelyet csapadéknak neveznek. Antigének és antitestek egyenértékű mennyiségben történő összekeverésével jön létre; az egyik feleslege csökkenti az immunkomplex képződésének szintjét.
J. Oudin 1946-ban javasolta az egyszerű diffúziós módszert, amely szerint a kicsapási reakció egyik komponense, általában a szérum, a gélben van, a másikat - az antigént - pedig az elsőre rétegelik egy gél formájában. megoldás.
Az antigén a gélbe diffundálva fehér csapadékvonalakat képez benne az antitestekkel, amelyek oldalsó megvilágítás mellett jól láthatóak. 1948-ban J. Ouchterlonu kifejlesztett egy még egyszerűbb és kényelmesebb módszert a kétdimenziós ellendiffúzióra, amely lehetővé teszi a különböző antigének és szérumok közvetlen összehasonlítását. Ez a módszer a keresztreakciók vizsgálatában is nagyon értékes.
A reakció Ouchterlon szerinti beállításához fiziológiás sóoldatban készített 1%-os agart használunk, amelyet Petri-csészékbe öntünk, kerületükön 0,5 cm-es réteggel, a központtól 1-2 cm távolságra. A diagnosztikai kicsapó szérumot a központi üregbe öntjük, a perifériás üregekbe pedig a homológ és a vele összehasonlított antigének oldatát öntjük. Az eredményeket 24, 48 és 72 órás szobahőmérsékleten végzett inkubálás után rögzítjük.
Az antitestek és az antigének egymás felé diffundálnak, és azokon a területeken, ahol ekvivalens koncentrációjuk jön létre, íves kicsapódási sávok képződnek. Ha a két szomszédos üregből származó csapadéksávok összeolvadnak, ez több antigén komponens jelenlétét jelzi a tesztfolyadékban. Az Ouchterlohn szerinti ellendiffúziós reakciót gyakran használják baktériumok, például diftéria toxicitásának meghatározására.
A gélkicsapás módszerének további fejlesztése az immunelektroforézis. Ez a kifejezés olyan módszerre utal, amely kombinálja az antigének keverékének elektroforetikus elválasztását és az Ouchterlohn ellendiffúziót ugyanazon agar géllemezen. A kicsapódó szérumot ezután a gélben az elektroforetikus elválasztás irányával párhuzamosan kivágott horonyba öntik.
A reakció eredményeként kialakuló csapadékvonalak az antigénfrakciók elektroforetikus mozgása irányában megnyúlt ívek. Az immunelektroforézis lehetővé teszi az oldható antigének legfeljebb 30 komponenst tartalmazó komplex keverékeinek összetételének meghatározását, ezért értékes diagnosztikai módszer.
Csapadék reakció Az RP-t Ag (precipitinogén) oldatából kicsapódásnak nevezik, amikor immunszérumnak (precipitin) és elektrolitnak van kitéve.
Az RP segítségével egy antigén 1:100 000, sőt 1:1 000 000 hígításban is kimutatható, azaz olyan kis mennyiségben, amely kémiailag nem mutatható ki.
A precipitinogének a protein-PS természetes ultramikroszkópos részecskéi: mikronokból, szervekből és TC-ből származó kivonatok, patakanyag; baktériumsejt bomlástermékei, azok lizátumai, szűrletei. A csapadékanyagok termikusan stabilak, ezért ezek előállításához az anyagot forralják.
Az RP-ben folyékony átlátszó Ag-t használnak.
A kicsapódó szérumokat általában nyulak több hónapos ciklusokban történő hiperimmunizálásával állítják elő, baktériumszuszpenziókkal, táptalaj szűrletekkel, autolizátumokkal, mikroorganizmusok sókivonataival és tejsavófehérjékkel történő bejuttatásával.
Rendező: RP Ascoli. Egy keskeny kémcsőben kis mennyiségű hígítatlan kicsapó szérummal, ferde helyzetben tartva, pipettával lassan rétegezzük a fal mentén azonos mennyiségű Ag-t.
Annak érdekében, hogy a két folyadék ne keveredjen, a kémcsövet óvatosan függőlegesen helyezzük el. Pozitív reakció esetén a kémcsőben 5-10 perc múlva szürkésfehér gyűrű jelenik meg a szérum és a vizsgált kivonat határán. A reakciót szükségszerűen szérum- és antigénkontroll kíséri.
Az Ascoli reakciót lépfene, tularémia, pestis Ag azonosítására használják.
A törvényszéki orvostanban is alkalmazták egy fehérje fajtájának meghatározására, különösen a vérfoltokra, az egészségügyi gyakorlatban a hús, hal, lisztből készült termékek, szennyeződések a tejben. Ennek az RP-nek a hátránya a csapadék (gyűrű) instabilitása, amely enyhe rázással is eltűnik. Sőt, meghatározásra sem használható mennyiségi összetétel Ag részt vesz a csapadék képződésében.
Ouchterlony csapadékreakció. A reakciót Petri-csészékre visszük az agargél lyukaiba.
Gélként jól mosott átlátszó agart használnak. Ag és szérum kerül az agar gélbe úgy, hogy az ezeket tartalmazó lyukak bizonyos távolságra legyenek. Az antitest és az antigén egymás felé diffúzióval és egymással összekapcsolódva 24-48 óra alatt fehér sáv formájában immunkomplexet alkot.
