Diagnosticum vi vi антигенен еритроцит. Diagnosticum еритроцитна салмонела o
Удостоверение за регистрация № РЗН 2016/3905 от 04.04.2016 г.
Предназначение
Комплектът от реагенти "Diagnosticum еритроцитна салмонела Vi-антиген за RPHA" (SED-Vi) е предназначен за откриване на антитела срещу Vi-антигена на причинителя на коремен тиф в човешки кръвни серуми чрез реакцията на пасивна хемаглутинация (RPHA ).
Характеристики на комплекта
Принцип на действие
При наличие на антитела към причинителя на коремен тиф се наблюдава хемаглутинация на пилешки еритроцити, сенсибилизирани с Vi антигена, което води до образуване на "чадър" от утаени еритроцити на дъното на U-образните ямки на плаката. . При липса на антитела срещу причинителя на коремен тиф, утаените червени кръвни клетки образуват "точка".
Комплект съдържание
| Име на реагента | Описание | Количество в комплект |
|---|---|---|
| Diagnosticum еритроцитна салмонела Vi-антиген, сух 6% (EDS) | Формализирани пилешки еритроцити, сенсибилизирани с S. typhi Vi антиген. Суха хигроскопична маса с кафяв цвят. След разтваряне суспензията е червено-кафява на цвят. | 1 ет., от 0,6 мл |
| Серум за диагностика на салмонела, адсорбиран, Vi рецептор, сух (разреден 1:20, (K+)) | Адсорбирана салмонела от заешки серум, Vi рецептор, разреден 1:20. Суха хигроскопична пореста маса с бял цвят. След разтваряне е прозрачна жълтеникава или безцветна течност. | 1 ет., от 0,3 мл |
| Разредител за тестова проба (RSD) | Прозрачна течност със синьо-виолетов цвят. | 1 фл., 10 мл |
| Фосфатен буферен разтвор (PBS) | Прозрачна безцветна течност. | 1 фл., 10 мл |
| Еднократна полимерна таблетка за имунологични реакции | Еднократна полимерна таблетка за имунологични реакции от прозрачен безцветен полистирен. | 1 бр. |
Диагностични характеристики
Диагностикумът трябва да бъде аглутиниран в RPHA с адсорбиран диагностичен салмонела серум, Vi рецептор, сух (разреждане 1:20), до титъра, посочен на серумния етикет. Условното ниво на диагностични характеристики на кръвен серум от здрави хора трябва да се счита за серумно разреждане не по-високо от 1:20. Времето за анализ е 3040 минути. Комплектът е предназначен за тестване на 42 кръвни серума при опция за скрининг или 10 кръвни серума при опция за титруване.
Предпазни мерки
Комплектът е предназначен само за ин витро диагностична употреба. Веществата, включени в комплекта, са инактивирани и безопасни. Когато работите с комплекта, трябва да спазвате SP 1.3.2322-08 и SanPiN 2.1.7.2790-10.
Допълнително оборудване и материали
Оборудване, материали, решения:
- 1-канални пипетни дозатори с променлив дозиращ обем 5 - 40 µl; 40 - 200 µl; 200 - 1000 µl и 1000 - 5000 µl;
- 8- или 12-канални пипетни дозатори с променливи дозиращи обеми от 5 - 40 µl и 40 - 200 µl;
- дестилирана вода (GOST 6709-72).
Анализирани проби
Изследваните проби от кръвен серум се съхраняват при температура от 2 до 8 °C за не повече от 3 дни от момента на вземане на кръвта. Суроватката може да се съхранява замразена при температура не по-висока от минус 18 °C за не повече от 1 година. Преди употреба пробите се размразяват при температура от 16 до 25 °C и се смесват чрез разклащане. Не се допуска повторно замразяване. Не трябва да се използват проби с бактериален растеж и хемолиза. Преди извършване на реакцията тестовите серуми се нагряват при 56 °C в продължение на 30 минути.
Извършване на анализ
Приготвяне на контролен диагностичен серум (К+)
Пригответе работен разтвор от адсорбиран диагностичен серум на Salmonella, Vi рецептор, сух (разреждане 1:20) от 0,3 ml (K+). За да направите това, добавете 0,3 ml фосфатен буферен разтвор (PBS) към съдържанието на бутилката с К+. Останалото количество серум може да се раздели на аликвоти и да се съхранява замразено при температура не по-висока от минус 18 °C за не повече от 6 месеца.
