Реакція преципітації механізм реакції на відміну реакції. Реакція преципітації (імунологічний метод)
Що полягає у взаємодії розчинного антигену з антитілом з наступним випаданням дрібнозернистого осаду (преципітату).
Реакція преципітації дозволяє визначити в досліджуваному матеріалі наявність невідомого антигену шляхом додавання відомого антитіла або за допомогою відомого антигену - невідоме антитіло. Преципітація йде гіршевідсутність солей. Оптимум преципітації перебуває у діапазоні рН=7,0-7,4.
Механізм преципітації близький до механізму аглютинації. Під впливом імунної, що прореагувала з антигеном, зменшується ступінь його дисперсності. Необхідно, щоб сироватка та антиген були абсолютно прозорі. При постановці преципітації можна одного розведення сироватки додавати різні розведення антигену чи навпаки.
Преципітація реєструється краще, якщо антиген нашарувати у пробірці на антитіло. При цьому спостерігається поява преципітату у вигляді кільця – кільцепреципітація. Кільцепреципітацію проводять у спеціальних пробірках діаметром 2,5-3,5 мм. Для визначення числа антигенів у досліджуваному матеріалі або різних антитіл у сироватці користуються реакцією преципітації в агарі: 1% освітлений агар розливають або на предметні скла. У різні лунки, виготовлені в агарі, наливають розчини антигену і антитіла, які дифундують назустріч один одному, утворюючи лінії преципітації. Реакція преципітації широко використовується при діагностиці (див. Асколі реакція).
Преципітація в агар дозволяє визначати токсигенність дифтерійних культур.
У судово-медичних дослідженняхПреципітація служить для встановлення видової приналежності крові, органів та тканин за допомогою специфічних преципітуючих сироваток.
Преципітація – реакція осадження комплексу антигену (преципітіногену) та антитіла (преципітину). Преципітація - один із імунологічних феноменів, що дозволяють визначити вміст антитіл (див.) у сироватці крові хворих або вакцинованих людей, а також у крові імунізованих тварин. При використанні стандартних сироваток реакція преципітації може бути застосована для титрування різних за походженням розчинних антигенів (див.).
При найпростішій формі постановки реакції преципітації до ряду пробірок з постійною кількістю антигену додають підшаруванням сироватку досліджувану в серії кратних розведень. Після 30-60 хв. інкубації при кімнатній температурі на межі двох рідин утворюється кільце помутніння - кільцепреципітація. Мінімальна кількість сироватки, що дає реакцію преципітації, беруть за титр антисироватки. При зворотній постановці реакції зі стандартною антисироваткою вдається оцінити відносну концентрацію антигену різних біологічних рідинах.
Результати титрування антитіл та антигенів на підставі вищезгаданого методу не мають абсолютного кількісного виразу. З метою кількісної оцінки вмісту антитіл Гейдельбергер, Кабат (М. Heidelberger, Е. Kabat) та ін. кількісний методреакції преципітації, основу якого лежить виявлення звані зони еквівалентності. При змішуванні вікових кількостей антигену з постійними обсягами антисироватки кількість преципітату, що утворюється, спочатку зростає, а потім знову знижується через збільшення розчинності комплексу антиген - антитіло в надлишку антигену. Якщо визначити у всіх пробірках вміст антитіл у надосадовій рідині, то виявиться, що в середніх пробірках ряду або навіть у єдиній пробірці антитіл у надосадовій рідині немає; разом з тим тут же утворюється найбільший за величиною преципітату. Оскільки в зоні еквівалентності преципітату втягується також весь антиген, введений в суміш реагуючих речовин, після віднімання з кількості білка преципітату білка антигену отримують точну величину вмісту антитіл в даному обсязі випробуваної сироватки. Вміст білка преципітату після ретельного промивання охолодженим фізіологічним розчином визначають азотом або яким-небудь колориметричним методом.
Оцінюючи значення реакції преципітації як діагностичного методунеобхідно враховувати, що в імунних сироватках можуть бути антитіла, що не мають властивостей преципітинів і, отже, не утворюють преципітату при взаємодії з антигеном. До них відносяться насамперед неповні антитіла, а також деякі інші антитіла, що належать до групи гамма-А-глобулінів.
Здатність антисироватки преципітувати антиген може бути порушена нагріванням до 65-70°, обробкою органічними розчинниками, відновленням у кислому середовищі [Ізлікер (Н. Isliker), А.Я. Кульберг]. Феномен преципітації з антисироваткою, що свідомо містить преципітини, можливий лише за певної температури, концентрації солей та водневих іонів. Найшвидше реакція преципітації протікає при 25-37 °. Неодмінна умова утворення преципітату - присутність в ізотонічних концентраціях натрію хлориду (0,85% розчину NaCl). При збільшенні концентрації NaCl до 15% преципітати, утворені полісахаридною антигеном, частково розчиняються, чим можна скористатися для вилучення чистих антитіл. Реакція преципітації з антигенами білкової природи протікає з однаковою швидкістю і повнотою як 0,85%, так і 15% розчинах NaCl. Оптимальна для освіти преципітату концентрація водневих іонів відповідає значенням рН від 5,0 до 9,0.
У лабораторній практиці застосовують різні модифікації реакції преципітації. Зокрема, реакцію термопреципітації застосовують для виявлення антигенів бактерій сибірки, ботулізму та ін, що не піддаються термічній денатурації (коктоантигени). Ця реакція відрізняється від реакції кільцепреципітації тільки тим, що як антиген використовують фільтрат прокип'яченого досліджуваного матеріалу (див. А сколі реакція).
Під час аналізу за допомогою реакції преципітації складної суміші антигенів неможливо охарактеризувати властивості окремих компонентів суміші. Для вирішення цього завдання вдаються до методів преципітації в агарі та до імуноелектрофорезу. Метод преципітації в агарі у найбільш поширеній модифікації Оухтерлоню (О. Ouchterlony) заснував на тому, що антиген і антисироватка, дифузуючи назустріч один одному в тонкому шарі агару, утворюють при зустрічі лінії преципітації. За кількістю таких ліній можна будувати висновки про кількості компонентів, які у цій суміші антигенів. Метод Оухгерлоню дозволяє порівнювати різні антигенні суміші та визначати ступінь спорідненості присутніх у них компонентів. При аналізі складної антигенної суміші, що містить речовини з однаковими швидкостями дифузії в агарі, велику допомогуможе принести метод імуноелектрофорезу. Суміш антигенів попередньо поділяють в електричному полі в пластинці агару, після чого виявляють окремі компонентиантисироваткою. Антисироватку вносять у ровик, виконаний в агарі паралельно лінії, вздовж якої переміщалися при електрофорезі антигени. Кожен із антигенів дає з антисироваткою індивідуальну дугу преципітації. Імуноелектрофорез широко застосовують для аналізу патологічних відхиленьу білках сироваток, а також при імунологічному аналізі тканинних та бактеріальних антигенів.