Komplex precipitinogén jelenlétében több sáv jelenik meg. Ugyanakkor a szerológiailag rokon antigének sávjai összeolvadnak, a heterogének sávjai metszik egymást, ami lehetővé teszi a vizsgált anyagok antigénszerkezetének részleteit.
Széles körben használják exotoxinokat termelő vírusok és baktériumok által okozott betegségek diagnosztizálására.
3.Az indirekt hemagglutináció (RNGA) reakciója. Poliszacharidok, fehérjék, baktériumkivonatok, mikoplazmák, rickettsia és vírusok kimutatására szolgál, amelyeknek az agglutininekkel alkotott immunkomplexei nem láthatók a hagyományos klasszikus RA-ban, vagy antitestek kimutatására a betegek szérumában ezekkel az erősen diszpergált anyagokkal és a legkisebb mikroorganizmusokkal szemben. .
RNGA fertőző betegségek szerodiagnosztizálására. Az RNHA segítségével a betegek szérumában lévő antitestek kimutatására vörösvértest antigén diagnosztikát készítenek.
kicsapódási reakció.
Ehhez az eritrocitákat 15 percig 1:20 000–1:200 000 hígítású tanninoldattal kezelik, ami stabilitást és adszorpciós képességüket növeli. Ezután egy ismert antigénnel összekeverjük és 2 órán át 37°C-on inkubáljuk.Az antigénszenzitizált eritrocitákat 2-3-szor mossuk izotóniás nátrium-klorid oldattal, adjuk a szérumhoz, hígítjuk és a tartály üregeibe öntjük. panelek.
Kontrollként az ép és antigénnel teli eritrociták szuszpenziói szolgálnak, amelyeket a szérumokhoz adnak, amelyek nyilvánvalóan pozitív és negatív reakciókat adnak.
A reakció eredményeit a termosztátban történő inkubálás után 2 órával figyelembe veszik, és pluszpontokkal értékelik: "++++" - a vörösvértestek esernyő formájában borítják be a lyukat. szaggatott élek; "-" - eritrociták felhalmozódása "gomb" formájában
Kapcsolódó információ:
Keresés a webhelyen:
Gyűrűs kicsapódási reakció
A gyűrűs adhéziós reakció az egyik legegyszerűbb szerológiai módszerek. Keskeny kicsapócsövekben hajtják végre. Először az antigén több hígításban (1:2; 1:4; 1:8; 1:16) felvett tiszta oldatát egyformán öntjük az összes kémcsőbe.
Az antigének és antitestek összekapcsolódása a reagensek érintkezési határán történik. Ennek a kölcsönhatásnak az eredményeként pozitív esetekben (amikor az antigén megfelel az antitestnek) egy idő után opálos gyűrű formájában csapadék képződik.
Reakció található széles körű alkalmazás ban ben orvosi gyakorlat lépfene antigén kimutatására állatok gyapjújában, bőrében, húsában (Ascoli reakció); a fertőző betegségek egyéb kórokozóinak kimutatására a betegektől nyert kóros anyagokban vagy tárgyakban külső környezet, valamint benne igazságügyi orvosszakértői vizsgálat egy fehérje fajtájának meghatározására, különösen egy vérfehérjére vagy más biológiai folyadékokra.
Ouchterlony immundiffúzió
A kicsapási reakciót agargélen hajthatjuk végre.
A módszer azon alapszik, hogy az antigének és antitestek részecskéi eltérő méretükből adódóan különböző sebességgel diffundálnak a gélben, és ennek következtében különböző távolságokra mozognak. Ez lehetővé teszi az egyes antigénrendszerek szétválasztását, ha keverékben vannak, és ezáltal lehetővé teszi a baktériumok és komplex fehérjék, szérumok és állati szövetek antigénszerkezetének tanulmányozását.
Vizuális és hatékony módszer gélkicsapást Ouchterlony javasolta.
Petri-csészéken agarral kis lyukakat készítenek, egymástól bizonyos távolságra kivágva. Az egyikbe antigént, a többibe szérumot öntenek. A reakció komponensei a gélben diffundálnak egymás felé, és látható csapadékvonalat alkotnak, ahol az antigének találkoznak a rájuk specifikus antitestek optimális koncentrációjával. Mivel a reagensek koncentrikusan diffundálnak ki a lyukakból, több vizsgálat is elvégezhető úgy, hogy több mérőhelyet helyezünk el különböző antigénekkel (vagy ugyanazon antigén különböző hígításaival) egy antitestüreg köré.
Az Ouchterlony-reakció lehetővé teszi, hogy következtetést vonjunk le az antigén természetére egy ismert szérumból, és fordítva, egy ismert antigénből, meghatározzuk az antitestek természetét.
A módszer előnye, hogy lehetővé teszi a komplex keverékek antigén komponenseinek összehasonlítását, valamint közös vagy különbségük megítélését. Az antigének közös használatának összehasonlításához lyukakkal ellátott agart készítünk: az egyikbe antiszérumot öntünk, a többibe pedig az összehasonlítandó antigéneket. Ha az antigének eltérőek, akkor a kicsapódási sávok egyenlőtlenül helyezkednek el.
