Діагностикум vi ві антигенний еритроцитарний. Діагностикум еритроцитарний сальмонельозний
Реєстраційне посвідчення № РЗН 2016/3905 від 04.04.2016 р.
Призначення
Набір реагентів "Діагностикум сальмонельозний еритроцитарний Vi-антигенний для РПГА" (СЕД-Vi) призначений для виявлення антитіл до Vi-антигену збудника черевного тифу в сироватках крові людей реакцією пасивної гемаглютинації (РПГА).
Характеристика набору
Принцип дії
За наявності антитіл до збудника черевного тифу спостерігається гемаглютинація сенсибілізованих Vi-антигеном курячих еритроцитів, що призводить до утворення на дні U-подібних лунок планшета "парасолька" з еритроцитів, що осіли. За відсутності антитіл до збудника черевного тифу осілі еритроцити утворюють "крапку".
Склад набору
| Найменування реагенту | Опис | Кількість у наборі |
|---|---|---|
| Діагностикум еритроцитарний сальмонельозний Vi-антигенний, сухий 6% (СЕД) | Формалінізовані курячі еритроцити, сенсибілізовані Vi-антигеном S.typhi. Суха гігроскопічна маса коричневого кольору. Після розчинення – суспензія червоно-коричневого кольору. | 1 фл., з 0,6 мл |
| Сироватка діагностична сальмонельозна адсорбована, рецептор Vi, суха (у розведенні 1:20, (К+)) | Кроляча сироватка сальмонельозна адсорбована, рецептор Vi, у розведенні 1:20. Суха гігроскопічна маса пориста білого кольору. Після розчинення – прозора рідина жовтуватого кольору або безбарвна. | 1 фл., з 0,3 мл |
| Розріджувач досліджуваних проб (РІП) | Прозора рідина синьо-фіолетового кольору. | 1 фл., 10 мл |
| Буферний фосфатний розчин (ФБР) | Прозора безбарвна рідина. | 1 фл., 10 мл |
| Планшет полімерний для імунологічних реакцій одноразового застосування. | Планшет полімерний для імунологічних реакцій одноразового застосування із прозорого безбарвного полістиролу. | 1 шт. |
Діагностичні характеристики
Діагностикум повинен аглютинуватися в РПГА сироваткою діагностичної сальмонельозної адсорбованої, рецептор Vi, сухий (у розведенні 1:20), до титру, вказаного на етикетці сироватки. Умовним рівнем діагностичної характеристики сироватки крові здорових людей слід вважати розведення сироватки не вище 1:20. Час проведення аналізу – 3040 хвилин. Набір розрахований на дослідження 42 сироваток крові у варіанті скринінгу або 10 сироваток крові у варіанті їх титрування.
Запобіжні заходи
Набір призначений тільки для діагностики in vitro. Вхідні компоненти набору речовини інактивовані і безпечні. При роботі з набором слід дотримуватись СП 1.3.2322-08 та СанПіН 2.1.7.2790-10.
Додаткове обладнання та матеріали
Обладнання, матеріали, розчини:
- дозатори піпеткові 1-канальні з об'ємом дозування, що варіюється, 5 - 40 мкл; 40 - 200 мкл; 200 - 1000 мкл і 1000 - 5000 мкл;
- дозатори піпеткові 8- або 12-канальні з об'ємом дозування, що варіюється, 5 - 40 мкл і 40 - 200 мкл;
- вода дистильована (ГОСТ 6709-72).
Аналізовані зразки
Досліджувані зразки сироватки крові зберігають при температурі від 2 до 8 ° С не більше 3 діб від моменту взяття крові. Допускається зберігання сироватки в замороженому стані за температури не вище мінус 18 °С не більше 1 року. Перед використанням зразки розморожують при температурі від 16 до 25 °З перемішують струшуванням. Повторне заморожування не допускається. Не можна використовувати зразки з бактеріальним проростом та гемолізом. Перед постановкою реакції випробувані сироватки прогрівають при 56 С протягом 30 хвилин.
