تشخیص آزمایشگاهی هلمینتیازها روش جداسازی کشت خالص لیشمانیا حاصل از تراشیدن بافت های پاتولوژیک

روش های ساده

روش ماکروسکوپی هنگام معاینه مدفوع، می توان کرم ها، سر، بخش ها، قطعات استروبیلی را که خود به خود یا پس از کرم زدایی برجسته می شوند، تشخیص داد. این روش به ویژه برای تشخیص انتروبیازیس، تنیازیس و تنیارینکوز توصیه می شود.

بخش‌های کوچکی از مدفوع را در یک حمام مسطح یا در ظرف پتری با آب مخلوط می‌کنند و با استفاده از یک ذره‌بین در صورت لزوم، کرم‌ها و تمام تشکیلات سفید مشکوک را با موچین یا پیپت از بین می‌برند. مواد جمع‌آوری‌شده برای مطالعه بیشتر به فنجان دیگری با آب یا روی یک لام شیشه‌ای در یک قطره گلیسیرین رقیق شده یا محلول کلرید سدیم ایزوتونیک منتقل می‌شود.

با روش ته نشینی، کل قسمت آزمایشی مدفوع باید در یک استوانه شیشه ای با آب مخلوط شود، سپس لایه بالایی آب باید به دقت تخلیه شود. این کار چندین بار تکرار می شود. هنگامی که مایع شفاف شد، تخلیه می شود و رسوب در بخش های کوچک در یک حمام شیشه ای یا ظرف پتری، همانطور که در بالا نشان داده شد، مشاهده می شود.

روش های میکروسکوپی روش اصلی بررسی مدفوع برای تشخیص تخم ها یا لاروهای کرمی است. روش های مختلف تحقیق در زیر توضیح داده شده است. به منظور افزایش قابلیت اطمینان معاینه، آنالیزها را می توان چندین بار در روز یا با فاصله 1-3 روز تکرار کرد.

روش اسمیر بومی. اسمیر بومی رایج ترین و از نظر فنی در دسترس ترین روش برای بررسی مدفوع است. در یک اسمیر بومی، تخم ها و لاروهای کرمی از انواع مختلف یافت می شود. با این حال، با تعداد کمی تخم در مدفوع، آنها همیشه یافت نمی شوند. بنابراین مطالعه مدفوع فقط با کمک اسمیر بومی کامل نیست و باید با روش های غنی سازی تکمیل شود. کارایی معاینه اسمیر بومی به طور قابل توجهی هنگام مشاهده چهار آماده سازی تهیه شده از نمونه مدفوع بر روی دو لام شیشه ای بدون لام های پوششی بهبود می یابد، که امکان بررسی کل تقریباً همان مقدار مدفوع با روش کاتو را فراهم می کند (به زیر مراجعه کنید).

مقدار کمی (به اندازه یک سر کبریت) مدفوع هم زده شده با یک چوب چوبی روی سطح یک لام شیشه ای در قطره ای از محلول گلیسیرین 50 درصد آغشته می شود. معمولا دو اسمیر روی یک لیوان تهیه می شود. اسمیر زیر یک میکروسکوپ با بزرگنمایی کم مشاهده می شود (ob. 8, app. 7). در موارد مشکوک با یک لغزش پوششی پوشانده می شود و با بزرگنمایی زیاد بررسی می شود (ob. 40).

برای تهیه اسمیر بزرگ بومی، 200-300 میلی گرم مدفوع (به اندازه یک نخود بزرگ) روی شیشه 9*6 سانتی متر در 20-15 قطره محلول آبی 50 درصد گلیسرول آسیاب می شود. زیر میکروسکوپ استریوسکوپی دوچشمی (جلد 4، تقریباً 12.5 یا جلد 2، تقریباً 17) در نور عبوری بدون لغزش پوشش مشاهده می شود. در موارد مشکوک، می توانید لنز را به بزرگنمایی بالاتر ترجمه کنید. در چنین اسمیرهایی، تخم‌های کرمی بزرگ رنگی به وضوح قابل مشاهده هستند و تخم‌های شفاف کرم نواری پیگمی تا حدودی بدتر هستند. این روش برای تشخیص تخم های کوچک مناسب نیست. در عین حال، حجم زیادی از مواد مورد مطالعه و میدان دید زیاد با عمق میدان بالا، کارایی قابل توجهی از این اصلاح را در مقایسه با یک اسمیر بومی معمولی فراهم می‌کند.

اسمیر ضخیم سلفون (روش کاتو) موثرتر از آزمایش اسمیر بومی است، اما باید با روش های غنی سازی نیز ترکیب شود. تخم‌های همه انواع کرم‌ها شناسایی می‌شوند، اما برای تشخیص تخم‌های کرم پیگمی (تخم‌های شفاف) یا opisthorchis (تخم‌های کوچک)، دستیار آزمایشگاه باید به ویژه مراقب باشد که آنها را از دست ندهد (شکل 21).

این روش مبتنی بر تشخیص تخم‌های کرم در یک اسمیر غلیظ از مدفوع است که با گلیسیرین شفاف شده و با مالاشیت سبز رنگ شده است. سلفون آبدوست ابتدا به صفحات 20×40 میلی متر بریده می شود و در مخلوط کاتو (6 میلی لیتر محلول آبی 3 درصد مالاکیت گرین، 500 میلی لیتر گلیسرول، 500 میلی لیتر محلول فنل 6 درصد) غوطه ور می شود. 3-5 میلی لیتر از مخلوط برای 100 بشقاب کافی است که در یک روز آماده استفاده است و می توان در همان مخلوط در ظرف در بسته در دمای اتاق به مدت 6 ماه نگهداری کرد. در غیاب مالاشیت سبز (توصیه شده برای کاهش خستگی چشم دستیار آزمایشگاه) و فنل (ضدعفونی کننده)، تنها می توان از محلول آبی 50٪ گلیسیرین استفاده کرد، اثربخشی مطالعه کاهش نمی یابد.

برنج. 20. روش تهیه اسمیر غلیظ مدفوع با سلفون طبق کاتو

100 میلی گرم از فضولات روی یک لام شیشه ای اعمال می شود، با یک صفحه سلفونی که مانند بالا عمل می شود پوشانده می شود، و با یک درپوش لاستیکی فشار داده می شود تا مدفوع از زیر سلفون پخش نشود. میکروسکوپ با بزرگنمایی کم یا زیاد میکروسکوپ حداکثر 1 ساعت (در هوای گرم - 30-40 دقیقه) پس از تهیه اسمیر انجام می شود. دلیل کدورت آماده سازی ممکن است یک لایه ضخیم از مدفوع، پردازش ضعیف صفحه در مخلوط کاتو، زمان ناکافی قرار گرفتن در معرض آماده سازی در زیر سلفون باشد. پاکسازی طولانی مدت با گلیسیرین و خشک شدن بیش از حد آماده سازی نیز تشخیص تخم مرغ را دشوار می کند.

روش پیچش بر اساس S.S. شولمان. این روش برای تشخیص لارو کرم در مدفوع، در درجه اول Strongyloid پیشنهاد شد. فقط مدفوع تازه دفع شده مورد بررسی قرار می گیرد که 2-3 گرم آن به یک شیشه شیشه ای منتقل می شود و با یک میله شیشه ای در حرکات دایره ای با 3-5 برابر مقدار نمک نمکی بدون تماس با دیواره های رگ هم زده می شود. تخم ها و لاروهای کرم ها در مرکز تجمع می یابند. پس از اختلاط، قطره انتهای چوب به سرعت به یک لام شیشه ای منتقل می شود و با یک ورقه پوششی پوشانده می شود و زیر میکروسکوپ بررسی می شود.

روش های غنی سازی روش های غنی سازی بر اساس تفاوت وزن مخصوص تخم مرغ ها و محلول نمک استفاده شده است که امکان تشخیص مقدار کمی از آنها را فراهم می کند. اگر وزن مخصوص تخم ها بیشتر از وزن مخصوص مایع باشد، تخم ها در رسوب متمرکز می شوند که زیر میکروسکوپ بررسی می شود. این روش ته نشینی برای تخم های ترماتود استفاده می شود. با وزن مخصوص بالاتر محلول، تخم ها به سطح مایع شناور می شوند و سپس فیلم مورد بررسی قرار می گیرد. اینها روشهای شناورسازی (شناور) هستند، آنها برای تشخیص تخمهای کرم قلابدار، کرم شلاقی و کرم پیگمی مؤثرتر هستند.

روش های شناورسازی روش Fulleborn بر اساس شناور کردن تخم کرم در محلول اشباع کلرید سدیم است که دارای چگالی نسبی بالایی است (1.2) که امکان تشخیص تخم با تعداد کمی از آنها را فراهم می کند. این روش موثرتر از مطالعه اسمیر بومی است، اگرچه دشوارتر است. مزایای روش ارزان بودن و در دسترس بودن است. توصیه می شود مطالعه اسمیر بومی و روش Fülleborn را با هم ترکیب کنید.

محلول اشباع شده با حل کردن 400 گرم کلرید سدیم در 1 لیتر آب هنگام جوشیدن تهیه می شود. چگالی نسبی محلول 1.18-1.22 است. محلول در یک بطری در بسته نگهداری می شود. برای تجزیه و تحلیل، 2-3 گرم مدفوع را در یک شیشه با حجم 30-50 میلی لیتر قرار می دهیم و در حالی که با چوب هم می زنیم، محلول اشباع شده از کلرید سدیم تقریباً به بالا اضافه می شود. یک نوار کاغذ به سرعت ذرات بزرگ شناور را از بین می برد. بعد از 45-60 دقیقه با ته نشین شدن با یک حلقه سیمی، فیلم سطح را بردارید و آن را به یک لام شیشه ای در یک قطره محلول گلیسرول آبی 50٪ منتقل کنید. به جای برداشتن فیلم با حلقه، می توانید محلول داخل شیشه را به بالا اضافه کنید، با یک اسلاید شیشه ای بپوشانید، که تخم مرغ های شناور به سطح آن می چسبند. چندین آماده سازی در حال آماده سازی است. علاوه بر این، 2-4 آماده سازی از رسوب مشاهده می شود و آن را با یک پیپت چشمی روی 2 اسلاید شیشه ای می گیریم. علاوه بر لایه سطحی، بررسی رسوب نیز ضروری است، زیرا تخم های ترماتود، تانیدها، تخم های بارور نشده آسکاریس در این محلول شناور نمی شوند. تخم‌های تعدادی از کرم‌ها بلافاصله در محلول نمکی شناور نمی‌شوند. بنابراین، اگر حداکثر تعداد تخم های کرم نواری پیگمی بعد از 15-20 دقیقه شناور شود، پس از 2-3 ساعت آسکاریس - بعد از 1.5-2 ساعت، کرم شلاقی - بعد از 2-3 ساعت.

بنابراین، از مزایای این روش می توان به ارزان بودن و در دسترس بودن آن، معایب آن نیاز به مشاهده آماده سازی روی لایه و رسوب سطحی و همچنین مدت زمان ته نشین شدن آن اشاره کرد.

روش E. V. Kalantaryan نیز یک روش غنی سازی است، اما کارآمدتر و ساده تر از روش Fülleborn است. محلول اشباع نیترات سدیم با چگالی نسبی 1.38 استفاده می شود. بنابراین، تخم‌های اکثر کرم‌ها شناور می‌شوند و در لایه سطحی یافت می‌شوند؛ بررسی رسوب مورد نیاز نیست.

برای تهیه محلول اشباع نیترات سدیم، 1 کیلوگرم نمک نیترات سدیم (نیترات سدیم) را در 1 لیتر آب حل کرده و می جوشانند تا کاملا حل شود و لایه ای روی سطح آن تشکیل شود. بدون فیلتر کردن، در یک بطری خشک بریزید. در صورت عدم وجود نیترات سدیم، می توان آن را با نیترات آمونیوم (نیترات آمونیوم) جایگزین کرد که 1.7 کیلوگرم در هر لیتر آب حل می شود. چگالی نسبی محلول حاصل 1.3 است که تا حدودی کارایی را در مقایسه با محلول نیترات سدیم کاهش می دهد.

مزایای روش: تخم های اکثر کرم ها به سرعت بیرون می آیند و در لایه سطحی یافت می شوند که نیاز به مطالعه رسوب را از بین می برد. معایب این روش کمبود نیترات سدیم و همچنین این واقعیت است که تخم های ترماتود، انکوسفرهای تانید شناور نمی شوند و در رسوب باقی می مانند. باید در نظر داشت که با قرار گرفتن طولانی مدت (بیش از 1-2 ساعت) مدفوع در محلول، تخم های برخی از کرم ها شروع به متورم شدن و ته نشین شدن می کنند و از لایه سطحی ناپدید می شوند.

روش های ته نشینی

روش P. P. Goryachev بر اساس اصل ته نشینی تخم مرغ است. اسمیر در این مورد سبک و بدون ناخالصی های درشت است که تشخیص تخم های کوچک ترماتود (اپیستورکیا و غیره) را تسهیل می کند. وزن مخصوص تخم های اپیستورچ زیاد است، بنابراین در محلول های نمکی شناور نمی شوند.

70-100 میلی لیتر از محلول کلرید سدیم اشباع شده در سیلندر به قطر 2-3 سانتی متر ریخته می شود. به طور جداگانه، 0.5 گرم مدفوع را در 20-25 میلی لیتر آب کاملاً مخلوط کنید و با احتیاط از طریق یک قیف با دو لایه گاز به داخل یک استوانه روی نمک فیلتر کنید و از مخلوط کردن خودداری کنید (به طوری که دو لایه کاملاً مشخص تشکیل شود). پس از 2-3 ساعت، لایه بالایی با مدفوع با پیپت مکیده می شود و محلول نمک باقی مانده به مدت 12-20 ساعت باقی می ماند یا سانتریفیوژ می شود. رسوب بر روی یک اسلاید شیشه ای پیپت می شود، با یک ورقه پوششی پوشانده شده و میکروسکوپ می شود.

روش گوریاچف برای تشخیص تخم‌های تریاک پیشنهاد شد و نسبت به آزمایش اسمیر بومی و روش فوله‌بورن مؤثرتر بود. در حال حاضر، برای تشخیص اپیستورکیازیس (کلونورکیازیس)، روش های کاتو و کلانتریان به عنوان کاملا موثر و از نظر فنی ساده تر توصیه می شود.

روش کراسیلنیکوف تحت تأثیر سورفکتانت هایی که بخشی از مواد شوینده (شوینده ها) هستند، تخم های کرم از مدفوع خارج شده و در رسوبات متمرکز می شوند.

