गलत नकारात्मक परीक्षण - अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण। कॉम्ब्स परीक्षण: प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष

- एक एंटीग्लोबुलिन परीक्षण जिसका उद्देश्य आरएच-नकारात्मक रक्त में आरएच कारक के लिए अपूर्ण एंटी-एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी की पहचान करना है - एक विशिष्ट प्रोटीन जो आरएच-पॉजिटिव रक्त के एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर स्थित होता है। ये दो प्रकार के होते हैं इस प्रयोग: प्रत्यक्ष - लाल रक्त कोशिकाओं की सतह पर एंटीबॉडी का पता लगाना, अप्रत्यक्ष - रक्त सीरम में एंटीबॉडी का पता लगाना। रक्त रोगों के निदान और उपचार की निगरानी में प्रत्यक्ष परीक्षण किया जाता है: हीमोलिटिक अरक्तता, हेमोलिटिक रोगनवजात शिशु और अन्य। आधान के दौरान दाता और प्राप्तकर्ता के रक्त की अनुकूलता का आकलन करने के साथ-साथ गर्भावस्था की योजना और प्रबंधन करते समय आरएच संघर्ष की उपस्थिति और जोखिम का निर्धारण करने के लिए एक अप्रत्यक्ष परीक्षण किया जाता है। कॉम्ब्स परीक्षण के लिए सामग्री है ऑक्सीजन - रहित खून, अध्ययन एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया पर आधारित विधियों का उपयोग करके किया जाता है। आम तौर पर दोनों टेस्ट देते हैं नकारात्मक परिणाम. विश्लेषण एक दिन के भीतर पूरा हो जाता है। मॉस्को में कुल मिलाकर 87 पते मिले जहां यह विश्लेषण किया जा सकता था।

- एक एंटीग्लोबुलिन परीक्षण जिसका उद्देश्य आरएच-नकारात्मक रक्त में आरएच कारक के लिए अपूर्ण एंटी-एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी की पहचान करना है - एक विशिष्ट प्रोटीन जो आरएच-पॉजिटिव रक्त के एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर स्थित होता है। इस परीक्षण के दो प्रकार हैं: प्रत्यक्ष - लाल रक्त कोशिकाओं की सतह पर एंटीबॉडी का पता लगाना, अप्रत्यक्ष - रक्त सीरम में एंटीबॉडी का पता लगाना। रक्त रोगों के उपचार के निदान और निगरानी में प्रत्यक्ष परीक्षण किया जाता है: हेमोलिटिक एनीमिया, नवजात शिशुओं के हेमोलिटिक रोग और अन्य। आधान के दौरान दाता और प्राप्तकर्ता के रक्त की अनुकूलता का आकलन करने के साथ-साथ गर्भावस्था की योजना और प्रबंधन करते समय आरएच संघर्ष की उपस्थिति और जोखिम का निर्धारण करने के लिए एक अप्रत्यक्ष परीक्षण किया जाता है। कॉम्ब्स परीक्षण के लिए सामग्री शिरापरक रक्त है; अध्ययन एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया के आधार पर तरीकों का उपयोग करके किया जाता है। आम तौर पर, दोनों परीक्षण नकारात्मक परिणाम देते हैं। विश्लेषण एक दिन के भीतर पूरा हो जाता है।

कॉम्ब्स परीक्षण - नैदानिक ​​परीक्षण Rh-नकारात्मक रक्त, जिसका उद्देश्य Rh कारक के प्रति एंटीबॉडी का पता लगाना है। परीक्षण का उपयोग आरएच संघर्ष और हेमोलिटिक प्रतिक्रियाओं के विकास के जोखिम की पहचान करने के लिए किया जाता है। प्रत्येक व्यक्ति में, लाल रक्त कोशिकाओं की सतह में एंटीजन या एग्लूटीनोजेन - यौगिकों का एक निश्चित सेट होता है भिन्न प्रकृति का, जिसकी उपस्थिति या अनुपस्थिति से रक्त प्रकार और Rh कारक का आकलन किया जाता है। एंटीजन सहित कई प्रकार के होते हैं मेडिकल अभ्यास करनामहानतम व्यवहारिक महत्वएग्लूटीनोजेन ए और बी होते हैं, जो रक्त समूह निर्धारित करते हैं, और एग्लूटीनोजेन डी, जो आरएच कारक निर्धारित करते हैं। पर सकारात्मक Rh कारकडी एंटीजन एरिथ्रोसाइट्स की बाहरी झिल्ली पर पाए जाते हैं, लेकिन यदि वे नकारात्मक हैं तो नहीं।

कॉम्ब्स परीक्षण, जिसे एंटीग्लोबुलिन परीक्षण भी कहा जाता है, का उद्देश्य रक्त में आरएच कारक प्रणाली में अपूर्ण एंटी-एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी का पता लगाना है। Rh कारक के प्रति एंटीबॉडी - विशिष्ट इम्युनोग्लोबुलिन, जो आरएच-नकारात्मक रक्त में उत्पन्न होते हैं जब एग्लूटीनोजेन डी के साथ एरिथ्रोसाइट्स इसमें प्रवेश करते हैं। यह तब हो सकता है जब भ्रूण और गर्भवती महिला का रक्त मिश्रित होता है, पूर्व रक्त टाइपिंग के बिना किए गए रक्त संक्रमण के दौरान। कॉम्ब्स परीक्षण दो संस्करणों में मौजूद है - प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष। प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण करते समय, लाल रक्त कोशिकाओं की सतह से जुड़ी एंटीबॉडी का पता लगाया जाता है। अध्ययन का उपयोग हेमोलिटिक प्रतिक्रिया का कारण निर्धारित करने के लिए किया जाता है। अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण का उद्देश्य रक्त प्लाज्मा में एंटी-एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी का पता लगाना है। दाता और प्राप्तकर्ता या मां और भ्रूण के बीच रक्त की अनुकूलता निर्धारित करना आवश्यक है, और आरएच संघर्ष के विकास और बाद में लाल रक्त कोशिकाओं के हेमोलिसिस को रोकने में मदद करता है।

कॉम्ब्स परीक्षण के दोनों संस्करणों के लिए रक्त एक नस से लिया जाता है। विश्लेषण एंटीग्लोबुलिन सीरम का उपयोग करके एग्लूटिनेशन द्वारा किया जाता है। अध्ययन के परिणामों का उपयोग हेमटोलॉजी में हेमोलिटिक प्रतिक्रियाओं के कारणों की पहचान करने के लिए, सर्जरी और पुनर्जीवन में रक्त आधान करते समय, प्रसूति और स्त्री रोग में आरएच-नकारात्मक रक्त वाली महिलाओं में गर्भधारण की निगरानी के लिए किया जाता है।

संकेत

प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण, जो लाल रक्त कोशिकाओं की सतह से जुड़ी एंटीबॉडी का पता लगाता है, हेमोलिटिक प्रतिक्रियाओं (लाल रक्त कोशिकाओं का विनाश) के लिए निर्धारित है। विभिन्न मूल के. अध्ययन प्राथमिक ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया, पोस्ट-ट्रांसफ्यूजन हेमोलिटिक एनीमिया, नवजात शिशु के हेमोलिटिक रोग, ऑटोइम्यून, ट्यूमर या संक्रामक रोगों के कारण होने वाले एरिथ्रोसाइट्स के हेमोलिसिस के साथ-साथ लेने के लिए संकेत दिया गया है। दवाइयाँ, उदाहरण के लिए, क्विनिडाइन, मेथिल्डोपा, प्रोकेनामाइड। अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण, जो रक्त प्लाज्मा में एंटीबॉडी निर्धारित करता है, का उपयोग आरएच संघर्ष के विकास को रोकने के लिए किया जाता है। यह रक्त आधान की तैयारी कर रहे रोगियों के साथ-साथ गर्भवती महिलाओं के लिए भी संकेत दिया गया है नकारात्मक Rh कारकउसे उपलब्ध कराया भावी पिताबच्चे का Rh कारक सकारात्मक है।

