Culoarea și transparența mediului finit. Reacția în lanț a uraniului și reacția în lanț a senzațiilor

119. Reacțiile lui Pandi și Nonne - Apelt

Ca reactiv pentru efectuarea reacției Pandi se folosește un lichid transparent supernatant, care se obține prin agitarea puternică a 100 g de acid carbolic lichid cu 1000 ml apă distilată. Pentru a obţine sedimente şi lichid limpede(reactiv), acest amestec se pune mai întâi într-un termostat timp de 3-4 ore, apoi se păstrează la temperatura camerei timp de 2-3 zile.

Se pune un pahar de ceas sau o sticlă lamă pe hârtie de culoare închisă și se aplică 2-3 picături de reactiv, apoi 1 picătură fluid cerebrospinal. Dacă picătura devine tulbure sau apare o turbiditate sub formă de fir de-a lungul periferiei sale, reacția este considerată pozitivă.

Pentru a efectua reacția Nonne-Apelt, aveți nevoie de eprubete curate, o soluție saturată de sulfat de amoniu, apă distilată și hârtie de culoare închisă. Se prepară o soluție saturată de sulfat de amoniu în felul următor: 0,5 g de sulfat de amoniu neutru chimic pur se pun într-un balon de 1000 ml, apoi se toarnă 100 ml de apă distilată încălzită la 95 ° C, se agită până când sarea este complet dizolvată și se lasă câteva zile la temperatura camerei. După 2-3 zile, soluția se filtrează și se determină pH-ul. Reacția ar trebui să fie neutră.

Se toarnă 0,5-1 ml din soluția rezultată într-o eprubetă și se adaugă cu grijă aceeași cantitate de lichid cefalorahidian de-a lungul peretelui eprubetei. După 3 minute, evaluați rezultatul. Apariția unui inel albicios indică o reacție pozitivă. Apoi se agită conținutul eprubetei, se determină gradul de turbiditate comparându-l cu o eprubetă care conține apă distilată. Rezultatele reacției sunt evaluate pe fundalul hârtiei negre.

120. Bordet - reacția Zhangou

Un test de diagnostic valoros atunci când este detectat gonoree cronică printre persoanele care suferă de boli cronice boli inflamatorii sistemul genito-urinar. Conform literaturii, când utilizarea corectă Această metodă detectează până la 80% din cazurile de gonoree care nu au fost detectate prin metode bacterioscopice sau bacteriologice.

Reacția Bordet-Zhang poate fi o urmă ca urmare a unei boli anterioare sau a utilizării unei gonovaccine pentru diagnostic (metodă imunobiologică de provocare), precum și terapeutic (tratamentul proceselor inflamatorii cronice ale sistemului genito-urinar la femei, conform lui Baksheev). scop. Prin urmare, înainte de a o efectua, este necesar să colectați cu atenție anamneza,

Reacția poate fi, de asemenea, fals pozitivă atunci când se administrează lapte, utilizat în scopuri medicinale pirogenă.

În consecință, o reacție pozitivă Bordet-Giangu nu servește drept dovadă incontestabilă a prezenței infecție gonococică, la fel ca unul negativ, nu poate fi o dovadă a absenței gonoreei. in orice caz rezultate pozitive pe o perioadă lungă de timp, medicul ar trebui să se concentreze pe găsirea sursei infecției gonococice în organism.

O cultură gonococică ucisă care conține 3-4 miliarde de corpuri microbiene în 1 ml este utilizată ca antigen. Antigenul gonococic se păstrează cu o soluție de formaldehidă și se toarnă în fiole de 1-5 ml. Fiolele nedeschise sunt potrivite timp de 6 luni, cele deschise pot fi păstrate 2-3 zile într-un tub steril la frigider la o temperatură de 3-5 ° C,

Reacția de fixare a complementului Bordet-Giangu se desfășoară în mod similar cu reacția Wasserman (vezi nr. 121). Antigenul gonococic este diluat cu soluție izotonică de clorură de sodiu conform titrului indicat pe eticheta fiolei. Reacția se efectuează cel mai adesea într-un volum de 2,5 ml, prin urmare, la 0,5 ml de ser de testare diluat 1:5, se adaugă 0,5 ml de antigen diluat în fiecare tub. Restul de 1,5 ml reprezintă 1 ml de sistem hemolitic și 0,5 ml de complement.

Reacția este considerată pozitivă dacă este exprimată în grade diferiteîntârzierea hemolizei în serul de testare. În control (ser de sânge oameni sanatosi) se observă hemoliză completă.

121. Reacția Wasserman

Serul de sânge al pacienților cu sifilis conține reagine și anticorpi. Reaginele au proprietatea de a se combina cu antigenul cardiolipin. Anticorpii specifici împotriva Treponema pallidum se combină cu antigeni specifici. Complexele antigen-anticorp rezultate sunt absorbite de complementul adăugat în reacție. Indicatia se face prin introducerea unui sistem hemolitic (hematii de oaie + ser hemolitic).

