Reaksiyonun çökelme reaksiyon mekanizması reaksiyondan farklıdır. Yağış reaksiyonu (immünolojik yöntem)
Çözünür bir antijenin bir antikorla etkileşiminden ve ardından ince taneli bir çökeltinin (çökelti) çökelmesinden oluşur.
Çökeltme reaksiyonu, bilinen bir antikor ekleyerek veya bilinen bir antijen - bilinmeyen bir antikor kullanarak test materyalinde bilinmeyen bir antijenin varlığını belirlemenizi sağlar. yağış daha kötüye gidiyor tuzların yokluğunda. Yağış optimumu pH=7.0-7.4 aralığındadır.
Çökelme mekanizması aglütinasyona yakındır. Antijenle reaksiyona giren bağışıklık sisteminin etkisi altında dağılma derecesi azalır. Serum ve antijen tamamen şeffaf olmalıdır. Çökelti ayarlarken, antijenin farklı seyreltileri bir serum seyreltisine eklenebilir veya bunun tersi de geçerlidir.
Antijen, test tüpünde antikor üzerine bindirilirse çökelme daha iyi kaydedilir. Bu durumda, bir halka şeklinde bir çökeltinin görünümü gözlenir - halka çökelmesi. Halka çökeltme, 2,5-3,5 mm çapındaki özel test tüplerinde gerçekleştirilir. Test materyalindeki antijenlerin veya serumdaki farklı antikorların sayısını belirlemek için agar çökeltme reaksiyonu kullanılır: Cam lamların içine veya üzerine %1 berraklaştırılmış agar dökülür. Antijen ve antikor çözeltileri, agarda yapılan farklı kuyucuklara dökülerek birbirine doğru difüze olur ve çökelme hatları oluşturur. Çöktürme reaksiyonu tanıda yaygın olarak kullanılmaktadır (bkz. Ascoli reaksiyonu).
Agarda çökeltme, difteri kültürlerinin toksijenitesinin belirlenmesine izin verir.
AT adli araştırmaçökeltme, özel çökeltici serumlar yardımıyla kan, organ ve dokuların tür ilişkisini kurmaya yarar.
Çökeltme - bir antijen (çökeltici) ve antikor (çökelti) kompleksinin çökelme reaksiyonu. Yağış, hasta veya aşılanmış kişilerin kan serumundaki ve ayrıca aşılanmış hayvanların kanındaki antikorların (bakınız) içeriğini belirlemeyi mümkün kılan immünolojik olaylardan biridir. Standart serum kullanılırken, çeşitli kökenlerden çözünür antijenleri titre etmek için çökeltme reaksiyonu kullanılabilir (bkz.).
Çökeltme reaksiyonunu kurmanın en basit biçiminde, bir dizi çoklu dilüsyondaki test serumu, sabit miktarda antijen içeren bir dizi test tüpüne katmanlanarak eklenir. 30-60 dakika sonra. iki sıvının sınırında oda sıcaklığında inkübasyon, bir bulanıklık halkası - halka çökelmesi oluşturdu. Çökelme reaksiyonu veren serumun minimum miktarı antiserum titresi olarak alınır. Reaksiyon standart bir antiserumla tersine çevrildiğinde, çeşitli biyolojik sıvılardaki antijenin nispi konsantrasyonunu tahmin etmek mümkündür.
Yukarıdaki yönteme dayalı olarak antikorların ve antijenlerin titrasyonunun sonuçları, mutlak bir nicel ifadeye sahip değildir. Antikorların içeriğini ölçmek için Heidelberger, Kabat (M. Heidelberger, E. Kabat) ve diğerleri geliştirilmiştir. Sayısal metot sözde eşdeğerlik bölgesinin tespitine dayanan çökelme reaksiyonu. Yaşa uygun miktarlarda antijen, sabit hacimlerde antiserum ile karıştırıldığında, antijen-antikor kompleksinin fazla antijen içindeki çözünürlüğünün artması nedeniyle oluşan çökelti miktarı önce artar ve sonra tekrar azalır. Tüm test tüplerinde süpernatandaki antikorların içeriğini belirlersek, o zaman arka arkaya orta test tüplerinde ve hatta tek bir test tüpünde süpernatanda antikor olmadığı ortaya çıkar; aynı zamanda en büyük çökelti burada oluşur. Eşdeğerlik bölgesinde, reaktanların karışımına dahil edilen antijenin tamamı çökeltiye de dahil olduğundan, antijen protein çökeltisini protein miktarından çıkardıktan sonra, belirli bir test serumu hacmindeki antikor içeriğinin tam değeri elde edilir. Soğutulmuş salinle iyice yıkandıktan sonra çökeltinin protein içeriği nitrojenle veya bazı kolorimetrik yöntemlerle belirlenir.
Çökeltme reaksiyonunun değerini şu şekilde değerlendirirken teşhis yöntemiçökelti özelliklerine sahip olmayan ve bu nedenle bir antijenle etkileşime girdiğinde bir çökelti oluşturmayan antikorların immün serumda bulunabileceği dikkate alınmalıdır. Bunlar, öncelikle eksik antikorların yanı sıra gama-A globülin grubuna ait diğer bazı antikorları içerir.
Antiserumun antijeni çökertme yeteneği, 65-70°C'ye ısıtılarak, organik çözücülerle muamele edilerek, asidik bir ortamda indirgenerek [Isliker (N. Isliker), A.Ya. Kühlberg]. Bildiğiniz gibi çökelti içeren antiserumla çökelme olgusu, yalnızca belirli bir sıcaklıkta, tuzların ve hidrojen iyonlarının konsantrasyonunda mümkündür. Çökeltme reaksiyonu en hızlı şekilde 25-37°'de ilerler. Bir çökelti oluşumu için vazgeçilmez bir koşul, izotonik konsantrasyonlarda (% 0.85 NaCl çözeltisi) sodyum klorürün varlığıdır. NaCl konsantrasyonu %15'e yükseltildiğinde, polisakkarit yapısındaki antijen tarafından oluşturulan çökeltiler kısmen çözünür ve bu da saf antikorları çıkarmak için kullanılabilir. Protein yapısındaki antijenlerle çökeltme reaksiyonu, hem %0,85 hem de %15'te aynı oranda ve tamlıkta ilerler. NaCl çözümleri. Bir çökelti oluşumu için optimum hidrojen iyonu konsantrasyonu, 5.0 ila 9.0 arasındaki pH değerlerine karşılık gelir.
Laboratuvar uygulamasında, çökelme reaksiyonunun çeşitli modifikasyonları kullanılır. Özellikle, termo-çökeltme reaksiyonu, bakteriyel antijenleri tespit etmek için kullanılır. şarbon, botulizm vb., termal denatürasyona (koktoantijenler) tabi değildir. Bu reaksiyon, halka çökeltme reaksiyonundan yalnızca kaynatılmış test materyalinin süzüntüsünün antijen olarak kullanılması bakımından farklılık gösterir (bkz. Reaksiyon A).
Karmaşık bir antijen karışımını çökeltme reaksiyonu kullanarak analiz ederken, karışımın ayrı ayrı bileşenlerinin özelliklerini karakterize etmek imkansızdır. Bu sorunu çözmek için agarda çökeltme ve immünoelektroforez yöntemlerine başvurun. Ouchterlony'nin (O. Ouchterlony) en yaygın modifikasyonunda agarda çökeltme yöntemi, ince bir agar tabakasında birbirine doğru difüze olan antijen ve antiserumun karşılaştıklarında bir çökeltme çizgisi oluşturmalarına dayanır. Bu tür hatların sayısına göre, belirli bir antijen karışımında bulunan bileşenlerin sayısı yargılanabilir. Ouhgerlonu yöntemi, farklı antijenik karışımları karşılaştırmayı ve bunlarda bulunan bileşenlerin akrabalık derecesini belirlemeyi mümkün kılar. Agarda aynı difüzyon oranlarına sahip maddeler içeren karmaşık bir antijenik karışımı analiz ederken, büyük yardım immünoelektroforez yöntemini getirebilir. Antijen karışımı, bir agar plakasında bir elektrik alanında ön olarak ayrılır ve ardından geliştirilir. kişisel bileşenler antiserum. Antiserum, elektroforez sırasında antijenlerin hareket ettiği çizgiye paralel agarda yapılan bir hendeğe verilir. Antijenlerin her biri, antiserum ile bireysel bir çökelme yayı verir. İmmünoelektroforez, analiz için yaygın olarak kullanılmaktadır. patolojik anormallikler serum proteinlerinde ve ayrıca doku ve bakteriyel antijenlerin immünolojik analizinde.
