Helmintológiai módszerek. Alapvető kutatási módszerek egysejtűekre

A legegyszerűbbek 4 osztályra oszthatók:

Az encystation során a mikroorganizmus megszerzi kerek formaés védőhüvellyel letakarva. Ciszta formájában a protozoonok kevésbé érzékenyek rá kedvezőtlen tényezők környezet.

A kutatás a következőket foglalhatja magában:

Jegyzet:A diagnosztikának nagyon sok fajtája létezik, figyelembe vesszük azokat a típusokat, amelyek a leggyakoribbak a klinikai laboratóriumi gyakorlatban.

Magán típusú diagnosztika

Minden konkrét esetben a laboráns feladata egy adott kórokozó felkutatása, néha a fő kórokozóval együtt másokat is találnak.

Ennek a mikroorganizmusnak 6 faja van, amely képes élni az emberi bélben. Klinikai jelentősége csak dysenterikus amőbája van, vegetatív formában és ciszták formájában.

Ezenkívül immunológiai módszereket alkalmaznak:

• indirekt immunfluoreszcencia;
• indirekt agglutináció (PHA);
• radiális immundiffúzió.

Jegyzet: szerológiai módszerek nem informatívak, és csak a főbb kiegészítéseként használatosak kétes esetekben.

Ciliáris (csillók) diagnózisa

E nemzetség mikroorganizmusainak patogén formája a balantidia. Ez egy mikroba, amely balantidiasist okoz – a vastagbél fekélyes folyamatával járó betegséget. A kórokozó natív kenetben található vegetatív forma és ciszta formájában. A kenet anyagát (ürülék és nyálka) szigmoidoszkópos vizsgálat során veszik, és speciális táptalajra vetik.

A flagellátok (leishmania, giardia, tripanoszómák, trichomonádok) diagnosztikája

A leishmania, a trypanosoma, a giardia, a trichomonads veszélyes az emberre.

Leishmania- mikrobák leishmaniasis okozója, vérkenetben vizsgálják, anyagok csontvelő, bőrinfiltrátumokból származó kaparék. Egyes esetekben a Leishmania diagnosztizálása során táptalajra vetik.

Trypanoszómák– kórokozók álomkór(amerikai/afrikai trypanosomiasis vagy Chagas-kór).

Az afrikai változat meghatározása a kezdeti időszak a dolgozószobában perifériás vér. A kóros mikrobák a betegség progressziója során megtalálhatók a nyirokcsomók szúrásának anyagában, előrehaladott stádiumban - a cerebrospinális folyadékban.

A trypanoszómák diagnosztizálásához Chagas-betegség gyanúja esetén a vizsgálati anyagot mikroszkóp alatt, kis nagyítással vizsgálják. Ebben az esetben a keneteket és egy vastag cseppet előre megfestik.

Trichomonas(bél, száj,) az érintett nyálkahártyákról vett anyagok mikroszkópos vizsgálatával mutathatók ki.

A sporozoák azonosítása (malária plazmódium, kokcidózis kórokozója stb.)

Az emberre a leggyakoribb és legveszélyesebb faj a maláriás plazmódium, amelynek 4 fő kórokozója van: kórokozó. háromnapos malária, négynapos malária, trópusi maláriaés malária ovális.

A Plasmodium (sporogony) szexuális fejlődése az Anopheles szúnyogokban megy végbe. Aszexuális (szöveti és eritrocita skizogónia) - a májszövetben és az emberi eritrocitákban. Ezeket a funkciókat életciklus figyelembe kell venni a malária plazmódium diagnosztizálásánál.

Tehát egy újonnan megbetegedett beteg vérében megtalálhatók a sporogony ciklus csírasejtek. De a maláriás rohamok csúcspontján a skizonták nagy számban jelennek meg a vérben.

Ráadásul be különböző fázisok maláriás láz megjelenik különféle formák Plasmodium:

• a hideg időszakában a vér megtelik merozoitákkal, egyfajta skizonttal;
• a hőmérséklet magasságában a gyűrű alakú trofozoiták felhalmozódnak az eritrocitákban;
• a hőmérséklet csökkenését az amőboid trophozoiták túlsúlya jellemzi;
• időszakokban normál állapot a vér a skizonták felnőtt formáit tartalmazza.

A malária kórokozójának (malária plazmódium) vizsgálatát kenetben és vastag cseppben végezzük.

Jegyzet:a kenetek és vastag vércseppek tanulmányozása során a malária diagnózisa néha téves. A vérlemezkék bizonyos esetekben tévesen malária kórokozóként sorolhatók be. Ezenkívül a leukociták és más sejtek fragmensei néha plazmódiumot szimulálnak.

Alapvető kutatási módszerek egysejtűekre

Tekintsük át röviden a protozoonok jelenlétének legáltalánosabb kutatási módszereit.

A protozoonok diagnosztizálása natív kenettel és Lugol-oldattal festett kenettel (ürülékben)

A gyógyszert ürülék emulziójából állítják elő izotóniás oldatban. Két csepp nátrium-kloridot és Lugol-oldatot csepegtetünk egy tárgylemezre. A vizsgálati anyagot egy fapálcával mindkét készítményhez adjuk, és miután üveggel letakarjuk, a mikroszkóp különböző felbontásán nézzük.