Pentru a efectua reacția aveți nevoie de:

a) soluție izotonică de clorură de sodiu;

b) antigene ultrasonice treponemale (pastrate la frigider la +4 °C) si cardiolipin (pastrate la temperatura camerei);

c) complement, care este serul sanguin obtinut din punctia cardiaca a 5-10 cobai sanatosi. Se poate pastra la frigider 2 luni, cu conditia
conservare cu soluţie 4%. acid boricşi soluţie de sulfat de sodiu 5%;

d) hemolizină - ser hemolitic de iepure imunizat cu eritrocite de oaie cu diferite titruri (pastrat la frigider la 4 °C);

e) hematii de oaie obținute prin puncție vena jugulară. Sângele se colectează într-un borcan steril cu bile de sticlă (pentru amestecare), se agită timp de 15 minute. Cheagurile de fibrină sunt separate prin filtrare prin tifon steril. Sângele defibrat poate fi păstrat la frigider până la 5 zile.

Uneori este nevoie de o păstrare mai lungă a sângelui de oaie și, prin urmare, este conservat cu un conservant special (6 g glucoză, 4,5 g acid boric, 100 ml soluție izotonică de clorură de sodiu), care se fierbe într-o baie de apă pentru 20 de minute pe zi timp de 3 zile Pentru 100 ml de sânge defibrinat de oaie sunt necesari 15 ml de conservant. Sângele defibrat conservat în acest fel este păstrat la frigider.

Experimentul principal este precedat de mai multe etape.

Un pacient din vena cubitală se iau 5-10 ml de sange si se proceseaza serul. La copii, sângele poate fi prelevat din vena temporală sau o incizie în călcâi. Puncția se face cu instrumente sterile, o seringă și un ac.
prespălată cu soluție izotonică de clorură de sodiu.

Sângele pentru cercetare se ia pe stomacul gol; Cu 3-4 zile înainte de studiu, pacientului i se interzice consumul droguri narcotice, preparate digitalice, luați alcool.

Studiul nu trebuie efectuat la pacienții cu temperatură ridicată organism, după accidentare, intervenții chirurgicale, anestezie, boli infecțioase recente, la femei în timpul menstruației, la femeile însărcinate (în ultimele 10 zile de sarcină), la femei în travaliu (în primele 10 zile după naștere), precum și la nou-născuți ( în primele 10 zile de viaţă) .

Sângele rezultat într-un tub steril este plasat într-un termostat la o temperatură de 37 °C timp de 15-30 de minute. Cheagul rezultat este separat de pereții eprubetei cu o tijă de sticlă sterilă și plasat la frigider pentru o zi. Serul transparent separat (de deasupra cheagului) este aspirat cu o pipetă Pasteur folosind un bec de cauciuc sau turnat cu grijă într-un alt tub steril și inactivat într-o baie de apă timp de 30 de minute la o temperatură de 56 °C. Serul preparat în acest fel pentru experiment poate fi păstrat la frigider până la 5-6 zile.

Antigenele sunt diluate conform metodei și titrului indicate pe etichetă.

Pregătiți un sistem hemolitic. Pentru a face acest lucru, sângele de oaie sau globulele roșii defibrinate în cantitatea necesară pentru reacție sunt centrifugate, plasma este separată cu grijă, iar sedimentul este spălat cu 5-6 volume de soluție izotonă de clorură de sodiu până când lichidul supernatant devine complet incolor. Din sediment, se prepară o suspensie 3% de globule roșii într-o soluție izotonă de clorură de sodiu la titru triplu.

O soluție de ser hemolitic și o suspensie de eritrocite de oaie se amestecă rapid și se pun într-un termostat timp de 30 de minute.

Complementul uscat este diluat cu soluție izotonică de clorură de sodiu într-un raport de 1:10, ser uman normal inactivat - 1:5.

Complementul este titrat în 30 de tuburi plasate într-un rack de 10 tuburi pe 3 rânduri. Pe două rânduri se titrează în prezența a două antigene, în al treilea - cu soluție izotonică de clorură de sodiu. Cinci tuburi sunt tuburi de control: două pentru cei doi antigeni corespunzători și câte unul pentru monitorizarea complementului, a serului hemolitic și a soluției izotonice de clorură de sodiu pentru hemotoxicitate; completați-le după cum urmează:

Eprubetele se pun într-un termostat timp de 45 de minute, după care se verifică. Nu ar trebui să existe hemoliză în nicio eprubetă.

