Механизмът на реакцията на утаяване е различен от реакцията. Реакция на утаяване (имунологичен метод)
Състои се във взаимодействието на разтворим антиген с антитяло, последвано от образуване на финозърнест седимент (утайка).
Реакцията на утаяване дава възможност да се определи наличието на неизвестен антиген в тестовия материал чрез добавяне на известно антитяло или използване на известен антиген за определяне на неизвестно антитяло. Валежи става все по-злепри липса на соли. Оптималното утаяване е в диапазона pH=7,0-7,4.
Механизмът на утаяване е близък до механизма на аглутинация. Под въздействието на имунната система, която е реагирала с антигена, степента на неговата дисперсия намалява. Необходимо е серумът и антигенът да са напълно прозрачни. Когато извършвате утаяване, можете да добавите различни разреждания на антигена към едно разреждане на серума или обратно.
Преципитацията се записва по-добре, ако антигенът е наслоен върху антитялото в епруветка. В този случай се наблюдава появата на утайка под формата на пръстен - пръстеновидно утаяване. Утаяването на пръстена се извършва в специални тръби с диаметър 2,5-3,5 mm. За определяне на броя на антигените в тествания материал или различни антитела в серума се използва реакцията на утаяване на агар: 1% избистрен агар се излива в или върху предметни стъкла. Разтворите на антиген и антитяло се изсипват в различни ямки, направени в агар, които дифундират една към друга, образувайки линии на утаяване. Реакцията на утаяване се използва широко в диагностиката (виж реакцията на Асколи).
Утаяването в агар дава възможност да се определи токсигенността на дифтерийните култури.
IN криминалистични изследванияпреципитацията служи за установяване на видовата принадлежност на кръвта, органите и тъканите с помощта на специфични утаяващи серуми.
Преципитация - реакцията на утаяване на комплекс от антиген (преципитоген) и антитела (преципитин). Утаяването е едно от имунологичните явления, което позволява да се определи съдържанието на антитела (виж) в кръвния серум на болни или ваксинирани хора, както и в кръвта на имунизирани животни. Когато се използват стандартни серуми, реакцията на утаяване може да се използва за титруване на разтворими антигени от различен произход (виж).
В най-простата форма на настройка на реакцията на утаяване, тест серумът се добавя чрез наслояване в серия от епруветки с постоянно количество антиген в серия от многократни разреждания. След 30-60 мин. инкубиране при стайна температура, пръстен от мътност се образува на границата на две течности - пръстеновидно утаяване. Минималното количество серум, което дава реакция на утаяване, се приема като титър на антисерума. Чрез извършване на обратната реакция със стандартен антисерум е възможно да се оцени относителната концентрация на антигена в различни биологични течности.
Резултатите от титруване на антитела и антигени по горния метод нямат абсолютен количествен израз. За да се определи количествено съдържанието на антитела, Heidelberger, Kabat (M. Heidelberger, E. Kabat) и други разработиха количествен методреакция на утаяване, която се основава на откриването на така наречената зона на еквивалентност. При смесване на специфични за възрастта количества антиген с постоянни обеми антисерум, количеството на образуваната утайка първоначално се увеличава и след това отново намалява поради повишената разтворимост на комплекса антиген-антитяло в излишък от антиген. Ако определим съдържанието на антитела в супернатантата във всички епруветки, ще се окаже, че в средните епруветки от редицата или дори в единствената епруветка няма антитела в супернатантата; в същото време тук се образува най-голямата утайка. Тъй като в зоната на еквивалентност целият антиген, въведен в сместа от реагиращи вещества, също участва в утайката, след изваждане на протеина на антигена от количеството на протеина на утайката, се получава точната стойност на съдържанието на антитела в даден обем тестов серум . Съдържанието на протеини в утайката след щателно промиване с охладен физиологичен разтвор се определя чрез азот или някакъв колориметричен метод.
При оценка на стойността на реакцията на утаяване като диагностичен методнеобходимо е да се вземе предвид, че имунните серуми могат да съдържат антитела, които нямат свойствата на преципитини и следователно не образуват утайка при взаимодействие с антигена. Те включват предимно непълни антитела, както и някои други антитела, принадлежащи към групата на гама А-глобулините.
Способността на антисерума да утаява антиген може да бъде нарушена чрез нагряване до 65-70 °, третиране с органични разтворители, редукция в кисела среда [Izliker (N. Isliker), A.Ya. Кулберг]. Феноменът на утаяване с антисерум, за който е известно, че съдържа преципитини, е възможен само при определена температура, концентрация на соли и водородни йони. Реакцията на утаяване протича най-бързо при 25-37°. Задължително условие за образуването на утайка е наличието на натриев хлорид (0,85% разтвор на NaCl) в изотонични концентрации. Когато концентрацията на NaCl се увеличи до 15%, утайките, образувани от полизахаридния антиген, частично се разтварят, което може да се използва за извличане на чисти антитела. Реакцията на утаяване с протеинови антигени протича с еднаква скорост и пълнота както при 0,85%, така и при 15% разтвори на NaCl. Оптималната концентрация на водородни йони за образуване на утайка съответства на стойности на рН от 5,0 до 9,0.
В лабораторната практика се използват различни модификации на реакцията на утаяване. По-специално, реакцията на термопреципитация се използва за откриване на бактериални антигени антракс, ботулизъм и др., неподлежащи на термична денатурация (коктоантигени). Тази реакция се различава от реакцията на пръстеновидно утаяване само по това, че филтратът от сварен тестов материал се използва като антиген (вижте Какво представлява реакцията).
Когато се анализира сложна смес от антигени с помощта на реакцията на утаяване, е невъзможно да се характеризират свойствата на отделните компоненти на сместа. За да решат този проблем, те прибягват до методите на утаяване в агар и имуноелектрофореза. Методът на утаяване на агар в най-разпространената модификация на O. Ouchterlony се основава на факта, че антигенът и антисерумът, дифундиращи един към друг в тънък слой агар, образуват линии на утаяване, когато се срещнат. По броя на тези линии може да се съди за броя на компонентите, съдържащи се в дадена смес от антигени. Методът Ouhgerlonu ви позволява да сравнявате различни антигенни смеси и да определяте степента на свързаност на присъстващите в тях компоненти. При анализиране на сложна антигенна смес, съдържаща вещества с еднакви скорости на дифузия в агар, голяма помощможе да донесе имуноелектрофореза метод. Антигенната смес се разделя предварително в електрическо поле в агарово блюдо, след което се проявява отделни компонентиантисерум. Антисерумът се добавя към улей, направен в агара, успореден на линията, по която се движат антигените по време на електрофорезата. Всеки антиген произвежда индивидуална преципитационна дъга с антисерум. Имуноелектрофореза се използва широко за анализ патологични аномалиив серумните протеини, както и в имунологичния анализ на тъканни и бактериални антигени.