Immunelektroforézis
Az utóbbi években az immunelektroforézis módszerét alkalmazták finom immunológiai vizsgálatokhoz. A módszert először P.
Grabar és K. A. Williams 1953-ban. Ez üveglemezeken végzett agar-gél-elektroforézis kombinációja immundiffúzióval. Kezdetben az antigén elektroforetikus elválasztását hajtják végre, amely gyakran fehérje vagy más molekulák keveréke. Ehhez az antigént az agarban előre kivágott mélyedésbe vezetjük, és az agarlemezt egy ideig egyenáramú zónába helyezzük.
mert különböző sebességgel a molekulák mozgása az antigén szétválása alkotórészeire. Ezt követően a kicsapódó immunszérumot az áramáramlással párhuzamos irányban kivágott horonyba vezetjük.
Az antigén és az antiszérum egymás felé diffundál a gélben.
csapadék
Mindegyik antigén egy kicsapódási zónát ad ív formájában, a hozzá tartozó antitestekkel. E vonalak száma, helyzete és alakja képet ad az eredeti antigénkeverék összetételéről.
flokkulációs reakció
A módszert Ramon javasolta 1924-ben.
Ez azon a tényen alapul, hogy a toxin és az antitoxikus szérum keveréke bizonyos körülmények között zavarosságot és csapadékot okoz. Ebben az esetben a reakció korábban megy végbe azokban a kémcsövekben, ahol az antitoxin mennyisége megfelel annak a dózisnak, amely ezt a toxinmennyiséget teljesen semlegesíti.
Ezért, ha a toxin erőssége ismert, akkor az ismeretlen tesztszérum antitoxin mennyisége meghatározható. Ehhez a tesztszérumból több hígítást készítenek, minden hígításhoz azonos mennyiségű ismert toxint adnak, ami után megfigyelhető, hogy a kémcsövek közül melyik fog először flokkulálódni (az oldat zavarossága). Határozza meg a kezdeti flokkulációt. Ezután megtörténik a számítás.
Például meg kell határozni a diftéria elleni antitestek koncentrációját a vizsgált szérumban. A reakcióhoz diftéria toxint használnak, amely 1 ml-enként 50 Lf-t tartalmaz (Lf az a minimális toxinmennyiség, amelyet 1 antitoxikus egység (AU) antiszérum semlegesít.
Tételezzük fel, hogy a kezdeti pelyhesedés észlelhető egy kémcsőben, amely 0,2 ml ebből a szérumból és 2 ml ismert toxinból áll, amelynek aktivitása 100 Lf (50 Lf x 2).
Tehát 0,2 ml szérum semlegesítette ezt a toxint. Ezért 0,2 ml szérum 100 AU-t tartalmaz, és ennek a szérumnak 1 ml-ében az antitestek koncentrációja 500 AU-nak felel meg (100 AU x 5).
Hasonló módszerrel a flokkulációs reakció az ellenkező célra is használható - a toxoidok immunizáló tulajdonságainak meghatározására.
Ehhez szabványos antitoxikus szérumra van szükség.
Semlegesítési reakció
A reakciót élelmiszer-bakteriális mérgezés diagnosztizálására használják, hogy meghatározzák a vizsgált anyagban lévő bakteriális toxinokat. Ezenkívül a külső környezet egyes objektumainak tanulmányozásába is beilleszthető a tartalom szempontjából patogén baktériumok toxinokat termelnek, például amikor a talajt vizsgálják a tetanusz vagy a gáz gangréna kórokozóinak jelenlétére.
Ismeretes, hogy a homológ antitoxikus szérummal kevert toxin nem mutatja meg mérgező hatás ahogy a toxin semlegesül. A toxin és az antitoxin kölcsönhatásának reakciója általában szigorúan specifikus, ezért a toxin típusának meghatározásához szükséges semlegesítési reakció felállításához minden típusra specifikus diagnosztikai szérumra van szükség. és a toxin típusa. 2-3 és több antitoxikus szérum keveréke is használható egyidejűleg, ha várhatóan több toxin is jelen lesz a vizsgálati anyagban.
A semlegesítési reakció lehetővé teszi a kórokozó toxin típusának és típusának meghatározását.
A vizsgálati anyag lehet állítólag mérgezést okozó élelmiszer-szűrlet, edények mosogatása, ahol ezek a termékek találhatók, stb.
Megtörténik az állítólagos toxin előzetes semlegesítése. Ehhez egy antitoxikus diagnosztikai szérumot (a kívánt toxin elleni antitesteket tartalmaz) adnak a kémcsőbe a vizsgálati anyaggal együtt (kísérleti kémcső); azonos térfogatú fiziológiás sóoldatot adunk egy másik kémcsőbe (kontroll).
Rövid inkubáció után a kémcsövek tartalmát fehér egerek két csoportjába (kísérleti és kontroll) visszük.
A semlegesítési reakció eredményeit közvetlenül a kontroll állatok elhullása után vesszük figyelembe. Ebben az esetben a kapott állatok túlélési ténye antitoxikus szérum a vizsgálati anyaggal együtt a beinjektált szérumnak megfelelő toxin jelenlétét jelzi benne.
A semlegesítési reakció előnye a kapott eredmények nagy megbízhatósága.