Adli Yağış. Yağış, adli tıpta kanın türünü, organların ve dokuların kısımlarını belirlemek için kullanılır. Bazı soruşturma vakalarında, suç aletlerinde, suçlunun veya kurbanın kıyafetlerinde vb. bulunan kan türünün tespit edilmesi gerekmektedir. çeşitli hayvanlardan elde edilen proteinler ile kullanılmaktadır. Serumlar genellikle insan, at, kedi, tavuk, domuz, köpek, sığırlar. En az 1:10.000 titreye sahip olmalı ve yeterince spesifik olmalıdır. Ekstraktlar, çalışılan nokta veya kan kabuğundan hazırlanır. fizyolojik salin, bunlar daha sonra çöktürücü serumlarla test edilir. Çöken serumlardan biri, uygun bir kontrol reaksiyonu ile test kanından bir ekstrakt ile bir çökelti oluşturursa, protein tipinin belirlenmiş olduğu kabul edilir. Çökeltme reaksiyonu, insan veya hayvan doku ve organlarındaki protein tipini de belirleyebilir. Tipik olarak, çökeltme reaksiyonu, koni biçimli bir uca sahip test tüplerinde gerçekleştirilir. Bulanık ekstraktların alınması üzerine, Ouchterlon'a göre agarda çökeltme reaksiyonu gerçekleştirilir.
Çökeltme reaksiyonu (RP), bir elektrolit varlığında antikorların etkisi altında çözünür bir antijenin çökelmesidir. Görünür reaksiyon etkisi (yağış olgusu) - bulanıklık (bulanık halka veya tortu oluşumu - çökelti).
RP, bir dizi bulaşıcı hastalıkta bilinmeyen bir antijeni tespit etmek için kullanılır: şarbon, tularemi, menenjit, çiçek hastalığı ile. Adli tıpta kanın, spermin cinsinin belirlenmesinde kullanılır; sıhhi ve hijyenik araştırmalarda - sahtecilik oluşturmak için Gıda Ürünleri. RP'ler çok farklı. yüksek hassasiyet ve 1: 1.000.000 ve 1: 10.000.000 dilüsyonda antijen tespit etmenizi sağlar.
Çökeltme reaksiyonunun bileşenleri.
1. Antijen (çökeltici) - bu bir antijen moleküler doğa ince dağılmış (çözünür) bir durumda olan. Çöktürücüler, çeşitli doku lizatları veya özleri vb.dir. Çöktürücü, antijen parçacıklarının boyutu bakımından aglütinojenden farklıdır. aglütinojen sahip hücre boyutları(bunlar tüm hücreleri yok etmez), ancak boyutlar çöktürücü ile orantılı moleküler boyut(bunlar proteinler ve bunların karbonhidratlar veya lipidlerle olan kompleksleridir). çöktürücü solüsyon şeffaf.
2. Antikorlar (çökeltiler) insan serumunda veya bilinen antikorları içeren immün teşhis çökeltici serumlarda bulunur.
3. Elektrolit- izotonik sodyum klorür çözeltisi.
çöktürücü elde etme.
Malzemenin öğütülmesi ve kaynatılarak veya diğer yöntemlerle protein antijenlerinin çıkarılmasıyla elde edilir.
çöktürücü örnekleri: lizatlar veya özler çeşitli organlar ve dokular, yabancı kan serumu (serum çözüm, her şeyden önce, çeşitli proteinler), mikropların et suyu kültürlerinin filtratları, mikropların tuz özleri, otolizatlar, vb.
Çöktürücü serumların elde edilmesi.
Uygun presipitinojenler ile tavşanların hiperimmunizasyonu ile elde edilmiştir. Bu tür serumlar, tavşanların aşılandığı presipitinojenlere karşı antikorlar içerir.
Çöktüren sera örnekleri: hızlandırıcı şarbon serumu (şarbon antijenlerine karşı antikorlar içerir), çöktürücü antimeningokokal serum(menenjite neden olan ajanın antijenlerine karşı antikorlar içerir), vb.
titreçökeltici serum, serumun hala bir çökelme reaksiyonu verdiği en yüksek çökeltici seyreltisidir.
RP ayarlama yolları.
1. Halka çökelme reaksiyonu -özel çökeltme tüplerinde gerçekleştirilir (çap - 0,4-0,5 cm, yükseklik - 7-8 cm). Test tüpüne 0,2 - 0,3 ml çökeltici serum eklenir ve aynı miktarda çökeltici, bir Pasteur pipetinin uzun burnuyla dikkatlice duvar boyunca tabakalanır. Ardından, yatay bir konumdan dikkatlice tüpler dikey olarak yerleştirilir.
Reaksiyon sonuçlarının muhasebeleştirilmesi antijen-antikor sınırında beyaz bir halkanın görünmesi ile gerçekleştirilir. Olumlu bir tepki ile böyle bir halka gözlenir. Bu durumda antijen, antikora karşılık gelir ve bağlanmaları gerçekleşir.
Çöktürücü olarak organ ve dokuların kaynatılıp süzülmüş sulu özleri kullanılırsa, reaksiyona reaksiyon denir. ısıl yağış (örneğin, şarbon teşhisi sırasında).
2. Jelde çökelme reaksiyonu - Petri kaplarında veya bir agar jel tabakasının yerleştirildiği cam slaytlarda gerçekleştirilir. Jel katılaştığında, içine antijenlerin veya antikorların veya her ikisinin yerleştirildiği oyuklar kesilir. Ayırt etmek 2 yöntem Jelde RP:
bir metod basit (radyal) immün difüzyon: immun reaksiyon bileşenlerinden (antijen veya antikor) biri kuyucuğa yerleştirilir ve diğer bileşen agar ile karıştırılır; de olumlu bir sonuç (antijen bir antikora karşılık gelir) kuyunun etrafında oluşur çökelti halkası ;
yöntem çift immün difüzyon: hem antikor hem de antijen ayrı oyuklara yerleştirilir, agar jeli içinde birbirlerine doğru yayılırlar; olumlu bir sonuçla antikorların ve antijenlerin buluştuğu yer yağış hatları .
Bir jelde RP örneği Ouchterlony çift immün difüzyon reaksiyonudur difteri teşhisinde
İmmünoelektroforez - elektroforez yöntemi ile çöktürme reaksiyonunu birleştiren bir yöntemdir. Jelde bir antijen karışımı (örneğin serum proteinleri) elektroforez kullanılarak ayrılır. Ardından, istenen proteini (bilinmeyen antijen) bulmak ve belirlemek için, bu proteine \u200b\u200b(bilinen antikor) antikorlar içeren bir teşhis çökeltici serum kullanılır. Bunu yapmak için tanı serumu, proteinlere paralel oluğa sokulur. Proteinler arasında serumdaki antikora karşılık gelen bir tane varsa, o zaman etrafında oluşur. yağış hatları.
Yağış reaksiyonu- RP (dan lat. praeci-pito- çökelti,), adı verilen bulanıklık şeklinde antikorlarla çözünür bir moleküler antijen kompleksinin oluşumu ve çökelmesidir. çökelti. Antijen ve antikorların eşdeğer miktarlarda karıştırılmasıyla oluşturulur; birinin fazlası eğitim düzeyini düşürür. bağışıklık kompleksi. Aglütinasyon reaksiyonunun aksine, çökelme reaksiyonu için antijen, partiküllerin boyutu moleküllerin boyutuna yaklaşan çözünebilir bileşiklerdir. Bunlar proteinler, karbonhidratlar ve lipidler içeren protein kompleksleri, bakteri özleri, çeşitli disatlar veya mikrobiyal et suyu kültürlerinin süzüntüleri olabilir. Çökeltme reaksiyonunda yer alan antikorlara çökeltiler denir. Ortaya çıkan ince antijen-antikor kompleksi, çökelme reaksiyonunu aşamalandırmak için belirli yöntemlerle saptanır.