Съдебномедицински валеж. Преципитацията се използва в съдебната медицина за установяване вида на кръвта, части от органи и тъкани. В редица следствени случаи е необходимо да се установи вида на кръвта, открита върху инструментите на престъплението, върху дрехите на престъпника или жертвата и т.н. За реакцията на утаяване се използват преципитиращи серуми, получени чрез имунизиране на зайци, петли, кози с протеини от различни животни. Обикновено се приготвят серуми, които утаяват хора, коне, котки, пиле, прасе, куче, говеда. Те трябва да имат титър поне 1:10 000 и да са доста специфични. Екстракти се приготвят от изследваното петно или кора кръв. физиологичен разтвор, които след това се тестват с преципитиращи серуми. Видът на протеина се счита за установен, ако един от преципитиращите серуми образува утайка с екстракт от изследваната кръв със съответната контролна реакция. Реакцията на утаяване може също така да определи вида на протеина в човешки или животински тъкани и органи. Обикновено реакцията на утаяване се провежда в епруветки с конусообразен край. Когато се получат мътни екстракти, реакцията на утаяване се провежда в агар на Ouchterlohn.
Реакция на утаяване (RP) е утаяване на разтворим антиген под действието на антитела в присъствието на електролит. Видим реакционен ефект (феномен на утаяване) – облачност (образуване на мътен пръстен или утайка - утайка).
RP се използва за откриване на неизвестен антиген при редица инфекциозни заболявания: за антракс, туларемия, менингит, едра шарка. В съдебната медицина се използва за определяне на видовете кръв и сперма; в санитарно-хигиенните изследвания - за установяване на фалшификация хранителни продукти. RP е много различен висока чувствителности ви позволява да откриете антиген при разреждания от 1:1 000 000 и 1:10 000 000.
Компоненти на реакцията на утаяване.
1. Антиген (преципитоген) -това е антиген молекулярна природа, който е във фино диспергирано (разтворимо) състояние. Преципитогените са различни лизати или екстракти от тъкани и др. Преципитогенът се различава от аглутиногена по размера на антигенните частици. АглутиногенТо има размери на клетката(това не са унищожени цели клетки), а размерите преципитогенсъизмерим с молекулни размери(това са протеини и техните комплекси с въглехидрати или липиди). Преципитогенен разтвор прозрачен.
2. Антитела (преципитини)се откриват в човешки кръвен серум или в имунни диагностични преципитиращи серуми, които съдържат известни антитела.
3. Електролит– изотоничен разтвор на натриев хлорид.
Получаване на преципитоген.
Получава се чрез смилане на материала и извличане на протеинови антигени от него чрез варене или други методи.
Примери за преципитогени: лизати или екстракти различни органии тъкани, чужд кръвен серум (серумът е решение, на първо място, различни протеини),филтрати от бульонни култури от микроби, солни екстракти от микроби, автолизати и др.
Приготвяне на преципитиращи серуми.
Получен чрез хиперимунизация на зайци с подходящи преципитогени. Такива серуми съдържат антитела към онези преципитогени, с които са имунизирани зайци.
Примери за преципитиращи серуми: утаяване антраксен серум (съдържа антитела срещу антигени на антракс), преципитиращ антименингококов серум(съдържа антитела срещу антигени на причинителя на менингит) и др.
Титърпреципитиращ серум - това е най-високото разреждане на преципитогена, при което серумът все още дава реакция на утаяване.
Методи за настройка на RP.
1. Реакция на пръстеновидно утаяване –извършва се в специални утаителни тръби (диаметър - 0,4-0,5 cm, височина - 7-8 cm). 0,2 - 0,3 ml утаяващ серум се добавя към епруветката и същото количество преципитоген се наслоява внимателно по стената с дългия накрайник на пастьоровата пипета. След това внимателно поставете епруветките вертикално от хоризонтална позиция.
Отчитане на резултатите от реакцията извършва се чрез появата на бял пръстен на границата антиген-антитяло. Ако реакцията е положителна се наблюдава образуването на такъв пръстен. В този случай антигенът съответства на антитялото и се осъществява тяхното свързване.
Ако като преципитоген се използват сварени и филтрирани водни екстракти от органи и тъкани, реакцията се нарича реакция thermoring валежи (например при диагностициране на антракс).
2. Реакция на утаяване в гел -извършва се в панички на Петри или върху предметни стъкла, където се поставя слой агар гел. Докато гелът се втвърдява, се изрязват ямки, в които се поставят антигени или антитела, или и двете. Разграничете 2 метода RP в гел:
а) метод проста (радиална) имунодифузия: един от компонентите на имунната реакция (антиген или антитяло) се поставя в ямката, а другият компонент се смесва с агар; при положителен резултат (антиген съответства на антитяло) a утайка пръстен ;
б) метод двойна имунодифузия: както антитялото, така и антигенът се поставят в отделни ямки, те дифундират един към друг в агарния гел; ако резултатът е положителен където се образуват антитела и антиген валежни линии .
Пример за RP в геле реакцията на двойна имунодифузия на Ouchterlony при диагностициране на дифтерия
Имуноелектрофореза –Това е метод, който съчетава метода на електрофорезата и реакцията на утаяване. Смес от антигени (например серумни протеини) се разделя в гел с помощта на електрофореза. След това, за да се намери и идентифицира интересуващият протеин (неизвестен антиген), се използва диагностичен преципитиращ серум, който съдържа антитела към този протеин (известно антитяло). За да направите това, диагностичният серум се въвежда в жлеба успоредно на протеините. Ако сред протеините има такъв, който съответства на антитялото, открито в серума, тогава валежни линии.
Реакция на утаяване- RP (отлат. praecipito- преципитат) - това е образуването и утаяването на комплекс от разтворим молекулен антиген с антитела под формата на мътност, т.нар. утайка.Образува се чрез смесване на антигени и антитела в еквивалентни количества; излишъкът от един от тях намалява нивото на образование имунен комплекс. За разлика от реакцията на аглутинация, антигенът за реакцията на утаяване е разтворими съединения, чийто размер на частиците се доближава до размера на молекулите. Това могат да бъдат протеини, комплекси от протеини с въглехидрати и липиди, бактериални екстракти, различни дисати или филтрати на бульонни култури от микроби. Антителата, участващи в реакцията на утаяване, се наричат преципитини. Полученият фино диспергиран комплекс антиген-антитяло се открива с помощта на определени методи за стадиране на реакцията на утаяване.