Bizonyos jelek szerint a talált protozoonokat regisztrálják. A pontosság érdekében egy anyagból 2-3 készítményt készítenek. Kétséges esetekben az elemzést 2-3 héten keresztül többször megismételjük.

A módszer képes kimutatni a vegetatív és cisztás formákat:

• lamblia;
• balantidia;
• vérhas amőba.

A patogén formákkal együtt a nem patogén protozoonokat is meghatározzák. Szintén at egészséges hordozók vannak luminális és cisztás formák.

Fontos:a pontatlanságok és hibák elkerülése érdekében ismételten kutatásokat kell végezni.

A protozoonok natív és festett kenet módszerével történő diagnosztizálásának eredményének tartalmaznia kell a kórokozó formájának leírását (áttetsző, ciszta, szövet).

Kutatási követelmények:

• az elemzésre vett anyagot (folyékony széklet) a székletürítés után legkésőbb 30 perccel megvizsgálják;
• a kialakult ürüléket a székletürítést követő 2 órán belül diagnosztizálni kell;
• az anyag nem tartalmazhat szennyeződéseket ( fertőtlenítőszerek, víz, vizelet);
• csak fából készült pálcikákat használnak az anyaggal való munkához, az üvegek nem alkalmasak a nyálka elcsúszása miatt;
• A rudakat használat után azonnal el kell égetni.

Konzervációs módszer (ürülék vizsgálata) a protozoonok diagnosztikájában

A vizsgálatot a protozoonok tartósítószerrel történő rögzítésével végezzük. A különbség e módszer és az előző között az, hogy a tartósítószerek lehetővé teszik a gyógyszer hosszú távú tárolását.

Használt tartósítószerek:

• Talicska. Tartósítószer összetevőket tartalmaz: 0,7 ml nátrium-klorid, 5 ml formalin, 12,5 ml 96%-os alkohol, 2 g fenol és 100 ml desztillált víz. Színező összetétel: 0,01% tionin oldat (azúrkék).
• Safarliev megoldása. Összetevők: 1,65 g cink-szulfát, 10 ml formalin, 2,5 g kristályos fenol, 5 ml ecetsav, 0,2 g metilénkék, 100 ml víz. Ezt a tartósítószert olyan esetekben használják, amikor az anyagot több mint egy hónapig kell tárolni.

Az üres palackokat tartósítószerrel töltik meg, az anyagot 3: 1 arányban töltik bele, majd szükség esetén festéket adnak hozzá. Az eredmények értékelése 2-3 gyógyszer vizsgálata során történik.

Formalin-éter dúsítási módszer (a protozoonok székletben való jelenlétének elemzése)

Ez a diagnosztikai módszer lehetővé teszi a protozoon ciszták elkülönítését és koncentrálását. Az elemzéshez a következő összetevőkre van szükség: formalin (10 ml), 0,85 g izotóniás oldat, desztillált víz, kénsav-éter, Lugol oldat.

A bioanyag és a felsorolt ​​folyadékok keverékét összekeverik és centrifugálják. A cső alján kapott csapadékot Lugol-oldattal megfestjük, és ciszták és vegetatív formák jelenlétére vizsgáljuk.

Leishmania kimutatási módszer (csontvelő kenet)

A leishmaniasis diagnosztizálására reagenseket használnak: Nikiforov keverékét (kén-éter és etanol), foszfát puffer, Azur-eozin Romanovsky szerint.

A csontvelő-anyagot nagyon óvatosan helyezzük egy tárgylemezre speciális képzés. Merítési rendszerrel ellátott mikroszkópot használnak.

BAN BEN akut időszak betegségek pontban találhatók nagyszámú leishmania.

Jegyzet:Néha vérsejtek hasonlíthat a feldolgozott leishmaniára, ezért nagyon fontos, hogy a laboráns figyelmes legyen és kellő tapasztalattal rendelkezzen az önvizsgálathoz.

Módszer a leishmania kimutatására bőrinfiltrátumból származó kenetben

A szükséges reagensek hasonlóak az előző vizsgálathoz.

A vizsgálati anyagot a meglévő tuberkulózis vagy fekélyes tartalomból nyerik. A leishmaniasis gyanújával végzett kaparást nagyon óvatosan, szikével, vér nélkül végezzük. Ezután a készítményt üvegen készítjük el. A kapott eredmények pontossága érdekében több készítményt egyidejűleg vizsgálnak meg.

Betegség jelenlétében a vizsgálati anyagban jelenlévő makrofágok, fibroblasztok és limfoid sejtek közül a Leishmaniát is meghatározzák.

Módszer a patológiás szövetek kaparásával nyert tiszta Leishmania tenyészet izolálására

Ezzel a diagnosztizálási módszerrel a legegyszerűbb szövetkaparékot egy speciálisba helyezzük tápközeg, amelyben a Leishmania aktív szaporodása következik be.

A kaparás előtt a bőrt óvatosan alkohollal kezeljük, majd a gümőben bemetszést készítünk, melynek aljáról eltávolítjuk a tartalmát, és a tápközeggel együtt kémcsőbe helyezzük. Az anyagot többször veszik, majd különböző kémcsövekbe helyezik. Ezután egy termosztátban 22-24 fokos hőmérsékleten történik a termesztés. Az eredményeket mikroszkóp alatt értékelik. Ezt a módszert akkor alkalmazzák, amikor más, olcsóbb és gyors utakat A protozoonok diagnosztizálása hatástalan.

