تحقیقات باکتریولوژیک در اسهال خونی تشخیص آزمایشگاهی اسهال خونی، آمیبیاز و بالانتیدیا

اسهال خونی

اسهال خونی - عفونتکه با مسمومیت عمومی بدن، مدفوع شل و ضایعه عجیب غشای مخاطی روده بزرگ مشخص می شود. یکی از شایع ترین بیماری های حاد روده ای در جهان است. این بیماری از زمان های قدیم تحت عنوان "اسهال خونی" شناخته شده است، اما ماهیت آن متفاوت است. در سال 1875م دانشمند روسی لش یک آمیب را از بیمار مبتلا به اسهال خونی جدا کرد انتامبا هیستولیتیکا،در 15 سال بعد استقلال این بیماری ایجاد شد که نام آمیبیازیس را حفظ کرد. عوامل ایجاد کننده اسهال خونی گروه بزرگی از باکتری های مشابه بیولوژیکی هستند که در این جنس متحد شده اند. شیگلتا.پاتوژن برای اولین بار در سال 1888 کشف شد. A. Chantemes و Vidal; در سال 1891 توسط A.V. Grigoriev توصیف شد و در سال 1898. K. Shiga با استفاده از سرم به دست آمده از بیمار، عامل بیماری زا را در 34 بیمار مبتلا به اسهال خونی شناسایی کرد و در نهایت نقش اتیولوژیکی این باکتری را ثابت کرد. با این حال، در سال های بعدی، سایر پاتوژن های اسهال خونی کشف شد: در سال 1900. - اس. فلکسنر، در سال 1915. - K. Sonne، در سال 1917. - K. Stutzer و K. Schmitz، در سال 1932. - جی بوید، در سال 1934 - دی لارج، در سال 1943 - A. Saks.

در حال حاضر جنس شیگلاشامل بیش از 40 سروتیپ است. همه آنها میله های گرم منفی کوتاه و غیر متحرک هستند که هاگ و کپسول تشکیل نمی دهند که (روی معمولی به خوبی رشد می کنند. رسانه های مغذیروی محیطی با سیترات به عنوان تنها منبع کربن رشد نکنید. H2S تشکیل نمی دهند، اوره آز ندارند. واکنش Voges-Proskauer منفی است. گلوکز و برخی دیگر از کربوهیدرات ها برای تشکیل اسید بدون گاز تخمیر می شوند (به جز برخی از بیوتیپ ها) Shigella flexneri: S.manchesterو ewcastle)؛به عنوان یک قاعده، لاکتوز را تخمیر نکنید (به استثنای شیگلا سون)، آدونیت، اینوزیتول، ژلاتین را مایع نمی کند، معمولا کاتالاز را تشکیل می دهد، لیزین دکربوکسیلاز و فنیل آلانین دآمیناز ندارد. محتوای G+C در DNA 49-53 مول است. شیگلا بی هوازی اختیاری است، دمای مطلوب برای رشد 37 درجه سانتیگراد است، آنها بالاتر از 45 درجه سانتیگراد رشد نمی کنند، pH مطلوب محیط 6.7-7.2 است. مستعمرات در محیط های متراکم گرد، محدب، نیمه شفاف هستند؛ در صورت تداعی، کلنی های R شکل خشن تشکیل می شوند. رشد روی BCH به شکل یک کدورت یکنواخت، اشکال خشن یک رسوب را تشکیل می دهند. کشت های تازه جدا شده شیگلا سون J4HO مستعمرات دو نوع را تشکیل می دهند: محدب گرد کوچک (فاز I)، مسطح بزرگ (2 فاز). ماهیت کلنی به حضور (فاز I) یا عدم حضور (فاز II) پلاسمید با میلی متر 120 MD بستگی دارد که میزان حدت شیگلا سون را نیز تعیین می کند.

آنتی‌ژن‌های O با ویژگی‌های متفاوت در شیگلا یافت شد: مشترک برای خانواده انتروباکتریاسه،ژنریک، گونه، گروه و نوع خاص، و همچنین آنتی ژن K. آنها آنتی ژن H ندارند.

طبقه بندی فقط آنتی ژن های O گروه و نوع خاص را در نظر می گیرد. با توجه به این ویژگی ها، شیگلابه 4 زیر گروه یا 4 گونه تقسیم می شود و شامل 44 سروتیپ است. در زیر گروه A (گونه شیگلا دیسانتری)شیگلا مانیتول تخمیرکننده را شامل نمی شود. این گونه شامل 12 سروتیپ (1-12) می باشد. هر کلیشه آنتی ژن نوع خاص خود را دارد. روابط آنتی ژنی بین سروتیپ ها، و همچنین با سایر انواع شیگلا، ضعیف بیان می شود. به زیر گروه B (نوع شیگلا فلکسنری)شامل شیگلا، معمولاً مانیتول تخمیر می شود. شیگلای این گونه از نظر سرولوژیکی به یکدیگر مرتبط هستند: آنها حاوی آنتی ژن های نوع خاص (I-VI) هستند که بر اساس آن به سروتیپ های (1-6) و آنتی ژن های گروهی تقسیم می شوند که در ترکیبات مختلف در هر سروتیپ یافت می شوند. و بر اساس آن سروتیپ ها به زیر سروتیپ ها تقسیم می شوند. علاوه بر این، این گونه شامل دو نوع آنتی ژنی است - X و Y، که آنتی ژن های معمولی ندارند، آنها در مجموعه ای از آنتی ژن های گروه متفاوت هستند. سروتیپ S.flexneri 6زیرسروتیپ ندارد، اما با توجه به ویژگی های تخمیر گلوکز، مانیتول و دولسیت به 3 نوع بیوشیمیایی تقسیم می شود.

به زیر گروه C (نوع شلگلا بویدل)شامل شیگلا، معمولاً مانیتول تخمیر می شود. اعضای گروه از نظر سرولوژیکی از یکدیگر متمایز هستند. روابط آنتی ژنی در گونه ضعیف بیان می شود. این گونه شامل 18 سروتیپ (1-18) است که هر کدام آنتی ژن نوع اصلی خود را دارند.

در زیر گروه D (گونه شلگلا سونلشامل شیگلا است که معمولاً مانیتول را تخمیر می کند و می تواند به آهستگی (پس از 24 ساعت انکوباسیون و بعد از آن) لاکتوز و ساکارز را تخمیر کند. چشم انداز S. sonneiشامل یک سروتیپ است، با این حال، کلنی های فاز I و II آنتی ژن های نوع خاص خود را دارند. دو روش برای طبقه بندی درون گونه ای شیگلای Sonne پیشنهاد شده است:

1) تقسیم آنها به 14 نوع و زیرگروه بیوشیمیایی با توجه به توانایی آنها در تخمیر مالتوز، رامنوز و زایلوز.

2) تقسیم به انواع فاژ بر اساس حساسیت به مجموعه ای از فاژهای مربوطه.

این روش های تایپ عمدتاً دارای اهمیت اپیدمیولوژیک هستند. علاوه بر این، شیگلای Sonne و شیگلای Flexner با توانایی سنتز کولیسین های خاص (colicinogenotyping) و با حساسیت به کولیسین های شناخته شده (colicinotyping) در معرض تایپ برای همان هدف قرار می گیرند. برای تعیین نوع کولیسین های تولید شده توسط شیگلا، J. Abbott و R. Shannon مجموعه ای از سویه های معمولی و شاخص شیگلا را پیشنهاد کردند و برای تعیین حساسیت شیگلا به آن انواع شناخته شدهکولیسین ها از مجموعه ای از سویه های مرجع colicinogenic P. Frederick استفاده می کنند.

مقاومت. شیگلا مقاومت نسبتا بالایی در برابر عوامل محیطی دارد. آنها روی پارچه پنبه ای و روی کاغذ تا 30-36 روز زنده می مانند، در مدفوع خشک - تا 4-5 ماه، در خاک - تا 3-4 ماه، در آب - از 0.5 تا 3 ماه، روی میوه ها و سبزیجات - تا 2 واحد، در شیر و محصولات لبنی - تا چند هفته؛ در دمای 60 درجه سانتیگراد در 15-20 دقیقه می میرند.

حساس به محلول های کلرامین، کلر فعال و سایر مواد ضد عفونی کننده.

عوامل بیماری زایی. مهم ترین خاصیت بیولوژیکیشیگلا، که بیماری زایی آنها را تعیین می کند - توانایی حمله به سلول های اپیتلیال، در آنها تکثیر می شود و باعث مرگ آنها می شود. این اثر را می توان با استفاده از آزمایش کراتوکونژونکتیو (تعریف یک حلقه از کشت شیگلا (3-2 میلیارد باکتری) در زیر پلک تحتانی خوکچه هندی باعث ایجاد کراتوکونژونکتیویت سروزی-چرکی) و همچنین با عفونت کشت سلولی (اثر سیتوتوکسیک)، یا جنین مرغ (مرگ آنها)، یا موش سفید داخل بینی (توسعه پنومونی). عوامل اصلی بیماری زایی شیگلا را می توان به سه گروه تقسیم کرد:

1) عواملی که تعامل با اپیتلیوم غشای مخاطی را تعیین می کند.

2) عواملی که مقاومت در برابر مکانیسم های دفاعی هومورال و سلولی ماکرو ارگانیسم و ​​توانایی شیگلا برای تکثیر در سلول های آن را ایجاد می کنند.

3) توانایی تولید سموم و محصولات سمی که توسعه فرآیند پاتولوژیک واقعی را تعیین می کند.

گروه اول شامل عوامل چسبندگی و کلونیزاسیون است: نقش آنها توسط پیلی، پروتئین های غشای خارجی و LPS ایفا می شود. چسبندگی و کلونیزاسیون توسط آنزیم هایی که مخاط را از بین می برند - نورآمینیداز، هیالورونیداز، موسیناز تسهیل می شود. گروه دوم شامل عوامل تهاجم است که باعث نفوذ شیگلا به انتروسیت ها و تولید مثل آنها در آنها و در ماکروفاژها با تظاهرات همزمان یک اثر سیتوتوکسیک و (یا) انتروتوکسیک می شود. این خواص توسط ژن های پلاسمید با m.m کنترل می شود. 140 MD (این سنتز پروتئین های غشای خارجی را رمزگذاری می کند که باعث تهاجم می شوند) و ژن های کروموزومی شیگلا: ksr A (باعث کراتوکونژونکتیویت می شود)، cyt (مسئول تخریب سلول)، و همچنین ژن های دیگری که هنوز شناسایی نشده اند. محافظت از شیگلا در برابر فاگوسیتوز توسط آنتی ژن K سطحی، آنتی ژن های 3، 4 و لیپوپلی ساکارید انجام می شود. علاوه بر این، لیپید A اندوتوکسین شیگلا دارای اثر سرکوب کننده سیستم ایمنی است - فعالیت سلول های حافظه ایمنی را سرکوب می کند.

گروه سوم از عوامل بیماری زایی شامل اندوتوکسین و دو نوع اگزوتوکسین موجود در شیگلا - اگزوتوکسین های شیگا و اگزوتوکسین های شبه شیگا (SLT-I و SLT-II) است که خواص سیتوتوکسیک آنها بیشتر در S.dysenteriae 1.سموم شیگا و شیگا مانند در سروتیپ های دیگر نیز یافت می شود S.dysenteriae،آنها نیز تشکیل می شوند S.flexneri، S.sonnei، S.boydii، ETEC و مقداری سالمونلا. سنتز این سموم توسط ژن های سمی فاژهای تبدیل کننده کنترل می شود. انتروتوکسین های نوع LT در Flexner، Sonne و Boyd Shigella یافت شده است. سنتز LT در آنها توسط ژن های پلاسمید کنترل می شود. انتروتوکسین فعالیت آدنیلات سیکلاز را تحریک می کند و مسئول ایجاد اسهال است. شیگا توکسین یا نوروتوکسین با سیستم آدنیلات سیکلاز واکنش نمی دهد، اما اثر سیتوتوکسیک مستقیم دارد. شیگا و سموم شیگا مانند (SLT-I و SLT-II) دارای m.m. -70 کیلو دالتون و از زیر واحدهای A و B (آخرین زیر واحد از 5 زیر واحد کوچک یکسان) تشکیل شده است. گیرنده سموم گلیکولیپید غشای سلولی است.

حدت شیگلا سون به پلاسمید با m.m نیز بستگی دارد. 120 MD. این ماده سنتز حدود 40 پلی پپتید غشای خارجی را کنترل می کند که هفت مورد از آنها با بیماری زاست. شیگلا سون با این پلاسمید کلنی های فاز I را تشکیل می دهد و بدخیم است. کشت هایی که پلاسمید را از دست داده اند، مستعمرات فاز II را تشکیل می دهند و فاقد حدت هستند. پلاسمیدهای با m.m. 120-140 MD در Flexner و Boyd Shigella یافت شد. لیپوپلی ساکارید شیگلا یک اندوتوکسین قوی است.

ویژگی های اپیدمیولوژیتنها منبع عفونت انسان است. هیچ حیوانی در طبیعت به اسهال خونی مبتلا نمی شود. در شرایط تجربی، اسهال خونی فقط در میمون ها قابل تکثیر است. روش عفونت مدفوعی – دهانی است. راه های انتقال - آب ( غالب برای شیگلا فلکسنر)، غذا، شیر و محصولات لبنی نقش مهمی دارند (مسیر غالب عفونت برای شیگلا سون) و تماس با خانواده، به ویژه برای گونه S. dysenteriae.

یکی از ویژگی های اپیدمیولوژی اسهال خونی تغییر در ترکیب گونه ای پاتوژن ها و همچنین بیوتیپ های Sonne و سروتیپ های فلکسنر در مناطق خاص است. به عنوان مثال، تا پایان دهه 30 قرن XX، سهم S.dysenteriae 1 30-40٪ از کل موارد اسهال خونی را تشکیل می دهد و سپس این سروتیپ کمتر و کمتر شروع به رخ دادن کرد و تقریباً ناپدید شد. با این حال، در دهه 1960 و 1980 S.dysenteriaeدوباره در عرصه تاریخی ظاهر شد و باعث ایجاد یک سری اپیدمی شد که منجر به تشکیل سه کانون هیپرآندمیک آن - در آمریکای مرکزی، آفریقای مرکزی و جنوب آسیا (هند، پاکستان، بنگلادش و سایر کشورها) شد. دلایل تغییر در ترکیب گونه ای پاتوژن های اسهال خونی احتمالاً با تغییر همراه است مصونیت گلهو با تغییر در خواص باکتری های اسهال خونی. به ویژه، بازگشت S.dysenteriae 1و توزیع گسترده آن، که باعث تشکیل کانون های هیپرآندمیک اسهال خونی می شود، با کسب پلاسمیدهایی که باعث مقاومت چند دارویی و افزایش حدت می شود، همراه است.