Реакцията на утаяване на пръстена е предложена за първи път от Асколи. Използва се при диагностицирането на антракс, чума, туларемия и менингит. Методът е прост и достъпен.
Специфичен имунопреципитиращ серум се излива в тесни утаяващи епруветки и антигенът се наслоява много внимателно върху него. Като антиген например при диагностициране на антракс се вземат парчета кожа, вълна, кожи от паднало животно и др.. Сваряват се, течността се прецежда и се използва като антиген. Появата на пръстен - утайка на границата на две течности - показва наличието на съответния антиген.
Реакцията на утаяване с агар гел или методът на дифузионно утаяване позволява подробно изследване на състава на сложни водоразтворими антигенни смеси. За да настроите реакцията, използвайте гел (полутечен или по-плътен агар). Всеки компонент, който изгражда антигена, дифундира към съответното антитяло с различна скорост. Поради това се намират комплекси от различни антигени и съответните антитела различни областигел, където се образуват преципитационни линии. Всеки ред съответства само на един комплекс антиген-антитяло. Реакцията на утаяване обикновено се провежда при стайна температура.
Получен е методът на имуноелектрофореза широко използване V последните годинипри изследване на антигенната структура на микробите. Антигенният комплекс се поставя в ямка, която се намира в центъра на агар гел, излят върху плоча. След това електрически ток преминава през агарния гел, което кара различните антигени, включени в комплекса, да се преместят в полето електрически токв зависимост от тяхната електрофоретична подвижност. След завършване на електрофорезата специфичен имунен серум се добавя към улей, разположен по протежение на ръба на плаката, и се поставя във влажна камера. На местата, където се образува комплексът антиген-антитяло, се появяват преципитационни линии.
Реакции на утаяване слагамв епруветки (реакция на пръстеновидно утаяване),в гелове, хранителни среди и др. Широк получено разпределениевидове реакции на утаяване в полутечен агар или агарозен гел: двойна имунодифузия по Ouchterlony. радиална имунодифузия, имуноелектрофорезаи т.н
Реакция на радиална имунодифузия. Имунният серум с разтопен агар гел се налива равномерно върху чашата. След втвърдяване в гела се правят ямки, в които се поставя антигенът в различни разреждания. Антигенът, дифундиращ в гела, образува пръстеновидни зони на утаяване около ямките с антитела (фиг. 13.7). Диаметърът на преципитационния пръстен е пропорционален на концентрацията на антигена. Реакцията се използва за определяне на съдържанието в кръвта на имуноглобулини от различни класове, компоненти на системата на комплемента и др.
Имуноелектрофореза- комбинация от електрофореза и имунопреципитация: смес от антигени се въвежда в ямките на гела и се разделя в гела с помощта на електрофореза. След това в жлеба, успоредно на зоните на електрофореза, се въвежда имунен серум, чиито антитела, дифундирайки в гела, образуват линия на утаяване в точката на контакт с антигена.
Имунна електронна микроскопия- електронна микроскопия на микроби, най-често вируси, третирани с подходящи антитела. Вирусите, третирани с имунен серум, образуват имунни агрегати (микропреципитати). Около вирионите се образува "венче" от антитела, контрастиращи с фосфорволфрамова киселина или други електронно-оптически плътни препарати.
123. Реакция на утаяване в гел за определяне на токсигенността на микроорганизми, механизъм, методи на формулиране.
Реакция на утаяване (RP)- това е образуването и утаяването на комплекс от разтворим молекулен антиген с антитела под формата на мътност, наречена утайка. Образува се чрез смесване на антигени и антитела в еквивалентни количества; излишъкът на един от тях намалява нивото на образуване на имунен комплекс.
През 1946 г. J. Oudin предлага прост метод на дифузия, при който един от компонентите на реакцията на утаяване, обикновено серум, е в гел, а другият - антигенът - е наслоен върху първия под формата на разтвор .
Антигенът, дифундиращ в гела, образува в него бели преципитационни линии с антитела, ясно видими при странично осветление. През 1948 г. J. Ouchterlonyu разработи още по-прост и по-удобен метод за двуизмерна контра-дифузия, позволяващ директно сравнение на различни антигени и серуми. Този метод също е много ценен при изследване на кръстосани реакции.
За настройка на реакцията на Ouchterlon се използва 1% агар, приготвен във физиологичен разтвор, който се излива в петриеви панички със слой от 0,5 см. След втвърдяване в агаровата плоча се изрязват отвори с диаметър 5-6 mm - един в центъра на съда, 4-5 - по обиколката на разстояние 1-2 см от централната. Диагностичният преципитиращ серум се излива в централната ямка, а разтвор на хомоложни и сравними антигени се излива в периферните ямки. Резултатите се записват след 24, 48 и 72 часа инкубиране при стайна температура.
Антителата и антигените дифундират един към друг и в областите, където се създават техните еквивалентни концентрации, се образуват дъгообразни преципитационни ивици. Ако преципитационните ивици, идващи от две съседни ямки, се слеят, това показва наличието на няколко антигенни компонента в тестовата течност. Реакцията на контра-дифузия на Ouchterlohn често се използва за определяне на токсигенността на бактерии, като дифтерия.
По-нататъшно развитие на метода за утаяване с гел е имуноелектрофореза. Този термин се отнася до метод, който съчетава електрофоретично разделяне на смес от антигени и противодифузия на Ouchterlon върху една и съща агарна гел плоча. Утаеният серум се излива в жлеб, изрязан в гела, успореден на посоката на електрофоретичното разделяне.
Образуваните в резултат на реакцията линии на утаяване имат формата на дъги, издължени по посока на електрофоретичното движение на антигенните фракции. Имуноелектрофорезата позволява да се определи състава на сложни смеси от разтворими антигени, съдържащи до 30 компонента, и следователно е ценен диагностичен метод.
Реакция на утаяване(RP) се нарича утаяване от разтвор на Ag (преципитоген), когато е изложен на имунен серум (преципитин) и електролит.
Чрез RP е възможно да се открие антиген в разреждания 1:100 000 и дори 1:1 000 000, т.е. в толкова малки количества, които не могат да бъдат открити химически.
Преципитогените са ултрамикроскопични частици от естествен протеин-PS: екстракти от микрони, органи и TC, pat материал; продукти от разпада на бактериални клетки, техните лизати, филтрати. Преципитогените са термично стабилни, следователно, за да се получат, материалът се подлага на кипене.
