гельмінтологічні методи. Основні методи дослідження найпростіших

Поділяються найпростіші на 4 класи:

При інцистуванні мікроорганізм набуває округлу формута покривається захисною оболонкою. У формі цисти найпростіші стають малосприйнятливими до несприятливим факторамсередовища.

Дослідження можуть піддаватися:

Зверніть увагу:різновидів діагностики дуже багато, ми розглянемо ті види, які найпоширеніші у клінічній лабораторній практиці.

Приватні види діагностики

У кожному конкретному випадку перед лаборантом ставиться завдання знаходження певного збудника, іноді принагідно з основним виявляються й інші.

Налічується 6 видів цього мікроорганізму, здатного до проживання в кишечнику людини. Клінічне значеннямає тільки дизентерійна амеба, що зустрічається у вегетативної формі та у вигляді цист.

Додатково застосовуються імунологічні методи:

• непрямої імунофлюоресценції;
• непрямої аглютинації (РНА);
• радіальної імунодифузії.

Зверніть увагу: серологічні методималоінформативні та застосовуються лише як доповнення до основних у сумнівних випадках.

Діагностика війкових (інфузорій)

Патогенна форма мікроорганізмів цього – балантидій. Це мікроб, що викликає балантидіаз – хвороба, що супроводжується виразковим процесом товстого кишківника. Збудник виявляється у нативному мазку у вигляді вегетативної форми та цисти. Матеріал для мазка (кал і слиз) забирається при ректороманоскопічному дослідженні та висівається на спеціальні середовища.

Діагностика джгутиконосців (лейшманій, лямблій, тріпанос, тріхомонад)

Для людини становлять небезпеку лейшманії, трипаносоми, лямблії, трихомонади.

Лейшманія– мікроби, викликають лейшманіоз, досліджуються у мазках крові, матеріалах кісткового мозку, зіскрібків зі шкірних інфільтратів. У деяких випадках при діагностиці лейшманій застосовується посів на живильні середовища.

Трипаносоми– збудники сонної хвороби(Американський/африканський трипаносомоз або хвороба Шагаса).

Африканський варіант визначають початковому періодіпри дослідженні периферичної крові. Патологічні мікроби при прогресуванні хвороби знаходяться у матеріалі пункцій лімфовузлів, у запущених стадіях – у спинномозковій рідині.

Для діагностики трипанос при підозрі на хворобу Шагаса досліджуваний матеріал обстежується під мікроскопом при малому збільшенні. При цьому мазки та товсту краплю попередньо фарбують.

Трихомонади(кишкова, ротова,) виявляються при мікроскопії матеріалів, взятих із уражених слизових оболонок.

Виявлення споровиків (малярійного плазмодія, збудника кокцидозу та ін.)

Найбільш поширений і небезпечний для людини вид - малярійний плазмодій, що має 4 основні різновиди збудника: збудник триденної малярії, чотириденної малярії, тропічної маляріїта малярії овале.

Статевий розвиток плазмодія (спорогонія) проходить у комарах Анофелес. Безстатеве (тканинна та еритроцитарна шизогонія) – у печінковій тканині та еритроцитах людини. Ці особливості життєвого циклуобов'язково враховуються при діагностиці малярійного плазмодія.

Так, у щойно хворого у крові можна виявити статеві клітини циклу спорогонії. А ось на висоті малярійних нападів у крові у великій кількості з'являються шизонти.

Більше того, в різні фази малярійної лихоманкивиявляються різні формиплазмодія:

• у період ознобу кров наповнюється мерозоїтами, різновидом шизонтів;
• на висоті температури в еритроцитах накопичуються кільцеподібні трофозоїти;
• зниження температури характеризується переважанням амебоподібних трофозоїтів;
• у періоди нормального стануКров містить дорослі форми шизонтів.

Дослідження збудника малярії (малярійного плазмодія) проводиться в мазку та в товстій краплі.

Зверніть увагу:діагностика малярії при дослідженні мазків та товстих крапель крові іноді буває помилковою. Тромбоцити крові в деяких випадках можуть бути помилково зараховані до малярійного збудника. Також іноді симулюють плазмодії фрагменти лейкоцитів та інших клітин.

Основні методи дослідження найпростіших

Стисло ознайомимося з найпоширенішими методами дослідження на наявність найпростіших.

Діагностика найпростіших методом нативного мазка та мазка, пофарбованого розчином Люголя (у калі)

Препарат готується з емульсії калу в ізотонічному розчині. На предметне скло наносяться дві краплі хлору натрію і поруч розчин Люголя. В обидва склади дерев'яною паличкою додають матеріал, що досліджується, і після накриття склом переглядають у різних дозволах мікроскопа.

