Цвят и прозрачност на готовия носител. Уранова верижна реакция и сензационна верижна реакция

119. Реакции на Pandey и Nonne - Apelt

Като реагент за провеждане на реакцията на Pandey се използва бистра супернатантна течност, която се получава чрез енергично разклащане на 100 g течна карболова киселина с 1000 ml дестилирана вода. За утайка и бистра течност(реагент), тази смес първо се поставя в термостат за 3-4 часа и след това се държи при стайна температура за 2-3 дни.

Поставете часовник или предметно стъкло върху тъмна хартия и нанесете 2-3 капки от реагента върху него, след това 1 капка гръбначно-мозъчна течност. Ако капката стане мътна или се появи нишковидно помътняване по периферията й, реакцията се счита за положителна.

За провеждане на реакцията Nonne-Apelt са необходими чисти епруветки, наситен разтвор на амониев сулфат, дестилирана вода и тъмна хартия. Приготвя се наситен разтвор на амониев сулфат по следния начин: 0,5 g химически чист неутрален амониев сулфат се поставя в колба от 1000 ml, след това се налива 100 ml дестилирана вода, загрята до 95 ° C, разклаща се до пълното разтваряне на солта и се оставя за няколко дни при стайна температура. След 2-3 дни разтворът се филтрира и се определя рН. Реакцията трябва да е неутрална.

0,5-1 ml от получения разтвор се излива в епруветката и същото количество цереброспинална течност внимателно се добавя по стената на епруветката. След 3 минути оценете резултата. Появата на белезникав пръстен показва положителна реакция. След това съдържанието на епруветката се разклаща, степента на мътност се определя чрез сравняване с епруветка, съдържаща дестилирана вода. Резултатите от реакцията се оценяват на фона на черна хартия.

120. Реакция на Борде-Янгу

Ценен диагностичен тест при идентифициране хронична гонореясред хората с хронични възпалителни заболявания пикочно-половата система. Според литературата кога правилна употребаТози метод разкрива до 80% от случаите на гонорея, които не са открити чрез бактериоскопски или бактериологичен метод.

Реакцията на Bordet-Jangu може да бъде следа в резултат на предишно заболяване или употребата на гоноваксина за диагностика (имунобиологичен метод за провокация), както и терапевтична (лечение на хронични възпалителни процеси на пикочно-половата система при жени според Бакшеев) предназначение. Ето защо, преди да го извършите, е необходимо внимателно да се събере анамнеза,

Реакцията може да бъде и фалшиво положителна при въвеждане на мляко, използване в лечебни целипирогенал.

Следователно положителната реакция на Борде-Янгу не служи като неоспоримо доказателство за наличието гонококова инфекция, както и отрицателни не могат да бъдат доказателство за липса на гонорея. въпреки това положителни резултатидълго време трябва да бъде насочено от лекар за търсене на фокус на гонококова инфекция в тялото.

Като антиген се използва убита гонококова култура, съдържаща 3-4 милиарда микробни тела на 1 ml. Гонококовият антиген се консервира с разтвор на формалдехид и се изсипва в ампули от 1-5 ml. Неотворените ампули са годни за 6 месеца, отворените могат да се съхраняват 2-3 дни в стерилна епруветка в хладилник при температура 3-5 ° C,

Реакцията на свързване на комплемента Borde-Zhang се провежда подобно на реакцията на Васерман (виж № 121). Гонококовият антиген се разрежда с изотоничен разтвор на натриев хлорид според титъра, посочен на етикета на ампулата. Реакцията най-често се провежда в обем от 2,5 ml, следователно към 0,5 ml разреден тестов серум 1: 5 се добавят 0,5 ml от разредения антиген към всяка епруветка. Останалите 1,5 ml са 1 ml от хемолитичната система и 0,5 ml комплемент.

Реакцията се счита за положителна при наличие на различни степенизабавяне на хемолизата в тествания серум. В контрола (кръвен серум здрави хора) се наблюдава пълна хемолиза.

121. Реакция на Васерман

В кръвния серум на пациенти със сифилис има реагини и антитела. Реагините имат способността да влизат в съединения с кардиолипинов антиген. Специфични антитела срещу Treponema pallidum се комбинират със специфични антигени. Получените комплекси антиген-антитяло се сорбират от добавения към реакцията комплемент. Индикацията се извършва чрез въвеждане на хемолитична система (овчи еритроцити + хемолитичен серум).

