Bitmiş ortamın rengi ve şeffaflığı. Uranyum zincir reaksiyonu ve sansasyonel zincir reaksiyonu

119. Pandey ve Nonne - Apelt reaksiyonları

Pandey reaksiyonunu gerçekleştirmek için bir reaktif olarak, 100 g sıvı karbolik asidin 1000 ml damıtılmış su ile kuvvetli bir şekilde çalkalanmasıyla elde edilen berrak bir süpernatan sıvı kullanılır. Sediment için ve temiz sıvı(reaktif), bu karışım önce 3-4 saat termostata yerleştirilir ve ardından 2-3 gün oda sıcaklığında tutulur.

Koyu renkli kağıda bir saat veya cam slayt yerleştirin ve üzerine 2-3 damla reaktif uygulayın, ardından 1 damla Beyin omurilik sıvısı. Damla bulanıklaşırsa veya çevresinde ipliksi bir bulanıklık görülürse, reaksiyon pozitif olarak kabul edilir.

Nonne-Apelt reaksiyonunu gerçekleştirmek için temiz test tüpleri, doymuş bir amonyum sülfat çözeltisi, damıtılmış su ve koyu renkli kağıt gereklidir. Doymuş bir amonyum sülfat çözeltisi hazırlanır Aşağıdaki şekilde: 0,5 g kimyasal olarak saf nötr amonyum sülfat 1000 ml'lik bir şişeye konur, daha sonra 95 ° C'ye ısıtılmış 100 ml damıtılmış su dökülür, tuz tamamen eriyene kadar çalkalanır ve birkaç gün oda sıcaklığında bırakılır. 2-3 gün sonra çözelti süzülür ve pH belirlenir. Reaksiyon nötr olmalıdır.

Elde edilen çözeltiden 0,5-1 ml test tüpüne dökülür ve aynı miktarda beyin omurilik sıvısı tüp duvarı boyunca dikkatlice eklenir. 3 dakika sonra sonucu değerlendirin. Beyazımsı bir halkanın görünümü, pozitif bir reaksiyonu gösterir. Daha sonra test tüpünün içeriği çalkalanır, saf su içeren bir test tüpü ile karşılaştırılarak bulanıklık derecesi belirlenir. Reaksiyonun sonuçları siyah kağıdın arka planına karşı değerlendirilir.

120. Bordet-Jangu reaksiyonu

Tanımlamada değerli tanı testi kronik gonore kronik hastalığı olan kişiler arasında iltihaplı hastalıklar genitoüriner sistem. Literatüre göre, ile doğru kullanım Bu yöntem, bakteriyoskopik veya bakteriyolojik yöntemle saptanamayan gonore vakalarının %80'e kadarını ortaya çıkarır.

Bordet-Jangu reaksiyonu, önceki bir hastalığın veya teşhis için bir gonovaccine kullanımının (immünobiyolojik provokasyon yöntemi) yanı sıra terapötik (kadınlarda genitoüriner sistemin kronik enflamatuar süreçlerinin tedavisi) bir sonucu olarak bir takip olabilir. Baksheev'e) amaç. Bu nedenle, gerçekleştirmeden önce dikkatlice bir anamnez toplamak gerekir,

Reaksiyon ayrıca sütün eklenmesiyle yanlış pozitif olabilir, tıbbi amaçlar pirojenal.

Bu nedenle, olumlu bir Bordet-Jangu reaksiyonu, varlığın tartışılmaz kanıtı olarak hizmet etmez. gonokok enfeksiyonu, hem de olumsuz gonore yokluğunun kanıtı olamaz. Yine de pozitif sonuçlar vücutta gonokok enfeksiyonunun odağını aramak için uzun süre bir doktor tarafından yönlendirilmelidir.

Bir antijen olarak, 1 ml'de 3-4 milyar mikrobiyal cisim içeren öldürülmüş bir gonokok kültürü kullanılır. Gonokok antijeni formaldehit çözeltisi ile korunur ve 1-5 ml'lik ampullere dökülür. Açılmamış ampuller 6 ay kullanıma uygundur, açıldıktan sonra steril test tüpünde 2-3 gün buzdolabında 3-5 °C sıcaklıkta saklanabilir,

Borde-Zhang tamamlayıcı sabitleme reaksiyonu, Wasserman reaksiyonuna benzer şekilde gerçekleştirilir (bkz. No. 121). Gonokokal antijen, ampulün etiketinde belirtilen titreye göre izotonik sodyum klorür çözeltisi ile seyreltilir. Reaksiyon çoğunlukla 2,5 ml'lik bir hacimde gerçekleştirilir, bu nedenle 0,5 ml seyreltilmiş 1: 5 test serumuna, her test tüpüne 0,5 ml seyreltilmiş antijen eklenir. Kalan 1,5 ml, 1 ml hemolitik sistem ve 0,5 ml tamamlayıcıdır.

Reaksiyon, ifade edilen varlığında pozitif olarak kabul edilir. değişen dereceler test edilen serumda hemoliz gecikmeleri. Kontrolde (kan serumu sağlıklı insanlar) tam hemoliz gözlenir.

121. Wasserman reaksiyonu

Frengi hastalarının kan serumunda reaktifler ve antikorlar bulunur. Reajinler, kardiyolipin antijeni ile bileşiklere girme kabiliyetine sahiptir. Treponema pallidum'a karşı spesifik antikorlar, spesifik antijenlerle birleşir. Elde edilen antijen-antikor kompleksleri, reaksiyona eklenen tamamlayıcı tarafından emilir. Endikasyon, bir hemolitik sistem (koyun eritrositleri + hemolitik serum) dahil edilerek üretilir.