Приготвяне на Salmonella erythrocyte diagnosticum (SED)
За да се подготви работно разреждане на суспензията Salmonella erythrocyte diagnosticum, към съдържанието на бутилката със сух 6% SED се добавят 0,6 ml дестилирана вода и се оставя да се хидратира в продължение на 2 часа при температура от 16 до 25 °C. След това към разтвора се добавят 2,4 ml разтвор на фосфатен буфер (PBS). Работният разтвор се съхранява при температура от 2 до 8 °C за не повече от 1 месец. Не се допуска замразяване.
Декларация на RPGA по време на скрининг на кръвни серуми
Кръвните серуми за скринингови изследвания се разреждат в ямките на таблетката, както следва:
- приготвят се предварителни разреждания 1:20 в първите ямки на плаката, като първо се добавят 190 μl разтвор на RIP в тях, след това 10 μl от тестовите серуми. Всеки серум се добавя с отделен накрайник и внимателно се пипетира (цветът на разтвора в ямките след добавяне на серумите трябва да се промени от синьо-виолетов към зелен);
- скринингови разреждания от 1:40 се приготвят във вторите ямки, като първо се добавят 25 μl PBS разтвор в тях и след това 25 μl предварително разредени серуми и внимателно се пипетират.
Всеки път, когато се извършва RPGA, е необходимо да се извърши контролно определяне на K+ титъра. За да направите това, добавете 50 μl PBS разтвор към 8 ямки в дълъг ред. След това добавете 50 μl работен разтвор на К+ (1:20) към първата ямка, внимателно го отпипетирайте и прехвърлете 50 μl в следващите ямки, като получите 2-кратни разреждания от 1:40 до 1:5120. 50 μl PBS разтвор се добавя към други 4 ямки, за да се наблюдава EDS за липса на спонтанна хемаглутинация.
25 μl SED се добавят към всички ямки на плаката със скринингови разреждания на тестовите серуми (с изключение на първите, съдържащи RIP) и контролите. Разбъркайте суспензията SED в бутилка или вана преди употреба!Таблетката се разклаща старателно и се оставя при температура от 16 до 25°С за 30-40 минути до пълното утаяване на еритроцитите в контролата.
Декларация на RPGA по време на титруване на тестови кръвни серуми
Титруването на тестовите серуми и работния разтвор на K+ се извършва в къси редове на плаката. Друг къс ред се използва за наблюдение на липсата на спонтанна хемаглутинация на EDS.
180 μl разтвор на RIP се добавя към първите ямки на къси редове за титруване на тестовия серум. Добавете 50 μl PBS разтвор към всички останали ямки.
20 μl тестови серуми се добавят към ямките с RIP разтвора (получава се разреждане 1:10). Всеки серум се добавя със собствен връх и внимателно се пипетира (цветът на разтвора в ямките трябва да се промени от синьо-виолетов до зелен). След това 50 μl се прехвърлят от първите ямки в следващите ямки в редовете, като се получават двукратни разреждания от 1:20 до 1:1280. В края на титруването разтворите в обем от 50 μl се отстраняват от последните ямки.
Всеки път, когато се извършва RPGA, е необходимо да се извърши контролно определяне на K+ титъра. За да направите това, добавете 50 μl PBS разтвор към 8 ямки в дълъг ред. След това добавете 50 μl работен разтвор на К+ (1:20) към първата ямка, внимателно го отпипетирайте и прехвърлете 50 μl в следващите ямки, като получите 2-кратни разреждания от 1:40 до 1:5120.
За да се контролира диагностикума за отсъствие на спонтанна хемаглутинация, към всички ямки на къс ред се добавят 50 μl разтвор на PBS.
25 μl SED се добавят към всички ямки (с изключение на първите ямки на всеки ред за тест серуми, съдържащи RIP). Разбъркайте суспензията SED в бутилка или вана преди употреба! Таблетката се разклаща старателно и се оставя при температура от 16 до 25°С за 30-40 минути до пълното утаяване на еритроцитите в контролата.