За да се осъществи реакцията:

а) изотоничен разтвор на натриев хлорид;

б) ултразвукови трепонемни (съхранява се в хладилник при +4 °C) и кардиолипин (съхранява се при стайна температура) антигени;

в) комплемент, който е кръвен серум, получен чрез сърдечна пункция на 5-10 здрави морски свинчета. Може да се съхранява в хладилник до 2 месеца при условие
консервиране 4% разтвор борна киселинаи 5% разтвор на натриев сулфат;

г) хемолизин - хемолитичен заешки кръвен серум, имунизиран с овчи еритроцити с различни титри (съхранява се в хладилник при температура 4 ° C);

д) овчи еритроцити, получени чрез пункция югуларна вена. Кръвта се събира в стерилен буркан със стъклени перли (за смесване), разклаща се за 15 минути. Фибриновите съсиреци се отделят чрез филтруване през стерилна марля. Дефибринираната кръв може да се съхранява в хладилник до 5 дни.

Понякога има нужда от по-продължително съхранение на овча кръв, поради което тя се консервира със специален консервант (6 g глюкоза, 4,5 g борна киселина, 100 ml изотоничен разтвор на натриев хлорид), който се вари на водна баня. по 20 минути на ден в продължение на 3 дни За 100 ml дефибринирана овча кръв са необходими 15 ml консервант. Консервираната по този начин дефибринирана кръв се съхранява в хладилник.

Основният експеримент се предхожда от няколко етапа.

При пациент от кубитална венавземете 5-10 ml кръв и обработете серума. При деца може да се вземе кръв от темпоралната вена или разрез на петата. Пункцията се извършва със стерилни инструменти, спринцовка и игла
предварително измити с изотоничен разтвор на натриев хлорид.

Кръвта за изследване се взема на празен стомах; 3-4 дни преди изследването пациентът е забранен за употреба лекарства, дигиталисови препарати, приемайте алкохол.

Изследването не трябва да се провежда при пациенти с повишена температуратяло, след травма, операция, анестезия, скорошни инфекциозни заболявания, при жени по време на менструация, при бременни (в последните 10 дни от бременността), родилки (в първите 10 дни след раждането), както и новородени (в първите 10 дни от живота).

Получената кръв в стерилна епруветка се поставя за 15-30 минути в термостат при температура 37 °C. Полученият съсирек се отделя от стените на епруветката със стерилна стъклена пръчка и се поставя в хладилник за едно денонощие. Отделеният прозрачен серум (над съсирека) се изсмуква с пастьорова пипета с помощта на гумена круша или внимателно се излива в друга стерилна епруветка и се инактивира на водна баня за 30 минути при температура 56 °C. Така приготвеният за експеримента серум може да се съхранява в хладилник до 5-6 дни.

Антигените се разреждат според метода и титъра, посочени на етикета.

Подгответе хемолитична система. За да направите това, дефибринирана кръв или овчи еритроцити в количеството, необходимо за реакцията, се центрофугира, плазмата се отделя внимателно и утайката се промива с 5-6 обема изотоничен разтвор на натриев хлорид, докато супернатантата стане напълно безцветна. От утайката се приготвя 3% суспензия на еритроцити в изотоничен разтвор на натриев хлорид според троен титър.

Разтвор на хемолитичен серум и суспензия от овчи еритроцити бързо се смесват и се поставят в термостат за 30 минути.

Сухият комплемент се разрежда с изотоничен разтвор на натриев хлорид в съотношение 1:10, нормален инактивиран човешки серум - 1:5.

Комплементът се титрува в 30 епруветки, поставени в стелаж от 10 епруветки в 3 реда. В два реда се титрува в присъствието на два антигена, в третия - с изотоничен разтвор на натриев хлорид. Пет епруветки са контролни: две за съответните два антигена и по една за контрол на комплемента, хемолитичен серум и изотоничен разтвор на натриев хлорид за хемотоксичност; попълнете ги така:

Епруветките се поставят в термостат за 45 минути, след което се проверяват. Хемолиза не трябва да има в нито една епруветка.

Комплементът в разреждане 1:10 се излива в 10 епруветки от 1-ви ред на стелажа в дози: 0,1, 0,16, 0,2, 0,24, 0,3, 0,36, 0,4, 0,44, 0,5 и 0,55 ml. Към съдържанието на всяка епруветка се добавя изотоничен разтвор на натриев хлорид до 1 ml и се разбърква старателно. 0,25 ml от сместа от всяка епруветка се прехвърля в съответните епруветки от 2-ри и 3-ти ред. Стелажът с епруветките се разклаща, към 3-тия ред епруветки се добавят 0,5 ml от хемолитичната система, отново се разклаща и се поставя за 45 минути в термостат при температура 37 °C. Нормален човешки кръвен серум, разреден с изотоничен разтвор на натриев хлорид в съотношение 1:5, 0,25 ml се излива във всичките 30 епруветки.