محلول 1٪ پودر لباسشویی لوتوس به طور مقدماتی تهیه شده است. برای این کار 10 گرم از پودر را در 1 لیتر آب لوله کشی حل می کنند. در صورت عدم وجود لوتوس از پودرهای لباسشویی دیگر نیز می توان استفاده کرد که هر کدام را باید به اندازه ای که بدون بارندگی در 1 لیتر آب لوله کشی حل می شود مصرف کرد. 20-30 میلی لیتر محلول شوینده در ظرف شیشه ای با ظرفیت 30-50 میلی لیتر ریخته می شود، قسمت کوچکی از فضولات در آنجا قرار می گیرد و خوب مخلوط می شود. نسبت مدفوع و محلول باید تقریباً 1:20 باشد. مدفوع باید حداقل یک روز در محلول باشد. در این مدت رسوبی از 2-3 لایه در پایین تشکیل می شود. لایه پایینی از ذرات درشت سنگین تشکیل شده است، تخم های کرم در لایه میانی جمع می شوند، لایه بالایی پوسته های خاکستری مایل به سفید است. سپس با پیپت 3-2 قطره مایع از لایه میانی جمع آوری شده و به لام شیشه ای منتقل می شود. 2 آماده سازی روی یک لیوان تهیه می شود که با روکش پوشانده شده و میکروسکوپ می شود.

روش Krasilnikov به شما امکان می دهد تخم های همه انواع کرم ها را که با مدفوع دفع می شوند تشخیص دهید.

روش ته نشینی اتر-فرمالین و روش ته نشینی شیمیایی بسیار پر زحمت و با راندمان بالا به ویژه در آزمایشات انبوه است؛ بنابراین استفاده از روش اتر-استیک مصلحت تر است. این اجازه می دهد تا پس از پردازش اضافی رسوب با معرف های شیمیایی، عملا فقط تخم های کرم در آن به دست آید، که شناسایی تخم های ترماتود کوچک را تسهیل می کند. معلوم شد که این روش جهانی است، تخم‌های همه کرم‌های روده، کیست‌های تک یاخته‌های روده را آشکار می‌کند، همچنین می‌توان از آن برای تعیین کمیت شدت تهاجم استفاده کرد.

7 میلی لیتر محلول 10 درصد اسید استیک را در لوله های آزمایش مدرج سانتریفیوژ بریزید و 1 گرم مدفوع را به علامت 8 میلی لیتر اضافه کنید. مدفوع کاملاً با یک چوب مخلوط می شود تا مخلوطی همگن تشکیل شود و سپس از طریق دو لایه گاز داخل لوله سانتریفیوژ دیگری فیلتر می شود (به طوری که لوله جدید محلول فیلتر شده دوباره 8 میلی لیتر داشته باشد، اگر کمتر باشد، می توانید علاوه بر آن آبکشی کنید. قیف با یک باند با محلول 10٪ اسید استیک، که از طریق آن محلول مدفوع را فیلتر کرد). به این لوله 2 میلی لیتر اتر (تا علامت 10 میلی لیتر) اضافه کنید و به مدت 30 ثانیه به شدت تکان دهید. مخلوط در 3000 دور در دقیقه به مدت 1 دقیقه (یا 2 دقیقه در 1500 دور در دقیقه) سانتریفیوژ می شود. لایه منعقد کننده (به شکل چوب پنبه در قسمت بالایی لوله) با چوب از دیواره های لوله جدا شده و همراه با مایع رویی به دقت تخلیه می شود. رسوب (معمولاً کوچک و بی رنگ) با یک پیپت روی اسلایدهای شیشه ای اعمال می شود، با یک ورقه پوششی پوشانده می شود و میکروسکوپ می شود.

ساده ترین ها به 4 کلاس تقسیم می شوند:

هنگامی که آنزیست می شود، میکروارگانیسم شکلی گرد پیدا می کند و با یک پوسته محافظ پوشیده می شود. به شکل کیست، تک یاخته ها کمتر در معرض عوامل محیطی نامطلوب قرار می گیرند.

تحقیقات ممکن است شامل موارد زیر باشد:

توجه داشته باشید:انواع مختلفی از تشخیص وجود دارد، ما انواعی را که در عمل آزمایشگاهی بالینی رایج هستند در نظر خواهیم گرفت.

انواع خصوصی تشخیص

در هر مورد خاص، دستیار آزمایشگاه وظیفه یافتن یک پاتوژن خاص را دارد، گاهی اوقات دیگران به همراه عامل اصلی پیدا می شوند.

6 گونه از این میکروارگانیسم قادر به زندگی در روده انسان وجود دارد. فقط آمیب اسهال خونی که به صورت رویشی و به صورت کیست بروز می کند اهمیت بالینی دارد.

علاوه بر این، از روش های ایمونولوژیک استفاده می شود:

• ایمونوفلورسانس غیر مستقیم؛
• آگلوتیناسیون غیر مستقیم (PHA)؛
• ایمونودیفیوژن شعاعی

توجه داشته باشید: روش‌های سرولوژیکی غیر اطلاعاتی هستند و فقط به عنوان افزودنی به روش‌های اصلی در موارد مشکوک استفاده می‌شوند.

تشخیص مژگانی (سیلیات)

شکل بیماریزای میکروارگانیسم های این جنس بالانتیدیا است. این یک میکروبی است که باعث بالانتیدازیس می شود - بیماری همراه با فرآیند زخم روده بزرگ. عامل ایجاد کننده در اسمیر بومی به شکل رویشی و کیست یافت می شود. مواد اسمیر (مدفوع و مخاط) در طی معاینه سیگموئیدوسکوپی گرفته می شود و روی محیط های مخصوص کاشته می شود.

تشخیص تاژکک ها (لیشمانیا، ژیاردیا، تریپانوزوم ها، تریکومونادها)

لیشمانیا، تریپانوزوما، ژیاردیا، تریکومونادها برای انسان خطرناک هستند.

لیشمانیا- میکروب هایی که باعث لیشمانیوز می شوند در اسمیر خون، مواد مغز استخوان، خراش های حاصل از نفوذ پوست بررسی می شوند. در برخی موارد در تشخیص لیشمانیا از کاشت روی بسترهای غذایی استفاده می شود.

تریپانوزوم ها- عوامل ایجاد کننده بیماری خواب (تریپانوزومیازیس آمریکایی / آفریقایی یا بیماری شاگاس).

نوع آفریقایی در دوره اولیه در مطالعه خون محیطی تعیین می شود. میکروب های پاتولوژیک در طول پیشرفت بیماری در مواد سوراخ های غدد لنفاوی، در مراحل پیشرفته - در مایع مغزی نخاعی یافت می شوند.

برای تشخیص تریپانوزوم ها در صورت مشکوک به بیماری شاگاس، ماده آزمایشی در زیر میکروسکوپ با بزرگنمایی کم مورد بررسی قرار می گیرد. در این مورد، اسمیر و یک قطره غلیظ از قبل رنگ آمیزی می شود.

تریکوموناس(روده ای، دهانی) با میکروسکوپ مواد گرفته شده از غشاهای مخاطی آسیب دیده شناسایی می شوند.

شناسایی اسپروزوئرها (پلاسمودیوم مالاریا، عامل کوکسیدوز و غیره)

شایع ترین و خطرناک ترین گونه برای انسان، پلاسمودیوم مالاریا است که دارای 4 نوع اصلی پاتوژن است: عامل بیماری مالاریا سه روزه، مالاریا چهار روزه، مالاریا استوایی و مالاریا بیضی شکل.

رشد جنسی پلاسمودیوم (اسپوروگونی) در پشه های آنوفل صورت می گیرد. غیرجنسی (اسکیزوگونی بافت و گلبول قرمز) - در بافت کبد و گلبول های قرمز انسان. این ویژگی های چرخه زندگی باید در هنگام تشخیص پلاسمودیوم مالاریا در نظر گرفته شود.

بنابراین، در خون یک بیمار تازه بیمار، سلول های زایای چرخه اسپوروژنی یافت می شود. اما در اوج حملات مالاریا، شیزونت ها به تعداد زیاد در خون ظاهر می شوند.

علاوه بر این، در مراحل مختلف تب مالاریا، اشکال مختلفی از پلاسمودیوم ظاهر می شود:

• در طول دوره سرما، خون با merozoites، نوعی شیزونت پر می شود.
• در اوج دما، تروفوزوئیت های حلقه ای شکل در گلبول های قرمز تجمع می یابند.
• کاهش دما با غلبه تروفوزوئیت های آمیبوئید مشخص می شود.
• در طول دوره های شرایط طبیعی، خون حاوی اشکال بالغ شیزونت است.

مطالعه عامل ایجاد کننده مالاریا (پلاسمودیوم مالاریا) به صورت اسمیر و در قطره غلیظ انجام می شود.

توجه داشته باشید:تشخیص مالاریا در مطالعه اسمیر و قطرات غلیظ خون گاهی اشتباه است. پلاکت های خون در برخی موارد ممکن است به اشتباه به عنوان پاتوژن مالاریا طبقه بندی شوند. همچنین، قطعات لکوسیت ها و سایر سلول ها گاهی اوقات پلاسمودیوم را شبیه سازی می کنند.

روشهای تحقیق پایه برای تک یاخته ها

بیایید نگاهی کوتاه به رایج ترین روش های تحقیق برای حضور تک یاخته ها بیندازیم.

تشخیص تک یاخته با استفاده از اسمیر بومی و لام رنگ آمیزی شده با محلول لوگول (در مدفوع)

این دارو از امولسیون مدفوع در محلول ایزوتونیک تهیه می شود. دو قطره کلرید سدیم و محلول لوگول روی یک اسلاید شیشه ای ریخته می شود. مواد مورد آزمایش با یک چوب چوبی به هر دو ترکیب اضافه می شود و پس از پوشاندن با شیشه، با وضوح های مختلف میکروسکوپ مشاهده می شود.

با توجه به علائم خاص، تک یاخته های یافت شده ثبت می شوند. برای دقت، 2-3 آماده سازی از یک ماده تهیه می شود. در موارد مشکوک، تجزیه و تحلیل چندین بار در طول 2-3 هفته تکرار می شود.

این روش می تواند اشکال رویشی و کیستیک را تشخیص دهد:

• لامبلیا;
• بالانتیدیا;
• آمیب اسهال خونی

همراه با اشکال بیماری زا، تک یاخته های غیر بیماری زا نیز تعیین می شوند. ناقلان سالم نیز دارای اشکال مجرای و کیستیک هستند.

مهم:تحقیقات به منظور جلوگیری از اشتباهات و اشتباهات باید به طور مکرر انجام شود.

نتیجه تشخیص تک یاخته با روش اسمیر بومی و رنگ آمیزی شده باید حاوی شرح شکل پاتوژن (نفوذ، کیست، بافت) باشد.

الزامات تحقیق:

• مواد گرفته شده برای تجزیه و تحلیل (مدفوع مایع) حداکثر 30 دقیقه پس از اجابت مزاج بررسی می شود.
• مدفوع تشکیل شده باید در عرض 2 ساعت پس از اجابت مزاج تشخیص داده شود.
• مواد نباید حاوی ناخالصی (ضدعفونی کننده ها، آب، ادرار) باشد.
• فقط از چوب های چوبی برای کار با مواد استفاده می شود ، شیشه ها به دلیل لغزش مخاط مناسب نیستند.
• چوب ها باید بلافاصله پس از استفاده سوزانده شوند.

روش حفاظتی (بررسی مدفوع) در تشخیص تک یاخته ها

این مطالعه با تثبیت تک یاخته با یک ماده نگهدارنده انجام می شود. تفاوت این روش با روش قبلی در این است که نگهدارنده ها به شما امکان می دهند دارو را برای مدت طولانی ذخیره کنید.

مواد نگهدارنده مورد استفاده:

• بارو. حاوی مواد نگهدارنده: 0.7 میلی لیتر کلرید سدیم، 5 میلی لیتر فرمالین، 12.5 میلی لیتر الکل 96 درصد، 2 گرم فنل و 100 میلی لیتر آب مقطر. ترکیب رنگ: محلول 0.01٪ تیونین (آزور).
• راه حل صفرلیف ترکیب: 1.65 گرم سولفات روی، 10 میلی لیتر فرمالین، 2.5 گرم فنل کریستالی، 5 میلی لیتر اسید استیک، 0.2 گرم متیلن بلو، 100 میلی لیتر آب. این ماده نگهدارنده در مواردی استفاده می شود که مواد باید بیش از یک ماه نگهداری شوند.

بطری های خالی با یک ماده نگهدارنده پر می شوند، مواد به نسبت 3: 1 به آنها منتقل می شود، سپس، در صورت لزوم، یک رنگ اضافه می شود. ارزیابی نتایج در مطالعه 2-3 دارو انجام می شود.

روش غنی‌سازی فرمالین-اتر (تجزیه و تحلیل حضور تک یاخته‌ها در مدفوع)

این روش تشخیصی به شما امکان می دهد کیست های تک یاخته ای را جدا و متمرکز کنید. مواد زیر برای تجزیه و تحلیل مورد نیاز است: فرمالین (10 میلی لیتر)، 0.85 گرم محلول ایزوتونیک، آب مقطر، اتر سولفوریک، محلول لوگول.

مخلوطی از مواد زیستی با مایعات ذکر شده مخلوط و سانتریفیوژ می شود. رسوب به دست آمده در پایین لوله با محلول لوگول رنگ آمیزی شده و از نظر وجود کیست و اشکال رویشی بررسی می شود.

روش تشخیص لیشمانیا (اسمیر مغز استخوان)

برای تشخیص لیشمانیوز، از معرف ها استفاده می شود: مخلوطی از نیکیفوروف (اتر سولفوریک و الکل اتیلیک)، بافر فسفات، آزور-ائوزین به گفته رومانوفسکی.

ماده مغز استخوان پس از آماده سازی خاص با دقت زیادی روی یک لام شیشه ای قرار می گیرد. یک میکروسکوپ با سیستم غوطه وری استفاده می شود.

در دوره حاد بیماری، تعداد زیادی لیشمانیا در نقطه نقطه یافت می شود.

توجه داشته باشید:گاهی اوقات سلول های خونی می توانند شبیه لیشمانیا درمان شده باشند، بنابراین برای تکنسین آزمایشگاه بسیار مهم است که مراقب باشد و تجربه کافی برای مطالعه مستقل داشته باشد.

روش تشخیص لیشمانیا در اسمیر از نفوذ پوست

معرف های مورد نیاز مشابه آزمایش قبلی هستند.

مواد آزمایش از محتویات سل یا زخم موجود بدست می آید. خراش دادن به ظن لیشمانیوز با چاقوی جراحی و بدون خون بسیار با احتیاط انجام می شود. سپس آماده سازی روی شیشه آماده می شود. برای صحت نتایج به دست آمده، چندین آماده سازی به طور همزمان مورد بررسی قرار می گیرند.

در صورت وجود بیماری، از بین ماکروفاژها، فیبروبلاست ها و سلول های لنفوئیدی موجود در ماده آزمایش، لیشمانیا نیز مشخص می شود.