RP използва течно прозрачно Ag.
Утаяващите серуми обикновено се получават чрез хиперимунизиране на зайци в цикли в продължение на няколко месеца, като им се инжектират бактериални суспензии, филтрати от бульонни култури, автолизати, солни екстракти от микроорганизми и суроватъчни протеини.
Продукция на RP Ascoli.В тясна епруветка с малко количество неразреден преципитиращ серум, като я държите в наклонено положение, същият обем Ag бавно се наслоява по стената с пипета.
За да се избегне смесването на двете течности, епруветката се поставя внимателно вертикално. Ако реакцията е положителна в епруветка, след 5-10 минути на границата между серума и изследвания екстракт се появява сиво-бял пръстен. Реакцията задължително се придружава от серумни и антигенни контроли.
Реакцията на Асколи се използва за идентифициране на антракс, туларемия и чума Ag.
Намира приложение и в съдебната медицина за определяне на вида на протеина, по-специално петна от кръв, в санитарната практика при идентифициране на фалшифициране на месо, риба, продукти от брашно, примеси в млякото. Недостатъкът на този RP е нестабилността на утайката (пръстена), която изчезва дори при леко разклащане. Освен това не може да се използва за определяне количествен състав Ags, участващи в образуването на утайката.
Реакция на утаяване на Ouchterlony.Реакцията се провежда върху петриеви панички в ямките на агар гел.
Като гел се използва добре измит прозрачен агар. Ag и серум се добавят към агарния гел, така че ямките, които ги съдържат, да са на определено разстояние. Разпространявайки се един към друг и комбинирайки се един с друг, антитялото и антигенът образуват имунен комплекс под формата на бяла ивица след 24-48 часа.
При наличие на комплексен преципитоген се появяват няколко ленти. В този случай лентите на серологично свързани антигени се сливат заедно, а лентите на различни се пресичат, което позволява да се определят подробностите за антигенната структура на изследваните вещества.
Широко използван за диагностициране на заболявания, причинени от вируси и бактерии, които произвеждат екзотоксини.
3.Реакция на индиректна хемаглутинация (IRHA).Използва се за откриване на полизахариди, протеини, екстракти от бактерии, микоплазми, рикетсии и вируси, чиито имунни комплекси с аглутинини не могат да се видят при конвенционалния класически RA, или за откриване на антитела в серуми на пациенти срещу тези силно диспергирани вещества и малки микроорганизми.
RNGA за серодиагностика на инфекциозни заболявания.Използвайки RNGA за откриване на антитела в серума на пациентите, се изготвят ДИАГНОСТИКА НА ЕРИТРОЦИТЕН АНТИГЕН.
Реакция на утаяване.
За целта червените кръвни клетки се третират в продължение на 15 минути с разтвор на танин при разреждане 1:20 000–1:200 000, което им придава стабилност и повишава адсорбционния капацитет. След това те се смесват с известен антиген и се инкубират в продължение на 2 часа при температура 37 ° C. Антиген-сенсибилизираните червени кръвни клетки се промиват 2-3 пъти с изотоничен разтвор на натриев хлорид и се добавят към серума, разреждат се и се изсипват в ямките на панелите.
Контролата е суспензия от интактни и заредени с антиген еритроцити, които се добавят към серуми, които очевидно дават положителни и отрицателни реакции.
Резултатите от реакцията се вземат предвид 2 часа след инкубиране в термостат и се оценяват с плюсове: „++++“ - червените кръвни клетки покриват ямката под формата на чадър с назъбени ръбове; “–” – натрупване на червени кръвни клетки под формата на “копче”
Свързана информация:
Търсене в сайта:
Реакция на пръстеновидно утаяване
Реакцията на свързване на пръстена е една от най-простите серологични методи. Извършва се в тесни утаителни тръби. Първо, бистър разтвор на антиген, взет в няколко разреждания (1:2; 1:4; 1:8; 1:16), се излива по равно във всички епруветки.
Комбинацията от антигени и антитела се случва на границата на контакт на реагентите. В резултат на това взаимодействие, в положителни случаи (когато антигенът съвпада с антитялото), след известно време се образува утайка под формата на опалесциращ пръстен.
Открита е реакция широко приложение V медицинска практиказа откриване на антиген на антракс във вълна, кожи и месо от животни (реакция на Асколи); за откриване на други патогени на инфекциозни заболявания в патологичен материал, получен от пациенти или в предмети външна среда, както и в съдебномедицинска експертизаза определяне на вида на протеина, по-специално кръвен протеин или други биологични течности.
Имунодифузия на Ouchterlony
Реакцията на утаяване може да се извърши в агар гел.
Методът се основава на факта, че частици от антигени и антитела, поради различните си размери, дифундират в гела с различна скорост и в резултат на това се преместват на различни разстояния. Това дава възможност за разделяне на отделни антигенни системи в случаите, когато те са в смес, и следователно прави възможно изследването на антигенната структура на бактерии и сложни протеинови вещества, серуми и животински тъкани.
Визуални и ефективен методутаяване в гела е предложено от Ouchterlony.
Правят се малки дупки върху петриеви панички с агар, изрязани на известно разстояние една от друга. В един от тях се налива антиген, в останалите - серум. Реакционните компоненти дифундират в гела един към друг и образуват видима линия на утаяване, където антигените срещат оптимални концентрации на антитела, специфични за тях. Тъй като реагентите дифундират концентрично от ямките, могат да се извършат множество анализи чрез поставяне на множество ямки, съдържащи различни антигени (или различни разреждания на същия антиген) около ямка с антитяло.
Реакцията на Ouchterlony позволява да се направи заключение за естеството на антигена от известен серум и, обратно, от известен антиген се определя природата на антителата.
Предимството на метода е, че позволява да се сравняват антигенните компоненти на сложни смеси и да се прецени техните прилики или разлики. За да сравните сходството на антигените, пригответе агар с ямки: антисерумът се излива в едната, а сравняваните антигени се изсипват в другата. Ако антигените са различни, тогава ивиците на утаяване са разположени по различен начин.
Имуноелектрофореза
През последните години методът на имуноелектрофореза се използва за деликатни имунологични изследвания. Методът е описан за първи път от П.
Grabar и K. A. Williams през 1953 г. Това е комбинация от агар гел електрофореза върху стъклени плаки с имунодифузия. Първо се извършва електрофоретично разделяне на антигена, който често е смес от протеин или други молекули. За да направите това, антигенът се въвежда в кладенец, предварително изрязан в агар, и агарната плоча се поставя за известно време в зона на постоянен електрически ток.