Érzékenységében és válaszadási sebességében azonban elmarad néhány más kutatási módszertől.
A lízis reakciói
A lízis reakciókat általában a korpuszkuláris antigének feloldódásának nevezik az erre az antigénre specifikus antitestek hatására, komplement jelenlétében.
Tól től immunreakciók a baktériumok és más korpuszkuláris antigének lízisének jelensége alapján elsősorban bakteriolízis és hemolízis reakciókat alkalmaznak.
bakteriolízis reakció
A reakció mind in vitro, mind in vivo végbemegy. Ez utóbbi V.I. reakciójaként ismert. Isaev - Pfeiffer.
Ezek a tudósok kimutatták, hogy ha tengerimalacok kolera antigénekkel előimmunizált, akkor egy erősen virulens vibrio cholerae tenyészet hasüregébe történő bejuttatása nem okoz állatok fertőzését, mivel hasi üreg a kórokozó specifikus antitestek hatására feloldódik.
Később I.
I. Mechnikov bebizonyította, hogy a kolera vibrio hasonló feloldódása immunszérum hatására kémcsőben megy végbe, ha a fő komponensekhez friss szérumot, komplementforrást adnak. A baktériumok feloldódását specifikus antitestek hatására komplement jelenlétében bakteriolízis reakciónak nevezzük.
A bakteriolízis reakció beállításakor először a tesztszérum 10-szeres hígításainak sorozatát kell elkészíteni. Ezután minden kémcsőbe ugyanannyi (1-2 csepp) mikrobaszuszpenziót adunk. A keverékhez komplementet adunk. 37 °C-on történő inkubálás után a keveréket minden kémcsőből táptalajra oltjuk, hogy meghatározzuk az életképes baktériumok jelenlétét vagy hiányát.
A reakció felhasználható antitestek kimutatására egy ismert mikroorganizmus segítségével, vagy a mikrobák típusának meghatározására diagnosztikai immunszérum segítségével.
NÁL NÉL praktikus munka a bakteriológusok ritkán alkalmazzák ezt a reakciót, főként a kolera és a koleraszerű vibriók megkülönböztetésére.
Hemolízis reakció
A hemolízis mechanizmusa hasonló a bakteriolíziséhez.
A reakcióban használt eritrociták az antigén. Az antitestek forrása az anti-eritrocita szérum (például ha a reakcióban birka eritrocitákat használnak, akkor a szükséges szérumot specifikus anti-eritrocita antitestekkel birka eritrocitákkal immunizált nyulakból nyerik).
A tengerimalac vérszérumát leggyakrabban lízisreakciók komplementereként használják, mivel lényegesen több komplementet tartalmaz, mint más állatok szérumában.
Azokban az esetekben, amikor az antitestek komplement jelenlétében elpusztítják az eritrocitákat, hemoglobin szabadul fel belőlük, és az eritrociták zavaros szuszpenziójából származó reakcióelegy átlátszó vörös folyadékká (lakkvér) alakul.
Ezt a reakciót hemolízisnek nevezik. A laboratóriumi gyakorlatban a komplement adszorpció indikátoraként használják a komplementkötési reakcióban.
Kapcsolódó információ:
Keresés a webhelyen:
Előadásterv: Tantárgy és a mikrobiológia rövid fejlődéstörténete. A mikroorganizmusok általános tulajdonságai és helyzetük a természetben. csapadék reakció
Az állatorvosi mikrobiológia és feladatai
mir.zavantag.com > Biológia > Előadás
1 … 7 8 9 10 11 12 13 14 15
| ^
Az RA-t először M. Gruber fejlesztette ki 1896-ban. A reakció lényege az antitest és az antigén kölcsönhatása, ami a mikrobák összetapadását (agglutinációját) eredményezi, szabad szemmel látható pelyhek, csomók képződésével. Az RA-t széles körben használják szerológiai diagnózis sok bakteriális fertőzések(brucellózis, takonykór, szalmonellózis, colibacillózis stb.), valamint az izolált mikroorganizmusok fajainak és típusainak szerológiai azonosítására. Az RA beállítására többféle módszer létezik: kémcső (volumetriás), csepegtető (lemezes), vércsepp, gyűrűreakció tejjel, hemagglutinációs reakció és változatai (RHGA, RNHA), Coombs antiglobulin teszt stb. ^ – szérum helyett vért vesznek. Állítsa be a lemez reakcióját. Csirkék és pulykák pullorózisának, csirkék mikoplazmózisának diagnosztizálása. Coombs reakciója lehetővé teszi a nem teljes antitestek kimutatását. Ez utóbbiak egyértékűek, ezért gátolják az agglutinát képződését. A módszer antiglobulin szérum felhasználásán alapul, amely közvetítőként szolgál a corpuscularis antigéneken (eritrociták, baktériumok) rögzített hiányos antitestek összekapcsolásához. ^ - nem vonatkozik a szerológiai és diagnosztikailag pontos reakciókra, azonban lehetővé teszi az antigén - hemagglutinin kimutatását és a hemagglutináló tulajdonságok (a vörösvérsejtek agglutináló képességének) megállapítását egyes baktériumokban és mikoplazmákban. RNGA- az elmúlt években a szerodinamika egyik vezető helyét foglalta el. Lényege abban rejlik, hogy a megfelelő kórokozó vagy antitest antigénjének fehérjemolekulái előre adszorbeálódnak a tanninnal kezelt birka vagy más állat eritrocitáin. Ezután tegye a reakciót úgy, hogy az érzékenyített eritrocitákat összekeverjük beteg állatok vérszérumával, vagy a második esetben a vizsgált antigénnel. Szérum spec. Az antigén elleni antitestek (vagy fordítva) vörösvértest-agglutináció lép fel - a reakció pozitív. R. Kraus javasolta 1897-ben. A kicsapódás az antitest-precipitin és az