Преципітація у судово-медичному відношенні. Преципітація застосовується в судовій медицині для встановлення видової приналежності крові, частин органів та тканин. У ряді слідчих справ потрібно встановити видову приналежність крові, виявленої на гарматах скоєння злочину, одязі злочинця чи жертви та інших. Для реакції преципітації застосовують преципітуючі сироватки, одержувані імунізацією кроликів, півнів, кіз білками різних тварин. Зазвичай виготовляють сироватки, що преципітують білок людини, коні, кішки, курки, свині, собаки, рогатої худоби. Вони повинні мати титр не нижче 1:10 000 і бути досить специфічними. З досліджуваної плями або скоринки крові готують витяжки на фізіологічному розчині, які потім випробовують сироватками, що преципітують. Вид білка вважається встановленим, якщо одна з преципітуючих сироваток утворює преципітату з витяжкою з крові, що досліджується, при відповідній контрольній реакції. Реакцією преципітації можна встановити вид білка тканин і органів людини або тварин. Зазвичай реакцію преципітації роблять у пробірках з конусоподібним кінцем. При отриманні каламутних витяжок реакцію преципітації виробляють в агарі по Оухтерлон.
Реакція преципітації (РП) – це осадження розчинного антигену при дії антитіл у присутності електроліту. Видимий ефект реакції (феномен преципітації) - помутніння (Утворення каламутного кільця або осаду – преципітату).
РП застосовують для виявлення невідомого антигену при низці інфекційних захворювань: при сибірці, туляремії, менінгіті, віспі. У судовій медицині її використовують визначення видової приналежності крові, сперми; у санітарно-гігієнічних дослідженнях – для встановлення фальсифікації харчових продуктів. РП відрізняється дуже високою чутливістюі дозволяє виявити антиген у розведенні 1:1 000 000 та 1: 10 000 000.
Компоненти реакції преципітації.
1. Антиген (преципітіноген) -це антиген молекулярної природи, що знаходиться в дрібнодисперсному (розчинному) стані. Преципітіногени - це різні лізати або екстракти тканин та ін. Преципітіноген відрізняється від аглютиногену розміром частинок антигену. Аглютиногенмає розміри клітин(це не зруйновані цілі клітини), а розміри преципітіногенусумірні з розмірами молекул(Це білки та їх комплекси з вуглеводами або ліпідами). Розчин преципітіногену прозорий.
2. Антитіла (преципітіни)знаходяться в сироватці крові людини або в імунних діагностичних сироватках, які містять відомі антитіла.
3. Електроліт- Ізотонічний розчин хлориду натрію.
Одержання преципітиногену.
Отримують шляхом подрібнення матеріалу та вилучення з нього білкових антигенів кип'ятінням або іншими способами.
Приклади преципітіногенів: лізати або екстракти різних органіві тканин, чужорідна сироватка крові (сироватка - це розчин, в першу чергу, різних білків),фільтрати бульйонних культур мікробів, сольові екстракти мікробів, аутолізати та ін.
Одержання преципітуючих сироваток.
Отримують шляхом гіперімунізації кроликів відповідними преципітіногенами. Такі сироватки містять антитіла до преципітиногенів, якими імунізували кроликів.
Приклади преципітуючих сироваток: преципітуюча сибірка сироватка (містить антитіла до антигенів збудника сибірки), преципітуюча протименінгококова сироватка(містить антитіла проти антигенів збудника менінгіту) та ін.
Титрпреципітуючої сироватки - це найбільше розведення преципітіногену, при якому сироватка ще дає реакцію преципітації.
Методи постановки РП.
1. Реакція кільцепреципітації -проводиться у спеціальних преципітаційних пробірках (діаметр – 0,4-0,5 см, висота – 7-8 см). У пробірку вносять 0,2 - 0,3 мл сироватки, що преципітує, і по стінці довгим носиком пастерівської піпетки обережно нашаровують таку ж кількість преципітиногену. Потім обережно із горизонтального положення пробірки ставлять вертикально.
Облік результатів реакції проводять за появою білого кільця на межі антиген-антитіло. При позитивній реакції спостерігається утворення такого кільця. В цьому випадку антиген відповідає антитілу і відбувається їхнє зв'язування.
Якщо як преципітиноген використовують прокип'ячені і профільтровані водні екстракти органів і тканин, то реакція називається реакцією термокільцепреципітації (Наприклад, при діагностиці сибірки).
2. Реакція преципітації в гелі –проводиться в чашках Петрі або на предметному склі, куди поміщають шар агарового гелю. При застиганні гелю в ньому вирізують лунки, в які поміщають антигени або антитіла, або те й інше. Розрізняють 2 методиРП у гелі:
а) метод простий (радіальної) імунодифузіїодин з компонентів реакції імунітету (антиген або антитіло) поміщають у лунку, а інший компонент – змішують з агаром; при позитивному результаті (антиген відповідає антитілу) навколо лунки утворюється кільце преципітату ;
б) метод подвійний імунодифузії: антитіло і антиген поміщають в окремі лунки, вони дифундують в агаровом гелі назустріч один одному; при позитивному результаті на місці зустрічі антитіла та антигену утворюються лінії преципітації .
Прикладом РП у геліє реакція подвійної імунодифузії по Оухтерлоні при діагностиці дифтерії
Імуноелектрофорез –це метод, який поєднує метод електрофорезу та реакцію преципітації. Суміш антигенів (наприклад, білків сироватки крові) поділяється в гелі за допомогою електрофорезу. Потім, щоб знайти і визначити потрібний білок (невідомий антиген), використовують діагностичну сироватку, що містить преципітуючу, яка містить антитіла до цього білку (відоме антитіло). Для цього в канавку паралельно білкам вноситься діагностична сироватка. Якщо серед білків є той, який відповідає антитілу, що знаходиться в сироватці, навколо нього утворюються лінії преципітації.
Реакція преципітації- РП (відлат. praeci-pito- осаджувати,) - це формування та осадження комплексу розчинного молекулярного антигену з антитілами у вигляді помутніння, званого преципітатом.Він утворюється при змішуванні антигенів і антитіл в еквівалентних кількостях; надлишок одного з них знижує рівень освіти імунного комплексу. На відміну від реакції аглютинації антигеном для реакції преципітації є розчинні сполуки, величина частинок яких наближається до розмірів молекул. Це можуть бути білки, комплекси білків з вуглеводами та ліпідами, бактеріальні екстракти, різні дизати або фільтрати бульйонних культур мікробів. Антитіла, що у реакції преципітації, називають преципітинами. дрібнодисперсний комплекс, що утворюється, антиген - антитіло виявляється при певних методах постановки реакції преципітації.