Complementul la o diluție de 1:10 se toarnă în 10 tuburi din primul rând al rackului în doze: 0,1, 0,16, 0,2,0,24, 0,3, 0,36,0,4,0,44, 0,5 și 0,55 ml. Se adaugă o soluție izotonică de clorură de sodiu până la 1 ml la conținutul fiecărei eprubete și se amestecă bine. 0,25 ml de amestec din fiecare eprubetă se transferă în eprubetele corespunzătoare din rândurile 2 și 3. Se agită grătarul cu eprubete, se adaugă 0,5 ml de sistem hemolitic la al 3-lea rând de eprubete, se agită din nou și se pune într-un termostat la 37 °C timp de 45 de minute. Ser de sânge uman normal, diluat cu soluție izotonică de clorură de sodiu în raport de 1:5, este turnat în toate cele 30 de eprubete, câte 0,25 ml fiecare.

Antigenul I (ultrasunemic treponemic), diluat prin titru cu soluție izotonică de clorură de sodiu, se adaugă 0,25 ml la 10 eprubete de pe primul rând; antigenul II (cardiolipină în aceeași diluție și în aceeași cantitate) - în 10 tuburi din al 2-lea rând. Se toarnă 0,25 ml soluție izotonică de clorură de sodiu în 10 eprubete de pe al 3-lea rând, restul de 0,25 ml se toarnă. După incubarea într-un termostat, se adaugă 0,5 ml de sistem hemolitic în 20 de tuburi (primul și al doilea rând), se agită și se pune la loc în termostat timp de 45 de minute.

După 45 de minute, se determină doza de lucru de complement, adică titrul acestuia cu o creștere de 15-20%.

Este considerat titlul de complement cantitate minimă, provocând hemoliza completă a globulelor roșii de oaie în prezența antigenului și a serului sanguin uman normal.

Experimentul principal este că fiecare ser test inactivat, diluat într-un raport de 1: 5 cu soluție izotonică de clorură de sodiu, este turnat în 0,25 ml în trei eprubete. Se adaugă 0,25 ml de antigen I în prima eprubetă, 0,25 ml de antigen II în a doua și 0,25 ml de soluție izotonică de clorură de sodiu în a treia (martor). În toate eprubetele se adaugă, de asemenea, 0,25 ml de complement diluat la doza de lucru. Toate eprubetele sunt introduse într-un termostat timp de 45 de minute, apoi se adaugă 0,5 ml de sistem hemolitic, se agită și se pun într-un termostat timp de 45-50 de minute. Rezultatul experimentului este înregistrat după debutul hemolizei complete în tuburile de control.

Rezultatele reacției sunt evaluate ca plusuri: întârziere completă a hemolizei (reacție puternic pozitivă) ++++, semnificativă (reacție pozitivă) +++, parțială (reacție slab pozitivă) ++, nesemnificativă (reacție îndoielnică) - ±, fără întârziere a hemolizei (reacție negativă) - .

La metoda cantitativă Pentru a realiza reacția Wasserman, experimentul se efectuează cu volume descrescătoare de ser diluat cu soluție izotonică de clorură de sodiu.

Schema experimentului principal al reacției Wasserman

Semnificația clinică a reacției Wasserman este greu de supraestimat. Se efectuează la toți pacienții înainte de tratament, dar sens special ea are la sifilis latent, înfrângere organe interne si sistemul nervos.

Rezultatele reacției Wasserman caracterizează calitatea tratamentului acordat, ceea ce dă temei pentru a scoate din registru pacienții tratați într-o anumită perioadă de timp.

În sifilisul primar, reacția Wasserman este de obicei pozitivă la sfârșitul săptămânii a 6-a din momentul infecției; cu sifilis secundar proaspăt este pozitiv în aproape 100% din cazuri, cu sifilis secundar recurent - în 98-100%; activ terțiar - în 85%; terțiar ascuns – în 60% din cazuri.

Reacția Wasserman este efectuată de două ori pentru toate femeile însărcinate, pacienții cu probleme somatice, nervoase, mentale și boli de piele, precum și populațiile decretate. În același timp, rezultatele reacțiilor pozitive și slab pozitive ar trebui tratate critic, deoarece pot apărea la sfârșitul sarcinii și după naștere, cu hipertiroidism, malarie, lepră, carie. tumoare maligna, boli infecțioase, colagenoză etc. Prin urmare, dacă există manifestari clinice Bolile lor trebuie luate în considerare, împreună cu datele bacterioscopice, în primul rând.

În același timp, există factori care pot distorsiona adevărata natură a rezultatelor obținute în urma reacției Wasserman: sticlă de laborator prost spălată (urme de acid și alcali în eprubete), depozitarea pe termen lung a sângelui prelevat pentru cercetare, consumul de grăsimi și alcool de către pacienți înainte de examinare, perioada de menstruație etc.

În toate cazurile, este recomandabil să se efectueze o examinare cuprinzătoare a pacientului, inclusiv, pe lângă reacția Wasserman, și RIBT (vezi 122, 123, 124) etc.