За певними ознаками реєструють знайдених найпростіших. Для точності готують 2-3 препарати з одного матеріалу. У сумнівних випадках аналіз повторюють кілька разів протягом 2-3 тижнів.

Методом можна виявити вегетативні та цистні форми:

• лямблій;
• балантидій;
• дизентерійної амеби.

Разом з патогенними формами визначаються і найпростіші непатогенні. Також у здорових носіївзнаходяться просвітні та цистні форми.

Важливо:дослідження, щоб уникнути неточностей і помилок, слід проводити неодноразово.

Результат діагностики найпростіших методом нативного та забарвленого мазка повинен містити опис форми збудника (просвітна, циста, тканинна).

Вимоги до дослідження:

• забраний на аналіз матеріал (рідкий кал) досліджується пізніше 30 хвилин після дефекації;
• оформлений кал необхідно діагностувати протягом 2 годин після дефекації;
• у матеріалі не повинно бути домішок ( дезінфікуючих засобівводи, сечі);
• для роботи з матеріалом використовують тільки дерев'яні палички, скляні не придатні через зісковзування слизу;
• палички після використання необхідно негайно спалювати.

Метод консервації (дослідження калу) при діагностиці найпростіших

Дослідження проводиться шляхом фіксації найпростіших із консервантом. Відмінність цього від попереднього у цьому, що консерванти дозволяють зберегти препарат протягом тривалого періоду.

Використовувані консерванти:

• Барроу. Містить інгредієнти, що консервують: 0,7 мл хлориду натрію, 5 мл формаліну, 12,5 мл 96% спирту, 2 г фенолу і 100 мл дистильованої води. Фарбувальний склад: 0,01% розчин тіонін (азура).
• Розчин Сафарлієва. Склад: 1,65 г сульфату цинку, 10 мл формаліну, 2,5 г кристалічного фенолу, 5 мл оцтової кислоти 0,2 г метиленового синього, 100 мл води. Цей консервант використовується у випадках, коли матеріал повинен зберігатись більше місяця.

Консервантом наповнюються порожні флакони, у яких переносять матеріал, у пропорціях 3:1, потім за необхідності додають барвник. Оцінка результатів проводиться у разі дослідження 2-3-х препаратів.

Метод формалін-ефірного збагачення (аналіз на наявність найпростіших у калі)

Цей спосіб діагностики дозволяє відокремити та сконцентрувати цисти найпростіших. Для аналізу потрібні такі інгредієнти: формалін (10 мл), 0,85 г ізотонічного розчину, дистильована вода, сірчаний ефір, розчин Люголю.

Суміш біоматеріалу з перерахованими рідинами змішують та центрифугують. Отриманий на дні пробірки осад забарвлюють розчином Люголя і досліджують на наявність цист і вегетативних форм.

Метод знаходження лейшманій (мазок кісткового мозку)

Для діагностики лейшманіозу використовуються реактиви: суміш Нікіфорова (сірчаний ефір та етиловий спирт), фосфатний буфер, Азур-еозин по Романівському.

Речовину кісткового мозку дуже обережно поміщають на предметне скло. спеціальної підготовки. Використовується мікроскоп із імерсійною системою.

У гострий періодхвороби в пунктаті виявляється велика кількістьлейшманій.

Зверніть увагу:іноді кров'яні клітиниможуть нагадувати оброблені лейшманії, тому дуже важливо лаборанту бути уважним та мати достатній досвід для самостійного дослідження.

Метод виявлення лейшманій у мазку зі шкірного інфільтрату

Необхідні реактиви аналогічні до попереднього аналізу.

Досліджуваний матеріал отримують з наявного горбка або виразкового вмісту. Зішкріб при підозрі на лейшманіоз робиться дуже акуратно скальпелем, без крові. Потім готується препарат на склі. Для точності одержуваних результатів одночасно оглядають кілька препаратів.

За наявності захворювання серед присутніх у досліджуваному матеріалі макрофагів, фібробластів, лімфоїдних клітин визначаються лейшманії.

Метод виділення чистої культури лейшманій, отриманих шляхом зіскрібку патологічних тканин

При цьому способі діагностики найпростіших зіскрібок тканин поміщають у спеціальну живильне середовище, в якій відбувається активне розмноження лейшманій

Перед забором зіскрібка шкіру ретельно обробляють спиртом, потім робиться надріз горбка, з дна якого витягується вміст і поміщається в пробірку з середовищем. Матеріал забирається кілька разів, після чого він поміщається у різні пробірки. Потім термостат при температурі 22-24 градуси відбувається культивування. Результати оцінюють під мікроскопом. Цей метод застосовується, коли інші, більш дешеві та швидкі способидіагностики найпростіших неефективні.