Отчитане и интерпретация на резултатите
Отчитане на резултатите при скрининг на кръвен серум
Резултатите се вземат предвид по конвенционална скала от четири кръста. Серумният титър се счита за неговото разреждане, което дава хемаглутинация с най-малко 3 (+++) кръстосвания.
- ++++ (4+) - аглутинираните еритроцити образуват обърнат "чадър" на дъното на дупката, краищата му падат;
- +++ (3+) - аглутинираните еритроцити образуват обърнат "чадър" на дъното на отвора, ръбовете му са гладки;
- ++ (2+) - заедно с аглутинираните еритроцити, на дъното на ямката има утайка под формата на малък "пръстен" от неаглутинирани еритроцити;
- + (1+) - повечето червени кръвни клетки не са аглутинирани и се установяват под формата на малък "пръстен";
- (-) - неаглутинираните червени кръвни клетки образуват "точка" на дъното на ямката.
За положителен резултат се счита хемаглутинация на еритроцити, заредени с Vi-антиген, чрез най-малко 3 кръстосвания (+++).
Контролът на качеството на диагностикума се осигурява от 4 ямки от контролния ред, в които са добавени само PBS и SED разтвор. В тези ямки не трябва да има спонтанна хемаглутинация - реакцията е отрицателна (-). В противен случай изследването трябва да се повтори. Ако при повторно стадиране се появи хемаглутинация, лекарството не се използва.
Трябва да се счита, че серумите с отрицателен резултат не съдържат антитела срещу Vi антигена с диагностичен титър 1:40 или по-нисък.
Серумите, които дават положителен резултат при разреждане 1:40, трябва да бъдат повторно тествани с титруване на серума, за да се установи неговият титър.
Отчитане на резултатите при титриране на кръвния серум
Серумният титър се счита за неговото разреждане, което дава хемаглутинация от най-малко 3 (+++) кръста.
Контролът на качеството на диагностикума се осигурява от ямките на реда за контрол на EDS. В тези ямки не трябва да има спонтанна хемаглутинация - реакцията е отрицателна (-). В противен случай изследването трябва да се повтори. Ако при повторно стадиране се появи хемаглутинация, лекарството не се използва.
Комплектът реагент Diagnosticum Salmonella VI-antigen е предназначен за откриване в човешки кръвен серум на специфични антитела срещу Salmonella typhus VI-антиген при реакция на пасивна хемаглутинация (RPHA).
ЗАДАДЕНА ХАРАКТЕРИСТИКА
2.1. Принцип на метода.
Активният принцип на Diagnosticum Salmonella VI-антиген е Vi-антигенът, фиксиран върху повърхността на червените кръвни клетки. При взаимодействие със серуми, съдържащи антитела срещу Vi-антигена, се наблюдава феноменът на аглутинация на еритроцитите.
2.2. СЪДЪРЖАНИЕ НА КОМПЛЕКТА
| Реактиви | Количество |
| Diagnosticum еритроцитна салмонела Vi-антигенна течност- представлява 1% суспензия от формалинизирани и сенсибилизирани еритроцити от Salmonella Typhoid ovce с В-антиген във фосфатен буферен разтвор (pH 7,2). + 0,2; концентрация 0,06 mol/l). Хомогенна суспензия от кафяв цвят без люспи; при утаяване се образуват 2 слоя: плътна кафява утайка от еритроцити и прозрачна жълтеникава супернатантна течност | 1 бутилка - 3 мл |
| Salmonella диагностичен серум, адсорбиран B рецептор сух -хомогенна маса от бяло с кафеникав оттенък до бежово | 1 бутилка – 0,1 мл |
| 1% суспензия от формалинизирани, несенсибилизирани овчи еритроцити— хомогенна суспензия от кафяв цвят без люспи; при утаяване се образуват 2 слоя: плътна кафява утайка от еритроцити и прозрачна жълтеникава супернатантна течност | 1 бутилка – |
| Разтвор за разреждане на серум и поставяне на RPGA - 0,9% разтвор на натриев хлорид - прозрачна безцветна течност, pH от 6,5 до 7,5 | 2 бутилки – по 8 мл всяка |
| Плака с кръгло дъно за еднократна употреба за имунологични реакции -се състои от 8 реда, всеки от които включва 12 дупки с прозрачно, безцветно, кръгло дъно | 1 бр |
АНАЛИТИЧНИ И ДИАГНОСТИЧНИ ХАРАКТЕРИСТИКИ.