روش جداسازی کشت خالص لیشمانیا حاصل از تراشیدن بافت های پاتولوژیک

با این روش تشخیص، ساده‌ترین خراش‌های بافت در یک محیط غذایی مخصوص قرار می‌گیرد که لیشمانیا به طور فعال در آن تکثیر می‌کند.

قبل از انجام خراش دادن، پوست با دقت با الکل درمان می شود، سپس برشی در غده ایجاد می شود، که محتویات آن برداشته می شود و با محیط در لوله آزمایش قرار می گیرد. این ماده چندین بار گرفته می شود و پس از آن در لوله های آزمایش مختلف قرار می گیرد. سپس در یک ترموستات در دمای 22-24 درجه، کشت صورت می گیرد. نتایج زیر میکروسکوپ ارزیابی می شود. این روش زمانی استفاده می‌شود که سایر روش‌های ارزان‌تر و سریع‌تر برای تشخیص تک یاخته‌ها بی‌اثر باشند.

با تماشای یک بررسی ویدیویی می توانید ببینید که چگونه آزمایش های حضور تک یاخته ها در عمل با یک قطره خون رمزگشایی می شوند:

لوتین الکساندر، ستون نویس پزشکی

روش های تحقیق کرم شناسی به دو دسته مستقیم و غیر مستقیم تقسیم می شوند. روش های مستقیم: تشخیص خود کرم ها، قطعات آنها، تخم ها، لاروها در مدفوع، ادرار، ترشح اثنی عشر، خلط، مخاط بینی و واژن، محتویات فضاهای زیر زبانی، تکه های بافت بیوپسی شده. روش‌های غیرمستقیم: تشخیص تغییرات ثانویه‌ای که در بدن انسان در نتیجه فعالیت حیاتی انگل، واکنش‌های سرولوژیکی، آزمایش‌های عمومی خون و ادرار رخ می‌دهد. متداول ترین روش ها برای بررسی مدفوع کرمی و پروتوزوسکوپی هستند. هنگام تشخیص، تشخیص تخم ها یا لاروهای انواع کرم هایی که در دستگاه گوارش انسان زندگی می کنند، با هر روشی غیرممکن است. بنابراین، هنگام استفاده از روش فلوتاسیون، تخم‌های ترماتود و در برخی موارد تخم‌های کرم گرد بارور نشده در لایه سطحی شناور نمی‌شوند (به دلیل وزن مخصوص بالا). در مدفوع، یافتن تخم‌های کرم سوزنی، انکوسفرهای تنیدی، که با روش‌های تحقیقاتی خاص شناسایی می‌شوند، بسیار نادر است: خراشیدن از چین‌های دور مقعدی برای کرم‌های سوزنی و تنید، روش‌های ته‌نشینی برای ترماتودها (تخم‌های اپیستورچ و غیره). بنابراین، برای معاینه هدفمند بیمار از نظر کرمی، پزشک در ارجاع باید مشخص کند که کدام کرم ها باید مورد توجه اصلی قرار گیرند (تشخیص)، که به دستیار آزمایشگاه اجازه می دهد تکنیک مناسب را برای شناسایی این نوع کرم انتخاب کند. مدفوع گرفته شده از محل های مختلف مدفوع به مقدار حداقل 50 گرم (قاشق چایخوری) در ظرف شیشه ای تمیز باید حداکثر تا یک روز پس از اجابت مزاج به آزمایشگاه ارسال و در روز دریافت مورد بررسی قرار گیرد. در صورت نیاز به نگهداری مدفوع تا روز بعد، آن را در جای سرد (4-0 درجه سانتیگراد) قرار می دهند یا با یکی از مواد نگهدارنده پر می کنند. قبل از مطالعه، مدفوع با چوب مخلوط می شود تا تخم های کرم به طور مساوی در کل توده توزیع شوند. اگر هر گونه تخم کرم در آماده سازی یافت شود، مشاهده متوقف نمی شود، زیرا. ممکن است تهاجم دو یا سه گانه باشد. نظارت بر اثربخشی درمان کرمی با بررسی مدفوع برای تخم های کرم در 2-3 هفته یا 2-3 ماه پس از درمان، بسته به کرم شناسایی شده انجام می شود. روش های ماکروسکوپی برای تشخیص کامل کرم های بالغ از نظر جنسی یا تکه های آنها در مدفوع با چشم غیرمسلح یا با ذره بین دستی استفاده می شود. اغلب روی سطح مدفوع پس از اجابت مزاج، می توانید کرم های خزنده فعال را ببینید. دفع با مدفوع کرم گرد؛ گاهی اوقات خود افراد متوجه ترشح کرم ها می شوند. در بیماران مبتلا به دی فیلوبوتریازیس، قطعات استروبیلوس کرم نواری (به شکل "رشته") می تواند برجسته شود، و در بیماران مبتلا به تنید (کرم گاو یا خوک)، بخش هایی از کرم ها (به شکل "برش های سفید" ) اغلب مدفوع را ترک می کنند (به شکل "بریدگی های سفید") یا به طور فعال از مقعد خارج می شوند. روش ماکروسکوپی اصلی ترین روش برای تشخیص افتراقی تنیادوز و تنیارینکوز (در ترکیب با بررسی) است. از روش های خاص ماکروسکوپی، روش شستشوی متوالی مدفوع استفاده می شود. مدفوع در آب مخلوط می شود تا یک سوسپانسیون یکنواخت به دست آید، پس از آن، تحت نور خوب، در قسمت های کوچک جداگانه در کووت های عکاسی سیاه یا در زمینه تیره در ظروف پتری به دقت بررسی می شوند. با موچین یا سوزن کالبد شکافی، تمام ذرات سفید مشکوک، تشکیلات بزرگ مشکوک به قطعات کرم ها برداشته می شوند و زیر ذره بین بین دو اسلاید شیشه ای بررسی می شوند. کرم های کوچک یا سر سستودها در زیر ذره بین در قطره گلیسیرین یا زیر میکروسکوپ بررسی می شوند. هنگام استفاده از این روش برای تشخیص قطعات گوشت خوک، کرم گاوی، کرم پهن، قطعات شسته شده بین دو لیوان قرار می گیرند و با مشاهده نور زیر ذره بین یا بزرگنمایی کم میکروسکوپ، گونه ها با ساختار رحم (در یک بخش بالغ کرم خوک، 8-12 شاخه جانبی، و در یک کرم گاو نر 18-32، اغلب 28-32، در یک کرم پهن، بخش ها گسترده تر هستند و رحم در مرکز به شکل "رزت"). اگر رحم ضعیف دیده شود، ابتدا می توان آن را برای مدتی در محلول گلیسیرین 50٪ نگه داشت، پس از آن حتی تنه های رحم متروک به وضوح قابل مشاهده است. هنگام تعیین این سستودها با ساختار سرهای جدا شده، آنها را با دقت با یک گردن در یک قطره گلیسرول بین لام های شیشه ای قرار می دهند (یا با یک ورقه پوششی پوشانده می شوند) و بدون فشار دادن زیر میکروسکوپ با بزرگنمایی کم مورد بررسی قرار می گیرند.

روش های میکروسکوپی به ساده، پیچیده و خاص تقسیم می شوند.

روش های ساده شامل اسمیر بومی، اسمیر بومی با محلول لوگول، اسمیر غلیظ زیر سلفون طبق کاتو، پیچش (به گفته شولمان) و خراش دادن پری مقعد می باشد.

روش های پیچیده کارآمدتر هستند و بر اساس غلظت تخم مرغ در آماده سازی هستند. آنها شامل پیش درمان مدفوع با معرف های مایع است که در نتیجه تخم کرم ها یا رسوب می کنند یا به سطح مایع شناور می شوند.

روش های پیچیده شامل روش های غنی سازی است:

الف) شناورسازی (زمانی که وزن مخصوص تخم ها کمتر از وزن مخصوص محلول نمکی باشد و تخم ها در لایه سطحی شناور شوند).

ب) رسوب گذاری (زمانی که وزن مخصوص تخم ها بیشتر از وزن مخصوص محلول های نمکی باشد و تخم ها در رسوب ته نشین شوند).

روش‌های ویژه برای تشخیص تخم‌ها و لاروهای کرم‌ها، کیست‌ها و اشکال رویشی تک یاخته‌ها، روش‌های خراشیدن، فلوتاسیون، ته‌نشینی، لاروسکوپی، پروتوزوسکوپی، مطالعه صفرا و روش‌های رنگ‌آمیزی اسمیر مدفوع، خلط و غیره است.

نمونه برداری و حفاظت

برای تحقیق، مدفوع از مکان های مختلف در قطعات 50 گرمی گرفته می شود و در یک ظرف شیشه ای یا پلاستیکی تمیز با درب محکم به آزمایشگاه فرستاده می شود. مدفوع تازه (نه بیشتر از یک روز) و در برخی موارد (در مطالعه برای استرونژیلوئیدازیس) بلافاصله پس از اجابت مزاج بررسی می شود. تعدادی از مواد نگهدارنده برای مدفوع حاوی تخم کرم کرم پیشنهاد شده است: محلول فرمالین 4-10٪، که باید تا دمای 50-60 درجه حرارت داده شود تا از رشد تخم کرم قلابدار جلوگیری شود. مخلوطی از محلول آبی 0.2٪ نیترات سدیم (1900 میلی لیتر)، محلول لوگول (5 گرم ید، 10 گرم یدید پتاسیم، 250 میلی لیتر آب)، فرمالین (300 میلی لیتر) و گلیسیرین (25 میلی لیتر)، که در آن کرم ها تخم مرغ 6-8 ماه ذخیره می شود. مخلوطی از گلیسیرین (5 میلی لیتر)، فرمالین (5 میلی لیتر) و آب (100 میلی لیتر)؛ محلول های 1-1.5٪ مواد شوینده "Lotus"، "Extra"، "Barf"، "Tide" و غیره (به نسبت وزن مدفوع و محلول شوینده 1: 5). مخلوطی از مرتیولات 1: 1000 (200 میلی لیتر)، فرمالین (25 میلی لیتر)، گلیسیرین (5 میلی لیتر)، آب مقطر (250 میلی لیتر) با افزودن 0.6 میلی لیتر محلول لوگول (بر اساس 1 گرم مدفوع در هر 10 میلی لیتر مخلوط).

برای تشخیص هلمینتیازها از روش های ماکرو و میکروهلمینتوسکوپی برای بررسی مدفوع استفاده می شود.

مطالعات ماکروهلمینتوسکوپی

روش تسویه

قسمت روزانه مدفوع به طور کامل با 5-10 برابر مقدار آب مخلوط می شود، در استوانه های شیشه ای (شیشه ها، سطل ها) ریخته می شود و تا زمانی که ذرات معلق کاملاً ته نشین شوند، رها می شود. لایه ابری بالایی با دقت تخلیه می شود و آب تمیز به بالا اضافه می شود (چند بار تکرار کنید تا آب بالای رسوب شفاف شود). پس از تخلیه لایه رویی، رسوب را به یک کووت یا ظرف پتری منتقل کنید و آن را (در زمینه تیره) زیر ذره بین یا با چشم غیر مسلح مشاهده کنید.

روش غربالگری

مدفوع مخلوط شده با آب بر روی الک بالایی دستگاه که شامل سیستمی از الک با سوراخ هایی با قطر کم می باشد قرار می گیرد، دستگاه به شبکه آبرسانی متصل می شود و با بازکردن شیر آب، شستشو می شود و مایع جاری می شود. به فاضلاب تخلیه می شود. کرم های بزرگ روی الک بالایی باقی می مانند، در حالی که کرم های کوچکتر روی غربال های پایینی باقی می مانند. غربال ها را برگردانده و پس از شستن محتویات داخل کووت های تیره، با چشم غیر مسلح یا زیر ذره بین مشاهده می شوند.

مطالعات میکروهلمینتوسکوپی

به منظور تشخیص تخم‌ها (روش‌های هلمینتو-اووسکوپی - رنگ. شکل 1) یا لارو کرمی (روش‌های هلمینتو-لاروسکوپی) انجام می‌شود.

روش های هلمینتووسکوپی

روش های کیفی بدون غنی سازی

اسمیر بومی. مقدار کمی مدفوع بر روی یک لام شیشه ای در یک قطره محلول گلیسرول 50 درصد یا آب جوشانده می شود. ذرات بزرگ با دقت برداشته می شوند، مخلوط با یک پوشش پوشانده می شود و زیر میکروسکوپ بررسی می شود (دو اسمیر مشاهده می شود). تهیه لکه های طولانی بین دو اسلاید شیشه ای راحت تر و راحت تر است. اسمیر بومی تنها علاوه بر روش های غنی سازی استفاده می شود، زیرا به اندازه کافی موثر نیست، به خصوص با تهاجمات ضعیف.

اسمیر ضخیم با سلفون طبق کاتو(K. Kato, 1954) یک روش تحقیق بسیار مؤثر است. قطعات سلفون آبدوست (4×2 سانتی متر) به مدت 24 ساعت در مخلوطی از گلیسرول (50 میلی لیتر)، محلول فنل 6 درصد (500 میلی لیتر) و محلول آبی 3 درصد (6 میلی لیتر) مالاشیت سبز خیس می شوند (این دومی اختیاری است. ). خوب. 100 میلی گرم مدفوع روی یک لام شیشه ای آغشته می شود و با یک تکه سلفون مرطوب پوشانده می شود و با یک درب لاستیکی شماره 5 فشار می یابد. در نتیجه تخمهای کرمی به راحتی در زیر میکروسکوپ با بزرگنمایی کم قابل تشخیص هستند.

روش های کیفی با غنی سازی (روش های شناور و ته نشینی)

اولین آنها بر اساس استفاده از محلول های اشباع از مواد شیمیایی مختلف است. موادی که تخم مرغ ها در آنها به دلیل اختلاف وزن مخصوص شناور هستند.