Halka çökeltme reaksiyonu ilk olarak Ascoli tarafından önerildi. Şarbon, veba, tularemi, menenjit tanısında kullanılır. Yöntem basit ve erişilebilir.
Spesifik bir immün çöktürücü serum, dar çökeltme tüplerine dökülür ve üzerine antijen çok dikkatli bir şekilde katmanlanır. Antijen olarak örneğin şarbon teşhisi yapılırken deri parçaları, yün, düşmüş bir hayvanın derileri vb. Alınır, kaynatılır, sıvı süzülür ve antijen olarak kullanılır. Bir halkanın görünümü - iki sıvının sınırında bir çökelti - karşılık gelen antijenin varlığını gösterir.
Agar jel çökeltme reaksiyonu veya difüzyon çökeltme yöntemi, karmaşık suda çözünür antijenik karışımların bileşimini ayrıntılı olarak incelemeyi mümkün kılar. Reaksiyonu ayarlamak için bir jel (yarı sıvı veya daha kalın agar) kullanılır. Antijeni oluşturan her bileşen, karşılık gelen antikora doğru farklı bir oranda difüze olur. Bu nedenle, çeşitli antijenlerin ve karşılık gelen antikorların kompleksleri, farklı bölgeler Yağış çizgilerinin oluştuğu jel. Hatların her biri yalnızca bir antijen-antikor kompleksine karşılık gelir. Çökeltme reaksiyonu genellikle oda sıcaklığında ayarlanır.
Alınan immünoelektroforez yöntemi geniş kullanım içinde son yıllar mikropların antijenik yapısının incelenmesinde. Antijen kompleksi, plaka üzerine dökülen agar jelinin merkezinde bulunan kuyuya yerleştirilir. Daha sonra agar jelinden bir elektrik akımı geçirilir ve bunun sonucunda komplekse dahil olan çeşitli antijenler alana hareket eder. elektrik akımı elektroforetik hareketliliklerine bağlıdır. Elektroforez tamamlandıktan sonra, plakanın kenarı boyunca yerleştirilmiş hendeğe spesifik bir bağışıklık serumu verilir ve nemli bir odaya yerleştirilir. Antijen-antikor kompleksinin oluştuğu yerlerde çökelme çizgileri belirir.
Yağış reaksiyonları koy test tüplerinde (halka çökeltme reaksiyonu), jellerde, besleyici ortamlarda vb. Geniş dağıtım alındı yarı sıvı bir agar veya agaroz jelinde çökelme reaksiyonu çeşitleri: Ouchterlony'ye göre çift immün difüzyon. radyal immünodifüzyon, immünoelektroforez ve benzeri
Radyal immünodifüzyon reaksiyonu. Erimiş agar jeli içeren bağışıklık serumu bardağa eşit şekilde dökülür. Jelde katılaşmadan sonra, antijenin çeşitli dilüsyonlarda yerleştirildiği kuyucuklar açılır. Jel içine difüze olan antijen, kuyucukların çevresinde antikor halkalı çökelme bölgeleri oluşturur (Şekil 13.7). Çökeltme halkasının çapı, antijen konsantrasyonu ile orantılıdır. Reaksiyon, çeşitli sınıflardaki immünoglobulinlerin, tamamlayıcı sistemin bileşenlerinin vb. kan seviyelerini belirlemek için kullanılır.
immünoelektroforez- elektroforez ve immünopresipitasyon yönteminin bir kombinasyonu: jelin kuyularına bir antijen karışımı verilir ve elektroforez kullanılarak jel içinde ayrılır. Daha sonra, elektroforez bölgelerine paralel olarak, oluğa, antikorları jele yayılan ve çökeltme hattının antijeni ile buluşma noktasında oluşan bir immün serum sokulur.
Bağışıklık elektron mikroskobu- uygun antikorlarla tedavi edilen mikropların, daha sıklıkla virüslerin elektron mikroskobu. İmmün serumla tedavi edilen virüsler, immün agregatlar (mikro çökeltiler) oluşturur. Virionların çevresinde, fosfotungstik asit veya diğer elektron-optik olarak yoğun preparasyonların aksine, bir antikor "tacı" oluşur.
123. Mikroorganizmaların toksijenitesini belirlemek için bir jelde çökeltme reaksiyonu, mekanizma, sertleştirme yöntemleri.
Yağış reaksiyonu (RP)- bu, çökelti adı verilen bulanıklık şeklinde antikorlarla çözünür bir moleküler antijen kompleksinin oluşumu ve çökelmesidir. Antijen ve antikorların eşdeğer miktarlarda karıştırılmasıyla oluşturulur; bunlardan birinin fazlası, bağışıklık kompleksinin oluşum seviyesini azaltır.
1946'da J. Oudin, çökelme reaksiyonunun bileşenlerinden birinin, genellikle serumun jelde olduğu ve diğerinin - antijenin - birincisi şeklinde katmanlandığı basit difüzyon yöntemini önerdi. çözüm.
Jelin içine yayılan antijen, yan aydınlatma altında açıkça görülebilen antikorlarla içinde beyaz çökeltme çizgileri oluşturur. 1948'de J. Ouchterlonu, çeşitli antijenlerin ve serumların doğrudan karşılaştırılmasına izin veren daha da basit ve daha kullanışlı bir iki boyutlu karşı difüzyon yöntemi geliştirdi. Bu yöntem, çapraz reaksiyonların çalışmasında da çok değerlidir.
Ouchterlon'a göre reaksiyon oluşturmak için serum fizyolojik içinde hazırlanan %1'lik agar kullanılır ve petri kaplarına merkezden 1-2 cm uzaklıkta 0,5 cm'lik bir çevre çevresine dökülür. Teşhis çökeltici serum merkezi kuyuya dökülür ve buna kıyasla homolog ve antijenlerden oluşan bir çözelti periferik kuyulara dökülür. Sonuçlar, oda sıcaklığında 24, 48 ve 72 saatlik inkübasyondan sonra kaydedilir.
Antikorlar ve antijenler birbirlerine doğru difüze olurlar ve eşdeğer konsantrasyonlarının oluştuğu alanlarda arkuat çökelme bantları oluşur. İki bitişik kuyudan gelen çökelme bantlarının birleşmesi, test sıvısında birkaç antijenik bileşenin varlığını gösterir. Ouchterlohn'a göre karşı difüzyon reaksiyonu, genellikle difteri gibi bakterilerin toksijenitesini belirlemek için kullanılır.
Jel çökeltme yönteminin bir başka gelişimi de immünoelektroforezdir. Bu terim, bir antijen karışımının elektroforetik olarak ayrılmasını ve aynı agar jel plakası üzerinde Ouchterlohn karşı difüzyonunu birleştiren bir yöntemi ifade eder. Çöken serum daha sonra elektroforetik ayırma yönüne paralel olarak jelde kesilmiş bir oluğa dökülür.
Reaksiyon sonucu oluşan çökelme çizgileri, antijen fraksiyonlarının elektroforetik hareketi yönünde uzayan yaylar şeklindedir. İmmünoelektroforez, 30'a kadar bileşen içeren çözünür antijenlerin karmaşık karışımlarının bileşimini belirlemeyi mümkün kılar ve bu nedenle değerli bir teşhis yöntemidir.
Yağış reaksiyonu(RP), immün serum (presipitin) ve elektrolite maruz kaldığında bir Ag (presipitinojen) çözeltisinden çökelme olarak adlandırılır.
RP sayesinde bir antijen 1:100.000 ve hatta 1:1.000.000 dilüsyonlarda, yani kimyasal olarak tespit edilemeyecek kadar küçük miktarlarda tespit edilebilir.
Presipitinojenler, ultramikroskopik protein-PS doğal parçacıklarıdır: mikronlardan, organlardan ve TC, pat materyalinden ekstraktlar; bakteri hücresinin bozunma ürünleri, bunların lizatları, süzüntüleri. Çöktürücüler termal olarak kararlıdır; bu nedenle, onları elde etmek için malzeme kaynamaya tabi tutulur.
RP'de sıvı şeffaf Ag'ler kullanılır.