antigén-precipitinogén kölcsönhatása során megfigyelhető jelenség. A reakció lényege, hogy az immunszérumban specifikus antitestek hatására megváltozik az antigén kolloidjainak diszperzitása és kicsapódása. Az RP kémcsövekbe helyezhető folyékony közegben (gyűrűs precipitációs reakció) vagy agargélben (lamelláris RDP). A gyűrűs kicsapódási reakciót először Ascoli (1910) javasolta, és a legszélesebb körben használják lépfene diagnosztizálására. Vezetéskor állatorvosi szakértelem Az RP egy módszer a hús, liszt és egyéb termékek hamisításának meghatározására. Különleges jelentés ennek a reakciónak igazságügyi orvosszakértői vizsgálata van a vér típusának meghatározásakor. A kicsapási reakció folyékony közegben történő alkalmazása azonban nem teszi lehetővé az antigének heterogenitásának jellemzését, pl. a készítményben lévő antigének száma és koncentrációja. Ezt az információt úgy kaphatjuk meg, hogy az RP-t gélbe (általában agarba) helyezzük. A gyógyszer különböző antigénjei mozgássebességgel eltérően diffundálnak, és az átlátszó gél vastagságában csapadékot képeznek azon a helyen, ahol a homológ antitesttel találkoznak. A precipitációs vonalak lokalizációja és koncentrációja az antigénkészítmény minden egyes komponensére jellemző lesz, amely minőségi kritériumként szolgál. A készítmény hígításával jellemezhető a benne lévő antigének relatív tartalma. Számos módszert dolgoztak ki az RDP beállítására: a közvetlen egydimenziós diffúzió módszere Uden (1946), az egyszerű radiális immundiffúzió módszere Mancini (1963), az agargélebe történő kettős diffúzió módszere Ouchterlony (1948) szerint. ), stb. ^
(RN) a modellen tetanusz toxinokés antitoxinok. Az RN lényege az immunszérum homológ antitesteinek azon képességében rejlik, hogy elnyomják (semlegesítik) a betegség kórokozójának vagy anyagcseretermékeinek fertőző tulajdonságait. Az antigén-antitest keverékével végzett reakció eredményének megállapítása laboratóriumi állatokat fertőz, CC, EC. Pozitív pH-mutató a biológiai tesztrendszerek pusztulásának hiánya. NÁL NÉL bakteriális gyakorlat Az RN-t anaerob enterotoxémia, botulizmus stb. diagnosztizálására használják. Az RN-t toxinok, toxoidok vagy antitoxinok kimutatására és titrálására végzik. Antitestek kimutatására vérszérumban és antigén kimutatására a vizsgált anyagban (brucellózis, takonykór, rickettsiosis, tuberkulózis stb. esetén). Ez a reakció a közvetett kétrendszerű reakcióhoz tartozik. 5 összetevője van:
A 3,4,5 komponensek alkotják a jelzőrendszert. Ha a vizsgált szérum antigénje és antitestje megfelel egymásnak egy másik, antigén-antitest immunkomplex keletkezik, amely megköti és kivonja a komplementet abból a környezetből, ahol a reakció végbemegy. Az antigénnek megfelelő antitestek hiányában a vizsgált szérumban a meghatározott komplex nem képződik - a komplement szabad marad. Mivel ezek láthatatlan folyamatok, annak a kérdésnek a megoldására, hogy mi történt a komplementtel, a hemolitikus rendszer komponenseit indikátorként vezetik be a kémcsőbe - hemolitikus szérum + eritrociták. Ha a komplement kötődik a bakteriológiai rendszerhez, az eritrociták hemolízise nem következik be, az eredmény pozitív - a szérum antitesteket tartalmaz. A hemolízis jelenléte a szabad komplement jelenlétének indikátoraként szolgál a bakteriológiai rendszerben, ami csak akkor lehetséges, ha a tesztszérumban nincsenek antitestek - az eredmény negatív. Az RSC szigorúan működik mennyiségi arányok alkatrészek. Ezt előzetes titrálással érik el (a komplement és a hemolitikus szérum titrálása a reakció napján történik; a mikrobiális antigén - 2-3 hónapon belül egyszer). A titrálás az egyik vagy másik komponens legkisebb mennyiségének meghatározása a reakcióban a reakció végrehajtásához, a felesleg vagy hiány az eredmények torzulását jelenti. Az RDSC a CSC egy változata, de abban különbözik, hogy a reakció első fázisa 16-18 órán át tart hidegben (40 C), ami növeli az érzékenységet az antigén-antitest komplex hosszabb komplement adszorpciója miatt. |
7 8 9 10 11 12 13 14 15
Hasonló:
| A "környezeti mikrobiológia" meghatározása Általános mikrobiológia, a mikroorganizmusok egymás közötti kapcsolatának vizsgálata a külső környezet tárgyaival és a makroorganizmussal |
A legáltalánosabb és legalapvetőbb fogalmak, amelyek tükrözik a lényeges, ... A filozófia egy tudomány, amely a legtöbbet tanulmányozza Általános rendelkezések az emberről, a természetről és a tudásról |
||
| Terv A "Nemzetközi gazdasági kapcsolatok" tudományág tárgya és módszere ... A "Nemzetközi gazdasági kapcsolatok" tudományág tárgya és módszere, valamint a nemzetközi gazdasági kapcsolatok fejlődéstörténete |
Kérdések a "jogi pszichológia" kurzus vizsgájához hallgatóknak ... A jogpszichológia fogalma. A jogpszichológia tárgya, feladatai, fejlődéstörténete |
||
| 1. A politikai és jogi doktrínák történetének tárgya és módszere > Tárgy ... Ez annak köszönhető, hogy e jogi diszciplína keretein belül egy konkrét témát kutatnak és foglalkoznak - a ... |
1.