Reaksiyonun gerçekleşmesi için:

a) izotonik sodyum klorür çözeltisi;

b) ultrasonik treponemal (+4 °C'de buzdolabında saklanır) ve kardiyolipin (oda sıcaklığında saklanır) antijenleri;

c) 5-10 sağlıklı kobayın kalbinin delinmesiyle elde edilen kan serumu olan tamamlayıcı. Sağlandığı takdirde buzdolabında 2 aya kadar saklanabilir
%4'lük çözelti konservesi borik asit ve %5 sodyum sülfat çözeltisi;

d) hemolizin - farklı titrelere sahip koyun eritrositleri ile aşılanmış hemolitik tavşan kanı serumu (4 ° C sıcaklıkta buzdolabında saklanır);

e) delinme yoluyla elde edilen koyun eritrositleri şahdamarı. Kan, cam boncuklarla (karıştırmak için) steril bir kavanozda toplanır, 15 dakika çalkalanır. Fibrin pıhtıları steril gazlı bezden süzülerek ayrılır. Defibrine kan buzdolabında 5 güne kadar saklanabilir.

Bazen koyun kanının daha uzun süre saklanmasına ihtiyaç duyulur ve bu nedenle bir su banyosunda kaynatılan özel bir koruyucu (6 g glikoz, 4.5 g borik asit, 100 ml izotonik sodyum klorür çözeltisi) ile korunur. 3 gün boyunca günde 20 dakika 100 ml defibrine koyun kanı için 15 ml koruyucu gereklidir. Bu şekilde saklanan defibrine kan buzdolabında saklanır.

Ana deneyden önce birkaç aşamadan geçilir.

gelen bir hastada kubital damar 5-10 ml kan alın ve serumu işleyin. Çocuklarda şakak damarından veya topuktaki bir kesiden kan alınabilir. Delme steril aletler, bir şırınga ve bir iğne ile yapılır.
izotonik sodyum klorür çözeltisi ile önceden yıkanmıştır.

Araştırma için kan aç karnına alınır; Çalışmadan 3-4 gün önce hastanın kullanması yasaktır. ilaçlar, digitalis hazırlıkları, alkol al.

olan hastalarda çalışma yapılmamalıdır. yükselmiş sıcaklık vücut, travma, ameliyat, anestezi, yakın zamanda geçirilmiş enfeksiyon hastalıkları, kadınlarda adet döneminde, gebelerde (gebeliğin son 10 gününde), doğumda (doğumdan sonraki ilk 10 günde) ve yenidoğanlarda (ilk 10 günlük yaşam).

Elde edilen kan steril bir tüpte 15-30 dakika 37 °C sıcaklıktaki bir termostata yerleştirilir. Oluşan pıhtı steril bir cam çubukla test tüpünün duvarlarından ayrılır ve bir gün buzdolabında bekletilir. Ayrılan şeffaf serum (pıhtı üzerinde) bir pastör pipeti ile kauçuk bir ampul kullanılarak emilir veya dikkatlice başka bir steril tüpe dökülür ve 56 °C sıcaklıkta 30 dakika su banyosunda inaktive edilir. Deney için bu şekilde hazırlanan serum buzdolabında 5-6 güne kadar saklanabilir.

Antijenler, etikette belirtilen yönteme ve titreye göre seyreltilir.

Hemolitik sistemi hazırlayın. Bunun için reaksiyon için gerekli miktarda defibrine edilmiş kan veya koyun eritrositleri santrifüjlenir, plazma dikkatlice ayrılır ve çökelti, süpernatant tamamen renksiz hale gelene kadar 5-6 hacim izotonik sodyum klorür çözeltisi ile yıkanır. Üçlü bir titreye göre tortudan izotonik bir sodyum klorür çözeltisi içinde% 3'lük bir eritrosit süspansiyonu hazırlanır.

Hemolitik serum çözeltisi ve koyun eritrosit süspansiyonu hızla karıştırılır ve 30 dakika boyunca bir termostata yerleştirilir.

Kuru tamamlayıcı, 1:10, normal inaktive insan serumu - 1:5 oranında izotonik sodyum klorür çözeltisi ile seyreltilir.

Kompleman, 3 sıra halinde 10 tüplük bir rafa yerleştirilmiş 30 tüpte titre edilir. İki sıra halinde, iki antijen varlığında, üçüncü sırada - izotonik sodyum klorür çözeltisi ile titre edilir. Beş tüp kontroldür: iki tanesi karşılık gelen iki antijen için ve her biri kompleman, hemolitik serum ve hemotoksisite için izotonik sodyum klorür solüsyonunu izlemek için; bunları şu şekilde doldurun:

Tüpler 45 dakika termostata yerleştirilir ve ardından kontrol edilir. Hemoliz herhangi bir test tüpünde olmamalıdır.