Çöktüren serumlar genellikle tavşanların birkaç aylık döngülerde hiperimmünizasyonuyla elde edilir, onlara bakteriyel süspansiyonlar, et suyu kültürü filtratları, otolizatlar, mikroorganizmaların tuz ekstraktları ve peynir altı suyu proteinleri verilir.
RP Ascoli'nin sahnelediği. Az miktarda seyreltilmemiş çökeltici serum içeren dar bir test tüpünde, onu eğimli bir konumda tutarak, aynı hacimde Ag, bir pipet ile duvar boyunca yavaşça katmanlar halinde yayılır.
İki sıvının birbirine karışmaması için deney tüpü dikkatlice dikey olarak yerleştirilir. Bir test tüpünde pozitif bir reaksiyonla, serum ile çalışılan ekstrakt arasındaki sınırda 5-10 dakika sonra grimsi beyaz bir halka belirir. Reaksiyona mutlaka serum ve antijen kontrolleri eşlik eder.
Ascoli reaksiyonu şarbon, tularemi, veba Ag'yi tanımlamak için kullanılır.
Ayrıca adli tıpta bir protein türünün, özellikle kan lekelerinin belirlenmesinde, sıhhi uygulamada et, balık, un ürünleri, sütteki safsızlıklar. Bu RP'nin dezavantajı, hafif sallamayla bile kaybolan çökeltinin (halka) kararsızlığıdır. Ayrıca, belirlemek için kullanılamaz kantitatif kompozisyonÇökeltinin oluşumunda yer alan Ag.
Ouchterlony çökeltme reaksiyonu. Reaksiyon, agar jel kuyularındaki Petri kaplarına konur.
Jel olarak iyi yıkanmış şeffaf agar kullanılır. Ag ve serum, onları içeren kuyucuklar belirli bir mesafede olacak şekilde agar jele verilir. Birbirine doğru difüzyon ve birbirine bağlanan antikor ve antijen, 24-48 saat içinde beyaz bir bant şeklinde bir immün kompleksi oluşturur.
Kompleks bir presipitinojen varlığında birkaç bant ortaya çıkar. Aynı zamanda, serolojik olarak ilişkili antijenlerin bantları birleşir ve heterojen olanların bantları kesişir, bu da incelenen maddelerin antijenik yapısının ayrıntılarını belirlemeyi mümkün kılar.
Ekzotoksin üreten virüs ve bakterilerin neden olduğu hastalıkları teşhis etmek için yaygın olarak kullanılmaktadır.
3.Dolaylı hemaglutinasyon (RNGA) reaksiyonu. Klasik RA'da aglütininlerle immun kompleksleri görülemeyen polisakkaritleri, proteinleri, bakteri ekstraktlarını, mikoplazmaları, riketsiyaları ve virüsleri tespit etmek veya hastaların serumlarında bu yüksek oranda dağılmış maddelere ve en küçük mikroorganizmalara karşı antikorları tespit etmek için kullanılır. .
Bulaşıcı hastalıkların serodiyagnozu için RNGA. RNHA kullanılarak hastaların serumlarındaki antikorları tespit etmek için eritrosit antijen tanıları hazırlanır.
Yağış reaksiyonu.
Bunu yapmak için, eritrositler 15 dakika boyunca 1:20.000–1:200.000 dilüsyonda tanen solüsyonu ile muamele edilir, bu onlara stabilite verir ve adsorpsiyon kapasitelerini arttırır. Daha sonra bilinen bir antijen ile karıştırılarak 37°C'de 2 saat inkübe edilir Antijenle sensitize eritrositler 2-3 kez izotonik sodyum klorür solüsyonu ile yıkanır ve seruma eklenir, seyreltilir ve kuyucuklara dökülür. paneller.
Seralara eklenen sağlam ve antijen yüklü eritrositlerin süspansiyonları, açıkça pozitif ve negatif reaksiyonlar verir, kontrol görevi görür.
Reaksiyonun sonuçları, bir termostatta inkübasyondan 2 saat sonra dikkate alınır ve artılarla değerlendirilir: "++++" - eritrositler, kuyuyu bir şemsiye şeklinde kaplar. pürüzlü kenarlar; "-" - eritrositlerin "düğme" şeklinde birikmesi
İlgili bilgi:
site araması:
Halka çökeltme reaksiyonu
Halka yapışma reaksiyonu en basitlerinden biridir. serolojik yöntemler. Dar çöktürme tüplerinde gerçekleştirilir. İlk olarak, birkaç dilüsyonda (1:2; 1:4; 1:8; 1:16) alınan antijenin berrak bir çözeltisi, tüm test tüplerine eşit olarak dökülür.
Antijenlerin ve antikorların bağlantısı, reaktiflerin temas sınırında gerçekleşir. Bu etkileşim sonucunda pozitif vakalarda (antijen antikora karşılık geldiğinde) bir süre sonra yanardöner halka şeklinde bir çökelti oluşur.
Tepki bulundu geniş uygulama içinde tıbbi uygulama hayvanların yün, deri ve etlerindeki şarbon antijenini saptamak için (Ascoli reaksiyonu); hastalardan elde edilen patolojik materyallerde veya nesnelerde bulaşıcı hastalıkların diğer patojenlerini tespit etmek dış ortam, yanı sıra adli tıp muayenesi bir protein türünün, özellikle bir kan proteininin veya diğer biyolojik sıvıların belirlenmesi.
Ouchterlony immün difüzyonu
Çökeltme reaksiyonu, bir agar jeli üzerinde gerçekleştirilebilir.
Yöntem, antijen ve antikor parçacıklarının farklı boyutları nedeniyle jel içinde farklı hızlarda dağılması ve bunun sonucunda farklı mesafelere hareket etmesi gerçeğine dayanmaktadır. Bu, bir karışım halindeyken ayrı ayrı antijen sistemlerini ayırmayı mümkün kılar ve bu nedenle bakterilerin ve kompleks proteinlerin, serumların ve hayvan dokularının antijenik yapısını incelemeyi mümkün kılar.
görsel ve etkili yöntem jel çökeltme Ouchterlony tarafından önerilmiştir.
Agarlı Petri kapları üzerinde birbirinden belirli bir mesafede kesilmiş küçük oyuklar yapılır. Birine antijen, diğerlerine serum dökülür. Reaksiyonun bileşenleri jel içinde birbirine doğru yayılır ve antijenlerin kendisine özgü optimal antikor konsantrasyonları ile buluştuğu görünür bir çökelme çizgisi oluşturur. Reaktifler kuyucuklardan eşmerkezli olarak dağıldığı için, bir antikor kuyusunun etrafına farklı antijenlere (veya aynı antijenin farklı dilüsyonlarına) sahip çoklu kuyular yerleştirilerek çoklu testler gerçekleştirilebilir.
Ouchterlony reaksiyonu, bilinen bir serumdan antijenin doğası hakkında bir sonuç çıkarmayı mümkün kılar ve tersine, bilinen bir antijenden, antikorların doğası belirlenir.
Yöntemin avantajı, karmaşık karışımların antijenik bileşenlerini karşılaştırmaya ve bunların ortaklıklarını veya farklılıklarını yargılamaya izin vermesidir. Antijenlerin ortak özelliklerini karşılaştırmak için kuyucuklu bir agar hazırlanır: birine antiserum dökülür ve karşılaştırılan antijenler diğerlerine dökülür. Antijenler farklıysa, çökeltme bantları eşit olmayan bir şekilde yerleştirilmiştir.
immünoelektroforez
Son yıllarda, ince immünolojik çalışmalar için immünoelektroforez yöntemi kullanılmaya başlandı. Yöntem ilk olarak P.
Grabar ve K. A. Williams, 1953. Cam plakalar üzerinde agar jel elektroforezinin immünodifüzyon ile bir kombinasyonudur. Başlangıçta, genellikle protein veya diğer moleküllerin bir karışımı olan antijenin elektroforetik olarak ayrılması gerçekleştirilir. Bunu yapmak için, antijen agarda önceden kesilmiş bir kuyuya sokulur ve agar plakası bir süre doğru elektrik akımı bölgesine yerleştirilir.
yüzünden farklı hız moleküllerin hareketi, antijenin bileşen parçalarına ayrılmasıdır. Bundan sonra çökelen bağışıklık serumu, akım akışına paralel yönde kesilen oluğa verilir.