Антиген I (трепонемален ултразвук), разреден в титър с изотоничен разтвор на натриев хлорид, 0,25 ml се добавя към 10 епруветки от 1-ви ред; антиген II (кардиолипин в същото разреждане и в същото количество) - в 10 епруветки от 2-ри ред. 0,25 ml изотоничен разтвор на натриев хлорид се излива в 10 епруветки от 3-ти ред, останалите 0,25 ml се изсипват. След инкубиране в термостат, 0,5 ml от хемолитичната система се добавя към 20 епруветки (1-ви и 2-ри ред), разклаща се и отново се поставя в термостат за 45 минути.

След 45 минути се определя работната доза на комплемента, т.е. неговият титър с надбавка в диапазона 15-20%.

Титърът на комплемента се счита за минимално количество, причинявайки пълна хемолиза на еритроцитите на коч в присъствието на антиген и нормален човешки кръвен серум.

Основният опит е, че всеки тестван инактивиран серум, разреден в съотношение 1: 5 с изотоничен разтвор на натриев хлорид, се излива в 0,25 ml в три епруветки. Добавете 0,25 ml антиген I към първата епруветка, 0,25 ml антиген II към втората и 0,25 ml изотоничен разтвор на натриев хлорид към третата (контрола). Добавете 0,25 ml комплемент, разреден до работната доза, към всички епруветки. Всички епруветки се поставят в термостат за 45 минути, след което към тях се добавя 0,5 ml от хемолитичната система, разклаща се и се поставя в термостат за 45-50 минути. Резултатът от експеримента се записва след началото на пълна хемолиза в контролните епруветки.

Резултатите от реакцията се оценяват с плюсове: пълно забавяне на хемолизата (силно положителна реакция) ++++, значително (положителна реакция) +++, частично (слабо положителна реакция) ++, незначително (съмнителна реакция) - ±, няма забавяне на хемолизата (отрицателна реакция) - .

При количествен методпри провеждане на реакцията на Васерман опитът се поставя с намаляващи обеми серум, разреден с изотоничен разтвор на натриев хлорид.

Схема за провеждане на основния опит на реакцията на Васерман

Клиничното значение на реакцията на Васерман е трудно да се надцени. Провежда се на всички пациенти преди началото на лечението, но специално значениетя има при латентен сифилис, поражение вътрешни органии нервната система.

Резултатите от реакцията на Васерман характеризират качеството на лечението, което дава основание за отписване на лекувани пациенти в определен период от време.

При първичен сифилис реакцията на Васерман обикновено е положителна в края на 6-та седмица от момента на заразяването; с вторичен пресен сифилис, той е положителен в почти 100% от случаите, с вторичен рецидив - в 98-100%; третично активен - в 85%; третично скрито - в 60% от случаите.

Реакцията на Васерман се провежда два пъти за всички бременни жени, пациенти със соматични, нервни, психични и кожни заболявания, както и декретираните контингенти от населението. В същото време положителните и слабо положителните резултати от реакцията трябва да се третират критично, тъй като те могат да бъдат в края на бременността и след раждането, с хипертиреоидизъм, малария, проказа, гниене злокачествен тумор, инфекциозни заболявания, колагенози и др.. Затова при наличие на клинични проявлениязаболявания, те трябва да се вземат предвид, заедно с данните от бактериоскопията, на първо място.

В същото време има фактори, които могат да изкривят истинската природа на резултатите от реакцията на Васерман: лошо измити лабораторни съдове (следи от киселина и основи в епруветки), дългосрочно съхранение на кръв, взета за изследване, консумация на мазнини и алкохол от пациенти преди преглед, менструален период и др.

Във всички случаи е желателно да се проведе цялостен преглед на пациента, включително, в допълнение към реакцията на Васерман, също RIBT (виж 122, 123, 124) и др.

122. Реакция на Сакс - Витебски (цитохоличен)

Използва се за откриване на сифилис. Основава се на образуването на утайка, когато кръвният серум на пациента се смеси с антиген.