Проведення аналізу
Підготовка контрольної діагностичної сироватки (К+)
Готують робочий розчин сироватки діагностичної адсорбованої сальмонельозної, рецептор Vi, сухий (у розведенні 1:20) з 0,3 мл (К+). Для цього до вмісту флакона К+ додають 0,3 мл фосфатного буферного розчину (ФБР). Кількість сироватки, що залишилася, можна аліквотувати і зберігати в замороженому стані при температурі не вище мінус 18 °С не більше 6 місяців.
Підготовка діагностикуму еритроцитарного сальмонельозного (СЕД)
Для приготування робочого розведення суспензії діагностикуму еритроцитарного сальмонельозного до вмісту флакона з сухим 6% СЕД додають 0,6 мл дистильованої води та залишають для гідратації на 2 години при температурі від 16 до 25 °С. Потім до розчину додають 2,4 мл буферного фосфатного розчину (ФБР). Робочий розчин зберігають за нормальної температури від 2 до 8 °З трохи більше 1 міс. Заморожування не допускається.
Постановка РПГА при скринінгу сироваток крові
Сироватки крові для скринінгового дослідження розводять у лунках планшета наступним чином:
- попередні розведення 1:20 готують у перших лунках планшета, вносячи до них спочатку 190 мкл розчину РІП, потім - по 10 мкл досліджуваних сироваток. Кожну сироватку вносять окремим наконечником і ретельно піпетують (при цьому колір розчину в лунках після додавання сироваток повинен змінитися з синьо-фіолетового на зелений);
- скринінгові розведення 1:40 готують у других лунках, вносячи в них спочатку 25 мкл розчину ФБР, а потім по 25 мкл попередньо розведених сироваток і ретельно піпетують.
При кожній постановці РПГА необхідно проводити контрольне визначення титру К+. Для цього 8 лунок довгого ряду вносять по 50 мкл розчину ФБР. Потім у першу лунку вносять 50 мкл робочого розчину К+ (1:20), ретельно піпетують і переносять у наступні лунки по 50 мкл, отримуючи 2-кратні розведення від 1:40 до 1:5120. Ще 4 лунки вносять по 50 мкл розчину ФБР контролю СЕД відсутність спонтанної гемагглютинации.
У всі лунки планшета зі скринінговими розведеннями досліджуваних сироваток (крім перших, що містять РІП) і контролю вносять по 25 мкл СЕД. Перед використанням суспензію СЕД у флаконі або ванночці перемішати!Планшет ретельно струшують і залишають при температурі від 16 до 25 ° С на 30 - 40 хвилин до осідання еритроцитів у контролі.
Постановка РПГА при титруванні досліджуваних сироваток крові
Титрування досліджуваних сироваток та робочого розчину К+ проводять у коротких рядах планшета. Ще один короткий ряд використовують для контролю на відсутність спонтанної гемаглютинації СЕД.
У перші лунки коротких рядів для титрування сироватки, що досліджується, вносять 180 мкл розчину РІП. У решту лунок вносять по 50 мкл розчину ФБР.
У лунки з розчином РІП вносять 20 мкл досліджуваних сироваток (отримують розведення 1:10). Кожну сироватку вносять своїм наконечником і ретельно піпетують (колір розчину в лунках має змінитися з синьо-фіолетового на зелений). Потім з перших лунок переносять по 50 мкл наступні лунки рядів, отримуючи дворазові розведення від 1:20 до 1:1280. Наприкінці титрування з останніх лунок розчини об'ємом 50 мкл видаляють.
При кожній постановці РПГА необхідно проводити контрольне визначення титру К+. Для цього 8 лунок довгого ряду вносять по 50 мкл розчину ФБР. Потім у першу лунку вносять 50 мкл робочого розчину К+ (1:20), ретельно піпетують і переносять у наступні лунки по 50 мкл, отримуючи 2-кратні розведення від 1:40 до 1:5120.
Для контролю діагностикуму відсутність спонтанної гемагглютинації в усі лунки короткого ряду вносять по 50 мкл розчину ФБР.
У всі лунки (крім перших лунок кожного ряду досліджуваних сироваток, що містять РІП) вносять по 25 мкл СЕД. Перед використанням суспензію СЕД у флаконі або ванночці перемішати! Планшет ретельно струшують і залишають при температурі від 16 до 25 ° С на 30-40 хвилин до повного осідання еритроцитів у контролі.