Rh अनुकूलता निर्धारित करने के लिए, Rh-पॉजिटिव रक्त वाले रोगियों को कॉम्ब्स परीक्षण निर्धारित नहीं किया जाता है। इन मामलों में, लाल रक्त कोशिकाओं की सतह पर पहले से ही एंटीजन मौजूद होते हैं; एंटीबॉडी का उत्पादन रक्त आधान या गर्भवती महिला के रक्तप्रवाह में भ्रूण के रक्त के प्रवेश से शुरू नहीं किया जा सकता है। इसके अलावा, गर्भवती महिलाओं के लिए अध्ययन का संकेत नहीं दिया गया है यदि माता-पिता दोनों के पास नकारात्मक आरएच कारक है - एक विरासत में मिला अप्रभावी लक्षण। ऐसे जोड़ों में एक बच्चा हमेशा होता है Rh नकारात्मक रक्त, माँ के साथ प्रतिरक्षात्मक संघर्ष असंभव है। पर हेमोलिटिक विकृति विज्ञानएंटीग्लोबुलिन परीक्षण का उपयोग चिकित्सा की सफलता की निगरानी के लिए नहीं किया जाता है, क्योंकि परिणाम लाल रक्त कोशिकाओं के विनाश की प्रक्रिया की गतिविधि को प्रतिबिंबित नहीं करते हैं।

कॉम्ब्स परीक्षण की एक सीमा अनुसंधान प्रक्रिया की जटिलता है - प्राप्त करना विश्वसनीय परिणामतापमान और समय की स्थिति, अभिकर्मकों और बायोमटेरियल की तैयारी के नियमों का पालन करना आवश्यक है। कॉम्ब्स परीक्षण के फायदों में यह भी शामिल है उच्च संवेदनशील. हेमोलिटिक एनीमिया में, इस परीक्षण के परिणाम सकारात्मक रहते हैं, भले ही हीमोग्लोबिन, बिलीरुबिन और रेटिकुलोसाइट स्तर सामान्य हो जाएं।

सामग्री के विश्लेषण और संग्रह की तैयारी

कॉम्ब्स परीक्षण करने के लिए उपयोग की जाने वाली सामग्री शिरापरक रक्त है। विशेष ज़रूरतेंरक्त नमूना लेने की प्रक्रिया और रोगी को तैयार करने के लिए कोई समय नहीं है। किसी भी अध्ययन की तरह, खाने के बाद कम से कम 4 घंटे का ब्रेक लेने और आखिरी 30 मिनट में धूम्रपान बंद करने की सलाह दी जाती है। शारीरिक गतिविधि, टालना भावनात्मक तनाव. दवाएँ लेना बंद करने की आवश्यकता के बारे में अपने डॉक्टर से पहले से चर्चा करना भी उचित है - कुछ दवाएं कॉम्ब्स परीक्षण के परिणामों को विकृत कर सकती हैं। से एक सिरिंज का उपयोग करके रक्त लिया जाता है उलनार शिरा, नस से कम बार पीछे की ओरब्रश कुछ ही घंटों में सामग्री प्रयोगशाला में पहुंचा दी जाती है।

प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण करते समय, एंटीग्लोबुलिन सीरम को रोगी के रक्त सीरम में जोड़ा जाता है। कुछ समय बाद, एग्लूटीनेट्स की उपस्थिति के लिए मिश्रण की जांच की जाती है - यदि लाल रक्त कोशिकाओं पर एंटीबॉडी होते हैं तो वे बनते हैं। यदि परिणाम सकारात्मक है, तो एग्लूटिनेटिंग टिटर निर्धारित किया जाता है। अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण में शामिल हैं अधिकचरणों. सबसे पहले, सीरम में मौजूद एंटीबॉडी ऊष्मायन के दौरान इंजेक्ट की गई लाल रक्त कोशिकाओं पर स्थिर हो जाते हैं। फिर नमूने में एंटीग्लोबुलिन सीरम मिलाया जाता है, कुछ समय बाद एग्लूटीनेट्स की उपस्थिति और अनुमापांक निर्धारित किया जाता है। विश्लेषण अवधि 1 दिन है.

सामान्य परिणाम

आम तौर पर, प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण का परिणाम नकारात्मक (-) होता है। इसका मतलब यह है कि रक्त में लाल रक्त कोशिकाओं से जुड़े कोई एंटीबॉडी नहीं हैं, और वे हेमोलिसिस का कारण नहीं बन सकते हैं। सामान्य परिणामअप्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण भी नकारात्मक (-) है, यानी, रक्त प्लाज्मा में आरएच कारक के लिए कोई एंटीबॉडी नहीं हैं। प्राप्तकर्ता के लिए रक्त आधान की तैयारी करते समय, इसका मतलब दाता के रक्त के साथ संगतता है; गर्भावस्था की निगरानी करते समय, इसका मतलब है कि मां के आरएच संवेदीकरण की अनुपस्थिति, एक प्रतिरक्षाविज्ञानी संघर्ष विकसित होने का कम जोखिम। शारीरिक कारक, जैसे आहार संबंधी आदतें या शारीरिक गतिविधि, परीक्षा परिणाम को प्रभावित नहीं कर सकता। इसलिए, यदि परिणाम सकारात्मक है, तो डॉक्टर का परामर्श आवश्यक है।

विश्लेषण का नैदानिक ​​​​मूल्य

एक सकारात्मक कॉम्ब्स परीक्षण परिणाम गुणात्मक रूप से, (+) से (++++), या मात्रात्मक रूप से, 1:16 से 1:256 तक टाइटर्स द्वारा व्यक्त किया जाता है। लाल रक्त कोशिकाओं और रक्त सीरम में एंटीबॉडी की सांद्रता का निर्धारण दोनों प्रकार के नमूनों में किया जाता है। यदि प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण सकारात्मक है, तो लाल रक्त कोशिकाओं की बाहरी झिल्ली पर एंटीबॉडी का पता लगाया जाता है, जिससे इन रक्त कोशिकाओं का विनाश होता है। इसका कारण पूर्व टाइपिंग के बिना रक्त आधान हो सकता है - पोस्ट-ट्रांसफ्यूजन हेमोलिटिक प्रतिक्रिया, साथ ही नवजात शिशु के एरिथ्रोब्लास्टोसिस, दवाओं के उपयोग के कारण हेमोलिटिक प्रतिक्रिया, प्राथमिक या माध्यमिक ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया। लाल रक्त कोशिकाओं का द्वितीयक विनाश प्रणालीगत ल्यूपस एरिथेमेटोसस, इवांस सिंड्रोम, वाल्डेनस्ट्रॉम मैक्रोग्लोबुलिनमिया, पैरॉक्सिस्मल कोल्ड हीमोग्लोबिनुरिया, क्रोनिक लिम्फोसाइटिक ल्यूकेमिया, लिम्फोमा, संक्रामक मोनोन्यूक्लिओसिस, सिफलिस, माइकोप्लाज्मा निमोनिया के कारण हो सकता है।

अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण का सकारात्मक परिणाम प्लाज्मा में आरएच कारक के प्रति एंटीबॉडी की उपस्थिति को इंगित करता है। व्यवहार में, इसका मतलब है कि आरएच संवेदीकरण हो गया है, और गर्भावस्था के दौरान दाता रक्त के जलसेक के बाद आरएच संघर्ष विकसित होने की संभावना है। गर्भावस्था की जटिलताओं को रोकने के लिए, सकारात्मक कॉम्ब्स परीक्षण परिणाम वाली महिलाओं को एक विशेष रजिस्टर पर रखा जाता है।

असामान्यताओं का उपचार

कॉम्ब्स परीक्षण आइसोसेरोलॉजिकल अध्ययन को संदर्भित करता है। इसके परिणाम हेमोलिटिक प्रतिक्रिया की पहचान करना संभव बनाते हैं, साथ ही आरएच संघर्ष के विकास को रोकने के लिए दाता और प्राप्तकर्ता, मां और भ्रूण के रक्त की अनुकूलता निर्धारित करते हैं। यदि परीक्षण का परिणाम सकारात्मक है, तो आपको अपने उपस्थित चिकित्सक - प्रसूति-स्त्री रोग विशेषज्ञ, हेमेटोलॉजिस्ट, सर्जन से सलाह लेने की आवश्यकता है।

एंटीबॉडी, एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर स्थित, या तो स्थिर या मुक्त अवस्था में हो सकता है रक्त प्लाज़्मा. एंटीबॉडी की स्थिति के आधार पर, प्रत्यक्ष या अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स प्रतिक्रिया की जाती है। यदि यह मानने का कारण है कि एंटीबॉडी लाल रक्त कोशिकाओं की सतह पर स्थिर हैं, तो प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण किया जाता है। इस मामले में, परीक्षण एक चरण में होता है - जोड़ना एंटीग्लोबुलिन सीरम. यदि लाल रक्त कोशिकाओं की सतह पर अपूर्ण एंटीबॉडी मौजूद हैं, भागों का जुड़नालाल रक्त कोशिकाओं