Защото различна скоростДвижението на молекулите кара антигена да се раздели на съставните части. След това утаеният имунен серум се въвежда в жлеб, изрязан в посока, успоредна на текущия поток.
Антигенът и антисерумът дифундират един към друг в гела.
Валежи
Всеки антиген води до дъгообразна зона на утаяване със съответните антитела. Броят, позицията и формата на тези линии дават представа за състава на оригиналната антигенна смес.
Реакция на флокулация
Методът е предложен от Рамон през 1924 г.
Тя се основава на факта, че смес от токсин с антитоксичен серум при определени условия дава мътност и утаяване. В този случай реакцията настъпва по-рано в тези епруветки, където количеството антитоксин съответства на дозата, която напълно неутрализира това количество токсин.
Следователно, ако силата на токсина е известна, тогава може да се определи количеството антитоксин в неизвестния тестов серум. За да направите това, пригответе няколко разреждания на тестовия серум, добавете равни количества от известен токсин към всяко разреждане и след това наблюдавайте в коя от епруветките първо настъпва флокулация (мътност на разтвора). Определя се първоначалната флокулация. След това се прави изчислението.
Например, необходимо е да се определи концентрацията на антидифтерийни антитела в тестовия серум. Реакцията използва дифтериен токсин, съдържащ 50 Lf в 1 ml (Lf е минималното количество токсин, което се неутрализира от 1 антитоксична единица (AU) антисерум.
Да приемем, че е наблюдавана първоначална флокулация в епруветка, съдържаща 0,2 ml от този серум и 2 ml от известен токсин с активност 100 Lf (50 Lf x 2).
Това означава, че 0,2 ml серум неутрализира този токсин. Следователно 0,2 ml серум съдържа 100 AE, а в 1 ml от този серум концентрацията на антитела съответства на 500 AE (100 AE x 5).
По подобен метод реакцията на флокулация може да се използва за обратна цел - за определяне на имунизиращите свойства на токсоидите.
Това изисква стандартен антитоксичен серум.
Реакция на неутрализация
Реакцията се използва при диагностицирането на бактериално хранително отравяне за определяне на бактериалните токсини в тестовия материал. Освен това може да се използва при изследване на определени обекти от външната среда за поддръжка. патогенни бактериипроизводство на токсини, например при изследване на почвата за наличие на патогени на тетанус или газова гангрена.
Известно е, че токсинът, когато се смеси с хомоложен антитоксичен серум, не проявява своите токсичен ефект, тъй като токсинът се неутрализира. Реакцията на взаимодействие на токсин с антитоксин по правило е строго специфична, следователно, за да се извърши реакция на неутрализация, за да се определи вида на токсина, е необходимо да има диагностични серуми, специфични за всеки тип и вид токсин. Смес от 2-3 антитоксични серума или повече може да се използва едновременно, ако се очаква наличието на няколко токсина в тестовия материал.
Реакцията на неутрализация ви позволява да определите вида и вида на токсина на патогена.
Материалът, който се тества, може да бъде филтрат от хранителни продукти, за които се предполага, че са причинили отравяне, измиване от съдове, където са били тези продукти и др.
Предполагаемият токсин първо се неутрализира. За да направите това, към епруветката с тестовия материал (експериментална епруветка) се добавя антитоксичен диагностичен серум (съдържа антитела към желания токсин); в друга епруветка (контрола) се добавя равен обем физиологичен разтвор.
След краткотрайна инкубация, съдържанието на епруветките се прилага на две групи бели мишки (опитна и контролна).
Резултатите от реакцията на неутрализация се вземат предвид веднага след смъртта на контролните животни. В този случай фактът на оцеляване на получените животни антитоксичен серумзаедно с тестовия материал, показва наличието в него на токсин, съответстващ на въведения серум.
Предимството на реакцията на неутрализация е високата надеждност на получените резултати.
Но по отношение на чувствителността и скоростта на получаване на отговор той отстъпва на някои други методи на изследване.
Реакции на лизис
Реакциите на лизис обикновено се наричат разтваряне на корпускулярни антигени под въздействието на антитела, специфични за даден антиген в присъствието на комплемент.
от имунни реакции, базиран на феномена на лизиране на бактерии и други корпускулярни антигени, се използват главно реакциите на бактериолиза и хемолиза.
Реакция на бактериолиза
Реакцията протича както in vitro, така и in vivo. Последното е известно като реакция на V.I. Исаев-Пфайфер.
Тези учени са показали, че ако морски свинчетапредварително имунизиране с холерни антигени, след което последващото инжектиране в коремната кухина на силно вирулентна култура на Vibrio cholerae не причинява инфекция на животните, тъй като коремна кухинаПатогенът се разтваря под въздействието на специфични антитела.
В последствие аз.
И. Мечников доказа, че подобно разтваряне на Vibrio cholerae под въздействието на имунен серум се случва в епруветка, ако към основните компоненти се добави пресен серум, източник на комплемент. Разтварянето на бактерии под действието на специфични антитела в присъствието на комплемент се нарича реакция на бактериолиза.
При установяване на реакция на бактериолиза първо се приготвят серия от 10-кратни разреждания на тестовия серум. След това във всяка епруветка се добавя същото количество (1-2 капки) микробна суспензия. Към сместа се добавя комплемент. След инкубиране при 37 °C, сместа се инокулира от всяка епруветка върху хранителна среда, за да се определи наличието или отсъствието на жизнеспособни бактерии.
Реакцията може да се използва за определяне на антитела с помощта на известен микроорганизъм или за определяне на вида на микроба с помощта на диагностичен имунен серум.
IN практическа работаТази реакция рядко се използва от бактериолозите, главно за разграничаване на холера и холероподобни вибриони.
Реакция на хемолиза
Механизмът на хемолизата е подобен на механизма на бактериолизата.
Червените кръвни клетки, използвани в реакцията, са антигенът. Източникът на антитела е антиеритроцитният серум (например, ако в реакцията се използват овчи еритроцити, тогава необходимият серум със специфични антиеритроцитни антитела се получава от зайци, имунизирани с овчи еритроцити).
Кръвният серум на морско свинче най-често се използва като комплемент при реакции на лизис, тъй като съдържа значително повече комплемент от серумите на други животни.
В случаите, когато антителата в присъствието на комплемент разрушават червените кръвни клетки, хемоглобинът излиза от тях и реагиращата смес от мътна суспензия от червени кръвни клетки се превръща в прозрачна червена течност (лакирана кръв).