Реакцію кільцепреципітації запропоновано вперше Асколі. Її використовують при діагностиці сибірки, чуми, туляремії, менінгіту. Метод простий та доступний.
У вузькі преципітаційні пробірки розливають специфічну імунну сироватку, що преципітує, і на неї дуже обережно нашаровують антиген. Як антиген беруть, наприклад, при діагностиці сибірки шматочки шкіри, вовни, шкіри загиблої тварини та ін. Їх кип'ятять, рідину фільтрують і використовують як антиген. Поява на межі двох рідин кільця – преципітату свідчить про наявність відповідного антигену.
Реакція преципітації в агаровому гелі або метод дифузійної преципітації дозволяє детально вивчити склад складних водорозчинних антигенних сумішей. Для постановки реакції використовують гель (напіврідкий або густіший агар). Кожен компонент, що входить до складу антигену, дифундує назустріч відповідному антитілу з різною швидкістю. Тому комплекси різних антигенів і відповідних антитіл розташовуються в різних ділянкахгелю, де й утворюються лінії преципітації. Кожна з ліній відповідає лише одному комплексу антиген – антитіло. Реакцію преципітації ставлять зазвичай за кімнатної температури.
Метод імуноелектрофорезу отримав широке розповсюдженняв Останніми рокамищодо антигенної структури мікробів. Комплекс антигенів поміщають у луночок, який знаходиться в центрі агарового гелю, залитого на платівку. Потім через агаровий гель пропускають електричний струм, внаслідок чого різні антигени, що входять до комплексу, переміщаються в поле електричного струмузалежно від їхньої електрофоретичної рухливості. Після закінчення електрофорезу траншею, розташовану по краю пластинки, вносять специфічну імунну сироватку і поміщають у вологу камеру. У місцях утворення комплексу антиген – антитіло з'являються лінії преципітації.
Реакції преципітації ставлятьу пробірках (Реакція кільцепреципітації),в гелях, живильних середовищах та ін. Широке розповсюдження отрималирізновиди реакції преци-пітації в напіврідкому гелі агару або агарози: подвійна імунодифузія по Оухтерлоні. радіальна імунодифузія, імуноелектрофорезта ін
Реакція радіальної імунодифузії. Імунну сироватку з розплавленим агаровим гелем рівномірно наливають на скло. Після застигання в гелі роблять лунки, в які поміщають антиген у різних розведеннях. Антиген, диф-фундуючи в гель, утворює з антитілами кільце- зони преципітації навколо лунок (рис. 13.7). Діаметр кільця преципітації пропорційний концентрації антигену. Реакцію використовують для визначення вмісту в крові імуног-лобулінів різних класів, компонентів системи комплементу та ін.
Імуноелектрофорез- поєднання методу електрофорезу та імунопреципітації: суміш антигенів вноситься в лунки гелю і поділяється в гелі за допомогою електрофорезу. Потім у канавку паралельно зонам електрофорезу зносять імунну сироватку, антитіла кото-рой, дифундуючи в гель, утворюють у місці - зустрічі з антигеном лінії преципітації.
Імунна електронна мікроскопія- Електронна мікроскопія мікробів, частіше вірусів, оброблених відповідними антитілами. Віруси, оброблені імунною сироваткою, утворюють імунні агрегати (мікропреципітати). Навколо віріонів утворюється «віночок» з антитіл, контрастований фосфорно-вольфрамової кислотою або іншими електронно-оптично щільними препаратами.
123. Реакція преципітації в гелі визначення токсигенності мікроорганізмів, механізм, методи постановки.
Реакція преципітації (РП)- Це формування та осадження комплексу розчинного молекулярного антигену з антитілами у вигляді помутніння, званого преципітатом. Він утворюється при змішуванні антигенів і антитіл в еквівалентних кількостях; надлишок одного з них знижує рівень утворення імунного комплексу.
У 1946 р. Дж. Оудін запропонував метод простої дифузії, за яким один із компонентів реакції преципітації, зазвичай сироватка, знаходиться в гелі, а інший - антиген - нашарується на перший у вигляді розчину.
Антиген, дифузуючи в гель, утворює в ньому з антитілами білі лінії преципітації, добре видимі при бічному освітленні. У 1948 р. Е. Оухтерлоню розробив ще більш простий і зручний метод зустрічної двовимірної дифузії, що дозволяє проводити пряме порівняння різних антигенів та сироваток. Цей метод також є дуже цінним щодо перехресних реакцій.
Для постановки реакції по Оухтерлоню використовують 1%-ний агар, приготований на фізіологічному розчині, який розливають у чашки Петрі шаром 0,5 см. Після застигання в пластинці агару вирізають луночки діаметром 5-6 мм - одна в центрі чашки, по колу з відривом 1-2 див від центральної. У центральну луночку наливають діагностичну сироватку, що преципітує, а в периферичні - розчин гомологічного і порівнюваних з ним антигенів. Облік результатів проводять через 24, 48 та 72 год інкубації при кімнатній температурі.
Антитіла та антигени дифундують назустріч один одному, і в ділянках, де створюються їх еквівалентні концентрації, утворюються дугоподібні смуги преципітації. Якщо смуги преципітації, які від двох сусідніх луночек, зливаються, це свідчить про наявність кількох антигенних компонентів у досліджуваної рідини. Реакцію зустрічної дифузії по Оухтерлоню часто застосовують визначення токсигенності бактерій, наприклад дифтерійних.
Подальшим розвитком методу преципітації в гелі є імуноелектрофорез. Цим терміном позначають метод, що поєднує електрофоретичний поділ суміші антигенів і зустрічну дифузію по Оухтерлон на одній і тій же платівці агарового гелю. Преципітуючу сироватку при цьому наливають у канавку, вирізану в гелі паралельно напрямку електрофоретичного поділу.
Утворюються в результаті реакції лінії преципітації мають вигляд дуг, витягнутих у напрямку електрофоретичного руху антигенів фракцій. Імуноелектрофорез дозволяє визначати склад складних сумішей розчинних антигенів, що містять до 30 компонентів, і є цінним діагностичним методом.
Реакцією преципітації(РП) називається осадження з розчину Аг (преципітіногену) при впливі на нього імунної сироватки (преципітину) та електроліту.
За допомогою РП можна виявити антиген у розведеннях 1:100 000 і навіть 1:1 000 000, тобто в таких малих кількостях, які не виявляються хімічним шляхом.