ویژگی های پاتوژنز و کلینیک.دوره نهفتگی اسهال خونی 2 تا 5 روز و گاهی کمتر از یک روز است. تشکیل تمرکز عفونیدر غشای مخاطی قسمت نزولی روده بزرگ (سیگموئید و رکتوم)، جایی که عامل ایجاد کننده اسهال خونی نفوذ می کند، چرخه ای است: چسبندگی، کلونیزاسیون، ورود شیگلا به سیتوپلاسم انتروسیت ها، تولید مثل داخل سلولی، تخریب و دفع آنها. سلول های اپیتلیال، انتشار پاتوژن ها در لومن روده. پس از این، چرخه بعدی شروع می شود - چسبندگی، استعمار، و غیره. شدت چرخه ها به غلظت پاتوژن ها در لایه جداری غشای مخاطی بستگی دارد. در نتیجه چرخه های مکرر، کانون التهابی رشد می کند، زخم های ایجاد شده، اتصال، افزایش قرار گرفتن در معرض دیواره روده، در نتیجه خون، توده های مخاطی چرکی، لکوسیت های پلی مورفونوکلئر در مدفوع ظاهر می شوند. سیتوتوکسین ها (SLT-I و SLT-II) باعث تخریب سلولی، انتروتوکسین - اسهال، اندوتوکسین ها - مسمومیت عمومی می شوند. کلینیک اسهال خونی تا حد زیادی با توجه به اینکه چه نوع اگزوتوکسین به میزان بیشتری توسط پاتوژن تولید می شود، میزان اثر آلرژی زا و وضعیت ایمنیارگانیسم با این حال، بسیاری از سوالات در مورد پاتوژنز اسهال خونی بدون توضیح باقی می مانند: ویژگی های دوره اسهال خونی در کودکان دو سال اول زندگی، دلایل انتقال اسهال خونی حاد به مزمن، اهمیت حساسیت، مکانیسم مصونیت موضعی مخاط روده، و غیره تظاهرات بالینیاسهال خونی به عنوان اسهال عمل می کند، اصرارهای مکرر- در موارد شدید، تا 50 بار یا بیشتر در روز، تنسموس (اسپاسم دردناک راست روده) و مسمومیت عمومی. ماهیت مدفوع با درجه آسیب به روده بزرگ تعیین می شود. شدیدترین اسهال خونی ناشی از S.dysenteriae 1، راحت ترین - اسهال خونی سون.

ایمنی پس از عفونی. همانطور که مشاهدات روی میمون ها نشان داده است، پس از ابتلا به اسهال خونی، یک ایمنی قوی و نسبتا طولانی مدت باقی می ماند. این بیماری توسط آنتی بادی های ضد میکروبی، آنتی توکسین ها، افزایش فعالیت ماکروفاژها و لنفوسیت های T ایجاد می شود. نقش بسزایی دارد مصونیت موضعیمخاط روده با واسطه IgAs. با این حال، ایمنی ماهیت نوع خاصی دارد، ایمنی متقابل قوی رخ نمی دهد.

تشخیص آزمایشگاهی . روش اصلی باکتریولوژیک است. ماده مورد مطالعه مدفوع است. طرح جداسازی پاتوژن: تلقیح بر روی محیط های تشخیصی افتراقی اندو و پلوسکیرف (به موازات محیط غنی کننده و به دنبال آن تلقیح در محیط های اندو و پلوسکیرف) برای جداسازی کلنی های جدا شده، به دست آوردن فرهنگ نابمطالعه خواص بیوشیمیایی آن و با در نظر گرفتن مورد دوم شناسایی با استفاده از سرم های آگلوتینه کننده تشخیصی چند ظرفیتی و تک ظرفیتی. سرم های تجاری زیر تولید می شوند:

1. به شیگلا که مانیتول را تخمیر نمی کند: به S.dysenteriae 1 تا 2 S.dysenteriae 3-7(چند ظرفیتی و تک ظرفیتی)، به S.dysenteriae 8-12(چند ظرفیتی و تک ظرفیتی).

2. برای مانیتول تخمیر کننده شیگلا:

به آنتی ژن های معمولی S. flexneri I، II، III، IV، V، VI،

برای گروه بندی آنتی ژن ها S.flexneri 3، 4، 6،7،8- چند ظرفیتی،

به آنتی ژن ها S.boydii 1-18(چند ظرفیتی و تک ظرفیتی)

به آنتی ژن ها S. sonneiفاز اول، فاز دوم،

به آنتی ژن ها S.flexneri I-VI+ S.sonnei- چند ظرفیتی

برای تشخیص آنتی ژن ها در خون (از جمله به عنوان بخشی از CEC)، می توان از ادرار و مدفوع استفاده کرد. روش های زیر: RPHA، RSK، واکنش انعقادی (در ادرار و مدفوع)، IFM، RPHA (در سرم خون). این روش ها بسیار موثر، اختصاصی و برای تشخیص زودهنگام مناسب هستند.

برای تشخیص سرولوژیک می توان از: RPHA با مناسب استفاده کرد تشخیص گلبول های قرمز، روش ایمونوفلورسانس (در اصلاح غیر مستقیم)، روش کومبس (تعیین تیتر آنتی بادی های ناقص). ارزش تشخیصیهمچنین دارای یک آزمایش آلرژیک با اسهال خونی (محلولی از فراکسیون های پروتئینی شیگلا فلکسنر و سونه) است. واکنش پس از 24 ساعت در نظر گرفته می شود و در صورت وجود پرخونی و نفوذ به قطر 20-10 میلی متر مثبت در نظر گرفته می شود.

رفتار.تمرکز بر بازیابی حالت عادی است متابولیسم آب نمک, تغذیه منطقی، سم زدایی، آنتی بیوتیک درمانی منطقی (با در نظر گرفتن حساسیت پاتوژن به آنتی بیوتیک ها). اثر خوباستفاده زود هنگام از باکتریوفاژ دیسانتریک چند ظرفیتی، به ویژه قرص هایی با پوشش پکتین، که فاژ را از اثر آب معده HCl محافظت می کند. که در روده کوچکپکتین حل می شود، فاژها آزاد می شوند و عمل خود را نشان می دهند. برای اهداف پیشگیرانه، فاژ باید حداقل هر سه روز یک بار (دوره بقای آن در روده) داده شود.

مشکل پیشگیری خاصبرای ایجاد مصونیت مصنوعیواکسن های مختلفی علیه اسهال خونی استفاده شد: از باکتری های کشته شده، مواد شیمیایی، الکل، اما همه آنها ناکارآمد بودند و متوقف شدند. واکسن های ضد اسهال خونی فلکسنر از شیگلا فلکسنر زنده (جهش یافته، وابسته به استرپتومایسین) ایجاد شده است. واکسن های ریبوزومی، اما آنها نیز پیدا نکردند کاربرد گسترده. بنابراین، مشکل پیشگیری خاص از اسهال خونی حل نشده باقی مانده است. راه اصلی مبارزه با اسهال خونی، بهبود سیستم تامین آب و فاضلاب، اطمینان از رژیم های بهداشتی و بهداشتی سختگیرانه در شرکت های غذایی، به ویژه صنایع لبنی، در مراکز نگهداری از کودکان، اماکن عمومی و بهداشت شخصی است.

میکروبیولوژی وبا

وبا توسط WHO به عنوان یک بیماری مشخص می شود که با اسهال حاد، شدید و کم آب کننده آب برنج ناشی از عفونت با ویبریو کلرا مشخص می شود. با توجه به این واقعیت که با توانایی بارز در گسترش گسترده همه گیر مشخص می شود، دوره شدیدوبا مرگ و میر بالا یکی از خطرناک ترین عفونت هاست.

موطن تاریخی وبا هند است، به طور دقیق تر، دلتای رودخانه های گنگ و برهماپوترا (در حال حاضر هند شرقی و بنگلادش)، جایی که از زمان های بسیار قدیم وجود داشته است (اپیدمی های وبا در این منطقه از زمان مشاهده شده است. 500 سال قبل از میلاد). وجود طولانی کانون بومی وبا در اینجا با دلایل زیادی توضیح داده شده است. Vibrio cholerae نه تنها می تواند برای مدت طولانی در آب باقی بماند، بلکه در شرایط مساعد در آن نیز تکثیر شود - دمای بالای 12 درجه سانتیگراد، وجود مواد آلی. همه این شرایط در هند وجود دارد - آب و هوای گرمسیری (متوسط ​​دمای سالانه از +25 تا +29 درجه سانتیگراد)، بارش فراوان و باتلاقی، تراکم بالاجمعیت، به ویژه در دلتای گنگ، تعداد زیادی ازمواد آلی در آب، آلودگی مداوم آب در طول سال فاضلاب شهریو مدفوع، سطح پایین مادی زندگی و مناسک مذهبی و مذهبی خاص جمعیت.

عامل ایجاد کننده وبا ویبریوکلرادر سال 1883 افتتاح شد. در طول پنجمین بیماری همه گیر توسط R. Koch، با این حال، برای اولین بار، ویبریو در مدفوع بیماران مبتلا به اسهال در سال 1854 کشف شد. اف پاسینی.

V. choleraeمتعلق به خانواده است vibrionaceae،که شامل چندین جنس است (ویبریو، آئروموناس، پلزیوموناس، فوتوباکتریوم).جنس ویبریواز سال 1985 بیش از 25 گونه، که از آنها بالاترین ارزشبرای یک فرد دارند V.cholerae، V.parahaemolyticus، V.alginolyticus، dnificusو V.fluvialis.

ویژگی های کلیدی جنس ویبریو : کوتاه، بدون تشکیل هاگ و کپسول، میله های گرم منفی منحنی یا مستقیم، به قطر 0.5 میکرومتر، 1.5-3.0 میکرومتر طول، متحرک ( V. cholerae- یکنواخت، در برخی گونه ها دو یا چند تاژک قطبی؛ آنها به خوبی و به سرعت در محیط های معمولی، شیمی-ارگانوتروف ها، کربوهیدرات های تخمیر با تشکیل اسید بدون گاز رشد می کنند (گلوکز در طول مسیر Embden-Meyerhof تخمیر می شود). اکسیداز مثبت، تشکیل ایندول، کاهش نیترات به نیتریت (V.choleraeواکنش نیتروزو ایندول مثبت می دهد)، ژلاتین را تجزیه می کند، اغلب واکنش Voges-Proskauer مثبت می دهد (یعنی استیل متیل کربینول تشکیل می دهد)، اوره آز ندارد، H S تشکیل نمی دهد. لیزین و اورنیتین دکربوکسیلاز دارند، اما آرژنین ندارند. دی هیدرولاز

Vibrio cholerae برای مواد مغذی بسیار بی تکلف است. روی پپتون آب قلیایی 1% (pH 8.6-9.0) حاوی 0.5-1.0% NaCl به خوبی و به سرعت تکثیر می شود و از رشد سایر باکتری ها پیشی می گیرد. برای سرکوب رشد پروتئوس، اضافه کردن تلوریت پتاسیم 4 تا 1 درصد (PV) توصیه می شود (رقت نهایی 1:100000). 1% PV بهترین محیط غنی سازی برای V. cholerae است. در طول رشد، پس از 6-8 ساعت، یک لایه نازک خاکستری مایل به خاکستری روی سطح HP تشکیل می دهد که با تکان دادن به راحتی از بین می رود و به صورت ورقه ورقه به پایین می افتد، HP نسبتاً کدر می شود. برای جداسازی ویبریو کلرا، محیط های انتخابی مختلفی پیشنهاد شده است: آگار قلیایی، زرده نمک آگار، آلکالین آلبومینات، آگار قلیایی با خون، لاکتوز-ساکارز و سایر محیط ها. بهترین محیط TCBS (تیوسولفات سیترات-بروموتیمول ساکارز آگار) و تغییرات آن است. با این حال، MPA قلیایی بیشتر مورد استفاده قرار می گیرد، که روی آن ویبریو کلرا، مستعمراتی صاف، شفاف و زجاجیه با رنگ مایل به آبی، دیسکی شکل با قوام چسبناک تشکیل می دهد.

هنگام کاشت با تزریق در ستون ژلاتین، پس از 2 روز در دمای 22-23 درجه سانتی گراد، ویبریو به صورت حباب از سطح مایع شده و سپس قیفی شکل و در نهایت لایه به لایه می شود.

در شیر ویبریو به سرعت تکثیر می شود و پس از 48-24 ساعت باعث انعقاد می شود و سپس پپتونیزاسیون شیر اتفاق می افتد و پس از 3-4 روز به دلیل جابجایی PH شیر به سمت اسید ویبریو می میرد.

ب- هایبرگ با توجه به توانایی تخمیر مانوز، ساکارز و آرابینوز، تمام ویبریوها (وبا و شبه وبا) را به تعدادی گروه تقسیم کرد که تعداد آنها اکنون 8 است. ویبریوکلرا متعلق به گروه اول هایبرگ است.

ویبریوها که از نظر خصوصیات مورفولوژیکی، فرهنگی و بیوشیمیایی شبیه به وبا هستند، نامیده می شدند و به طور متفاوتی نامیده می شدند: پاراکلرا، شبه وبا، ویبریوهای NAG (ویبریوهای غیر آگلوتینه). ویبریوهایی که به گروه 01 تعلق ندارند. نام اخیر با دقت بیشتری بر رابطه آنها با وبا ویبریو تأکید می کند. همانطور که توسط A. Gardner و K. Venkatraman مشخص شد، وبا و ویبریوهای شبه وبا یک آنتی ژن H مشترک دارند، اما در آنتی ژن O متفاوت هستند. با توجه به آنتی ژن O، وبا و ویبریوهای شبه وبا در حال حاضر به 139 گروه سروگروه O تقسیم می شوند، اما تعداد آنها به طور مداوم دوباره پر می شود. Vibrio cholerae متعلق به گروه 01 است. دارای یک آنتی ژن A مشترک و دو آنتی ژن نوع خاص - B و C است که بر اساس آنها سه سروتیپ متمایز می شوند. V. cholerae- سروتیپ Ogawa (AB)، سروتیپ Inaba (AC) و سروتیپ Gikoshima (ABC). Vibrio cholerae در مرحله تجزیه دارای یک آنتی ژن OR است. به همین دلیل به منظور شناسایی V. choleraeسرم O، سرم OR و سرم های Inaba و Ogawa نوع خاص استفاده می شود.

عوامل بیماری زایی V. cholerae :

1. تحرک.

2. کموتاکسی. با کمک این خواص، ویبریو بر لایه مخاطی غلبه می کند و با سلول های اپیتلیال تعامل می کند. در موتانت‌های Che (که توانایی کموتاکسی را از دست داده‌اند)، حدت به شدت کاهش می‌یابد. بیماری‌زایی در موتانت‌های Mot (که تحرک خود را از دست داده‌اند) یا به طور کامل ناپدید می‌شوند یا 100-1000 برابر کاهش می‌یابند.

3. عوامل چسبندگی و کلونیزاسیون که با کمک آنها ویبریو به میکروویلی ها می چسبد و غشای مخاطی روده کوچک را کلونیزه می کند.

4. آنزیم ها: موسیناز، پروتئازها، نورآمینیداز، لسیتیناز و غیره.

آنها چسبندگی و استعمار را تقویت می کنند، زیرا مواد تشکیل دهنده مخاط را از بین می برند. نورآمینیداز، اسید سیالیک را از گلیکوپروتئین های اپیتلیال جدا می کند و یک پلت فرم "فرود" برای ویبریوها ایجاد می کند. علاوه بر این، تعداد گیرنده‌های کلروژن را با تغییر تری و دی‌سیالوگانگلیوزیدها به مونوسیالوگانگلیوزید Gm b که به عنوان گیرنده کلروژن عمل می‌کند، افزایش می‌دهد.