1:10 seyreltmede tamamlayıcı, rafın 1. sırasının 10 test tüpüne dozlarda dökülür: 0.1, 0.16, 0.2,0.24, 0.3, 0.36,0.4,0.44, 0.5 ve 0.55 ml. Her tüpün içeriğine 1 ml'ye kadar izotonik sodyum klorür solüsyonu ekleyin ve iyice karıştırın. Her tüpten 0.25 ml karışım 2. ve 3. sıradaki ilgili test tüplerine aktarılır. Test tüplerinin bulunduğu raf çalkalanır, 3. sıra test tüplerine 0,5 ml hemolitik sistem eklenir, tekrar çalkalanır ve 45 dakika 37 °C sıcaklıktaki bir termostata yerleştirilir. 1:5 oranında izotonik sodyum klorür çözeltisi ile seyreltilmiş normal insan kanı serumu, 0.25 ml 30 test tüpünün tümüne dökülür.

Antijen I (treponemal ultrason), titrede izotonik sodyum klorür çözeltisi ile seyreltilir, 1. sıranın 10 test tüpüne 0.25 ml eklenir; antijen II (aynı seyreltmede ve aynı miktarda kardiyolipin) - 2. sıranın 10 test tüpünde. 3. sıradaki 10 test tüpüne 0.25 ml izotonik sodyum klorür çözeltisi dökülür, kalan 0.25 ml dökülür. Termostatta inkübasyondan sonra 20 test tüpüne (1. ve 2. sıra) 0,5 ml hemolitik sistem eklenir, çalkalanır ve tekrar termostatta 45 dakika bekletilir.

45 dakika sonra, tamamlayıcının çalışma dozu, yani titresi, % 15-20 aralığında bir pay ile belirlenir.

Tamamlayıcı titre olarak kabul edilir asgari miktar, antijen ve normal insan kan serumu varlığında ram eritrositlerinin tam hemolizine neden olur.

Ana deneyim, izotonik sodyum klorür çözeltisi ile 1: 5 oranında seyreltilmiş test edilen her bir inaktive serumun üç test tüpünde 0.25 ml'ye dökülmesidir. İlk tüpe 0.25 ml antijen I, ikinci tüpe 0.25 ml antijen II ve üçüncü tüpe (kontrol) 0.25 ml izotonik sodyum klorür solüsyonu ekleyin. Tüm test tüplerine çalışma dozuna seyreltilmiş 0.25 ml tamamlayıcı ekleyin. Tüm test tüpleri bir termostata 45 dakika yerleştirilir, daha sonra bunlara 0,5 ml hemolitik sistem eklenir, çalkalanır ve 45-50 dakika termostata yerleştirilir. Deneyin sonucu, kontrol tüplerinde tam hemoliz başlangıcından sonra kaydedilir.

Reaksiyonun sonuçları artılarla değerlendirilir: hemolizde tam gecikme (güçlü pozitif reaksiyon) ++++, önemli (pozitif reaksiyon) +++, kısmi (zayıf pozitif reaksiyon) ++, önemsiz (şüpheli reaksiyon) - ±, hemolizde gecikme yok (negatif reaksiyon) - .

saat Sayısal metot Wassermann reaksiyonunu gerçekleştirirken, deneyim, izotonik sodyum klorür çözeltisi ile seyreltilmiş azalan serum hacimleri ile belirlenir.

Wasserman reaksiyonunun ana deneyimini yürütme planı

Wasserman reaksiyonunun klinik önemini abartmak zordur. Tedaviye başlamadan önce tüm hastalar için yapılır, ancak özel anlam o var gizli frengi, yenilgi iç organlar ve sinir sistemi.

Wasserman reaksiyonunun sonuçları, belirli bir süre içinde tedavi edilen hastaların kayıtlarının silinmesine neden olan tedavinin kalitesini karakterize eder.

Primer sifilizde, Wasserman reaksiyonu enfeksiyon anından itibaren 6. haftanın sonunda genellikle pozitiftir; ikincil taze sifiliz ile vakaların neredeyse %100'ünde pozitiftir, ikincil tekrarlama ile - %98-100; üçüncül aktif -% 85'te; üçüncül gizli - vakaların% 60'ında.

Wasserman reaksiyonu tüm hamile kadınlar, somatik, sinirsel, zihinsel ve cilt hastalıkları, ayrıca nüfusun kararlaştırılmış birlikleri. Aynı zamanda, reaksiyonun pozitif ve zayıf pozitif sonuçları, hamileliğin sonunda ve doğumdan sonra hipertiroidizm, sıtma, cüzzam, çürüme ile olabileceğinden eleştirel olarak tedavi edilmelidir. kötü huylu tümör, bulaşıcı hastalıklar, kollajenozlar vb. Bu nedenle, varlığında klinik bulgular hastalıklar, ilk etapta bakteriyoskopi verileriyle birlikte dikkate alınmalıdır.

Aynı zamanda, Wasserman reaksiyonunun sonuçlarının gerçek doğasını bozabilecek faktörler vardır: kötü yıkanmış laboratuvar cam eşyaları (test tüplerinde asit ve alkali izleri), araştırma için alınan kanın uzun süreli saklanması, yağ tüketimi ve hastaların muayene öncesi, adet dönemi vb.

Her durumda, Wassermann reaksiyonuna ek olarak RIBT (bakınız 122, 123, 124), vb. dahil olmak üzere hastanın kapsamlı bir muayenesinin yapılması arzu edilir.

122. Sachs Reaksiyonu - Vitebsky (sitokolik)

Frengi tespit etmek için kullanılır. Hastanın kan serumu bir antijen ile karıştırıldığında bir çökelti oluşumuna dayanır.