122. Reacția Sachs-Vitebsky (citocolică)

Folosit pentru a detecta sifilisul. Se bazează pe formarea unui precipitat la amestecarea serului sanguin al pacientului cu un antigen.

Pentru a pregăti antigenul, mușchii mai multor inimi de bovine sunt curățați de tendoane, fascie și grăsime, măcinați într-o mașină de tocat carne și extrași cu un volum de 5 ori de alcool etilic 96% timp de 15 zile cu agitare zilnică de 20 de minute. Extractul rezultat este evaporat într-o baie de apă într-o cană de porțelan sub vid. La reziduu se adaugă alcool etilic 96% fierbinte (o masă galben strălucitor de lipoide) într-o cantitate de 1/3 din volumul luat pentru extracția musculară.

Extractul se păstrează 3 zile la temperatura camerei, se filtrează (in apă rece) și se adaugă o soluție 0,3-0,6% de colesterol cristalin, în funcție de rezultatele titrarii cu seruri pozitive și negative. Depozitați antigenul citocolic la temperatura camerei în fiole sigilate sau tuburi închise.

Metodologie. La 2 ml soluție izotonică de clorură de sodiu se adaugă rapid 1 ml de antigen citocolic și se lasă la temperatura camerei timp de 15 minute până când apar fulgi. Se adaugă 0,1 ml de emulsie antigenică la 0,2 ml de ser inactivat într-o eprubetă, se agită timp de 3 minute și se lasă timp de 30 de minute, după care se adaugă 1 ml soluție izotonică de clorură de sodiu.

Se adaugă 1,2 ml de soluție izotonică de clorură de sodiu și 0,1 ml de emulsie de antigen în tubul de control cu ​​antigen. Nu ar trebui să existe fulgi în control. Rezultatele reacției se iau în considerare vizual sau cu ajutorul lupei și se desemnează, în funcție de numărul de fulgi care cad, cu plusuri (++++, +++, ++). Dacă reacția este negativă, nu există fulgi, dar conținutul tubului poate deveni ușor opalescent.

În 1931, P. Sachs și E. Witebsky au propus o modificare a acestei tehnici, care constă în diluarea antigenului în două faze: se adaugă 2 părți soluție izotonică de clorură de sodiu la 1 parte din antigen, se păstrează la temperatura camerei timp de 5 minute și adăugați încă 9 părți soluție izotonă de clorură de sodiu. De asemenea, se recomandă diluarea antigenului cu o soluție de clorură de sodiu 2%, care, potrivit autorilor, crește sensibilitatea reacției. Modificarea cantitativă a reacției cu diluția serului este de asemenea posibilă (1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64 etc.).

Reacția este destul de sensibilă, durează puțin timp (aproximativ 1 oră), iar rezultatele ei sunt citite imediat.

123. Reacția de imobilizare a Treponema pallidum (RIBT)

Folosind o reacție, anticorpii și complementul care imobilizează Treponema pallidum sunt detectați în serul sanguin al pacienților cu sifilis.

În sifilisul primar, RIBT este predominant negativ, în secundar - pozitiv în 92-96% din cazuri, în terțiar - în 92-100%, în sistemul nervos și sifilisul congenital - în 86-89% din cazuri.

Rezultate pozitive ale RIBT au fost observate în sarcoide, eritematoză, diabet, tumori maligne, hepatita virala, ciroză hepatică, malarie, lepră, mononucleoză infecțioasă, unele boli ale țărilor fierbinți (pinta, tiană etc.).

Antigenul este o suspensie de treponem pal prelevat din testiculele unui iepure infectat cu sifilis prin introducerea în testicul a 0,75-1 ml dintr-o suspensie de treponem pal într-o soluție izotonică de clorură de sodiu (50 animale pe câmp vizual).

Materialul din testicul trebuie luat la 6-8 zile după ce animalul este infectat. Înainte de a lua antigenul, iepurele este ucis prin sângerare (puncție cardiacă sau artera carotida). Țesutul testicular este zdrobit și umplut cu ser de sânge al unui iepure sănătos, diluat cu soluție izotonică de clorură de sodiu, agitat timp de -30 de minute și apoi centrifugat timp de 10 minute (1000 rpm). Lichidul supernatant este examinat microscopic. Ar trebui să existe cel puțin 10-15 Treponema pallidums în fiecare câmp vizual.

Complementul este pregătit în mod obişnuit din sângele porcușoarelor de Guineea.

Pentru a efectua RIBT aveți nevoie de: 1,2 ml de soluție de gelatină 0,2%, 2,8 ml de soluție de albumină 5%, 1,6 ml de suspensie de Treponema pallidum; pH-ul mediului este de 7,2. La acest amestec se adaugă 0,15 ml de complement (cocktail). În paralel, se efectuează două teste: cu complemente active (experiment) și reactive (de control).

Melangerii sunt umpluți cu serul de testare până la semnul „1”, apoi cu un cocktail până la marcajul „2” și se închid cu un inel de cauciuc steril.