A filozófia mint tudomány története. Tárgya és módszere |
||
| A Kazah Köztársaság Oktatási és Tudományos Minisztériuma Diákszövetség… Jelen szabályzat az „Év Diákja-2011” köztársasági versenyről (a továbbiakban: verseny) meghatározza annak céljait és célkitűzéseit, a résztvevők ... |
A "mikrobiológia" és a "mikroorganizmus" fogalmak meghatározása … |
||
| Kérdések a tesztre való felkészüléshez a "konfliktusológia" tudományágban A konfliktustan, mint tudomány: tárgy, célok, célkitűzések, aktuális problémák, jelentősége jelenlegi szakaszában a társadalom fejlődése |
A videoklipek regionális versenyéről "k-roly-k!" Általános rendelkezések Jelen Szabályzat határozza meg a Verseny céljait, célkitűzéseit, alapelveit, lebonyolításának és lebonyolításának rendjét, a részvétel és a döntés rendjét ... |
Adjon hozzá egy gombot a webhelyéhez:
iskolai anyagok
www.mir.zavantag.com
csapadék reakció
A kicsapódás és az agglutináció meglehetősen hasonló reakciók, amelyek főként az alapján különböznek egymástól fizikai tulajdonságok AG.
Az első esetben oldható, a második esetben - korpuszkuláris formában. Az RP azon alapul, hogy az AG-AT reakció során csapadék képződik. Az RP nagyon specifikus és érzékeny.
A reakció összetevői:
1. oldható antigén vagy haptén (precipitogén);
2. AT - precipitinek (immunkicsapó szérum; nyulak megfelelő antigénoldatokkal történő immunizálásával nyerik);
csapadék reakció
izotóniás nátrium-klorid-oldat vagy agargél.
RP beállítási módszerek:
1) RP oldatokban - r.
gyűrűs csapadék;
2) RP gélben.
A gyűrűs kicsapási reakciót keskeny kicsapócsövekbe helyezzük, amelyekbe kicsapó szérumot öntünk.
Ezután öntsük a precipitinogén oldatot. Pozitív reakció esetén az összetevők határfelületén egy zavaros csapadékgyűrű jelenik meg, erre az RP beállítási módszerre példa az Ascoli termoprecipitációs reakció, amely az anthrax kórokozójának állati szervekből kivont hőstabil hapténjének kimutatására szolgál, bőr és gyapjú forralás közbeni extrakcióval. A gélben lévő RP egyik fajtája (Ouchterlony-reakció) lehetővé teszi a toxicitás meghatározását diftéria bacillus antitoxikus szérummal.
Petri-csészében azzal tápközeg helyezzünk rá egy antitoxikus diftériaszérummal impregnált szűrőpapírcsíkot, és a papírcsíkra merőleges vonások formájában oltsuk be a vizsgált tenyészetekkel. 37 PS-en inkubált napközben. Toxigén tenyészet jelenlétében a toxin és az antitoxin kölcsönhatásának helyén precipitációs vonalak képződnek A gélben zajló precipitációs reakciót immundiffúziónak nevezzük.
Gyakran forézissel gélben - immunelektroforézissel. A módszer elve: a vizsgált antigént elektroforetikusan frakcionáljuk. a kapott frakciókat kettős diffúziós módszerrel elemezzük, antiszérum felhasználásával.
Az Ascoli-reakciót a lépfene diagnosztizálására használják a lépfene bacilusok antigénjének kimutatása érdekében. A kicsapódási reakció beállításához a következőkkel kell rendelkeznie: precipitinogén - haptén B.
Antrachis (szöveti kivonat), precipitin (anthrax-kicsapó szérum) és sóoldat.
Termoprecipitinogén előállítása.
1. Öntsön 10 ml fiziológiás sóoldatot egy 1 g zúzott bőrt vagy 1 ml B. anthracis tenyészetet tartalmazó lombikba.
2. Tegye a lombikot forrásban lévő fürdőbe 30-45 percre.
3. Szűrje át azbesztet. A szűrletnek teljesen tisztának kell lennie. A kicsapási reakcióhoz a szűrletet legalább 100-szorosra hígítjuk.