5. عامل اصلی بیماری زایی V. choleraeیک اگزوتوکسین-کلروژن است که پاتوژنز وبا را تعیین می کند. مولکول کلروژن دارای m.m. 84 کیلو دالتون و از دو قطعه - A و B تشکیل شده است. قطعه A از دو پپتید - A1 و A2 - تشکیل شده و دارای خاصیت خاص سم وبا است. قطعه B از 5 زیر واحد یکسان تشکیل شده است و دو عملکرد را انجام می دهد: 1) گیرنده (مونوسیالوگانگلیوزید) انتروسیت را می شناسد و به آن متصل می شود.

2) یک کانال آبگریز درون غشایی برای عبور زیرواحد A تشکیل می دهد. پپتید A 2 Sl برای پیوند قطعات A و B عمل می کند. پپتید A t عملکرد سمی خود را انجام می دهد. با NAD تعامل می کند، باعث هیدرولیز آن می شود، ADP-ribose حاصل به زیر واحد تنظیمی آدنیلات سیکلاز متصل می شود. این منجر به مهار هیدرولیز GTP می شود. ترکیب GTP + آدنیلات سیکلاز به دست آمده باعث هیدرولیز ATP با تشکیل cAMP می شود. (یک راه دیگر برای تجمع cAMP سرکوب آنزیمی توسط کلروژن است که cAMP را به 5-AMP هیدرولیز می کند).

6. ویبریو کلرا علاوه بر کلروژن، عاملی را سنتز و ترشح می کند که باعث افزایش نفوذپذیری مویرگی می شود.

7. اگزوتوکسین های دیگری نیز در V. cholerae یافت شده است، به ویژه انواع LT، ST و SLT.

8. اندوتوکسین. لیپوپلی ساکارید V. choleraeخاصیت اندوتوکسیک قوی دارد. او مسئول مسمومیت عمومی بدن و استفراغ است. آنتی بادی های تشکیل شده علیه اندوتوکسین دارای اثر ویبریوسیدال واضحی هستند (ویبریوها را در حضور مکمل حل می کنند) و جزء مهم ایمنی پس از عفونت و پس از واکسیناسیون هستند.

توانایی ویبریوهایی که به گروه 01 تعلق ندارند در ایجاد بیماری های اسهال پراکنده یا گروهی در انسان با حضور انتروتوکسین های نوع LT یا ST مرتبط است که به ترتیب سیستم های آدنیلات یا گوانیلات سیکلاز را تحریک می کنند.

سنتز کلروژن - مهمترین دارایی V. cholerae.ژن‌هایی که سنتز قطعات A و B کلروژن را کنترل می‌کنند در اپرون vctAB یا ctxB ترکیب می‌شوند؛ آنها روی کروموزوم ویبریو قرار دارند. برخی از سویه های ویبریو کلرا دارای دو اپرون غیر پشت سر هم هستند. عملکرد اپرون توسط دو ژن تنظیم کننده کنترل می شود. ژن toxR یک کنترل مثبت ایجاد می کند؛ جهش در این ژن منجر به کاهش 1000 برابری تولید سم می شود. ژن htx یک کنترل منفی است؛ جهش در این ژن تولید سم را 3 تا 7 برابر افزایش می دهد.

برای تشخیص کلروژن می توان از روش های زیر استفاده کرد:

1. آزمایشات بیولوژیکی روی خرگوش. با تجویز داخل روده ای ویبریوهای وبا به خرگوش های شیرخوار (با سن حداکثر 2 هفته)، آنها دچار یک سندرم کلروژنیک معمولی می شوند: اسهال، کم آبی بدن و مرگ خرگوش. در کالبد شکافی - تزریق تیز عروق معده و نازک
روده ها، گاهی اوقات یک مایع شفاف در آن جمع می شود. اما تغییرات در روده بزرگ به ویژه مشخص است - بزرگ شده و پر از مایع کاملاً شفاف و نی رنگ با پوسته ها و حباب های گاز است. هنگامی که V. cholerae در ناحیه بسته شده روده کوچک در خرگوش های بالغ تزریق می شود، همان تغییرات در روده بزرگ مانند عفونت خرگوش های شیرخوار مشاهده می شود.

2. تشخیص مستقیم کلروژن با استفاده از روش‌های ایمونوفلورسانس یا ایمونواسی آنزیمی یا واکنش همولیز ایمنی غیرفعال (کلروژن به Gm1 گلبول‌های قرمز متصل می‌شود و وقتی آنتی‌بادی‌های آنتی‌توکسیک و مکمل اضافه می‌شوند، لیز می‌شوند).

3. تحریک آدنیلات سیکلاز سلولی در کشت های سلولی.

4. استفاده از قطعه کروموزوم به عنوان پروب DNA V. choleraeاپرون کلروژن حامل

در طول همه گیری هفتم، سویه ها جدا شدند V. choleraeبا درجات مختلفحدت زایی: کلروژنیک (خارش زا)، کمی کلروژنیک (با حدت کم) و غیرکلروژنیک (غیر بیماریزا). غیر کلروژنیک V. choleraeبه عنوان یک قاعده، آنها دارای فعالیت همولیتیک هستند، توسط فاژ 5 تشخیصی وبا (HDF-5) لیز نمی شوند و باعث بیماری انسان نمی شوند.

برای تایپ فاژ V. cholerae(شامل V.eltor) S. Mukherjee مجموعه های مربوطه از فاژها را پیشنهاد کرد که سپس در روسیه با فاژهای دیگر تکمیل شد. مجموعه ای از این فاژها (1-7) امکان تمایز بین آنها را فراهم می کند V. cholerae 16 نوع فاژ HDF-3 به طور انتخابی ویبریو کلرا را لیز می کند نوع کلاسیک، HDF-4 - ویبریوهای El Tor و HDF-5 فقط ویبریوهای کلروژنیک (خارجی) از هر دو نوع را لیز می کند و ویبریوهای غیرکلروژنیک را لیز نمی کند.

کلروژن های ویبریو، به عنوان یک قاعده، فعالیت همولیتیک ندارند، توسط HDF-5 لیز می شوند و باعث ایجاد وبا در انسان می شوند.

مقاومت در برابر عوامل بیماری زا وبا Vibrio cholerae در دماهای پایین به خوبی زنده می مانند: آنها تا 1 ماه در یخ زنده می مانند. در آب دریا - تا 47 روز، در آب رودخانه - از 3-5 روز تا چند هفته، در آب پز آب معدنیماندگاری بیش از 1 سال، در خاک - از 8 روز تا 3 ماه، در مدفوع تازه - تا 3 روز، در غذاهای آب پز (برنج، رشته فرنگی، گوشت، غلات و غیره) 2-5 روز، در خام باقی می ماند. سبزیجات - 2-4 روز، در میوه ها - 1-2 روز، در شیر و محصولات لبنی - 5 روز؛ هنگامی که در سرما ذخیره می شود، دوره بقا 1-3 روز افزایش می یابد: روی کتانی آلوده به مدفوع، آنها تا 2 روز و در مواد مرطوب - یک هفته دوام می آورند. Vibrio cholerae در 80 درجه سانتیگراد پس از 5 دقیقه، در 100 درجه سانتیگراد - فوراً می میرد. بسیار حساس به اسیدها؛ تحت تأثیر کلرامین و سایر مواد ضد عفونی کننده در 5-15 دقیقه می میرند. آنها به خشک شدن و عمل مستقیم حساس هستند. اشعه های خورشیداما آنها به خوبی و به مدت طولانی حفظ می شوند و حتی در مخازن باز و فاضلاب های غنی از مواد آلی با pH قلیایی و دمای بالای 10-12 درجه سانتیگراد تکثیر می شوند. بسیار حساس به کلر: یک دوز کلر فعال 0.3-0.4 میلی گرم در لیتر آب در 30 دقیقه باعث ضد عفونی مطمئن از ویبریو وبا می شود.

ویژگی های اپیدمیولوژی. منبع اصلی عفونت فقط یک فرد است - یک بیمار مبتلا به وبا یا یک حامل ویبریو و همچنین آب آلوده به آنها. هیچ حیوانی در طبیعت به وبا مبتلا نمی شود. روش عفونت مدفوعی – دهانی است. راه های آلودگی: الف) اصلی - از طریق آبی که برای آشامیدن، استحمام و نیازهای خانگی استفاده می شود. ب) تماس با خانوار و ج) از طریق غذا. تمام اپیدمی های بزرگ و همه گیری های وبا ماهیت آبی داشتند. Vibrio cholerae دارای چنین مکانیسم های سازگاری است که وجود جمعیت آنها را هم در بدن انسان و هم در اکوسیستم های خاصی از آب های آزاد تضمین می کند. اسهال شدید ناشی از ویبریو کلرا روده ها را از باکتری های رقیب پاک می کند و به گسترش گسترده پاتوژن در محیط کمک می کند، در درجه اول در فاضلاب و آب های آزاد، جایی که آنها ریخته می شوند. فرد مبتلا به وبا پاتوژن را به داخل می ریزد تعداد زیادی- از 100 میلیون تا 1 میلیارد در هر 1 میلی لیتر مدفوع، حامل ویبریو 100-100000 ویبریو در هر 1 میلی لیتر آزاد می کند، دوز آلوده کننده حدود 1 میلیون ویبریو است. طول مدت جداسازی ویبریوکلرا در ناقلین سالم از 7 تا 42 روز و در افرادی که بیمار بوده اند 7 تا 10 روز است. انتشار طولانی تر بسیار نادر است.

یکی از ویژگی های وبا این است که پس از آن، به عنوان یک قاعده، حمل و نقل طولانی مدت وجود ندارد و کانون های بومی پایدار تشکیل نمی شوند. با این حال، همانطور که قبلا ذکر شد، به دلیل آلودگی آب های آزاد با فاضلاب حاوی مقادیر زیادی از مواد آلی، مواد شوینده و نمک سفره، در تابستان، ویبریو وبا در آنها نه تنها برای مدت طولانی زنده می ماند، بلکه حتی چند برابر می شود.

از اهمیت اپیدمیولوژیک زیادی برخوردار است که ویبریوکلراهای گروه 01، هم غیرسمی و هم سمی، می توانند برای مدت طولانی در انواع مختلف باقی بمانند. اکوسیستم های آبیبه شکل اشکال کشت نشده با کمک یک واکنش زنجیره ای پلیمراز با مطالعات باکتریولوژیک منفی در تعدادی از مناطق بومی CIS در آب های مختلف، ژن های دامپزشکی از اشکال کشت نشده پیدا شد. V. cholerae.

در صورت ابتلا به بیماری های وبا، مجموعه ای از اقدامات ضد اپیدمی انجام می شود که در میان آنها مهم و تعیین کننده فعال است. تشخیص به موقعو ایزوله ( بستری، درمان ) بیماران در حاد و فرم غیر معمولو حامل های ویبریو سالم؛ اقداماتی برای جلوگیری از راه های احتمالی انتشار عفونت انجام می شود. توجه ویژه ای به تامین آب (کلرزنی) می شود آب آشامیدنی) رعایت رژیم بهداشتی و بهداشتی در شرکت های مواد غذایی، موسسات کودکان، اماکن عمومی؛ کنترل دقیق، از جمله کنترل باکتریولوژیک، بر روی آب های آزاد انجام می شود، ایمن سازی جمعیت انجام می شود و غیره.

ویژگی های پاتوژنز و کلینیک. دوره نهفتگی وبا از ساعت بدون لغزش تا 6 روز و اغلب 3-2 روز متغیر است. هنگامی که در مجرای روده کوچک، Vibrio cholerae به دلیل تحرک و کموتاکسی به غشای مخاطی به مخاط فرستاده می شود. برای نفوذ به آن، ویبریوها تعدادی آنزیم تولید می کنند: نورآمینیداز، موسیناز، پروتئازها، لسیتیناز، برخی از آنها مواد موجود در مخاط را از بین می برند و حرکت ویبریوها را به سلول های اپیتلیال تسهیل می کنند. با چسبندگی، ویبریوها به گلیکوکالیکس اپیتلیوم متصل می شوند و با از دست دادن تحرک، شروع به تکثیر شدید می کنند، میکروویلی های روده کوچک را مستعمره می کنند و در همان زمان مقدار زیادی اگزوتوکسین-کلروژن تولید می کنند. مولکول های کلروژن به مونوسیالوگانگلیوزید Gm1 متصل می شوند و به غشای سلولی نفوذ می کنند، سیستم آدنیلات سیکلاز را فعال می کنند و cAMP تجمع یافته باعث ترشح بیش از حد مایع، کاتیون ها و آنیون های Na + , HCO 3 ~, K + , SG از انتروسیت ها می شود که منجر به diarrhealer ارگانیسم کم آبی و نمک زدایی سه نوع سیر بیماری وجود دارد:

1. بیماری اسهالی خشن و شدید کم آبی که منجر به مرگ بیمار در چند ساعت می شود.

2. کمتر شدید، یا اسهال بدون کم آبی.

3. سیر بدون علامت بیماری (ناقل ویبریو).

در وبا شدید، بیماران دچار اسهال می شوند، مدفوع بیشتر می شود، مدفوع فراوان می شود، حالت آبکی به خود می گیرد، بوی مدفوع خود را از دست می دهد و شبیه آب برنج می شود (مایع ابری با بقایای مخاطی شناور در آن و سلول های اپیتلیال). سپس استفراغ ناتوان کننده ابتدا با محتویات روده می پیوندد و سپس استفراغ به شکل آب برنج در می آید. دمای بیمار کمتر از حد طبیعی می شود، پوست سیانوتیک، چروکیده و سرد می شود - آلژید وبا. در نتیجه کم آبی، خون غلیظ می شود، سیانوز ایجاد می شود، گرسنگی اکسیژن، عملکرد کلیه به شدت آسیب می بیند، تشنج ظاهر می شود، بیمار هوشیاری خود را از دست می دهد و مرگ رخ می دهد. میزان مرگ و میر وبا در طول همه گیری هفتم از 1.5 درصد در کشورهای توسعه یافته تا 50 درصد در کشورهای در حال توسعه متغیر بود.

ایمنی پس از عفونیبیماری های بادوام، طولانی مدت و مکرر نادر هستند. ایمنی به دلیل آنتی بادی ها (آنتی توکسین ها بیشتر از آنتی بادی های ضد میکروبی باقی می مانند)، سلول های حافظه ایمنی و فاگوسیت ها، آنتی سمی و ضد میکروبی است.

تشخیص آزمایشگاهی.اصلی و روش تعیین کنندهتشخیص وبا باکتریولوژیک است. ماده برای تحقیق از بیمار مدفوع و استفراغ است. مدفوع برای حمل ارتعاش بررسی می شود. در افرادی که بر اثر وبا جان خود را از دست داده اند، یک بخش بسته شده از روده کوچک و کیسه صفرا برای تحقیق گرفته می شود. از اشیاء محیط خارجی، آب از مخازن باز و فاضلاب بیشتر مورد بررسی قرار می گیرد.