روش کوفوئید-باربر(Ch.A. Kofoid, M. A. Barber) اصلاح شده توسط Fulleborn (F. Fulleborn, 1920). خوب. 5 گرم مدفوع در یک شیشه بلند و باریک (حجم 100 میلی لیتر) با یک چوب چوبی در 100 میلی لیتر محلول اشباع نمک خوراکی مخلوط می شود. وزن به روگو 1,18 (400 گرم نمک با جوشاندن در 1 لیتر آب حل می شود). ذرات بزرگی که روی سطح شناور شده اند به سرعت با یک چوب یا تکه کاغذ حذف می شوند. پس از ته نشین شدن مخلوط به مدت 45-90 دقیقه. یک حلقه سیم (قطر 0.8-1 سانتی متر) کل فیلم سطح را جدا می کند، آن را به یک اسلاید شیشه ای منتقل می کند. هنگام آزمایش تخم کرم قلابدار، مخلوط به مدت 10-15 دقیقه باقی می ماند. می توانید فیلم را مستقیماً با یک اسلاید شیشه ای جدا کنید که شیشه را می پوشاند تا با مایع تماس پیدا کند (محلول نمک اشباع شده به لبه های شیشه اضافه می شود). پس از ته نشین شدن، لام برداشته می شود، به سرعت برمی گردد و در زیر میکروسکوپ (بدون لغزش پوشش) فیلمی با تخم های کرمی که به آن چسبیده اند بررسی می شود. این روش به خوبی تخم‌های همه نماتدها و کرم‌های پیگمی را نشان می‌دهد. تخم های ترماتود سنگین؛ اکثر سستودها و کرم های گرد لقاح نیافته شناور ضعیفی دارند، بنابراین رسوبات نیز مورد بررسی قرار می گیرند. برای انجام این کار، پس از برداشتن فیلم، مایع از شیشه به سرعت تخلیه می شود و چند قطره از رسوب با یک حلقه یا پیپت گرفته می شود، به یک اسلاید شیشه ای منتقل می شود، یک قطره گلیسیرین برای شفاف سازی اضافه می شود و تحت یک بررسی قرار می گیرد. میکروسکوپ

روش E. V. Kalantaryan(1938) اصلاح کارآمدتری از روش فولبورن است. در آن، محلول کلرید سدیم با محلول اشباع نیترات سدیم، sp جایگزین می شود. وزن به روگو 1.39 (یک حجم نیترات سدیم در حین جوشاندن در حجم مساوی آب حل می شود)، فیلم پس از 20-30 دقیقه برداشته می شود.

روش های فاوست نیز اعمال می شود (E. S. Faust, 1939)، Brudastov et al. (1970) و دیگران.

برای رسوب تخم کرم کرم از یک ماده شیمیایی استفاده می شود. موادی که چربی ها و پروتئین ها را در مدفوع حل می کنند.

روش Telemann (W. Telemann, 1908) که توسط Miyagawa اصلاح شده است (Y. Miyagawa, 1913). خوب. 5 گرم مدفوع در هاون یا شیشه آسیاب می شود و 5 میلی لیتر اتیل اتر و محلول اسید کلریدریک 50٪ اضافه می شود. این مخلوط از طریق یک سیم یا الک مو در یک لوله آزمایش فیلتر شده و سانتریفیوژ می شود. سه لایه در لوله آزمایش تشکیل می شود: در بالا - اتر با چربی محلول، در پایین - اسید هیدروکلریک با مواد پروتئینی محلول، در رسوب - قسمت های نامحلول مدفوع و تخم کرم کرم. لایه های بالایی تخلیه شده و آب به رسوب اضافه شده و سانتریفیوژ می شود. چند قطره از رسوب به یک اسلاید شیشه ای منتقل می شود و زیر میکروسکوپ بررسی می شود. این روش می‌تواند تخم‌های انواع کرم‌ها را تشخیص دهد، اما گاهی اوقات تغییر شکل می‌دهند.

روش ریچی (L. S. Kitchie, 1948).برای حل کردن چربی ها و پروتئین ها از فرمالین و اتر استفاده می شود.

برای رسوب تخم کرم کرم می توان از مواد شوینده مختلف استفاده کرد. در خارج از کشور نیز روش فیلتراسیون در دستگاه های مخصوص بل رواج یافته است که از آن نه تنها مدفوع، بلکه برای مطالعه ادرار، خون و ... نیز استفاده می شود.

تعدادی روش وجود دارد که اصول فلوتاسیون و ته نشین شدن تخم مرغ را ترکیب می کند. از آن جمله می توان به روش های لین (C. A. Lane)، ریواس (D. Rivas)، گورکینا، دارلینگ (S. T. Darling) اشاره کرد. یکی از این روش‌های شناورسازی-رسوبی و همچنین روش تخلیه‌های متوالی، توسط N.V. Demidov (1963، 1965) برای تحقیق در مورد فاسیولیازیس و دیکروسلیوز پیشنهاد شد.

روشهای کمی

روش استول(N. R. Stoll، 1926). در یک لوله آزمایش پهن مدرج یا فلاسک (با دو علامت: 56 و 60 میلی لیتر)، محلول هیدروکسید سدیم غیر طبیعی تا نقطه اول ریخته می شود، مدفوع اضافه می شود تا سطح مایع به علامت دوم برسد، با یک میله شیشه ای کاملا مخلوط می شود و 10 مهره شیشه ای یا سنگریزه های ریز را گذاشته، درب را بسته و به مدت 1 دقیقه تکان دهید. به سرعت، به طوری که سوسپانسیون ته نشین نشود، 0.075 میلی لیتر از مخلوط (0.005 گرم مدفوع) با یک پیپت مدرج جمع آوری می شود، به یک لام شیشه ای با شبکه ای که روی آن اعمال شده است، با یک لغزش پوشانده می شود و تخم کرم ها در آن قرار می گیرند. آماده سازی زیر میکروسکوپ شمارش می شود. با ضرب عدد حاصل در 200، تعداد تخم های موجود در 1 گرم مدفوع را بدست آورید. برای نتیجه دقیق تر، تخم مرغ ها را در دو یا چند آماده سازی شمارش می کنند و میانگین گرفته می شود. روش استول برای تهاجمات ضعیف غیر حساس است. بنابراین، شمارش تعداد تخم‌ها در فرآورده‌های تهیه‌شده با روش‌های مختلف شناورسازی یا ته‌نشینی، به شرطی که دائماً از مدفوع و ظروف با حجم یکسان استفاده شود، شمارش شود. اسمیر غلیظ کاتو نیز استفاده می شود.

روش بیور(R. C. Beaver, 1950). یک اسمیر استاندارد تهیه می شود که چگالی آن با استفاده از الکتروفتومتر تعیین می شود و سپس تمام تخم های کرم در آن شمارش می شود.

روش های هلمینتولارووسکوپی

روش برمن(G. Baermann، 1917). 5-10 گرم مدفوع تازه دفع شده روی مش فلزی در یک قیف شیشه ای قرار می گیرد که در انتهای باریک آن یک لوله لاستیکی با گیره قرار داده شده است. برای جلوگیری از آلودگی رسوبات به ذرات مدفوع، توصیه می شود کاغذ (روی مش) قرار داده شود یا ذغال حیوانی یا آرد ذرت به مدفوع اضافه شود. قیف تا زمانی که با مدفوع تماس پیدا کند با آب گرم (t ° 45-50) پر می شود. به دلیل گرماگرایی، لاروها به طور فعال وارد آب گرم می شوند و به تدریج در قسمت پایین قیف، بالای گیره تجمع می یابند. پس از 3-4 ساعت، گیره باز می شود، مایع در 1-2 لوله آزمایش پایین می آید، به مدت 2-3 دقیقه سانتریفیوژ می شود، لایه بالایی تخلیه می شود و رسوب بر روی یک لام شیشه ای زیر میکروسکوپ بررسی می شود.

روشی برای تشخیص میرسیدیا شیستوزوم. مدفوع در تاریکی در دمای 8-10 درجه شسته می شود و رسوب به مدت 45 دقیقه نگهداری می شود. در نور روشن در دمای 28 درجه سانتیگراد، سپس در یک فلاسک تیره با یک لوله در کناره بریزید. میرسیدیاها در یک لوله جانبی شفاف متمرکز می شوند که از آنجا می توان آنها را جدا کرد.

از روش های Fülleborn و دیگران نیز برای تشخیص لارو کرم قلابدار استفاده می شود.

روش های مطالعه سایر ترشحات و همچنین بافت ها و اندام ها

خوب. 100 میلی لیتر ادرار آزمایش به مدت 30 دقیقه ایستاده است. در یک استوانه و پس از برداشتن لایه بالایی، 10-15 میلی لیتر رسوب را در یک لوله آزمایش بریزید، 1-2 دقیقه با سرعت 1500 دور در دقیقه سانتریفیوژ کنید. رسوب بررسی می شود. توصیه می شود کل قسمت روزانه ادرار جمع آوری شود.

شیستوزومیازیس ادراری تناسلی با شناسایی میرسیدیا تشخیص داده می شود. بخشی از ادرار تازه به مدت 5 دقیقه سانتریفیوژ می شود، رسوب در یک فلاسک سیاه رنگ ریخته می شود، یک لوله شیشه ای شفاف به قسمت بالای برش لحیم می شود. آب به نسبت 1:5، 1:10 اضافه می شود و به مدت 2 ساعت در ترموستات در دمای 25-30 درجه سانتیگراد قرار می گیرد. میراسیدی‌هایی که از تخم‌ها بیرون می‌آیند از طریق یک لوله شفاف با چشم غیرمسلح به شکل نقاطی که به سرعت در حال حرکت هستند قابل مشاهده هستند. در hron، شکل شیستوزومیازیس در بیماران در پایان خون ادراری اختصاص داده می شود، اما تخمک در ادرار به ندرت یافت می شود، بنابراین توصیه می شود که به بیوپسی از مثانه متوسل شوید.

بررسی خلط.خلط ممکن است حاوی تخم های پاراگونیموس، شیستوزوم، تومینکس، لارو نماتدهای مهاجر، قطعات مثانه اکینوکوک باشد. کل قسمت خلط تحویلی به دقت با چشم غیر مسلح یا زیر ذره بین بررسی می شود، تمام ضایعات قابل مشاهده از بافت، خوشه های زنگ زده و غیره انتخاب و بررسی می شوند. سپس کل قسمت را با سکته مغزی مشاهده کنید. خلط چرکی را با مقدار مساوی محلول قلیایی سوزاننده 0.5% ریخته و سانتریفیوژ کرده و رسوب را بررسی می کنند.

با برخی از کرم ها، تغییرات مشخصه در خلط مشاهده می شود. به عنوان مثال، با پاراگونیمیازیس، در خلط، خوشه‌هایی از تخم‌ها به شکل توده‌های زرد رنگ و همچنین مقدار زیادی مخاط، لکوسیت‌ها، گلبول‌های قرمز، سلول‌های آلوئولی، مارپیچ‌های Kurschmann، الیاف الاستیک، کریستال‌های Charcot-Leiden یافت می‌شوند. کریستال های لوزی مشخص با انتهای نوک تیز نیز آشکار می شوند. وجود تعداد زیادی ائوزینوفیل باعث تمایز پاراگونیمیازیس از سل می شود.

بررسی محتویات آبسه ها و نقطه ها. در ترشحات چرکی آبسه ها و همچنین در تومورها و کیست های برداشته شده در حین جراحی، کرم ها، قطعات آنها، لاروها و تخم ها (اکینوکوک، آلوئوکوک، اسپارگانوم، سیستیسرکوس، دیروفیلاریا، کرم های گرد، توکسوکارا، پاراگونیموس و غیره) یافت می شوند. تکنیک تحقیق رایج است. در برخی موارد، بخش های بافت شناسی از بافت های تومور تهیه می شود. محتویات چرکی را می توان با روش Telemann پردازش کرد. مایع شفاف مانند محتویات دوازدهه با افزودن اتر سولفوریک بررسی می شود. مایع اکینوکوک سانتریفیوژ می شود و رسوب از نظر وجود اسکولکس و قلاب بررسی می شود. بر اساس Ziehl-Nelsen آماده سازی با carbolfuchsin رنگ آمیزی می شود.

مطالعه خونمیکروفیلاریا و لارو نماتدهای مهاجر در خون یافت می شوند. یک قطره خون از انگشت یا لاله گوش گرفته می شود و تازه معاینه می شود یا از آن آماده سازی می شود.

یک قطره خون روی یک لام شیشه ای با یک مربع وازلین قرار داده می شود و به آرامی با یک ورقه پوششی فشار داده می شود. در زیر میکروسکوپ، میکروفیلاریا در حال حرکت بین سلول های خونی دیده می شود. خون را می توان بین دو لایه نوار چسب سلولزی قرار داد. میکروفیلاریا به مدت 6 ساعت متحرک باقی می ماند. در یک آماده سازی کاملاً خشک شده، آنها را می توان در زیر میکروسکوپ در عرض 30 روز تشخیص داد. گونه های میکروفیلاریا را فقط می توان در اسمیرهای رنگی یا قطره های غلیظ شناسایی کرد. فرآورده های آماده شده بر اساس رومانوفسکی - گیمسا، رایت، زیهل-نلسن، لیشمن، پاپانیکولائو خشک، همولیز و رنگ آمیزی می شوند (به روش رنگ آمیزی رایت، روش رومانوفسکی-گیمسا، روش زیهل-نلسن مراجعه کنید). با یافتن میکروفیلاریا در یک قطره خون رنگ آمیزی شده طبق رومانوفسکی-گیمسا، این دارو علاوه بر این با هماتوکسیلین هانسن رنگ آمیزی می شود. بعد از 15-60 دقیقه 2 دقیقه شسته شد در آب روان آماده سازی رنگ آمیزی شده در محلول اسید هیدروکلریک 0.2٪ متمایز می شود. کلاهک میکروفیلاریا به رنگ بنفش کم رنگ و ماده هسته ای بدن به رنگ بنفش تیره در می آید.

برای آلودگی های خفیف، 2 تا 10 یخ خون باید با یک ضد انعقاد (مثلا محلول سیترات سدیم 5 درصد) با یکی از روش های زیر بررسی شود.

روش نات (J. Knott، 1939)، اصلاح شده توسط Markell و Foge (E. K. Markell، M. Voge، 1965). 2 میلی لیتر خون در یک لوله سانتریفیوژ با 10 کیسه اسید استیک 1% مخلوط شده و به مدت 2 دقیقه سانتریفیوژ می شود. در 1500 دور در دقیقه؛ لایه سطحی تخلیه می شود، رسوب بر روی چندین لام شیشه ای توزیع شده و زیر میکروسکوپ بررسی می شود. آماده سازی ها را می توان بر اساس رومانوفسکی-گیمسا یا روش های دیگر رنگ آمیزی کرد.

روش فیلتراسیون بل (D. R. Bell، 1967). در دستگاهی متشکل از یک قیف فولادی ضد زنگ با سوراخ مستطیلی و فیلترهای غشایی به همان شکل، به اندازه 19 در 42 میلی متر، با اندازه منافذ 0.8 تا 5 میکرومتر، خون در لوله های آزمایش فیلتر شده و در مخلوطی از همولیز می شود. 1 میلی لیتر مایع شوینده تیپول و 9 میلی لیتر فیزیول، محلول (برای تسریع در فیلتراسیون، دستگاه به پمپ خلاء متصل می شود). فیلتر در آب مقطر در حال جوش ثابت می شود و مطابق رومانوفسکی-گیمسا یا هماتوکسیلین ارلیخ داغ رنگ می شود. فیلتر رنگی در یک خشک کن یا در الکل ایزوپروپیل (به طور متوالی در 3 فنجان) خشک می شود، روی شیشه با روغن غوطه وری شفاف می شود و زیر یک لپه بررسی می شود. آماده سازی رنگ شده برای چند هفته ذخیره می شود. روش بل موثرترین روش برای شمارش کمی میکروفیلاریا در خون است.