За приготвяне на антигена мускулите на няколко говежди сърца се почистват от сухожилия, фасции, мазнини, смилат се в месомелачка и се екстрахират с 5-кратен обем 96% етанол в продължение на 15 дни с ежедневно 20-минутно разклащане. Полученият екстракт се изпарява на водна баня в порцеланова чаша под вакуум. Към остатъка (ярко жълта маса от липоиди) се добавя горещ 96% етилов алкохол в количество 1/3 от обема на мускулите, взети за екстракция.

Извлекът се държи 3 дни на стайна температура, филтрира се (в студена вода) и добавете 0,3-0,6% разтвор на кристален холестерол, в зависимост от резултатите от титруването с положителни и отрицателни серуми. Съхранявайте цитохоличен антиген при стайна температура в запечатани ампули или запечатани епруветки.

Методика. Към 2 ml изотоничен разтвор на натриев хлорид бързо се излива 1 ml цитохолен антиген и се оставя на стайна температура за 15 минути, докато се появят люспи. Добавете 0,1 ml антигенна емулсия към 0,2 ml инактивиран серум, разклатете в продължение на 3 минути и оставете за 30 минути, след което добавете 1 ml изотоничен разтвор на натриев хлорид.

Към контролната епруветка с антиген се добавят 1,2 ml изотоничен разтвор на натриев хлорид и 0,1 ml антигенна емулсия. В контролата не трябва да има люспи. Резултатите от реакцията се отчитат визуално или с лупа и се обозначават в зависимост от количеството изпаднали люспи с плюсове (++++, +++, ++). При отрицателна реакция няма люспи, но съдържанието на епруветката може да е леко опалесциращо.

През 1931 г. P. Sachs и E. Witebsky предлагат модификация на тази техника, която се състои в разреждане на антигена в две фази: 2 части изотоничен разтвор на натриев хлорид се добавят към 1 част от антигена, държат се при стайна температура в продължение на 5 минути. , и други 9 части изотоничен разтвор се добавят натриев хлорид. Също така се препоръчва разреждане на антигена с 2% разтвор на натриев хлорид, което според авторите повишава чувствителността на реакцията. Възможна е и количествена модификация на реакцията със серумно разреждане (1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64 и т.н.).

Реакцията е доста чувствителна, отнема кратко време (около 1 час), а резултатите от нея се отчитат веднага.

123. Реакция на имобилизация на бледа трепонема (RIBT)

С помощта на реакция в кръвния серум на пациенти със сифилис се откриват антитела и комплемент, които обездвижват бледа трепонема.

При първичен сифилис RIBT е предимно отрицателен, при вторичен - положителен в 92-96% от случаите, при третичен - в 92-100%, при сифилис на нервната система и вроден - в 86-89% от случаите.

Положителни резултати от RIBT са отбелязани при саркоид, еритематоза, диабет, злокачествени тумори, вирусен хепатит, цироза на черния дроб, малария, проказа, инфекциозна мононуклеоза, някои заболявания на горещите страни (пинта, фрамбезия и др.).

Антигенът е суспензия от бледа трепонема, взета от тестисите на заек, заразен със сифилис, чрез въвеждане в тестиса на 0,75-1 ml суспензия от бледа трепонема в изотоничен разтвор на натриев хлорид (50 индивида на зрително поле).

Материал от тестисите трябва да се вземе 6-8 дни след заразяването на животното. Преди да вземе антигена, заекът се заколва чрез обезкървяване (сърдечна пункция или каротидна артерия). Тестикуларната тъкан се натрошава и се пълни със здрав кръвен серум от заек, разреден с изотоничен разтвор на натриев хлорид, разклаща се за -30 минути и след това се центрофугира за 10 минути (1000 rpm). Супернатантът се изследва под микроскоп. Във всяко зрително поле трябва да има поне 10-15 бледи трепонема.

Подготвя се допълнение по обичайния начинот кръвта на морски свинчета.

За RIBT се нуждаете от: 1,2 ml 0,2% разтвор на желатин, 2,8 ml 5% разтвор на албумин, 1,6 ml суспензия от бледа трепонема; pH на средата - 7,2. Към тази смес се добавят 0,15 ml комплемент (коктейл). Паралелно се поставят две проби: с активни (опитни) и реактивни (контролни) добавки.

Изследваният серум се събира в меланжори до знака "1", след което коктейлът се събира до знака "2" и те се затварят със стерилен гумен пръстен.

В същото време подобна реакция се провежда с очевидно положителни и очевидно отрицателни серуми.

Меланжите се номерират и се поставят в термостат при температура 35 ° C за 18-20 часа, след което се изваждат по двойки (опит - контрола) от термостата и съдържанието се излива в съответните епруветки. 2 капки се нанасят върху предметното стъкло: отляво - опит, отдясно - контрола, покриват се с покривно стъкло и се микроскопират в тъмно зрително поле.