هنگام انجام یک مطالعه باکتریولوژیکی، سه شرط زیر باید رعایت شود:

1) در اسرع وقت مواد را از بیمار تلقیح کنید (ویبریو وبا در مدفوع باقی می ماند. کوتاه مدت);

2) ظروفی که در آن مواد مصرف می شود نباید با مواد شیمیایی ضد عفونی شوند و نباید دارای اثری از آنها باشند، زیرا ویبریو کلرا به آنها بسیار حساس است.

3) امکان آلودگی و عفونت دیگران را از بین ببرید.

در مواردی که وجود دارد V. choleraeنه گروه های 01، آنها باید با استفاده از سرم های آگلوتینه کننده مناسب از سایر سروگروپ ها تایپ شوند. ترشح از بیمار مبتلا به اسهال (از جمله وبا) V. choleraeگروه غیر 01 به همان اقدامات ضد اپیدمی مانند ایزوله نیاز دارد V. cholerae 01-گروه ها. در صورت لزوم، توانایی سنتز کلروژن یا وجود ژن های کلروژن در ویبریوکلراهای جدا شده با استفاده از پروب DNA با یکی از روش ها تعیین می شود.

تشخیص سرولوژیکی وبا ماهیت کمکی دارد. برای این منظور می توان از واکنش آگلوتیناسیون استفاده کرد، اما بهتر است تیتر آنتی بادی های ویبریوسیدال یا آنتی توکسین ها را تعیین کرد (آنتی بادی های کلروژن با روش ایمونواسی آنزیمی یا ایمونوفلورسانس تعیین می شوند).

رفتاربیماران مبتلا به وبا در درجه اول باید شامل آبرسانی مجدد و بازیابی متابولیسم طبیعی آب نمک باشند. برای این منظور، توصیه می شود از محلول های نمکی، به عنوان مثال، از ترکیب زیر استفاده کنید: NaCl - 3.5. NaHCO 3 - 2.5; KS1 - 1.5 و گلوکز - 20.0 گرم در هر 1 لیتر آب. چنین درمان هایی که از نظر پاتوژنتیکی ثابت شده است در ترکیب با درمان منطقی آنتی بیوتیکی می تواند مرگ و میر در وبا را تا 1٪ یا کمتر کاهش دهد.

پروفیلاکسی خاصبرای ایجاد مصونیت مصنوعی، واکسن های مختلفی پیشنهاد شده است، از جمله واکسن هایی که از سویه های کشته شده Inaba و Ogawa می باشند. توکسوئید کلروژن برای استفاده زیر جلدی و واکسن شیمیایی دو ظرفیتی روده، sos

تشخیص آزمایشگاهی دیسنتری، آمیبیاز و بالانتیدیازیس

در شرایط مدرن، در برخی موارد یا با طغیان‌های کانونی کوچک بیماری‌های روده، که اغلب با علائم نامشخص رخ می‌دهند، روش‌های تحقیق آزمایشگاهی از اهمیت عملی بالایی برخوردار است.

تحقیقات انجام شده برای اهداف تشخیصی باید با رعایت دقیق توصیه های تعیین شده و در اسرع وقت انجام شود.

مجموعه مدفوعبرای تحقیق، آنها را در ظروف تمیز (گلدان های شبانه، روتختی) که حاوی باقیمانده مواد ضد عفونی کننده نیستند قرار می دهند؛ مواد برای تحقیق از مخاط رکتوم با تامپون در طول سیگموئیدوسکوپی گرفته می شود.

برای تایید باکتریولوژیک تشخیص، بهتر است قبل از درمان با آنتی بیوتیک ها و سولفونامیدها از بیماران مبتلا به اسهال خونی مدفوع گرفته شود و بعد از درمان با این داروها ناقل باکتری مشخص شود.

کاشت روی ظروف پتری باید بلافاصله پس از گرفتن مواد انجام شود.

اول از همه، یک معاینه ماکروسکوپی مدفوع انجام می شود، در حالی که آنها می توانند: بقایای مواد غذایی - تکه های گوشت، باقی مانده های چربی، غذای گیاهیو ناخالصی های پاتولوژیک - مخاط با قوام چسبناک به شکل توده (در اسهال خونی شفاف نیست و در آمیبیاز شفاف است). خون بدون تغییر در اسهال خونی و ضایعه اولسراتیوقسمت پایین روده بزرگ با علت متفاوت و تغییر رنگ ("ژله تمشک") با آمیب، بالانتیدیا. چرک در اشکال شدید طولانی اسهال خونی تشخیص داده می شود.

بررسی میکروسکوپی مدفوع برای تشخیص عناصر سلولی خون، آمیب، بالانتیدیا و کیست های آنها استفاده می شود. آماده سازی بومی به شرح زیر تهیه می شود: یک توده مدفوع روی یک اسلاید شیشه ای و یک قطره محلول کلرید سدیم ایزوتونیک در کنار آن قرار می گیرد، مخلوط شده و با یک پوشش پوشانده می شود. برای رنگ آمیزی تک یاخته ها از محلول لوگول استفاده می شود.

برای تمایز عناصر سلولی خون، آماده سازی با رنگ Romanovsky-Giemsa یا لاجورد ائوزین درمان می شود. در اسهال خونی، آماده‌سازی تهیه‌شده از مخاط حاوی بسیاری از گرانولوسیت‌های نوتروفیل (بیش از 90 درصد کل عناصر سلولی)، گرانولوسیت‌های ائوزینوفیل منفرد (ائوزینوفیل) و مقدار متفاوتگلبول های قرمز؛ با آمیبیازیس، عناصر سلولی کمی وجود دارد، توده اصلی آنها سلول های تغییر یافته با هسته پیکنوز و لبه باریک پروتوپلاسم است. گرانولوسیت های ائوزینوفیل و کریستال های شارکو لیدن را پیدا کنید.

اشکال بافتی آمیب (Entamoeba histolytica) در یک آماده‌سازی بدون رنگ بی‌رنگ، متحرک (با کمک شبه‌پا)، در حالت کشیده به 50-60 میکرون می‌رسند، اغلب در آندوپلاسم با گلبول‌های قرمز و اطراف آن یافت می‌شوند. هسته. وجود گلبول های قرمز در سلول، تشخیص انتامبا هیستولوتیکا از اشکال غیر بیماری زا (E. hartmani، E. coli.) را ممکن می سازد.

شکل نیمه شفاف آمیب کوچکتر (تا 20 میکرون)، غیر فعال و فاقد گلبول های قرمز است. حتی کیست های کوچکتر (10-12 میکرون)، شکل گرد، بی حرکت؛ در مراحل اولیه رشد، آنها حاوی 2 هسته، و هسته های بالغ - 4. در آماده سازی های رنگ آمیزی شده با محلول لوگول، هسته آمیب و کیست های آنها قهوه ای روشن هستند (شکل 6).

بالانتیدیا(بالانتیدیوم کلی) - مژک داران بزرگ، گاهی اوقات به طول 200 میکرون و قطر 50-70 میکرون می رسد، متحرک، به دلیل وجود گل مژه، دارای دهانه (پریستوم) و مقعد (سیتوپیگوس) است. هسته های بزرگ (ماکرونوکلئوس) و کوچک (ریزانوکلئوس)، واکوئل ها، گلبول های قرمز دستگیر شده در آندوپلاسم قابل مشاهده هستند. کیست های بالانتیدیا بی حرکت، گرد، به قطر 50-60 میکرومتر، دارای یک غشای دو کانتور، در داخل آنها حاوی ماکرونوکلئوس و واکوئل هستند (شکل 7).

بررسی باکتریولوژیک مدفوع در اسهال خونی باسیلی بهتر است مدت کوتاهی پس از اجابت مزاج انجام شود، در حالی که شما باید از آخرین قسمت های مدفوع مواد (مخاط و چرک) بگیرید. مواد مورد آزمایش با یک حلقه روی ظروف پتری با محیط های انتخابی (Ploskirev، Ploskirev + levomycetin، Levin) تلقیح شده و به مدت 18-24 ساعت در ترموستات در دمای +37 درجه سانتیگراد قرار می گیرند. روز بعد، مشکوک (بی رنگ) کلنی ها بر روی محیط Ressel زیر کشت می شوند و لوله های آزمایش در یک ترموستات به مدت یک روز در دمای +370 درجه سانتیگراد قرار می گیرند. در روز سوم پس از دریافت کشت خالص، اسمیر برای میکروسکوپ و مطالعه تحرک آماده می شود (شیگلا بی حرکت هستند) . آنها واکنش آگلوتیناسیون را روی شیشه با سرم‌های نوع خاص قرار دادند، ابتدا با سرم‌ها در برابر انواع غالب در منطقه، و سپس برای تعیین روی یک ردیف "متنوع" بذر کردند. خواص بیوشیمیاییفرهنگ انتخاب شده

عوامل ایجاد کننده اسهال خونی لاکتوز و ساکارز را تخمیر نمی کنند (به جز Sonne)، گلوکز را تجزیه نمی کنند (به اسید تبدیل می کنند)، سولفید هیدروژن را تشکیل نمی دهند.

پاسخ نهایی در معاینه باکتریولوژیک در روز پنجم داده می شود. گاهی اوقات سویه‌های آتیپیک پاتوژن، کشت‌هایی که چسبندگی‌پذیری خود را از دست داده‌اند و با ویژگی‌های دیگر جدا می‌شوند. در چنین مواردی، مطالعات برای دوره های طولانی تری ادامه می یابد.

همچنین روش‌های باکتریولوژیک تسریع‌شده وجود دارد - کشت مجدد کلنی‌های مشکوک از ظروف پتری پس از 18 تا 20 ساعت از شروع مطالعه در 2 لوله آزمایش با محیط Ressel (آگار مایل با 1٪ لاکتوز و 0.1٪ گلوکز - در یک و 1٪ ساکارز و 0.1٪ مانیتول - در دیگری). پس از 4 ساعت، رشد کلنی ها ممکن است ظاهر شود، که از آنها اسمیر تهیه می شود، طبق گرم رنگ آمیزی می شود، تحرک مورد مطالعه قرار می گیرد و یک واکنش آگلوتیناسیون تقریبی با سرم در برابر شایع ترین عوامل بیماری زا در منطقه تنظیم می شود. بنابراین، در حال حاضر در روز دوم می توانید یک پاسخ اولیه بدهید. پاسخ نهایی در روز سوم پس از در نظر گرفتن نتایج کاشت در ردیف "واریگی" و واکنش دقیق آگلوتیناسیون داده می شود.

تلقیح پاتوژن های اسهال خونی همیشه یکسان نیست، به عوامل زیادی بستگی دارد - روش مصرف مواد برای تحقیق، کیفیت رسانه و دلایل دیگر، که یکی از آنها تعداد پاتوژن ها در واحد حجم مدفوع است. ثابت شده است که عوامل ایجاد کننده اسهال خونی در مواردی کاشته می شوند که حداقل صدها میلیون اجسام میکروبی در یک گرم مدفوع وجود داشته باشد. AT موارد نادرمی توان عامل ایجاد کننده اسهال خونی را از خون جدا کرد.

در حضور میکروسکوپ شب تاب، سرم های اختصاصی با فلوروکروم، روش فلورسانس مستقیم آنتی بادی ها به دانش آموزان نشان داده می شود.

همچنین امکان ایجاد واکنش آگلوتیناسیون با سرم خون و اطلاعات تشخیصی بیمار وجود دارد، اما تیتر آنتی بادی در بیماران مبتلا به اسهال خونی کم است و علاوه بر این، اغلب با پدیده پاراگلوتیناسیون مواجه می شود که دستیابی به آن را دشوار می کند. نتایج قابل اعتماد. واکنش هماگلوتیناسیون غیرمستقیم (IHA) با تشخیص استاندارد اریتروسیت حساس تر است. روش کمکیتحقیق یک آزمایش آلرژیک داخل جلدی با اسهال خونی به گفته D. A. Tsuverkalov است که پس از 24 ساعت با توجه به اندازه پاپول تشکیل شده در نظر گرفته می شود.

دستورالعمل روش شناسی برای دانش آموزان درس عملی شماره 28.

موضوع درس:

هدف: بررسی روش های تشخیص میکروبیولوژیک، درمان اتیوتروپیک و پیشگیری از شیگلوزیس.

ماژول 2 . میکروبیولوژی ویژه، بالینی و اکولوژیکی.

مبحث 5: روش های تشخیص میکروبیولوژیک اسهال خونی.

مرتبط بودن موضوع:شیگلوزیس در همه جا وجود دارد و در کشورهایی با سطح فرهنگی بهداشتی پایین و شیوع بالای سوء تغذیه و تغذیه نامناسب یک مشکل جدی ایجاد می کند. در کشورهای در حال توسعه، بهداشت نامناسب، بهداشت شخصی نامناسب، ازدحام بیش از حد، و نسبت بزرگی از کودکان در جمعیت، گسترش عفونت را مورد حمایت قرار می‌دهد. در اوکراین، شیوع شیگلوز در گروه های بسته در پس زمینه شایع تر است سطح پاییننظافت و بهداشت، به عنوان مثال، در مهدکودک ها و مهدکودک ها، در قایق های توریستی، در کلینیک های روانپزشکی یا پناهگاه های معلولان. شیگلا عامل اسهال مسافران و گردشگران بوده است.

علت بیماری های گروهی را می توان استفاده از محصولات غذایی آلوده به سهل انگاری کارگران صنف ناقل شیگلا دانست. شیوع هایی در ارتباط با استفاده از آب آشامیدنی وجود دارد و شنا در مخازن آلوده نیز منجر به عفونت می شود. با این حال، به نظر می رسد که راه های انتقال غذا و آب در مقایسه با وبا و تب حصبه که معمولاً به آن نیاز دارند، نقش کمتری در گسترش شیگلوز دارند. دوزهای بزرگعوامل بیماری زا در کشورهای در حال توسعه، که شیوع بیماری عمدتا از فرد به فرد است، ناقلین می توانند مخزن مهم عامل عفونی باشند. در بیمارانی که داروهای ضد باکتری مصرف نکرده اند، ریزش شیگلا در مدفوع معمولاً 14 هفته طول می کشد، اما در بخش کوچکی از موارد بسیار بیشتر طول می کشد.

شیگلوزیس یک عفونت باکتریایی حاد روده است که توسط یکی از چهار نوع شیگلا ایجاد می شود. طیف اشکال بالینی عفونت از اسهال خفیف و آبکی تا اسهال خونی شدید است که با کرامپ های شکمی، تنسموس، تب و علائم مسمومیت عمومی مشخص می شود.

اتیولوژی.

جنس Shigella (به نام K. Shiga، که در سال 1898 به طور مفصل مطالعه کرد و عامل جدا شده اسهال خونی باکتریایی را توسط A.V. Grigoriev توصیف کرد) از خانواده Enterobacteriaceae شامل گروهی از گونه های باکتریایی نزدیک به هم است که دارای خواص زیر:

من. ریخت شناسی: شیگلا - چوب های کوچکبا انتهای گرد آنها با سایر نمایندگان خانواده Enterobacteriaceae در فقدان تاژک (غیر متحرک) متفاوت هستند، اسپور و کپسول ندارند و گرم منفی هستند.