În același timp, se realizează o reacție similară cu seruri evident pozitive și evident negative.

Melangherii se numerotează și se pun într-un termostat la o temperatură de 35 °C timp de 18-20 ore, după care se scot din termostat în perechi (experiment - control) iar conținutul se toarnă în eprubetele corespunzătoare. Se aplică 2 picături pe o lamă de sticlă: în stânga este experimentul, în dreapta este controlul, acoperiți cu un capac de sticlă și microscop într-un câmp vizual întunecat.

În primul rând, se studiază rezultatele controlului: se determină procentul de Treponema pallidum mobil și imobil. Formula de calcul: X = (A - B)/A * 100, unde A este numărul de treponeme mobile pallidum din martor; B - numărul de treponeme pallidum mobile din experiment.

Exemplu: (24 - 19) / 24 * 100 = 21%.

Evaluări rezultate RIBT: sub 20% - negativ. 21-30% - îndoielnic, 31-50% - slab pozitiv, peste 50% - pozitiv.

Antigen, complement și auxiliar, indicator sau sistem hemolitic - ser hemolitic și eritrocite de oaie.

Dacă în primul sistem se formează un complex specific antigen + anticorp, atunci complementul este adsorbit (se combină cu acest complex) și hemoliza nu are loc în al doilea sistem.

Reacția necesită:

1. Ser de testare, care este obținut din sângele prelevat prin puncția venei ulnare a pacientului. După coagularea sângelui, serul este aspirat într-un tub separat și inactivat timp de 30 de minute la 56 °C într-o baie de apă.

2. Antigen - o suspensie de gonococi uciși.

3. Globulele roșii de oaie sunt obținute din sânge defibrinat colectat steril. Se spală prin centrifugare de 3 ori cu porții noi de soluție salină. În reacție se folosește o suspensie de 3% de globule roșii.

4. Serul hemolitic se prepară în prealabil prin imunizarea iepurilor cu hematii de oaie. Înainte de utilizare, serul este titrat.

5. Complement – ​​ser proaspăt de cobai. Sângele este aspirat din inima cobaiului cu o seringă, iar după coagulare, serul este separat. Înainte de experiment, doza de lucru de complement este titrată. Pentru a face acest lucru, luați diluția de bază a complementului 1:10 și turnați-o în eprubete de la 0,1 la 0,5, după care volumul din fiecare eprubetă este ajustat la 1,5 ml cu soluție salină.

În același timp, se prepară un sistem hemolitic - diluat în titru triplu, ser hemolitic + 3% suspensie de eritrocite de oaie. Ambele ingrediente sunt în volume diferite și ținute într-un termostat timp de 30 de minute (sensibilizarea amestecului), după care amestecul se adaugă 1 ml în eprubete și se pune într-un termostat timp de 30 de minute. 2 eprubete servesc drept control:

1. 1 ml sistem hemolitic + 1,5 ml soluție fiziologică;

2. 0,5 ml complement 1:10 + 0,5 ml suspensie de globule roșii + 1,5 ml soluție fiziologică.

Titrul de complement este cantitatea minimă la care mai are loc hemoliza. Pentru a stabili reacția, luați o doză de lucru de complement, crescută față de titrul cu 20-25%, adică, de obicei, cantitatea de complement care este prezentă în penultima eprubetă cu hemoliză. Creșterea dozei de complement este necesară deoarece în reacție activitatea complementului poate fi oarecum suprimată de alte ingrediente ale reacției (antigen, ser).
43) RSK Wasserman

Plasat pentru diagnosticul de sifilis pentru a detecta anticorpi, precum și pentru a determina eficacitatea terapie specifică. Se bazează pe principiul reacției de fixare a complementului Bordet-Gengou. O diferență semnificativă între reacția Wasserman este nespecificitatea antigenului: extracte lipoide din organe normale animalelor

Pentru a efectua reacția Wasserman, este necesar să aveți serul pacientului, diagnostice, antigene cu reacție încrucișată nr. 1, nr. 2, complement, ser hemolitic, hematii de oaie, ser fiziologic.

Diagnosticum nr. 1 - specific, treponemal.

Diagnosticum nr. 2 - nespecific, antigenul cardiolipin, care sunt extracte de inimă de bovine foarte purificate, cu o compoziție chimică constantă de lipoide. Lipoidele, de compoziție chimică sunt apropiate de lipoizii Treponema pallidum, prin urmare, deși nu sunt specifici, fixează anticorpi împotriva spirochetei.

Acești antigeni sunt produși central și sunt utilizați diluați în reacție conform titrului indicat pe etichetă.

Concomitent cu experimentul principal se plasează 2 martori: cu ser evident negativ și cu ser evident pozitiv.