Antijeni hazırlamak için, birkaç sığır kalbinin kasları tendonlardan, fasyadan, yağdan temizlenir, bir kıyma makinesinde kıyılır ve günlük 20 dakikalık çalkalama ile 15 gün boyunca 5 kat hacimde %96 etanol ile ekstrakte edilir. Elde edilen ekstrakt vakum altında porselen bir kap içinde su banyosunda buharlaştırılır. Kalıntıya (parlak sarı lipoid kütlesi) ekstraksiyon için alınan kas hacminin 1 / 3'ü kadar sıcak% 96 etil alkol eklenir.

Ekstrakt 3 gün oda sıcaklığında tutulur, süzülür. soğuk su) ve pozitif ve negatif serumlarla titrasyonun sonuçlarına bağlı olarak %0.3-0.6 kristal kolesterol solüsyonu ekleyin. Sitokolik antijeni kapalı ampullerde veya kapalı test tüplerinde oda sıcaklığında saklayın.

Metodoloji. 2 ml izotonik sodyum klorür çözeltisine 1 ml sitokolik antijen hızla dökülür ve pullar görünene kadar 15 dakika oda sıcaklığında bırakılır. 0,2 ml inaktive seruma 0,1 ml antijenik emülsiyon ekleyin, 3 dakika çalkalayın ve 30 dakika yalnız bırakın, ardından 1 ml izotonik sodyum klorür çözeltisi ekleyin.

1.2 ml izotonik sodyum klorür solüsyonu ve 0.1 ml antijenik emülsiyon antijenli kontrol tüpüne eklenir. Kontrolde pul olmamalıdır. Reaksiyonun sonuçları görsel olarak veya bir büyüteçle dikkate alınır ve düşen pul miktarına bağlı olarak artılarla (++++, +++, ++) gösterilir. Negatif bir reaksiyon ile pul yoktur, ancak tüpün içeriği hafif yanardöner olabilir.

1931'de P. Sachs ve E. Witebsky, antijenin iki aşamada seyreltilmesini içeren bu tekniğin bir modifikasyonunu önerdi: 1 kısım antijene 2 kısım izotonik sodyum klorür çözeltisi ilave edildi, oda sıcaklığında 5 süreyle tutuldu. dakika ve 9 kısım izotonik çözelti daha sodyum klorür eklenir. Antijenin, yazarlara göre reaksiyonun duyarlılığını artıran% 2 sodyum klorür çözeltisi ile seyreltilmesi de önerilir. Serum seyreltme ile reaksiyonun nicel bir modifikasyonu da mümkündür (1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64, vb.).

Reaksiyon oldukça hassastır, kısa sürer (yaklaşık 1 saat) ve sonuçları hemen okunur.

123. Soluk treponema immobilizasyon reaksiyonu (RIBT)

Frengili hastaların kan serumunda bir reaksiyon yardımıyla, soluk treponemayı hareketsiz hale getiren antikorlar ve tamamlayıcılar tespit edilir.

Birincil sifiliz ile RIBT ağırlıklı olarak negatiftir, ikincil - vakaların% 92-96'sında pozitif, üçüncül -% 92-100'ünde, sinir sisteminin sifilizinde ve konjenital - vakaların% 86-89'unda.

Sarkoid, eritematoz, diyabet, malign tümörlerde RIBT'nin olumlu sonuçları kaydedildi, viral hepatit, karaciğer sirozu, sıtma, cüzzam, bulaşıcı mononükleoz, sıcak ülkelerin bazı hastalıkları (bira bardağı, yaws, vb.).

Antijen, sifiliz ile enfekte olmuş bir tavşanın testislerinden izotonik sodyum klorür çözeltisi içinde 0.75-1 ml soluk treponema süspansiyonu (görüş alanı başına 50 kişi) verilerek alınan bir soluk treponema süspansiyonudur.

Testis materyali hayvana bulaştıktan 6-8 gün sonra alınmalıdır. Antijeni almadan önce tavşan kan kaybıyla (kalp delinmesi veya şahdamarı). Testis dokusu ezilir ve izotonik sodyum klorür solüsyonu ile seyreltilmiş sağlıklı tavşan kanı serumu ile doldurulur, -30 dakika çalkalanır ve sonra 10 dakika (1000 rpm) santrifüj edilir. Süpernatant mikroskobik olarak incelenir. Her görüş alanında en az 10-15 soluk treponema olmalıdır.

Tamamlayıcı hazırlanıyor her zamanki gibi kobayların kanından.

RIBT için ihtiyacınız olanlar: 1,2 ml %0,2 jelatin solüsyonu, 2,8 ml %5 albümin solüsyonu, 1,6 ml soluk treponema süspansiyonu; ortam pH - 7.2. Bu karışıma 0.15 ml tamamlayıcı (kokteyl) eklenir. Paralel olarak iki örnek konur: aktif (deney) ve reaktif (kontrol) tamamlayıcılar.

İncelenen serum “1” işaretine kadar melanjörlere toplanır ve ardından “2” işaretine kadar kokteyl toplanır ve steril kauçuk halka ile kapatılır.

Aynı zamanda, bariz pozitif ve bariz negatif serumlarla benzer bir reaksiyon gerçekleştirilir.

Melangerler numaralandırılır ve 18-20 saat boyunca 35 °C sıcaklıktaki bir termostata yerleştirilir, ardından termostattan çiftler halinde (deney - kontrol) çıkarılır ve içerikleri uygun test tüplerine dökülür. Cam slayta 2 damla uygulanır: solda - deneyim, sağda - kontrol, bir lamel ile kaplanmış ve karanlık bir görüş alanında mikroskoplandırılmıştır.