II. فرهنگی: شیگلا هوازی یا بی هوازی اختیاری است. شرایط بهینه کشت دمای 37 درجه سانتی گراد، pH 7.2-7.4. آنها بر روی محیط های غذایی ساده (MPA، MPB) به شکل کلنی های کوچک، براق، نیمه شفاف، خاکستری، گرد به اندازه 1.52 میلی متر رشد می کنند.اس فرم. استثنا شیگلای Sonne است که اغلب جدا می شود و کلونی های بزرگ، صاف، ابری و لبه های دندانه دار را تشکیل می دهد.آر شکل می گیرد (کلنی ها شبیه "برگ انگور" هستند). در محیط های غذایی مایع، شیگلا کدورت یکنواختی ایجاد می کند.آر تشکیل رسوب می دهد. محیط مایع غنی‌کننده براث سلنیت است.

III. آنزیمیویژگی های اصلی بیوشیمیایی لازم برای شناسایی شیگلا در جداسازی یک کشت خالص به شرح زیر است:

1. عدم تشکیل گاز در طی تخمیر گلوکز؛
2. عدم تولید سولفید هیدروژن؛
3. بدون تخمیر لاکتوز در 48 ساعت.

در مجموع، این چهار گونه بیشتر به حدود 40 سروتیپ تقسیم می شوند. با توجه به ویژگی های آنتی ژن های اصلی سوماتیک (O) و خواص بیوشیمیایی، چهار گونه یا گروه زیر متمایز می شوند: S. dysenteriae (گروه A، شامل: Grigoriev-Shigi، Stutzer-Schmitz، Large-Sachs)، S. flexneri. (گروه B)، S. boydii (گروه C) و S. sonnei (گروه D).

در رابطه با مانیتول، همه شیگلاها به مانیتول تقسیم شونده (فلکسنر، بوید، سون شیگلا) و غیر شکافنده (گریگوریف-شیگا، استوتزر-اشمیتز، شیگلای بزرگ ساکس) تقسیم می شوند.

IV. عوامل بیماری زا:

1. تهاجم پلاسمیدهاتوانایی شیگلا را برای ایجاد تهاجم با انتشار و تولید مثل بین سلولی بعدی در اپیتلیوم مخاط کولون فراهم می کند.
2. تشکیل سم: شیگلا دارای اندوتوکسین لیپوپلی ساکارید است که از نظر شیمیایی و بیوشیمیایی شبیه اندوتوکسین های سایر اعضای خانواده انتروباکتریاسه است. علاوه بر این، S. dysenteriae نوع I (باسیل شیگا) یک اگزوتوکسین تولید می کند. از زمان کشف دومی، مشخص شده است که دارای فعالیت انتروتوکسین است و می تواند باعث ترشح روده شود و همچنین دارای اثر سیتوتوکسیک علیه سلول های اپیتلیال روده باشد. ارائه می دهد اثر عصبیدر کودکان مبتلا به شیگلوز مشاهده شده است. سم شیگا، وارد شدن به خون، همراه با آسیب به اندوتلیوم زیر مخاطی، بر گلومرول های کلیه نیز تأثیر می گذارد، در نتیجه، علاوه بر اسهال خونی، سندرم اورمیک همولیتیک با ایجاد نارسایی کلیوی ایجاد می شود.

V. ساختار آنتی ژنی:همه شیگلاها دارای یک آنتی ژن O سوماتیک هستند که بسته به ساختار آن به سرووارها تقسیم می شوند.

VI. مقاومت:دما 100 0 C فوراً شیگلا را می کشد. شیگلا در برابر دماهای پایین مقاوم هستند آب رودخانهآنها تا 3 ماه، روی سبزیجات و میوه ها - تا 15 ماه ذخیره می شوند.در شرایط مساعد، شیگلا قابلیت تولید مثل در محصولات غذایی (سالاد، وینگرت، گوشت آب پز، گوشت چرخ کرده، ماهی آب پز، شیر و محصولات لبنی، کمپوت و ژله) به ویژه سون شیگلا را دارد.

همهگیرشناسی.

1. منبع عفونت:فردی که از اشکال حاد و مزمن شیگلوز رنج می برد. ناقل باکتری

2. راه های انتقال:

• غذا (عمدتا برای S. sonnei)
• آبزی (عمدتا برای S. flexneri)
• تماس با خانواده (عمدتا برای S. dysenteriae)

3. دروازه ورودیعفونت خدمت می کند دستگاه گوارش.

پاتوژنز و تغییرات پاتولوژیک.

پس از مصرف، شیگلا کلونیزه می شود بخش های بالاییروده کوچک و تکثیر در آنجا، احتمالا باعث افزایش ترشح در مرحله اولیهعفونت ها سپس شیگلا از طریق سلول‌های M به زیر مخاط نفوذ می‌کند و در آنجا توسط ماکروفاژها می‌بلعد. این منجر به مرگ برخی از شیگلا می شود و در نتیجه واسطه های التهابی آزاد می شود که باعث شروع التهاب در زیر مخاط می شود. آپوپتوز فاگوسیت ها به بخش دیگری از شیگلا اجازه زنده ماندن و نفوذ به سلول های اپیتلیال مخاط را می دهد. پوسته ی مقر اصلی. در داخل انتروسیت ها، شیگلا تکثیر شده و بین سلولی گسترش می یابد و در نتیجه فرسایش ایجاد می شود. هنگامی که شیگلا می میرد، شیگا و سموم شیگا مانند ترشح می شوند که عمل آنها منجر به مسمومیت می شود. شکست غشای مخاطی با تورم، نکروز و خونریزی همراه است که باعث ظاهر شدن خون در مدفوع می شود. علاوه بر این، این سم بر سیستم عصبی مرکزی تأثیر می گذارد که منجر به اختلالات تغذیه ای می شود.

تظاهرات بالینی.

طیف تظاهرات بالینی شیگلوز بسیار گسترده است از اسهال خفیف تا اسهال خونی شدید همراه با درد شکمی، تنسموس، تب و مسمومیت عمومی.

دوره نفهتگیاز چند ساعت تا 7 روز متغیر است، اغلب 2-3 روز است.در ابتدا بیماران دارند مدفوع آبکی، تب (تا 41 درجه سانتیگراد)، درد منتشر در شکم، تهوع و استفراغ. در کنار این موارد بیماران از درد عضلانی، لرز، کمردرد و سردرد. در روزهای آینده پس از شروع بیماری، علائم اسهال خونی ظاهر می شود - مدفوع تنسموس، مکرر، کم، مدفوع مخاطی خونی. دمای بدن به تدریج کاهش می یابد، درد می تواند در ربع تحتانی شکم موضعی شود. شدت اسهال در اواخر هفته اول بیماری به حداکثر می رسد. اسهال خونی همراه با مدفوع خونی شایع تر است و در بیماری ناشی از آن زودتر ظاهر می شود S. dysenteriae نوع I نسبت به سایر اشکال شیگلوزیس.

برای شیگلوزیس سون یک دوره خفیف تر بیماری مشخص است (نوعی معده و روده یا گاستروآنتروکولیتیک). دوره تب کوتاهتر است، اثرات مسمومیت کوتاه مدت است و تغییرات مخرب در مخاط روده معمولی نیست.

شیگلوز فلکسنراساساً دو نوع از دوره بالینی مشخص است - گاستروانتروکولیت و کولیت.

عوارض خارج روده ای در شیگلوزنادر:

1. یکی از عوارض شیگلوز می تواند ایجاد دیس باکتریوز روده باشد.
2. همراه با سردرد، ممکن است علائم مننژیت و تشنج تشنجی نیز وجود داشته باشد.
3. موارد نوروپاتی محیطی در عفونت S. dysenteriae نوع I و مواردی از سندرم Guillain-Barre (پلی‌نوریت) در طی شیوع گاستروانتریت S. boydii گزارش شده است.
4. به استثنای کودکان مبتلا به دیستروفی، انتشار هماتوژن پاتوژن نسبتا نادر است و مواردی از آبسه شیگلوزیس و مننژیت نیز شرح داده شده است.
5. با شیگلوز، ایجاد سندرم رایتر با آرتریت، ورم ملتحمه استریل و اورتریت ممکن است، این معمولا پس از 1-4 هفته از شروع اسهال در بیماران رخ می دهد.
6. در کودکان، شیگلوز با یک سندرم اورمیک همولیتیک همراه است که اغلب با واکنش‌های مشابه لوسمی، کولیت شدید و اندوتوکسین در گردش همراه است، اما باکتریمی معمولاً تشخیص داده نمی‌شود.
7. به ندرت، کراتوکونژونکتیویت چرکی ناشی از شیگلایی است که در اثر خود عفونت انگشتان آلوده وارد چشم شده است.
8. شوک هیپوولمیک و DIC.
9. پریتونیت، گانگرن روده، خونریزی روده.

مصونیت: انسان در برابر شیگلوز مقاومت طبیعی دارد. بعد از بیماری گذشتهایمنی پایدار نیست و پس از شیگلوز، Sonne عملاً وجود ندارد. با بیماری ناشی از Shigella Grigoriev Shigi، ایمنی ضد سمی پایدارتری ایجاد می شود. نقش اصلی در محافظت در برابر عفونت متعلق به ترشح است IgA جلوگیری از چسبندگی و فعالیت وابسته به آنتی بادی سیتوتوکسیک لنفوسیت های داخل اپیتلیال، که همراه با ترشح IgA شیگلا را بکش

تشخیص و تحقیقات آزمایشگاهی.

هدف از مطالعه: تشخیص و شناسایی شیگلا برای تشخیص تشخیص ناقلان باکتری؛ تشخیص شیگلا در غذاها

مطالب تحقیقی: فضولات، مواد مقطعی، مواد غذایی.

روش های تشخیصی:میکروبیولوژیک (باکتریولوژیک، میکروسکوپی (شوم آور)؛ سرولوژیکی، بیولوژیکی، تست آلرژی.

پیشرفت تحقیق:

1 روز مطالعه:کشت باید از مدفوع تازه دفع شده یا با استفاده از سواب رکتوم (لوله رکتوم) انجام شود. در صورت عدم وجود شرایط مناسب، مواد باید در محیط حمل و نقل قرار گیرند. برای این کار باید از آگار انتریک (مک کانکی یا شیگلا-سالمونلا محیط)، آگار زایلوز-لیزین-دئوکسی کولات نسبتا انتخابی، KLD و براث مواد مغذی (براث سلنیت) استفاده شود. اگر زمان بین جمع آوری و تلقیح بیش از 2 ساعت باشد، باید از محلول های نگهدارنده استفاده کرد: 20% آبگوشت صفرا، محیط ترکیبی کافمن.

• فضولات موجود در مخلوط گلیسیرین امولسیون می شوند، یک قطره از امولسیون روی محیط ریخته می شود و با یک کاردک مالیده می شود. محیط های افتراقی برای شیگلا محیط های Ploskirev، Endo و EMS (ائوزین متیلن بلو آگار) هستند. محیط Ploskirev (ترکیب محیط شامل: MPA، لاکتوز، نمک است اسیدهای صفراویو شاخص سبز درخشان) نیز یک رسانه انتخابی برای شیگلا است، زیرا رشد اشریشیا کلی را مهار می کند.
• به موازات کاشت مستقیم مواد جمع آوری شدهبذر روی محیط غنی‌کننده - براث سلنیت.
• همه محصولات در یک ترموستات قرار می گیرند.

روز دوم مطالعه:

• فنجان ها از ترموستات خارج می شوند، کلنی های مشکوک روی محیط Ressel's (محیط غذایی که شامل: آگار-آگار، اندیکاتور Andrede، 1٪ لاکتوز، 0.1٪ گلوکز) و مانیتول غربالگری می شوند. کاشت با ضربه های روی سطح شیبدار و تزریق به ستون آگار انجام می شود. محیط Ressel تلقیح شده به مدت 18-24 ساعت در ترموستات قرار می گیرد (به موازات آن، بذردهی مجدد از محیط سلنیت به محیط تشخیص افتراقی انجام می شود).
• تهیه اسمیر (رنگ آمیزی گرم)، میکروسکوپ.
• آماده سازی قطره "آویزان" یا "خرد شده" را آماده کنید.
• بیان RA نشان دهنده با سرم های شیگلوز تشخیصی چند ظرفیتی.
• کاشت کلنی های مشکوک روی شیب آگار.

روز سوم مطالعه:

• میکروسکوپ مواد مایل آگار.
• کشت هایی که لاکتوز را روی محیط Ressel تخمیر نکرده اند، تحت مطالعه بیشتر قرار می گیرند: اسمیر ساخته می شود (رنگ آمیزی گرم)، خلوص کشت بررسی می شود. در صورت وجود میله های گرم منفی، آنها را روی محیط کشت هیس، آبگوشت با کاغذهای شاخص (برای تشخیص ایندول و سولفید هیدروژن) و روی شیر تورنسل می کارند.
• محیط های تلقیح شده به مدت 18-24 ساعت در ترموستات قرار می گیرند.

روز چهارم مطالعه:

• حسابداری برای یک "سریال متنوع".
• کشت هایی که به دلیل خواص آنزیمی و فرهنگی خود در برابر شیگلا مشکوک هستند، در معرض شناسایی سرولوژیکی قرار می گیرند. بیان RA روی شیشه (سرم های تشخیصی معمولی و گروهی). راه اندازی RA مستقر شده.

مانند روش های تسریع شدهبرای شیگلوز استفاده می شودمیکروسکوپ فلورسانسو نمونه بیولوژیکی(ورود سویه های بدخیم شیگلا به کیسه ملتحمه (زیر پلک پایین) ملتحمه خوکچه هندی تا پایان روز اول ایجاد می شود).

تست آلرژی Zuverkalovتست آلرژی داخل جلدی با اسهال خونی (تعریف 0.1 میلی لیتر اسهال خونی در واکنش مثبت ساعد در صورت انفیلتراسیون و پرخونی). تشخیص آلرژی در حال حاضر عملا استفاده نمی شود. تست Tsurvekalov از نظر ویژگی تفاوتی ندارد، واکنش های مثبت نه تنها در شیگلوز، بلکه در سالمونلوز، اشریشیوز، یرسینیوز و سایر عفونت های حاد روده و گاهی اوقات در افراد سالم نیز ثبت می شود.

درمان و پیشگیری.باکتریوفاژ برای درمان و پیشگیری با توجه به نشانه های اپیدمیولوژیک استفاده می شود. تجویز خوراکیآنتی بیوتیک پس از تعیین آنتی بیوگرام; در صورت دیس باکتریوز، آماده سازی پروبیوتیک ها برای اصلاح میکرو فلورا. برای پر کردن از دست دادن مایعات و الکترولیت ها - معرفی محلول گلوکز-الکترولیت در داخل.

اهداف خاص:

خواص بیولوژیکی پاتوژن های شیگلوز را تفسیر کنید.

با طبقه بندی شیگلا آشنا شوید.

یاد بگیرید که الگوهای بیماری زایی فرآیند عفونی ناشی از شیگلا را تفسیر کنید.

تعیین روش های تشخیص میکروبیولوژیک، درمان اتیوتروپیک و پیشگیری از شیگلوز.

قادر بودن به:

• مواد مورد آزمایش را روی محیط های غذایی تلقیح کنید.
  • اسمیر و لکه گرم تهیه کنید.
  • انجام میکروسکوپ آماده سازی با استفاده از میکروسکوپ غوطه وری.
  • ویژگی های مورفولوژیکی، فرهنگی، آنزیمی شیگلا را تجزیه و تحلیل کنید.