Тази реакция се нарича хемолиза. В лабораторната практика се използва като индикатор за адсорбцията на комплемента в реакцията на свързване на комплемента.
Свързана информация:
Търсене в сайта:
Конспект на лекцията: Предмет и кратка история на развитието на микробиологията. Общи свойства на микроорганизмите и тяхното разположение в природата. реакция на утаяване
Ветеринарна микробиология и нейните задачи
mir.zavantag.com > Биология > Лекция
1 … 7 8 9 10 11 12 13 14 15
| ^
RA е разработен за първи път от M. Gruber през 1896 г. Същността на реакцията е взаимодействието на антитяло с антиген, което води до слепване (аглутинация) на микроби с образуване на люспи и бучки, видими с просто око. RA се използва широко за серологична диагностикамного бактериални инфекции(бруцелоза, сап, салмонелоза, колибацилоза и др.) и за серологична идентификация на видовете и видовете изолирани микроорганизми. Има няколко метода за стадиране на РА: епруветка (обемна), капкова (плочка), кръвна капка, пръстеновидна реакция с мляко, реакция на хемаглутинация и нейните варианти (RZGA, RNGA), антиглобулинов тест на Coombs и др. ^ – вместо серум се взема кръв. Извършва се реакция на плака. Диагностицирани са пулроза на пилета и пуйки, микоплазмоза на пилета. Реакция на Кумбс��позволява откриване на непълни антитела. Последните са едновалентни и следователно инхибират образуването на аглутинат. Методът се основава на използването на антиглобулинов серум, който служи като посредник за свързване на непълни антитела, фиксирани върху корпускуларни антигени (еритроцити, бактерии). ^ – не се отнася за серологични и диагностично точни реакции, но ви позволява да откриете антигена - хемаглутинин и да установите хемаглутиниращи свойства (способност за аглутинация на червени кръвни клетки) в някои бактерии и микоплазми. RNGA- през последните години зае едно от водещите места в серодинамиката. Същността му се състои в това, че протеиновите молекули на антигена на съответния патоген или антитяло се адсорбират предварително върху третирани с танин еритроцити на овца или друго животно. След това се провежда реакция чрез смесване на сенсибилизирани еритроцити с кръвни серуми на болни животни или, във втория случай, с изследвания антиген. При наличие на серум спец. Антителата към този антиген (или обратното) причиняват аглутинация на червените кръвни клетки - положителна реакция. Предложен от Р. Краус през 1897 г. Преципитацията е явление, наблюдавано по време на взаимодействието на преципитинови антитела и преципитинов антиген. Същността на реакцията е промяна в дисперсията на антигенните колоиди и тяхното утаяване под въздействието на специфични антитела, открити в имунния серум. RP може да се доставя в епруветки в течна среда (пръстенова реакция) или в агар гел (плака RP). Реакцията на пръстеновидно утаяване е предложена за първи път от Ascoli (1910); тя е най-широко използвана за диагностициране на антракс. При провеждане ветеринарен преглед RP е метод за определяне на фалшификацията на месо, брашно и други продукти. Специално значениеТази реакция възниква при съдебно-медицинска експертиза при определяне на вида на кръвта. Използването на реакция на утаяване в течна среда обаче не позволява да се характеризира хетерогенността на антигените, т.е. броя и концентрацията на антигените в препарата. Тази информация може да бъде получена чрез поставяне на RP в гел (обикновено агар). Имайки скоростта на движение, различните антигени на лекарството дифундират неравномерно, образувайки преципитати в дебелината на прозрачния гел в точката на среща с хомоложното антитяло. Локализацията и концентрацията на преципитните линии ще бъдат характерни за всеки компонент на антигенния препарат, което служи като критерий за неговото качество. Чрез разреждане на лекарството може да се характеризира относителното съдържание на антигени в него. Разработени са няколко метода за стадиране на RDP: методът на директна едномерна дифузия според Houdin (1946), методът на проста радиална имунодифузия според Mancini (1963), методът на двойна дифузия в агар гел според Ouchterlony ( 1948) и др. ^
(RN) върху модела тетанични токсинии антитоксини. Същността на RN се състои в способността на хомоложните антитела на имунния серум да потискат (неутрализират) инфекциозните свойства на патогена или неговите метаболитни продукти. За да се установи резултатът от реакцията, лабораторните животни, CC и EC се заразяват със смес антиген-антитяло. Индикаторът е положителен RN - липса на смърт на биологични тест системи. IN бактериална практика RN се използва при диагностицирането на анаеробна ентеротоксемия, ботулизъм и др. RN се провежда за откриване и титриране на токсини, токсоиди или антитоксини. Използва се за откриване на антитела в кръвния серум и за откриване на антиген в тестовия материал (за бруцелоза, сап, рикетсиоза, туберкулоза и др.). Тази реакция е индиректна двусистемна реакция. Включва 5 компонента:
Компоненти 3,4,5 съставляват индикаторната система. Ако антигенът и антитялото на тестовия серум съответстват едно на друго приятелю, възниква имунен комплекс антиген-антитяло, който свързва и извлича комплемента от средата, в която протича реакцията. Ако в тестовия серум няма антитела, съответстващи на антигена, посоченият комплекс не се образува - комплементът остава свободен. Тъй като това са невидими процеси, за да се реши въпросът какво се е случило с комплемента, компонентите на хемолитичната система - хемолитичен серум + червени кръвни клетки - се въвеждат в епруветката като индикатор. Ако комплементът е свързан в бактериологичната система, няма да настъпи хемолиза на червените кръвни клетки, резултатът е положителен - серумът съдържа антитела. Наличието на хемолиза служи като индикатор за наличието на свободен комплемент в бактериологичната система, което е възможно само ако няма антитела в тестовия серум - резултатът е отрицателен. RSC действа строго количествени отношениякомпоненти. Това се постига чрез тяхното предварително титруване (комплементът и хемолитичният серум се титруват в деня на реакцията; микробният антиген - веднъж в рамките на 2-3 месеца). Титруването е определянето на най-малкото количество от определен компонент в реакцията за провеждане на реакцията; излишъкът или дефицитът означава изкривяване на резултатите. RDSC е вариант на RSK, но се различава по това, че първата фаза на реакцията протича 16-18 часа на студено (40C), което повишава чувствителността поради по-продължителната адсорбция на комплемента от комплекса антиген-антитяло. |
7 8 9 10 11 12 13 14 15
Подобен:
| Определение на понятието "екологична микробиология" Обща микробиология, изучаваща връзките на микроорганизмите помежду си, с обекти на околната среда и макроорганизми |
Най-общите и фундаментални понятия, отразяващи съществените... Философията е наука, която изучава най-много общи разпоредбиза човека, природата и знанието |
||
| План Предмет и метод на дисциплината „Международни икономически отношения”... Предмет и метод на дисциплината "Международни икономически отношения" и история на развитието на международните икономически отношения |
Въпроси за изпита по дисциплината „Правна психология” За студенти... Понятието юридическа психология. Предмет, цели и история на развитието на правната психология |
||
| 1. Предмет и метод на историята на политическите и правни учения > Предмет... Това се дължи на факта, че в рамките на тази правна дисциплина се изучава и обхваща специфичен предмет - историята на възникването... |
1.