İlk olarak, kontrolün sonuçları incelenir: hareketli ve hareketsiz soluk treponemaların yüzdesi belirlenir. Sayma formülü: X = (A - B) / A * 100, burada A, kontroldeki hareketli soluk treponema sayısıdır; B - deneydeki mobil soluk treponema sayısı.

Örnek: (24 - 19) / 24 * 100 = %21.

RIBT sonuçlarının tahminleri: %20'nin altında - negatif. %21-30 - şüpheli, %31-50 - zayıf pozitif, %50'nin üzerinde - pozitif.

Antijen, tamamlayıcı ve yardımcı, gösterge veya hemolitik sistem - hemolitik serum ve koyun eritrositleri.

İlk sistemde spesifik bir antijen + antikor kompleksi oluşursa, tamamlayıcı adsorbe edilir (bu kompleks ile birleşir) ve ikinci sistemde hemoliz olmaz.

Reaksiyon şunları gerektirir:

1. Hastanın kübital damarının delinmesiyle alınan kandan elde edilen test serumu. Kan pıhtılaşmasından sonra serum ayrı bir tüpe aspire edilir ve su banyosunda 56 °C'de 30 dakika inaktive edilir.

2. Antijen - öldürülmüş gonokokların süspansiyonu.

3. Koyun eritrositleri, steril defibrine kandan elde edilir. Yeni porsiyon tuzlu su ile 3 kez santrifüj edilerek yıkanırlar. Reaksiyonda %3'lük bir eritrosit süspansiyonu kullanılır.

4. Hemolitik serum, tavşanların koç eritrositleri ile aşılanmasıyla önceden hazırlanır. Serum kullanımdan önce titre edilir.

5. Tamamlayıcı - taze kobay serumu. Kobayın kalbinden şırınga ile kan emilir, pıhtılaşmadan sonra serumu ayrılır. Deneyden önce komplemanın çalışma dozu titre edilir. Bunu yapmak için, tamamlayıcı 1:10'un ana dilüsyonunu alın ve 0.1'den 0.5'e kadar olan test tüplerine dökün, ardından her test tüpündeki hacim tuzlu su ile 1.5 ml'ye ayarlanır.

Aynı zamanda, bir hemolitik sistem hazırlanır - üçlü titrede seyreltilir, hemolitik serum +% 3 koyun eritrosit süspansiyonu. Her iki bileşen de farklı hacimlerdedir ve bir termostatta 30 dakika tutulur (karışımın hassaslaşması), daha sonra karışım 1 ml'de test tüplerine eklenir ve 30 dakika termostata yerleştirilir. 2 test tüpü kontrol görevi görür:

1. 1 ml hemolitik sistem + 1.5 ml salin;

2. 0,5 ml tamamlayıcı 1:10 + 0,5 ml eritrosit süspansiyonu + 1,5 ml salin.

Kompleman titresi, hemolizin hala meydana geldiği minimum miktardır. Reaksiyonu kurmak için, titreye karşı %20-25 oranında arttırılan, yani genellikle hemolizli sondan bir önceki test tüpünde bulunan kompleman miktarı arttırılan bir tamamlayıcı çalışma dozu alınır. Kompleman dozunda bir artış gereklidir çünkü reaksiyonda kompleman aktivitesi reaksiyonun diğer bileşenleri (antijen, serum) tarafından bir şekilde baskılanabilir.
43) RSK Wasserman

Antikorları tespit etmek ve etkinliğini belirlemek için sifiliz teşhisinde kullanılır özel terapi. Borde-Gangou tamamlayıcı fiksasyon reaksiyonu ilkesine dayanmaktadır. Wasserman reaksiyonundaki önemli bir fark, antijenin spesifik olmamasıdır: normal organlar hayvanlar

Wasserman reaksiyonunu oluşturmak için hastanın serumu, teşhis, çapraz reaksiyona giren antijenler No. 1, No. 2, kompleman, hemolitik serum, ram eritrositleri, tuzlu su.

Teşhis No. 1 - spesifik, treponemal.

2 No'lu Teşhis - spesifik değil, kardiyolipin antijeni, sabit bir lipoid kimyasal bileşimine sahip yüksek oranda saflaştırılmış sığır kalbi özleridir. Lipoidler, tarafından kimyasal bileşim treponema pallidum lipoidlerine yakındır, bu nedenle spesifik olmasalar da spiroketlere karşı antikorları sabitlerler.

Bu antijenler merkezi olarak üretilir ve etikette belirtilen titreye göre seyreltilerek reaksiyonda kullanılır.

Ana deneyle eşzamanlı olarak, 2 kontrol yerleştirilir: bariz şekilde negatif ve bariz şekilde pozitif serumlarla.