سوالات نظری:

1. ویژگی های پاتوژن های شیگلوزیس. خواص بیولوژیکی

2. طبقه بندی شیگلا. اصول زیربنایی

3. اپیدمیولوژی، پاتوژنز و ویژگی های بالینیشیگلوز

4. تشخیص آزمایشگاهی.

5. اصول درمان و پیشگیری از شیگلوز.

کارهای عملی که در کلاس انجام می شود:

1. میکروسکوپ آماده سازی های نمایشی از کشت های خالص پاتوژن های شیگلوزیس.

2. کار بر روی تشخیص باکتریولوژیک شیگلوز: مطالعه کشت های مدفوع بر روی محیط Ploskirev.

3. زیر کشت کلنی های مشکوک بر روی محیط کشت Ressel و روی BCH برای تعیین تشکیل ایندول و H 2 اس.

4. ترسیم آماده سازی های نمایشی و طرح تشخیص میکروبیولوژیکی شیگلوز در پروتکل درس.

5. ثبت پروتکل.

ادبیات:

1. Korotyaev A.I.، Babichev S.A.، میکروبیولوژی پزشکی، ایمونولوژی و ویروس شناسی / کتاب درسی برای دانشگاه های پزشکی، سنت پترزبورگ "ادبیات ویژه"، 1998. - 592p.

2. تیماکوف V.D.، Levashev V.S.، Borisov L.B. میکروبیولوژی / کتاب درسی. - ویرایش دوم، بازبینی شده. و اضافی - M .: پزشکی، 1983، -512s.

3. پیاتکین ک.د. Krivoshein Yu.S. میکروب شناسی با ویروس شناسی و ایمونولوژی.- کیف: مدرسه In and shcha، 1992. - 431s.

4. میکروبیولوژی پزشکی / ویرایش شده توسط V.I. پوکروفسکی.-M.: GEOTAR-MED، 2001.-768s.

5. راهنمای به آموزش عملیدر میکروبیولوژی، ایمونولوژی و ویروس شناسی. اد. M.P. زیکوف م. "پزشکی". 1977. 288 ص.

6. Cherkes F.K., Bogoyavlenskaya L.B., Belskan N.A. میکروبیولوژی. / اد. F.K. چرکس. م.: پزشکی، 1986. 512 ص.

7. یادداشت های سخنرانی.

ادبیات اضافی:

1. Makiyarov K.A. میکروبیولوژی، ویروس شناسی و ایمونولوژی. آلما آتا، «قزاقستان»، 1974. 372 ص.

2. تیتوف ام.و. بیماری های عفونی. - ک.، 1995. 321s.

3. Shuvalova E.P. بیماری های عفونی. - م.: پزشکی، 1990. - 559 ص.

4. BME، جلد 1، 2، 7.

5. پاولوویچ اس.ا. میکروبیولوژی پزشکی در نمودارها: Proc. کمک هزینه پزشکی در رفیق من.: ویش. مدرسه، 1986. 255 ص.

مختصر دستورالعمل هابرای کار در جلسه عملی

در ابتدای درس میزان آمادگی دانش آموزان برای درس بررسی می شود.

کار مستقل شامل مطالعه طبقه بندی شیگلا، تجزیه و تحلیل طرح بیماری زایی و علائم بالینیشیگلوز بررسی روشهای تشخیص آزمایشگاهی شیگلوزیس. دانش آموزان کاشت مواد زیستی را روی محیط های غذایی انجام می دهند. سپس میکروپرپراتورها تهیه می شود، طبق گرم رنگ آمیزی می شوند، میکروسکوپ انجام می شود، میکروپرپراتورها ترسیم می شوند و توضیحات لازم داده می شود. ترکیب کار مستقل همچنین شامل میکروسکوپی از آماده سازی های نمایشی و ترسیم آنها در پروتکل درس است.

در پایان درس، کنترل تست و تجزیه و تحلیل نتایج نهایی کار مستقل هر دانش آموز انجام می شود.

نقشه فن آوری درس عملی.

p/n	مراحل	زمان در دقیقه	راه های یادگیری	تجهیزات	محل
	بررسی و تصحیح سطح اولیه آمادگی برای درس		وظایف تستخط پایه	جداول، اطلس	اتاق مطالعه
	کار مستقل		نمودار ساختار منطقی	میکروسکوپ غوطه‌وری، رنگ‌ها، اسلایدهای شیشه‌ای، حلقه‌های باکتریولوژیک، محیط‌های مغذی، محیط Ploskirev، محیط Ressel، "سری هیس متنوع"
	خود بررسیو تصحیح تسلط بر مطالب		وظایف یادگیری هدفمند
	کنترل تست		تست ها
	تجزیه و تحلیل نتایج کار

وظایف یادگیری هدفمند:

1. مدفوع از کودک مبتلا به عفونت حاد روده ای (جمع آوری مدفوع با لوله رکتوم انجام شد) حاوی مخاط و چرک تهیه شد. چه روش تشخیصی اکسپرس باید استفاده شود؟

آ. الایزا.

ب تپه دریایی.

سی. RA

D. RSK.

E. RIA.

1. عامل اسهال خونی از یک کودک بیمار مبتلا به عفونت حاد روده ای جدا شد. چه جور ویژگی های مورفولوژیکیویژگی پاتوژن؟

آ . میله غیر متحرک گرم منفی.

ب . میله متحرک گرم مثبت.

سی . یک کپسول روی یک محیط غذایی تشکیل می دهد.

D . در محیط خارجی هاگ تشکیل می دهد.

E . استرپتوباسیل های گرم مثبت

3. بیماری که سه روز پیش مریض شده و از دمای 38 درجه سانتیگراد، درد شکم، مکرر شکایت دارد. مدفوع مایعوجود خون در مدفوع، پزشک از نظر بالینی تشخیص داد اسهال خونی باسیلی. در این مورد از چه روشی برای تشخیص میکروبیولوژیک باید استفاده کرد و برای تایید تشخیص چه موادی باید از بیمار گرفته شود؟

A. باکتریوسکوپی کال.

B. باکتریولوژیک کال.

ج. خون باکتریوسکوپی.

د. ادرار باکتریولوژیک.

E. خون سرولوژیکی.

4. Shigella Sonne از مدفوع بیمار جدا شد. چه باید انجام شود تحقیقات اضافیبرای تعیین منبع عفونت؟

آ . تایپ فاژی کشت خالص جدا شده را انجام دهید.

ب . آنتی بیوگرام را تعیین کنید.

سی . واکنش بارش را تنظیم کنید.

D . واکنش تثبیت کمپلمان را تنظیم کنید.

E . یک واکنش خنثی سازی را تنظیم کنید.

5. از بین گروهی از گردشگران (27 نفر) که آب دریاچه را می نوشیدند، پس از دو روز، 7 نفر دچار علائم شدند. اسهال حاد. چه موادی برای ایجاد اتیولوژی این بیماریباید به آزمایشگاه فرستاده شود؟

الف- آب، مدفوع بیماران.

ب- آب، خون مریض.

ج. محصولات غذایی.

D. ادرار

E. بلغم.

6. اشکال مهم روش تشخیصی میکروسکوپی برای عفونت های حاد روده ای، محتوای اطلاعات ناکافی آن به دلیل هویت مورفولوژیکی باکتری های خانواده است.انتروباکتریاسه . چه چیزی این روش را آموزنده تر می کند؟

آ . رادیوایمونواسی

ب . واکنش کومبز

سی . سنجش ایمونوسوربنت مرتبط

D . واکنش اپسونیزاسیون

E . واکنش ایمونوفلورسانس.

7. یک بیمار 29 ساله با حملات استفراغ، اسهال و تنسموس در بیمارستان بستری شد. مدفوع با تکه های مخاط و مخلوطی از خون. بررسی باکتریولوژیک باکتری های مستعمرات در محیط Ploskirev، میله های بی حرکت و گرم منفی را نشان داد که لاکتوز را تخمیر نمی کنند. عامل ایجاد کننده فرآیند عفونی را نام ببرید.

آ. شیگلا فلکسنر.

ب ویبریو التور.

سی ای کولی.

D. Proteus mirabilis.

E. سالمونلا انتریتیدیس

8. یک عدد کاهو به آزمایشگاه میکروبیولوژی تحویل داده شد که مشکوک به حاد بودن آن است. عفونت روده. چه محیط های غذایی برای تلقیح اولیه استفاده می شود؟

آ . زرده نمک آگار، MPB.

ب MPA، MPB.

سی . آبگوشت سلنیت، اندو، پلوسکیروا.

D . آبگوشت جگر، چهارشنبه روکس.

E . آگار خون، آگار قلیایی.

9. در مطالعه میکروبیولوژیکی گوشت چرخ کرده، باکتری های متعلق به جنس شیگلا جدا شدند. بررسی چه خواصی از میکروب ها منجر به چنین نتیجه ای شد؟

آ . فرهنگی، رنگارنگ.

ب . آنتی ژنیک، فرهنگی.

سی . ساکارولیتیک، پروتئولیتیک.

D . آنتی ژنیک، ایمنی زا.

E . مورفولوژیک، آنتی ژنیک.

10. وقتی آزمایش میکروسکوپیاستفراغ گرفته شده از یک بیمار با علائم عفونت حاد روده، چوب های بی حرکت پیدا شد. در چه اسمیر یا آماده سازی می توان تحرک باکتری را بررسی کرد؟

آ . در یک اسمیر رنگ آمیزی گرم.

ب . در یک اسمیر رنگ آمیزی شده با توجه به Tsil - Nelsen.

سی . در آماده سازی "قطره ضخیم".

D . در یک اسمیر آغشته به نایسر.

E . در آماده سازی "قطره خرد شده".

الگوریتم کار آزمایشگاهی:

1. بررسی خواص بیولوژیکی شیگلا.

2. آشنایی با طبقه بندی شیگلا.

3. تجزیه و تحلیل طرح تظاهرات پاتوژنتیک و بالینی شیگلوز.

4. بررسی روش های تشخیص آزمایشگاهی شیگلوز.

5. مطالعه اصول اولیه درمان و پیشگیری از شیگلوز.

1. تهیه فرآورده های ثابت از کشت باکتری.
2. رنگ آمیزی ریز آماده سازیتوسط گرم
3. میکروسکوپ ریز آماده سازیبا با استفاده از میکروسکوپ غوطه وری، تحلیل و ترسیم آنها در پروتکل درس.
4. Mi کروموسکوپی و تجزیه و تحلیل آماده سازی های نمایشی از کشت های خالص شیگلا.
5. ترسیم آماده سازی های نمایشی و طرح تشخیص آزمایشگاهی شیگلوز در پروتکل.
6. تدوین پروتکل

اسهال خونی - این یک عفونت دردناک همراه با اسهال همراه با ترشح خون، چرک و مخاط، درد شکم و علائم مسمومیت عمومی است که با ضایعه غالب روده بزرگ ایجاد می شود. انواع متفاوتنوع شیگلا(باکتری های اسهال خونی).

عوامل ایجاد کننده اسهال خونی متعلق به بخش گراسیلیکوت، خانواده انتروباکتریاسه، نوع شیگلا.
اسهال خونی ، تماس گرفت شیگلا دیسانتری، شدیدتر از بیماری های ناشی از سایر شیگلا است، زیرا علاوه بر اندوتوکسین که باعث التهاب روده می شود، این نوع باکتری یک اگزوتوکسین قوی تولید می کند که به عنوان نوروتوکسین عمل می کند.

اسهال خونی باکتریایی شیگلوز یا شیگلوز یک بیماری عفونی است که توسط باکتری های این جنس ایجاد می شود شیگلا,

اسهال خونیمورفولوژی و خواص رنگی.
شیگلا - میله های گرم منفی با انتهای گرد، 2-3 میکرون طول، 0.5-7 میکرون ضخامت، تشکیل هاگ ندارند، تاژک ندارند، بی حرکت هستند. در بسیاری از سویه ها، پرزهای یک نوع عمومی و پیل تناسلی یافت می شوند. برخی از شیگلا دارای میکروکپسول هستند.

اسهال خونی کشت.
چوب های اسهال خونی بی هوازی اختیاری هستند. آنها نسبت به محیط های غذایی بی نیاز هستند، در دمای 37 درجه سانتیگراد و pH 7.2-7.4 به خوبی رشد می کنند. در رسانه های متراکم آنها کلنی های شفاف کوچک را تشکیل می دهند، در محیط های مایع - کدورت منتشر. آبگوشت سلنیت اغلب به عنوان یک محیط غنی‌کننده برای کشت شیگلا استفاده می‌شود.

اسهال خونیفعالیت آنزیمی
شیگلا نسبت به سایر انتروباکتری ها فعالیت آنزیمی کمتری دارد. آنها کربوهیدرات ها را با تشکیل اسید تخمیر می کنند. ویژگی مهمی که تمایز شیگلا را ممکن می‌سازد، ارتباط آنها با مانیتول است: S. dysenteriae مانیتول را تخمیر نمی‌کند، نمایندگان گروه‌های B، C، D مانیتول مثبت هستند. فعال ترین آنها از نظر بیوشیمیایی S. sonnei است که به آرامی (در عرض 2 روز) می تواند لاکتوز را تخمیر کند. بر اساس رابطه S. sonnei با رامنوز، زایلوز و مالتوز، 7 گونه بیوشیمیایی از آن متمایز می شود.

اسهال خونیساختار آنتی ژنیک
شیگلا دارای آنتی ژن O است، ناهمگنی آن باعث می شود سرووارها و زیر سرووارها در گروه ها متمایز شوند. در برخی از اعضای این جنس، آنتی ژن K یافت می شود.

اسهال خونیعوامل بیماری زایی
همه باسیل‌های دیسانتریک اندوتوکسین را تشکیل می‌دهند که دارای اثر آنتروتروپیک، نوروتروپیک و تب زا است. علاوه بر این، S. dysenteriae - Shigella Grigoriev-Shiga - یک اگزوتوکسین ترشح می کند که دارای اثر انتروتوکسیک، نوروتوکسیک، سیتوتوکسیک و نفروتوکسیک بر بدن است که بر این اساس متابولیسم آب نمک و فعالیت سیستم عصبی مرکزی را مختل می کند و منجر به مرگ می شود. سلول های اپیتلیال روده بزرگ، آسیب به لوله های کلیوی.

با تشکیل اگزوتوکسین، دوره شدیدتری از اسهال خونی ناشی از این پاتوژن همراه است. اگزوتوکسین می تواند توسط انواع دیگر شیگلا نیز ترشح شود. فاکتور نفوذپذیری RF کشف شده است که در نتیجه رگ های خونی تحت تأثیر قرار می گیرند. عوامل بیماری زا نیز شامل پروتئین تهاجمی، تسهیل نفوذ آنها به سلول های اپیتلیال، و همچنین پروتئین های پیلی و غشای خارجی مسئول چسبندگی، و یک میکروکپسول.