Побачити, як на практиці розшифровуються аналізи на наявність найпростіших крапель крові, ви зможете, подивившись відео-огляд:

Лотін Олександр, медичний оглядач

Випорожнення досліджуються двома методами:

1. Макроскопічний - Виявляють гельмінтів, їх головки, членики, уривки стробіли. Невеликі порції калу, перемішують з водою в плоскій ванні або чашці Петрі і переглядають при хорошому освітленні на темному тлі, за необхідності користуючись лупою. Всі підозрілі утворення пінцетом переносять в іншу чашку з водою або предметне скло в краплю розведеного гліцерину.

При методі відстоюваннядосліджувану порцію фекалій розмішують з водою у скляному циліндрі, після відстоювання зливають верхній шарводи. Так повторюють кілька разів. Коли рідина стане прозорою, її зливають, а осад переглядають у чашці Петрі.

2. Мікроскопічний – для виявлення яєць та личинок гельмінтів. Існує багато методів дослідження.

1). Нативний мазок - Найбільш поширений та технічно доступний метод дослідження. Можна виявити яйця та личинки всіх гельмінтів. Однак при невеликій кількості яєць їх не завжди вдається знайти. Тому використовується метод збагачення.

1). Метод Фюлеборгу – це метод збагачення, заснований на випливанні яєць гельмінтозів у насиченому розчині NaCl (1,2 – щільність; 400 г NaCl на 1 літр води; 40% розчин NaCl). Метод ефективніший, ніж нативний мазок. У скляні банки поміщають 2-5 г фекалій і заливають розчином NaCl, розмішують і через 45 хвилин знімають плівку, що утворилася металевою петлею, поміщають краплю гліцерину на предметне скло. Досліджують під мікроскопом. Недолік методу – уповільнене випливання яєць різних гельмінтів, карликовий ціп'як – через 15-20 хвилин, аскарид – 1,5 години, власоголов – 2-3 години.

2) Метод Калантарян – також метод збагачення, але застосовується насичений розчин NaNO 3 (1,38 густина). Більшість яєць спливає, не потрібне дослідження осаду. Недолік - тривале витримування яєць у розчині, що призводить до того, що деякі яйця починають набухати і осідати на дно, зникаючи з поверхневої плівки.

3. Метод Горячова - заснований на принципі осадження яєць, виявлення дрібних яєцьтрематод. Як розчин використовують насичений розчин NaCl і зверху обережно нашаровують 3-4 мл розчину фекалій. Через 15-20 годин яйця трематод осідають на дно. Рідину зливають, осад на предметне скло та під мікроскоп.

4. Метод закручування за Шульманом – для виявлення у калі личинок гельмінтів. Досліджують лише свіжовиділені фекалії. 2-3 г поміщають у скляну банку та доливають 5-кратну кількість води, швидко розмішують паличкою, не торкаючись стінок банки – 20-30 хвилин, потім паличку швидко виймають, і краплю рідини на кінці переносять на предметне скло та мікроскопують.

5. Метод Бермана - заснований на здібності, личинок гельмінтів мігрувати, у напрямку тепла, і служить для виявлення їх у фекаліях.

6. Метод Харада та Морі (метод вирощування личинок) та рекомендується для дослідження на анкілостомітози. Метод заснований на тому, що в теплі та на вологому фільтрованому папері з яєць анкілостомід розвиваються філярієподібні личинки, які легко можна виявити. На середину смужки фільтрованого паперу наносять 15 г калу, папір з фекаліями поміщають у банку, щоб нижній кінець був занурений у воду, а верхній закріплений пробкою. Банку витримують у термостаті 28 0 С протягом 5-6 днів. Філярієподібні личинки розвиваються за цей час і спускаються у воду. Рідину досліджують під лупою. Якщо важко виявити, рідину центрифугують, попередньо вбивши личинок нагріванням до 60 0 . Лаборант повинен працювати у рукавичках.

7. Методи на ентеробіоз - Виявлення яєць гостриці та бичачого ціп'яка.

а) зішкріб з періанальних складок – ватним тампоном, туго намотаним на дерев'яну паличку та змочену 50% розчином гліцерину. У лабораторії тампон змивають 1-2 краплями 50% водним розчином гліцерину.