Antijen ve antiserum jel içinde birbirlerine doğru difüze olurlar.
yağış
Her antijen, kendisine karşılık gelen antikorlarla bir yay şeklinde bir çökelme bölgesi verir. Bu çizgilerin sayısı, konumu ve şekli, orijinal antijen karışımının bileşimi hakkında fikir verir.
flokülasyon reaksiyonu
Yöntem, 1924'te Ramon tarafından önerildi.
Toksin ile antitoksik serum karışımının belirli koşullar altında bulanıklık ve çökelti vermesi esasına dayanır. Bu durumda reaksiyon, antitoksin miktarının bu toksin miktarını tamamen nötralize eden doza karşılık geldiği test tüplerinde daha erken gerçekleşir.
Dolayısıyla toksinin gücü biliniyorsa bilinmeyen test serumundaki antitoksin miktarı da belirlenebilir. Bunu yapmak için, test serumunun birkaç seyreltisi hazırlanır, her seyreltiye aynı miktarda bilinen bir toksin eklenir, ardından test tüplerinden hangisinin önce topaklanacağı (çözeltinin bulanıklığı) gözlemlenir. İlk flokülasyonu belirleyin. Sonra hesaplama yapılır.
Örneğin, test serumundaki anti-difteri antikorlarının konsantrasyonunun belirlenmesi gerekmektedir. Reaksiyon, 1 ml başına 50 Lf içeren difteri toksini kullanır (Lf, 1 antitoksik ünite (AU) antiserum tarafından nötralize edilen minimum toksin miktarıdır.
Bu serumdan 0,2 ml ve 100 Lf (50 Lf x 2) aktiviteye sahip 2 ml bilinen bir toksin içeren bir test tüpünde ilk flokülasyonun not edildiğini varsayalım.
Yani 0.2 ml serum bu toksini etkisiz hale getirdi. Bu nedenle 0.2 ml serum 100 AU içerir ve bu serumun 1 ml'sinde antikor konsantrasyonu 500 AU'ya (100 AU x 5) karşılık gelir.
Benzer bir yöntemle topaklanma reaksiyonu, toksoidlerin bağışıklık kazandırma özelliklerini belirlemek için zıt amaç için kullanılabilir.
Bu, standart bir antitoksik serum gerektirir.
Nötrleştirme reaksiyonu
Reaksiyon, test materyalindeki bakteriyel toksinleri belirlemek için gıda bakteriyel zehirlenmesinin teşhisinde kullanılır. Ayrıca içerik için dış çevredeki bazı nesnelerin incelenmesine konulabilir. patojenik bakteriörneğin toprağı tetanoz veya gazlı kangren patojenlerinin varlığı açısından incelerken toksinler üretir.
Homolog antitoksik serum ile karıştırılan toksinin etkisini göstermediği bilinmektedir. zehirli eylem toksin nötralize edildiğinden. Bir toksinin bir antitoksin ile etkileşiminin reaksiyonu, kural olarak, kesinlikle spesifiktir, bu nedenle, toksin tipini belirlemek amacıyla bir nötralizasyon reaksiyonu oluşturmak için, her tipe özgü teşhis serumlarına sahip olmak gerekir. ve toksin türü. Test materyalinde birkaç toksinin bulunması bekleniyorsa, 2-3 antitoksik serum ve daha fazlasının bir karışımı aynı anda kullanılabilir.
Nötralizasyon reaksiyonu, patojen toksininin tipini ve tipini belirlemenizi sağlar.
Test malzemesi, zehirlenmeye neden olduğu iddia edilen gıda ürünleri, bu ürünlerin bulunduğu yerlerdeki bulaşıklardan gelen yıkamalar vb. olabilir.
İddia edilen toksinin ön nötralizasyonu gerçekleştirilir. Bunu yapmak için, test materyali (deneysel test tüpü) ile test tüpüne bir antitoksik teşhis serumu (istenen toksine karşı antikorlar içerir) eklenir; Başka bir test tüpüne (kontrol) eşit hacimde fizyolojik salin eklenir.
Kısa bir inkübasyondan sonra, test tüplerinin içerikleri iki grup beyaz fareye (deney ve kontrol) verilir.
Nötralizasyon reaksiyonunun sonuçları, kontrol hayvanlarının ölümünden hemen sonra dikkate alınır. Bu durumda, alınan hayvanların hayatta kalma gerçeği antitoksik serum test materyali ile birlikte, içinde enjekte edilen seruma karşılık gelen bir toksinin varlığını gösterir.
Nötralizasyon reaksiyonunun avantajı, elde edilen sonuçların yüksek güvenilirliğidir.
Bununla birlikte, duyarlılığı ve yanıt alma hızı açısından diğer bazı araştırma yöntemlerinden daha düşüktür.
Lizis reaksiyonları
Lizis reaksiyonları, genellikle, tamamlayıcı varlığında bu antijene özgü antikorların etkisi altında korpüsküler antijenlerin çözünmesi olarak adlandırılır.
İtibaren bağışıklık reaksiyonları Bakterilerin ve diğer korpüsküler antijenlerin parçalanması fenomenine dayanarak, esas olarak bakteriyoliz ve hemoliz reaksiyonları kullanılır.
bakteriyoliz reaksiyonu
Reaksiyon hem in vitro hem de in vivo gerçekleşir. İkincisi, V.I.'nin reaksiyonu olarak bilinir. Isaev - Pfeiffer.
Bu bilim adamları göstermiştir ki, eğer kobaylar kolera antijenleri ile önceden bağışıklı hale getirildikten sonra, daha sonra oldukça öldürücü bir vibrio kolera kültürünün karın boşluğuna sokulması, hayvanlarda enfeksiyona neden olmaz, çünkü karın boşluğu patojen, spesifik antikorların etkisi altında çözülür.
Sonra ben.
I. Mechnikov, ana bileşenlere bir tamamlayıcı kaynağı olan taze serum eklenirse, bağışıklık serumunun etkisi altında benzer bir kolera vibrio çözünmesinin bir test tüpünde meydana geldiğini kanıtladı. Bakterilerin kompleman varlığında spesifik antikorların etkisi altında çözünmesine bakteriyoliz reaksiyonu denir.
Bakteriyoliz reaksiyonunu ayarlarken, önce test serumunun 10 kat seyreltme serisi hazırlanır. Daha sonra her test tüpüne aynı miktarda (1-2 damla) mikrobiyal süspansiyon eklenir. Karışıma tamamlayıcı eklenir. 37 °C'de inkübasyondan sonra, canlı bakterilerin varlığını veya yokluğunu belirlemek için karışım her bir tüpten bir besin ortamına aşılanır.
Reaksiyon, bilinen bir mikroorganizmayı kullanarak antikorları tespit etmek veya tanısal bir bağışıklık serumu kullanarak mikrop tipini belirlemek için kullanılabilir.
AT pratik iş bakteriyologlar bu reaksiyonu, esas olarak kolera ve kolera benzeri vibrioların ayrımı için nadiren kullanırlar.
hemoliz reaksiyonu
Hemoliz mekanizması bakteriyolizinkine benzer.
Reaksiyonda kullanılan eritrositler antijendir. Antikorların kaynağı, anti-eritrosit serumudur (örneğin, reaksiyonda koyun eritrositleri kullanılıyorsa, spesifik anti-eritrosit antikorları içeren gerekli serum, koyun eritrositleri ile aşılanmış tavşanlardan elde edilir).
Gine domuzu kan serumu, diğer hayvanların serumlarından önemli ölçüde daha fazla tamamlayıcı içerdiğinden, çoğunlukla lizis reaksiyonlarında bir tamamlayıcı olarak kullanılır.
Kompleman varlığında antikorların eritrositleri yok ettiği durumlarda, onlardan hemoglobin salınır ve bulanık bir eritrosit süspansiyonundan reaksiyona giren karışım şeffaf kırmızı bir sıvıya (vernik kanı) dönüşür.
Bu reaksiyona hemoliz denir. Laboratuvar pratiğinde kompleman fiksasyon reaksiyonunda kompleman adsorpsiyonunun bir göstergesi olarak kullanılır.