Първо се изследват резултатите от контрола: определя се процентът на подвижните и неподвижните бледи трепонеми. Формула за преброяване: X = (A - B) / A * 100, където A е броят на подвижните бледи трепонеми в контролата; B - броят на подвижните бледи трепонеми в експеримента.

Пример: (24 - 19) / 24 * 100 = 21%.

Оценки на резултатите от RIBT: под 20% - отрицателни. 21-30% - съмнително, 31-50% - слабо положително, над 50% - положително.

Антиген, комплемент и спомагателна, индикаторна или хемолитична система - хемолитичен серум и овчи еритроцити.

Ако в първата система се образува специфичен комплекс антиген + антитяло, тогава комплементът се адсорбира (комбинира се с този комплекс) и във втората система не настъпва хемолиза.

Реакцията изисква:

1. Тест серум, който се получава от кръв, взета чрез пункция на кубиталната вена на пациента. След съсирването на кръвта серумът се аспирира в отделна епруветка и се инактивира за 30 минути при 56 °C във водна баня.

2. Антиген - суспензия от убити гонококи.

3. Овчи еритроцити се получават от стерилна дефибринирана кръв. Те се промиват чрез центрофугиране 3 пъти с нови порции физиологичен разтвор. В реакцията се използва 3% суспензия от еритроцити.

4. Предварително се приготвя хемолитичен серум чрез имунизиране на зайци с еритроцити на коч. Серумът се титрира преди употреба.

5. Допълнение - свеж серум от морско свинче. Кръвта се изсмуква от сърцето на морско свинче със спринцовка, след съсирване серумът се отделя. Преди експеримента работната доза комплемент се титрира. За да направите това, вземете основното разреждане на комплемента 1:10 и го изсипете в епруветки от 0,1 до 0,5, след което обемът във всяка епруветка се регулира с физиологичен разтвор до 1,5 ml.

В същото време се приготвя хемолитична система - разреден в троен титър хемолитичен серум + 3% суспензия от овчи еритроцити. Двете съставки са в различни обеми и се държат в термостат за 30 минути (сенсибилизиране на сместа), след което сместа се добавя по 1 ml в епруветки и се поставя в термостат за 30 минути. 2 епруветки служат за контрола:

1. 1 ml хемолитична система + 1,5 ml физиологичен разтвор;

2. 0,5 ml комплемент 1:10 + 0,5 ml еритроцитна суспензия + 1,5 ml физиологичен разтвор.

Титърът на комплемента е минималното количество, при което все още настъпва хемолиза. За да се настрои реакцията, се взема работна доза комплемент, увеличена спрямо титъра с 20-25%, т.е. обикновено количеството комплемент, което е в предпоследната епруветка с хемолиза. Увеличаването на дозата на комплемента е необходимо, тъй като в реакцията активността на комплемента може да бъде до известна степен потисната от други съставки на реакцията (антиген, серум).
43) RSK Васерман

Използва се за диагностициране на сифилис с цел откриване на антитела, както и за определяне на ефективността специфична терапия. Основава се на принципа на реакцията на свързване на комплемента на Borde-Gangou. Съществена разлика в реакцията на Васерман е неспецифичността на антигена: липоидните екстракти от нормални органиживотни

За да се установи реакцията на Васерман, е необходимо да имате серум на пациента, диагностика, кръстосано реагиращи антигени № 1, № 2, комплемент, хемолитичен серум, еритроцити на овен, физиологичен разтвор.

Диагностикум No1 - специфичен, трепонемален.

Диагностикум № 2 - неспецифичен, кардиолипинов антиген, които са високо пречистени екстракти от говеждо сърце, които имат постоянен химичен състав на липоиди. Липоиди, от химичен съставса близки до липоидите на treponema pallidum, следователно, въпреки че не са специфични, те фиксират антитела срещу спирохети.

Тези антигени се произвеждат централно и се използват в реакцията, разредени според титъра, посочен на етикета.

Едновременно с основния опит се поставят 2 контроли: с очевидно отрицателни и с очевидно положителни серуми.