A gyűrűs kicsapódási reakció beállítása.
1) 0,3 ml teljes kicsapó szérumot vagy 1:5, 1:10 arányban hígítva öntünk a kicsapócsőbe.
2) A cső falára óvatosan egy precipitinogént rétegezünk, amely akkor tekinthető pozitívnak, ha legkésőbb 5-15 percen belül két folyadék határán a kicsapódott fehérje zavaros gyűrűje képződik.
A kicsapási reakció beállításakor a következő vezérlőket kell használni:
a) antigén és sóoldat;
b) specifikus szérum és fizikai.
c) antigén és nem specifikus szérum.
Ne legyen zavaros minden kontrollcsőben A kicsapási reakcióhoz speciális, 40-60 mm magas és 4-5 mm átmérőjű lecsapó csöveket használnak, a keskeny csövekben a kicsapódás sokkal gyorsabban megy végbe és világosabban nyilvánul meg, mint a közönséges kémcsövekben , alaposan megmossuk és megszárítjuk, hogy üvegük teljesen átlátszó és száraz legyen.
A precipitációs reakció során egy specifikus immunkomplex válik ki, amely egy oldható antigénből (lizátum, kivonat, haptén) és egy specifikus antitestből áll elektrolitok jelenlétében.
A reakció eredményeként keletkező zavaros gyűrűt vagy csapadékot ún kicsapódik. Ez a reakció elsősorban az antigén részecskék méretében tér el az agglutinációs reakciótól.
A precipitációs reakciót általában az antigén meghatározására használják számos fertőzés (antrax, agyhártyagyulladás stb.) diagnózisában; az igazságügyi orvostanban - a vér, a sperma stb. fajtájának meghatározására; egészségügyi és higiéniai vizsgálatokban - a termékek hamisításának megállapítása során; segítségével meghatározza az állatok és növények filogenetikai kapcsolatát. A reakcióhoz szüksége van:
1. Antitestek (precipitinek) - immunszérum magas antitesttiterrel (nem alacsonyabb, mint 1:100 000). A kicsapódó szérum titerét annak az antigénnek a legmagasabb hígítása határozza meg, amellyel reagál. A szérumot általában hígítatlanul vagy hígítva használják 1:5 -1:10.
2. Antigén - fehérje vagy lipoid poliszacharid jellegű oldott anyagok (komplett antigének és haptének).
3. Izotóniás oldat.
A kicsapási reakció végrehajtásának fő módszerei a következők: gyűrűs kicsapási reakció és agar (gél) precipitációs reakció.
Figyelem! A kicsapási reakcióban részt vevő összes komponensnek teljesen átlátszónak kell lennie.
Gyűrűs kicsapódási reakció. 0,2-0,3 ml (5-6 csepp) szérumot adunk a kicsapócsőbe Pasteur pipettával (a szérum nem eshet a cső falára). Az antigént óvatosan rétegezzük a szérumra ugyanabban a térfogatban, vékony Pasteur pipettával a kémcső falára öntjük. A kémcsövet ferde helyzetben tartják. Megfelelő rétegezéssel egyértelmű határvonalat kell elérni a szérum és az antigén között. Óvatosan, hogy a folyadék ne keveredjen, helyezze a kémcsövet állványba. A reakció pozitív eredményével az antigén és az antitest határán zavaros „gyűrű” képződik - csapadék.
Kicsapódási reakció agarban(gél). A reakció sajátossága, hogy az antigén és az antitest kölcsönhatása sűrű közegben, azaz gél. A kapott csapadék a közeg vastagságában zavaros sávot ad. A sáv hiánya a reakciókomponensek közötti eltérést jelez. Ezt a reakciót széles körben alkalmazzák az orvosbiológiai kutatásokban, különösen a diftériát okozó toxinok képződésének vizsgálatában.
Lizis reakció (immun citolízis)
immun lízis- ez a sejtek feloldása antitestek hatására a komplement kötelező részvételével. A reakcióhoz szüksége van:
1. Antigén mikrobák, eritrociták vagy más sejtek.
2. Ellenanyag(lizin) - immunszérum, ritkán a beteg széruma. A bakteriolitikus szérum a baktériumok lízisében részt vevő antitesteket tartalmaz; hemolitikus - hemolizinek, amelyek hozzájárulnak a vörösvértestek líziséhez; a spirocheták líziséhez spirochetolizinek, sejtek - itolizinek stb.
3. Kiegészítés. A legtöbb komplement a tengerimalacok szérumában. Ezt a szérumot (több állatból származó keverék) általában kiegészítőként használják.
4. Izotóniás oldat.
kicsapódási reakció.
| Paraméter neve | Jelentése |
| Cikk tárgya: | kicsapódási reakció. |
| Rubrika (tematikus kategória) | Oktatás |
Precipitációs reakció (RP) - ϶ᴛᴏ oldható antigén kicsapása antitestek hatására elektrolit jelenlétében. Látható reakcióhatás (csapadék jelenség) - zavarosság (zavaros gyűrű vagy üledék képződése - kicsapódik).