Преципітіногени являють собою ультрамікроскопічні частки білково-ПС прир: екстракти з мкÒ, органів і тк, пат матеріалу; продукти розпаду бактеріальної клітини, їх лізати, фільтрати. Преципітіногени мають термостійкість, тому для їх отримання матеріал піддається кип'ятінню.
У РП використовуються рідкі прозорі аг.
Преципітуючі сироватки зазвичай отримують гіперімунізації кроликів циклами протягом декількох місяців, вводячи їм бактеріальні суспензії, фільтрати бульйонних культур, аутолізати, сольові екстракти мікроорганізмів, сироваткові білки.
Постановка РП Асколі.У вузьку пробірку з невеликою кількістю нерозведеної преципітуючої сироватки, тримаючи її в похилому положенні, піпеткою повільно по стінці нашарується такий же обсяг Аг.
Щоб не змішати дві рідини, пробірку обережно ставлять вертикально. При позитивній реакції в пробірці на кордоні між сироваткою і досліджуваним екстрактом через 5-10 хв з'являється сірувато-біле кільце. Постановка реакції обов'язково супроводжується контролюми сироватки та антигену.
Реакція Асколі застосовується для ідентифікації сибіркового, туляремійного, чумного Аг.
Вона знайшла також застосування в судовій медицині для опред-я видової приналежності білка, зокрема кров'яних плям, у санітарній практиці при виявленні фальсифікації м'ясних, рибних, борошняних виробів, домішок у молоці. Недоліком цієї РП є нестійкість преципітату (кільця), який зникає навіть при легкому струшуванні. Крім того, за її допомогою не можна визначити кількісний складАг, що беруть участь у формуванні преципітату.
Реакція преципітації Оухтерлоні.Реакцію ставлять на філіжанках Петрі в лунках агарового гелю.
Як гель використовують добре відмитий прозорий агар. Аг і сироватки вносяться в агаровий гель так, щоб лунки, що містять їх, знаходилися на певній відстані. Дифузуючи назустріч один одному і з'єднуючись один з одним, антитіло та антиген утворюють через 24-48 годин імунний комплекс у вигляді білої смуги.
За наявності складного за складом преципітіногену виникає кілька смуг. При цьому смуги серологічно споріднених антигенів зливаються воєдино, а смуги різнорідних перехрещуються, що дозволяє визначити деталі антигенної структури досліджуваних речовин.
Широко використовується для діагностики захворювань, що викликаються вірусами та бактеріями, що продукують екзотоксин.
3.Реакція непрямої гемаглютинації (РНГА).Ставиться для виявлення полісахаридів, білків, екстрактів бактерій, мікоплазм, рикетсій і вірусів, імунні комплекси яких з аглютинінами у звичайних класичних РА побачити не вдається, або ж для виявлення антитіл у сироватках хворих до цих високодисперсних речовин і найдрібніших мікро .
РНГА для серодіагностики інфекційних хвороб.Використовуючи РНГА для виявлення антитіл у сироватках хворих, готують ЕРИТРОЦИТАРНІ АНТИГЕННІ ДІАГНОСТИКУМИ.
Реакція преципітації.
Для цього еритроцити обробляють 15 хв розчином таніну в розведенні 1:20 000-1:200 000, що надає їм стійкість і підвищує адсорбційну здатність. Потім їх змішують з відомим антигеном і інкубують протягом 2 годин при температурі 37°С.
Контролем служать суспензії інтактних та навантажених антигеном еритроцитів, які вносять у сироватки, що дають свідомо позитивну та негативну реакції.
Результати реакції враховують через 2 години після інкубації в термостаті та оцінюють плюсами: «++++» – еритроцити покривають лунку у вигляді парасольки з нерівними краями; «–» – скупчення еритроцитів у вигляді «ґудзики»
Схожа інформація:
Пошук на сайті:
Реакція кільцепреципітації
Реакція кільцепричепування – одна з найпростіших серологічних методів. Вона виконується у вузьких преципітаційних пробірках. Спочатку на всі пробірки порівну розливають прозорий розчин антигену, взятого в декількох розведеннях (1:2; 1:4; 1:8; 1:16).
З'єднання антигенів та антитіл відбувається на межі зіткнення реагентів. В результаті цієї взаємодії в позитивних випадках (коли антиген відповідає антитілу) через деякий час відбувається утворення преципітату у вигляді кільця, що опалесціює.
Реакція знайшла широке застосуванняв медичної практикидля виявлення в шерсті, шкурах, м'ясі тварин сибіркового антигену (реакція Асколі); для виявлення інших збудників інфекційних хвороб у патологічному матеріалі, отриманому від хворих, або в об'єктах зовнішнього середовища, а також у судово-медичної експертизидля визначення видової приналежності білка, зокрема, білка крові або інших біологічних рідин.
Імунодифузія по Оухтерлоні
Реакція преципітації можна поставити в агаровом гелі.
Метод заснований на тому, що частинки антигенів та антитіл через різні розміри дифундують у гелі з неоднаковою швидкістю і внаслідок цього просуваються на різні відстані. Це дозволяє розділити окремі системи антигенів у тих випадках, коли вони знаходяться в суміші, і, отже, дає можливість вивчити антигенну структуру бактерій та складних білкових речовин, сироваток та тканин тварин.
Наочний та ефективний методпреципітації в гелі запропонував Оухтерлоні
На чашках Петрі з агаром роблять невеликі лунки, вирізані на певній відстані один від одного. В один із них наливають антиген, в інші – сироватки. Компоненти реакції дифундують у гелі у напрямку один до одного та утворюють видиму лінію преципітації там, де антигени зустрічаються з оптимальними концентраціями специфічних для нього антитіл. Оскільки реагенти дифундують з лунок концентрично, можна провести відразу кілька досліджень, якщо розмістити навколо лунки з антитілами кілька лунок з різними антигенами (або різними розведеннями одного і того ж антигену).
Реакція Оухтерлоні дає можливість робити висновок про природу антигену відомою сироваткою і, навпаки, за відомим антигеном визначається природа антитіл.
Перевага методу – в тому, що він дозволяє порівняти антигенні компоненти складних сумішей і судити про їхню спільність чи відмінності. Для порівняння спільності антигенів готують агар з лунками: в одну наливають антисироватку, в інші - антигени, що порівнюються. Якщо антигени різні, смуги преципітації розташовуються неоднаково.
Імуноелектрофорез
В останні роки для тонких імунологічних досліджень застосовується метод імуноелектрофорезу. Метод уперше описали П.
Грабар і К. А. Вільямс в 1953 р. Він є поєднанням електрофорезу в агаровом гелі на скляних пластинках з імунодифузією. На початку проводиться електрофоретичний поділ антигену, що часто є сумішшю білкових або інших молекул. Для цього антиген вносять у заздалегідь вирізану в агарі лунку і пластинку з агаром на деякий час поміщають в зону постійного електричного струму.