روش با پلی ویدون گلدسمید نیز استفاده می شود.

تحقیق پوستدر پوست می توان میکروفیلاریاهای یک کلیسای انکو و لارو کرم های حیوانات را پیدا کرد که باعث ایجاد شکل پوستی لارو مهاجر می شود (نگاه کنید به). برش های پوستی یا مواد به دست آمده از زخم در ران، ساق پا، باسن یا در سطح عضله دلتوئید گرفته می شود. یک قطعه مخروطی شکل از اپیدرم با یک سنجاق حشره شناسی بلند می شود و با تیغ بریده می شود و روی شیشه در یک قطره محلول فیزیول بررسی می شود. اگر نتیجه منفی باشد، آماده سازی تازه پس از 10 دقیقه دوباره بررسی می شود. لاروها معمولاً در امتداد لبه های آماده سازی موضعی می شوند. مواد دریافتی را می توان در 2 میلی لیتر فیزیول، محلول ظرف 1-2 ساعت نگهداری کرد. و رسوب را بررسی کنید. توصیه می شود 5 برش پوست از بیمار گرفته شود.

آماده سازی آماده سازی از خون و مایع بافتی آزاد شده پس از فشرده سازی قوی برش ها امکان پذیر است. قطره ها بر اساس مایر، رومانوفسکی-گیمسا یا هماتوکسیلین دلافیلد رنگ آمیزی می شوند.

روش استاندارد برای تعیین کمیت تهاجم ناحیه بیوپسی شده پوست. 3-5 میلی متر و وزن حداقل 1-4 میلی گرم وزن کنید، به قطعات کوچک برش دهید و لاروها را زیر میکروسکوپ در فیزیول بشمارید. محلول روی یک اسلاید شیشه ای؛ 1-4 لارو در میدان دید با علامت +، 5-9 لارو - با علامت ++، 10-19 - با علامت +++، 20 یا بیشتر - با علامت + + + + مشخص می شوند. حسابداری کمی برای انجام آماده سازی های رنگ آمیزی راحت تر است.

آزمایش تریکینوز، سیستیسرکوز و شیستوزومیازیس

شناسایی لارو تریچینلا

روش فشرده سازی.تکه‌ای از عضله دوسر یا عضله گاستروکنمیوس (نزدیک تاندون)، که با جراحی آسپسیس گرفته می‌شود، با سوزن‌های کالبد شکافی به الیاف نازک جداگانه تقسیم می‌شود و بین دو لام شیشه‌ای در یک قطره گلیسیرین فشرده می‌شود تا آماده‌سازی نازک و شفاف شود. لاروهای تریچینلا به وضوح زیر میکروسکوپ با میدان دید تاریک قابل مشاهده هستند. تحقیق بر روی چند قطعه ماهیچه در کمپرسوریوم های مورد استفاده در دامپزشکی موثر است. تمرین، به ویژه در ترشینلوسکوپی های خاص.

روش هضم بچمن(G. W. Bachman, 1928). 1 و ماهیچه های خرد شده را با 60 میلی لیتر آب معده مصنوعی (0.5 گرم پپسین؛ 0.7 میلی لیتر اسید هیدروکلریک غلیظ؛ 100 میلی لیتر آب) ریخته و به مدت 18 ساعت انکوبه می کنند. در ترموستات در دمای 37 درجه؛ لایه بالایی مایع تخلیه می شود، آب گرم (درجه حرارت 37-45 درجه) به رسوب اضافه می شود و در دستگاه Bermann ریخته می شود. یک ساعت بعد، مایع را در لوله آزمایش پایین می آورند، سانتریفیوژ می کنند و رسوب را بررسی می کنند. اگر لاروها در کپسول های کلسیفیه محصور شوند، ابتدا آنها را در محلول هیدروکلریک، نیتروژن یا اسید سولفوریک کلسیم زدایی می کنند.

سنجش زیستی. تکه‌های ماهیچه‌های مورد مطالعه به موش‌ها یا موش‌های سفید تغذیه می‌شوند. پس از 2-3 روز، تریچینلا بالغ جنسی در محتویات اثنی عشر و پس از 2-3 هفته، لارو در عضلات دیافراگم و زبان یافت می شود.

بخش های بافت شناسیتکه های ماهیچه در مایعات بوئین، زنکر یا سایر مایعات ثابت می شوند. برش ها به روش معمول بر روی میکروتوم تهیه شده و با هماتوکسیلین دلافیلد رنگ آمیزی می شوند.

شناسایی سیستیسرک ها

یک قطعه عضله، بافت همبند و غیره با چشم غیرمسلح معاینه می شود، سیستیسرک به دقت جدا می شود - یک وزیکول شفاف مایل به سفید به اندازه 1-2 سانتی متر، بین دو لام شیشه ای در یک قطره گلیسیرین له شده و تحت بررسی قرار می گیرد. میکروسکوپ برای تعیین زنده ماندن سیستیسرک های جدا شده از بافت ها، آنها را در محلول 50 درصد صفرا برای فیزیول نگهداری می کنند. محلول در ترموستات در دمای 37 درجه؛ بعد از 10-60 دقیقه سر یک سیستیسرک زنده به سمت بیرون می چرخد. سیستیسرک های کلسیفیه شده قبلاً با محلول 4 درصد اسید نیتریک به مدت یک ساعت کلسیم زدایی می شوند.

تشخیص تخمک های شیستوزومی

در hron، اشکال شیستوسوماتوز، زمانی که تشکیل گرانولوم از آزاد شدن تخمک از بافت ها به مجرای روده یا مجرای ادرار جلوگیری می کند، از نمونه برداری از مخاط رکتوم استفاده می شود که با قاشق مخصوص با استفاده از رکتوسکوپی انجام می شود. انتخاب محل با ضایعه قابل مشاهده قطعه بیوپسی بین دو لام شیشه ای خرد شده و زیر میکروسکوپ بررسی می شود. اگر نتیجه منفی باشد، قطعات در محلول 4 درصد قلیایی سوزاننده شفاف شده و از آنها گیستول تهیه می شود. برش ها بیوپسی از مخاط ژژنوم به صورت خوراکی انجام می شود و مواد به دست آمده با روش فشرده سازی یا گیستول بررسی می شود، برش هایی از آن تهیه می شود. در برخی موارد شیستوزومیازیس تناسلی ادراری، تشخیص تنها بر اساس بیوپسی اندووزیکال انجام می شود. با شکل کبدی شیستوزومیازیس، بیوپسی سوراخی از کبد انجام می شود. گیستول از مواد به دست آمده مقاطع تهیه شده و زیر میکروسکوپ فلورسنت بررسی می شود. یک میکروسکوپ فلورسنت با میدان استفاده تاریک و برای بررسی بافت کبد برای تخم‌های شیستوزوم. هنگامی که شیستوزوم ها دستگاه تناسلی زنان را تحت تأثیر قرار می دهند، ترشحات با استفاده از یک آینه واژن جمع آوری می شود یا تکه هایی از غشای مخاطی دهانه رحم با یک قاشق تیز گرفته می شود. مواد دریافتی زیر میکروسکوپ روی شیشه در محلول فیزیول قطره ای بررسی می شود.

تحقیق در مورد انتروبیازیس و تنیدوز

خراش دادن پری مقعد (توصیه می شود در عصر، 1 تا 1.5 ساعت پس از رفتن بیمار به رختخواب، یا صبح قبل از توالت انجام شود). با یک کبریت که به صورت اریب بریده شده و در یک قطره مایع مرطوب شده است (فیزیول، محلول، آب جوشیده یا محلول 2 درصد بی کربنات سودا)، روی یک لام شیشه ای قرار داده شده، آیا این کار را با دقت انجام دهم؟ خراشیدن از غشای مخاطی مقعد و چین های اطراف آن (از مرکز به بیرون). مخاط جمع‌آوری‌شده در پایان مسابقه با لبه پوشش به صورت قطره‌ای از مایع روی لام خراشیده می‌شود و با همان لام پوششی پوشانده می‌شود. در معاینات انبوه، زمانی که سوهان در کودکان یا سایر موسسات انجام می شود، کبریت مصرف شده را در یک قطره مایع روی لام قرار می دهند، پس از خشک شدن، قطره ها را با لام دیگری پوشانده و به آزمایشگاه تحویل می دهند، در کاغذ پیچیده می شوند و با آن محکم می شوند. یک باند الاستیک برای مطالعه مخاط رکتوم، از دستگاه خاصی استفاده می شود - لوله Shakhmatov یا Ziemann، که با آن مخاط از رکتوم گرفته می شود و اسمیر زیر میکروسکوپ بررسی می شود.

روش سواب پنبه ای. به بیماران یک لوله آزمایش با یک سواب پنبه ای روی شیشه یا چوب چوبی در خانه داده می شود. صبح، بیمار چین های اطراف مقعد را با سواب مرطوب شده با آب جوشیده پاک می کند و در لوله آزمایش با مقدار کمی آب قرار می دهد. در آزمایشگاه، سواب ها در همان لوله با مقدار جدیدی از آب شسته می شوند و رسوب پس از سانتریفیوژ بررسی می شود.

روش سلفون هال (M. C. Hall, 1937). یک تکه سلفون مربعی با یک نوار لاستیکی روی یک میله شیشه ای تقویت شده است. خراش دادن با سلفون خشک انجام می شود و در لوله آزمایش قرار می گیرد. در آزمایشگاه، سلفون کمی از چوب جابجا می شود و با بریدن نوک آن با قیچی، آن را روی یک اسلاید شیشه ای صاف می کنیم. با یک محلول هیدروکسید سدیم غیر طبیعی مرطوب شده، با یک ورقه پوششی پوشانده شده و زیر میکروسکوپ بررسی می شود.

روش نوار سلولزی گراهام (C. F. Graham, 1941). نواری از نوار سلولزی با قسمت چسبنده‌اش به چین‌های دور مقعدی سوژه فشار داده می‌شود، سپس با همان سمت به لام و بدون لغزش پوششی بررسی می‌شود. می توانید یک قطره تولوئن اضافه کنید. VV Kaledin (1972) پیشنهاد کرد که برای این منظور از دیسک های سلولوئیدی بریده شده از فیلم اشعه ایکس شسته شده و مرطوب شده با گلیسیرین استفاده شود. دیسک ها بر روی یک اسلاید شیشه ای در یک قطره چسب سیلیکات بررسی می شوند. از روش نوار سلولزی می توان برای بررسی لباس زیر کودکان نیز استفاده کرد.

خراشیدن زیر زبانی. لبه های ناخن، بستر ناخن، فضاهای زیر زبانی با محلول 0.5-1٪ قلیایی سوزاننده مرطوب شده و با سواب های پنبه ای مرطوب پاک می شوند. سواب ها با همان محلول در لوله های سانتریفیوژ قرار می گیرند، سانتریفیوژ می شوند و رسوب بررسی می شود.

روش های مطالعه اشیاء محیطی برای تخم و لارو کرم ها (مطالعات بهداشتی و کرم شناسی)

تحقیقات به منظور تعیین میزان آلودگی اشیاء محیطی با تخم و لارو کرم ها انجام می شود. از داده های دریافتی برای ارزیابی یک منزلت استفاده می شود. وضعیت موسسات و شرکت ها و اثربخشی اقدامات در حال انجام برای مبارزه با کرمی.

هنگام مطالعه میزان آلودگی اشیاء مختلف محیطی با تخم‌ها و لاروهای کرم و ارزیابی نقش آن‌ها در اپیدمیولوژیک کرمی، مهم است که نه تنها تعداد تخم‌های یافت شده، بلکه زنده بودن و تهاجمی بودن آنها نیز مشخص شود: ) از نظر ظاهری، زیر میکروسکوپ. ب) رنگ آمیزی با رنگ های مختلف، از جمله رنگ های درخشان. به عنوان یک قاعده، تخم های زنده و لاروها رنگ نمی گیرند. ج) کشت در شرایط بهینه تا مرحله تهاجمی. د) عفونت حیوانات آزمایشگاهی (زیست سنجی).

مطالعات آب و فاضلاب. برای یک مطالعه، 10-25 لیتر آب (رودخانه ها، دریاها، برکه ها، استخرها، لوله های آب) و 1-2-5 لیتر فاضلاب استفاده می شود.

روش 3. G. Vasilkova (1941). آب یا فاضلاب از طریق اولترافیلترهای غشایی در دستگاه گلدمن که شامل یک قیف شیشه ای یا فلزی با فیلترهایی است که توسط یک حلقه نازل به فلاسک Bunsen متصل می شود، فیلتر می شود. برای سرعت بخشیدن به فرآیند فیلتراسیون، یک پمپ خلاء به دستگاه متصل می شود. پس از فیلتراسیون، فیلترهای غشایی در زیر میکروسکوپ بررسی می‌شوند و با محلول گلیسرول 50 درصد پاک می‌شوند. رسوب انباشته شده تمیز می شود و به طور جداگانه به صورت اسمیر مشاهده می شود. دستگاه های فیلتراسیون و طرح های دیگر استفاده می شود.

روش G. Sh. Gudzhabidze و G. A. Yudin (1963) برای مطالعه سیال فاضلاب. 1 لیتر مایع به مدت 2 ساعت در یک سیلندر Lisenko ته نشین می شود. رسوب حاصل (5-9 میلی لیتر) مانند مطالعه خاک (به زیر مراجعه کنید) درمان می شود.

روش N. A. Romanenko (1967). به 1 لیتر مایع زائد که در یک استوانه شیشه ای با ظرفیت 1200-1500 میلی لیتر قرار داده شده است، 0.4-0.6 گرم سولفات آلومینیوم یا کلرید آهن (به منظور انعقاد که روند ته نشینی ذرات معلق را تسریع می کند) اضافه کنید و بعد از آن. 40 دقیقه. مخلوط به مدت 3 دقیقه سانتریفیوژ می شود. در 1000 دور در دقیقه؛ لایه بالایی تخلیه می شود و برای حل کردن تکه ها، 1-2 میلی لیتر محلول 3٪ اسید کلریدریک و سپس 150 میلی لیتر محلول اشباع نیترات سدیم اضافه کنید. رسوب مانند خاک بررسی می شود.

تحقیق خاک

آلودگی خاک با تخم های کرم به منظور شناسایی کانون های کرمی و ارزیابی اثربخشی توانبخشی آنها تعیین می شود.