İlgili bilgi:
site araması:
Ders planı: Konu ve mikrobiyoloji gelişiminin kısa tarihi. Mikroorganizmaların genel özellikleri ve doğadaki konumları. Yağış reaksiyonu
Veteriner mikrobiyolojisi ve görevleri
mir.zavantag.com > Biyoloji > Anlatım
1 … 7 8 9 10 11 12 13 14 15
| ^
RA ilk olarak 1896 yılında M. Gruber tarafından geliştirilmiştir. Reaksiyonun özü, antikorun antijen ile etkileşimidir, bu da mikropların çıplak gözle görülebilen pul, topaklar oluşumu ile yapışmasına (aglütinasyonuna) neden olur. RA yaygın olarak kullanılır serolojik tanı birçok Bakteriyel enfeksiyonlar(bruselloz, ruam, salmonelloz, kolibasilloz, vb.) ve izole edilen mikroorganizma türlerinin ve türlerinin serolojik tanımlaması için. RA ayarlamak için birkaç yöntem vardır: test tüpü (hacimsel), damla (plaka), kan damlası, sütle halka reaksiyonu, hemaglütinasyon reaksiyonu ve varyantları (RHGA, RNHA), Coombs'un antiglobulin testi, vb. ^ – Serum yerine kan alınır. Plaka reaksiyonunu ayarlayın. Tavuk ve hindilerde pulloroz, tavuklarda mikoplazmoz teşhisi. Coombs reaksiyonu tamamlanmamış antikorların saptanmasına izin verir. İkincisi tek değerlidir ve bu nedenle aglütinat oluşumunu engellerler. Yöntem, korpüsküler antijenlere (eritrositler, bakteriler) sabitlenmiş eksik antikorların bağlanması için bir aracı görevi gören antiglobulin serumunun kullanımına dayanmaktadır. ^ - serolojik ve teşhis açısından doğru reaksiyonlar için geçerli değildir, ancak antijen - hemaglutinin saptamanıza ve bazı bakteri ve mikoplazmalarda hemaglutinasyon özellikleri (kırmızı kan hücrelerini aglütine etme yeteneği) oluşturmanıza olanak tanır. RNGA- son yıllarda serodinamiğin önde gelen yerlerinden birini almıştır. Özü, karşılık gelen patojen veya antikorun antijeninin protein moleküllerinin, tanenle tedavi edilen bir koyun veya başka bir hayvanın eritrositleri üzerinde önceden adsorbe edilmesi gerçeğinde yatmaktadır. Ardından, hassaslaştırılmış eritrositleri hasta hayvanların kan serumlarıyla veya ikinci durumda incelenen antijenle karıştırarak reaksiyonu koyun. Serum spec varlığında. Bu antijene karşı antikorlar (veya tersi) eritrosit aglütinasyonu meydana gelir - reaksiyon pozitiftir. 1897'de R. Kraus tarafından önerildi. Çökelme, antikor-çökelti ve antijen-çökeltici etkileşimi sırasında gözlenen bir olgudur. Reaksiyonun özü, antijen kolloidlerinin dağılımını ve bunların immün serumdaki spesifik antikorların etkisi altında çökelmesini değiştirmektir. RP, sıvı bir ortamda (halka çökeltme reaksiyonu) veya agar jelde (lamellar RDP) test tüplerine yerleştirilebilir. Halka çökelme reaksiyonu ilk olarak Ascoli (1910) tarafından önerilmiş olup, en yaygın olarak şarbon tanısında kullanılmaktadır. yürütürken veterinerlik uzmanlığı RP, et, un ve diğer ürünlerin tahrifatını belirlemek için kullanılan bir yöntemdir. Özel anlam Bu reaksiyonun kan türünün belirlenmesinde adli tıp muayenesi vardır. Bununla birlikte, sıvı bir ortamda çökeltme reaksiyonunun kullanılması, antijenlerin heterojenliğini karakterize etmeye izin vermez, yani; preparasyondaki antijenlerin sayısı ve konsantrasyonu. Bu bilgi, RP'nin bir jele (genellikle agar) yerleştirilmesiyle elde edilebilir. Hareket hızına sahip olan ilacın farklı antijenleri farklı şekilde difüze olur ve homolog antikorla buluştukları yerde şeffaf jel kalınlığında çökeltiler oluştururlar. Çökelti çizgilerinin lokalizasyonu ve konsantrasyonu, kalitesi için bir kriter olarak hizmet eden antijenik preparasyonun her bir bileşeni için karakteristik olacaktır. İlacın seyreltilmesiyle, içindeki antijenlerin nispi içeriğini karakterize etmek mümkündür. RDP'yi ayarlamak için çeşitli yöntemler geliştirilmiştir: Uden'e (1946) göre doğrudan tek boyutlu difüzyon yöntemi, Mancini'ye (1963) göre basit radyal immün difüzyon yöntemi, Ouchterlony'ye (1948) göre agar jele çift difüzyon yöntemi ), vb. ^
(RN) model üzerinde tetanoz toksinleri ve antitoksinler. RN'nin özü, immün serumun homolog antikorlarının, hastalığa neden olan ajanın veya metabolik ürünlerinin enfeksiyöz özelliklerini baskılama (nötralize etme) yeteneğinde yatmaktadır. Antijen-antikor karışımı ile reaksiyon sonucunun belirlenmesi laboratuvar hayvanlarını enfekte eder, CC, EC. Pozitif bir pH göstergesi, biyolojik test sistemlerinde ölümün olmamasıdır. AT bakteriyel uygulama RN, anaerobik enterotoksemi, botulizm vb. tanısında kullanılır. RN, toksinleri, toksoidleri veya antitoksinleri tespit etmek ve titre etmek için gerçekleştirilir. Kan serumundaki antikorları tespit etmek ve test materyalindeki antijeni tespit etmek için kullanılır (bruselloz, ruam, riketsioz, tüberküloz vb. için). Bu reaksiyon dolaylı iki sistem reaksiyonuna aittir. 5 bileşeni vardır:
3,4,5 bileşenleri gösterge sistemini oluşturur. Test serumunun antijeni ve antikoru birbirine uyuyorsa bir başkası, bir antijen-antikor bağışıklık kompleksi ortaya çıkar ve bu, reaksiyonun meydana geldiği ortamdan tamamlayıcıyı bağlar ve çıkarır. Test serumunda antijene karşılık gelen antikorların yokluğunda, belirtilen kompleks oluşmaz - tamamlayıcı serbest kalır. Bunlar görünmez süreçler olduğundan, tamamlayıcıya ne olduğu sorusunu çözmek için, hemolitik sistemin bileşenleri bir gösterge olarak - hemolitik serum + eritrositler - test tüpüne sokulur. Tamamlayıcı bakteriyolojik sisteme bağlanırsa, eritrositlerin hemolizi olmaz, sonuç pozitiftir - serum antikorlar içerir. Hemolizin varlığı, bakteriyolojik sistemde yalnızca test serumunda antikorların yokluğunda mümkün olan serbest tamamlayıcı varlığının bir göstergesi olarak hizmet eder - sonuç negatiftir. RSC katı kurallar altında ilerliyor kantitatif oranlar bileşenler. Bu, ön titrasyonları ile elde edilir (tamamlayıcı ve hemolitik serum reaksiyon gününde titre edilir; mikrobiyal antijen - 2-3 ayda bir). Titrasyon, reaksiyonu gerçekleştirmek için reaksiyondaki bir veya başka bir bileşenin en küçük miktarının belirlenmesidir; fazlalık veya eksiklik, sonuçların bozulmasıdır. RDSC, CSC'nin bir varyantıdır, ancak reaksiyonun ilk fazının soğukta (40C) 16-18 saat sürmesi bakımından farklılık gösterir; bu, antijen-antikor kompleksi tarafından daha uzun kompleman adsorpsiyonu nedeniyle hassasiyeti artırır. |
7 8 9 10 11 12 13 14 15
Benzer:
| "Çevresel mikrobiyoloji"nin tanımı Genel mikrobiyoloji, mikroorganizmaların kendi aralarındaki, dış ortamdaki nesnelerle ve makro organizmalarla olan ilişkilerini inceleyen bilim dalıdır. |
Esas olanı yansıtan en genel ve temel kavramlar, ... Felsefe, en çok inceleyen bir bilimdir. Genel Hükümler insan, doğa ve bilgi hakkında |
||
| Plan "Uluslararası Ekonomik İlişkiler" disiplininin konusu ve yöntemi... "Uluslararası Ekonomik İlişkiler" disiplininin konusu ve yöntemi ile Uluslararası Ekonomik İlişkilerin gelişim tarihi |
"Hukuk psikolojisi" kursundaki sınav soruları Öğrenciler için ... Yasal psikoloji kavramı. Hukuk psikolojisinin gelişimi konusu, görevleri ve tarihçesi |
||
| 1. Siyasi ve hukuki doktrinler tarihinin konusu ve yöntemi> Konu ... Bunun nedeni, bu hukuk disiplini çerçevesinde belirli bir konunun araştırılması ve ele alınmasıdır - ortaya çıkış tarihi ... |
1.