Megnézheti, hogyan fejti meg a gyakorlatban a protozoon jelenlétére vonatkozó teszteket egy csepp vér, ha megnéz egy videót:

Lotin Alexander, orvosi rovatvezető

A székletet kétféleképpen vizsgálják:

1. Makroszkópos - megtalálni a helmintákat, azok fejét, szegmenseit, strobilimaradványait. A széklet kis adagjait vízzel összekeverjük egy lapos tálcában vagy Petri-csészében, és jó megvilágítás mellett nézzük sötét háttér szükség esetén nagyítóval. Minden gyanús képződményt csipesszel átviszünk egy másik csésze vízbe vagy egy tárgylemezre egy csepp hígított glicerinben.

A módszerrel fenntartva a vizsgált ürülékrészt üveghengerben vízzel felkeverjük, ülepítés után lecsepegtetjük felső réteg víz. Ez többször megismétlődik. Amikor a folyadék átlátszóvá válik, lecsepegtetjük, és az üledéket Petri-csészében nézzük.

2. Mikroszkópos - a helminták tojásainak és lárváinak kimutatására. Számos kutatási módszer létezik.

1). natív kenet - a legelterjedtebb és technikailag elérhető kutatási módszer. Minden féreg tojása és lárvája megtalálható. Kis számú tojás esetén azonban nem mindig találhatók meg. Ezért a dúsítási módszert alkalmazzák.

1). Fülleborg módszer - ez egy dúsítási módszer, amely a helminthiasis tojások megjelenésén alapul telített NaCl-oldatban (1,2 - sűrűség; 400 g NaCl 1 liter vízben; 40% -os NaCl-oldat). A módszer hatékonyabb, mint a natív kenet. 2-5 g ürüléket üvegedényekbe helyezünk, NaCl-oldattal megtöltjük, megkeverjük, majd 45 perc múlva fémhurokkal eltávolítjuk a képződött filmet, egy csepp glicerint helyezünk egy tárgylemezre. Vizsgálja meg mikroszkóp alatt. A módszer hátránya a különböző helminták tojásainak késleltetett megjelenése, törpe galandféreg - 15-20 perc múlva, orsóféreg - 1,5 óra, ostorféreg - 2-3 óra.

2) Kalantaryan módszer - szintén dúsítási módszer, de telített NaNO 3 oldatot (1,38 sűrűségű) használnak. A tojások nagy része lebeg, az üledék vizsgálata nem szükséges. Hátránya, hogy a tojásokat sokáig oldatban tartják, ami azt eredményezi, hogy egyes tojások megduzzadnak és leülnek az aljára, eltűnnek a felületi filmből.

3. Gorjacsov módszere – pete lerakódás elve alapján, kimutatás kis tojásokat trematodes. Oldatként telített NaCl-oldatot használunk, és óvatosan 3-4 ml ürülékoldatot rétegzünk a tetejére. 15-20 óra elteltével a trematode tojások leülepednek az aljára. A folyadékot lecsepegtetjük, az üledéket egy tárgylemezen és mikroszkóp alatt helyezzük el.

4. Shulman csavaró módszer – helminth lárvák kimutatására a székletben. Csak frissen izolált székletet vizsgáljon. 2-3 g-ot egy üvegedénybe teszünk, és felöntjük 5-szörös mennyiségű vízzel, gyorsan felkavarjuk egy pálcikával, anélkül, hogy az edény falát érintené - 20-30 perc, majd gyorsan eltávolítjuk a rudat, és egy csepp végén lévő folyadékot egy tárgylemezre visszük és mikroszkóppal vizsgáljuk.

5. Berman-módszer - a helminth lárvák meleg felé vándorló képességén alapul, és a székletben való azonosításukra szolgál.

6. Harada és Mori módszere (lárvátenyésztési módszer), és ankylostomiasis vizsgálatára javasolt. A módszer azon alapul, hogy melegben és nedves szűrt papíron a kampósféreg tojásaiból filariform lárvák fejlődnek, amelyek könnyen kimutathatók. Egy szűrt papírcsík közepére 15 g ürüléket viszünk fel, az ürülékkel ellátott papírt tégelybe helyezzük úgy, hogy az alsó vége vízbe merüljön, a felső végét pedig parafával rögzítsük. Az edényt termosztátban 28 0 C-on 5-6 napig tartjuk. A filariform lárvák ezalatt fejlődnek ki, és leszállnak a vízbe. A folyadékot nagyítóval vizsgáljuk. Ha nehezen észlelhető, a folyadékot centrifugálják, miután a lárvákat 60 0-ra melegítve elpusztítják. A laboratóriumi technikusnak kesztyűt kell viselnie.

7. Az enterobiasis módszerei – féregpeték kimutatása és bika galandféreg.

a) kaparás a perianalis redőkből - fából készült pálcikára erősen feltekercselt és 50%-os glicerinoldattal megnedvesített pamut törlővel. A laboratóriumban a tampont 1-2 csepp 50%-os vizes glicerinoldattal lemossák.

b) ragacsos atka módszer (Graham módszer)

A ragasztószalagot a perianális redőkre kell felhelyezni, majd ragadós réteggel a tárgylemezre és mikroszkóppal.