روش 3. G. Vasilkova و V. A. Gefter (1948). 12.5 گرم خاک در لوله های آزمایش (100 میلی لیتر) ساخته شده از فولاد ضد زنگ یا برنج با 20 میلی لیتر محلول قلیایی سوزاننده 5٪ مخلوط می شود و 10 دانه شیشه ای یا سنگریزه های کوچک اضافه می شود. لوله ها با درپوش های لاستیکی بسته شده و به مدت 20 دقیقه تکان داده می شود. در شیکر یا با دست پس از برداشتن پلاگ ها، لوله های آزمایش به مدت 3-5 دقیقه سانتریفیوژ می شوند، مایع سطح تخلیه می شود، 60-80 میلی لیتر محلول اشباع نیترات سدیم به رسوب اضافه می شود و پس از مخلوط شدن کامل، دوباره به مدت 3-5 سانتریفیوژ می شود. دقایق. در این فیلم سطحی با تخم مرغ های شناور با لمس سطح مخلوط با یک حلقه پیچیده (5-6 حلقه متصل به یک میله مشترک) برداشته می شود و به یک لیوان آب منتقل می شود. مخلوط با همان محلول، سانتریفیوژ. کل روش حداقل 3 بار تکرار می شود. محتویات شیشه، جایی که فیلم منتقل می شود، با آب رقیق می شود و از طریق فیلترهای غشایی فیلتر می شود که زیر میکروسکوپ در یک قطره گلیسرول بررسی می شود.

روش 3. G. Vasilkova و V. A. Gefter اصلاح شده توسط A. A. Namitokov (1961) با روش اصلی تفاوت دارد زیرا به جای مطالعه آماده سازی فیلم، از نیمی از محتویات لوله استفاده می شود (هر بار یک بخش جدید از محلول اشباع سدیم اضافه می شود. نیترات)، فیلتر شده و فیلترها را بررسی کنید.

N. A. Romanenko (1968) توصیه می کند که نمونه های خاک و لجن فاضلاب برای تخم های کرمی با استفاده از دستگاه پیشنهاد شده توسط G. Sh. Gudzhabidze بررسی شود. 50 گرم خاک به مدت 1 دقیقه کاملاً مخلوط می شود. در 150 میلی لیتر آب در لوله های سانتریفیوژ (ظرفیت 250 میلی لیتر) با تیغه های مخصوص که توسط موتور الکتریکی به حرکت در می آیند. مخلوط به مدت 3 دقیقه سانتریفیوژ می شود. در 1000 دور در دقیقه، آب را تخلیه کرده و با اضافه کردن 150 میلی لیتر محلول اشباع نیترات سدیم، مخلوط کرده و دوباره به مدت 3 دقیقه سانتریفیوژ کنید. لوله های آزمایش با نمونه ها در یک پایه قرار می گیرند، محلول نیترات سدیم اضافه می شود تا یک منیسک محدب تشکیل شود، با اسلایدهای شیشه ای (10 × 6 سانتی متر) پوشانده می شود و به مدت 10-15 دقیقه کنار گذاشته می شود، سپس لیوان ها برداشته شده و مورد بررسی قرار می گیرند. این روش حداقل 4 بار تکرار می شود.

تحقیق در مورد لارو کرم ها به روش برمن (1917). 200-400 گرم خاک را در یک قطعه گاز روی توری فلزی (با قطر سوراخ 1-2 میلی متر) روی قسمت پهن قیف شیشه ای که در سه پایه ثابت شده قرار می دهند. یک لوله لاستیکی با یک گیره روی انتهای باریک قیف کشیده شده است. قیف با آب گرم (t ° 50) پر می شود تا قسمت پایین توری با خاک با آب تماس پیدا کند. به دلیل ترموتروپی، لاروها به طور فعال به داخل آب گرم می خزند و با ته نشین شدن در قسمت پایین لوله لاستیکی بالای گیره تجمع می یابند. پس از 3-4 ساعت 50 میلی لیتر از محتویات از قیف در لوله آزمایش خارج شده و سانتریفیوژ شده و رسوب مورد بررسی قرار می گیرد.

تحقیق در مورد سبزیجات، میوه ها و انواع توت ها

به طور عمده سبزیجات، انواع توت ها و میوه هایی که بدون عملیات حرارتی خورده شده اند را بررسی کنید. روش 3. G. Vasilkova (1948). 10-5 عدد سبزی یا میوه (تقریباً 5/0 کیلوگرم) یا 100 تا 200 گرم سبزی (کاهو، پیاز سبز) را به مدت چند ساعت با آب در شیشه های شیشه ای دهان گشاد با درب آسیاب شده ریخته و به مدت 20-10 دقیقه تکان دهید. . در شیکر یا با دست آب تخلیه می شود، اشیاء مورد مطالعه با آب تمیز شسته می شوند و تمام آب شستشو در دستگاه گلدمن فیلتر می شود. فیلترها با پاکسازی با گلیسیرین بررسی می شوند. می توانید فیلترها را با محلول 25% لوگول در گلیسیرین رنگ آمیزی کنید. در همان زمان، تخم کرم ها قهوه ای می شوند و در بین دانه های نشاسته آبی رنگ به راحتی قابل تشخیص هستند. رسوبات بزرگ مانند خاک رفتار می شود.

مطالعه سواب از وسایل خانه و دست. یک برس چسب (یا یک سواب پنبه ای پیچیده شده در یک تکه پارچه نایلونی) آغشته به محلول 2٪ بی کربنات سودا به طور مکرر روی جسم یا دست های مورد بررسی انجام می شود و پس از آن در همان محلول ریخته شده در یک محلول شستشو داده می شود. لوله آزمایش در آزمایشگاه، برس ها و سواب ها با آب تمیز شسته می شوند. تمام آب شستشو سانتریفیوژ شده و رسوب بررسی می شود.

روش V. A. Gefter (1960). جمع آوری گرد و غبار از موجودی نرم با یک جاروبرقی متصل به قیف که از 2 قسمت قابل جدا شدن تشکیل شده است کارآمدتر است: یک فیلتر غشایی روی سطح قسمت پایینی که با توری فلزی یا پلاستیکی پوشانده شده قرار می گیرد و با قرار دادن آن تقویت می شود. بالای قیف قیف مونتاژ شده با یک لوله لاستیکی به شیلنگ جاروبرقی متصل می شود. گرد و غبار به مدت 3 دقیقه از جسم جمع آوری می شود و پس از آن فیلتر برداشته شده و با فیلتر جدید جایگزین می شود. در آزمایشگاه، فیلترها در زیر میکروسکوپ مشاهده می شوند که با گلیسیرین پاک شده اند. اگر لایه گرد و غبار روی فیلتر بزرگ باشد، آن را خراشیده می کنند و به عنوان لکه می بینند یا مانند خاک رفتار می کنند.

روش های تشخیص ایمونولوژیک

امکان استفاده از ایمونول. روش‌های تشخیص هلمینتیازها به دلیل توانایی کرم‌ها در تولید آنتی‌ژن‌های فعال است که بر سلول‌های سیستم ایمنی میزبان تأثیر می‌گذارد و تولید آنتی‌بادی‌ها را تحریک می‌کند. موثرترین روش های تشخیص ایمنی برای کرم های روده ای، زمانی که اسرار و دفع کرم ها با فعالیت آنتی ژنی مستقیماً وارد خون میزبان می شود. ایمونول، واکنش ها برای تشخیص آسکاریاز، تریچینوز، فیلاریازیس، شیستوسوماتوز، اکینوکوکوز و آلوئوکوکوز، سیستیسرکوز، پاراگونیمیازیس، کمپلکس علائم لارو مهاجر- (توکسوکاریاز، آنژیوسترانگیلوز) و غیره) و تست داخل پوستی استفاده می شود. آنتی‌ژن‌ها از لاروها و کرم‌های بالغ با استفاده از عصاره‌های نمکی هموژنه‌های بافت‌های تازه منجمد یا لیوفیلیزه و همچنین مایعات فعال بیولوژیکی مختلف (مایع تاول‌های اکینوکوک، مایع حفره‌ای آسکاریس و غیره) تهیه می‌شوند. با توجه به اینکه کرم ها ساختار آنتی ژنی بسیار پیچیده ای دارند و در موزاییک آنتی ژنی آنها اجزا و عوامل تعیین کننده فردی وجود دارد که با انواع دیگر کرم ها، باکتری ها و آنتی ژن های میزبان واکنش متقابل دارند، روش هایی برای پاکسازی آنها از اجزای غیر اختصاصی در حال توسعه است. فراکشن با روش های مختلفی انجام می شود: فیلتراسیون ژل در ستون ها با سفادکس، کروماتوگرافی تبادل یونی روی DEAE-Sephadex، تیمار با اسیدها و غیره. آنتی ژن های فرکشنال معمولاً دارای ویژگی بالاتری نسبت به عصاره های کامل هستند، در حالی که فعالیت آنها تقریباً یکسان است. روش‌های تشخیص ایمنی به طور فزاینده‌ای مورد استفاده قرار می‌گیرند. از واکنش‌ها نه تنها برای کامل‌ترین و زودهنگام‌ترین تشخیص بیماران، بلکه برای مطالعه کانون‌ها و مطالعه اپیدمیولوژیک هلمینتیازها نیز استفاده می‌شود.

واکنش های سرولوژیکیواکنش ریز رسوب روی لاروهای زنده برای تشخیص نماتدها - مرحله پیش از تصور آسکاریازیس، آنکیلوستومیدوز، تریچینوزیس استفاده می شود. واکنش 5-10 روز پس از عفونت مثبت می شود (آسکاریازیس، آنکیلوستومیدوز) و 90-100 روز ادامه می یابد. آنتی ژن لارو نماتد زنده جدا شده از بافت حیوانات آزمایشگاهی آلوده به آزمایش است. لاروهای انتخاب شده با فیزیول استریل، محلول و آب مقطر و 10 تا 15 کپی به طور کامل از پروتئین میزبان شسته می شوند. با یک پیپت پاستور روی یک لام شیشه ای استریل با چاهک قرار می گیرد. 2-3 قطره از سرم آزمایش را بریزید، با یک نوار استریل بپوشانید، در یک محفظه مرطوب (ظرف پتری که با کاغذ صافی مرطوب پوشانده شده است) قرار دهید و به مدت 24-48 ساعت انکوبه کنید. در یک ترموستات در دمای 37 درجه. با یک واکنش مثبت در زیر بزرگنمایی کم میکروسکوپ، توده های سفید مایل به خاکستری، کمی مادی از رسوبات به شکل کروی یا زیگزاگ در اطراف دهان و مقعد لارو قابل مشاهده است. راندمان واکنش به 85-95٪ می رسد.

واکنش رسوب حلقه ای توسط V. P. Pashuk (1957) برای تشخیص تریکینوزیس ایجاد شد. واکنش در هفته 2-3 بیماری مثبت می شود. راندمان آن به 80-90٪ می رسد. آنتی ژن عصاره پودری از لارو خشک شده در دمای 35 درجه است که از ماهیچه های حیوانات آلوده جدا شده است. در لوله های آزمایش قطر. 0.5 سانتی متر از هر رقت آنتی ژن 0.1 میلی لیتر بریزید و روی آن را با احتیاط لایه برداری کنید (یا تا ته آن را پایین بیاورید) مقدار مساوی از سرم آزمایش را به طوری که مایعات مخلوط نشوند. لوله ها به مدت 30 دقیقه نگه داشته می شوند. در یک ترموستات در دمای 37 درجه و سپس 30-60 دقیقه. در دمای اتاق. با یک واکنش مثبت، یک حلقه ظریف مایل به سفید در مرز تماس بین آنتی ژن و سرم ظاهر می شود که در صورت تکان دادن به راحتی متلاشی می شود.

واکنش رسوب در ژل بر اساس Ouchterlony (O. Ouchterlony، 1949) در ریز اصلاح A. I. Gusev و V. S. Tsvetkov توسط I. A. Ginovker، E. A. Zabozlaeva، A. V. Doronin (1970) برای تشخیص مراحل اولیه ophorchisis پیشنهاد شد. طبق داده های اولیه، بازده آن 87٪ است. آنتی ژن عصاره ای از هموژنه اپیستورکیس تازه منجمد شده از نظر جنسی بالغ جدا شده از کبد گربه است.

واکنش هماگلوتیناسیون غیرمستقیم (نگاه کنید به) با یک تشخیص - یک سوسپانسیون از گلبول های قرمز رسمی و برنزه شده قوچ حساس شده توسط مایع اکینوکوک - ایجاد شد.

LN Stepankovskaya (1972) برای تشخیص اکینوکوکوز و آلوئوکوکوزیس.

RNHA با تشخيص گلبولهاي قرمز فرمالينه شده گوسفند حساس شده با عصاره هموژن سيستيسركهاي تازه منجمد كرم نوار خوك توسط L.M. Konovalova (1973) براي تشخيص سيستيسركوزيس مغز پيشنهاد شد. در 85 درصد موارد موثر است.

RNHA با ascaris diagnosticum برای تشخیص مرحله پیش تصور آسکاریازیس پیشنهاد شده است.

واکنش تثبیت کمپلمان (نگاه کنید به) طبق روش معمول انجام می شود و برای تشخیص تریکینوز و سیستیسرکوز استفاده می شود.

روش آنتی بادی های شب تاب (روش غیر مستقیم). این روش با هموژنه خشک بدون چربی سیستی سرک کرم نواری خوک به عنوان آنتی ژن ثابت شده روی یک لام شیشه ای توسط JI توسعه داده شد. M. Konovalova (1973) برای تشخیص سیستیسرکوز انسانی. همان واکنش با گیستول، بخش هایی از لارو تریکینلا به عنوان یک آنتی ژن برای تشخیص تریکینوز ایجاد شد.

E. S. Leykina، V. A. Gefter.

هنگامی که تخم های کرم بر روی اشیاء مختلف محیطی (خاک، آب، سبزیجات و غیره) یافت می شوند، همیشه لازم است که زنده ماندن آنها از نظر ظاهری، رنگ آمیزی با رنگ های حیاتی، کشت در شرایط بهینه و تنظیم یک نمونه بیولوژیکی تعیین شود.

تغذیه حیوانات آزمایشگاهی

تعیین زنده ماندن تخم ها یا لاروهای کرم در ظاهر. تخمهای هلمینت ابتدا با بزرگنمایی کم و سپس با بزرگنمایی زیاد میکروسکوپ می شوند. در تخم های تغییر شکل یافته و مرده کرم ها، پوسته به سمت داخل پاره یا خم شده است، پلاسما کدر، شل شده است. در تخم‌های تقسیم‌بندی شده، گلوله‌های شکاف (بلاستومرها) از نظر اندازه نابرابر، شکل نامنظم و اغلب به یک قطب منتقل می‌شوند. گاهی اوقات تخمک های غیرطبیعی وجود دارد که با داشتن ناهنجاری های خارجی، به طور طبیعی رشد می کنند. در لاروهای زنده آسکاریدها، دانه بندی ریز فقط در قسمت میانی بدن وجود دارد، همانطور که می میرند، دانه بندی در سراسر بدن پخش می شود، واکوئل های هیالین براق بزرگ ظاهر می شود - به اصطلاح رشته های مروارید.