Облік та інтерпретація результатів
Облік результатів при скринінгу сироваток крові
Облік результатів проводять за умовною шкалою чотирьох хрестів. Титром сироватки вважається її розведення, що дає гемаглютинацію не менш як на 3 (+++) хреста.
- ++++ (4+) - аглютиновані еритроцити утворюють на дні лунки перевернутий "парасольку", краї його опадають;
- +++ (3+) - аглютиновані еритроцити утворюють на дні лунки перевернутий "парасольку", краї його рівні;
- ++ (2+) - поряд з аглютинованими еритроцитами на дні лунки є осад у вигляді невеликого «кільця» з неаглютинованих еритроцитів;
- + (1+) - більшість еритроцитів не аглютиноване і осідає у вигляді невеликого «кільця»;
- (-) - Неаглютиновані еритроцити утворюють на дні лунки «точку».
Позитивним результатом вважають гемаглютинацію навантажених Vi-антигеном еритроцитів не менше ніж на 3 хрести (+++).
Контролем якості діагностикуму служать 4 лунки контрольного ряду, які вносили тільки розчин ФБР і СЕД. У цих лунках не повинно бути спонтанної гемаглютинації – негативна реакція (-). Інакше слід повторити дослідження. Якщо при повторній постановці з'являється гемаглютинація, препарат не використовується.
Сироватки з негативним результатом слід вважати антитіл, що не містять, до Vi-антигену в діагностичному титрі 1:40 і нижче.
Сироватки, що дають позитивний результат у розведенні 1:40, слід досліджувати повторно у варіанті титрування сироватки для встановлення її титру.
Облік результатів при титруванні сироваток крові
Титром сироватки вважається її розведення, що дає гемаглютинацію не менше ніж на 3 (+++) хреста.
Контролем якості діагностикуму служать лунки низки контролю СЕД. У цих лунках не повинно бути спонтанної гемаглютинації – негативна реакція (-). Інакше слід повторити дослідження. Якщо при повторній постановці з'являється гемаглютинація, препарат не використовується.
Набір реагентів Діагностикум Сальмонельозний ВІ-антигенний призначений для виявлення в сироватці крові людини специфічних антитіл до Ві-антигену тифу сальмонел в реакції пасивної гемаглютинації (РПГА).
ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРУ
2.1. Принцип методу.
Діагностиком Сальмонельозний ВІ-антигенний є Ві-антиген, фіксований на поверхні еритроцитів. При взаємодії із сироватками, що містять антитіла до Ві-антигену, спостерігається феномен аглютинації еритроцитів.
2.2. СКЛАД НАБОРУ
| Реагенти | Кількість |
| Діагностикум еритроцитарний сальмонельозний Ві-антигенний рідкий- являє собою 1% завись формалінізованих та сенсибілізованих Ві-антигеном сальмонел тифу еритроцитів барана у фосфатному буферному розчині (рН 7,2 + 0,2; концентрація 0,06 моль/л). Гомогенна суспензія коричневого кольору без пластівців; при відстоюванні утворюється 2 шари: щільний коричневий осад еритроцитів і прозора жовта надосадова рідина | 1 флакон - 3 мл |
| Сироватка діагностична сальмонельозна адсорбована рецепторгомогенна маса від білого з коричневим відтінком до бежевого кольору | 1 флакон – з 0,1 мл |
| 1 % завись формалінізованих, несенсибілізованих еритроцитів барана- гомогенна суспензія коричневого кольору без пластівців; при відстоюванні утворюється 2 шари: щільний коричневий осад еритроцитів і прозора жовта надосадова рідина | 1 флакон – |
| Розчин для розведення сироватки та постановки РПГА 0,9 % розчин натрію хлориду – прозора безбарвна рідина, рН від 6,5 до 7,5 | 2 флакони – по 8 мл |
| Планшет круглодонний для імунологічних реакцій одноразового застосування.складається з 8 рядів, кожен з яких включає 12 лунок з прозорим, безбарвним, круглим дном. | 1 шт |
Аналітичні та діагностичні характеристики.