C) kaparás szempálcikákkal (Rabinovich módszere). A perianális kaparáshoz üveg szempálcákat használnak, amelyek legszélesebb részét speciális ragasztóval borítják, amely lehetővé teszi a gombatojások megtartását.

Vér, epe, köpet és izmok vizsgálata

Vérmikroszkópos vizsgálat - filariae lárvákat észlelnek.

Köpetvizsgálat - paraganim peték, orsóféreg lárvák, necator, strongyloid, echinococcus hólyag elemei.

Az izmok vizsgálata - trichinellózis gyanúja esetén megvizsgálják a beteg vagy a holttest izmait, valamint azt a húst, amely feltételezhetően okozta a fertőzést. A trichinoszkópia céljából az izmot apró darabokra vágják és kompresszorokba helyezik, ez két széles, vastag üveg, amely összezúzja az izmokat, és kapszulák formájában találják meg a Trichinella lárvákat - a kompressziós módszert.

Emésztési módszer - az izmokat mesterséges gyomornedvvel öntik (oldat sósavbólés pepszin). Az izmok megemésztődnek, és a lárvák könnyen felismerhetők. Az invázió intenzitásának meghatározása: a lárvák száma legfeljebb 200 per 1 g izomszövet– az invázió mérsékelt intenzitása; 500-ig - intenzív; 500 felett - szuperintenzív invázió.

Szerológiai módszerek

Helmintológiai kutatási módszerek. A helmintiázisok diagnosztizálásának módszerei közvetlen módszerekre oszthatók, amelyek maguknak a helmintáknak vagy azok töredékeinek, valamint a helminták lárváinak és tojásainak közvetlen kimutatásán alapulnak (a széklet, a vizelet, az epe és a nyombél tartalmának, a köpet, a vér és a szövetek vizsgálatának módszerei, a perianalis területről és a subungualis terekből kaparással nyert anyag), és közvetett, amelyek segítségével feltárják másodlagos változások az emberi szervezetben a férgek létfontosságú tevékenysége eredményeként keletkezik (a vér morfológiai összetételének vizsgálata, immunológiai módszerek a helminthiasis diagnosztizálására, röntgenvizsgálatok stb.). A direkt módszerek közül a legelterjedtebbek a koprológiaiak, amelyek makro- és mikrohelmintoszkópiára oszlanak. Egyes esetekben speciális módszereket alkalmaznak.

Makrogelmitoszkópiás kutatási módszerek bélférgek vagy azok töredékeinek (scolex, szegmensek, cestodes strobila részei) felkutatására irányul. Azon helmintiázisok diagnosztizálására szolgálnak, amelyekben a peték nem ürülnek ki a beteg ürülékével, vagy kis mennyiségben és nem mindig ürülnek ki (például enterobiasis esetén a pinworms székletben, teniidózisokban, szegmensekben található).

Az ürülékben lévő tűférgek vagy cestodes-szegmensek kimutatásához a székletet szabad szemmel nézzük. Mert megkülönböztető diagnózis taeniasis esetén ajánlott a vízzel hígított ürüléket külön kis adagokban fekete fotóküvettákban vagy Petri-csészékben sötét háttér előtt megtekinteni. A helminták töredékére gyanús nagy képződményeket nagyító alatt vizsgálják két tárgylemez között. Ha által klinikai indikációk kis helminták vagy cestodafejek kimutatását javasolják a kezelés után, majd a gyanús részecskéket nagyító alatt, egy csepp glicerinben, és szükség esetén mikroszkóp alatt megvizsgálják.

Mikrohelmintoszkópos kutatási módszerek(kvalitatív) célja a helminták tojásainak és lárváinak azonosítása. Alkalmazza a vastag kenet módszert celofán fedőlemezzel Kato szerint. A Kato keverék 6-ból áll ml 3%-os vizes malachitzöld oldat, 500 ml glicerin és 500 ml 6%-os fenolos oldat. Kato tányérok (hidrofil celofán darabokra vágva 20×40 mm) 24-re merülnek h a Kato keverékbe úgy, hogy egymás mellett legyenek (3-5 ml Kato-féle megoldás 100 tányérra). 100 mg az ürüléket üveglemezre helyezzük, Kato szerint celofán fedőlemezzel letakarjuk, és lenyomjuk, így a széklet a celofán lemezen belüli üveglemezre kenődik. A kenetet szobahőmérsékleten hagyjuk, hogy 40-50 °C-ra derüljön min, majd mikroszkóp alatt szemléljük. A forró évszakban, hogy a készítmény ne száradjon ki, nedves szivacsot helyezünk az elkészített készítmény tányérjára.

Minden típusú bélféreg teljes kimutatásához a Kato celofán fedőlemez vastag kenet módszert kell alkalmazni az egyik dúsító módszerrel együtt. Ezek közül a legelterjedtebb a Kalantaryan-módszer és a Fülleborn-módszer.