Настройване на основния опит

Първо, инактивиран и разреден тестов серум 1:5 се излива в 4 епруветки. След това антигени (№ 1, № 2) се изсипват в 2 епруветки, физиологичен разтвор се излива в 3-та епруветка. След това към всички епруветки се добавя работна доза комплемент. След смесване на съставките, стелажът с епруветките се поставя в термостат при 37 °C за 30 минути. След престой в термостат към всички епруветки се добавя хемолитична система. Епруветките отново се поставят в термостат за 2 часа, след което се оставят на стайна температура. На следващия ден се отбелязва резултатът.Оценява се степента на интензивност на реакцията, четири плюса (++++), три (+++), два (++) и един (+) - в зависимост от интензивността от цвета на течността и размера на еритроцитния седимент на дъното. Пълната хемолиза се обозначава с (-) минус. При рязко несъответствие между резултатите с различни антигени, експериментът се повтаря с нова порция кръв.
44) RIT-r. Имобилизиране на бледа трепонема.

Тази реакция се използва в диагностични цели, и за признанието фалшиви положителни резултатистандартни серологични реакции, особено при латентен сифилис.

RIBT се крие във факта, че в присъствието на имобилизини в серума на пациенти със сифилис и активен комплемент, бледите трепонеми губят своята подвижност.

РИБТ се поставя в стерилни кутии. В реакцията участват тест серумът, комплементът и антигенът.

При RIBT антигенът е суспензия от бледа трепонема от заешки тестис в ранни дати(7-8 дни след заразяването) сифилитичен орхит. Специална суспензионна среда запазва жизнеспособността на бледа трепонема поне за един ден. В RIBT се използва комплемент морски свинчета. RIBT протича при анаеробни условия. Епруветките със съставките се поставят в микроаеростат, от който атмосферен въздухи се впръсква газова смес (95 части азот и 5 части въглероден двуокис). Микроанаеростатът с епруветки се поставя в термостат (35°С) за 18-20 часа.

Успоредно с формулирането на реакцията, контролни изследванияс положителен и отрицателен кръвен серум, взет от предишен опит.

Резултатите от RIBT се оценяват след изваждане на епруветките от термостата (т.е. след 18-20 часа опит). С пастьорова пипета капка от съдържанието на епруветката се нанася върху предметно стъкло, което се покрива с покривно стъкло и се изследва в тъмното поле на микроскоп (обектив 40, окуляр 10). При обездвижване на до 20% от бледите трепонеми реакцията се счита за отрицателна, от 21 до 30% - съмнителна, от 31 до 50% слабо положителна, от 51 до 100% - положителна. Процентът на обездвижване на бледа трепонема се определя съгласно специална таблица.

45) Опсон-фагоцитна реакция

Механизъм: повишена фагоцитоза на микробни клетки под влияние на благоприятните ефекти на антитела, имунен серум и комплемент.

Компоненти на реакцията:

1) антиген - дневна микробна култура;

3) комплемент - пресен серум от морско свинче;

4) фагоцити - левкоцитна суспензия.

Опсонините са антитела, намиращи се в нормални и имунни серуми и подготвят микробите за фагоцитоза.

Реакцията се поставя в специални епруветки при t=37° минути. След това се приготвят петна от всяка епруветка, преброяват се 100 фагоцита и се определя броят на фагоцитираните микроконтроли.

Опсоничен индекс = фагоцитен индекс. серум/фагоцитен индекс на нормален серум

Колкото по-висок е опсоничният индекс (трябва да бъде >1) на изследвания серум и следователно толкова по-висок е! бруцелоза).

Използва се за определяне на опсонини - антитела, които стимулират фагоцитната активност на левкоцитите, т.е. серодиагностика на инфекции като бруцелоза.

Повишаването на фагоцитозата се дължи на прикрепването на опсонини с активни центрове (Pav-фрагмент) към бактериални детерминанти и след това, с помощта на Pc-фрагменти, към Pc-рецепторите на фагоцитите. Нормалният серум съдържа малки количества опсонини, които действат в присъствието на комплемент. В имунния серум има повече опсонини и тяхната активност е по-малко зависима от комплемента.

Компоненти:

Изследван серум

нормален серум

Ежедневна микробна култура (напр. стафилококова)

Фагоцити - суспензия от неутрофили

Инкубация при 37°C за 30 минути. От всяка епруветка се приготвят петна, оцветени по Romanovsky-Giemsa и броят на микробите се преброява под микроскоп, в 100 или повече неугрофили, т.е. определяне на фагоцитния индекс.

Фагоцитен индекс - броят на микробите, абсорбирани от един неутрофил.

Опсоничен индекс фагоцитен индекс на имунен (тестван) серум / фагоцитен индекс на нормален серум.

Колкото по-висок е опсоничният индекс (трябва да бъде > 1), толкова по-висок е имунитетът.