अप्रत्यक्ष प्रतिक्रिया

अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स प्रतिक्रिया 2 चरणों में होती है। सबसे पहले आपको कृत्रिम रूप से लागू करने की आवश्यकता है संवेदीकरणलाल रक्त कोशिकाओं ऐसा करने के लिए, लाल रक्त कोशिकाओं और परीक्षण किए जा रहे रक्त सीरम को इनक्यूबेट किया जाता है, जिससे एंटीबॉडी लाल रक्त कोशिकाओं की सतह पर स्थिर हो जाती हैं। जिसके बाद कॉम्ब्स परीक्षण का दूसरा चरण किया जाता है - एंटीग्लोबुलिन सीरम जोड़ना।

शीघ्र प्रतिक्रिया - आरपी (लैटिन प्रिसिपिलो से अवक्षेपण तक) बादल के रूप में एंटीबॉडी के साथ घुलनशील आणविक एंटीजन के एक परिसर का गठन और अवक्षेपण है जिसे कहा जाता है तलछट. यह एंटीजन और एंटीबॉडी को समान मात्रा में मिलाकर बनता है; उनमें से एक की अधिकता प्रतिरक्षा परिसर के गठन के स्तर को कम कर देती है। अवक्षेपण प्रतिक्रिया परीक्षण ट्यूबों (रिंग अवक्षेपण प्रतिक्रिया), जैल, पोषक तत्व मीडिया आदि में की जाती है। अर्ध-तरल अगर या एगरोज़ जेल में वर्षा प्रतिक्रिया की किस्में, डबल इम्युनोडिफ्यूजन द्वारा ऑचटरलोनी, रेडिएप इम्यूनोडिफ्यूजन, इम्यूनोएपेक्ट्रोफोरेसिसऔर आदि।

वलय अवक्षेपण प्रतिक्रिया. प्रतिक्रिया संकीर्ण अवक्षेपण नलिकाओं में की जाती है: एक घुलनशील एंटीजन को प्रतिरक्षा सीरम पर स्तरित किया जाता है। एंटीजन और एंटीबॉडी के इष्टतम अनुपात के साथ, इन दो समाधानों की सीमा पर एक अपारदर्शी परत बनती है। अवक्षेपित वलय. यदि उबले हुए और फ़िल्टर किए गए ऊतक के अर्क को प्रतिक्रिया में एंटीजन के रूप में उपयोग किया जाता है, तो इस प्रतिक्रिया को पहली थर्मोप्रेसिपिटेशन प्रतिक्रिया (वह प्रतिक्रिया जिसमें एंथ्रेक्स हैप्टेन का पता लगाया जाता है) कहा जाता है।
ऑचटरलोनी डबल इम्युनोडिफ्यूजन प्रतिक्रिया. प्रतिक्रिया स्थापित करने के लिए, अगर जेल को पिघलाया गया पतली परतइसे कांच की प्लेट में डाला जाता है और सख्त होने के बाद इसमें छेद कर दिए जाते हैं। एंटीजन और प्रतिरक्षा सीरा को जेल के कुओं में अलग-अलग रखा जाता है, जो एक दूसरे की ओर फैलते हैं। मिलन बिंदु पर, समान अनुपात में, वे एक सफेद धारी के रूप में अवक्षेप बनाते हैं। बहुघटक प्रणालियों में, एंटीजन और एंटीबॉडी वाले कुओं के बीच अवक्षेप की कई रेखाएँ दिखाई देती हैं; समान एजी में, अवक्षेप रेखाएं विलीन हो जाती हैं; गैर-समान एजी में वे प्रतिच्छेद करते हैं।
रेडियल इम्युनोडिफ्यूजन प्रतिक्रिया।पिघले हुए अगर जेल के साथ प्रतिरक्षा सीरम को गिलास पर समान रूप से डाला जाता है। जेल में जमने के बाद, कुएँ बनाए जाते हैं जिनमें एंटीजन को विभिन्न तनुकरणों में रखा जाता है। एंटीजन, जेल में फैलकर, एंटीबॉडी वाले कुओं के चारों ओर रिंग वर्षा क्षेत्र बनाता है। अवक्षेपण वलय का व्यास प्रतिजन सांद्रता के समानुपाती होता है। प्रतिक्रिया का उपयोग रक्त सीरम में विभिन्न वर्गों के इम्युनोग्लोबुलिन, पूरक प्रणाली के घटकों आदि को निर्धारित करने के लिए किया जाता है।
इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस- वैद्युतकणसंचलन और इम्यूनोप्रेसिपिटेशन की विधि का एक संयोजन: एंटीजन के मिश्रण को जेल के कुओं में पेश किया जाता है और वैद्युतकणसंचलन का उपयोग करके जेल में अलग किया जाता है, फिर इम्यूनोसेरम को वैद्युतकणसंचलन क्षेत्रों के समानांतर खांचे में जोड़ा जाता है, जिनमें से एंटीबॉडी फैलती हैं जेल और एंटीजन के साथ "मिलन" स्थल पर अवक्षेपण रेखाएँ बनाता है।
फ़्लोक्यूलेशन प्रतिक्रिया(रेमन के अनुसार) (लैटिन f1oecus से - ऊन के टुकड़े) - प्रतिक्रिया विष - एंटीटॉक्सिन या टॉक्सोइड - एंटीटॉक्सिन के दौरान एक टेस्ट ट्यूब में ओपेलेसेंस या फ्लोकुलेंट द्रव्यमान (इम्यूनोप्रेसिपिटेशन) की उपस्थिति। इसका उपयोग एंटीटॉक्सिक सीरम या टॉक्सोइड की गतिविधि को निर्धारित करने के लिए किया जाता है।

एचएलए टाइपिंग- मानव प्रमुख हिस्टोकम्पैटिबिलिटी कॉम्प्लेक्स - एचएलए कॉम्प्लेक्स का अध्ययन। इस गठन में गुणसूत्र 6 पर जीन का एक क्षेत्र शामिल है जो विभिन्न प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं में शामिल एचएलए एंटीजन को एनकोड करता है।

के लिए कार्य एचएलए टाइपिंगबहुत भिन्न हो सकते हैं - जैविक पहचान (एचएलए प्रकार माता-पिता के जीन के साथ विरासत में मिला है), पूर्वसूचना का निर्धारण विभिन्न रोग, अंग प्रत्यारोपण के लिए दाताओं का चयन - इसमें दाता और प्राप्तकर्ता के ऊतकों की एचएलए टाइपिंग के परिणामों की तुलना करना शामिल है। एचएलए टाइपिंग का उपयोग करके, यह निर्धारित किया जाता है कि बांझपन के मामलों का निदान करने के लिए हिस्टोकम्पैटिबिलिटी एंटीजन के संदर्भ में पति-पत्नी कितने समान या भिन्न हैं।

एचएलए टाइपिंग सुझाव देती है एचएलए बहुरूपता विश्लेषणऔर दो तरीकों से किया जाता है - सीरोलॉजिकल और आणविक आनुवंशिक। एचएलए टाइपिंग की क्लासिक सीरोलॉजिकल विधि माइक्रोलिम्फोसाइटोटॉक्सिक परीक्षण पर आधारित है, और आणविक विधि पीसीआर (पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन) का उपयोग करती है।

सीरम विज्ञानी एचएलए टाइपिंगपृथक कोशिका आबादी पर किया गया। प्रमुख हिस्टोकम्पैटिबिलिटी कॉम्प्लेक्स एंटीजन मुख्य रूप से लिम्फोसाइटों द्वारा ले जाए जाते हैं। इसलिए, टी लिम्फोसाइटों के निलंबन का उपयोग वर्ग I एंटीजन के मुख्य वाहक के रूप में किया जाता है, और बी लिम्फोसाइटों के निलंबन का उपयोग एचएलए वर्ग II एंटीजन को निर्धारित करने के लिए किया जाता है। पूरे रक्त से आवश्यक कोशिका आबादी को अलग करने के लिए, सेंट्रीफ्यूजेशन या इम्यूनोमैग्नेटिक पृथक्करण का उपयोग किया जाता है। ऐसा माना जाता है कि पहली विधि गलत-सकारात्मक डेटा का कारण बन सकती है, क्योंकि इसके परिणामस्वरूप कुछ कोशिकाएं मर जाती हैं। दूसरी विधि को अधिक विशिष्ट माना जाता है - 95% से अधिक कोशिकाएँ व्यवहार्य रहती हैं।

लेकिन लिम्फोसाइटोटॉक्सिक परीक्षण करने का आधार एचएलए टाइपिंगएक विशिष्ट सीरम है जिसमें एचएलए वर्ग I और II एंटीजन के विभिन्न एलील वैरिएंट के प्रति एंटीबॉडी होते हैं। एक सीरोलॉजिकल परीक्षण यह जांच कर एचएलए प्रकार का निर्धारण कर सकता है कि कौन सा सीरा लिम्फोसाइटों के साथ प्रतिक्रिया करता है और कौन सा नहीं।