Bir bilim olarak felsefe tarihi. Konusu ve yöntemi |
||
| Kazakistan Cumhuriyeti Eğitim ve Bilim Bakanlığı Öğrenci İttifakı… "Yılın Öğrencisi-2011" (bundan sonra yarışma olarak anılacaktır) cumhuriyetçi yarışmasına ilişkin bu yönetmelik, amaçlarını ve hedeflerini, katılımcılarını belirler ... |
"Mikrobiyoloji" ve "mikroorganizma" terimlerinin tanımı … |
||
| "Çatışma bilimi" disiplinindeki sınava hazırlanmak için sorular Bir bilim olarak çatışma bilimi: konu, hedefler, hedefler, güncel problemler, önemi şimdiki aşama toplumun gelişimi |
Video kliplerin bölgesel yarışması hakkında "k-roly-k!" Genel Hükümler Bu Yönetmelik, Yarışmanın amaçlarını, hedeflerini, ilkelerini, organizasyon ve yürütme prosedürünü, katılım prosedürünü ve belirleme prosedürünü belirler ... |
Sitenize bir düğme ekleyin:
Okul malzemeleri
www.mir.zavantag.com
Yağış reaksiyonu
Çökelme ve aglütinasyon, temel olarak farklılık gösteren oldukça benzer reaksiyonlardır. fiziksel özellikler AG.
İlk durumda, ikincisinde çözünür halde sunulur - korpüsküler formlarda. RP, AG-AT reaksiyonu sırasında bir çökelti oluşumuna dayanır. RP oldukça spesifik ve hassastır.
Reaksiyon Bileşenleri:
1. çözünür antijen veya hapten (çökeltici);
2. AT - çökeltiler (bağışıklık çökeltici serum; tavşanların uygun antijen çözeltileri ile aşılanmasıyla elde edilir);
Yağış reaksiyonu
izotonik sodyum klorür çözeltisi veya agar jeli.
RP ayar yöntemleri:
1) Çözümlerde RP - r.
halka çökelmesi;
2) Jel içinde RP.
Halka çökeltme reaksiyonu, içine çökelen serumların döküldüğü dar çökeltme tüplerine konur.
Sonra presipitinojen solüsyonunu dökün. Pozitif bir reaksiyonla, bileşenlerin arayüzünde bulutlu bir çökelme halkası belirir.Bu RP kurma yönteminin bir örneği, hayvan organlarından ekstrakte edilen şarbon patojeninin termostabil bir haptenini tespit etmek için kullanılan Ascoli termopresipitasyon reaksiyonudur. kaynatma sırasında ekstraksiyon yoluyla deri ve yün Jeldeki RP çeşitlerinden biri (Ouchterlony reaksiyonu), toksijeniteyi belirlemenizi sağlar difteri basili antitoksik serum ile.
ile bir Petri kabında besin ortamı antitoksik difteri serumu ile emprenye edilmiş bir filtre kağıdı şeridi yerleştirin ve incelenen kültürleri kağıt şeridine dik darbeler şeklinde inoküle edin. Gün boyunca 37 PS'de inkübe edildi. Toksijenik bir kültürün varlığında, toksinin antitoksin ile etkileşime girdiği yerde çökelme çizgileri oluşur.Jel içindeki çökelme reaksiyonuna immünodifüzyon denir.
Genellikle jel - immünoelektroforezde foresis ile. Yöntem ilkesi: çalışılan antijen elektroforetik olarak fraksiyonlara ayrılır. elde edilen fraksiyonlar, antiserum kullanılarak çift difüzyon yöntemiyle analiz edilir.
Ascoli reaksiyonu, şarbon basilinin antijenini tespit etmek için şarbonun teşhisinde kullanılır. Bir çökeltme reaksiyonu oluşturmak için şunlara sahip olmalısınız: precipitinogen - hapten B.
Antrakis (doku özü), presipitin (şarbon çökeltici serum) ve salin.
Termopresipitinojenin hazırlanması.
1. 1 g ezilmiş deri veya 1 ml B. anthracis kültürü içeren bir şişeye 10 ml fizyolojik salin dökün.
2. Şişeyi 30-45 dakika kaynayan bir banyoya yerleştirin.
3. Asbestten süzün. Süzüntü tamamen berrak olmalıdır. Çökeltme reaksiyonu için süzüntü 100 kat veya daha fazla seyreltilir.
Halka çökeltme reaksiyonunun ayarlanması.
1) 0,3 ml tam çöktürücü serum veya 1:5, 1:10 oranında seyreltilmiş çökeltme tüpüne dökülür.
2) Çöktürücü, tüpün duvarı boyunca dikkatlice katmanlanır.En geç 5-15 dakika içinde iki sıvının sınırında bulanık bir çökmüş protein halkası oluşursa, reaksiyon pozitif kabul edilir.
Çökeltme reaksiyonunu ayarlarken aşağıdaki kontroller kullanılır:
a) antijen ve salin solüsyonu;
b) spesifik serum ve fiziksel.
c) antijen ve spesifik olmayan serum.
Tüm kontrol tüplerinde bulanıklık olmamalıdır Çökeltme reaksiyonu için 40-60 mm yüksekliğinde ve 4-5 mm çapında özel çökeltme tüpleri kullanılır, dar tüplerde çökelme çok daha hızlı gerçekleşir ve sıradan test tüplerine göre daha net kendini gösterir. , camları tamamen şeffaf ve kuru olacak şekilde iyice yıkanır ve kurutulur.
Çökeltme reaksiyonunda, elektrolitlerin mevcudiyetinde çözünür bir antijen (lizat, ekstrakt, hapten) ve spesifik bir antikordan oluşan spesifik bir bağışıklık kompleksi çökeltilir.
Bu reaksiyon sonucunda oluşan bulutlu halka veya çökeltiye denir. çökelti. Bu reaksiyon, aglütinasyon reaksiyonundan esas olarak antijen partiküllerinin boyutunda farklılık gösterir.
Çökeltme reaksiyonu genellikle bir dizi enfeksiyonun (şarbon, menenjit vb.) tanısında antijeni belirlemek için kullanılır; adli tıpta - kan, sperm vb. türlerini belirlemek için; sıhhi ve hijyenik çalışmalarda - ürünlerin tahrif edildiğini tespit ederken; yardımı ile hayvanların ve bitkilerin filogenetik ilişkisini belirleme. İhtiyacınız olan reaksiyon için:
1. Antikorlar (çökeltiler) - yüksek titrede antikor içeren (1:100.000'den düşük olmayan) bağışıklık serumu. Çöken serumun titresi, reaksiyona girdiği antijenin en yüksek dilüsyonu ile belirlenir. Serum genellikle seyreltilmemiş veya seyreltilmiş olarak kullanılır. 1:5 -1:10.
2. Antijen - bir protein veya lipoid polisakarit yapısındaki çözünmüş maddeler (tam antijenler ve haptenler).
3. İzotonik çözelti.
Çökeltme reaksiyonunu gerçekleştirmenin ana yöntemleri şunlardır: halka çökeltme reaksiyonu ve agarda (jel) çökeltme reaksiyonu.
Dikkat! Çökeltme reaksiyonunda yer alan tüm bileşenler tamamen şeffaf olmalıdır.