3.1. Диагностикумът трябва да бъде аглутиниран в RPHA с диагностичния серум от Salmonella, адсорбиран от сухия B рецептор в разреждане не по-малко от 1:160.
Условното ниво на диагностични характеристики на кръвен серум от здрави хора трябва да се счита за серумно разреждане не по-високо от 1:20.
3.2. Време за анализ: 2 часа.
3.3. Комплектът съдържа 8 определения.
ПРЕДПАЗНИ МЕРКИ
Когато работите с комплекта, трябва да спазвате „Правилата за проектиране, предпазни мерки, промишлена хигиена, противоепидемичен режим и лична хигиена при работа в лаборатории (отдели, отдели) на санитарни и епидемиологични институции на Министерството на здравеопазването на СССР ( М., 1981).
Анализираните серуми, както и реагентите в контакт с тях, трябва да се считат за потенциално заразени, способни на дългосрочно запазване или предаване на ХИВ, вирус на хепатит или друг причинител на вирусна инфекция - с тях трябва да се работи внимателно:
- работа с гумени ръкавици;
- при пипетиране е необходимо да се използват автоматични дозатори;
- след приключване на работата, третирайте анализираните серуми и реагентите и инструментите в контакт с тях с дезинфекционен разтвор
- Избършете оборудването със 70% етилов алкохол преди и след употреба.
Анализираните серуми трябва да бъдат инактивирани при температура 56 0 C за 30 минути.
Серумът за диагностика на Salmonella, адсорбиран от B рецептора, включен в комплекта, е сух и инактивиран.
Обективните резултати от анализа са гарантирани, ако са изпълнени следните условия:
- Всички реагенти от комплекта трябва да се съхраняват при температури от 2 до 8 0 C;
- не използвайте реактиви с изтекъл срок на годност;
- не използвайте реактивите от комплекта, ако върху опаковката им няма подходяща маркировка;
- За да извършите RPHA, използвайте реактиви, включени само в този комплект.
2.диагностикум
4.от унищожени микроби (изолиране на специфичен Ag)
Еритроцитна HBs диагностика
2.диагностикум
4. суспензия от въздушна овца, обработена с танин и утаени a\g HBs
5.за откриване на специфични антитела в кръвния серум
Диагностикум gp120
2.диагностикум
4.отделете a\g пр. ХИВ
5. за откриване на ХИВ
Тетанус еритроцитна диагностика
2.диагностикум
4. суспензия от er.ram, обработена с танин и a\g тетанус
5. за откриване на специфични антитела в кръвния серум (към тетанус
Кардиолипинов антиген за микропреципитация
2.диагностикум
4. извлечени липидни фракции от сърцето на здрав бик
5.за откриване на специфични антитела в кръвния серум
Ултразвуков трепонемален антиген
2.диагностикум
4. на убити екск. сифилис
5.за откриване на специфични антитела в кръвния серум
Диагностикум на корпускулярна туларемия
2.диагностикум
4.от отделни патогенни частици
5.за откриване на специфични антитела в кръвния серум
Диагностикум на дизентерия
2.диагностикум
4. суспензия от убити животни
5.за откриване на специфични антитела в кръвния серум на пациента
Еритроцитна диагностика от Shigella Sonne
2.диагностикум
4.суспензия от ер.рам, обработена с тонин
5.за откриване на специфични антитела в кръвния серум
Диагностикум от Salmonella typhimurium
2.диагностикум
4. на убити екск. салмонела
5.за откриване на специфични антитела в кръвния серум
Серуми
Конски серум против гангрена 5000 IU
2.серум
4. от кръвния серум на коне с хиперимия с анатоксин от възбудителна газова гангрена
6. парентерално, след тест с глобулин 1:100
Нормален човешки имуноглобулин
2.серум
4.от донорски кръвен серум
5. форма-е пас. специфичен закупени изкуства имм
6.парентерално
Утаяващ антраксен серум
2.серум
4. от кръвен серум на хиперимунизирани животни a\g exc.sib. язви
6. реакция на утаяване (RP)
Ботулинов серум тип – А 400 IU
2.серум
5.за откриване на специфичен антиген в изследвания материал
6. реакция на неутрализация (RN)
Глобулин против антракс
2.серум
4.от кръвен серум на хиперимунизирани животни и/или екск.антракс
5. форма-е пас. специфичен закупени изкуства имм
6.парентерално
Хемолитичен серум
2.серум
4.от серум на хиперимунизирани животни с еритроцити на животни от друг тип
5.за откриване на специфичен антиген в изследвания материал
Ogawa холерен аглутиниращ серум
2.серум
4.от кръвен серум на хиперимунизирани животни
5.за откриване на специфичен антиген в изследвания материал
Луминесцентен серум от туларемия
2.серум
4.от кръвен серум на хиперимунизирани животни a\g exc.tular.