3.1. Діагностикум повинен аглютинуватися в РПГА сироваткою діагностичної сальмонельозної адсорбованої рецептор Ві сухий у розведенні не менше ніж 1:160.
Умовним рівнем діагностичної характеристики сироватки крові здорових людей слід вважати розведення сироватки не вище 1:20.
3.2. Час проведення аналізу – 2 год.
3.3. Набір розрахований на 8 визначень.
ЗАПОБІЖНІ ЗАХОДИ
Працюючи з набором слід дотримуватися «Правила устрою, техніки безпеки, виробничої санітарії, протиепідемічного режиму та особистої гігієни під час роботи у лабораторіях (відділеннях, відділах) санітарно-епідеміологічних установ системи Міністерства охорони здоров'я СРСР (М., 1981 р.).
Аналізовані сироватки, а також реагенти, що перебувають з ними в контакті, слід розглядати як потенційно інфіковані, здатні тривалий час зберігати або передавати ВІЛ, вірус гепатиту або будь-який інший збудник вірусної інфекції — поводитися з ними слід обережно:
- працювати у гумових рукавичках;
- під час піпетування необхідно користуватися автоматичними дозаторами;
- при завершенні роботи аналізовані сироватки і реагенти, що знаходяться з ними в контакті, інструменти піддавати обробці дезінфікуючим розчином
- обладнання до та після роботи протирати 70% етиловим спиртом.
Аналізовані сироватки повинні бути інактивовані за температури 56 0 С протягом 30 хв.
Діагностична сальмонельозна адсорбована рецептор Ві, що входить до складу набору сироватка, суха інактивована.
Об'єктивні результати аналізу гарантуються під час таких умов:
- зберігання всіх реагентів набору здійснювати за температури від 2 до 8 0 С;
- не використовувати реагенти з терміном придатності, що минув;
- не використовувати реагенти набору за відсутності на їх упаковці відповідного маркування;
- для проведення РПГА використовувати реагенти, що входять лише до цього набору.
2.діагностикум
4.з зруйнованих мікробів (виділення конкретного Аг)
Еритроцитарний HBs-діагностикум
2.діагностикум
4. завись ер.барана оброблених таніном і обложеними а\г HBs
5.для виявлення специфічних антитіл у сироватці крові
Діагностикум GP120
2.діагностикум
4.окремі а\г возб. ВІЛ
5.для виявлення а\т до ВІЛ
правцевий еритроцитарний діагностикум
2.діагностикум
4.свесь ер.барана, оброблені таніном з а\г возб.правця
5.для виявлення специфічних антитіл у сироватці крові (до возб.правця
Антиген кардіоліпіновий для мікропреципітації.
2.діагностикум
4.витяж.ліпід.фракцій із серця здорового бика
5.для виявлення специфічних антитіл у сироватці крові
Ультраозвучений трепонемний антиген
2.діагностикум
4.з убитих еб. сифілісу
5.для виявлення специфічних антитіл у сироватці крові
Корпускулярний туляремійний діагностикум
2.діагностикум
4.з окремих частинок збудника
5.для виявлення специфічних антитіл у сироватці крові
Дизентерійний діагностикум
2.діагностикум
4. завись із убитих м\о
5.для виявлення специфічних антитіл у сироватці крові пацієнта
Еритроцитарний діагностикум із шигел Зонне
2.діагностикум
4.свесь ер.барана, оброблені тонином
5.для виявлення специфічних антитіл у сироватці крові
Діагностикум із сальмонел тифімуріум
2.діагностикум
4.з убитих еб. сальмонел
5.для виявлення специфічних антитіл у сироватці крові
Сироватки
Протигангренозна кінська сироватка 5000 МО
2. сироватка
4.з сироватки крові гіперімм.коней анатоксином збудж.газової гангрени
6.парентерально, після проби з глобуліном 1:100
Імуноглобулін людини нормальний
2. сироватка
4. із сироватки крові донора
5. форм-е пас. специфічні. придб. мистецтв. імм
6.парентерально
Преципітуюча сибірка сироватка
2. сироватка
4. з сироватки крові гіперімунізованих тварин а\г возб.сиб. виразки
6. реакція преципітації (РП)
Ботулінічна сироватка тип – А 400 МО
2. сироватка
5.для виявлення специфічного антигену в досліджуваному матеріалі
6. реакція нейтралізації (РН)
Протисибірковий глобулін
2. сироватка
4.з сироватки крові гіперімунізованих тварин а\г возб.сиб.виразки
5. форм-е пас. специфічні. придб. мистецтв. імм
6.парентерально
Гемолітична сироватка
2. сироватка
4. із сироватки гіперімунізованих тварин еритроцитами тварин. ін.