б) метод липкої лепти (метод Грехема)

Липку стрічку прикладають до періанальних складок, потім липким шаром до предметного скла та мікроскопують.

В) зіскрібок за допомогою очних паличок (метод Рабіновича). Для періанального зіскрібка використовують скляні очні палички, широка частина яких покривається спеціальним клеєм, що дозволяє утримувати яйця гостриків.

Дослідження крові, жовчі, мокротиння та м'язів

Мікроскопія крові – виявляють личинки філярій.

Дослідження мокротиння – яйця параганіма, личинки аскариди, деяка, стронгілоїда, елементи ехінококового міхура.

Дослідження м'язів – при підозрі на трихінельоз досліджують м'язи хворого або трупа, а також м'ясо, що ймовірно спричинило зараження людини. З метою трихінелоскопії м'яз розрізають на дрібні шматочки і поміщають у компресорій, це два широкі, товсті скла, які роздавлюють м'язи і личинки трихінели виявляються у вигляді капсул - метод компресії.

Метод перетравлення – м'язи заливають штучним шлунковим соком (розчин соляної кислотита пепсин). М'язи перетравлюються, а личинки легко виявляються. Визначення інтенсивності інвазії: кількість личинок до 200 на 1 г м'язової тканини- Помірна інтенсивність інвазії; до 500 – інтенсивна; понад 500 – надінтенсивна інвазія.

Серологічні методи

Гельмінтологічні методи досліджень. Методи діагностики гельмінтозів поділяють на прямі, засновані на безпосередньому виявленні самих гельмінтів або їх фрагментів, а також личинок і яєць гельмінтів (методи дослідження фекалій, сечі, жовчі та дуоденального вмісту, мокротиння, крові та тканин, матеріалу, отриманого при зіскрібці з пери піднігтьових просторів), і непрямі, за допомогою яких виявляють вторинні зміни, що виникають в організмі людини в результаті життєдіяльності гельмінтів (дослідження морфологічного складу крові, імунологічні методи діагностики гельмінтозів, рентгенологічні дослідженняі т.д.). З прямих методів найбільш поширені копрологічні, які поділяються на макро- та мікрогельмінтоскопічні. У окремих випадках використовують спеціальні методи.

Макрогельмітоскопічні методи дослідженняспрямовані на пошуки гельмінтів або їх фрагментів (сколексів, члеників, частин стробіл цестод). Їх застосовують для діагностики тих гельмінтозів, при яких яйця не виділяються з екскрементами хворого або виділяються в невеликій кількості і не завжди (наприклад, при ентеробіоз у фекаліях виявляють гострики, при теніїдозах - членики).

Для виявлення у фекаліях гостриків чи члеників цестод проводять перегляд фекалій неозброєним оком. Для диференціальної діагностикиТенідоз рекомендується перегляд розріджених водою фекалій окремими невеликими порціями в чорних фотографічних кюветах або в чашках Петрі на темному тлі. Великі утворення, підозрілі на фрагменти гельмінтів, розглядають під лупою між двома предметними шибками. Якщо ж по клінічним показаннямприпускають виявлення дрібних гельмінтів або голівок цестод після лікування, то підозрілі частки розглядають під лупою в краплі гліцерину, а в разі потреби і під мікроскопом.

Мікрогельмінтоскопічні методи дослідження(якісні) спрямовані на виявлення яєць та личинок гельмінтів. Застосовують метод товстого мазка з целофановою покривною платівкою за Като. Суміш Като складається з 6 мл 3% водного розчину малахітової зелені, 500 млгліцерину та 500 мл 6% розчину фенолу. Платівки по Като (гідрофільний целофан розрізають на частини розміром 20 40 мм) занурюють на 24 году суміш Като так, щоб вони прилягали один до одного (3-5 млрозчину Като на 100 платівок). 100 мгфекалій наносять на предметне скло, накривають целофановою покривною пластинкою по Като і придавлюють так, щоб фекалії розмазалися по предметному склу в межах целофанової пластинки. Мазок залишають за кімнатної температури для освітлення на 40-50 хв,після цього переглядають під мікроскопом. У жарку пору року щоб уникнути висихання препарату на пластинку приготовленого препарату кладуть вологу губку.

Для повного виявлення гельмінтів всіх видів метод товстого мазка з целофановою покривною платівкою за Като необхідно використовувати у поєднанні з одним із методів збагачення. Найбільш поширеними є метод Калантарян і метод Фюллеборна.