5.за откриване на специфичен антиген в изследвания материал
Имуноглобулин срещу човешки кърлежов енцефалит
2.серум
4.от донорски кръвен серум
5. форма-е пас. специфичен закупени изкуства имм
6.парентерално
ESNO диагностичен серум
2.серум
4.от кръвен серум на животни, хиперимунизирани с ESNO вируси
5.за откриване на специфичен антиген в изследвания материал
Човешки имуноглобулин срещу хепатит В
2.серум
4.от кръвен серум на донор, ваксиниран срещу хепатит В
5. форма-е пас. специфичен закупени изкуства имм
6.парентерално
Белязан с пероксидаза антиглобулинов серум
2.серум
4.от кръвен серум на хиперимунизирани животни
5. за откриване на специфичен антиген в тестовия материал (HIV)
Имуноглобулин против бяс
2.серум
4.от донорски кръвен серум
5. форма-е пас. специфичен закупени изкуства имм
Удостоверение за регистрация № РЗН 2016/3905 от 04.04.2016 г.
Предназначение
Комплектът от реагенти "Diagnosticum еритроцитна салмонела Vi-антиген за RPHA" (SED-Vi) е предназначен за откриване на антитела срещу Vi-антигена на причинителя на коремен тиф в човешки кръвни серуми чрез реакцията на пасивна хемаглутинация (RPHA ).
Характеристики на комплекта
Принцип на действие
При наличие на антитела към причинителя на коремен тиф се наблюдава хемаглутинация на пилешки еритроцити, сенсибилизирани с Vi антигена, което води до образуване на "чадър" от утаени еритроцити на дъното на U-образните ямки на плаката. . При липса на антитела срещу причинителя на коремен тиф, утаените червени кръвни клетки образуват "точка".
Комплект съдържание
| Име на реагента | Описание | Количество в комплект |
|---|---|---|
| Diagnosticum еритроцитна салмонела Vi-антиген, сух 6% (EDS) | Формализирани пилешки еритроцити, сенсибилизирани с S. typhi Vi антиген. Суха хигроскопична маса с кафяв цвят. След разтваряне суспензията е червено-кафява на цвят. | 1 ет., от 0,6 мл |
| Серум за диагностика на салмонела, адсорбиран, Vi рецептор, сух (разреден 1:20, (K+)) | Адсорбирана салмонела от заешки серум, Vi рецептор, разреден 1:20. Суха хигроскопична пореста маса с бял цвят. След разтваряне е прозрачна жълтеникава или безцветна течност. | 1 ет., от 0,3 мл |
| Разредител за тестова проба (RSD) | Прозрачна течност със синьо-виолетов цвят. | 1 фл., 10 мл |
| Фосфатен буферен разтвор (PBS) | Прозрачна безцветна течност. | 1 фл., 10 мл |
| Еднократна полимерна таблетка за имунологични реакции | Еднократна полимерна таблетка за имунологични реакции от прозрачен безцветен полистирен. | 1 бр. |
Диагностични характеристики
Диагностикумът трябва да бъде аглутиниран в RPHA с адсорбиран диагностичен салмонела серум, Vi рецептор, сух (разреждане 1:20), до титъра, посочен на серумния етикет. Условното ниво на диагностични характеристики на кръвен серум от здрави хора трябва да се счита за серумно разреждане не по-високо от 1:20. Времето за анализ е 3040 минути. Комплектът е предназначен за тестване на 42 кръвни серума при опция за скрининг или 10 кръвни серума при опция за титруване.