5.для виявлення специфічного антигену в досліджуваному матеріалі
Холерна аглютинуюча сироватка Огава
2. сироватка
4.з сироватки крові гіперімунізованих тварин
5.для виявлення специфічного антигену в досліджуваному матеріалі
Люміністична туляремійна сироватка
2. сироватка
4.з сироватки крові гіперімунізованих тварин а\г возб.туляр.
5.для виявлення специфічного антигену в досліджуваному матеріалі
Імуноглобулін проти кліщового енцефаліту людини
2. сироватка
4. із сироватки крові донора
5. форм-е пас. специфічні. придб. мистецтв. імм
6.парентерально
ЕСНО-діагностична сироватка
2. сироватка
4. із сироватки крові гіперімунізованих тварин вірусами ЕСНО
5.для виявлення специфічного антигену в досліджуваному матеріалі
Імуноглобулін людини проти гепатиту В
2. сироватка
4. із сироватки крові донора, вакцинованого проти гепатиту В
5. форм-е пас. специфічні. придб. мистецтв. імм
6.парентерально
Антиглобулінова сироватка, мічена перкоксидазою
2. сироватка
4.з сироватки крові гіперімунізованих тварин
5.для виявлення специфічного антигену в досліджуваному матеріалі (ВІЛ)
Антирабічний імуноглобулін
2. сироватка
4. із сироватки крові донора
5. форм-е пас. специфічні. придб. мистецтв. імм
Реєстраційне посвідчення № РЗН 2016/3905 від 04.04.2016 р.
Призначення
Набір реагентів "Діагностикум сальмонельозний еритроцитарний Vi-антигенний для РПГА" (СЕД-Vi) призначений для виявлення антитіл до Vi-антигену збудника черевного тифу в сироватках крові людей реакцією пасивної гемаглютинації (РПГА).
Характеристика набору
Принцип дії
За наявності антитіл до збудника черевного тифу спостерігається гемаглютинація сенсибілізованих Vi-антигеном курячих еритроцитів, що призводить до утворення на дні U-подібних лунок планшета "парасолька" з еритроцитів, що осіли. За відсутності антитіл до збудника черевного тифу осілі еритроцити утворюють "крапку".
Склад набору
| Найменування реагенту | Опис | Кількість у наборі |
|---|---|---|
| Діагностикум еритроцитарний сальмонельозний Vi-антигенний, сухий 6% (СЕД) | Формалінізовані курячі еритроцити, сенсибілізовані Vi-антигеном S.typhi. Суха гігроскопічна маса коричневого кольору. Після розчинення – суспензія червоно-коричневого кольору. | 1 фл., з 0,6 мл |
| Сироватка діагностична сальмонельозна адсорбована, рецептор Vi, суха (у розведенні 1:20, (К+)) | Кроляча сироватка сальмонельозна адсорбована, рецептор Vi, у розведенні 1:20. Суха гігроскопічна маса пориста білого кольору. Після розчинення – прозора рідина жовтуватого кольору або безбарвна. | 1 фл., з 0,3 мл |
| Розріджувач досліджуваних проб (РІП) | Прозора рідина синьо-фіолетового кольору. | 1 фл., 10 мл |
| Буферний фосфатний розчин (ФБР) | Прозора безбарвна рідина. | 1 фл., 10 мл |
| Планшет полімерний для імунологічних реакцій одноразового застосування. | Планшет полімерний для імунологічних реакцій одноразового застосування із прозорого безбарвного полістиролу. | 1 шт. |
Діагностичні характеристики
Діагностикум повинен аглютинуватися в РПГА сироваткою діагностичної сальмонельозної адсорбованої, рецептор Vi, сухий (у розведенні 1:20), до титру, вказаного на етикетці сироватки. Умовним рівнем діагностичної характеристики сироватки крові здорових людей слід вважати розведення сироватки не вище 1:20. Час проведення аналізу – 3040 хвилин. Набір розрахований на дослідження 42 сироваток крові у варіанті скринінгу або 10 сироваток крові у варіанті їх титрування.