यदि कोशिकाओं और सीरम के बीच प्रतिक्रिया होती है, तो इसका परिणाम कोशिका की सतह पर एक एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स का निर्माण होता है। पूरक युक्त समाधान जोड़ने के बाद, कोशिका लसीका और मृत्यु होती है। सकारात्मक (लाल प्रतिदीप्ति) और नकारात्मक (हरी प्रतिदीप्ति) प्रतिक्रियाओं का आकलन करने के लिए प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके, या परमाणु धुंधलापन का मूल्यांकन करने के लिए चरण-विपरीत माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके एक सीरोलॉजिकल एचएलए टाइपिंग परीक्षण का मूल्यांकन किया जाता है। मृत कोशिकाएं. एचएलए टाइपिंग का परिणाम प्रतिक्रियाशील सीरा और एंटीजन के क्रॉस-रिएक्टिंग समूहों की विशिष्टता और साइटोटॉक्सिसिटी प्रतिक्रिया की तीव्रता को ध्यान में रखकर निकाला जाता है।

सीरोलॉजिकल के नुकसान एचएलए टाइपिंगक्रॉस-प्रतिक्रियाओं की उपस्थिति, कमजोर एंटीबॉडी संबंध या एचएलए एंटीजन की कम अभिव्यक्ति, कई एचएलए जीनों में प्रोटीन उत्पादों की अनुपस्थिति हैं।

अधिक आधुनिक, आणविक विधियाँ एचएलए टाइपिंगवे पहले से ही मानकीकृत सिंथेटिक नमूनों का उपयोग करते हैं जो ल्यूकोसाइट्स की सतह पर एंटीजन के साथ नहीं, बल्कि डीएनए के साथ प्रतिक्रिया करते हैं और सीधे संकेत देते हैं कि नमूने में कौन से एंटीजन मौजूद हैं। आणविक तरीकों के लिए जीवित श्वेत रक्त कोशिकाओं की आवश्यकता नहीं होती है; किसी भी मानव कोशिका का अध्ययन किया जा सकता है, और कुछ माइक्रोलीटर रक्त काम करने के लिए पर्याप्त है, या आप खुद को मौखिक श्लेष्मा से खुरचना तक सीमित कर सकते हैं।

आणविक आनुवंशिक एचएलए टाइपिंगपीसीआर विधि का उपयोग करता है, जिसका पहला चरण शुद्ध जीनोमिक डीएनए (संपूर्ण रक्त, ल्यूकोसाइट निलंबन, ऊतकों से) प्राप्त करना है।

फिर डीएनए नमूने की प्रतिलिपि बनाई जाती है - एक विशिष्ट एचएलए लोकस के लिए विशिष्ट प्राइमरों (लघु एकल-फंसे डीएनए) का उपयोग करके इन विट्रो में प्रवर्धित किया जाता है। प्रत्येक प्राइमर जोड़ी के सिरे एक विशिष्ट एलील के अनुरूप अद्वितीय अनुक्रम के सख्ती से पूरक होने चाहिए, अन्यथा प्रवर्धन नहीं होगा।

पीसीआर के बाद बार-बार नकल करने पर पता चलता है एक बड़ी संख्या कीडीएनए के टुकड़े, जिनका मूल्यांकन दृष्टिगत रूप से किया जा सकता है। ऐसा करने के लिए, प्रतिक्रिया मिश्रण को इलेक्ट्रोलिसिस या संकरण के अधीन किया जाता है, और क्या विशिष्ट प्रवर्धन हुआ है यह एक प्रोग्राम या तालिका का उपयोग करके निर्धारित किया जाता है। एचएलए टाइपिंग का परिणाम जीन और एलील स्तरों पर एक व्यापक रिपोर्ट के रूप में प्रस्तुत किया जाता है। प्रयुक्त नमूनों के मानकीकरण के कारण, आणविक एचएलए टाइपिंगअधिक सटीक रूप से सीरोलॉजिकल। इसके अलावा, यह अधिक जानकारी (अधिक नए डीएनए एलील) और भी बहुत कुछ प्रदान करता है उच्च स्तरइसका विवरण, क्योंकि यह न केवल एंटीजन, बल्कि एलील्स की भी पहचान करना संभव बनाता है, जो यह निर्धारित करते हैं कि कोशिका पर कौन सा एंटीजन मौजूद है।

प्रतिरक्षा लसीका प्रतिक्रिया.प्रतिक्रिया एरिथ्रोसाइट्स और बैक्टीरिया समेत कोशिकाओं के साथ प्रतिरक्षा परिसरों को बनाने के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी की क्षमता पर आधारित होती है, जो शास्त्रीय मार्ग और सेल लसीका के साथ पूरक प्रणाली की सक्रियता की ओर ले जाती है। प्रतिरक्षा लसीका प्रतिक्रियाओं में से, हेमोलिसिस प्रतिक्रिया का सबसे अधिक उपयोग किया जाता है और बैक्टीरियोलिसिस प्रतिक्रिया का उपयोग शायद ही कभी किया जाता है (मुख्य रूप से हैजा और हैजा जैसे विब्रियोस के भेदभाव में)।

हेमोलिसिस प्रतिक्रिया.पूरक की उपस्थिति में एंटीबॉडी के साथ प्रतिक्रिया के प्रभाव में, लाल रक्त कोशिकाओं का एक धुंधला निलंबन चमकदार लाल रंग में बदल जाता है साफ़ तरल- हीमोग्लोबिन के स्राव के कारण "लाह रक्त"। डायग्नोस्टिक पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (एफएफआर) स्थापित करते समय, हेमोलिसिस प्रतिक्रिया का उपयोग संकेतक के रूप में किया जाता है: मुक्त पूरक की उपस्थिति या अनुपस्थिति (निर्धारण) का परीक्षण करने के लिए।

जेल में स्थानीय हेमोलिसिस प्रतिक्रिया(एर्न प्रतिक्रिया) हेमोलिसिस प्रतिक्रिया के प्रकारों में से एक है। यह आपको एंटीबॉडी बनाने वाली कोशिकाओं की संख्या निर्धारित करने की अनुमति देता है। एंटीबॉडी - हेमोलिसिन - स्रावित करने वाली कोशिकाओं की संख्या हेमोलिसिस सजीले टुकड़े की संख्या से निर्धारित होती है जो एरिथ्रोसाइट्स युक्त एगर जेल में दिखाई देती है, जो अध्ययन और पूरक लिम्फोइड ऊतक की कोशिकाओं का एक निलंबन है।

इम्यूनोफ्लोरेसेंट विधि

(आरआईएफ, इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रतिक्रिया) फ्लोरोक्रोम से संयुग्मित एबीएस (एजीएस) का उपयोग करके विशिष्ट एजी (एबीएस) का पता लगाने की एक विधि है। इसमें उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता है। संक्रमण के स्पष्ट निदान के लिए उपयोग किया जाता है। रोग (अनुसंधान सामग्री में रोगज़नक़ की पहचान), साथ ही एबी और सतह रिसेप्टर्स और ल्यूकोसाइट्स (इम्यूनोफेनोटाइपिंग) और अन्य कोशिकाओं के मार्करों के निर्धारण के लिए। प्रत्यक्ष I. एम.इसमें ऊतक के एक भाग का प्रसंस्करण या पैथोलॉजिकल सामग्री या माइक्रोबियल क्रस्ट से एक स्मीयर शामिल होता है जिसमें फ्लोरोक्रोम के साथ संयुग्मित विशिष्ट एबीएस होता है; तैयारी को अनबाउंड एब्स से मुक्त करने के लिए धोया जाता है और एक प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है। सकारात्मक मामलों में, वस्तु की परिधि के चारों ओर एक चमकती रोशनी दिखाई देती है। प्रतिरक्षा जटिल. गैर विशिष्ट ल्यूमिनसेंस को बाहर करने के लिए नियंत्रण आवश्यक है। पर अप्रत्यक्ष. उन्हें।पहले चरण में, एक ऊतक अनुभाग या स्मीयर को गैर-फ्लोरोसेंट विशिष्ट एजेंट के साथ इलाज किया जाता है, दूसरे में - जानवर के -ग्लोबुलिन के खिलाफ एक ल्यूमिनसेंट एजेंट के साथ जिसका उपयोग पहले चरण में किया गया था। सकारात्मक स्थिति में, एक चमकदार कॉम्प्लेक्स बनता है, जिसमें Ar, At और At बनाम At (सैंडविच विधि) शामिल होते हैं। फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप के अलावा, कोशिकाओं की फेनोटाइपिंग करते समय आरआईएफ को भी ध्यान में रखा जाता है। लेजर सेल सॉर्टर .