Предпазни мерки
Комплектът е предназначен само за ин витро диагностична употреба. Веществата, включени в комплекта, са инактивирани и безопасни. Когато работите с комплекта, трябва да спазвате SP 1.3.2322-08 и SanPiN 2.1.7.2790-10.
Допълнително оборудване и материали
Оборудване, материали, решения:
- 1-канални пипетни дозатори с променлив дозиращ обем 5 - 40 µl; 40 - 200 µl; 200 - 1000 µl и 1000 - 5000 µl;
- 8- или 12-канални пипетни дозатори с променливи дозиращи обеми от 5 - 40 µl и 40 - 200 µl;
- дестилирана вода (GOST 6709-72).
Анализирани проби
Изследваните проби от кръвен серум се съхраняват при температура от 2 до 8 °C за не повече от 3 дни от момента на вземане на кръвта. Суроватката може да се съхранява замразена при температура не по-висока от минус 18 °C за не повече от 1 година. Преди употреба пробите се размразяват при температура от 16 до 25 °C и се смесват чрез разклащане. Не се допуска повторно замразяване. Не трябва да се използват проби с бактериален растеж и хемолиза. Преди извършване на реакцията тестовите серуми се нагряват при 56 °C в продължение на 30 минути.
Извършване на анализ
Приготвяне на контролен диагностичен серум (К+)
Пригответе работен разтвор от адсорбиран диагностичен серум на Salmonella, Vi рецептор, сух (разреждане 1:20) от 0,3 ml (K+). За да направите това, добавете 0,3 ml фосфатен буферен разтвор (PBS) към съдържанието на бутилката с К+. Останалото количество серум може да се раздели на аликвоти и да се съхранява замразено при температура не по-висока от минус 18 °C за не повече от 6 месеца.
Приготвяне на Salmonella erythrocyte diagnosticum (SED)
За да се подготви работно разреждане на суспензията Salmonella erythrocyte diagnosticum, към съдържанието на бутилката със сух 6% SED се добавят 0,6 ml дестилирана вода и се оставя да се хидратира в продължение на 2 часа при температура от 16 до 25 °C. След това към разтвора се добавят 2,4 ml разтвор на фосфатен буфер (PBS). Работният разтвор се съхранява при температура от 2 до 8 °C за не повече от 1 месец. Не се допуска замразяване.
Декларация на RPGA по време на скрининг на кръвни серуми
Кръвните серуми за скринингови изследвания се разреждат в ямките на таблетката, както следва:
- приготвят се предварителни разреждания 1:20 в първите ямки на плаката, като първо се добавят 190 μl разтвор на RIP в тях, след това 10 μl от тестовите серуми. Всеки серум се добавя с отделен накрайник и внимателно се пипетира (цветът на разтвора в ямките след добавяне на серумите трябва да се промени от синьо-виолетов към зелен);
- скринингови разреждания от 1:40 се приготвят във вторите ямки, като първо се добавят 25 μl PBS разтвор в тях и след това 25 μl предварително разредени серуми и внимателно се пипетират.
Всеки път, когато се извършва RPGA, е необходимо да се извърши контролно определяне на K+ титъра. За да направите това, добавете 50 μl PBS разтвор към 8 ямки в дълъг ред. След това добавете 50 μl работен разтвор на К+ (1:20) към първата ямка, внимателно го отпипетирайте и прехвърлете 50 μl в следващите ямки, като получите 2-кратни разреждания от 1:40 до 1:5120. 50 μl PBS разтвор се добавя към други 4 ямки, за да се наблюдава EDS за липса на спонтанна хемаглутинация.
25 μl SED се добавят към всички ямки на плаката със скринингови разреждания на тестовите серуми (с изключение на първите, съдържащи RIP) и контролите. Разбъркайте суспензията SED в бутилка или вана преди употреба!Таблетката се разклаща старателно и се оставя при температура от 16 до 25°С за 30-40 минути до пълното утаяване на еритроцитите в контролата.