Kalantaryan módszer: 100-as széles nyakú lombikokban mlüvegrúddal alaposan keverje meg 5 G széklet, fokozatosan hozzáadva telített nátrium-nitrát oldatot (1 kg nátrium-nitrát per 1 l vizet forraláskor) a pohár széléig. A felszínre úszott nagy részecskéket papírkanállal távolítjuk el. A sóoldat felületére tárgylemezt helyezünk (sóoldatot addig adunk hozzá, amíg a keverék teljesen érintkezésbe nem kerül az üveglemezzel). 20-30 után min A tárgylemezt eltávolítjuk, és a filmet mikroszkóp alatt nézzük. Ennek a sónak a hiányában használhat telített konyhasóoldatot Fholleborn szerint (400 G só az 1-ben l forrásban lévő víz).

Annak a ténynek köszönhetően, hogy a tojás egy nagy fajsúly(ascaridák megtermékenyítetlen petékje, trematoda és nagy cestoda pete), ne lebegjenek, a folyadék felszíni rétegének vizsgálata mellett a Fülleborn módszer alkalmazásakor 2-4 készítményt kell mikroszkóp alatt megnézni az üledékből. .

Különféle helminthiasisok speciális laboratóriumi kutatási módszerei.

A bélféreg töredékeinek kimutatásához a székletet meztelenül nézik, majd vízzel keverik, és kis részletekben Petri-csészében, sötét háttér előtt megvizsgálják. Minden gyanús részecskét helyeznek egy tárgylemezre egy csepp vízben, és nagyítóval megvizsgálják. A napi adagot 5-10-szeres mennyiségű víz hozzáadásával hengerbe helyezheti. Keverés után az edényt a szuszpendált részecskék teljes ülepedéig hagyjuk. Felszíni réteg folyadékok öntése és öntése tiszta víz. A kimosott csapadékot kis részletekben szabad szemmel vagy nagyítóval nézzük. A peték kimutatására mikroszkópos vizsgálati módszereket alkalmaznak.

Natív kenet módszer. Kis mennyiségű széklet különböző helyeken a vizsgálati mintát egy tárgylemezen eldörzsöljük egy csepp 50%-os glicerinoldatban, izotóniás nátrium-klorid-oldatban vagy vízben. A keveréket fedőlemezzel fedjük le, és mikroszkóp alatt nézzük.

Fülleborn lebegő módszere. A széklet egy részét összekeverjük 20 rész telített nátrium-klorid-oldattal (fajsúly ​​1,18), amelyet kis részletekben adunk hozzá. A felszínre úszó nagy részecskéket azonnal eltávolítjuk, és a keveréket 45 percig állni hagyjuk. Ezalatt az idő alatt a nátrium-klorid-oldatnál kisebb fajsúlyú helmintpeték a felszínre úsznak. A felületi filmet körülbelül 1 cm átmérőjű huzalhurokkal eltávolítjuk, és egy tárgylemezre helyezzük mikroszkóp alatti vizsgálat céljából.

Kalantaryan módszer. A lebegő módszer hatékonyságát növeli, ha a nátrium-kloridot telített nátrium-nitrát-oldattal helyettesítjük. Ebben az esetben a keveréket 10-15 percig tartjuk.

A széklet nátrium-klorid- vagy nátrium-nitrát-oldattal való leülepedése után keletkezett felületi film tárgylemezzel is eltávolítható. Ebből a célból egy sóoldattal készült ürülékkeverékkel színültig megtöltött tégelyt üveglappal fedünk le úgy, hogy alsó felülete érintkezzen a folyadékkal. Az ülepedés után az üveget eltávolítják, és gyorsan felfelé fordítva a felületet, amelyen a film található, mikroszkóp alatt megnézzük.

A csípős redők lekaparását (a tűférgek peték és a szarvasmarha galandféreg onkoszféráinak azonosítására) reggel, a vécé készítése előtt végezzük. Vízbe vagy 50%-os glicerines oldatba mártott fa spatulával kaparja körbe végbélnyílás. A kapott anyagot egy csepp vízben vagy 50%-os glicerinoldatban egy tárgylemezre visszük, és mikroszkóp alatt megnézzük. A spatula cserélhető egy nedves vattakoronggal, amellyel a perianális területet töröljük át, majd alaposan öblítsük le vízzel. A vizet centrifugáljuk, és a csapadékot mikroszkóp alatt vizsgáljuk.

Bermann-módszer (lárvák kimutatására). Az állványba helyezett üvegtölcséren 5-6 g ürülékkel bevont fémhálót rögzítünk. A tölcsér alsó végére egy bilinccsel ellátott gumicsövet helyeznek. A tölcsért t ° 50 ° -ra melegített vízzel töltik meg úgy, hogy Alsó részürülékkel ellátott hálók érintkeztek vízzel. A lárvák aktívan beköltöznek a vízbe, és felhalmozódnak a gumicső alsó részében. 4 óra elteltével a folyadékot centrifugacsövekbe engedjük, centrifugáljuk, és a csapadékot mikroszkóp alatt megvizsgáljuk.

A köpet elemzése, az orrnyálka és hüvelyi folyás a tüdőtrematode paragonimus peték, az ascaridák és kampósférgek lárvái, a tűférgek tojásai, az echinococcus hólyag töredékei kimutatására. A vizsgált nyálkarészt (váladékot) üvegre kenjük, és fekete-fehér alapon makroszkopikusan, majd mikroszkóp alatt megnézzük. 25%-os antiformin oldatot adhatunk a vizsgált anyaghoz, alaposan felrázzuk, és 1-1,5 órán át tartjuk, hogy a nyálka feloldódjon. Az elegyet centrifugáljuk, és a csapadékot mikroszkóp alatt megvizsgáljuk.