Метод Калантарян: у склянках із широким горлом об'ємом 100 млретельно розмішують скляною паличкою. гфекалій, поступово доливаючи насичений розчин нітрату натрію. кгазотнокислого натрію на 1 лводи при кип'ятінні) до країв склянки. Великі частинки, що спливли на поверхню, видаляють паперовим совочком. До поверхні сольового розчину прикладають предметне скло (сольовий розчин додають до повного дотику суміші з предметним склом). Через 20-30 хвпредметне скло знімають та плівку переглядають під мікроскопом. За відсутності цієї солі можна використовувати насичений розчин кухонної солі за Фголлеборном (400 гсолі в 1 лводи при кип'ятінні).

У зв'язку з тим, що яйця мають великий питома вага(непліднені яйця аскарид, яйця трематод та великих цестод), не спливають, крім дослідження поверхневого шару рідини, при використанні методу Фюллеборна необхідно переглянути під мікроскопом 2-4 препарати з осаду.

Спеціальні лабораторні методи досліджень різних гельмінтози.

Для виявлення фрагментів гельмінтів фекалії переглядають неозброєним, потім змішують з водою та досліджують невеликими порціями у чашці Петрі на темному тлі. Усі підозрілі частинки поміщають на предметне скло у краплю води та досліджують під лупою. Можна добову порцію помістити в циліндр із додаванням 5-10-кратної кількості води. Після розмішування посудину залишають до повного осадження завислих частинок. Поверхневий шаррідини зливають та наливають чисту воду. Відмитий осад проглядають невеликими порціями в неозброєним оком або під лупою. Для виявлення яєць застосовують мікроскопічні методи дослідження.

Метод нативного мазка. Невелика кількість калу з різних місцьдосліджуваної порції розтирають на предметному склі в краплі 50% розчину гліцерину, ізотонічного розчину натрію хлориду або води. Суміш накривають покривним склом та переглядають під мікроскопом.

Метод випливання по Фюлеборну. Одну частину випорожнень розмішують у 20 частинах насиченого розчину хлориду натрію (питома вага 1,18), що додається невеликими порціями. Великі частинки, що спливли на поверхню, негайно видаляють, а суміш залишають на 45 хв. Протягом цього часу яйця гельмінтів, що мають меншу питому вагу, ніж розчин натрію хлориду, спливають на поверхню. Поверхневу плівку знімають дротяною петлею діаметром близько 1 см і переносять на предметне скло для дослідження під мікроскопом.

Метод Калантарян. Ефективність методу випливання підвищується при заміні хлориду натрію насиченим розчином азотнокислого натрію. В цьому випадку суміш витримують 10-15 хв.

Поверхневу плівку, що утворюється після відстоювання суміші калу з розчином натрію хлориду або азотнокислого натрію, можна знімати і предметним склом. З цією метою баночку, налиту до країв сумішшю випорожнень з розчином солі, накривають предметним склом так, щоб нижня його поверхня стикалася з рідиною. Після відстоювання скло знімають і швидко повернувши догори поверхнею, на якій знаходиться плівка, переглядають під мікроскопом.

Зішкріб сперіанальних складок (для виявлення яєць гостриків і онкосфер бичачого ціп'яка) роблять вранці до туалету. Дерев'яним шпателем, змоченим у воді або в 50% розчині гліцерину, виробляють зіскоблювання навколо анального отвору. Отриманий матеріал переносять на предметне скло у краплю води або 50% розчину гліцерину та переглядають під мікроскопом. Шпатель можна замінити вологим ватним тампоном, яким протирають періанальну область, потім добре прополіскують у воді. Воду центрифугують і досліджують осад під мікроскопом.

Метод Берманна (для виявлення личинок). Металеву сітку з нанесеними на неї 5-6 г фекалій зміцнюють на скляній вирві, вставленій у штатив. На нижній кінець вирви надягають гумову трубку із затискачем. Вирву наповнюють водою, підігрітою до t° 50°, так, щоб Нижня частинасітки з фекаліями стикалася з водою. Личинки активно переходять у воду і накопичуються у нижній частині гумової трубки. Через 4 години рідину спускають центрифужні пробірки, центрифугують і осад переглядають під мікроскопом.

Аналіз мокротиння, носового слизу та вагінальних виділеньдля виявлення яєць легеневої трематоди парагонімусу, личинок аскарид та анкілостомід, яєць гостриків, фрагментів ехінококового міхура. Досліджувану порцію слизу (виділень) намазують на скло та переглядають на чорному та білому тлі макроскопічно, а потім під мікроскопом. Можна додати до досліджуваного матеріалу 25% розчин антиформіну, ретельно збовтати і витримати 1-1,5 години для розчинення слизу. Суміш центрифугують і досліджують осад під мікроскопом.