Декларация на RPGA по време на титруване на тестови кръвни серуми
Титруването на тестовите серуми и работния разтвор на K+ се извършва в къси редове на плаката. Друг къс ред се използва за наблюдение на липсата на спонтанна хемаглутинация на EDS.
180 μl разтвор на RIP се добавя към първите ямки на къси редове за титруване на тестовия серум. Добавете 50 μl PBS разтвор към всички останали ямки.
20 μl тестови серуми се добавят към ямките с RIP разтвора (получава се разреждане 1:10). Всеки серум се добавя със собствен връх и внимателно се пипетира (цветът на разтвора в ямките трябва да се промени от синьо-виолетов до зелен). След това 50 μl се прехвърлят от първите ямки в следващите ямки в редовете, като се получават двукратни разреждания от 1:20 до 1:1280. В края на титруването разтворите в обем от 50 μl се отстраняват от последните ямки.
Всеки път, когато се извършва RPGA, е необходимо да се извърши контролно определяне на K+ титъра. За да направите това, добавете 50 μl PBS разтвор към 8 ямки в дълъг ред. След това добавете 50 μl работен разтвор на К+ (1:20) към първата ямка, внимателно го отпипетирайте и прехвърлете 50 μl в следващите ямки, като получите 2-кратни разреждания от 1:40 до 1:5120.
За да се контролира диагностикума за отсъствие на спонтанна хемаглутинация, към всички ямки на къс ред се добавят 50 μl разтвор на PBS.
25 μl SED се добавят към всички ямки (с изключение на първите ямки на всеки ред за тест серуми, съдържащи RIP). Разбъркайте суспензията SED в бутилка или вана преди употреба! Таблетката се разклаща старателно и се оставя при температура от 16 до 25°С за 30-40 минути до пълното утаяване на еритроцитите в контролата.
Отчитане и интерпретация на резултатите
Отчитане на резултатите при скрининг на кръвен серум
Резултатите се вземат предвид по конвенционална скала от четири кръста. Серумният титър се счита за неговото разреждане, което дава хемаглутинация с най-малко 3 (+++) кръстосвания.
- ++++ (4+) - аглутинираните еритроцити образуват обърнат "чадър" на дъното на дупката, краищата му падат;
- +++ (3+) - аглутинираните еритроцити образуват обърнат "чадър" на дъното на отвора, ръбовете му са гладки;
- ++ (2+) - заедно с аглутинираните еритроцити, на дъното на ямката има утайка под формата на малък "пръстен" от неаглутинирани еритроцити;
- + (1+) - повечето червени кръвни клетки не са аглутинирани и се установяват под формата на малък "пръстен";
- (-) - неаглутинираните червени кръвни клетки образуват "точка" на дъното на ямката.
За положителен резултат се счита хемаглутинация на еритроцити, заредени с Vi-антиген, чрез най-малко 3 кръстосвания (+++).
Контролът на качеството на диагностикума се осигурява от 4 ямки от контролния ред, в които са добавени само PBS и SED разтвор. В тези ямки не трябва да има спонтанна хемаглутинация - реакцията е отрицателна (-). В противен случай изследването трябва да се повтори. Ако при повторно стадиране се появи хемаглутинация, лекарството не се използва.
Трябва да се счита, че серумите с отрицателен резултат не съдържат антитела срещу Vi антигена с диагностичен титър 1:40 или по-нисък.
Серумите, които дават положителен резултат при разреждане 1:40, трябва да бъдат повторно тествани с титруване на серума, за да се установи неговият титър.
Отчитане на резултатите при титриране на кръвния серум
Серумният титър се счита за неговото разреждане, което дава хемаглутинация от най-малко 3 (+++) кръста.
Контролът на качеството на диагностикума се осигурява от ямките на реда за контрол на EDS. В тези ямки не трябва да има спонтанна хемаглутинация - реакцията е отрицателна (-). В противен случай изследването трябва да се повтори. Ако при повторно стадиране се появи хемаглутинация, лекарството не се използва.
Комплектът реагент Diagnosticum Salmonella VI-antigen е предназначен за откриване в човешки кръвен серум на специфични антитела срещу Salmonella typhus VI-антиген при реакция на пасивна хемаглутинация (RPHA).