Elemzése nyombél és gyomornedv májmételypeték, horogféreg, Strongyloides lárvák kimutatására. A kapott nyombéltartalom mindhárom részét centrifugáljuk, és az üledéket mikroszkóp alatt megvizsgáljuk. Szintén felfedezni és.

A szövetek tanulmányozása. A Trichinella lárvák azonosításához a biopsziás izomdarabokat óvatosan rostokra osztják, kompresszorüvegek közé szorítják (vastag üvegek csavarokkal), és mikroszkóp alatt, árnyékolt fénnyel megvizsgálják. A cysticerci azonosításához az izmokat boncolt tűkkel rétegezzük, az izolált hólyagot megtisztítjuk a környező szövettől, két tárgylemez közé szorítjuk és nagyítóval megvizsgáljuk.

Vérvizsgálat (a filariae lárváinak kimutatására). Egy lógó cseppet vazelinnel szegélyezett fedőlemezen vizsgálunk. 0,3 ml vért 3%-os oldat 10-szeresével keverhet össze. Az elegyet centrifugáljuk, és a csapadékot mikroszkóp alatt megvizsgáljuk. A készítmények 1 ml-re történő dúsításához vénás vér adjunk hozzá 3 ml 2%-os formalinoldatot vagy 5-szörös mennyiségű folyadékot, amely 95 ml 5%-os formalinoldatból, 5 ml ecetsavból és 2 ml tömény oldatból áll. alkoholos oldat hematoxilin. Az elegyet centrifugáljuk, a csapadékot desztillált vízzel mossuk és mikroszkóp alatt vizsgáljuk. A megkülönböztetés érdekében különböző típusok filariae vizsgálja a Giemsa-Romanovsky módszerrel festett keneteket.

Mód immunológiai diagnosztika. Alkalmazzon (agglutináció, komplement fixáció) és allergiás diagnosztikai teszteket (lásd) a megfelelő típusú helmintából.

Helmintológiai kutatási módszerek. Rizs. Helminth tojás. 1-10 - tojás orsóférgek(fonálférgek): 1 - 3 - orsóférgek (1 - megtermékenyített pete, 2 - megtermékenyített tojás fehérjeburok nélkül, 3 - megtermékenyítetlen tojás); 4 - macskaféle orsóféreg; 5 - orsóféreg húsevők; 5 - pinworms; 7 - ostorcsapás; 8 - tominx; 9 - horogféreg; 10 - tricho-strongilid. 11-15 - tojás galandférgek(cestodes): 11 - szarvasmarha galandféreg; 12 - galandféreg törpe; 13 - patkány galandféreg; 14 - tök galandféreg; 15 - széles szalag. 16 - 24 - mételytojás (trematodes): 16 - trematodes (schistosomes) japán; 17 - trematodes (schistosomes) vizelet - szexuális; 18 - trematodes (schistosomes) Munson; 19 - trematodes (parogonymus) tüdő; 20 - trematodes (opisthorchis) szibériai (macska); 21 - trematodes (clonorchis) kínai; 22 - intestinalis trematodes (metagonimus); 23 - a máj trematodesa (fasciola); 24 - trematodes (dicrocelium) lándzsás.

A helmintológiai kutatás hatékony és kényelmes módszere az vastag kenet vizsgálata Kato szerint, melynek lényege, hogy vastag, glicerinnel derített és malachitzöldre színezett ürülékkenetben bélférgek tojásait észleljük. A Kato keverék összetétele: 6 ml 3% -os vizes malachit zöld oldat, 500 ml glicerin, 500 ml 6% fenolos oldat. Az oldat stabil, szobahőmérsékleten tárolható. A készítmények elkészítéséhez borsó nagyságú ürülékdarabokat helyezünk egy tárgylemezre, majd 24 órán át Kato keverékben érlelt hidrofil celofán filmmel fedjük le, és az üveghez nyomjuk. egyenletes eloszlás anyag. A 40-60 percig derített keneteket mikroszkóppal vizsgáljuk. A kimutatott helmintpetéket megszámoljuk és morfológiai jellemzők meghatározzák fajukat. A módszer lehetővé teszi az ascaris, a whipworm, a cestodes, a trematodes, kisebb mértékben a horogféreg és a törpe galandféreg tojásainak feltárását.