फ़्लो साइटॉमेट्री- किसी कोशिका के मापदंडों, उसके अंगों और उसमें होने वाली प्रक्रियाओं के ऑप्टिकल माप की एक विधि।

तकनीक में लेजर बीम से प्रकाश के प्रकीर्णन का पता लगाना शामिल है क्योंकि एक कोशिका तरल की धारा में इसके माध्यम से गुजरती है, और प्रकाश फैलाव की डिग्री किसी को कोशिका के आकार और संरचना का अंदाजा लगाने की अनुमति देती है। इसके अलावा, विश्लेषण उन रासायनिक यौगिकों के प्रतिदीप्ति के स्तर को ध्यान में रखता है जो कोशिका का हिस्सा हैं (ऑटोफ्लोरेसेंस) या फ्लो साइटोमेट्री से पहले नमूने में जोड़े गए हैं।

सेल सस्पेंशन, फ्लोरोसेंट मोनोक्लोनल एंटीबॉडी या फ्लोरोसेंट रंगों के साथ पूर्व-लेबल, प्रवाह सेल से गुजरने वाले द्रव प्रवाह में प्रवेश करता है। स्थितियों का चयन इस प्रकार किया जाता है कि कोशिकाएँ तथाकथित के कारण एक के बाद एक पंक्तिबद्ध हो जाती हैं। जेट में जेट का हाइड्रोडायनामिक फ़ोकसिंग। जिस समय कोई कोशिका लेज़र किरण को पार करती है, डिटेक्टर रिकॉर्ड करते हैं:

छोटे कोणों पर प्रकाश का प्रकीर्णन (1° से 10° तक) ( यह विशेषतासेल आकार निर्धारित करने के लिए उपयोग किया जाता है)।

90° के कोण पर प्रकाश का प्रकीर्णन (हमें नाभिक/साइटोप्लाज्म अनुपात, साथ ही कोशिकाओं की विविधता और ग्रैन्युलैरिटी का न्याय करने की अनुमति देता है)।

कई प्रतिदीप्ति चैनलों (2 से 18-20 तक) के माध्यम से प्रतिदीप्ति तीव्रता - आपको सेल निलंबन आदि की उप-जनसंख्या संरचना निर्धारित करने की अनुमति देती है।

पिपेट (अलग-अलग!) का उपयोग करके एक प्लेट या ग्लास स्लाइड पर सीरम O(I), A(II), B(III) की 1 बड़ी बूंद लगाएं। समय नोट करने के बाद, सीरम की बूंदों को रक्त की बूंदों के साथ मिलाने के लिए एक साफ कांच की छड़ या कांच की स्लाइड के एक साफ कोने का उपयोग करें। निर्धारण 5 मिनट तक चलता है, प्लेट को हिलाते हुए, फिर बूंदों के प्रत्येक मिश्रण में खारा घोल की 1 बूंद डालें और परिणामों का मूल्यांकन करें। सीरम 2 अलग-अलग सीरीज में आए तो बेहतर है। रक्त समूह के परिणाम दोनों सीरम लॉट में मेल खाने चाहिए।

आइसोहेमाग्लुटिनेशन परिणामों का मूल्यांकन:

isohemagglutination. यदि प्रतिक्रिया सकारात्मक है, तो मिश्रण में चिपकने वाली लाल रक्त कोशिकाओं के छोटे लाल दाने दिखाई देते हैं। दाने बड़े दानों में और बाद वाले गुच्छों में विलीन हो जाते हैं। सीरम लगभग फीका पड़ गया है;

यदि प्रतिक्रिया नकारात्मक है, तो मिश्रण 5 मिनट तक एक समान रंग का रहता है गुलाबी रंगऔर अनाज नहीं मिलता;

O(I), A(II), B(III) समूहों के 3 सीरा के साथ काम करते समय, प्रतिक्रियाओं के 4 संयोजन संभव हैं:

1. यदि सभी 3 सीरा ने नकारात्मक प्रतिक्रिया दी है, यानी, मिश्रण समान रूप से गुलाबी रंग का है - यह O(I) रक्त प्रकार है;

   यदि केवल समूह A(II) के सीरम ने नकारात्मक प्रतिक्रिया दी, और सीरा O(I) और B(III) ने सकारात्मक प्रतिक्रिया दी, यानी दाने दिखाई दिए - यह A(II) रक्त समूह है;

   समूह B(II) के सीरम ने नकारात्मक प्रतिक्रिया दी, और समूह O(I) और A(II) के सीरम ने सकारात्मक प्रतिक्रिया दी - यह B(III) रक्त समूह है।

सभी 3 सीरा ने सकारात्मक प्रतिक्रिया दी - परीक्षण किया गया रक्त AB(IV) समूह था। इस मामले में, AB(IV) समूह सीरम के साथ एक अध्ययन किया जाता है।

टिप्पणी!परीक्षण किए जा रहे रक्त की बूंदें सीरम की बूंदों से 5-10 गुना छोटी होनी चाहिए।

आइसोहेमाग्लगुटिनेशन त्रुटियाँ।

जहां एग्लूटिनेशन होना चाहिए, वहां पर एग्लूटिनेशन करने में विफलता और जहां नहीं होना चाहिए, वहां एग्लूटिनेशन की उपस्थिति। यह कमजोर सीरम टिटर और खराब लाल रक्त कोशिका एग्लूटिनेशन के कारण हो सकता है।

एग्लूटिनेशन की उपस्थिति जहां नहीं होनी चाहिए- यह स्यूडोएग्लूटीनेशन है, जब लाल रक्त कोशिकाओं के ढेर "सिक्का स्तंभ" बनाते हैं। प्लेट को हिलाने या सेलाइन डालने से ये नष्ट हो जाते हैं।

पैनाग्लूटीनेशन, जब सीरम अपने स्वयं के रक्त प्रकार सहित सभी लाल रक्त कोशिकाओं को एक साथ चिपका देता है। 5वें मिनट तक एग्लूटीनेशन के लक्षण गायब हो जाते हैं।

तथाकथित कोल्ड पैनाग्लूटीनेशन भी होता है, जब कमरे में कम हवा के तापमान (15 डिग्री सेल्सियस से नीचे) के कारण लाल रक्त कोशिकाएं एक साथ चिपक जाती हैं।

इन सभी मामलों में, या तो बार-बार प्रतिक्रिया की जाती है, या मानक लाल रक्त कोशिकाओं का उपयोग किया जाता है।

Rh रक्त का निर्धारण

आरएच स्थिति निर्धारित करने के लिए, यानी, लोगों के रक्त में आरएच सिस्टम एंटीजन की उपस्थिति या अनुपस्थिति का पता लगाने के लिए, मानक एंटी-आरएच सीरा (अभिकर्मकों) का उपयोग किया जाता है, जो विशिष्टता में भिन्न होते हैं, यानी, इस प्रणाली के विभिन्न एंटीजन के लिए एंटीबॉडी युक्त होते हैं। आरएच 0 (डी) एंटीजन को निर्धारित करने के लिए, एंटी-रीसस सीरम का उपयोग अक्सर 10% जिलेटिन समाधान के साथ किया जाता है, या 33% पॉलीग्लुसीन समाधान के साथ पहले से तैयार मानक एंटी-रीसस अभिकर्मक का उपयोग किया जाता है। अधिक सटीक शोध परिणाम प्राप्त करने के लिए, साथ ही अन्य सीरोलॉजिकल प्रणालियों के एंटीजन की पहचान करने के लिए, कॉम्ब्स परीक्षण का उपयोग किया जाता है (यह ट्रांसफ्यूज्ड रक्त की अनुकूलता निर्धारित करने में भी बहुत संवेदनशील है)। शोध के लिए देशी रक्त या किसी परिरक्षक से तैयार रक्त का उपयोग किया जाता है। इस मामले में, रक्त को आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान की दस गुना मात्रा के साथ परिरक्षक से धोया जाना चाहिए। Rh स्थिति का निर्धारण करते समय- Rh 0 (D) दो अलग-अलग श्रृंखलाओं के सीरम या एंटी-रीसस अभिकर्मक के दो नमूनों का उपयोग किया जाना चाहिए और साथ ही Rh-पॉजिटिव (Rh +) और Rh-नेगेटिव (Rh-) रक्त से प्राप्त मानक लाल रक्त कोशिकाओं का उपयोग किया जाना चाहिए। नियंत्रण के लिए व्यक्तियों का उपयोग किया जाना चाहिए। अन्य आइसोएंटीजन का निर्धारण करते समय, लाल रक्त कोशिकाओं को नियंत्रित करें जिनमें एंटीजन होता है या कमी होती है जिसके खिलाफ मानक सीरम में एंटीबॉडी को निर्देशित किया जाता है, उसी के अनुसार उपयोग किया जाना चाहिए।