Опсоно-фагоцитният индекс е цифров индикатор = броя на фагоцитите х фагоцитозния резултат (в зависимост от броя на погълнатите микроби). Максималният резултат е -75.

46) RN върху мишки, за да се установи екзотоксин

Тази реакция се основава на способността на специфичен антитоксичен серум да неутрализира екзотоксина.

Имунните серумни антитела са в състояние да неутрализират увреждащия ефект на микробите или техните токсини върху чувствителни клетки и тъкани, което е свързано с блокадата на микробните антигени от антитела, т.е. тяхната неутрализация.

Реакцията на неутрализация (RN) се извършва чрез въвеждане на смес антиген-антитяло в животни или в чувствителни тестови обекти (клетъчна култура, ембриони). При липса на увреждащ ефект на микроорганизми или техните антигени, токсини в животни и тестови обекти, те говорят за неутрализиращия ефект на имунния серум и следователно за специфичността на взаимодействието на комплекса антиген-антитяло.

За провеждане на реакцията се смесва тестовият материал, в който се очаква наличието на екзотоксин антитоксичен серум, съхраняван в термостат и прилаган на животни (морски свинчета, мишки). Контролните животни се инжектират с филтрата на тестовия материал, който не е третиран със серум. В случай, че настъпи неутрализиране на екзотоксина с антитоксичен серум, животните от експерименталната група ще останат живи. Контролните животни ще умрат в резултат на действието на екзотоксина.

Реакцията на неутрализация на екзотоксина възниква, когато той взаимодейства с антитоксичен серум (антитела-антитоксини). В резултат на образуването на комплекса антиген-антитяло токсинът губи токсичните си свойства.

Реакцията на неутрализация се провежда, за да се открият и титруват токсини, токсоиди или антитоксини.

Токсините се получават чрез филтриране на течност растежна средаили тестов материал, където са се размножили токсигенни бактерии. При обработка с формалин в продължение на 30-45 дни при температура 37°C токсинът се превръща в анатоксин, който се използва за имунизиране на животните за получаване на антитоксичен серум.

Реакция на неутрализация in vivo. За да се определи вида на токсина, той се смесва с диагностичен антитоксичен серум и тази смес се прилага на бели мишки. Когато токсинът се неутрализира с антитоксичен серум, мишките не умират.

Реакцията на неутрализация се използва за определяне на антитоксичния имунитет при деца с дифтерия (тест на Шик) и скарлатина (тест на Дик). За да направите това, определено количество от съответния токсин (1/40 DLM) се инжектира интрадермално в областта на предмишницата. Ако в тялото има антитоксини, токсинът ще бъде неутрализиран и реакцията ще бъде отрицателна. При липса на антитоксини в организма, възпалителен отговорна мястото на инжектиране.
47) RN (реакция на неутрализация) върху мишки за идентифициране на вируса енцефалит, пренасян от кърлежи

Вирусът на ТВЕ е патогенен за редица лабораторни и диви животни. Най-чувствителни са новородените и младите бели мишки. След инфекция в мозъка, интраперитонеално, интрамускулно, тези животни развиват енцефалит, завършващ със смъртта на животните. От селскостопанските животни козите са най-податливи на TBE вируса, овцете и кравите са по-малко податливи, а конете са слабо податливи. Вирусът на TBE има цитопатогенен ефект (CPE), причинявайки цитопатични промени в първични и трансплантирани култури от свински ембрионални бъбречни клетки (SPEV и RPE) и се размножава без изразен CPE в много други. клетъчни култури. В мозъка на заразените мишки и културната течност на заразените култури се натрупват вирусът на ТВЕ и специфични вирусни антигени: фиксиращи комплемента, хемаглутиниращи, преципитиращи и др.

TBE вирус дълго времеконсервирани при ниски температури ( оптимален режим-60 градуса. C и по-ниски), понася добре лиофилизацията, в изсушено състояние остава много години, но бързо се инактивира при стайна температура. Варенето го убива след 2 минути, а в горещо мляко на 60 градуса. C умира след 20 минути.

Формалин, фенол, алкохол и други дезинфектанти, ултравиолетова радиация също имат инактивиращ ефект.

Реакцията на неутрализация се основава на способността на специфични имунни серуми да потушават инфекциозния ефект на вирусите. Прилага се в две направления:

1) за типизиране на изолирани вируси;

2) за титруване на антитела в серума на възстановени пациенти.