Szintén széles körben használt dúsítási módszerek. A flotációs módszerek alapelve, hogy a bélsárt sóoldatban szuszpendálják, aminek a relatív sűrűsége nagyobb a bélférgek tojásaihoz képest, aminek következtében az a felszínre úszik. A felületi film tartalmát mikroszkóp alatt vizsgáljuk. Az oldatokat dúsító keverékként használják: asztali só- 400 g 1 liter vízben (relatív sűrűsége Fülleborn szerint -1,18); nátrium-nitrát - 1 kg 1 liter vízben (relatív sűrűsége Kalantaryan-1,38 szerint); nátrium-nitrát - 900 g és kálium-nitrát - 400 g 1 liter vízben (relatív sűrűség Brudastov és Krasnonos-1,48 szerint). felforraljuk és lehűtjük.
A kutatáshoz 5-10 g ürüléket adunk egy üveghez vagy fajanszüveghez, 100-200 ml sóoldatot adunk hozzá, és alaposan összekeverjük. Ezután a felszínre került nagy részecskéket fa spatulával vagy papír- vagy kartonkanállal eltávolítják, és azonnal széles üveglemezt helyeznek a felületi filmre úgy, hogy a sóoldat és az üveglemez teljes mértékben érintkezzen. A keverék ülepedése után 30-40 perccel az üveglemezt eltávolítjuk, a filmmel felfelé mikroszkóp alá helyezzük, és a teljes felületet gondosan megvizsgáljuk. A kiszáradás elkerülése érdekében 2-3 csepp 50%-os glicerines oldatot adhat hozzá. A felületi fólia dróthurokkal is eltávolítható. A flotációs módszerek hatékonysága a relatív sűrűség növekedésével nő sóoldatok. Ezekkel a módszerekkel kimutatható a fonálférgek, cestodák és trematodák tojásai.

A tojások székletben történő kimutatására a Krasilnikov ülepítési módszert alkalmazzák.. A székletet összekeverjük 1%-os mosószer oldattal ( mosópor"Lotus" stb.) 1:10 arányban, amíg szuszpenzió nem képződik. A mosószer hatására a széklet különböző összetevői (fehérjék, zsírok, szöveti elemek) feloldódnak. 30 perc elteltével a cső tartalmát 1-2 percig rázatjuk, majd 5 percig centrifugáljuk. Az üledékből preparátumokat készítenek és mikroszkóp alatt nézik meg.
BAN BEN terepviszonyok, valamint a lakosság körében végzett tömeges felmérések során féregfertőzöttség esetén kényelmes a Kato vastag kenet módszer alkalmazása. BAN BEN álló körülmények betegek vizsgálatakor célszerű a leghatékonyabb flotációs módszereket alkalmazni. Ha a mikroszkópos vizsgálat során ezeket a módszereket alkalmazzuk, célszerű megszámolni a készítményben található tojásokat. Az ürülék vizsgálatához használt standard tömegtől vagy térfogattól (például 1 teáskanál vagy evőkanál) és a sóoldatok állandó térfogatától függően nagyjából meg lehet ítélni az invázió intenzitását. Ez a mennyiségi adat hasznos lehet az előírt kezelés alátámasztására és a féregtelenítés hatékonyságának értékelésére. Emellett más, pontosabb módszerekkel is meg lehet határozni a fertőzés intenzitását. kvantitatív módszerek, különösen a Stoll-módszer.

Tenarhynchosis és enterobiasis diagnosztizálására alkalmazni a perianalis-rektális kaparék kutatási módszerét. 50%-os glicerines oldatba mártott fa spatulával reggelente körkörös székletürítés előtt kaparást készítenek a perianalis redőkből. végbélnyílásÉs alsóbb osztályok végbél. A kapott, a fedőlemez szélénél spatulával megtisztított anyagot csepp 50%-os glicerinoldatban üveglemezre helyezzük, fedőlemezzel lefedjük és mikroszkóp alatt megvizsgáljuk. Megvizsgálhat egy cellulózszalag csíkot is, amelyet először ragasztós oldalával a pernaális redőkhöz nyomnak, majd tárgylemezre helyezve mikroszkóppal.

Fonálféreg lárvák kimutatása ürülékben Berman módszerrel. A módszer a lárvák termotróp tulajdonságán alapul. A kutatáshoz 1 evőkanál ürüléket veszünk, amelyet fémhálóba vagy több réteg gézből álló hálóba helyezünk egy drótvázra. A rácsot egy állványra rögzített tölcsérbe kell beépíteni. Egy bilinccsel ellátott gumicső csatlakozik a tölcsérhez. A hálót megemelve a tölcsért megtöltjük vízzel (hőmérséklet +40°...+50°C) úgy, hogy a háló alsó része vízbe merüljön. A székletből származó lárvák aktívan vándorolnak a meleg vízés leülepedve felhalmozódnak a tölcsér alján. 2-4 óra elteltével kinyitják a bilincset, vizet engednek egy centrifugacsőbe, és 2-3 percig centrifugálják. Ezután a felülúszót lecsepegtetjük, az üledéket tárgylemezre visszük és mikroszkóp alatt megnézzük, ahol a strongyloidiasis kórokozó mozgékony lárvái találhatók.

Harad módszer és A Mori lehetővé teszi a horogférgek és a necatorok lárváinak megkülönböztetését. A kampósféreg lárváit szűrőpapíron tenyésztik. Ebből a célból a betegtől legkésőbb a székletürítést követő 1 órában vett 0,5 g friss ürüléket a 12X1,5 cm méretű szűrőpapírcsíkokra kenjük úgy, hogy a csík mindkét végét tisztán hagyjuk. A csík egyik végét kémcsőbe merítjük, amelynek negyedik részét vízzel töltjük, a másikat parafával rögzítjük. A csöveket +26 ... + 28°C hőmérsékletű termosztátba helyezzük. A petékből kifejlődött lárvák a szűrőpapíron ereszkednek le, és a kémcső aljára telepednek le. 5-6 nap elteltével a papírcsíkot eltávolítjuk, és a kémcsőben maradt folyadékot nagyítóval megvizsgáljuk vagy centrifugáljuk. A centrifugálás során keletkezett csapadékot fénymikroszkóp alatt vizsgáljuk. Ha tetraéderes kémcsövek helyett használjuk befőttesüveg(15XYX7 cm méretű), melynek falaihoz 4 db papírcsík van rögzítve, az elemzések hatékonysága nő (G. M. Maruashvili et al., 1966).