आंशिक ताप एग्लूटीनिन सबसे आम प्रकार के एंटीबॉडी हैं जो ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया के विकास का कारण बन सकते हैं। ये एंटीबॉडी आईजीजी से संबंधित हैं, शायद ही कभी आईजीएम, आईजीए से।

कूम्ब्स परीक्षण

कॉम्ब्स परीक्षण: परिचय।कॉम्ब्स परीक्षण हेमग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया पर आधारित एक प्रयोगशाला निदान पद्धति है।

ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया के निदान की मुख्य विधि कॉम्ब्स परीक्षण है। यह आईजीजी या एस3 से लेपित एरिथ्रोसाइट्स को जोड़ने के लिए इम्युनोग्लोबुलिन (विशेष रूप से आईजीजी) या पूरक घटकों (विशेष रूप से एस3) के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी की क्षमता पर आधारित है।

आईजीजी और सी3बी का एरिथ्रोसाइट्स से बंधन ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया और दवा-प्रेरित प्रतिरक्षा हेमोलिटिक एनीमिया में देखा जाता है। प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण.प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण का उपयोग लाल रक्त कोशिकाओं की सतह पर स्थिर एंटीबॉडी या पूरक घटकों का पता लगाने के लिए किया जाता है। इसे इस प्रकार किया जाता है:

मानव इम्युनोग्लोबुलिन (एंटीग्लोबुलिन सीरम) या पूरक (एंटीकॉम्प्लिमेंटरी सीरम) के प्रति एंटीबॉडी प्राप्त करने के लिए, पशु को मानव सीरम, इम्युनोग्लोबुलिन या मानव पूरक से प्रतिरक्षित किया जाता है। पशु से प्राप्त सीरम को एंटीबॉडी से लेकर अन्य प्रोटीन तक शुद्ध किया जाता है।

सीरम को पूरी तरह से हटाने के लिए रोगी की लाल रक्त कोशिकाओं को खारे पानी से धोया जाता है, जो इम्युनोग्लोबुलिन और पूरक एंटीबॉडी को निष्क्रिय कर देता है और गलत नकारात्मक परिणाम पैदा कर सकता है।

यदि एंटीबॉडी या पूरक घटक लाल रक्त कोशिकाओं की सतह पर स्थिर होते हैं, तो एंटीग्लोबुलिन या एंटी-पूरक सीरम के जुड़ने से लाल रक्त कोशिकाओं का एकत्रीकरण होता है।

प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण का उपयोग निम्नलिखित मामलों में किया जाता है:

ऑटोइम्यून हेमोलिसिस।

नवजात शिशुओं का हेमोलिटिक रोग।

दवा-प्रेरित प्रतिरक्षा हेमोलिटिक एनीमिया।

हेमोलिटिक आधान प्रतिक्रियाएं। अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण.अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण सीरम में लाल रक्त कोशिकाओं के प्रति एंटीबॉडी का पता लगाता है। ऐसा करने के लिए, रोगी के सीरम को समूह 0 दाता लाल रक्त कोशिकाओं के साथ जोड़ा जाता है, और फिर एक सीधा कॉम्ब्स परीक्षण किया जाता है।

अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण का उपयोग निम्नलिखित मामलों में किया जाता है:

दाता और प्राप्तकर्ता रक्त की व्यक्तिगत अनुकूलता का निर्धारण।

एलोएंटीबॉडी का पता लगाना, जिसमें एंटीबॉडी भी शामिल हैं जो हेमोलिटिक ट्रांसफ्यूजन प्रतिक्रियाओं का कारण बनते हैं।

सतह एरिथ्रोसाइट एंटीजन का निर्धारण चिकित्सा आनुवंशिकीऔर फोरेंसिक दवा।

अस्थि मज्जा प्रत्यारोपण के दौरान एक जैसे जुड़वां बच्चों की पुष्टि।

जैविक परीक्षण करने के लिए, जितनी जल्दी हो सके रक्त चढ़ाया जाना शुरू हो जाता है (अधिमानतः एक धारा में)। 25 मिलीलीटर रक्त चढ़ाने के बाद सिस्टम ट्यूब को एक क्लैंप से जकड़ दिया जाता है। फिर 3 मिनट के लिए विराम होता है, जिसके दौरान प्राप्तकर्ता की स्थिति की निगरानी की जाती है। जैविक परीक्षण करने के लिए 25 मिलीलीटर रक्त तीन बार इंजेक्ट किया जाता है।परीक्षण के अंत में (3 मिनट के अंतराल पर 25 मिलीलीटर की आंशिक खुराक में पहले 75 मिलीलीटर रक्त के आधान के बाद), सिस्टम को समायोजित किया जाता है आवश्यक गतिआधान. किसी मरीज को एक से अधिक बोतल खून चढ़ाने पर सुई को नस से निकालना जरूरी होता है। इस मामले में, जिस शीशी में खून खत्म हो गया है, उसकी टेस्ट ट्यूब से सुई निकालकर अगली शीशी में डाल दी जाती है। सिस्टम ट्यूब (रबर या प्लास्टिक) को इस समय एक क्लैंप से जकड़ दिया जाता है। यदि रक्त आधान के दौरान प्राप्तकर्ता को अंतःशिरा के माध्यम से कोई अन्य दवा देना आवश्यक हो जाता है, तो यह सिस्टम की रबर ट्यूब में छेद करके किया जाता है। प्लास्टिक ट्यूब में छेद करना अस्वीकार्य है, क्योंकि वे गिरते नहीं हैं। प्रत्येक रक्त आधान के बाद, रोगी की पहचान करने और तुरंत समाप्त करने के लिए उसकी निगरानी की जानी चाहिए संभावित जटिलताएँ, शामिल एलर्जी. रक्त आधान की समाप्ति के 2 घंटे बाद शरीर का तापमान मापा जाना चाहिए। यदि यह बढ़ता है, तो माप अगले 4 घंटों तक हर घंटे दोहराया जाना चाहिए। पेशाब और मूत्र संरचना की निगरानी करना भी उतना ही महत्वपूर्ण है, जिससे ट्रांसफ्यूजन के बाद विषाक्त प्रतिक्रिया की उपस्थिति स्थापित करना संभव हो जाता है। रक्त आधान के बाद ओलिगुरिया और औरिया की शुरुआत, मूत्र में रक्त कोशिकाओं और प्रोटीन की उपस्थिति, रक्त आधान के बाद हेमोलिसिस के विकास का प्रत्यक्ष संकेत है।

कॉम्ब्स परीक्षण- किसी सतह से जुड़े या प्लाज्मा में घुले एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए एक परख। इसका उपयोग लाल रक्त कोशिकाओं के प्रतिरक्षण और एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए किया जाता है। दूसरा शीर्षक एंटीग्लोबुलिन परीक्षण. यह प्रत्यक्ष या अप्रत्यक्ष हो सकता है.

पर प्रत्यक्ष एंटीग्लोबुलिन परीक्षणलाल रक्त कोशिकाओं की सतह पर स्थिर एंटीबॉडी का पता लगाता है। दवाएँ (मेथिल्डोपा, पेनिसिलिन, कुनैन) आदि लेने के बाद, अन्य ऑटोइम्यून बीमारियों का संदेह होने पर इसे किया जाता है।

लाल रक्त कोशिकाओं को विवो में संवेदनशील बनाया गया है - एंटीबॉडी पहले से ही मजबूती से उनसे जुड़ी हुई हैं, और एंटीग्लोबुलिन सीरम (एंटी-आईजीजी) के जुड़ने से संवेदनशील कोशिकाएं एक साथ चिपक जाती हैं, जो नग्न आंखों को दिखाई देती है।

अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षणरक्त प्लाज्मा में एंटी-एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी का पता लगाता है, यह रक्त आधान से पहले और उसके दौरान किया जाता है।

एंटी-एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी एक प्रकार के ऑटोएंटीबॉडी हैं, यानी। आपके अपने ऊतकों के विरुद्ध एंटीबॉडी। ऑटोएंटीबॉडी पैथोलॉजिकल प्रतिक्रिया के दौरान होती है प्रतिरक्षा तंत्रउदाहरण के लिए, कुछ दवाओं के लिए उच्च खुराकपेनिसिलीन.