История на философията като наука. Нейният предмет и метод |
||
| Студентски алианс на Министерството на образованието и науката на Република Казахстан... Тази наредба за републиканското състезание „Ученик на годината 2011“ (наричано по-долу конкурса) определя неговите цели и задачи, участниците... |
Дефиниция на понятията „микробиология” и „микроорганизъм” … |
||
| Въпроси за подготовка за теста по дисциплината "Конфликтология" Конфликтологията като наука: предмет, цели, задачи, актуални проблеми, значение в модерен етапразвитие на обществото |
За регионалния конкурс за видео клипове „K-role-k!” Общи положения Настоящите Правила определят целите, задачите, принципите на Конкурса, реда за организирането и провеждането му, реда за участие и определяне... |
Добавете бутон към уебсайта си:
Училищни материали
mir.zavantag.com
Реакция на утаяване
Утаяването и аглутинацията са доста сходни реакции, които се различават главно по физични свойстваАГ.
В първия случай се представя в разтворими, във втория - в корпускулярни форми. Основата на RP е образуването на утайка по време на реакцията AG-AT. RP е много специфичен и чувствителен.
Реакционни съставки:
1. разтворим AG или хаптен (преципитоген);
2. АТ - преципитини (имунен преципитиращ серум; получен чрез имунизиране на зайци с подходящи разтвори на антигени);
Реакция на утаяване
изотоничен разтвор на натриев хлорид или агар гел.
Методи за настройка на RP:
1) RP в разтвори - r.
пръстеновидни валежи;
2) RP в гел.
Реакцията на пръстеновидно утаяване се провежда в тесни епруветки за утаяване, в които се изсипват утаяващите серуми.
След това се излива разтвор на преципитоген. Ако реакцията е положителна, на границата между съставките се появява мътен преципитационен пръстен.Пример за този метод за стадиране на RP е реакцията на термопреципитация на Асколи, използвана за откриване на термостабилния хаптен на патогена на антракс, извлечен от животински органи, кожа, и вълна чрез екстракция чрез кипене.Една от разновидностите на RP в гел (реакция на Ouchterlony) ви позволява да определите токсикогенността дифтериен бацилизползване на антитоксичен серум.
В петриево блюдо с хранителна средаПоставете лента от филтърна хартия, напоена с антитоксичен дифтериен серум, и я инокулирайте с тестовите култури под формата на ивици, перпендикулярни на лентата от хартия. Инкубирайте при 37 PS за 24 часа. При наличие на токсигенна култура на мястото на взаимодействие на токсина с антитоксина се образуват преципитационни линии.Реакцията на утаяване в гела се нарича имунодифузия.
Често фореза в гел - имуноелектрофореза. Принцип на метода: изследваният антиген се фракционира електрофоретично. получените фракции се анализират чрез двойна дифузия с използване на антисерум.
Тестът на Асколи се извършва за диагностициране на антракс с цел откриване на антигена на антраксния бацил. За да извършите реакцията на утаяване, трябва да имате: преципитоген - хаптен B.
Антрахис (тъканен екстракт), преципитин (утаяващ антраксен серум) и физиологичен разтвор.
Получаване на термопреципитоген.
1. Напълнете колба от 8, съдържаща 1 g натрошена кожа или 1 ml B. antilgas култура с 10 ml физиологичен разтвор.
2. Поставете колбата във вряща баня за 30-45 минути.
3. Филтрирайте през азбестов материал. Филтратът трябва да е напълно прозрачен. За реакцията на утаяване филтратът се разрежда 100 пъти или повече.
Настройка на реакцията на пръстеновидно утаяване.
1) 0,3 ml преципитиращ серум, цял или разреден 1:5, 1:10, се излива в преципитационна епруветка.
2) Преципитогенът се наслоява внимателно по стената на епруветката.Реакцията се счита за положителна, ако на границата на двете течности се образува мътен пръстен от утаяващ се протеин не по-късно от 5-15 минути.
При настройване на реакцията на утаяване се използват следните контроли:
а) антиген и физиологичен разтвор;
б) специфичен серум и физически.
в) антиген и неспецифичен серум.
Във всички контролни епруветки не трябва да има мътност.За реакцията на утаяване се използват специални утаителни епруветки с височина 40-60 mm и диаметър 4-5 mm.Утаяването в тесни епруветки става много по-бързо и се появява по-ясно, отколкото в обикновени тръби, те се измиват старателно и изсушават, така че стъклото им да е напълно прозрачно и сухо.
При реакцията на утаяване се утаява специфичен имунен комплекс, състоящ се от разтворим антиген (лизат, екстракт, хаптен) и специфично антитяло в присъствието на електролити.
Мътният пръстен или утайка, образувани в резултат на тази реакция, се наричат утайка. Тази реакция се различава главно от реакцията на аглутинация по размера на антигенните частици.
Реакцията на утаяване обикновено се използва за определяне на антиген при диагностицирането на редица инфекции (антракс, менингит и др.); в съдебната медицина - за определяне вида на кръвта, спермата и др.; при санитарно-хигиенни изследвания - при установяване на фалшифициране на продукти; с негова помощ се определя филогенетичната връзка на животните и растенията. За реакцията ви трябва:
1. Антитела (преципитини) - имунен серум с висок титър на антитела (не по-нисък от 1:100 000). Титърът на преципитиращия серум се определя от най-високото разреждане на антигена, с който той реагира. Серумът обикновено се използва неразреден или разреден 1:5 -1:10.
2. Антиген - разтворени вещества от протеинова или липоидна полизахаридна природа (пълни антигени и хаптени).
3. Изотоничен разтвор.
Основните методи за провеждане на реакцията на утаяване са: реакция на пръстеновидно утаяване и реакция на утаяване в агар (гел).
внимание! Всички компоненти, участващи в реакцията на утаяване, трябва да бъдат напълно прозрачни.