A schistosomiasis kutatási módszerei . Az ürülék vizsgálata - a széklet egy részét 250 ml vízzel összekeverjük, 3 réteg gézen átszűrjük egy kúpos edénybe, amelyet a tetejéig vízzel megtöltünk. 30 perc elteltével a folyékony réteget lecsepegtetjük, a csapadékhoz friss vizet adunk. A csapadékot addig mossuk, amíg tiszta felülúszót nem kapunk, és mikroszkóposan megvizsgáljuk.

A larvoszkópia módszere - 20-25 g ürüléket helyezünk egy Erlenmeyer-lombikba, amelynek az oldalán egy üvegcső van forrasztva, és megmossuk. csapvíz. Ezután a lombikot sötét papírral letakarjuk, a forrasztott üvegcsövet +25...+30°C-os fényben hagyjuk. A kikelt miracidiumok a meniszkusznál koncentrálódnak az oldalsó csőben, ahol nagyítóval vagy szabad szemmel is láthatóak. Vizeletvizsgálat - 100 ml vizeletet 10 és 14 óra között gyűjtünk, vagy a napi adagot leülepítjük, majd 1500 fordulat/perc sebességgel centrifugáljuk. A kapott csapadékot* tárgylemezre visszük és mikroszkóppal vizsgáljuk. A WHO egy módszert ajánl a vizelet teljes részének szűrésére. Szűrés után a szűrőket formalinnal kezeljük vagy felmelegítjük (a tojások elpusztítására), majd megnedvesítjük. vizesoldat ninhidrin. A szárított készítményekben a tojásembriók lila színt kapnak.

Az immunológiai szerek alkalmazása A schistosomiasis diagnosztizálására szolgáló kutatási módszerek bonyolultak, mivel a felnőtt schistosomák és tojásaik nagyszámú olyan antigént tartalmaznak, amelyek immunreakciók, amelyek nem fajspecifikusak (D. Bradley, 1979).

Hazánkban színrevitelre immunológiai reakciók helminthiasis esetén keletkezik egész sor szabványos diagnosztika. Gyakorlati használat allergiája van bőrteszt echinococcosis és alveococcosis esetén RLA echinococcus antigénnel, RSK hidegben, precipitációs reakció hidegben különböző módosulatokban (gyűrűs precipitáció, kicsapás kémcsövekben vagy kapillárisokban, amelyeket trichinosis, cysticercosis és migroascariasis antigénekkel helyeznek el). A fenti szerológiai reakciók beállítására szabványos diagnosztikát a bakteriális készítményeket gyártó vállalkozások készítenek. A gyártó a legyártott diagnosztikai eszközökhöz csatolja részletes utasításokat a tárolás szabályairól, a gyógyszer lejárati idejéről és a megfelelő antigének használatára vonatkozó utasításokról a reakció felállításának technikájával.

BAN BEN utóbbi évek jelentősen bővült a helminthiasis diagnosztizálására használt szerológiai vizsgálatok listája. Erre a célra a következő reakciókat alkalmazzák: RIGA, indirekt immunfluoreszcencia (RIF), gél immundiffúzió (RID), ellen immunoelektroforézis (VIEF), REAMA. Ezek a reakciók alkalmazhatók ascariasis, toxocariasis, trichinosis, kampósféreg-fertőzések, filariasis, echinococcosis és alveococcosis, opisthorchiasis, schistosomiasis, paragonimiasis esetén. Ezekre a reakciókra azonban hazánkban nem adnak ki szabványos diagnosztikát, és beállításuk technikáját sem szabályozzák. Külön laboratóriumok, többnyire tudományos, saját specifikus antigéneket készítenek és alkalmaznak különféle módosításokban. E módszerek leírása széles körben megtalálható a szakirodalomban, és nem szigorúan egységes. Az immunológiai adatok értelmezésének az immunválasz dinamikájának vizsgálatán kell alapulnia, figyelembe véve az egyes alkalmazottak specificitásának és érzékenységének szintjét. szerológiai reakció. Ezért a diagnózis felállításakor, valamint a lakosság szeroepidemiológiai felmérései során célszerű több, a legérzékenyebb reakciót alkalmazni. Ebből a szempontból a VIEF és a REMA reakciók, amelyek különböznek nagy érzékenységés kellően magas specificitású (P. Ambroise-Thomas, 1978; I. E. Ballad, 1979; G. M. Negryanu, 1980; A. M. Ponomareva, 1981; A. Ya. Lysenko, 1978 stb.). A REAMA hatékonyságát amebiasisban, leishmaniasisban, trypanosomiasisban és toxoplazmózisban tesztelték (GA Ermolin, 1980).