Аналіз дуоденального та шлункового сокудля виявлення яєць печінкових трематод, анкілостомід, личинок Strongyloides. Всі три порції дуоденального вмісту, отримані при центрифугують, і осад досліджують під мікроскопом. Також досліджують і .

Дослідження тканин. Для виявлення личинок трихінелл шматочки біопсованого м'яза ретельно розщеплюють на волоконця, здавлюють між компресорним склом (товсте скло з гвинтами) і досліджують під мікроскопом із затіненим світлом. Для виявлення цистицерків м'язи розшаровують препарувальними голками, виділений пляшечку очищають від навколишньої тканини, здавлюють між двома предметними склом і досліджують під лупою.

Аналіз крові (для виявлення личинок філярій). Досліджують висячу краплю на покривному склі, окантованому вазеліном. Можна 0,3 мл крові змішати з 10-кратною кількістю 3% розчину. Суміш центрифугують і досліджують осад під мікроскопом. Для збагачення препаратів до 1 мл венозної кровідодають 3 мл 2% розчину формаліну або 5-кратну кількість рідини, що складається з 95 мл 5% розчину формаліну, 5 мл оцтової кислоти та 2 мл концентрованого спиртового розчинугематоксиліну. Суміш центрифугують, осад промивають водою дистильованою шляхом і досліджують під мікроскопом. Для диференціювання різних видівФілярій досліджують мазки, забарвлені за методом Гімзи – Романовського.

Методи імунологічної діагностики. Застосовують (аглютинації, зв'язування комплементу) та алергічні діагностичні проби (див.) з відповідного виду гельмінта.

гельмінтологічні методи дослідження. Мал. Яйця гельмінтів. 1-10 – яйця круглих хробаків(нематод): 1 – 3 – аскариди (1 – запліднене яйце, 2 – запліднене яйце без білкової оболонки, 3 – незапліднене яйце); 4 - аскариди котячої; 5 -аскариди м'ясоїдних; 5-гострики; 7 - волосоголовець; 8 – томінксу; 9 - анкілостомід; 10 - трихо-стронгілід. 11-15 - яйця стрічкових хробаків(цестод): 11 - ціп'янка бичачого; 12 - ціп'яка карликового; 13 - ціп'яка щурячого; 14 - ціп'яка гарбузового; 15-стрічка широкого. 16 - 24 - яйця сисунів (трематод): 16 - трематоди (шистосоми) японської; 17 - трематоди (шистосоми) сечі - статевий; 18 – трематоди (шистосоми) Мансона; 19 - трематоди (парогонімус) легеневої; 20 - трематоди (описторхіс) сибірської (котячої); 21 - трематоди (клонорхіс) китайської; 22 – трематоди (метагонімусу) кишкової; 23 - трематоди (фасциоли) печінкової; 24 - трематоди (дикроцеліум) ланцетоподібної.

Ефективним та зручним методом гельмінтологічного дослідження є вивчення товстого мазка по Като, Суть якого полягає у виявленні яєць гельмінтів в товстому мазку фекалій, просвітлених гліцерином і підфарбованих малахітовою зеленню. Склад суміші Като – 6 мл 3% водного розчину малахітової зелені, 500 мл гліцерину, 500 мл 6% розчину фенолу. Розчин стабільний, може зберігатись при кімнатній температурі. Для приготування препаратів шматочки фекалій завбільшки з горошину наносять на предметне скло, покривають плівкою гідрофільного целофану, витриманого в суміші Като протягом 24 год, і придавлюють його до скла рівномірного розподілуматеріалу. Просвітлені протягом 40-60 хв мазки мікроскопують. Підраховують виявлені яйця гельмінтів і морфологічними ознакамивизначають їх видову приналежність. Метод дозволяє виявити яйця аскарид, волосоголовець, цестод, трематод, меншою мірою - анкілостомід і карликового ціп'яка.