Реакция на пръстеновидно утаяване.С помощта на пипета на Пастьор добавете 0,2 - 0,3 ml (5-6 капки) серум в епруветката за утаяване (серумът не трябва да попада върху стените на епруветката). Антигенът в същия обем се наслоява внимателно върху серума, като се излива с тънка пастьорска пипета по стената на епруветката. Епруветката се държи в наклонено положение. При правилно наслояване трябва да има ясна граница между серума и антигена. Внимателно, за да не смесите течността, поставете епруветката в стойка. Ако реакцията е положителна, на границата на антигена и антитялото се образува мътен "пръстен" - утайка.
Реакция на утаяване в агар(геле).Особеността на реакцията е, че взаимодействието на антиген и антитяло се случва в плътна среда, т.е. гел.Получената утайка дава мътна ивица в дебелината на средата. Липсата на лента показва несъответствие между компонентите на реакцията. Тази реакция се използва широко в биомедицинските изследвания, по-специално при изследването на образуването на токсини в причинителя на дифтерия.
Реакция на лизис (имунна цитолиза)
Имунен лизис- това е разпадането на клетки под въздействието на антитела със задължителното участие на комплемента. За реакцията ви трябва:
1. Антиген- микроби, червени кръвни клетки или други клетки.
2. Антитяло(лизин) - имунен серум, по-рядко пациентски серум. Бактериолитичният серум съдържа антитела, участващи в лизиране на бактерии; хемолитични - хемолизини, които насърчават разграждането на червените кръвни клетки; за лизиране на спирохети са необходими спирохетолизини, клетъчни итолизини и др.
3. Допълнение.Серумът на морските свинчета съдържа най-много комплемент. Този серум (смес от няколко животни) обикновено се използва като допълнение.
4. Изотоничен разтвор.
Реакция на утаяване.
| Име на параметъра | Значение |
| Тема на статията: | Реакция на утаяване. |
| Рубрика (тематична категория) | образование |
Реакция на утаяване (RP) - утаяване на разтворим антиген под действието на антитела в присъствието на електролит. Видим реакционен ефект (феномен на утаяване) – облачност (образуване на мътен пръстен или утайка - утайка).
RP се използва за откриване на неизвестен антиген в редица случаи инфекциозни заболявания: за антракс, туларемия, менингит, едра шарка. В съдебната медицина се използва за определяне на видовете кръв и сперма; в санитарно-хигиенните изследвания - за определяне на фалшифицирането на хранителни продукти. RP е много чувствителен и може да открие антиген при разреждания 1:1 000 000 и 1:10 000 000.
Компоненти на реакцията на утаяване.
1. Антиген (преципитоген) -това е антиген от молекулярна природа, който е във фино диспергирано (разтворимо) състояние. Преципитогени - ϶ᴛᴏ различни лизати или тъканни екстракти и др.
Публикувано на реф.рф
Преципитогенът се различава от аглутиногена по размера на антигенните частици. АглутиногенТо има размери на клетката(това не са унищожени цели клетки), а размерите преципитогенсъизмерим с молекулни размери(това са протеини и техните комплекси с въглехидрати или липиди). Преципитогенен разтвор прозрачен.
2. Антитела (преципитини)се откриват в човешки кръвен серум или в имунни диагностични преципитиращи серуми, които съдържат известни антитела.
3. Електролит– изотоничен разтвор на натриев хлорид.
Получаване на преципитоген.
Получава се чрез смилане на материала и извличане на протеинови антигени от него чрез варене или други методи.
Примери за преципитогени: лизати или екстракти от различни органи и тъкани, чужд кръвен серум (серум е решение, на първо място, различни протеини),филтрати от бульонни култури от микроби, солни екстракти от микроби, автолизати и др.
Приготвяне на преципитиращи серуми.
Получен чрез хиперимунизация на зайци с подходящи преципитогени. Такива серуми съдържат антитела към онези преципитогени, с които са имунизирани зайци.
Примери за преципитиращи серуми: утаяване на антраксен серум(съдържа антитела срещу антигени на антракс), преципитиращ антименингококов серум(съдържа антитела срещу антигени на причинителя на менингит) и др.
Титърпреципитиращ серум - ϶ᴛᴏ най-високото разреждане на преципитоген, при което серумът все още дава реакция на утаяване.
Методи за настройка на RP.
1. Реакция на пръстеновидно утаяване –извършва се в специални утаителни тръби (диаметър - 0,4-0,5 cm, височина - 7-8 cm). 0,2 - 0,3 ml утаяващ серум се добавя към епруветката и същото количество преципитоген се наслоява внимателно по стената с дългия накрайник на пастьоровата пипета. След това внимателно от хоризонтално положениетръбите се поставят вертикално.
Отчитане на резултатите от реакциятаизвършва се чрез появата на бял пръстен на границата антиген-антитяло. Ако реакцията е положителна се наблюдава образуването на такъв пръстен. В този случай антигенът съответства на антитялото и се осъществява тяхното свързване.
Ако се вари и се прецежда водни екстрактиоргани и тъкани, тогава реакцията обикновено се нарича реакция thermoring валежи (например при диагностицирането на антракс).
2. Реакция на утаяване на гел -извършва се в панички на Петри или върху предметни стъкла, където се поставя слой агар гел. Докато гелът се втвърдява, се изрязват ямки, в които се поставят антигени или антитела, или и двете. Разграничете 2 метода RP в гел:
а) метод проста (радиална) имунодифузия: един от компонентите на имунната реакция (антиген или антитяло) се поставя в ямката, а другият компонент се смесва с агар; ако резултатът е положителен (антиген съответства на антитяло) a утайка пръстен ;
б) метод двойна имунодифузия: както антитялото, така и антигенът се поставят в отделни ямки, те дифундират един към друг в агарния гел; ако резултатът е положителен където се образуват антитела и антиген валежни линии.
Пример за RP в геле реакцията на двойна имунодифузия на Ouchterlony при диагностициране на дифтерия
Имуноелектрофореза –Това е метод, който съчетава метода на електрофорезата и реакцията на утаяване. Смес от антигени (например серумни протеини) се разделя в гел с помощта на електрофореза. След това, за да се намери и идентифицира интересуващият протеин (неизвестен антиген), се използва диагностичен преципитиращ серум, който съдържа антитела към този протеин (известно антитяло). За да направите това, диагностичният серум се въвежда в жлеба успоредно на протеините. Ако сред протеините има такъв, който съответства на антитялото, открито в серума, тогава валежни линии.
Реакция на утаяване. - понятие и видове. Класификация и характеристики на категорията "Реакция на утаяване". 2017 г., 2018 г.