Ana deneyimi ayarlama

İlk olarak inaktive edilmiş ve 1:5 oranında seyreltilmiş test serumu 4 test tüpüne dökülür. Daha sonra antijenler (No. 1, No. 2) 2 test tüpüne dökülür, 3. test tüpüne fizyolojik salin dökülür. Bundan sonra, tüm tüplere bir çalışma dozu tamamlayıcı eklenir. Malzemeleri karıştırdıktan sonra, test tüplü raf, 30 dakika boyunca 37 °C'de bir termostata yerleştirilir. Termostatta tutulduktan sonra tüm test tüplerine hemolitik sistem eklenir. Tüpler tekrar 2 saat termostata yerleştirilir, ardından oda sıcaklığında bırakılır. Ertesi gün, sonuç not edilir.Reaksiyonun yoğunluk derecesi, yoğunluğa bağlı olarak dört artı (++++), üç (++++), iki (++) ve bir (+) olarak tahmin edilir. sıvının rengi ve alttaki eritrosit tortusunun boyutu. Tam hemoliz (-) eksi ile gösterilir. Farklı antijenlere sahip sonuçlar arasında keskin bir tutarsızlıkla, deney yeni bir kan bölümü ile tekrarlanır.
44) RIT-r. Soluk treponemanın immobilizasyonu.

Bu reaksiyon olarak kullanılır teşhis amaçlı ve tanınması için yanlış pozitif sonuçlarözellikle gizli sifiliz ile standart serolojik reaksiyonlar.

RIBT, sifilizli ve aktif komplemanlı hastaların serumunda immobilizinlerin varlığında, soluk treponemaların hareketliliklerini kaybetmeleri gerçeğinde yatmaktadır.

RIBT steril kutulara yerleştirilir. Test serumu, tamamlayıcı ve antijen reaksiyona katılır.

RIBT'de antijen, bir tavşan testisinden soluk treponema süspansiyonudur. erken tarihler(enfeksiyondan 7-8 gün sonra) sifilitik orşit. Özel bir süspansiyon ortamı, en az bir gün boyunca soluk treponemanın canlılığını korur. RIBT'de tamamlayıcı kullanılır kobaylar. RIBT anaerobik koşullar altında ilerler. Bileşenleri olan test tüpleri, bir mikroaerostat içine yerleştirilir. atmosferik hava ve bir gaz karışımı enjekte edilir (95 kısım nitrojen ve 5 kısım karbon dioksit). Test tüplü mikroanaerostat, 18-20 saat süreyle bir termostata (35°C) yerleştirilir.

Reaksiyonun formülasyonuna paralel olarak, kontrol çalışmalarıönceki deneyimlerden alınan pozitif ve negatif kan serumu ile.

RIBT sonuçları, test tüpleri termostattan çıkarıldıktan sonra (yani 18-20 saatlik deneyimden sonra) değerlendirilir. Bir Pasteur pipeti ile, test tüpünün içeriğinden bir damla, bir lamel ile kapatılmış ve bir mikroskobun karanlık alanında incelenen bir cam lam üzerine uygulanır (hedef 40, mercek 10). Soluk treponemaların %20'sine kadar immobilizasyonuyla, reaksiyon negatif, %21 ila %30 - şüpheli, %31 ila %50 zayıf pozitif, %51 ila %100 - pozitif olarak kabul edilir. Soluk treponemanın immobilizasyon yüzdesi özel bir tabloya göre belirlenir.

45) Opson-fagositik reaksiyon

Mekanizma: antikorların, bağışıklık serumunun ve tamamlayıcının dost etkilerinin etkisi altında mikrobiyal hücrelerin artan fagositozu.

Reaksiyon bileşenleri:

1) antijen - günlük mikrobiyal kültür;

3) tamamlayıcı - taze kobay serumu;

4) fagositler - lökosit süspansiyonu.

Opsoninler, normal ve immün serumda bulunan ve mikropları fagositoz için hazırlayan antikorlardır.

Reaksiyon, t=37° dakikada özel test tüplerine yerleştirilir. Daha sonra her tüpten smear hazırlanır, 100 fagosit sayılır ve fagosite edilen mikrokontrol sayısı belirlenir.

Opsonik indeks = fagositik indeks. normal serumun serum/fagositik indeksi

İncelenen serumun opsonik indeksi (>1 olmalıdır) ne kadar yüksekse ve dolayısıyla o kadar yüksek! bruselloz).

Opsoninleri belirlemek için kullanılır - lökositlerin fagositik aktivitesini uyaran antikorlar, yani. bruselloz gibi enfeksiyonların serodiagnozu.

Fagositozun artması, aktif merkezlere sahip opsoninlerin (Pav fragmanı) bakteriyel belirleyicilere ve daha sonra Pc fragmanlarının yardımıyla fagositlerin Pc reseptörlerine bağlanması nedeniyle oluşur. Normal serum, kompleman varlığında hareket eden az miktarda opsonin içerir. İmmün serumda daha fazla opsonin vardır ve bunların aktiviteleri komplemana daha az bağımlıdır.

Bileşenler:

İncelenen serum

normal serum

Günlük mikrobiyal kültür (örn. stafilokok)

Fagositler - nötrofillerin süspansiyonu

37°C'de 30 dakika inkübasyon. Her tüpten smear hazırlanır, Romanovsky-Giemsa'ya göre boyanır ve mikroskop altında 100 veya daha fazla neugrofilde mikrop sayısı sayılır, yani. fagositik indeksi belirler.

Fagositik indeks - bir nötrofil tarafından emilen mikrop sayısı.

Opsonik indeks fagositik immün (test edilmiş) serum indeksi / normal serumun fagositik indeksi.

Opsonik indeks ne kadar yüksekse (> 1 olmalıdır), bağışıklık o kadar yüksek olur.