Stabilirea experimentului principal

Mai întâi, serul de testare inactivat și diluat 1:5 este turnat în 4 eprubete. Apoi antigenele sunt turnate în 2 eprubete (Nr. 1, Nr. 2), iar soluția fiziologică este turnată în a 3-a eprubetă. După aceasta, în toate tuburile se adaugă o doză de lucru de complement. După amestecarea ingredientelor, grătarul cu eprubete este plasat într-un termostat la 37 °C timp de 30 de minute. După păstrarea într-un termostat, sistemul hemolitic este adăugat în toate eprubetele. Tuburile sunt plasate din nou într-un termostat timp de 2 ore și apoi lăsate la temperatura camerei. A doua zi se noteaza rezultatul.Se apreciaza gradul de intensitate al reactiei, patru plusuri (++++), trei (+++), doua (++) si unul (+) - in functie de intensitate de culoarea lichidului și de dimensiunea sedimentului de globule roșii din partea de jos. Hemoliza completă este indicată de un (-) minus. Dacă există o discrepanță puternică între rezultatele cu antigeni diferiți, experimentul se repetă cu o nouă porțiune de sânge.
44) RIT-r. Imobilizarea Treponema pallidum.

Această reacție este folosită ca în scopuri de diagnostic, și pentru recunoaștere rezultate fals pozitive reacții serologice standard, în special pentru sifilisul latent.

RIBT este că, în prezența imobilizinelor în serul pacienților cu sifilis și complement activ, treponema pallidum își pierde motilitatea.

RIBT este plasat în cutii sterile. Reacția implică serul de testare, complementul și antigenul.

În RIBT, antigenul este o suspensie de treponem palid dintr-un testicul de iepure în întâlniri timpurii(7-8 zile după infectare) orhită sifilitică. Un mediu special de suspensie păstrează viabilitatea Treponema pallidum cel puțin o zi. Complementul este folosit în RIBT porcușori de Guineea. RIBT apare în condiții anaerobe. Eprubete cu ingrediente sunt plasate într-un microanaerostat, din care aerul atmosfericși se injectează un amestec de gaz (95 părți azot și 5 părți dioxid de carbon). Microanaerostatul cu eprubete se pune într-un termostat (35°C) timp de 18-20 ore.

În paralel cu formularea reacției, studii de control cu ser de sânge pozitiv și negativ prelevat din experiența anterioară.

Rezultatele RIBT sunt evaluate după îndepărtarea tuburilor din termostat (adică după 18-20 de ore de experiment). Folosind o pipetă Pasteur, o picătură din conținutul eprubetei este aplicată pe o lamă de sticlă, care este acoperită cu un capac de sticlă și examinată la un microscop cu câmp întunecat (obiectiv 40, ocular 10). Când până la 20% din Treponema pallidum sunt imobilizate, reacția este considerată negativă, de la 21 la 30% - îndoielnică, de la 31 la 50% slab pozitivă, de la 51 la 100% - pozitivă. Procentul de imobilizare a Treponema pallidum este determinat folosind un tabel special.

45) Reacția opson-fagocitară

Mecanism: creșterea fagocitozei celulelor microbiene sub influența efectelor prietenoase ale anticorpilor, serului imunitar și complementului.

Componente de reacție:

1) antigen - cultura microbiana zilnica;

3) complement - ser proaspăt de cobai;

4) fagocite - suspensie de leucocite.

Opsoninele sunt anticorpi care se găsesc în serurile normale și imune și pregătesc microbii pentru fagocitoză.

Reacția se realizează în eprubete speciale la t = 37° minute. Apoi se prepară frotiuri din fiecare eprubetă, se numără 100 de fagocite și se determină numărul de microcontroale fagocitate.

Index opsonic = indice fagocitar. ser/indice fagocitar al serului normal

Cu cât este mai mare indicele opsonic (trebuie să fie >1) al serului testat și, prin urmare, cu atât este mai mare! bruceloză).

Este utilizat pentru determinarea opsoninelor - anticorpi care stimulează activitatea fagocitară a leucocitelor, adică. serodiagnosticul infecțiilor, cum ar fi bruceloza.

Întărirea fagocitozei are loc datorită atașării opsoninelor cu centrii activi (fragmentul Rav) la determinanții bacterieni, iar apoi cu ajutorul fragmentelor Pc la receptorii Pc ai fagocitelor. Serul normal conține cantități mici de opsonine, care își exercită efectele în prezența complementului. Există mai multe opsonine în serul imunitar, iar activitatea lor este mai puțin dependentă de complement.

Componente:

Test de ser

Ser normal

Cultură microbiană zilnică (de exemplu, stafilococică)

Fagocite - o suspensie de neutrofile

Se incubează la 37°C timp de 30 de minute. Frotiurile sunt preparate din fiecare eprubetă, colorate conform Romanovsky-Giemsa, iar numărul de microbi din 100 sau mai mulți neugrofili este numărat la microscop, adică. determina indicatorul fagocitar.