برای تعیین زنده ماندن تخم های بالغ آسکاریدها، کرم های شلاقی، کرم های سوزنی، حرکات فعال لارو باید با کمی گرم کردن آماده سازی (تا دمای بیش از 37 درجه سانتیگراد) ایجاد شود. مشاهده زنده ماندن لاروهای آسکاریس و کرم شلاق پس از جداسازی آنها از پوسته تخم مرغ با فشار دادن روی شیشه پوششی آماده سازی با سوزن یا موچین تشریح کننده راحت تر است.

در لاروهای مهاجم آسکاریدها اغلب کلاهکی دیده می‌شود که در انتهای سر لایه‌برداری کرده است و در لارو کرم‌های شلاقی که رشد خود را در تخم کامل کرده‌اند، یک استایلت در این مکان با بزرگ‌نمایی زیاد یافت می‌شود. در لاروهای مرده کرم ها، صرف نظر از محل آنها (در تخم یا خارج از آن)، پوسیدگی بدن مشاهده می شود. در این حالت ساختار داخلی لارو توده ای یا دانه ای می شود و بدن کدر و کدر می شود. واکوئل ها در بدن یافت می شوند و شکاف هایی روی کوتیکول یافت می شوند.

زنده ماندن انکوسفرهای تنیدی (گاو، کرم نواری خوک و غیره) با حرکت جنین ها زمانی که در معرض آنزیم های گوارشی قرار می گیرند تعیین می شود. تخم ها روی یک شیشه ساعت با آب معده سگ یا آب دوازدهه مصنوعی قرار می گیرند. ترکیب دومی: پانکراتین 0.5 گرم، بی کربنات سدیم 0.09 گرم، آب مقطر 5 میلی لیتر. شیشه های ساعت همراه با تخم مرغ در ترموستات 36-38 درجه سانتیگراد به مدت 4 ساعت قرار می گیرند در این صورت جنین های زنده از پوسته خارج می شوند. پوسته انکوسفرهای زنده نیز در پپسین اسیدی شده و در محلول قلیایی تریپسین پس از 6-8 ساعت در ترموستات 38 درجه سانتی گراد حل می شود.

اگر تخم‌های تنید در محلول 1% سولفید سدیم یا محلول 20% هیپوکلرید سدیم یا محلول 1% آب کلر در دمای 36-38 درجه سانتیگراد قرار داده شوند، جنین‌های بالغ و زنده از غشاها آزاد می‌شوند و این کار انجام می‌شود. به مدت 1 روز تغییر نمی کند انکوسفرهای نابالغ و مرده کوچک یا متورم می شوند و به شدت افزایش می یابند و سپس در عرض 10 دقیقه - 2 ساعت "حل می شوند". جنین های زنده تنیدها نیز به طور فعال در مخلوطی از محلول 1٪ کلرید سدیم، محلول بی کربنات سدیم 0.5٪ و صفرا در دمای 36- حرکت می کنند. 38 درجه سانتی گراد

زنده ماندن اکینوکوک های اسکولکس با حرارت کم تعیین می شود. برای انجام این کار، اسکولکس ها یا کپسول های بچه شسته شده در آب را در یک قطره آب روی یک لام شیشه ای با سوراخ قرار می دهند، با یک ورقه پوششی می پوشانند و زیر میکروسکوپ با مرحله گرمایش در دمای 38-39 درجه سانتیگراد بررسی می شوند. اگر میز گرمایش وجود ندارد، آماده سازی با استفاده از هر منبع گرمایی گرم می شود. در همان زمان، اسکولکس های زنده به طور فعال حرکت می کنند، مکنده ها را کاهش می دهند یا آرام می کنند، پروبوسیس را طولانی و کوتاه می کنند. اگر اسکولکس ها در محلول آبی 0.5-1٪ فیلیسیلن در دمای اتاق قرار داده شوند، تمام اسکولکس های زنده به سرعت تبدیل شده و می میرند. اسکولکس های غیر قابل دوام ظاهر نمی شوند.

زنده ماندن فاسیولیا آدولسکاریه جمع آوری شده از گیاهان و سایر اشیاء آب با بررسی آنها بر روی یک لام شیشه ای در نمک زیر میکروسکوپ با مرحله گرمایش بررسی می شود. با گرم شدن، لاروهای ترماتود در کیست شروع به حرکت می کنند.

زنده ماندن تخم های کرم نواری کوتوله با محل قلاب ها روی جنین تعیین می شود.

در تخم‌های زنده کرم گلوچه، حرکات آهسته آونگ مانند پروتوپلاسم و امتداد و جابجایی تقریباً نامحسوس انتهای نوک تیز جفت قلاب‌های جانبی دور از جفت میانی صورت می‌گیرد.

انقباضات پروتوپلاسم جنین و قلاب های ژرمینال به جنین کمک می کند تا ابتدا خود را از پوسته انکوسفر و سپس از پوسته خارجی تخمک آزاد کند.

در یک تخم زنده، جفت میانی و جفت قلاب‌های جانبی به صورت موازی قرار گرفته‌اند؛ در برخی از تخم‌ها، تیغه‌های جفت‌های جانبی به هم نزدیک شده و با زاویه کمتر از ۴۵ درجه نسبت به جفت میانی قلاب‌ها قرار دارند.

جنین در حال مرگ به طور تشنجی منقبض می شود و به آرامی قلاب ها را از هم جدا می کند. در جنین مرده، حرکت قلاب ها متوقف می شود و آنها به صورت نامرتب چیده می شوند، گاهی اوقات قلاب های جانبی جفت همسایه با زاویه راست، مبهم یا حاد از هم جدا می شوند.

گاهی اوقات چروک شدن جنین، تشکیل دانه بندی مشاهده می شود. روش دقیق تر مبتنی بر ظاهر حرکات انکوسفر در طول تغییر شدید دما است: از 5-10 تا 38-40 درجه سانتیگراد.

تعیین زنده ماندن نماتدهای نابالغ باید در یک محفظه مرطوب (ظروف پتری)، قرار دادن تخم‌های آسکاریس در محلول فرمالین 3٪ تهیه شده در محلول ایزوتونیک کلرید سدیم در دمای 24-30 درجه سانتیگراد، تخم‌های کرم شلاقی در 3٪ بررسی شود. محلول اسید هیدروکلریک در دمای 30-35 درجه سانتیگراد، تخم کرم در محلول ایزوتونیک کلرید سدیم در دمای 37 درجه سانتیگراد. ظروف پتری برای هوادهی بهتر باید هفته ای 1 تا 3 بار باز شوند و دوباره کاغذ صافی را با آب تمیز مرطوب کنید.

مشاهدات رشد تخم کرم کرم حداقل 2 بار در هفته انجام می شود. عدم وجود علائم توسعه در عرض 2-3 ماه نشان دهنده عدم زنده ماندن آنها است. علائم رشد تخم کرم کرم ابتدا مراحل خرد کردن، تقسیم محتویات تخم به بلاستومرهای جداگانه است. در طول روز اول، تا 16 بلاستومر ایجاد می شود که به مرحله دوم - مورولا و غیره منتقل می شود.

تخم‌های کرم قلاب‌دار در یک استوانه شیشه‌ای (به ارتفاع 50 سانتی‌متر و قطر 7 سانتی‌متر) که با درپوش بسته شده است، کشت می‌شوند. مخلوطی از حجم مساوی از ماسه استریل، زغال چوب و مدفوع با تخم کرم قلابدار، رقیق شده با آب تا قوام نیمه مایع، با دقت با استفاده از یک لوله شیشه ای در کف سیلندر ریخته می شود. در طی 1-2 روز استقرار در تاریکی در دمای 25-30 درجه سانتیگراد، لاروهای رابدیتوئید از تخم ها بیرون می آیند و پس از 5-7 روز از قبل فیلاری فرم می شوند: لاروها از دیواره های استوانه می خزند و در آنجا قرار می گیرند. حتی با چشم غیر مسلح نیز قابل مشاهده است. تخم‌های ترماتود که به طور طبیعی در آب رشد می‌کنند، مانند opisthorchis، diphyllobotriid، fasciol و غیره، روی یک شیشه ساعت، یک ظرف پتری یا در ظرف دیگری، لایه کوچکی از آب معمولی ریخته می‌شوند. هنگام کشت تخم فاسیولا، باید در نظر داشت که آنها در تاریکی سریعتر رشد می کنند، در حالی که میراسیدیوم در تخم های زنده در دمای 22-24 درجه سانتیگراد در 9-12 روز تشکیل می شود. هنگام میکروسکوپ تخمک های ترماتود در حال رشد، حرکات میراسیدیوم به وضوح قابل مشاهده است. Fasciola miracidium فقط در نور از پوسته تخم مرغ بیرون می آید. هنگام کشت، آب بعد از 2-3 روز تعویض می شود.

لارو کرم قلابدار و استرونگلوئید روی آگار در ظرف پتری با زغال حیوانی کشت می شود. پس از قرار گرفتن در ترموستات در دمای 26-30 درجه سانتیگراد به مدت 5-6 روز، لاروها روی آگار پخش شدند و مسیری از باکتری را پشت سر گذاشتند (روش Fülleborn).

روش هارادا و موری (1955). 7 میلی لیتر آب مقطر به لوله های آزمایش قرار داده شده در یک قفسه اضافه می شود. 0.5 گرم مدفوع را با یک چوب چوبی بردارید و روی کاغذ صافی (15X150 میلی متر) 5 سانتی متر از لبه سمت چپ اسمیر ایجاد کنید (این عمل برای محافظت از سطح میز آزمایشگاه روی یک ورق کاغذ انجام می شود). سپس نوار حاوی اسمیر در لوله قرار داده می شود تا انتهای چپ بدون اسمیر به پایین لوله برسد. انتهای بالایی با یک تکه سلفون پوشانده شده است و با یک نوار الاستیک محکم پیچیده شده است. روی لوله آزمایش شماره و نام خانوادگی آزمودنی را بنویسید. در این حالت لوله ها به مدت 10-8 روز در دمای 28 درجه سانتی گراد نگهداری می شوند. برای مطالعه کشت، پوشش سلفون را بردارید و بردارید و یک نوار کاغذ صافی را با موچین بردارید. در این مورد باید مراقب بود، زیرا تعداد کمی از لاروهای عفونی می توانند به انتهای بالای کاغذ صافی یا دیواره لوله آزمایش حرکت کرده و به زیر سطح سلفون نفوذ کنند.

لوله ها به مدت 15 دقیقه در یک حمام آب گرم در دمای 50 درجه سانتیگراد قرار می گیرند و پس از آن محتویات تکان داده می شود و به سرعت در یک لوله 15 میلی لیتری ریخته می شود تا لاروها رسوب کنند. پس از سانتریفیوژ، مایع رویی خارج می‌شود و رسوب به یک لام شیشه‌ای منتقل می‌شود که با یک ورقه پوششی پوشانده شده و با بزرگنمایی کم میکروسکوپ می‌شود.

برای تشخیص افتراقی لاروهای فیلاریفرم استفاده از داده های ارائه شده در جدول ضروری است. 13.

روش های رنگ آمیزی تخم مرغ و لارو کرم ها بافت‌های مرده در بیشتر موارد رنگ‌ها را سریع‌تر از بافت‌های زنده درک می‌کنند. این ویژگی ها در کرم شناسی برای تعیین زنده ماندن تخم ها و لاروهای کرم ها استفاده می شود. با این حال، در برخی موارد، برخی از رنگ ها توسط بافت های زنده بهتر از بافت های مرده درک می شوند.

جدول 13. تشخیص افتراقی لاروهای رشته ای A.duodenale، N.americanus، Strongyloides stercoralis، Trichostrongylus spp.

برای تشخیص افتراقی تخم‌ها و لاروهای زنده و مرده از رنگ‌ها و روش‌های زیر استفاده می‌شود.

لکوباز متیلن بلو برای رنگ آمیزی بافت های زنده و مرده استفاده می شود. یک سلول یا بافت زنده متیلن بلو را به یک لکوباز بی رنگ کاهش می دهد؛ بافت مرده این توانایی را ندارد و بنابراین رنگ می گیرد.

برای رنگ آمیزی تخم آسکاریس، می توانید از متیلن بلو در محلول اسید لاکتیک با قلیایی سوزاننده (متیلن بلو 0.05 گرم، سود سوزآور 0.5 گرم، اسید لاکتیک 15 میلی لیتر) استفاده کنید. تخم های زنده رنگ را درک نمی کنند، جنین های تخم های مرده آبی می شوند.

روش رنگ آمیزی برای تخم های کرم گرد و کرم شلاقی نابالغ قابل اجرا نیست. پوسته رنگدانه دار لکه می شود و بنابراین قابل مشاهده نیست که آیا سلول زایای داخل تخمک لکه دار شده است یا خیر.

لارو آسکاریس با محلول پایه رنگ آبی برلیانت-کرسیل با غلظت 1:10 000 به شرح زیر رنگ آمیزی می شود: یک قطره مایع با تخم آسکاریس و یک قطره از محلول رنگ پایه روی یک اسلاید شیشه ای اعمال می شود. آماده سازی با یک روکش پوشیده شده است که با ضربه سبک با سوزن کالبد شکافی محکم به جسم فشار داده می شود. در زیر میکروسکوپ تعداد لاروهای هچ شده و درجه رنگ آمیزی آنها مشاهده می شود و پس از 3-2 ساعت همان آماده سازی مجدداً بررسی می شود.فقط لاروهای تغییر شکل نیافته ای که 2 ساعت رنگ آمیزی نکرده اند زنده در نظر گرفته می شوند.لارو مرده زمانی که لکه می شود. پوسته می شکند (جزئی یا کامل).

امکان رنگ آمیزی آماده سازی با محلول ید در تعیین زنده ماندن تخم پرندگان آسکاریدیا نشان داده شده است. در این حالت از محلول الکل 5 درصد ید به عنوان رنگ استفاده می شود. هنگامی که آن را به دارو استفاده می شود، جنین تخم های آسکارید مرده در عرض 1-3 ثانیه نارنجی می شود. تخم‌های مرده اپیستورچیس و انکوسفرهای کرم گاو با محلول تولویدین آبی (1:1000) و انکوسفرهای مرده کرم گاو با محلول آبی برلیانت کرسیل (1:10000) رنگ‌آمیزی می‌شوند. در همان زمان، جنین و پوسته تخم مرغ مرده و زنده رنگ می گیرند. بنابراین، پس از رنگ آمیزی، تخم ها و انکوسفرها در آب خالص شسته می شوند و علاوه بر آن با سافرانین (رقیق 1:10000 با محلول الکل 10٪) رنگ آمیزی می شوند. الکل رنگ را از پوسته جدا می کند و سافرانین رنگ قرمز به آنها می دهد. در نتیجه، تخم های زنده قرمز رنگ می شوند، جنین تخم های مرده آبی است و پوسته آن قرمز باقی می ماند. جنین های مرده انکوسفرهای کرم گاو به سرعت، در عرض چند دقیقه، به رنگ قرمز روشن یا صورتی با سافرانین یا آبی با الماس-کرسیل آبی در رقت 1:4000 یا با کارمین نیلی در رقت 1:1000-1 رنگ آمیزی می شوند: 2000.