اسهال خونیمقاومت.
شیگلا مقاومت کمی در برابر عمل دارد عوامل مختلف. S. sonnei مقاومت بیشتری دارند که در آب لوله کشیتا 2.5 ماه ادامه دارد، در آب مخازن باز تا 1.5 ماه زنده می ماند. S. sonnei نه تنها می تواند برای مدت طولانی زنده بماند، بلکه در محصولات، به ویژه محصولات لبنی نیز تکثیر می شود.

اسهال خونیهمهگیرشناسی.
اسهال خونی یک عفونت آنتروپونوز است: منشا آن افراد بیمار و ناقلین است. مکانیسم انتقال عفونت ها مدفوعی-دهانی است. راه های انتقال می تواند متفاوت باشد - با اسهال خونی سون، مسیر غذا غالب است، با اسهال خونی فلکسنر - آب، برای اسهال خونی گریگوریف-شیگا، مسیر تماس با خانواده مشخص است.

اسهال خونی در بسیاری از کشورهای جهان یافت می شود. AT سال های گذشتهافزایش شدید در بروز این عفونت وجود دارد. افراد در هر سنی بیمار می شوند، اما کودکان 1 تا 3 ساله بیشتر مستعد ابتلا به اسهال خونی هستند. تعداد بیماران در جولای تا سپتامبر افزایش می یابد. انواع مختلف شیگلا به طور نابرابر در مناطق خاصی توزیع شده اند.

اسهال خونیپاتوژنز.
شیگلا از طریق دهان وارد دستگاه گوارش شده و به روده بزرگ می رسد. پاتوژن ها با داشتن تروپیسم برای اپیتلیوم خود، با کمک پیلی و پروتئین های غشای خارجی به سلول ها متصل می شوند. به لطف عامل مهاجم، آنها به داخل سلول ها نفوذ می کنند، در آنجا تکثیر می شوند و در نتیجه سلول ها می میرند.

زخم‌ها در دیواره روده ایجاد می‌شوند و در جای آن زخم‌ها تشکیل می‌شوند. اندوتوکسین که در طی تخریب باکتری ها ترشح می شود، باعث مسمومیت عمومی، افزایش تحرک روده و اسهال می شود. خون از زخم های تشکیل شده وارد مدفوع می شود. در نتیجه عمل اگزوتوکسین، نقض بارزتر متابولیسم آب نمک، فعالیت سیستم عصبی مرکزی و آسیب کلیه مشاهده می شود.

اسهال خونیتصویر بالینی.
دوره کمون از 1 تا 5 روز طول می کشد. این بیماری به طور حاد با افزایش دمای بدن به 38-39 درجه سانتیگراد شروع می شود، درد شکم، اسهال ظاهر می شود. مخلوطی از خون، مخاط در مدفوع یافت می شود. اسهال خونی گریگوریف-شیگا شدیدترین است.

اسهال خونیمصونیت.
پس از یک بیماری، ایمنی به گونه خاص و نوع خاص است. کوتاه مدت و ناپایدار است. اغلب این بیماری مزمن می شود. بیماری های مکرر حتی در یک فصل نیز مشاهده شد.

اسهال خونیآزمایشگاه تشخیصی
مدفوع بیمار به عنوان ماده آزمایش گرفته می شود. اساس تشخیص روش باکتریولوژیکی است که امکان شناسایی پاتوژن، تعیین حساسیت آن به آنتی بیوتیک ها، انجام شناسایی درون گونه ای (تعیین نوع بیوشیمیایی، سرووار یا کولیسینوژنووار) را فراهم می کند. با دوره طولانی اسهال خونی، می توان از آن به عنوان یک داروی کمکی استفاده کرد روش سرولوژیکی، شامل فرمولاسیون RA، RNHA (با افزایش تیتر آنتی بادی با فرمولاسیون مکرر واکنش، تشخیص را می توان تایید کرد).

اسهال خونیرفتار.
بیماران مبتلا به اشکال شدید گریگوریوا-شیش و اسهال خونی فلکسنر با آنتی بیوتیک درمان می شوند. دامنه ی وسیعاقدامات با در نظر گرفتن اجباری آنتی بیوگرام، زیرا در بین شیگلا اغلب نه تنها اشکال مقاوم به آنتی بیوتیک، بلکه وابسته به آنتی بیوتیک نیز وجود دارد. در اشکال خفیف اسهال خونی، از آنتی بیوتیک ها استفاده نمی شود، زیرا استفاده از آنها منجر به دیس باکتریوز می شود که تشدید می شود. فرآیند پاتولوژیکو اختلال در فرآیندهای بهبودی در غشای مخاطی روده بزرگ.

اسهال خونیجلوگیری.
تنها دارویی که می تواند در کانون های عفونت برای اهداف پیشگیری استفاده شود، باکتریوفاژ دیسانتریک است. نقش اصلی توسط پروفیلاکسی غیر اختصاصی ایفا می شود.

پیشگیری غیر اختصاصی ترتیب بهداشتی و بهداشتی مناسب زندگی مردم را فراهم می کند و آب و غذای باکیفیت را برای آنها تامین می کند.

در محیط بیمار باید اقداماتی برای جلوگیری از گسترش عامل بیماری زا انجام شود.

میکروبیولوژی اسهال خونی

اسهال خونی یک بیماری عفونی است که با مسمومیت عمومی بدن، اسهال و ضایعه عجیب غشای مخاطی روده بزرگ مشخص می شود. یکی از شایع ترین بیماری های حاد روده ای در جهان است. این بیماری از زمان های قدیم تحت عنوان "اسهال خونی" شناخته شده است، اما ماهیت آن متفاوت است. در سال 1875، دانشمند روسی F. A. Lesh یک آمیب را از یک بیمار مبتلا به اسهال خونی جدا کرد. انتامبا هیستولیتیکا، در 15 سال بعد استقلال این بیماری ایجاد شد که نام آمیبیازیس برای آن حفظ شد.

عوامل ایجاد کننده اسهال خونی گروه بزرگی از باکتری های مشابه بیولوژیکی هستند که در این جنس متحد شده اند. شیگلا. پاتوژن اولین بار در سال 1888 توسط A. Chantemes و F. Vidal کشف شد. در سال 1891 توسط A. V. Grigoriev شرح داده شد و در سال 1898، K. Shiga با استفاده از سرمی که از یک بیمار دریافت کرد، عامل بیماری زا را در 34 بیمار مبتلا به اسهال خونی شناسایی کرد و در نهایت نقش اتیولوژیکی این باکتری را ثابت کرد. با این حال، در سال های بعدی، سایر عوامل ایجاد کننده اسهال خونی نیز کشف شد: در سال 1900 - توسط S. Flexner، در سال 1915 - توسط K. Sonne، در سال 1917 - توسط K. Stutzer و K. Schmitz، در سال 1932 - توسط J. Boyd. ، در 1934 - توسط D. Large، در 1943 - توسط A. Sachs. در حال حاضر جنس شیگلاشامل بیش از 40 سروتیپ است. همه آنها میله های گرم منفی بی حرکت کوتاهی هستند که هاگ و کپسول تشکیل نمی دهند، که به خوبی در محیط های غذایی معمولی رشد می کنند، در محیط گرسنگی با سیترات یا مالونات به عنوان تنها منبع کربن رشد نمی کنند. H 2 S تشکیل نمی دهند، اوره آز ندارند. واکنش Voges-Proskauer منفی است. گلوکز و برخی دیگر از کربوهیدرات ها برای تشکیل اسید بدون گاز تخمیر می شوند (به جز برخی از بیوتیپ ها) شیگلا فلکسنر: اس. منچسترو اس نیوکاسل) به عنوان یک قاعده، لاکتوز (به استثنای شیگلا سون)، آدونیت، سالیسین و اینوزیتول را تخمیر نکنید، ژلاتین را مایع نکنید، معمولاً کاتالاز تشکیل می‌دهند، لیزین دکربوکسیلاز و فنیل آلانین دآمیناز ندارند. محتوای G + C در DNA 49 - 53 مول است. شیگلا بی هوازی اختیاری است، دمای مطلوب برای رشد 37 درجه سانتیگراد است، آنها در دمای بالاتر از 45 درجه سانتیگراد رشد نمی کنند، pH بهینه محیط 6.7 - 7.2 است. مستعمرات در محیط های متراکم گرد، محدب، نیمه شفاف هستند؛ در صورت تفکیک، کلنی های R شکل خشن تشکیل می شوند. رشد روی BCH به شکل یک کدورت یکنواخت، اشکال خشن یک رسوب را تشکیل می دهند. کشت‌های تازه جدا شده از Sonne Shigella معمولاً کلنی‌هایی از دو نوع تشکیل می‌دهند: محدب گرد کوچک (فاز I)، مسطح بزرگ (فاز II). ماهیت کلنی به حضور (فاز I) یا عدم حضور (فاز II) پلاسمید با m.m. 120 MD بستگی دارد، که همچنین حدت شیگلا سون را تعیین می کند.

طبقه‌بندی بین‌المللی شیگلا با در نظر گرفتن ویژگی‌های بیوشیمیایی آن‌ها (مانیتول-غیر تخمیرکننده، مانیتول تخمیرکننده، شیگلا با تخمیر آهسته لاکتوز) و ویژگی‌های ساختار آنتی ژنی آنها ساخته شده است (جدول 37).

آنتی‌ژن‌های O با ویژگی‌های متفاوت در شیگلا یافت شد: مشترک برای خانواده انتروباکتریاسهژنریک، گونه، گروه و نوع خاص، و همچنین آنتی ژن K. آنها آنتی ژن H ندارند.

جدول 37

طبقه بندی باکتری های جنس شیگلا

طبقه بندی فقط آنتی ژن های O گروه و نوع خاص را در نظر می گیرد. با توجه به این ویژگی ها، شیگلابه 4 زیر گروه یا 4 گونه تقسیم می شود و شامل 44 سروتیپ است. در زیر گروه A (گونه شیگلا دیسانتری) شامل شیگلایی است که مانیتول را تخمیر نمی کند. این گونه شامل 12 سروتیپ (1 - 12) است. هر سروتیپ آنتی ژن نوع خاص خود را دارد. روابط آنتی ژنی بین سروتیپ ها، و همچنین با سایر انواع شیگلا، ضعیف بیان می شود. به زیر گروه B (نوع شیگلا فلکسنر) شامل شیگلا است که معمولاً مانیتول تخمیر کننده است. شیگلای این گونه از نظر سرولوژیکی به یکدیگر مرتبط هستند: آنها حاوی آنتی ژن های نوع خاص (I - VI) هستند که بر اساس آن به سروتیپ های (1-6) و آنتی ژن های گروهی تقسیم می شوند که در ترکیبات مختلف در هر سروتیپ یافت می شوند. و بر اساس آن سروتیپ ها به زیر سروتیپ ها تقسیم می شوند. علاوه بر این، این گونه شامل دو نوع آنتی ژنی X و Y است که آنتی ژن های معمولی ندارند؛ آنها در مجموعه ای از آنتی ژن های گروه متفاوت هستند. سروتیپ S. flexneri 6زیرسروتیپ ندارد، اما با توجه به ویژگی های تخمیر گلوکز، مانیتول و دولسیت به 3 نوع بیوشیمیایی تقسیم می شود (جدول 38).

جدول 38

بیوتیپ ها S. flexneri 6

توجه داشته باشید. K - تخمیر تنها با تشکیل اسید. KG - تخمیر با تشکیل اسید و گاز؛ (-) - بدون تخمیر.

آنتی ژن لیپوپلی ساکارید O در تمام شیگلا فلکسنر حاوی آنتی ژن گروه 3، 4 به عنوان ساختار اولیه اصلی است، سنتز آن توسط یک ژن کروموزومی که در نزدیکی محل قرار دارد کنترل می شود. آنتی ژن های نوع خاص I، II، IV، V و آنتی ژن های گروه 6، 7، 8 نتیجه اصلاح آنتی ژن های 3، 4 (گلیکوزیلاسیون یا استیلاسیون) هستند و توسط ژن های پروفاژهای تبدیل کننده مربوطه، محل ادغام تعیین می شوند. که در ناحیه lac - pro کروموزوم شیگلا قرار دارد.

در دهه 80 در خاک کشور ظاهر شد. قرن 20 و یک زیرسروتیپ جدید که به طور گسترده استفاده می شود S. flexneri 4(IV: 7، 8) با زیرسروتیپ 4a (IV: 3، 4) و 4b (IV: 3، 4، 6) متفاوت است، برخاسته از نوع S. flexneri Y(IV: 3، 4) به دلیل لیزوژن شدن توسط پروفاژهای تبدیل کننده آن IV و 7، 8.

به زیر گروه C (نوع شیگلا بویدی) شامل شیگلا است که معمولاً مانیتول تخمیر کننده است. اعضای گروه از نظر سرولوژیکی از یکدیگر متمایز هستند. روابط آنتی ژنی در گونه ضعیف بیان می شود. این گونه شامل 18 سروتیپ (1 تا 18) است که هر کدام آنتی ژن نوع اصلی خود را دارند.

در زیر گروه D (گونه شیگلا سونئی) شامل شیگلا است که معمولاً مانیتول را تخمیر می کند و می تواند به آرامی (پس از 24 ساعت انکوباسیون و بعد) لاکتوز و ساکارز را تخمیر کند. چشم انداز S. sonneiشامل یک سروتیپ است، با این حال، کلنی های فاز I و II آنتی ژن های نوع خاص خود را دارند. دو روش برای طبقه بندی درون گونه ای شیگلای Sonne پیشنهاد شده است:

1) تقسیم آنها به 14 نوع و زیرگروه بیوشیمیایی با توجه به توانایی آنها در تخمیر مالتوز، رامنوز و زایلوز. 2) تقسیم به انواع فاژ بر اساس حساسیت به مجموعه ای از فاژهای مربوطه.

این روش های تایپ عمدتاً دارای اهمیت اپیدمیولوژیک هستند. علاوه بر این، شیگلای Sonne و شیگلای Flexner با توانایی سنتز کولیسین های خاص (colicinogenotyping) و با حساسیت به کولیسین های شناخته شده (colicinotyping) در معرض تایپ برای همان هدف قرار می گیرند. برای تعیین نوع کولیسین های تولید شده توسط شیگلا، J. Abbott و R. Shannon مجموعه ای از سویه های معمولی و شاخص شیگلا و برای تعیین حساسیت شیگلا به انواع شناخته شده کولیسین ها، مجموعه ای از سویه های colicinogenic مرجع توسط P. Frederick پیشنهاد کردند. استفاده می شود.

مقاومت.شیگلا مقاومت نسبتا بالایی در برابر عوامل محیطی دارد. آنها روی پارچه پنبه ای و روی کاغذ تا 30-36 روز زنده می مانند، در مدفوع خشک - تا 4-5 ماه، در خاک - تا 3-4 ماه، در آب - از 0.5 تا 3 ماه، روی میوه ها و سبزیجات - تا 2 هفته، در شیر و محصولات لبنی - تا چند هفته؛ در دمای 60 درجه سانتیگراد در 15 تا 20 دقیقه می میرند. حساس به محلول های کلرامین، کلر فعال و سایر مواد ضد عفونی کننده.