Широко застосовуються також методи збагачення. Принцип флотаційних методів полягає у суспендуванні фекалій у сольовому розчині, що має велику відносну щільність у порівнянні з яйцями гельмінтів, внаслідок чого вони виринають на поверхню. Під мікроскопом досліджується вміст поверхневої плівки. Як збагачувальні суміші використовують розчини: кухонну сіль- 400 г на 1 л води (відносна щільність по Фюлеборну -1,18); азотнокислий натрій - 1 кг в 1 л води (відносна щільність по "Калантарян-1,38); азотнокислий натрій - 900 г та азотнокислий калій - 400 г в 1 л води (відносна щільність по Брудастову та Красноносу-1,48). розчини кип'ятять та охолоджують.
Для дослідження вносять 5-10 г фекалій у скляну або фаянсову склянку, додають до неї 100-200 мл сольового розчину і ретельно розмішують. Потім видаляють великі частки, що спливли, дерев'яним шпателем або совочком з паперу або картону і відразу ж прикладають до поверхневої плівки широке предметне скло так, щоб сольовий розчин і предметне скло повністю стикалися. Після 30-40-хвилинного відстоювання суміші знімають предметне скло, кладуть під мікроскоп плівкою догори і ретельно переглядають всю поверхню. Щоб уникнути висихання, можна додати 2-3 краплі 50% розчину гліцерину. Поверхневу плівку можна знімати також дротяною петлею. Ефективність флотаційних методів підвищується зі збільшенням відносної щільності сольових розчинів. За допомогою цих методів можна виявляти яйця нематод, цестод та трематод.

Для виявлення яєць у фекаліях застосовують метод седиментації за Красильниковим.. Фекалії змішують з 1% розчином детергенту ( пральний порошок"Лотос" та ін.) у співвідношенні 1:10 до утворення суспензії. Під впливом детергенту розчиняються різні компоненти фекалій (білки, жири, тканинні елементи). Через 30 хв вміст пробірки струшують протягом 1-2 хв, після чого центрифугують 5 хв. З осаду готують препарати та переглядають під мікроскопом.
У польових умовах, і навіть при масових обстеженнях населення ураженість гельмінтами зручно застосовувати метод товстого мазка по Като. У стаціонарних умовпри обстеженні хворих краще використовувати найбільш ефективні флотаційні методи. При використанні цих методів під час мікроскопії доцільно підраховувати виявлені у препараті яйця. При дотриманні стандартності навішування або об'єму, взятих для дослідження фекалій (наприклад, 1 чайна або столова ложка), і єдиного єдиного обсягу сольових розчинів можна орієнтовно судити про інтенсивність інвазій. Цей кількісний облік може бути корисним при обґрунтуванні призначеного лікування та оцінці ефективності проведеної дегельмінтизації. Крім того, для встановлення інтенсивності інфекції можуть бути використані інші більш точні кількісні методизокрема метод Столла.

Для діагностики теніарингоспу та ентеробіозузастосовують метод дослідження періанально-ректальних зіскрібків. Дерев'яним шпателем, змоченим у 50% розчині гліцерину, роблять зіскрібок з періанальних складок вранці до дефекації в колі заднього проходуі нижніх відділівпряма кишка. Отриманий матеріал, очищений зі шпателя краєм покривного скла, поміщають на предметне скло до краплі 50% розчину гліцерину, накривають покривним склом та досліджують під мікроскопом. Можна також дослідити смужку целюлозної стрічки, яку спочатку притискають клейкою стороною до пернальних складок, потім поміщають на предметне скло і мікроскопують.

Виявлення личинок нематод у фекаліях за методом Бермана. Метод ґрунтується на термотропній властивості личинок. Для дослідження беруть 1 столову ложку фекалій, поміщають в металеву сітку або сітку з кількох шарів марлі на дротяному каркасі. Сітку встановлюють у вирву, укріплену в штативі. До лійки приєднується гумова трубка із затискачем. Піднявши сітку, лійку заповнюють водою (температура +40°...+50°С) так, щоб нижня частина сітки була занурена у воду. Личинки з фекалій активно мігрують у теплу водуі, осідаючи, накопичуються в нижній частині вирви. Через 2-4 години затиск відкривають, воду спускають в центрифужну пробірку і центрифугують протягом 2-3 хв. Потім зливають надосадову рідину, осад переносять на предметне скло і переглядають під мікроскопом, де шукають рухливі личинки збудника стронгілоїдозу.

Метод Харада та Морі дозволяє диференціювати личинки анкілостом та некаторами. Личинки анкілостомід культивують на фільтрувальному папері. З цією метою 0,5 г свіжих фекалій, взятих у хворого не пізніше ніж через 1 годину після дефекації, наносять на смужки фільтрувального паперу, розміром 12X1,5 см, залишаючи обидва кінці смужки чистими. Один кінець смужки занурюють у пробірку, четверта частина якої заповнена водою, а інший затискають пробкою. Пробірки ставлять у термостат за нормальної температури +26... + 28°С. Личинки, що розвинулися з яєць, опускаються по фільтрувальному паперу і осідають на дно пробірки. Через 5-6 днів смужку паперу видаляють, а рідину, що залишилася в пробірці, досліджують під лупою або центрифугують. Осад, що утворився при центрифугуванні, досліджують під світловим мікроскопом. При використанні замість пробірок чотиригранних скляних банок(Розміром 15ХЮХ7 см), до стінок яких прикріплюють по 4 паперові смужки, ефективність аналізів підвищується (Г. М. Маруашвілі з співавт., 1966).