Indicator fagocitar - numărul de microbi absorbiți de un neutrofil.

Index opsonic - indicator fagocitar al serului imunitar (test) / indicator fagocitar al serului normal.

Cu cât indicele opsonic este mai mare (trebuie să fie > 1), cu atât imunitatea este mai mare.

Indicele opson-fagocitar este un indicator digital = numărul de fagocite x evaluarea fagocitozei (în funcție de numărul de microbi absorbiți). Valoarea maximă este -75.

46) RN pe șoareci pentru a stabili exotoxina

Această reacție se bazează pe capacitatea unui ser antitoxic specific de a neutraliza exotoxina.

Anticorpii serici imunitari sunt capabili să neutralizeze efectele dăunătoare ale microbilor sau toxinelor acestora asupra celulelor și țesuturilor sensibile, ceea ce este asociat cu blocarea antigenelor microbiene de către anticorpi, adică neutralizarea acestora.

Reacția de neutralizare (RN) se realizează prin introducerea unui amestec antigen-anticorp în animale sau în obiecte de testare sensibile (cultură celulară, embrioni). În absența efectelor dăunătoare ale microorganismelor sau ale antigenelor sau toxinelor acestora la animale și obiectele de testat, ele vorbesc despre efectul de neutralizare al serului imun și, prin urmare, despre specificitatea interacțiunii complexului antigen-anticorp.

Pentru a efectua reacția, materialul de testat, care este de așteptat să conțină o exotoxină, este amestecat cu ser antitoxic, tinut in termostat si administrat la animale (cobai, soareci). Animalele de control sunt injectate cu filtratul materialului de testat, netratat cu ser. Dacă exotoxina este neutralizată cu ser antitoxic, animalele din lotul experimental vor rămâne în viață. Animalele de control vor muri ca urmare a exotoxinei.

Reacția de neutralizare a exotoxinei are loc atunci când interacționează cu serul antitoxic (anticorpi antitoxină). Ca urmare a formării complexului antigen-anticorp, toxina își pierde proprietățile toxice.

Reacția de neutralizare este efectuată pentru a detecta și titra toxine, toxoizi sau antitoxine.

Toxinele sunt obținute prin filtrarea lichidului mediu nutritiv sau material de testare în care s-au dezvoltat bacterii toxice. Când este tratată cu formaldehidă timp de 30-45 de zile la o temperatură de 37°C, toxina este transformată în toxoid, care este folosit pentru a imuniza animalele pentru a obține ser antitoxic.

Reacție de neutralizare in vivo. Pentru a determina tipul de toxină, aceasta este amestecată cu ser antitoxic de diagnostic și acest amestec este injectat în șoareci albi. La neutralizarea toxinei cu ser antitoxic, șoarecii nu mor.

Reacția de neutralizare este utilizată pentru a determina imunitatea antitoxică la copiii cu difterie (testul Schick) și scarlatina (testul Dick). Pentru a face acest lucru, o anumită cantitate din toxina corespunzătoare (1/40 DLM) este injectată intradermic în zona antebrațului. Dacă în organism există antitoxine, toxina va fi neutralizată și reacția va fi negativă. În absența antitoxinelor în organism, reactie inflamatorie la locul injectării toxinei.
47) RN (reacție de neutralizare) la șoareci pentru a identifica virusul encefalită transmisă de căpușe

Virusul TBE este patogen pentru o serie de animale de laborator și sălbatice. Soarecii albi nou-născuți și tinerii sunt cei mai sensibili. După infectarea la nivelul creierului, intraperitoneal, intramuscular, aceste animale dezvoltă encefalită, terminând cu moartea animalelor. Dintre animalele de fermă, caprele sunt cele mai sensibile la virusul TBE, oile și vacile sunt mai puțin sensibile, iar caii sunt ușor sensibili. Virusul TBE are un efect citopatogenic (CPE), provocând modificări citopatice în culturile primare și continue de celule renale embrionare porcine (PEB și PES) și se înmulțește fără un CPE pronunțat în multe alte culturi celulare. În creierul șoarecilor infectați și în fluidul de cultură al culturilor infectate are loc acumularea virusului TBE și a antigenelor virale specifice: fixarea complementului, hemaglutinarea, precipitarea etc.

Virusul TBE perioadă lungă de timp se conservă la temperaturi scăzute ( modul optim-60 de grade C și mai jos), tolerează bine liofilizarea, poate fi păstrat în stare uscată mulți ani, dar este rapid inactivat la temperatura camerei. Fierberea o omoară în 2 minute, iar în lapte fierbinte la 60 de grade. C moare în 20 de minute.

Formalina, fenolul, alcoolul și alți dezinfectanți și radiațiile ultraviolete au, de asemenea, un efect de inactivare.