عوامل بیماری زاییمهمترین خاصیت بیولوژیکی شیگلا که مشخص کننده بیماری زایی آنهاست، توانایی حمله به سلول های اپیتلیال، تکثیر در آنها و مرگ آنها است. این اثر را می توان با استفاده از آزمایش قوز قرنیه تشخیص داد (معرفی یک حلقه از کشت شیگلا (2 تا 3 میلیارد باکتری) در زیر پلک تحتانی خوکچه هندی باعث ایجاد کراتوکونژونکتیویت چرکی سروزی می شود) و همچنین با عفونت سلولی. کشت (اثر سیتوتوکسیک) یا جنین مرغ (مرگ آنها) یا داخل بینی در موش سفید (توسعه پنومونی). عوامل اصلی بیماری زایی شیگلا را می توان به سه گروه تقسیم کرد:

1) عواملی که تعامل با اپیتلیوم غشای مخاطی را تعیین می کند.

2) عواملی که مقاومت در برابر مکانیسم های دفاعی هومورال و سلولی ماکرو ارگانیسم و ​​توانایی شیگلا برای تکثیر در سلول های آن را ایجاد می کنند.

3) توانایی تولید سموم و محصولات سمی که توسعه فرآیند پاتولوژیک واقعی را تعیین می کند.

گروه اول شامل عوامل چسبندگی و کلونیزاسیون است: نقش آنها توسط پیلی، پروتئین های غشای خارجی و LPS ایفا می شود. آنزیم های تخریب کننده مخاط مانند نورآمینیداز، هیالورونیداز و موسیناز باعث افزایش چسبندگی و کلونیزاسیون می شوند. گروه دوم شامل عوامل تهاجم است که باعث نفوذ شیگلا به انتروسیت ها و تولید مثل آنها در آنها و در ماکروفاژها با تظاهرات همزمان یک اثر سیتوتوکسیک و (یا) انتروتوکسیک می شود. این ویژگی‌ها توسط ژن‌های پلاسمید با m.m. 140 MD (که سنتز پروتئین‌های غشای خارجی را که باعث تهاجم می‌شوند کد می‌کند) و ژن‌های کروموزومی شیگلا کنترل می‌شوند: kcp A (باعث کراتوکونژونکتیویت)، cyt (مسئول تخریب سلولی)، و همچنین ژن های دیگر که هنوز شناسایی نشده اند. محافظت از شیگلا در برابر فاگوسیتوز توسط آنتی ژن K سطحی، آنتی ژن های 3، 4 و لیپوپلی ساکارید انجام می شود. علاوه بر این، لیپید A اندوتوکسین شیگلا دارای اثر سرکوب کننده سیستم ایمنی است: فعالیت سلول های حافظه ایمنی را سرکوب می کند.

گروه سوم از عوامل بیماری زایی شامل اندوتوکسین و دو نوع اگزوتوکسین موجود در شیگلا - اگزوتوکسین های شیگا و اگزوتوکسین های شبه شیگا (SLT-I و SLT-II) است که خواص سیتوتوکسیک آنها بیشتر در S. dysenteriae 1. سموم شیگا و شیگا مانند در سروتیپ های دیگر نیز یافت می شود S. dysenteriae، آنها نیز تشکیل می شوند S. flexneri، S. sonnei، S. boydii، EHEC و مقداری سالمونلا. سنتز این سموم توسط ژن های سمی فاژهای تبدیل کننده کنترل می شود. انتروتوکسین های نوع LT در Flexner، Sonne و Boyd Shigella یافت شده است. سنتز LT در آنها توسط ژن های پلاسمید کنترل می شود. انتروتوکسین فعالیت آدنیلات سیکلاز را تحریک می کند و مسئول ایجاد اسهال است. شیگا توکسین یا نوروتوکسین با سیستم آدنیلات سیکلاز واکنش نمی دهد، اما اثر سیتوتوکسیک مستقیم دارد. سموم شیگا و شیگا مانند (SLT-I و SLT-II) دارای MW 70 کیلو دالتون هستند و از زیر واحدهای A و B تشکیل شده اند (آخرین زیر واحد از 5 زیر واحد کوچک یکسان). گیرنده سموم گلیکولیپید غشای سلولی است.

حدت Shigella Sonne به پلاسمید با m.m 120 MD نیز بستگی دارد. این ماده سنتز حدود 40 پلی پپتید غشای خارجی را کنترل می کند که هفت مورد از آنها با بیماری زاست. شیگلا سون با این پلاسمید کلنی های فاز I را تشکیل می دهد و بدخیم است. کشت هایی که پلاسمید را از دست داده اند، مستعمرات فاز II را تشکیل می دهند و فاقد حدت هستند. پلاسمیدهایی با m.m 120 - 140 MD در شیگلا فلکسنر و بوید یافت شد. لیپوپلی ساکارید شیگلا یک اندوتوکسین قوی است.

ویژگی های اپیدمیولوژیتنها منبع عفونت انسان است. هیچ حیوانی در طبیعت به اسهال خونی مبتلا نمی شود. در شرایط تجربی، اسهال خونی فقط در میمون ها قابل تکثیر است. روش عفونت مدفوعی – دهانی است. راه های انتقال - آب ( غالب برای شیگلا فلکسنر ) ، غذا به ویژه نقش مهمی متعلق به شیر و لبنیات (مسیر غالب آلودگی برای شیگلا سون) و تماس با خانوار مخصوصاً برای گونه است. S. dysenteriae.

یکی از ویژگی های اپیدمیولوژی اسهال خونی تغییر در ترکیب گونه ای پاتوژن ها و همچنین بیوتیپ های Sonne و سروتیپ های فلکسنر در مناطق خاص است. مثلاً تا پایان دهه 1930 قرن 20 برای به اشتراک گذاشتن S. dysenteriae 1 30 تا 40 درصد از کل موارد اسهال خونی را تشکیل می دهد و سپس این سروتیپ کمتر و کمتر شروع به رخ دادن کرد و تقریباً ناپدید شد. با این حال، در دهه 1960 - 1980. S. dysenteriaeدوباره در عرصه تاریخی ظاهر شد و باعث ایجاد یک سری اپیدمی شد که منجر به تشکیل سه کانون هیپرآندمیک آن - در آمریکای مرکزی، آفریقای مرکزی و جنوب آسیا (هند، پاکستان، بنگلادش و سایر کشورها) شد. دلایل تغییر در ترکیب گونه ای پاتوژن های اسهال خونی احتمالاً با تغییر در ایمنی جمعی و با تغییر در خواص باکتری های اسهال خونی مرتبط است. به ویژه، بازگشت S. dysenteriae 1و توزیع گسترده آن، که باعث تشکیل کانون های هیپرآندمیک اسهال خونی می شود، با کسب پلاسمیدهایی که باعث مقاومت چند دارویی و افزایش حدت می شود، همراه است.

ویژگی های پاتوژنز و کلینیک.دوره نهفتگی اسهال خونی 2 تا 5 روز و گاهی کمتر از یک روز است. تشکیل کانون عفونی در غشای مخاطی قسمت نزولی روده بزرگ (سیگموئید و رکتوم)، جایی که عامل ایجاد کننده اسهال خونی در آن نفوذ می کند، چرخه ای است: چسبندگی، کلونیزاسیون، ورود شیگلا به سیتوپلاسم انتروسیت ها، آنها تولید مثل داخل سلولی، تخریب و رد سلول های اپیتلیال، انتشار پاتوژن ها به روده های لومن. پس از این، چرخه بعدی شروع می شود - چسبندگی، استعمار، و غیره. شدت چرخه ها به غلظت پاتوژن ها در لایه جداری غشای مخاطی بستگی دارد. در نتیجه چرخه های مکرر، کانون التهابی رشد می کند، زخم های ناشی از اتصال، قرار گرفتن در معرض دیواره روده را افزایش می دهد، در نتیجه خون، توده های مخاطی چرکی و لکوسیت های پلی مورفونوکلئر در مدفوع ظاهر می شوند. سیتوتوکسین ها (SLT-I و SLT-II) باعث تخریب سلولی، انتروتوکسین - اسهال، اندوتوکسین ها - مسمومیت عمومی می شوند. کلینیک اسهال خونی تا حد زیادی با توجه به اینکه چه نوع اگزوتوکسین به میزان بیشتری توسط پاتوژن تولید می شود، میزان اثر آلرژی زا آن و وضعیت ایمنی ارگانیسم تعیین می شود. با این حال، بسیاری از مسائل مربوط به پاتوژنز اسهال خونی غیر قابل توضیح باقی مانده است، به ویژه: ویژگی های دوره اسهال خونی در کودکان دو سال اول زندگی، دلایل انتقال اسهال خونی حاد به مزمن، اهمیت حساسیت، مکانیسم مصونیت موضعی مخاط روده و غیره. معمول ترین تظاهرات بالینی اسهال خونی اسهال، هوس های مکرر است: در موارد شدید تا 50 بار یا بیشتر در روز، تنسموس (اسپاسم دردناک رکتوم) و مسمومیت عمومی. ماهیت مدفوع با درجه آسیب به روده بزرگ تعیین می شود. شدیدترین اسهال خونی ناشی از S. dysenteriae 1، راحت ترین - اسهال خونی سون.

ایمنی پس از عفونیهمانطور که مشاهدات روی میمون ها نشان داده است، پس از ابتلا به اسهال خونی، یک ایمنی قوی و نسبتا طولانی مدت باقی می ماند. این بیماری توسط آنتی بادی های ضد میکروبی، آنتی توکسین ها، افزایش فعالیت ماکروفاژها و لنفوسیت های T ایجاد می شود. نقش مهمی توسط ایمنی موضعی مخاط روده، با واسطه IgAs ایفا می شود. با این حال، ایمنی ماهیت نوع خاصی دارد، ایمنی متقابل قوی رخ نمی دهد.

تشخیص آزمایشگاهی.روش اصلی باکتریولوژیک است. ماده مورد مطالعه مدفوع است. طرح جداسازی پاتوژن: تلقیح در محیط های تشخیصی افتراقی اندو و پلوسکیرف (به موازات محیط غنی سازی و به دنبال آن تلقیح در محیط های اندو و پلوسکیرف) برای جداسازی کلنی های جدا شده، به دست آوردن یک کشت خالص، مطالعه خواص بیوشیمیایی آن و در نظر گرفتن آن. دومی، شناسایی با استفاده از سرم های آگلوتینه تشخیصی چند ظرفیتی و تک ظرفیتی. سرم های تجاری زیر تولید می شوند.

1. شیگلایی که مانیتول را تخمیر نمی کند:

به S. dysenteriae 1و 2

به S. dysenteriae 3-7(چند ظرفیتی و تک ظرفیتی)

به S. dysenteriae 8-12(چند ظرفیتی و تک ظرفیتی).

2. برای مانیتول تخمیر کننده شیگلا:

به آنتی ژن های معمولی S. flexneri I, II, III, IV, V, VI,

برای گروه بندی آنتی ژن ها S. flexneri 3، 4، 6، 7، 8- چند ظرفیتی،

به آنتی ژن ها S.boydii 1-18(چند ظرفیتی و تک ظرفیتی)، به آنتی ژن ها S. sonneiفاز اول، فاز دوم،

به آنتی ژن ها S. flexneri I–VI+ S. sonnei- چند ظرفیتی

برای شناسایی سریع شیگلا، روش زیر توصیه می شود: یک کلنی مشکوک (لاکتوزون منفی در محیط اندو) روی محیط TSI (eng. آهن سه قندی) - آگار سه قند (گلوکز، لاکتوز، ساکارز) با آهن برای تعیین تولید H 2 S. یا روی محیطی حاوی گلوکز، لاکتوز، ساکارز، آهن و اوره. هر ارگانیسمی که پس از 4 تا 6 ساعت انکوباسیون اوره را تجزیه کند، به احتمال زیاد به این جنس تعلق دارد. پروتئوسو ممکن است مستثنی شوند. یک میکروارگانیسم تولید کننده H2S یا دارای اوره آز یا تولید اسید در مفصل (تخمیر لاکتوز یا ساکارز) را می توان حذف کرد، اگرچه سویه های تولید کننده H2S باید به عنوان اعضای احتمالی جنس بررسی شوند. سالمونلا. در تمام موارد دیگر، کشت رشد یافته روی این محیط ها باید بررسی شود و در صورت تخمیر گلوکز (تغییر رنگ ستون)، جداسازی شود. شکل خالص. در عین حال می توان آن را در آزمایش آگلوتیناسیون روی شیشه با آنتی سرم مناسب برای جنس بررسی کرد. شیگلا. در صورت لزوم، سایر آزمایشات بیوشیمیایی برای بررسی تعلق به جنس انجام می شود شیگلاو تحرک را مطالعه کنید.

روش های زیر را می توان برای تشخیص آنتی ژن ها در خون (از جمله به عنوان بخشی از CEC)، ادرار و مدفوع استفاده کرد: RPHA، RSK، واکنش انعقادی (در ادرار و مدفوع)، IFM، RAGA (در سرم خون). این روش ها بسیار موثر، اختصاصی و برای تشخیص زودهنگام مناسب هستند.

برای تشخیص سرولوژیکی می توان از موارد زیر استفاده کرد: RPGA با تشخیص گلبول قرمز مربوطه، روش ایمونوفلورسانس (در اصلاح غیرمستقیم)، روش کومبس (تعیین تیتر آنتی بادی های ناقص). آزمایش آلرژیک با اسهال خونی (محلولی از فراکسیون های پروتئینی شیگلا فلکسنر و سون) نیز ارزش تشخیصی دارد. واکنش پس از 24 ساعت در نظر گرفته می شود و در صورت وجود پرخونی و نفوذ به قطر 20-10 میلی متر مثبت در نظر گرفته می شود.

رفتار.توجه اصلی به بازیابی متابولیسم طبیعی آب نمک، تغذیه منطقی، سم زدایی، درمان منطقی آنتی بیوتیک (با در نظر گرفتن حساسیت پاتوژن به آنتی بیوتیک ها) است. با استفاده زودهنگام از یک باکتریوفاژ دیسانتریک چند ظرفیتی، به ویژه قرص هایی با پوشش پکتین، که فاژ را از اثر HCl آب معده محافظت می کند، تأثیر خوبی به دست می آید. در روده کوچک، پکتین حل می شود، فاژها آزاد می شوند و عمل خود را نشان می دهند. برای اهداف پیشگیرانه، فاژ باید حداقل هر سه روز یک بار (دوره بقای آن در روده) داده شود.

مشکل پیشگیری خاصبرای ایجاد ایمنی مصنوعی در برابر اسهال خونی، از واکسن های مختلفی استفاده شد: از باکتری های کشته شده، مواد شیمیایی، الکل، اما همه آنها ناکارآمد بودند و متوقف شدند. واکسن های ضد اسهال خونی فلکسنر از شیگلا فلکسنر زنده (جهش یافته، وابسته به استرپتومایسین) ایجاد شده است. واکسن های ریبوزومی، اما آنها نیز به طور گسترده مورد استفاده قرار نگرفته اند. بنابراین، مشکل پیشگیری خاص از اسهال خونی حل نشده باقی مانده است. راه اصلی مبارزه با اسهال خونی، بهبود سیستم تامین آب و فاضلاب، اطمینان از رژیم های بهداشتی و بهداشتی سختگیرانه در شرکت های غذایی، به ویژه صنایع لبنی، در مراکز نگهداری از کودکان، اماکن عمومی و بهداشت شخصی است.