Az RP-t számos esetben ismeretlen antigén kimutatására használják fertőző betegségek: lépfenével, tularémiával, agyhártyagyulladással, himlővel. A törvényszéki orvostanban a vér, sperma típusának meghatározására használják; egészségügyi és higiéniai kutatásokban - élelmiszerek hamisításának megállapítására. Az RP nagyon érzékeny, és képes kimutatni az antigént 1:1 000 000 és 1:10 000 000 hígításokban.
A kicsapódási reakció összetevői.
1. Antigén (precipitinogén) - ez egy molekuláris jellegű antigén, amely finoman diszpergált (oldható) állapotban van. Precipitinogén anyagok - ϶ᴛᴏ különféle lizátumok vagy szövetkivonatok stb.
Házigazda: ref.rf
A precipitinogén az agglutinogéntől az antigénrészecskék méretében különbözik. Agglutinogén Megvan sejtméretek(ezek nem elpusztult egész sejtek), hanem a méretek kicsapógén arányos molekulaméret(ezek fehérjék és szénhidrátokkal vagy lipidekkel alkotott komplexeik). Precipitinogén oldat átlátszó.
2. Antitestek (precipitin) megtalálhatók a humán szérumban vagy az immundiagnosztikai kiváltó szérumokban, amelyek ismert antitesteket tartalmaznak.
3. Elektrolit- izotóniás nátrium-klorid oldat.
Prepitinogén kinyerése.
Úgy nyerik, hogy az anyagot megőrlik, és fehérje antigéneket forralással vagy más módon extrahálnak belőle.
Példák a precipitingogénekre: különböző szervek és szövetek lizátumai vagy kivonatai, idegen vérszérum (szérum megoldás, először is különféle fehérjék), mikrobák húsleves tenyészeteinek szűrletei, mikrobák sókivonatai, autolizátumok stb.
Kicsapódó szérum kinyerése.
Nyulak megfelelő precipitinogénekkel végzett hiperimmunizálásával nyertük. Az ilyen szérumok antitesteket tartalmaznak azon precipitinogénekkel szemben, amelyekkel a nyulakat immunizáltuk.
Példák a kicsapódó szérumokra: kicsapó lépfene szérum(antrax antigének elleni antitesteket tartalmaz), kicsapó antimeningococcus szérum(az agyhártyagyulladás kórokozójának antigénjei elleni antitesteket tartalmaz) stb.
Titer kicsapó szérum - ϶ᴛᴏ a precipitinogén legmagasabb hígítása, amelynél a szérum még kicsapódási reakciót ad.
Az RP beállításának módjai.
1. Gyűrűs kicsapódási reakció - speciális kicsapócsövekben végezzük (átmérő - 0,4-0,5 cm, magasság - 7-8 cm). 0,2-0,3 ml kicsapó szérumot adunk a kémcsőbe, és egy Pasteur-pipetta hosszú orrával óvatosan a fal mentén rétegezzük ugyanennyi precipitinogént. Ezután óvatosan vízszintes helyzetben a csöveket függőlegesen helyezzük el.
A reakció eredményeinek elszámolása fehér gyűrű megjelenésével az antigén-antitest határán. Pozitív reakcióval olyan gyűrű figyelhető meg. Ebben az esetben az antigén megfelel az antitestnek, és megtörténik a kötődésük.
Ha felforraljuk és leszűrjük vizes kivonatok szervek és szövetek, akkor a reakciót általában reakciónak nevezik hőre melegedő csapadék (például lépfene diagnosztizálásánál).
2. Gél kicsapódási reakció - Petri-csészékben vagy tárgylemezeken végezzük, ahová egy réteg agargélt helyezünk. Amikor a gél megszilárdul, lyukakat vágnak ki belőle, amelyekbe antigéneket vagy antitesteket, vagy mindkettőt helyeznek. Megkülönböztetni 2 módszer RP gélben:
egy metódus egyszerű (radiális) immundiffúzió: az immunreakció egyik komponensét (antigén vagy antitest) a lyukba helyezzük, a másik komponenst agarral keverjük össze; pozitív eredménnyel (az antigén egy antitestnek felel meg) a lyuk körül képződik csapadékgyűrű ;
b) módszer kettős immundiffúzió: mind az antitest, mind az antigén külön lyukakba kerül, az agargélben egymás felé diffundálnak; pozitív eredménnyel ahol az antitestek és az antigének találkoznak csapadékvonalak.
Példa az RP-re gélben az Ouchterlony kettős immundiffúziós reakció a diftéria diagnózisában
Immunelektroforézis - ez egy olyan módszer, amely egyesíti az elektroforézis módszerét és a kicsapási reakciót. Az antigének keverékét (például vérszérumfehérjéket) elektroforézissel gélben választják el. Ezután a kívánt fehérje (ismeretlen antigén) megtalálásához és meghatározásához egy diagnosztikai kicsapó szérumot használnak, amely e fehérje ellen antitesteket tartalmaz (ismert antitest). Ehhez diagnosztikai szérumot vezetnek be a barázdába a fehérjékkel párhuzamosan. Ha a fehérjék között van olyan, amely megfelel a szérumban lévő antitestnek, akkor körülötte képződik csapadékvonalak.
kicsapódási reakció. - koncepció és típusok. A "Csapadékreakció" kategória osztályozása és jellemzői. 2017, 2018.