Настройка на реакцията:

1. Върху лабораторни животни. Критерии за наличие на вирус

е смъртта на лабораторни животни. Изчислява се LD50

Максималното разреждане на вирусната суспензия, която

причини смъртта на 50% от заразените животни. За

се извършва идентифициране на вируса на енцефалит, пренасян от кърлежи

интрацеребрална инфекция на бели мишки.

2. В тъканни култури. Извършва се осчетоводяване на резултатите

Чрез цитопатично действие (CPE)

Чрез метода на цветен тест, базиран на промяна на цвета

Чрез хемадсорбция.

3. В пилешкия ембрион. Отчитането на резултатите се извършва съгласно

появата на петна по протежение на хориоалантоисната мембрана.

48) RTGA

Тази реакция се използва във вирусологичната практика:

За определяне на вида на вируса (на стъкло);

За откриване в серума на пациенти (разгърнати).

При установяване на приблизителна реакция на инхибиране на хемаглутинацията върху стъклото се нанася 1 капка типоспецифичен имунен серум, след което се добавя 1 капка от тестовия материал и 1 капка 5% суспензия от еритроцити.

Отчитане на резултатите: типът на вируса се определя от серума, с който не е настъпила реакцията, тъй като имунният серум, специфичен за изолирания вирус, потиска неговата хемаглутинираща активност и еритроцитите не аглутинират.
49) RIF

Като етикет се използват светещи флуорохромни багрила (флуорисцеин изотиоцианат и др.).

Има различни модификации на RIF. За експресна диагностика на инфекциозни заболявания - за откриване на микроби или техни антигени в изследвания материал се използва RIF по Кунс.

Има два метода на RIF според Кунс: директен и индиректен.

Директни RIF компоненти:

1) изследваният материал (изпражнение, отделено от назофаринкса и др.);

2) белязан специфичен имунен серум, съдържащ AT-la към желания антиген;

3) изотоничен разтвор на натриев хлорид.

Намазка от тестовия материал се третира с белязан антисерум.

Възниква AG-AT реакция. При луминесцентно микроскопско изследване в областта, където са локализирани комплексите AG-AT, се установява флуоресценция - луминесценция.

Индиректни RIF компоненти:

1) изследваният материал;

2) специфичен антисерум;

3) антиглобулинов серум (AT-la срещу имуноглобулин), маркиран с флуорохром;

4) Изотоничен разтвор на натриев хлорид.

Намазка от тестовия материал първо се третира с имунен серум към желания антиген и след това с маркиран антиглобулинов серум.

Светещи AG-AT комплекси - белязани с AT се откриват с помощта на флуоресцентен микроскоп.

Предимството на индиректния метод е, че не е необходимо да се приготвя широка гама от флуоресцентни специфични серуми и се използва само един флуоресцентен антиглобулинов серум.

Изолира се и 4-компонентна разновидност на индиректен RIF, когато допълнително се въвежда комплемент (серум от морско свинче). При положителна реакция се образува комплекс AG-AT - белязан - AT-комплемент.

Реакцията се отнася до серологични реакциивключващи маркирани антигени или антитела.

Извършва се чрез директни и косвени методи.

При директен методоткриване на антиген в материала от пациента. Използва се диагностичен флуоресцентен серум, който съдържа имуноглобулини, изолирани от имунни серуми и маркирани с флуорохроми.

Специфичният антиген се намира под формата на яркозелени луминисцентни конгломерати, а фонът на препарата се оцветява в оранжево-червен цвят.

Компоненти на реакцията на директна имунофлуоресценция:

1) изследваният материал;

2) специфичен луминисцентен серум;

3) луминисцентен микроскоп.

При диагностицирането на грип се извършва диференциация от патогените на параинфлуенца и аденовирусна инфекция. Назофарингеалният тампон се третира с флуоресцентен противогрипен серум или противогрипен имуноглобулин.

"+" резултат под формата на зелен блясък се получава след 3 часа.

При индиректния метод се откриват и титруват специфични антитела. Серумният титър е неговото максимално разреждане, при което флуоресценцията се отбелязва при "+ +".

Компоненти на реакцията на индиректна имунофлуоресценция

За търсене на антиген при експресна диагностика:

1) тестов материал (антиген);

2) специфичен серум;

3) антиглобулинов луминисцентен серум

4) луминисцентен микроскоп.

/ специфична фаза

Серумните антитела се адсорбират към антигена.

// неспецифична фаза

Използва се белязан с флуорохром антиглобулинов серум. Образува се комплекс антиген + антитяло (I) + антиглобулинов серум (II), който свети.