Через різної швидкостіруху молекул відбувається поділ антигену на складові. Після цього в канавку, вирізану в напрямку, паралельному руху струму, вносять імунну сироватку, що преципітує.
Антиген та антисироватка дифундують у гелі назустріч один одному.
Преципітація
Кожен антиген дає зону преципітації як дуги з відповідними йому антитілами. Число, положення та форма цих ліній дають уявлення про склад вихідної суміші антигену.
Реакція флоккуляції
Метод запропонований Рамоном у 1924 році.
Він заснований на тому, що суміш токсину з антитоксичною сироваткою в певних умовах дає помутніння та випадання осаду. При цьому реакція настає раніше в тих пробірках, де кількість антитоксину відповідає дозі, що повністю нейтралізує дану кількість токсину.
Отже, якщо відома сила токсину, можна встановити кількість антитоксину в невідомій сироватці. Для цього готують кілька розведень досліджуваної сироватки, додають до кожного розведення однакові кількості відомого токсину, після чого спостерігають, в якій із пробірок насамперед настане флоккуляція (помутніння розчину). Визначають ініціальну флоккуляцію. Потім проводити розрахунок.
Наприклад, потрібно визначити концентрацію протидифтерійних антитіл у досліджуваній сироватці. У реакції застосовується дифтерійний токсин, що містить 50 Lf в 1 мл (Lf – це мінімальна кількість токсину, яка нейтралізується 1 антитоксичною одиницею (АЕ) антисироватки.
Припустимо, що ініціальна флоккуляція відзначена у пробірці, де знаходилося 0,2 мл цієї сироватки та 2 мл відомого токсину активністю 100 Lf (50 Lf х 2).
Отже, 0,2 мл сироватки нейтралізували цей токсин. Отже, 0,2 мл сироватки містять 100АЕ, а 1 мл цієї сироватки концентрація антитіл відповідає 500 АЕ (100 АЕ х 5).
Аналогічним методом реакцію флоккуляції можна застосовувати і з протилежною метою для визначення імунізуючих властивостей анатоксинів.
Для цього потрібна стандартна антитоксична сироватка.
Реакція нейтралізації
Реакція застосовується при діагностиці харчових бактеріальних отруєння для визначення в досліджуваному матеріалі бактеріальних токсинів. Крім того, її можна ставити при дослідженні деяких об'єктів довкілля на вміст патогенних бактерій, що продукують токсини, наприклад, при дослідженні ґрунту на наявність збудників правця або газової гангрени.
Відомо, що токсин у суміші з гомологічною антитоксичною сироваткою не виявляє свого токсичної дії, Оскільки токсин нейтралізується. Реакція взаємодії токсину з антитоксином, як правило, суворо специфічна, тому для постановки реакції нейтралізації з метою визначення типу токсину необхідно мати діагностичні сироватки, специфічні для кожного виду та типу токсину. Можна застосовувати одночасно застосовувати суміш 2-3 антитоксичних сироваток і більше, якщо передбачається наявність у досліджуваному матеріалі кілька токсинів.
Реакція нейтралізації дозволяє визначити вид та тип токсину збудника.
Досліджуваним матеріалом може бути фільтрат харчових продуктів, що ймовірно викликали отруєння, змив з посуду, де знаходилися ці продукти та ін.
Попередньо проводиться нейтралізація передбачуваного токсину. Для цього до пробірки з досліджуваним матеріалом (досвідчена пробірка) додається антитоксична діагностична сироватка (вона містить антитіла до шуканого токсину); в іншу пробірку (контрольну) доливається рівний обсяг фізіологічного розчину.
Після короткочасної інкубації вміст пробірок вводиться двом групам білих мишей (дослідної та контрольної).
Результати реакції нейтралізації враховують відразу після загибелі контрольних тварин. У такому разі факт виживання тварин, які отримали антитоксичну сироваткуразом з досліджуваним матеріалом, вказує на наявність у ньому токсину, відповідного сироватці, що вводиться.
Перевагою реакції нейтралізації є висока достовірність результатів.
Однак за своєю чутливістю та швидкістю отримання відповіді вона поступається деяким іншим методам дослідження.
Реакції лізису
Реакціями лізису прийнято називати розчинення корпускулярних антигенів під дією антитіл, специфічних щодо даного антигену, у присутності комплементу.
З імунних реакцій, заснованих на феномені лізису бактерій та інших корпускулярних антигенів, застосовуються, головним чином, реакції бактеріолізу та гемолізу.
Реакція бактеріолізу
Реакція відбувається як in vitro, і in vivo. Остання відома за назвою реакції В.І. Ісаєва - Пфейффера.
Цими вченими показано, що якщо морських свинокпопередньо проиммунизировать холерними антигенами, то наступне введення їм у черевну порожнину високовірулентної культури холерного вібріона не викликає зараження тварин, оскільки черевної порожнинивідбувається розчинення збудника під впливом специфічних антитіл.
Надалі І.
І. Мечников довів, що аналогічне розчинення холерного вібріона під впливом імунної сироватки відбувається і в пробірці, якщо до основних компонентів додати свіжу сироватку - джерело комплементу. Розчинення бактерій під дією специфічних антитіл у присутності комплементу отримало назву реакції бактеріолізу.
При постановці реакції бактеріолізу спочатку готують ряд 10-кратних розведень сироватки, що досліджується. Потім у кожну пробірку додають однакову кількість (по 1-2 краплі) мікробної суспензії. До суміші додають комплемент. Після інкубування при 37 °З кожної пробірки робиться висів суміші на живильне середовище для встановлення наявності або відсутності життєздатних бактерій.
Реакцію можна застосовувати для визначення антитіл за допомогою відомого мікроорганізму або визначення виду мікробів за допомогою діагностичної імунної сироватки.
У практичної роботибактеріологів ця реакція застосовується рідко, головним чином, для диференціації холерних і холероподібних вібріонів.
Реакція гемолізу
Механізм гемолізу аналогічний механізму бактеріолізу.
Використовувані в реакції еритроцити є антигеном. Джерелом антитіл є антиеритроцитарна сироватка (наприклад, якщо в реакції застосовуються баранячі еритроцити, то необхідну сироватку зі специфічними антиеритроцитарними антитілами отримують від кроликів, імунізованих баранячими еритроцитами).
Як комплемент у реакціях лізису найчастіше використовується сироватка крові морської свинки, тому що в ній міститься значно більше комплементу, ніж у сироватках інших тварин.
У тих випадках, коли антитіла в присутності комплементу руйнують еритроцити, з них виходить гемоглобін, і суміш, що реагує, з каламутної суспензії еритроцитів перетворюється на прозору червону рідину (лакова кров).