Opsono-fagositik indeks dijital bir göstergedir = fagosit sayısı x fagositoz skoru (yutulan mikrop sayısına bağlı olarak). Maksimum puan -75'tir.

46) Ekzotoksin oluşturmak için fareler üzerinde RN

Bu reaksiyon, spesifik bir antitoksik serumun ekzotoksini nötralize etme yeteneğine dayanır.

Bağışıklık serum antikorları, mikropların veya onların toksinlerinin, mikrobiyal antijenlerin antikorlar tarafından bloke edilmesi, yani nötralizasyonları ile ilişkili hassas hücreler ve dokular üzerindeki zararlı etkisini nötralize edebilir.

Nötralizasyon reaksiyonu (RN), hayvanlara veya hassas test nesnelerine (hücre kültürü, embriyolar) bir antijen-antikor karışımı sokularak gerçekleştirilir. Mikroorganizmaların veya antijenlerinin, hayvanlardaki toksinlerin ve test nesnelerinin zarar verici etkisinin yokluğunda, bağışıklık serumunun nötralize edici etkisinden ve dolayısıyla antijen-antikor kompleksinin etkileşiminin özgüllüğünden bahsederler.

Reaksiyonu gerçekleştirmek için içinde ekzotoksin bulunması beklenen test materyali ile karıştırılır. antitoksik serum, bir termostatta tutuldu ve hayvanlara (gine domuzları, fareler) verildi. Kontrol hayvanlarına, serumla muamele edilmemiş test malzemesinin süzüntüsü enjekte edilir. Ekzotoksinin antitoksik serum ile nötralizasyonunun gerçekleşmesi durumunda deney grubundaki hayvanlar hayatta kalacaktır. Kontrol hayvanları, ekzotoksinin etkisinin bir sonucu olarak ölecektir.

Ekzotoksinin nötralizasyon reaksiyonu, antitoksik serum (antikorlar-antitoksinler) ile etkileşime girdiğinde meydana gelir. Antijen-antikor kompleksinin oluşumunun bir sonucu olarak, toksin toksik özelliklerini kaybeder.

Nötralizasyon reaksiyonu toksinleri, toksoidleri veya antitoksinleri tespit etmek ve titre etmek için gerçekleştirilir.

Toksinler sıvının filtrelenmesiyle elde edilir büyüme ortamı veya toksijenik bakterilerin çoğaldığı test materyali. 37°C sıcaklıkta 30-45 gün formalin ile işlendiğinde, toksin, antitoksik serum elde etmek için hayvanları bağışıklamak için kullanılan anatoksine dönüşür.

İn vivo nötralizasyon reaksiyonu. Toksinin tipini belirlemek için tanısal antitoksik serum ile karıştırılır ve bu karışım beyaz farelere verilir. Toksin, antitoksik serum ile nötralize edildiğinde fareler ölmez.

Nötralizasyon reaksiyonu, difteri (Schick testi) ve kızıl hastalığı (Dick testi) olan çocuklarda antitoksik bağışıklığı belirlemek için kullanılır. Bunu yapmak için, ilgili toksinin belirli bir miktarı (1/40 DLM) önkol bölgesine intradermal olarak enjekte edilir. Vücutta antitoksinler varsa toksin nötralize olur ve reaksiyon negatif olur. Vücutta antitoksinlerin yokluğunda, Tahrik edici cevap enjeksiyon yerinde.
47) Virüsü tanımlamak için farelerde RN (Nötralizasyon Reaksiyonu) kene kaynaklı ensefalit

TBE virüsü, bir dizi laboratuvar ve vahşi hayvan için patojeniktir. Yeni doğanlar ve genç beyaz fareler en hassas olanlardır. Beyindeki enfeksiyondan sonra, intraperitoneal, intramüsküler olarak, bu hayvanlar, hayvanların ölümüyle sonuçlanan ensefalit geliştirir. Çiftlik hayvanlarından keçiler TBE virüsüne en duyarlıdır, koyunlar ve inekler daha az duyarlıdır ve atlar zayıf duyarlıdır. TBE virüsü, domuz embriyonik böbrek hücrelerinin (SPEV ve RPE) primer ve transplante edilmiş kültürlerinde sitopatik değişikliklere neden olan sitopatojenik bir etkiye (CPE) sahiptir ve diğer birçoklarında belirgin CPE olmadan çoğalır. hücre kültürleri. Enfekte farelerin beyninde ve enfekte olmuş kültürlerin kültür sıvısında, TBE virüsü ve spesifik viral antijenler birikir: tamamlayıcı sabitleme, hemaglütinasyon, çökeltme, vb.

TBE virüsü uzun zaman düşük sıcaklıklarda korunmuş ( optimal mod-60 derece C ve altı), dondurarak kurutmayı iyi tolere eder, uzun yıllar kuru halde kalır, ancak oda sıcaklığında hızla inaktive olur. Kaynatma 2 dakika sonra ve 60 derecede sıcak sütte öldürür. C 20 dakika sonra ölür.

Formalin, fenol, alkol ve diğer dezenfektanlar, ultraviyole radyasyonun da inaktive edici etkisi vardır.

Nötralizasyon reaksiyonu, spesifik bağışıklık serumlarının virüslerin bulaşıcı etkisini söndürme yeteneğine dayanır. İki yönde uygulanır:

1) izole edilmiş virüsleri yazmak için;

2) iyileşen hastaların serumlarındaki antikorların titrasyonu için.