Запобіжні заходи
Набір призначений тільки для діагностики in vitro. Вхідні компоненти набору речовини інактивовані і безпечні. При роботі з набором слід дотримуватись СП 1.3.2322-08 та СанПіН 2.1.7.2790-10.
Додаткове обладнання та матеріали
Обладнання, матеріали, розчини:
- дозатори піпеткові 1-канальні з об'ємом дозування, що варіюється, 5 - 40 мкл; 40 - 200 мкл; 200 - 1000 мкл і 1000 - 5000 мкл;
- дозатори піпеткові 8- або 12-канальні з об'ємом дозування, що варіюється, 5 - 40 мкл і 40 - 200 мкл;
- вода дистильована (ГОСТ 6709-72).
Аналізовані зразки
Досліджувані зразки сироватки крові зберігають при температурі від 2 до 8 ° С не більше 3 діб від моменту взяття крові. Допускається зберігання сироватки в замороженому стані за температури не вище мінус 18 °С не більше 1 року. Перед використанням зразки розморожують при температурі від 16 до 25 °З перемішують струшуванням. Повторне заморожування не допускається. Не можна використовувати зразки з бактеріальним проростом та гемолізом. Перед постановкою реакції випробувані сироватки прогрівають при 56 С протягом 30 хвилин.
Проведення аналізу
Підготовка контрольної діагностичної сироватки (К+)
Готують робочий розчин сироватки діагностичної адсорбованої сальмонельозної, рецептор Vi, сухий (у розведенні 1:20) з 0,3 мл (К+). Для цього до вмісту флакона К+ додають 0,3 мл фосфатного буферного розчину (ФБР). Кількість сироватки, що залишилася, можна аліквотувати і зберігати в замороженому стані при температурі не вище мінус 18 °С не більше 6 місяців.
Підготовка діагностикуму еритроцитарного сальмонельозного (СЕД)
Для приготування робочого розведення суспензії діагностикуму еритроцитарного сальмонельозного до вмісту флакона з сухим 6% СЕД додають 0,6 мл дистильованої води та залишають для гідратації на 2 години при температурі від 16 до 25 °С. Потім до розчину додають 2,4 мл буферного фосфатного розчину (ФБР). Робочий розчин зберігають за нормальної температури від 2 до 8 °З трохи більше 1 міс. Заморожування не допускається.
Постановка РПГА при скринінгу сироваток крові
Сироватки крові для скринінгового дослідження розводять у лунках планшета наступним чином:
- попередні розведення 1:20 готують у перших лунках планшета, вносячи до них спочатку 190 мкл розчину РІП, потім - по 10 мкл досліджуваних сироваток. Кожну сироватку вносять окремим наконечником і ретельно піпетують (при цьому колір розчину в лунках після додавання сироваток повинен змінитися з синьо-фіолетового на зелений);
- скринінгові розведення 1:40 готують у других лунках, вносячи в них спочатку 25 мкл розчину ФБР, а потім по 25 мкл попередньо розведених сироваток і ретельно піпетують.
При кожній постановці РПГА необхідно проводити контрольне визначення титру К+. Для цього 8 лунок довгого ряду вносять по 50 мкл розчину ФБР. Потім у першу лунку вносять 50 мкл робочого розчину К+ (1:20), ретельно піпетують і переносять у наступні лунки по 50 мкл, отримуючи 2-кратні розведення від 1:40 до 1:5120. Ще 4 лунки вносять по 50 мкл розчину ФБР контролю СЕД відсутність спонтанної гемагглютинации.