Таку реакцію називають гемолізом. У лабораторній практиці вона застосовується як показник адсорбції комплементу в реакції зв'язування комплементу.
Схожа інформація:
Пошук на сайті:
План лекції: Предмет та коротка історія розвитку мікробіології. Загальні властивості мікроорганізмів та їх становище у природі. преципітації реакція
Ветеринарна мікробіологія та її завдання
mir.zavantag.com > Біологія > Лекція
1 … 7 8 9 10 11 12 13 14 15
| ^
РА вперше розроблена М.Грубером 1896 р. Сутність реакції полягає у взаємодії антитіла з антигеном, у результаті відбувається склеювання (аглютинація) мікробів з утворенням пластівців, грудочок, видимих неозброєним оком. РА широко застосовується для серологічної діагностикибагатьох бактеріальних інфекцій(бруцельозу, сапа, сальмонельозів, колібактеріозу та ін.) та для серологічної ідентифікації видів та типів виділених мікроорганізмів. Існує кілька методів постановки РА: пробірковий (об'ємний), краплинний (пластинчастий), кровокопальний, кільцева реакція з молоком, реакція гемаглютинації та її варіанти (РЗГА, РНГА), антиглобуліновий тест Кумбса та ін. ^ – замість сироватки береться кров. Ставлять пластинчасту реакцію. Діагностують пулороз курей та індичок, мікоплазмоз курей. Реакція Кумбсдозволяє виявити неповні антитіла. Останні одновалентні, у зв'язку з чим вони гальмують утворення аглютинату. Метод заснований на застосуванні антиглобулінової сироватки, що є посередником для з'єднання неповних антитіл, фіксованих на корпускулярних антигенах (еритроцити, бактерії). ^ – вона не відноситься до серологічних та діагностично точних реакцій, проте дозволяє виявити антиген – гемагглютинін та встановити гемагглютинуючі властивості (здатність аглютинувати еритроцити) у деяких бактерій та мікоплазм. РНДА– останніми роками зайняла одне з провідних місць у серодинаміці. Сутність її полягає в тому, що білкові молекули відповідного антигену збудника або антитіла попередньо адсорбують на оброблених таніном еритроцитів барана або ін. тварини. Потім ставлять реакцію шляхом змішування сенсибілізованих еритроцитів із сироватками крові хворих тварин або у другому випадку з досліджуваним антигеном. За наявності у сироватці спец. Антитіл на даний антиген (або навпаки) відбувається аглютинація еритроцитів – позитивна реакція. Запропонована Р.Краусом у 1897 році. Преципітація - явище, що спостерігається при взаємодії антитіл-преципітинів та антигену-преципітіногену. Сутність реакції полягає у зміні дисперсності колоїдів антигену та їх осадженням під впливом специфічних антитіл, що перебувають у імунній сироватці. РП може бути поставлена в пробірках у рідкому середовищі (реакція кільцеприципітації) або в агаровому гелі (пластинчаста РДП). Реакція кільцеприципітації вперше запропонована Асколі (1910), найбільш широко її застосовують з метою діагностики сибірки. При проведенні ветеринарної експертизиРП є методом визначення фальсифікації м'ясних, борошняних та інших продуктів. Особливе значенняця реакція має у судово-медичній експертизі щодо видової належності крові. Застосування реакції преципітації у рідкому середовищі не дозволяє, однак, охарактеризувати гетерогенність антигенів, тобто. кількість та концентрацію антигенів у препараті. Ці відомості можна отримати, якщо поставити РП у гелі (частіше агаровому). Маючи швидкість пересування, різні антигени препарату неоднаково дифундують, утворюючи в товщі прозорого гелю на місці зустрічі з гомологічним антитілом преципітати. Локалізація та концентрація ліній преципітинів будуть характерними для кожного компонента антигенного препарату, що є критерієм його якості. Шляхом розведення препарату можна характеризувати відносний вміст антигенів. Розроблено кілька методів постановки РДП: метод прямої одновимірної дифузії за Уденом (1946), метод простої радіальної імунодифузії по Манчіні (1963), метод подвійної дифузії в агаровий гель по Оухтерлоні (1948) та ін. ^
(РН) на моделі правцевих токсинівта антитоксинів. Сутність РН полягає у здатності гомологічних антитіл імунної сироватки пригнічувати (нейтралізувати) інфекційні властивості збудника хвороби або продуктів його життєдіяльності. Для встановлення результату реакції сумішшю антиген-антитіло заражають лабораторних тварин, КК, КЕ. Показник позитивно РН – відсутність загибелі біологічних тест-систем. У бактеріальній практиціРН застосовують при діагностиці анаеробної ентеротоксемії, ботулізму та ін. РН проводять з метою виявлення та титрування токсинів, анатоксинів або антитоксинів. Використовують для виявлення антитіл у сироватці крові та для виявлення у досліджуваному матеріалі антигену (при бруцельозі, сапі, рикетсіозах, туберкульозі та ін.). Ця реакція відноситься до непрямої двосистемної. У ній беруть участь 5 компонентів:
Компоненти 3,4,5 становлять індикаторну систему. Якщо антиген та антитіло випробуваної сироватки відповідають друг другові, виникає імунний комплекс антиген-антитіло, який пов'язує та витягує із середовища, де протікає реакція, комплемент. За відсутності у випробуваній сироватці антитіл, відповідних антигену, зазначений комплекс не утворюється – комплемент залишається вільним. Оскільки це невидимі процеси, то для вирішення питання, що сталося з комплементом, в пробірку як індикатор вводять компоненти гемолітичної системи – гемолітичну сироватку + еритроцити. Якщо в бактеріологічній системі комплемент зв'язався - гемолізу еритроцитів не відбудеться, результат позитивний - в сироватці містяться антитіла. Наявність гемолізу є показником наявності вільного комплементу в бактеріологічній системі, що можливе лише за відсутності в випробуваній сироватці антитіл – результат негативний. РСК протікає за строгих кількісних співвідношенняхкомпонентів. Це досягається попереднім титруванням (комплемент і гемолітичну сироватку титрують в день постановки реакції; мікробний антиген - один раз протягом 2-3 місяців). Титрування - визначення найменшої кількості того чи іншого компонента реакції для проведення реакції, зайве або недолік - спотворення результатів. РДСК - це варіант РСК, але який відрізняється тим, що перша фаза реакції протікає протягом 16-18 годин на холоді (40С), що підвищує чутливість через більш тривалу адсорбцію комплементу комплексом антиген-антитіло. |
7 8 9 10 11 12 13 14 15
Схожі:
| Визначення поняття «екологічна мікробіологія» Загальної мікробіології, що вивчає взаємовідносини мікроорганізмів між собою, з об'єктами зовнішнього середовища та макроорганізмом |
Найбільш загальні та фундаментальні поняття, що відображають суттєві,… Філософія -наука, яка вивчає самі загальні положенняпро людину, природу та про пізнання |
||
| План Предмет та метод дисципліни «Міжнародні економічні відносини»… Предмет та метод дисципліни «Міжнародні економічні відносини» та історія розвитку мео |
Питання до іспиту з курсу «юридична психологія» Концепція юридичної психології. Предмет, завдання та історія розвитку юридичної психології |
||
| 1. Предмет та метод історії політичних та правових навчань > Предмет… Це пов'язано з тим, що у межах цієї юридичної дисципліни досліджується і висвітлюється специфічний предмет – історія виникнення… |
1.