Reaksiyonun ayarlanması:

1. Laboratuvar hayvanları üzerinde. Bir virüsün varlığı için kriterler

laboratuvar hayvanlarının ölümüdür. LD50 hesaplanır

Viral süspansiyonun maksimum seyreltmesi,

enfekte hayvanların %50'sinin ölümüne neden olmuştur. İçin

kene kaynaklı ensefalit virüsünün tanımlanması gerçekleştirilir

beyaz farelerin intraserebral enfeksiyonu.

2. Doku kültürlerinde. Sonuçların muhasebesi yapılır

Sitopatik eylemle (CPE)

Renk değişimine dayalı renk testi yöntemiyle

Hemadsorbsiyon yoluyla.

3. Tavuk embriyosunda. Sonuçların muhasebeleştirilmesi aşağıdakilere göre yapılır:

koryoallantoik zar boyunca pockmarkların görünümü.

48) RTGA

Bu reaksiyon virolojik uygulamada kullanılır:

Virüs türünü belirlemek için (cam üzerinde);

Hastaların serumunda tespit için (konuşlandırılmış).

Yaklaşık bir hemaglütinasyon inhibisyon reaksiyonu kurarken, cama 1 damla tipe özgü immün serum uygulanır, ardından 1 damla test materyali ve 1 damla %5 eritrosit süspansiyonu eklenir.

Sonuçların açıklanması: Virüsün tipi, izole edilmiş virüse özgü bağışıklık serumu hemaglütinasyon aktivitesini baskıladığından ve eritrositler aglütine olmadığından, reaksiyonun meydana gelmediği serum tarafından belirlenir.
49) RIF

Işıltılı florokrom boyalar (florisein izotiyosiyanat, vb.) etiket olarak kullanılır.

RIF'in çeşitli modifikasyonları vardır. Bulaşıcı hastalıkların hızlı teşhisi için - test materyalindeki mikropları veya antijenlerini tespit etmek için Koons'a göre RIF kullanılır.

Koons'a göre RIF'in doğrudan ve dolaylı olmak üzere iki yöntemi vardır.

Doğrudan RIF bileşenleri:

1) incelenen materyal (nazofarenks ile ayrılmış bir bağırsak hareketi vb.);

2) istenen antijene AT-la içeren etiketli spesifik bağışıklık serumu;

3) izotonik sodyum klorür çözeltisi.

Test materyalinden bir leke, etiketli antiserum ile işlenir.

Bir AG-AT reaksiyonu meydana gelir. AG-AT komplekslerinin lokalize olduğu alandaki lüminesan mikroskobik inceleme, floresan - lüminesans ortaya çıkarır.

Dolaylı RIF bileşenleri:

1) incelenen materyal;

2) spesifik antiserum;

3) florokrom ile işaretlenmiş antiglobulin serumu (immünoglobuline karşı AT-la);

4) İzotonik sodyum klorür çözeltisi.

Test materyalinden bir yayma önce istenen antijene karşı bağışıklık serumu ile ve daha sonra etiketli antiglobulin serumu ile muamele edilir.

Aydınlık AG-AT kompleksleri - etiketli AT, bir floresan mikroskobu kullanılarak tespit edilir.

Dolaylı yöntemin avantajı, çok çeşitli floresan spesifik serum hazırlamaya gerek olmaması ve sadece bir floresan antiglobulin serumunun kullanılmasıdır.

Ek olarak tamamlayıcı (kobay serumu) eklendiğinde, 4 bileşenli bir dolaylı RIF çeşidi de izole edilir. Pozitif bir reaksiyonla, bir AG-AT kompleksi oluşur - etiketli - AT-tamamlayıcı.

Reaksiyon şu anlama gelir: serolojik reaksiyonlar etiketli antijenleri veya antikorları içerir.

Doğrudan ve dolaylı yöntemlerle gerçekleştirilir.

saat direkt yöntem hastadan alınan materyaldeki antijeni tespit edin. İmmün serumdan izole edilmiş ve florokromlarla etiketlenmiş immünoglobulinler içeren bir tanısal floresan serum kullanılır.

Spesifik antijen, parlak yeşil ışıldayan konglomeralar şeklinde bulunur ve preparasyonun arka planı turuncu-kırmızıya döner.

Doğrudan immünofloresan reaksiyonunun bileşenleri:

1) incelenen materyal;

2) spesifik ışıldayan serum;

3) ışıldayan mikroskop.

İnfluenza teşhisi konulurken, parainfluenza patojenlerinden farklılaşma yapılır ve adenovirüs enfeksiyonu. Nazofaringeal sürüntü, floresan influenza serumu veya influenza immünoglobulini ile tedavi edilir.

3 saat sonra yeşil bir parıltı şeklinde "+" sonuç elde edilir.

Dolaylı yöntemde spesifik antikorlar saptanır ve titre edilir. Serum titresi, floresansın "+ +" ile not edildiği maksimum seyreltmedir.

Dolaylı immünofloresan reaksiyonunun bileşenleri

Ekspres teşhiste bir antijen aramak için:

1) test materyali (antijen);

2) spesifik serum;

3) antiglobulin ışıldayan serum

4) ışıldayan mikroskop.

/ faza özel

Serum antikorları antijene adsorbe olur.

// spesifik olmayan aşama

Florokrom etiketli antiglobulin serumu kullanılır. Parlayan bir antijen + antikor kompleksi (I) + antiglobulin serumu (II) oluşur.