У всі лунки планшета зі скринінговими розведеннями досліджуваних сироваток (крім перших, що містять РІП) і контролю вносять по 25 мкл СЕД. Перед використанням суспензію СЕД у флаконі або ванночці перемішати!Планшет ретельно струшують і залишають при температурі від 16 до 25 ° С на 30 - 40 хвилин до осідання еритроцитів у контролі.
Постановка РПГА при титруванні досліджуваних сироваток крові
Титрування досліджуваних сироваток та робочого розчину К+ проводять у коротких рядах планшета. Ще один короткий ряд використовують для контролю на відсутність спонтанної гемаглютинації СЕД.
У перші лунки коротких рядів для титрування сироватки, що досліджується, вносять 180 мкл розчину РІП. У решту лунок вносять по 50 мкл розчину ФБР.
У лунки з розчином РІП вносять 20 мкл досліджуваних сироваток (отримують розведення 1:10). Кожну сироватку вносять своїм наконечником і ретельно піпетують (колір розчину в лунках має змінитися з синьо-фіолетового на зелений). Потім з перших лунок переносять по 50 мкл наступні лунки рядів, отримуючи дворазові розведення від 1:20 до 1:1280. Наприкінці титрування з останніх лунок розчини об'ємом 50 мкл видаляють.
При кожній постановці РПГА необхідно проводити контрольне визначення титру К+. Для цього 8 лунок довгого ряду вносять по 50 мкл розчину ФБР. Потім у першу лунку вносять 50 мкл робочого розчину К+ (1:20), ретельно піпетують і переносять у наступні лунки по 50 мкл, отримуючи 2-кратні розведення від 1:40 до 1:5120.
Для контролю діагностикуму відсутність спонтанної гемагглютинації в усі лунки короткого ряду вносять по 50 мкл розчину ФБР.
У всі лунки (крім перших лунок кожного ряду досліджуваних сироваток, що містять РІП) вносять по 25 мкл СЕД. Перед використанням суспензію СЕД у флаконі або ванночці перемішати! Планшет ретельно струшують і залишають при температурі від 16 до 25 ° С на 30-40 хвилин до повного осідання еритроцитів у контролі.
Облік та інтерпретація результатів
Облік результатів при скринінгу сироваток крові
Облік результатів проводять за умовною шкалою чотирьох хрестів. Титром сироватки вважається її розведення, що дає гемаглютинацію не менш як на 3 (+++) хреста.
- ++++ (4+) - аглютиновані еритроцити утворюють на дні лунки перевернутий "парасольку", краї його опадають;
- +++ (3+) - аглютиновані еритроцити утворюють на дні лунки перевернутий "парасольку", краї його рівні;
- ++ (2+) - поряд з аглютинованими еритроцитами на дні лунки є осад у вигляді невеликого «кільця» з неаглютинованих еритроцитів;
- + (1+) - більшість еритроцитів не аглютиноване і осідає у вигляді невеликого «кільця»;
- (-) - Неаглютиновані еритроцити утворюють на дні лунки «точку».
Позитивним результатом вважають гемаглютинацію навантажених Vi-антигеном еритроцитів не менше ніж на 3 хрести (+++).
Контролем якості діагностикуму служать 4 лунки контрольного ряду, які вносили тільки розчин ФБР і СЕД. У цих лунках не повинно бути спонтанної гемаглютинації – негативна реакція (-). Інакше слід повторити дослідження. Якщо при повторній постановці з'являється гемаглютинація, препарат не використовується.
Сироватки з негативним результатом слід вважати антитіл, що не містять, до Vi-антигену в діагностичному титрі 1:40 і нижче.
Сироватки, що дають позитивний результат у розведенні 1:40, слід досліджувати повторно у варіанті титрування сироватки для встановлення її титру.
Облік результатів при титруванні сироваток крові
Титром сироватки вважається її розведення, що дає гемаглютинацію не менше ніж на 3 (+++) хреста.
Контролем якості діагностикуму служать лунки низки контролю СЕД. У цих лунках не повинно бути спонтанної гемаглютинації – негативна реакція (-). Інакше слід повторити дослідження. Якщо при повторній постановці з'являється гемаглютинація, препарат не використовується.