Історія філософії як наука. Її предмет та метод |
||
| Міністерство освіти і науки республіки Казахстан альянс студентів... Справжнє положення про республіканський конкурс «Студент Року-2011» (далі за контекстом конкурс) визначає його цілі та завдання, учасників… |
Визначення термінів «мікробіологія» та «мікроорганізм» … |
||
| Запитання для підготовки до заліку з дисципліни «конфліктологія» Конфліктологія як наука: предмет, цілі, завдання, актуальні проблеми, значення на сучасному етапірозвитку суспільства |
Про крайовий конкурс відеороликів «к-ролі-к!» загальні положення Це Положення визначає цілі, завдання, принципи Конкурсу, порядок його організації та проведення, порядок участі та визначення… |
Додайте кнопку на своєму сайті:
Шкільні матеріали
mir.zavantag.com
Реакція преципітації
Преципітація та аглютинація - це досить подібні реакції, які різняться головним чином на підставі фізичних властивостейАГ.
У першому випадку він представлений у розчинній, у другому – у корпускулярній формах. В основі РП лежить утворення преципітату у процесі реакції АГ-АТ. РП високо специфічна та чутлива.
Інгредієнти реакції:
1. розчинний АГ або гаптен (преципітітоген);
2. АТ - преципітини (імуна преципітуюча сироватка; одержують імунізацією кроликів відповідними розчинами АГ-ми);
Реакція преципітації
ізотонічний розчин натрію хлориду або агаровий гель.
Методи постановки РП:
1) РП у розчинах - нар.
кільцепреципітації;
2) РП у гелі.
Реакцію кільцепреципітації ставлять у вузьких преципітаційних пробірках, які розливають преципітуючі сироватки.
Потім наливають розчин преципітіногену. При позитивній реакції на межі зіткнення інгредієнтів з'являється каламутне кільце преципітації. Прикладом такого способу постановки РП є реакція термопреципітації по Асколі, застосовувана для виявлення термостабільного гаптена збудника сибірки, що витягується з органів тварин, шкіри, вовни екстрак. (Реакція Оухтерлоні) дозволяє визначати токсигенність дифтерійної паличкиза допомогою антитоксичної сироватки.
У чашку Петрі з живильним середовищемпоміщають смужку фільтрувального паперу, просоченої антитоксичної протидифтерійної сироваткою і засівають досліджуваними культурами у вигляді штрихів, перпендикулярних до смужки паперу. Інкубують при 37 ПС протягом доби. За наявності токсигенної культури у місці взаємодії токсину з антитоксином утворюються лінії преципітації. Реакція преципітації в гелі зветься імунодиф-фузією.
Часто форезом у гелі – імуноелектрофорез. Принцип методу: досліджуваний антиген фракціонують електрофоретично. одержані фракції аналізують методом подвійної дифузії за допомогою антисироватки.
Реакція Асколі ставиться для діагностики сибірки з метою виявлення антигену сибірки. Для постановки реакції преципітації необхідно мати: преципітіноген – гаптен B.
Antrachis (екстракт з тканин), преципітин (преципітуюча сибірська виразка) і фізіологічний розчин.
Приготування термопреципітіногену.
1. 8 колбочку, що містить 1 г подрібненої шкіри або 1 мл культури В. ап1Ьгас!3, налити 10 мл фізіологічного розчину.
2. Колбу помістити в киплячу лазню на 30-45 хвилин.
3. Просрільтрувати через азбестову еату. Фільтрат має бути повністю прозорий. Для реакції преципітації фільтрат розлучається у 100 разів і більше.
Постановка реакції кільцепреципітації.
1) У преципітеційну пробірку наливається 0,3 мл преципітуючої сироватки цільної або в розведенні 1:5, 1:10.
2) По стінці пробірки обережно нашаровується преципі-тиноген- Реакція вважається позитивною, якщо на межі двох рідин утворюється каламутне кільце білка, що випадає, не пізніше 5-15 хвилин.
При постановці реакції преципітації застосовують такі контролі:
а) антиген та фізіологічний розчин;
б) специфічна сироватка та фіз.
в) антиген та неспецифічна сироватка.
Для реакції преципітації користуються спеціальними преципітаційними пробірками висотою 40-60 мм і діаметром 4-5 мм, преципітація у вузьких пробірках настає значно швидше і проявляється більш чітко, ніж у звичайних пробірках, їх ретельно миють і висушують, щоб скло їх було абсолютно прозорим та сухим.
У реакції преципітації відбувається випадання осад специфічного імунного комплексу, що складається з розчинного антигену (лізату, екстракту, гаптена) і специфічного антитіла в присутності електролітів.
Утворене в результаті цієї реакції каламутне кільце або осад називають преципітатом. Від реакції аглютинації ця реакція переважно відрізняється розміром частинок антигену.
Реакцію преципітації зазвичай застосовують визначення антигену при діагностиці низки інфекцій (сибірка, менінгіт та інших.); у судовій медицині - для визначення видової приналежності крові, сперми та ін; у санітарно-гігієнічних дослідженнях – при встановленні фальшування продуктів; з її допомогою визначають філогенетичну спорідненість тварин та рослин. Для реакції необхідні:
1. Антитіла (преципітіни) – імунна сироватка з високим титром антитіл (не нижче 1:100 000). Титр преципітуючої сироватки встановлюють за найбільшим розведенням антигену, з яким вона дає реакцію. Сироватку зазвичай застосовують нерозведеною або в розведенні 1:5 -1:10.
2. Антиген - розчинені речовини білкової або ліпоїднополісахаридної природи (повні антигени та гаптени).
3. Ізотонічний розчин.
Основні методи проведення реакції преципітації: реакція кільцепреципітації та реакція преципітації в агарі (гелі).
Увага! Усі компоненти, що беруть участь у реакції преципітації, повинні бути прозорими.