उनकी सतह पर लाल रक्त कोशिकाओं में विभिन्न प्रकार होते हैं रासायनिक संरचनाएँ(ग्लाइकोलिपिड्स, सैकराइड्स, ग्लाइकोप्रोटीन और प्रोटीन), चिकित्सा में एंटीजन कहलाते हैं। एक व्यक्ति को अपने माता-पिता से प्रत्येक लाल रक्त कोशिका पर एंटीजन का एक विशिष्ट मानचित्र विरासत में मिलता है।

एंटीजन को समूहों में संयोजित किया जाता है और फिर रक्त को कई समूहों में विभाजित किया जाता है - AB0, Rh, Kell, लुईस, किड, डफी प्रणाली के अनुसार। एक डॉक्टर के काम में सबसे प्रसिद्ध और महत्वपूर्ण AB0 और Rh फ़ैक्टर (Rh) हैं।

AB0 प्रणाली

किसी व्यक्ति की Rh स्थिति इन एंटीजन की उपस्थिति से निर्धारित होती है। एरिथ्रोसाइट्स का एक विशेष रूप से महत्वपूर्ण एंटीजन एंटीजन डी है। यदि यह मौजूद है, तो वे बात करते हैं Rh धनात्मक रक्त RhD, और यदि यह वहां नहीं है - ओह Rh नकारात्मक Rhd.

यदि संबंधित एंटीबॉडी एरिथ्रोसाइट एंटीजन से जुड़ जाता है, तो एरिथ्रोसाइट नष्ट हो जाता है - hemolysis.

संकेत

के लिए मुख्य संकेत प्रत्यक्षएंटीग्लोबुलिन परीक्षण- हेमोलिटिक एनीमिया का संदेह. अधिकतर यह प्राथमिक ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया, गठिया में हेमोलिसिस, ट्यूमर के लिए किया जाता है। संक्रामक रोग, दवा-प्रेरित हेमोलिसिस।

यदि रक्त आधान के कई दिनों या महीनों बाद या उसके दौरान एनीमिया प्रकट होता है दीर्घकालिक पीलियानवजात शिशु पर सीधा कॉम्ब्स परीक्षण भी किया जाता है।

अप्रत्यक्षएंटीग्लोबुलिन परीक्षण किया जाता हैरक्त आधान से पहले और Rh-नकारात्मक महिला की गर्भावस्था के दौरान।

ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया

ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया (प्राथमिक)- अज्ञात कारणों से होने वाली एक क्लासिक ऑटोइम्यून बीमारी। प्रतिरक्षा प्रणाली के भीतर परस्पर क्रिया बाधित हो जाती है, जिससे यह धारणा बन जाती है कि व्यक्ति की अपनी लाल रक्त कोशिकाएं विदेशी हैं। लिम्फ नोड्स में, आईजीजी वर्ग (टी 37 डिग्री सेल्सियस पर प्रतिक्रिया) और/या आईजीएम (टी 40 डिग्री सेल्सियस पर) के एंटीबॉडी संश्लेषित होते हैं, जो एरिथ्रोसाइट की सतह से जुड़े होने पर, कई एंजाइमों को ट्रिगर करते हैं ( पूरक प्रणाली) और एरिथ्रोसाइट की दीवार को "छिद्रित" करती है, जिससे इसका विनाश होता है - हेमोलिसिस।

पहले लक्षण लाल रक्त कोशिकाओं के नष्ट होने और हीमोग्लोबिन में कमी दोनों के कारण होते हैं। उनमें से:

• थकान, सामान्य कमज़ोरी, चिड़चिड़ापन
• श्वास कष्ट
• पेट और सीने में दर्द, मतली
• मूत्र का रंग गहरा होना
• पीठ दर्द
• त्वचा और श्लेष्मा झिल्ली का पीलापन
• लाल रक्त कोशिकाओं की संख्या में कमी और

सकारात्मक परिणाम प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण 100% ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया के निदान की पुष्टि करता है, जो इसकी ऑटोइम्यून उत्पत्ति को साबित करता है। उसी समय, एक नकारात्मक परिणाम निदान को दूर करना संभव नहीं बनाता है।

माध्यमिक हेमोलिटिक एनीमिया

माध्यमिक ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया और एक सकारात्मक कॉम्ब्स परीक्षण निम्नलिखित बीमारियों में हो सकता है:

• इवांस सिंड्रोम
• निमोनिया संक्रमण

इन बीमारियों के लिए एक सकारात्मक एंटीग्लोबुलिन परीक्षण लक्षणों में से एक है, न कि निदान के लिए एक मानदंड।

नवजात शिशु का हेमोलिटिक रोग

कारण नवजात शिशुओं के हेमोलिटिक रोग -माँ और भ्रूण के रक्त समूह की असंगति, ज्यादातर मामलों में आरएच प्रणाली के अनुसार, एकल मामलों में - एबी0 प्रणाली के अनुसार, आकस्मिक रूप से - अन्य एंटीजन के अनुसार।

यदि Rh-नेगेटिव महिला के भ्रूण को पिता से Rh-पॉजिटिव रक्त विरासत में मिलता है तो Rh संघर्ष विकसित होता है।

यह रोग नवजात शिशु में तभी विकसित होता है जब मां ने पहले से ही संबंधित एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी विकसित कर ली हो, जो बाद में होता है पिछली गर्भावस्थाएँ, गर्भपात, रक्ताधान असंगत रक्त. एरिथ्रोसाइट झिल्ली के एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी के संश्लेषण को ट्रिगर करने का सबसे आम कारण प्रसव (भ्रूण-मातृ रक्तस्राव) है। पहला जन्म आम तौर पर जटिलताओं के बिना होता है, लेकिन बाद में जन्म के बाद पहले दिनों में नवजात शिशु के हेमोलिटिक रोग से भरा होता है।

नवजात शिशु के हेमोलिटिक रोग के लक्षण:

• त्वचा का पीलापन
• , और श्लेष्मा झिल्ली
• बढ़े हुए जिगर और प्लीहा
• साँस की परेशानी
• पूरे शरीर में सूजन
• केंद्रीय तंत्रिका तंत्र की उत्तेजना और क्रमिक अवसाद

रक्त आधान के बाद एनीमिया

अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षणअनुकूलता का आकलन करने के लिए रक्त आधान से पहले किया जाता है, और एक सीधा कॉम्ब्स परीक्षण - इसके बाद यदि आधान के बाद हेमोलिसिस का संदेह होता है, यानी। बुखार, पानी आना (नीचे पढ़ें) जैसे लक्षणों की उपस्थिति में। विश्लेषण का उद्देश्य ट्रांसफ्यूज्ड लाल रक्त कोशिकाओं के प्रति एंटीबॉडी की पहचान करना है जो प्राप्तकर्ता की लाल रक्त कोशिकाओं से बंधे हैं और ट्रांसफ्यूजन के बाद हेमोलिसिस का कारण बनते हैं, साथ ही रक्त परिसंचरण से दाता लाल रक्त कोशिकाओं को समय से पहले हटा देते हैं। प्राप्तकर्ता (जिसने रक्त प्राप्त किया)।

लक्षण:

• शरीर के तापमान में वृद्धि
• त्वचा के लाल चकत्ते
• पीठ दर्द
• लाल
• जी मिचलाना
• चक्कर आना

डिकोडिंग

यह याद रखने योग्य है कि प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष एंटीग्लोबुलिन परीक्षणों को समझने के मूलभूत नियम समान हैं। एकमात्र अंतर एंटीबॉडी के स्थान का है - रक्त में या लाल रक्त कोशिका पर।

• अगर प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण नकारात्मक है- इसका मतलब है कि एंटीबॉडी लाल रक्त कोशिकाओं पर "बैठती" नहीं है और लक्षणों का कारण आगे खोजा जाना चाहिए और एक अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण किया जाना चाहिए
• अगर सकारात्मक परिणामरक्त आधान, संक्रमण, दवाओं के बाद कॉम्ब्स परीक्षण का पता चला - सकारात्मकता 3 महीने तक रहती है (लाल रक्त कोशिकाओं का जीवनकाल 120 दिन - 3 महीने)
• सकारात्मक एंटीग्लोबुलिन परीक्षण परिणाम स्व - प्रतिरक्षी रोगमहीनों और वर्षों तक चलता है

आदर्श

• प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण - नकारात्मक
• अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण - नकारात्मक

गुणात्मक रूप से सकारात्मक परिणाम एक से चार (+, ++, +++, ++++) तक प्लस की संख्या में मापा जाता है, और मात्रात्मक रूप से डिजिटल रूप में - 1:16, 1:256, आदि।

हाँ। आपके डॉक्टर को निश्चित रूप से पता होना चाहिए कि आपको रक्त आधान प्राप्त हुआ है, क्योंकि यह अब परीक्षण परिणामों की सही व्याख्या को प्रभावित करता है। किसी और का रक्त प्राप्त करते समय (हालांकि कई बार परीक्षण किया गया) इस बात की संभावना हमेशा बनी रहती है कि आपके शरीर में चढ़ाए गए रक्त के खिलाफ एंटीबॉडी विकसित हो जाएंगी। ये एंटीबॉडीज ही प्रदान करेंगी बुरा प्रभावस्वास्थ्य स्थिति पर. बाद के रक्त आधान के लिए, डॉक्टर को पता होना चाहिए कि आपको पहले ही रक्त आधान प्राप्त हो चुका है, जिसका अर्थ है कि एंटीबॉडी के संश्लेषण के लिए समय हो गया है। गर्भवती महिलाओं के लिए यह जानकारी और भी अधिक प्रासंगिक है।

3. यदि माँ और बच्चे के बीच आरएच कारक में बेमेल है, तो क्या सभी बच्चे बीमार होंगे?