جنین های زنده تحت تأثیر این رنگ ها حتی پس از 2-7 ساعت تغییر نمی کنند.

برای تعیین میزان زنده ماندن تخم‌های کرم نواری، استفاده از رنگ‌های زیر توصیه می‌شود: 1) آبی کرسیلی درخشان (1: 8000) - پس از 1 ساعت، انکوسفر تخم‌های مرده به‌ویژه رنگ‌آمیزی روشن می‌شود که به شدت در برابر رنگ پریده ظاهر می‌شود. یا پس زمینه بی رنگ بقیه تخم مرغ؛ 2) سافرانین: در رقت 1:8000 هنگام قرار گرفتن در معرض 2 ساعت و 1:5000 برای 3-5 ساعت. 3) محلول 50٪ اسید پیروگالیک در رقت 1: 2 - هنگامی که به مدت 1 ساعت در دمای 29-30 درجه سانتیگراد قرار می گیرد (هر چه دما پایین تر باشد، فرآیند رنگ آمیزی طولانی تر است).

پلروسرکوئیدهای زنده کرم نواری به خوبی با محلول آبی (1:1000) دهان خنثی به مدت 5-20 دقیقه رنگ آمیزی می شوند. برای به دست آوردن رنگ صورتی ماندگار که در عرض 5 روز ناپدید نمی شود و بر تحرک پلروسرکوئیدها تأثیر نمی گذارد، معمولاً 10 دقیقه کافی است. درجه رنگ با مشاهده لاروها در محلول کلرید سدیم ایزوتونیک خالص کنترل می شود که پلروسرکوئیدها به طور دوره ای از رنگ حذف می شوند. استفاده از متیلن بلو برای رنگ آمیزی پلروسرکوئیدهای مرده توصیه می شود.

R.E. Chobanov و همکاران (1986) روشی را برای تعیین زنده ماندن تخم ها و لاروهای کرم با استفاده از رنگدانه روبرین به دست آمده از کشت قارچ Peniciliium rubrum به عنوان رنگ پیشنهاد کردند. برای این کار از محلول رنگ آبی 3 درصد استفاده کنید.

فرآیند رنگ آمیزی تخم ها و لاروها پس از 1.5 ساعت تکمیل می شود.تخم های غیرقابل زنده ماندن کرم های سنجاقی، کرم های نواری گاوی و کوتوله، آنکیلوستومیدها، تریکوسترانگیلیدها رنگ صورتی شدید به خود می گیرند، لاروهای آنکیلوستومیدها و تریکوسترانگیلیدها قرمز می شوند. رنگ روشن کمتری در تخم‌های آسکاریس و کرم‌های شلاقی مشاهده می‌شود، زیرا از روده‌ها جدا می‌شوند، آنها قبلاً رنگ قهوه‌ای تیره دارند: تخم‌ها و لاروهای زنده رنگ نمی‌گیرند.

روش های فیزیکوشیمیایی برای تحریک آزادسازی میراکدیا از تخم ترماتود. این روش ها توسط S.M. German و S.A. Beer (1984) برای تعیین زنده ماندن تخم های اپیستورکیا و دی کروسلیوم با قرار دادن تخم ها در محیط واکنش توسعه داده شد. اگر زنده باشند میراسیدیوم بیرون می آید. این روش ها مبتنی بر فعال سازی فیزیکوشیمیایی غده هچینگ میراسیدیوم و تحریک فعالیت حرکتی لارو است. تحریک با قرار دادن تخم‌های ترماتود در معرض محیط واکنش ویژه در ترکیب با روش‌های متوالی حاصل می‌شود - ایجاد اختلاف دما، خشک کردن تعلیق تخم‌ها، قرار گرفتن در معرض جریان ضعیف مایع در قطره آزمایش، که به انتشار جرم میراسیدیا کمک می‌کند. تخم مرغ

تعیین میزان زنده ماندن تخم اپیستورک به روش هرمان، بیر. تعلیق تخم مرغ در آب (شیر، ته نشین شده) از قبل تا 10-12 درجه سانتیگراد خنک می شود. تمام عملیات بعدی در دمای اتاق (18-22 درجه سانتیگراد) انجام می شود. یک قطره (حدود 0.05 میلی لیتر) از یک سوسپانسیون حاوی 100-400 تخم مرغ به یک لوله سانتریفیوژ اضافه می شود. لوله های آزمایش به مدت 5-10 دقیقه در یک قفسه قرار می گیرند تا تخم ها رسوب کنند. سپس با یک نوار باریک کاغذ صافی، آب اضافی را با احتیاط مکیده تا کاملاً خارج شود. 2 قطره از محیط به لوله آزمایش اضافه می شود، تکان داده می شود، محتویات آن با یک پیپت روی یک لام شیشه ای منتقل می شود و به مدت 5-10 دقیقه باقی می ماند، کمی تکان داده می شود (یا زیر سشوار قرار می گیرد) تا جریان های مایع ضعیفی در لوله ایجاد شود. کاهش تعلیق تحت مطالعه این عمل، که به تقلید از پریستالیس روده نرم تنان می پردازد، به شما امکان می دهد آزادسازی میراسیدیا را فعال کنید. پس از آن، 2 قطره دیگر از محیط به سوسپانسیون اضافه می شود و سپس با استفاده از میکروسکوپ نوری معمولی (X200) آماده سازی میکروسکوپی بررسی می شود. در طول این مدت، تخم‌های دارای میراسیدیای زنده باید درپوش را باز کنند، در حالی که لارو به طور فعال در محیط بیرون می‌آید. به دلیل وجود اتانول در آن، میراسیدیوم در 3-5 دقیقه بی حرکت می شود و سپس با رنگ در محیط رنگ آمیزی می شود. در نتیجه، میرسیدیا به راحتی شناسایی و شمارش می شود.

آماده سازی محیط واکنش. محیط در بافر 0.05 مولار Tris-HCi تحت شرایط pH بهینه 8.0-9.5 تهیه می شود. اتانول تا 10-13% به بافر اضافه می شود و یک رنگ (سافرانین، متیلن بلو و سایر موارد که در محدوده PH کار می کنند) تا زمانی که مایع کمی رنگ شود (مثلاً برای سافرانین غلظت نهایی آن 1:50000 خواهد بود). می توانید از بافر دیگری استفاده کنید که در محدوده pH قلیایی کار می کند، مانند فسفات 0.05 مولار (pH 8.5). بنابراین، محیط حاوی 96٪ اتانول - 12 قسمت است. رنگ (محلول مادر) - 1-10 قسمت؛ 0.05 M tris-HC! بافر (pH 8.5-9.5) - تا 100 قسمت. مثال متوسط: 12 قسمت اتانول 96٪، 1 قسمت محلول سافرانین اشباع، بقیه تا 100 قسمت - بافر Tris-HCl 0.05 مولار، pH 9.5.

تعیین میزان زنده ماندن تخم های دی کروسلیوم به روش هرمان، بیر، استراتان. یک قطره از سوسپانسیون حاوی 100-150 تخم ترماتود به مدت 1-2 دقیقه در لوله سانتریفیوژ قرار داده می شود تا تخم ها ته نشین شوند. سپس مایع به دقت با یک نوار کاغذ صافی خشک می شود. 1-2 قطره از محیط واکنش را با پیپت پاستور اضافه کنید و در حمام آب در دمای 30-28 درجه سانتیگراد به مدت 3-2 دقیقه انکوبه کنید. ترکیب محیط: 6 قسمت بوتانول، 94 قسمت محلول کلرید سدیم 0.4 درصد یا محلول کلرید پتاسیم 0.3 درصد در آب مقطر. تخم مرغ ها در محیط با یک پیپت روی یک لام شیشه ای منتقل می شوند و به مدت 1.5-2 ساعت در دمای اتاق (18-22 درجه سانتیگراد) قرار می گیرند، در حالی که هر 25-30 دقیقه (در حالی که خشک می شود) 1-2 قطره (0.05) اضافه کنید. میلی لیتر) محلول بوتانول در آب مقطر. پس از آن، آماده سازی با بزرگنمایی 100-200 برابر میکروسکوپ می شود. زنده ماندن با تعداد تخمهای باز شده با میراسیدیای آزاد شده تعیین می شود. بوتانول از طریق منافذ پوسته تخم مرغ نفوذ می کند، به میرسیدیا می رسد و آنها را فعال می کند. جوجه کشی در دمای مشخص این فرآیند را تقویت می کند. بوتانول با غلظت 7-3 درصد برای میراسیدیوم خارج شده از تخم مضر است. انتقال سوسپانسیون تخم مرغ از یک لوله آزمایش به یک لام شیشه ای اجازه می دهد تا زمانی که میراسیدیوم خارج می شود (پس از 30-40 دقیقه)، غلظت بوتانول به دلیل تبخیر شدن به سطح ایمن (1.5-0.5٪) کاهش یابد. وجود کلرید سدیم در محیط با غلظت 0.1-0.5٪ (یا کلرید پتاسیم در غلظت 0.05-0.4٪) فعالیت میراسیدیوم آزاد شده را تعیین می کند. بر خلاف تخم‌های شفاف کوچک اپیستورچ، تخم‌های دی کروسلیوم دارای پوسته تیره رنگ هستند؛ درکی به وضوح قابل مشاهده هستند که پس از آزاد شدن میراسیدیوم باز می‌شود. بنابراین، زنده ماندن تخم‌های دی کروسلیوم با شمارش تخم‌هایی که باز شده‌اند، به جای رنگ‌آمیزی و شمارش میراسیدیا، راحت‌تر ارزیابی می‌شود.

روش فلورسنت برای مطالعه تخم‌ها و لاروهای کرم‌ها.

برای اولین بار در عمل کرم شناسی، روش های میکروسکوپ لومینسانس در سال 1955 به کار گرفته شد. گزارش شد که میکروسکوپ لومینسانس، تمایز اجسام زنده و مرده را بدون آسیب رساندن به تخمک ممکن می سازد. برای فلورسانس، از اشعه ماوراء بنفش استفاده نمی‌شود، بلکه از قسمت آبی-بنفش نور مرئی، با میکروسکوپ معمولی و اسلایدهای شیشه‌ای استفاده می‌شود. مجموعه خاصی از فیلترهای رنگی برای روشن کننده OI-18 استفاده شد.

مشخص شد که تخم‌های زنده و مرده کرم‌های گرد، کرم‌های سوزنی، کرم‌های نواری پیگمی، کرم‌های گاوی، کرم‌های پهن و سایر کرم‌های کرمی به طور متفاوتی درخشش دارند. این پدیده هم در هنگام لومینسانس اولیه بدون استفاده از رنگها و هم هنگام رنگ آمیزی با فلوروکرومها (آکریدین نارنجی، کوریفوسفین، پریمولین، اورولین، سولفات برلرین، تری فلاوین، ریوانول، کویناکرین و غیره) مشاهده می شود.

تخم‌های کرم گرد زنده و بدون تکه رنگ سبز روشن با رنگ مایل به زرد می درخشند. در تخم مرغ مرده، پوسته نور سبز بسیار روشن تر از جنین سبز تیره ساطع می کند. در تخم کرم گرد با لارو، فقط پوسته ظاهر می شود، در حالی که در مرده، پوسته و لارو هر دو زرد روشن هستند.

تخم‌های زنده بدون رنگدانه و بدون قطعه‌بندی کرم‌های نواری و پیگمی نور زرد مایل به سبز ساطع می‌کنند. در تخم های مرده، پوسته به شدت در برابر پس زمینه یک توده جنینی سبز تیره می درخشد. با لومینسانس ثانویه (در صورت رنگ آمیزی با نارنجی آکریدین با رقت 1:10 OOO و 1:50 OOO از 30 دقیقه تا 2 ساعت)، پوسته نماتدهای زنده و مرده، ترماتودها و سستودها به طور متفاوتی درخشنده می شوند.

پوسته زنده و مرده Ascaris lumbricoides، Toxocara leonina، Enterobius vermicularis، Hymenolepis nana، H.fraterna، H. diminuta، T.saginatus، D.latum نارنجی مایل به قرمز می شود. جنین زنده Asc. lumbricoides، T.leonina، H.diminuta، D.latum و انکوسفرهای کرم نواری گاوی به رنگ سبز تیره یا خاکستری مایل به روشنایی می‌تابند. جنین های مرده این تخم های کرمی نور نارنجی مایل به قرمز "سوزان" را منتشر می کنند. لاروهای کرم زنده و توکسوکارها (پوسته تخم‌ها) نور سبز خاکستری مات از خود ساطع می‌کنند و وقتی می‌میرند، رنگ آنها از انتهای سر به سبز روشن و سپس زرد، نارنجی و در نهایت نارنجی روشن تغییر می‌کند.

هنگامی که با فلوروکروم ها - کوریفسفیلوم، پریمولین - در تخم های مرده آسکاریدها و کرم های شلاقی رنگ آمیزی می شود، درخششی از زرد یاسی تا قرمز مسی مشاهده می شود. تخم های زنده درخشنده نیستند، اما به رنگ سبز تیره در می آیند. تخم‌های زنده ترماتودهای Paragonimus westermani و Clonorchis sinensis پس از رنگ‌آمیزی با نارنجی آکریدین درخشنده نمی‌شوند، در حالی که تخم‌های مرده نور سبز مایل به زرد از خود ساطع می‌کنند.

از روش لومینسانس نیز می توان برای تعیین زنده ماندن لاروهای کرمی استفاده کرد. بنابراین، با محلول آکریدین نارنجی (1: 2000) لاروهای استونژیلات، رابدیتا درخشش فلوروکرومی شده: زنده - سبز (با رنگ)، مرده - نور نارنجی روشن. لاروهای زنده تریچینلا وقتی به مدت 10 دقیقه با محلول های فلورسین ایزوتیوسیانات، اورامین و غیره تحت درمان قرار می گیرند، نمی درخشند یا درخشش ضعیفی از خود نشان نمی دهند.

میراسیدیای زنده که از پوسته بیرون آمده اند، نور آبی کمرنگی با تاج گل مژگان به رنگ زرد روشن منتشر می کنند، اما 10 تا 15 دقیقه پس از مرگ آنها به صورت سبز روشن "سوزان" و سپس نور نارنجی-قرمز ظاهر می شوند.