Реакція кільцепреципітації.У преципітаційну пробірку за допомогою пастерівської піпетки вносять 0,2 - 0,3 мл сироватки (5-6 крапель) (сироватка не повинна потрапляти на стінки пробірки). На сироватку обережно нашаровують антиген у такому ж обсязі, наливаючи його тонкою пастерівською піпеткою по стінці пробірки. Пробірку при цьому тримають у похилому положенні. При правильному нашаруванні між сироваткою та антигеном має вийти чітка межа. Обережно, щоб не перемішати рідини, ставлять пробірку в штатив. При позитивному результаті реакції межі антигену і антитіла утворюється каламутне «кільце» - преципітат.
Реакція преципітації в агарі(Гелі).Особливість реакції в тому, що взаємодія антигену та антитіла відбувається в щільному середовищі, тобто в гелі.Преципітат, що утворюється, дає в товщі середовища каламутну смугу. Відсутність лінії свідчить про невідповідність компонентів реакції. Цю реакцію широко застосовують при медико-біологічних дослідженнях, зокрема щодо токсинообразования у збудника дифтерії.
Реакція лізису (імунний цитоліз)
Імунний лізис- це розчинення клітин під впливом антитіл за обов'язкової участі комплементу. Для реакції необхідні:
1. Антиген-мікроби, еритроцити чи інші клітини.
2. Антитіло(Лізин) - імунна сироватка, рідше сироватка хворого. Бактеріолітична сироватка містить антитіла, що беруть участь у лізисі бактерій; гемолітична-гемолізини, що сприяють лізису еритроцитів; для лізису спірохет потрібні спірохетолізини, клітин-ітолізини і т.д.
3. Комплементи.Найбільше комплементу у сироватці морських свинок. Цю сироватку (суміш від кількох тварин) зазвичай використовують як комплемент.
4. Ізотонічний розчин.
Реакція преципітації.
| Найменування параметру | Значення |
| Тема статті: | Реакція преципітації. |
| Рубрика (тематична категорія) | Освіта |
Реакція преципітації (РП)- це осадження розчинного антигену при дії антитіл у присутності електроліту. Видимий ефект реакції (феномен преципітації) - помутніння (Утворення каламутного кільця або осаду – преципітату).
РП застосовують виявлення невідомого антигену при ряді інфекційних захворювань: при сибірці, туляремії, менінгіті, віспі. У судовій медицині її використовують для визначення видової приналежності крові, сперми; у санітарно-гігієнічних дослідженнях – задля встановлення фальсифікації харчових продуктів. РП відрізняється дуже високою чутливістю і дозволяє виявити антиген у розведенні 1:1 000 000 та 1:10 000 000.
Компоненти реакції преципітації.
1. Антиген (преципітіноген) -це антиген молекулярної природи, що знаходиться в дрібнодисперсному (розчинному) стані. Преципітіногени - це різні лізати або екстракти тканин та ін.
Розміщено на реф.
Преципітіноген відрізняється від аглютиногену розміром частинок антигену. Аглютиногенмає розміри клітин(це не зруйновані цілі клітини), а розміри преципітіногенусумірні з розмірами молекул(Це білки та їх комплекси з вуглеводами або ліпідами). Розчин преципітіногену прозорий.
2. Антитіла (преципітіни)знаходяться в сироватці крові людини або в імунних діагностичних сироватках, які містять відомі антитіла.
3. Електроліт- Ізотонічний розчин хлориду натрію.
Одержання преципітиногену.
Отримують шляхом подрібнення матеріалу та вилучення з нього білкових антигенів кип'ятінням або іншими способами.
Приклади преципітіногенів: лізати або екстракти різних органів та тканин, чужорідна сироватка крові (сироватка - це розчин, в першу чергу, різних білків),фільтрати бульйонних культур мікробів, сольові екстракти мікробів, аутолізати та ін.
Одержання преципітуючих сироваток.
Отримують шляхом гіперімунізації кроликів відповідними преципітіногенами. Такі сироватки містять антитіла до преципітиногенів, якими імунізували кроликів.
Приклади преципітуючих сироваток: преципітуюча сибірка сироватка(містить антитіла до антигенів збудника сибірки), преципітуюча протименінгококова сироватка(містить антитіла проти антигенів збудника менінгіту) та ін.
Титрпреципітуючої сироватки - це найбільше розведення преципітіногену, у якому сироватка ще дає реакцію преципітації.
Методи постановки РП.
1. Реакція кільцепреципітації -проводиться у спеціальних преципітаційних пробірках (діаметр – 0,4-0,5 см, висота – 7-8 см). У пробірку вносять 0,2 - 0,3 мл сироватки, що преципітує, і по стінці довгим носиком пастерівської піпетки обережно нашаровують таку ж кількість преципітиногену. Далі обережно з горизонтального положенняпробірки ставлять вертикально.
Облік результатів реакціїпроводять за появою білого кільця на межі антиген-антитіло. При позитивній реакції спостерігається утворення такого кільця. В цьому випадку антиген відповідає антитілу і відбувається їхнє зв'язування.
Якщо як преципітиноген використовують прокип'ячені і профільтровані водні екстрактиорганів та тканин, то реакція прийнято називати реакцією термокільцепреципітації (наприклад, при діагностиці сибірки).
2. Реакція преципітації в гелі –проводиться в чашках Петрі або на предметному склі, куди поміщають шар агарового гелю. При застиганні гелю в ньому вирізують лунки, в які поміщають антигени або антитіла, або те й інше. Розрізняють 2 методиРП у гелі:
а) метод простий (радіальної) імунодифузіїодин з компонентів реакції імунітету (антиген або антитіло) поміщають у лунку, а інший компонент – змішують з агаром; при позитивному результаті (антиген відповідає антитілу) навколо лунки утворюється кільце преципітату ;
б) метод подвійний імунодифузії: антитіло і антиген поміщають в окремі лунки, вони дифундують в агаровому гелі назустріч один одному; при позитивному результаті на місці зустрічі антитіла та антигену утворюються лінії преципітації.
Прикладом РП у геліє реакція подвійної імунодифузії по Оухтерлоні при діагностиці дифтерії
Імуноелектрофорез –це метод, який поєднує метод електрофорезу та реакцію преципітації. Суміш антигенів (наприклад, білків сироватки крові) поділяється в гелі за допомогою електрофорезу. Потім, щоб знайти і визначити потрібний білок (невідомий антиген), використовують діагностичну сироватку, що містить преципітуючу, яка містить антитіла до цього білку (відоме антитіло). Для цього в канавку паралельно білкам вноситься діагностична сироватка. Якщо серед білків є той, який відповідає антитілу, що знаходиться в сироватці, то навколо нього утворюються лінії преципітації.
Реакція преципітації. - Поняття та види. Класифікація та особливості категорії "Реакція преципітації." 2017, 2018.