यह इस पर निर्भर करता है कि बच्चा Rh पॉजिटिव है या नेगेटिव (RhD)। रक्त समूह I, II, III और IV के वाहक या तो Rh सकारात्मक या नकारात्मक हो सकते हैं। ऐसी स्थिति में जहां मां आरएच नेगेटिव है और बच्चा आरएच पॉजिटिव है, एंटीबॉडी का उत्पादन पहली गर्भावस्था के साथ ही हो जाएगा, लेकिन केवल पहले जन्म (या गर्भावस्था की समाप्ति) के बाद ही मां के रक्त और के बीच सीधा संपर्क होगा। बच्चा। एंटीबॉडी का हेमोलिटिक प्रभाव केवल दूसरे और के दौरान ही महसूस किया जाएगा अगला जन्म, जो नवजात शिशु में हेमोलिटिक रोग को जन्म देगा।

नकारात्मक आरएच कारक वाली प्रत्येक महिला की गर्भावस्था के दौरान और प्रसव के बाद सावधानीपूर्वक जांच की जानी चाहिए निवारक उपचारएंटीबॉडी की उपस्थिति और आगे की जटिलताओं को रोकने के लिए।

4. गर्भावस्था के दौरान, क्या कॉम्ब्स परीक्षण करने से पहले मेरे पति का रक्त प्रकार जानना आवश्यक है?

गर्भावस्था के दौरान आपको न केवल जानने की जरूरत है, बल्कि बच्चे के जैविक पिता के रक्त प्रकार की भी जांच करने की जरूरत है।

डेटा

• पहली बार 1945 में कैंब्रिज में प्रस्तावित किया गया
• संवेदनशीलता सीमा - एक लाल रक्त कोशिका पर कम से कम 300 निश्चित एंटीबॉडी अणु
• हेमोलिसिस को ट्रिगर करने वाले एंटीबॉडी की संख्या - प्रत्येक व्यक्ति के लिए व्यक्तिगत रूप से (16-30 से 300 तक)
• हेमोलिटिक एनीमिया (हीमोग्लोबिन, बिलीरुबिन, रेटिकुलोसाइट्स) के अन्य प्रयोगशाला संकेतकों की गतिशीलता सामान्य हो सकती है, और कॉम्ब्स परीक्षण समान स्तर पर रहेगा

कॉम्ब्स परीक्षण अंतिम बार संशोधित किया गया था: 16 मार्च, 2018 तक मारिया बोडियन

आम तौर पर, रक्त में लाल रक्त कोशिकाओं के प्रति कोई एंटीबॉडी नहीं होती हैं।

प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण एक एंटीग्लोबुलिन परीक्षण (एक जेल में एग्लूटिनेशन जो पूर्ण डाइवेलेंट एंटीबॉडी का पता लगाने की अनुमति देता है) है, जो आईजीजी वर्ग के एंटीबॉडी और लाल रक्त कोशिकाओं की सतह पर पूरक के सी 3 घटक का पता लगाता है। आमतौर पर, प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण द्वारा पता लगाए गए एंटीबॉडी में एक व्यापक विशिष्टता होती है जो एक अच्छी तरह से स्थापित एंटीजन से जुड़ी नहीं होती है। एक सकारात्मक प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण स्पष्ट रूप से इंगित करता है कि रोगी को हेमोलिटिक एनीमिया है, हालांकि सकारात्मक प्रत्यक्ष एंटीग्लोबुलिन परीक्षण वाले सभी रोगी इस बीमारी से पीड़ित नहीं हैं। लगभग 10% रोगियों में, लाल रक्त कोशिका झिल्ली पर एंटीबॉडी या पूरक घटकों को प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण (परीक्षण नकारात्मक है) द्वारा निर्धारित नहीं किया जा सकता है, लेकिन फिर भी वे ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया से पीड़ित हैं। ऐसे मामलों में एंटीबॉडी की विशिष्टता को स्पष्ट करने के लिए, उनके निस्पंदन के साथ परीक्षणों का उपयोग किया जाता है। एक प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण, जो केवल पूरक के लिए सकारात्मक है, आमतौर पर आईजीएम प्रकार के ठंडे एंटीबॉडी को संदर्भित करता है। इस मामले में, जब लाल रक्त कोशिकाओं पर IgM एंटीबॉडी मौजूद नहीं होते हैं बेसल तापमानशव. हालांकि, इस तथ्य के कारण कि आईजीएम एंटीबॉडी सक्रिय रूप से पूरक को ठीक करते हैं, और पूरक लाल रक्त कोशिकाओं पर रहता है, ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया (कोल्ड एगुटिनिन रोग) के इस रूप के साथ, कॉम्ब्स परीक्षण केवल पूरक के लिए सकारात्मक होगा।

प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण गर्म एंटीबॉडी के कारण होने वाले ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया, ऑटोइम्यून दवा-प्रेरित एनीमिया (मेथिल्डोपा लेने पर, 20% रोगियों तक सकारात्मक प्रतिक्रिया होती है), हेमोलिटिक एनीमिया के दवा-सोखने के प्रकार, हेमोलिटिक के प्रतिरक्षा जटिल प्रकार के लिए सकारात्मक है। एनीमिया (परीक्षण केवल C3 के लिए सकारात्मक है), शीत एंटीबॉडी के कारण होने वाले ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया के साथ - शीत एग्लूटीनिन रोग (परीक्षण केवल C3 के लिए सकारात्मक है)। पैरॉक्सिस्मल कोल्ड हीमोग्लोबिनुरिया में, प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण नकारात्मक होता है।

अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण - एक अप्रत्यक्ष एंटीग्लोबुलिन परीक्षण (अपूर्ण एंटीबॉडी का पता लगाता है) आपको रक्त में असामान्य एंटीबॉडी की पहचान करने की अनुमति देता है, जिसमें एलोएंटीबॉडी से लेकर विदेशी एरिथ्रोसाइट एंटीजन भी शामिल हैं। इसे इसका नाम (अप्रत्यक्ष) इसलिए मिला क्योंकि यह 2 चरणों में होता है। प्रारंभ में, रोगी का रक्त सीरम, जिसमें अपूर्ण एंटीबॉडी होते हैं, दृश्यमान अभिव्यक्तियों के बिना अतिरिक्त कॉर्पसकुलर एजी डायग्नोस्टिकम के साथ बातचीत करता है। दूसरे चरण में, जोड़ा गया एंटीग्लोबुलिन सीरम एक दृश्य अवक्षेप की उपस्थिति के साथ, एंटीजन पर अधिशोषित अपूर्ण एंटीबॉडी के साथ परस्पर क्रिया करता है। समजात (एलोजेनिक) लाल रक्त कोशिकाओं का आधान या गर्भावस्था सबसे अधिक होती है सामान्य कारणइन एंटी-एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी का निर्माण। एक सकारात्मक अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण का एक नकारात्मक प्रत्यक्ष परीक्षण के साथ संयोजन ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया के निदान के लिए कुछ भी प्रदान नहीं करता है। एक सकारात्मक अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण आधान के लिए रक्त का चयन करते समय और संरक्षित रक्त के साथ संगतता के लिए एक क्रॉस-परीक्षण आयोजित करते समय कुछ कठिनाइयों का कारण बनता है, लेकिन इसका कोई अन्य नैदानिक ​​​​मूल्य नहीं है।