Halka çökeltme reaksiyonu. 0,2 - 0,3 ml (5-6 damla) serum pastör pipeti kullanılarak çökeltme tüpüne eklenir (serum tüpün duvarlarına düşmemelidir). Antijen, test tüpünün duvarı boyunca ince bir Pasteur pipeti ile dökülerek, aynı hacimdeki serum üzerine dikkatli bir şekilde katmanlanır. Test tüpü eğimli bir konumda tutulur. Uygun katmanlama ile serum ve antijen arasında net bir sınır elde edilmelidir. Sıvıyı karıştırmamak için test tüpünü bir tripoda dikkatlice yerleştirin. Reaksiyonun olumlu bir sonucu ile, antijen ve antikor sınırında bulutlu bir "halka" oluşur - bir çökelti.
Agarda çökelme reaksiyonu(jel). Reaksiyonun özelliği, antijen ve antikor etkileşiminin yoğun bir ortamda, yani içinde gerçekleşmesidir. jel. Ortaya çıkan çökelti, ortamın kalınlığında bulanık bir bant verir. Bir bandın olmaması, reaksiyon bileşenleri arasında bir uyumsuzluğu gösterir. Bu reaksiyon, biyomedikal araştırmalarda, özellikle difteri etken maddesinde toksin oluşumu çalışmasında yaygın olarak kullanılmaktadır.
Lizis reaksiyonu (immün sitoliz)
bağışıklık lizisi- bu, tamamlayıcının zorunlu katılımı ile antikorların etkisi altındaki hücrelerin çözünmesidir. İhtiyacınız olan reaksiyon için:
1. Antijen mikroplar, eritrositler veya diğer hücreler.
2. Antikor(lizin) - bağışıklık serumu, nadiren hastanın serumu. Bakteriyolitik serum, bakterilerin parçalanmasında yer alan antikorları içerir; hemolitik - kırmızı kan hücrelerinin parçalanmasına katkıda bulunan hemolizinler; spiroketlerin parçalanması için spiroketolizinler, hücreler - itolizinler vb. gereklidir.
3. Tamamlayıcı. Gine domuzlarının serumundaki çoğu tamamlayıcı. Bu serum (birkaç hayvandan elde edilen karışım) genellikle tamamlayıcı olarak kullanılır.
4. İzotonik solüsyon.
Yağış reaksiyonu.
| Parametre adı | Anlam |
| Makale konusu: | Yağış reaksiyonu. |
| Değerlendirme listesi (tematik kategori) | Eğitim |
Çökeltme reaksiyonu (RP) - ϶ᴛᴏ bir elektrolit varlığında antikorların etkisi altında çözünür bir antijenin çökelmesi. Görünür reaksiyon etkisi (yağış olgusu) - bulanıklık (bulanık halka veya tortu oluşumu - çökelti).
RP, bilinmeyen bir antijeni tespit etmek için kullanılır. bulaşıcı hastalıklar: şarbon, tularemi, menenjit, çiçek hastalığı ile. Adli tıpta kanın, meninin cinsinin belirlenmesinde kullanılır; sıhhi ve hijyenik araştırmalarda - gıda ürünlerinin tahrif edilmesini sağlamak. RP çok hassastır ve antijeni 1:1.000.000 ve 1:10.000.000 dilüsyonlarda tespit edebilir.
Çökeltme reaksiyonunun bileşenleri.
1. Antijen (çökeltici) - ince dağılmış (çözünür) bir durumda olan moleküler yapıya sahip bir antijendir. Çöktürücüler - ϶ᴛᴏ çeşitli lizatlar veya doku özleri, vb.
ref.rf'de barındırılan
Bir presipitinojen, antijen partiküllerinin boyutunda bir aglütinojenden farklıdır. aglütinojen sahip hücre boyutları(bunlar tüm hücreleri yok etmez), ancak boyutlar çöktürücü ile orantılı moleküler boyut(bunlar proteinler ve bunların karbonhidratlar veya lipidlerle olan kompleksleridir). çöktürücü solüsyon şeffaf.
2. Antikorlar (çökeltiler) insan serumunda veya bilinen antikorları içeren immün teşhis çökeltici serumlarda bulunur.
3. Elektrolit- izotonik sodyum klorür çözeltisi.
çöktürücü elde etme.
Malzemenin öğütülmesi ve kaynatılarak veya diğer yöntemlerle protein antijenlerinin çıkarılmasıyla elde edilir.
çöktürücü örnekleri: çeşitli organ ve dokuların lizatları veya özleri, yabancı kan serumu (serum çözüm, her şeyden önce, çeşitli proteinler), mikropların et suyu kültürlerinin filtratları, mikropların tuz özleri, otolizatlar, vb.
Çöktürücü serumların elde edilmesi.
Uygun presipitinojenler ile tavşanların hiperimmunizasyonu ile elde edilmiştir. Bu tür serumlar, tavşanların aşılandığı presipitinojenlere karşı antikorlar içerir.
Çöktüren sera örnekleri: çökeltici şarbon serumu(şarbon antijenlerine karşı antikorlar içerir), çöktürücü antimeningokokal serum(menenjite neden olan ajanın antijenlerine karşı antikorlar içerir), vb.
titreçöktürücü serum - ϶ᴛᴏ serumun hala bir çökeltme reaksiyonu verdiği en yüksek çökeltici seyreltisidir.
RP ayarlama yolları.
1. Halka çökelme reaksiyonu -özel çökeltme tüplerinde gerçekleştirilir (çap - 0,4-0,5 cm, yükseklik - 7-8 cm). Test tüpüne 0,2 - 0,3 ml çökeltici serum eklenir ve aynı miktarda çökeltici, bir Pasteur pipetinin uzun burnuyla dikkatlice duvar boyunca tabakalanır. Sonra, dikkatlice yatay pozisyon Tüpler dikey olarak yerleştirilir.
Reaksiyon sonuçlarının muhasebeleştirilmesi antijen-antikor sınırında beyaz bir halkanın görünmesi ile gerçekleştirilir. Olumlu bir tepki ile böyle bir halka gözlenir. Bu durumda antijen, antikora karşılık gelir ve bağlanmaları gerçekleşir.
Haşlanıp süzülürse sulu özler organlar ve dokular, daha sonra reaksiyon genellikle reaksiyon olarak adlandırılır ısıl yağış (örneğin, şarbon tanısında).
2. Jel çökeltme reaksiyonu - Petri kaplarında veya bir agar jel tabakasının yerleştirildiği cam slaytlarda gerçekleştirilir. Jel katılaştığında, içine antijenlerin veya antikorların veya her ikisinin yerleştirildiği oyuklar kesilir. Ayırt etmek 2 yöntem Jelde RP:
bir metod basit (radyal) immün difüzyon: immun reaksiyon bileşenlerinden (antijen veya antikor) biri kuyucuğa yerleştirilir ve diğer bileşen agar ile karıştırılır; olumlu bir sonuçla (antijen bir antikora karşılık gelir) kuyunun etrafında oluşur çökelti halkası ;
yöntem çift immün difüzyon: hem antikor hem de antijen ayrı oyuklara yerleştirilir, agar jeli içinde birbirlerine doğru yayılırlar; olumlu bir sonuçla antikorların ve antijenlerin buluştuğu yer yağış hatları.
Jelde RP örneği Ouchterlony çift immün difüzyon reaksiyonudur difteri teşhisinde
İmmünoelektroforez - elektroforez yöntemi ile çöktürme reaksiyonunu birleştiren bir yöntemdir. Bir antijen karışımı (örneğin kan serum proteinleri), elektroforez kullanılarak bir jel içinde ayrılır. Ardından, istenen proteini (bilinmeyen antijen) bulmak ve belirlemek için, bu proteine \u200b\u200b(bilinen antikor) antikorlar içeren bir teşhis çökeltici serum kullanılır. Bunu yapmak için tanı serumu, proteinlere paralel oluğa sokulur. Proteinler arasında serumdaki antikora karşılık gelen bir tane varsa, o zaman etrafında oluşur. yağış hatları.
Yağış reaksiyonu. - kavram ve türleri. "Yağış reaksiyonu" kategorisinin sınıflandırılması ve özellikleri. 2017, 2018.