Методи дослідження на шистосомози . Дослідження фекалій - порцію фекалій змішують з 250 мл води, проціджують через 3 шари марлі в конічний посуд, який наповнюють доверху водою. Через 30 хв шар рідини зливають, до осаду доливають свіжу порцію води. Осад промивають до отримання прозорої надосадової рідини та мікроскопують.

Метод лярвоскопії - в колбу Ерленмейєра з напаяною збоку скляною трубочкою, спрямованою вгору, поміщають 20-25 г фекалій і промивають водопровідною водою. Потім колбу накривають темним папером, залишивши світла напаяну скляну трубочку при температурі +25...+30°С. Мирацидії, що вилупилися, концентруються у меніска в бічній трубочці, де їх можна бачити за допомогою лупи або неозброєним оком. Дослідження сечі -100 мл сечі, зібраної в період між 10 год. ранку і 14 год. дня, або добову порцію відстоюють, а потім центрифугують при 1500 об/хв. Отриманий осад наносять на предметне скло і мікроскопують. ВООЗ рекомендує метод фільтрування всієї порції сечі. Після фільтрування фільтри обробляють формаліном або підігрівають (щоб вбити яйця), а потім зволожують водним розчиномнінгідрину. У підсушених препаратах зародки яєць набувають фіолетового забарвлення.

Застосування імунологічних методів дослідження для діагностики шистосомозів пов'язано з труднощами, так як дорослі шистосоми та їх яйця містять велику кількість антигенів, що викликають імунні реакції, які є видоспецифічними (Д. Бредлі, 1979).

У нашій країні для постановки імунологічних реакційпри гельмінтозах випускається цілий рядстандартних діагностикумів. Практичне застосуваннямають алергічна шкірна пробана ехінококоз і альвеококоз, РЛА з ехінококовим антигеном, РСК на холоді, реакція преципітації на холоді в різних модифікаціях (кільцева преципітація, преципітація в пробірках або капілярах, які ставляться з трихінельозним, цистицерсказним і містицеркозним. Стандартні діагностикуми для встановлення вищезгаданих серологічних реакцій виготовляються підприємствами з виробництва бактерійних препаратів. До діагностикумів, що випускаються, підприємство-виробник додає докладні інструкціїпро правила зберігання, терміни придатності препарату та настанови щодо застосування відповідних антигенів з технікою постановки реакції.

У Останніми рокамиПерелік серологічних реакцій, які застосовуються для діагностики гельмінтозів, значно розширився. З цією метою використовуються наступні реакції: РІГА, непрямої імунофлюоресценції (РІФ), імунодифузії в гелі (РІД), зустрічного імуноелектрофорезу (ВІЕФ), РЕМА. Ці реакції можуть використовуватися при аскаридозі, токсокарозі, трихінельозі, анкілостомідозі, філяріатозах, ехінококозі та альвеококкозі, опісторгозі, шистосомозі, парагонімозі. Однак для цих реакції в нашій країні не випускаються стандартні діагностикуми і не регламентована техніка їх постановки. Окремі лабораторії, в основному наукові, готують самостійно специфічні антигени та застосовують їх у різних модифікаціях. Опис цих методів широко представлено в літературі і не є суворо уніфікованим. Інтерпретація даних імунологічного аналізу повинна ґрунтуватися на вивченні динаміки імунної відповіді з урахуванням рівня специфічності та чутливості кожної застосовуваної серологічної реакції. Тому при постановці діагнозу, а також при сероепідеміологічних обстеженнях населення доцільно користуватися кількома найбільш чутливими реакціями. З цих позицій добре зарекомендували себе реакції ВІЕФ та РЕМА, які відрізняються високою чутливістюі досить високою специфічністю (П. Амбруаз-Тома, 1978; І. Є. Балад, 1979; Г. М. Негряну, 1980; А. М. Пономарьова, 1981; А. Я. Лисенка, 1978 та ін). Ефективність РЕМА перевірена при амебіазі, лейшманіозі, трипаносомозі та токсоплазмозі (Г. А. Єрмолін, 1980).