Reacția de neutralizare se bazează pe capacitatea serurilor imune specifice de a stinge efectul infecțios al virusurilor. Aplicabil în două direcții:

1) pentru tiparea virusurilor izolate;

2) pentru titrarea anticorpilor în serurile celor care s-au recuperat.

Configurarea reacției:

1. Pe animale de laborator. Criterii pentru prezența unui virus

servește la moartea animalelor de laborator. Se calculează LD50

Diluția maximă a suspensiei virale, care

a provocat moartea a 50% dintre animalele infectate. Pentru

Se realizează identificarea virusului encefalită transmisă de căpușe

infectie intracerebrala a soarecilor albi.

2. În culturi de țesuturi. Rezultatele sunt luate în considerare

În funcție de efectul citopatic (CPE)

Conform metodei de testare a culorii bazată pe schimbarea culorii

Prin hemadsorbție.

3. În embrionul de pui. Rezultatele sunt înregistrate conform

apariția urmelor de-a lungul membranei corioalantoide.

48) RTGA

Această reacție este utilizată în practica virologică:

Pentru a determina tipul de virus (pe sticlă);

Pentru detectarea în serul pacienților (extins).

La stabilirea unei reacții indicative de inhibare a hemaglutinării, se aplică pe sticlă 1 picătură de ser imun specific tipului, apoi se adaugă 1 picătură de material de testat și 1 picătură de suspensie 5% de globule roșii.

Contabilizarea rezultatelor: tipul de virus este determinat de serul cu care nu a avut loc reacția, deoarece serul imunitar specific virusului izolat suprimă activitatea sa hemaglutinantă, iar globulele roșii nu se aglutinează.
49)RIF

Coloranții fluorocromi luminoși (izotiocianat de fluorisceină etc.) sunt utilizați ca etichete.

Există diverse modificări ale RIF. Pentru diagnosticarea expresă a bolilor infecțioase, Koons RIF este utilizat pentru a identifica microbii sau antigenele acestora în materialul de testat.

Există două metode de RIF conform lui Koons: directă și indirectă.

Componente RIF directe:

1) materialul examinat (scaunul evacuat de nazofaringe etc.);

2) ser imun specific marcat care conţine AT-la la antigenul dorit;

3) soluție izotonică de clorură de sodiu.

Un frotiu din materialul de testat este tratat cu antiser marcat.

Are loc reacția AG-AT. În timpul unei examinări microscopice luminiscente, fluorescența este detectată în zona în care sunt localizați complexele AG-AT.

Componentele RIF indirecte:

1) materialul studiat;

2) antiser specific;

3) ser antiglobulinic (AT-la împotriva imunoglobulinei), marcat cu fluorirom;

4) Soluție izotonică de clorură de sodiu.

Un frotiu din materialul de testat este tratat mai întâi cu ser imunitar la antigenul dorit și apoi cu ser antiglobulină marcat.

Complexele luminescente AG-AT - marcate AT sunt detectate folosind un microscop fluorescent.

Avantajul metodei indirecte este că nu este nevoie să se pregătească o gamă largă de seruri specifice fluorescente, ci se folosește un singur ser antiglobulinic fluorescent.

Există și un tip de RIF indirect cu 4 componente, atunci când complementul (ser de cobai) este introdus suplimentar. Într-o reacție pozitivă, se formează un complex de AG-AT - etichetat - complement AT.

Reacția se referă la reacții serologice implicând antigeni sau anticorpi marcați.

Se realizează prin metode directe și indirecte.

La metoda directa detecta antigenul în materialul de la un pacient. Se folosește un ser fluorescent de diagnostic, care conține imunoglobuline izolate din serurile imune și marcate cu fluorocromi.

Antigenul specific este detectat sub formă de conglomerate luminiscente de culoare verde strălucitor, iar fundalul preparatului este colorat portocaliu-roșu.

Componentele reacției directe de imunofluorescență:

1) materialul studiat;

2) ser luminiscent specific;

3) microscop fluorescent.

La diagnosticarea gripei se face diferențierea de agenții patogeni ai paragripalei și infecție cu adenovirus. Tamponul nazofaringian este tratat cu ser gripal fluorescent sau imunoglobulină gripală.

Rezultatul „+” sub forma unei străluciri verzi se obține după 3 ore.

Prin metoda indirectă, anticorpii specifici sunt detectați și titrați. Titrul seric este diluția sa maximă la care se notează fluorescența „+ +”.

Componentele reacției indirecte de imunofluorescență

Pentru a căuta un antigen în timpul diagnosticării rapide:

1) material de testare (antigen);

2) ser specific;

3) ser luminescent antiglobulinic

4) microscop fluorescent.

/ specific de fază

Anticorpii serici se adsorb la antigen.

// faza nespecifica

Se utilizează ser antiglobulinic cu anticorpi marcați cu fluorocromi. Se formează un complex antigen + anticorp (I) + ser antiglobulină (II), care strălucește.