ЗАДАДЕНА ХАРАКТЕРИСТИКА
2.1. Принцип на метода.
Активният принцип на Diagnosticum Salmonella VI-антиген е Vi-антигенът, фиксиран върху повърхността на червените кръвни клетки. При взаимодействие със серуми, съдържащи антитела срещу Vi-антигена, се наблюдава феноменът на аглутинация на еритроцитите.
2.2. СЪДЪРЖАНИЕ НА КОМПЛЕКТА
| Реактиви | Количество |
| Diagnosticum еритроцитна салмонела Vi-антигенна течност- представлява 1% суспензия от формалинизирани и сенсибилизирани еритроцити от Salmonella Typhoid ovce с В-антиген във фосфатен буферен разтвор (pH 7,2). + 0,2; концентрация 0,06 mol/l). Хомогенна суспензия от кафяв цвят без люспи; при утаяване се образуват 2 слоя: плътна кафява утайка от еритроцити и прозрачна жълтеникава супернатантна течност | 1 бутилка - 6 мл |
| Salmonella диагностичен серум, адсорбиран B рецептор сух -хомогенна маса от бяло с кафеникав оттенък до бежово | 1 бутилка – 0,1 мл |
| 1% суспензия от формалинизирани, несенсибилизирани овчи еритроцити— хомогенна суспензия от кафяв цвят без люспи; при утаяване се образуват 2 слоя: плътна кафява утайка от еритроцити и прозрачна жълтеникава супернатантна течност | 1 бутилка – |
| Разтвор за разреждане на серум и поставяне на RPGA - 0,9% разтвор на натриев хлорид - прозрачна безцветна течност, pH от 6,5 до 7,5 | 2 бутилки – по 8 мл всяка |
| Плака с кръгло дъно за еднократна употреба за имунологични реакции -се състои от 8 реда, всеки от които включва 12 дупки с прозрачно, безцветно, кръгло дъно | 1 бр |
АНАЛИТИЧНИ И ДИАГНОСТИЧНИ ХАРАКТЕРИСТИКИ.
3.1. Диагностикумът трябва да бъде аглутиниран в RPHA с диагностичния серум от Salmonella, адсорбиран от сухия B рецептор в разреждане не по-малко от 1:160.
Условното ниво на диагностични характеристики на кръвен серум от здрави хора трябва да се счита за серумно разреждане не по-високо от 1:20.
3.2. Време за анализ: 2 часа.
3.3. Комплектът съдържа 8 определения.
ПРЕДПАЗНИ МЕРКИ
Когато работите с комплекта, трябва да спазвате „Правилата за проектиране, предпазни мерки, промишлена хигиена, противоепидемичен режим и лична хигиена при работа в лаборатории (отдели, отдели) на санитарни и епидемиологични институции на Министерството на здравеопазването на СССР ( М., 1981).
Анализираните серуми, както и реагентите в контакт с тях, трябва да се считат за потенциално заразени, способни на дългосрочно запазване или предаване на ХИВ, вирус на хепатит или друг причинител на вирусна инфекция - с тях трябва да се работи внимателно:
- работа с гумени ръкавици;
- при пипетиране е необходимо да се използват автоматични дозатори;
- след приключване на работата, третирайте анализираните серуми и реагентите и инструментите в контакт с тях с дезинфекционен разтвор
- Избършете оборудването със 70% етилов алкохол преди и след употреба.
Анализираните серуми трябва да бъдат инактивирани при температура 56 0 C за 30 минути.
Серумът за диагностика на Salmonella, адсорбиран от B рецептора, включен в комплекта, е сух и инактивиран.
Обективните резултати от анализа са гарантирани, ако са изпълнени следните условия:
- Всички реагенти от комплекта трябва да се съхраняват при температури от 2 до 8 0 C;
- не използвайте реактиви с изтекъл срок на годност;
- не използвайте реактивите от комплекта, ако върху опаковката им няма подходяща маркировка;
- За да извършите RPHA, използвайте реактиви, включени само в този комплект.
Ви-Диагностикум
Диагностикум Vi
Vi-Антигенен