Набір реагентів Діагностикум Сальмонельозний ВІ-антигенний призначений для виявлення в сироватці крові людини специфічних антитіл до Ві-антигену тифу сальмонел в реакції пасивної гемаглютинації (РПГА).
ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРУ
2.1. Принцип методу.
Діагностиком Сальмонельозний ВІ-антигенний є Ві-антиген, фіксований на поверхні еритроцитів. При взаємодії із сироватками, що містять антитіла до Ві-антигену, спостерігається феномен аглютинації еритроцитів.
2.2. СКЛАД НАБОРУ
| Реагенти | Кількість |
| Діагностикум еритроцитарний сальмонельозний Ві-антигенний рідкий- являє собою 1% завись формалінізованих та сенсибілізованих Ві-антигеном сальмонел тифу еритроцитів барана у фосфатному буферному розчині (рН 7,2 + 0,2; концентрація 0,06 моль/л). Гомогенна суспензія коричневого кольору без пластівців; при відстоюванні утворюється 2 шари: щільний коричневий осад еритроцитів і прозора жовта надосадова рідина | 1 флакон - 6 мл |
| Сироватка діагностична сальмонельозна адсорбована рецепторгомогенна маса від білого з коричневим відтінком до бежевого кольору | 1 флакон – з 0,1 мл |
| 1 % завись формалінізованих, несенсибілізованих еритроцитів барана- гомогенна суспензія коричневого кольору без пластівців; при відстоюванні утворюється 2 шари: щільний коричневий осад еритроцитів і прозора жовта надосадова рідина | 1 флакон – |
| Розчин для розведення сироватки та постановки РПГА 0,9 % розчин натрію хлориду – прозора безбарвна рідина, рН від 6,5 до 7,5 | 2 флакони – по 8 мл |
| Планшет круглодонний для імунологічних реакцій одноразового застосування.складається з 8 рядів, кожен з яких включає 12 лунок з прозорим, безбарвним, круглим дном. | 1 шт |
Аналітичні та діагностичні характеристики.
3.1. Діагностикум повинен аглютинуватися в РПГА сироваткою діагностичної сальмонельозної адсорбованої рецептор Ві сухий у розведенні не менше ніж 1:160.
Умовним рівнем діагностичної характеристики сироватки крові здорових людей слід вважати розведення сироватки не вище 1:20.
3.2. Час проведення аналізу – 2 год.
3.3. Набір розрахований на 8 визначень.
ЗАПОБІЖНІ ЗАХОДИ
Працюючи з набором слід дотримуватися «Правила устрою, техніки безпеки, виробничої санітарії, протиепідемічного режиму та особистої гігієни під час роботи у лабораторіях (відділеннях, відділах) санітарно-епідеміологічних установ системи Міністерства охорони здоров'я СРСР (М., 1981 р.).
Аналізовані сироватки, а також реагенти, що перебувають з ними в контакті, слід розглядати як потенційно інфіковані, здатні тривалий час зберігати або передавати ВІЛ, вірус гепатиту або будь-який інший збудник вірусної інфекції — поводитися з ними слід обережно:
- працювати у гумових рукавичках;
- під час піпетування необхідно користуватися автоматичними дозаторами;
- при завершенні роботи аналізовані сироватки і реагенти, що знаходяться з ними в контакті, інструменти піддавати обробці дезінфікуючим розчином
- обладнання до та після роботи протирати 70% етиловим спиртом.
Аналізовані сироватки повинні бути інактивовані за температури 56 0 С протягом 30 хв.
Діагностична сальмонельозна адсорбована рецептор Ві, що входить до складу набору сироватка, суха інактивована.
Об'єктивні результати аналізу гарантуються під час таких умов:
- зберігання всіх реагентів набору здійснювати за температури від 2 до 8 0 С;
- не використовувати реагенти з терміном придатності, що минув;
- не використовувати реагенти набору за відсутності на їх упаковці відповідного маркування;
- для проведення РПГА використовувати реагенти, що входять лише до цього набору.
Vi-діагностикум
Діагностикум Ві
Vi-антигенний
