Mecanismul de reacție de precipitare este diferit de reacție. Reacția de precipitare (metoda imunologică)
Constă în interacțiunea unui antigen solubil cu un anticorp, urmată de formarea unui sediment cu granulație fină (precipitat).
Reacția de precipitare face posibilă determinarea prezenței unui antigen necunoscut în materialul de testat prin adăugarea unui anticorp cunoscut sau folosind un antigen cunoscut pentru a determina un anticorp necunoscut. Precipitare devine mai răuîn lipsa sărurilor. Precipitația optimă este în intervalul pH=7,0-7,4.
Mecanismul de precipitare este apropiat de mecanismul de aglutinare. Sub influența sistemului imunitar, care a reacționat cu antigenul, gradul de dispersie a acestuia scade. Este necesar ca serul și antigenul să fie complet transparente. Când efectuați precipitarea, puteți adăuga diferite diluții ale antigenului la o diluție a serului sau invers.
Precipitația este înregistrată mai bine dacă antigenul este stratificat deasupra anticorpului într-o eprubetă. În acest caz, se observă apariția unui precipitat sub formă de inel - precipitare inelară. Precipitarea inelului se realizează în tuburi speciale cu un diametru de 2,5-3,5 mm. Pentru a determina numărul de antigene din materialul de testat sau diferiți anticorpi din ser, se utilizează reacția de precipitare cu agar: se toarnă 1% agar limpezit în sau pe lame de sticlă. Soluțiile de antigen și anticorpi sunt turnate în diferite godeuri realizate în agar, care difuzează unul spre celălalt, formând linii de precipitare. Reacția de precipitare este utilizată pe scară largă în diagnosticare (vezi reacția Ascoli).
Precipitarea în agar face posibilă determinarea toxicității culturilor de difterie.
ÎN cercetare criminalistica precipitarea servește la stabilirea speciilor de sânge, organe și țesuturi folosind seruri precipitante specifice.
Precipitarea este reacția de precipitare a unui complex de antigen (precipitinogen) și anticorp (precipitină). Precipitația este unul dintre fenomenele imunologice care face posibilă determinarea conținutului de anticorpi (vezi) în serul sanguin al persoanelor bolnave sau vaccinate, precum și în sângele animalelor imunizate. Când se utilizează seruri standard, reacția de precipitare poate fi utilizată pentru a titra antigene solubile de diferite origini (vezi).
În cea mai simplă formă de stabilire a reacției de precipitare, serul de testat este adăugat prin stratificare într-o serie de eprubete cu o cantitate constantă de antigen într-o serie de diluții multiple. După 30-60 min. incubarea la temperatura camerei, la interfața a două lichide se formează un inel de turbiditate - precipitarea inelului. Cantitatea minimă de ser care dă o reacție de precipitare este luată ca titrul antiserului. Prin efectuarea reacției inverse cu un antiser standard, este posibilă estimarea concentrației relative a antigenului în diferite fluide biologice.
Rezultatele titrării anticorpilor și antigenelor pe baza metodei de mai sus nu au o expresie cantitativă absolută. Pentru a cuantifica conținutul de anticorpi, Heidelberger, Kabat (M. Heidelberger, E. Kabat) și alții au dezvoltat metoda cantitativă reacție de precipitare, care se bazează pe detectarea așa-numitei zone de echivalență. Când se amestecă cantități specifice vârstei de antigen cu volume constante de antiser, cantitatea de precipitat formată crește inițial și apoi scade din nou datorită solubilității crescute a complexului antigen-anticorp în exces de antigen. Dacă determinăm conținutul de anticorpi din supernatant în toate eprubetele, se va dovedi că în eprubetele din mijloc ale rândului sau chiar în singura eprubetă nu există anticorpi în supernatant; totodată aici se formează cel mai mare precipitat. Întrucât în zona de echivalență întregul antigen introdus în amestecul de substanțe care reacționează este implicat și în precipitat, după scăderea proteinei antigenului din cantitatea de proteină precipitată, se obține valoarea exactă a conținutului de anticorpi dintr-un volum dat de ser de testare. . Conținutul de proteine al precipitatului după spălarea temeinică cu soluție salină răcită se determină prin azot sau o metodă colorimetrică.
La aprecierea valorii reacţiei de precipitare ca metoda de diagnostic este necesar să se țină cont de faptul că serurile imune pot conține anticorpi care nu au proprietățile precipitinelor și, prin urmare, nu formează un precipitat atunci când interacționează cu antigenul. Acestea includ în primul rând anticorpi incompleti, precum și alți anticorpi aparținând grupului de gamma A-globuline.
Capacitatea antiserului de a precipita antigenul poate fi afectată prin încălzire la 65-70°, tratarea cu solvenți organici, reducerea în mediu acid [Izliker (N. Isliker), A.Ya. Kullberg]. Fenomenul de precipitare cu antiser cunoscut ca conține precipitine este posibil doar la o anumită temperatură, concentrație de săruri și ioni de hidrogen. Reacția de precipitare are loc cel mai rapid la 25-37°. O condiție indispensabilă pentru formarea unui precipitat este prezența clorurii de sodiu (soluție NaCl 0,85%) în concentrații izotonice. Când concentrația de NaCl crește la 15%, precipitatele formate de antigenul polizaharidic se dizolvă parțial, care pot fi folosite pentru a extrage anticorpi puri. Reacția de precipitare cu antigene proteice are loc cu aceeași viteză și completitate atât în 0,85%, cât și în 15% soluții de NaCl. Concentrația optimă de ioni de hidrogen pentru formarea precipitatului corespunde valorilor pH-ului de la 5,0 la 9,0.
În practica de laborator sunt utilizate diverse modificări ale reacției de precipitare. În special, reacția de termoprecipitare este utilizată pentru a detecta antigenele bacteriene antrax, botulism etc., nesupus denaturarii termice (coctoantigene). Această reacție diferă de reacția de precipitare cu inel doar prin aceea că filtratul materialului de testat fiert este utilizat ca antigen (vezi Ce este reacția).
Când se analizează un amestec complex de antigeni folosind reacția de precipitare, este imposibil să se caracterizeze proprietățile componentelor individuale ale amestecului. Pentru a rezolva această problemă, ei recurg la metode de precipitare în agar și imunoelectroforeză. Metoda de precipitare cu agar în cea mai comună modificare a O. Ouchterlony se bazează pe faptul că antigenul și antiserul, difuzând unul față de celălalt într-un strat subțire de agar, formează linii de precipitare atunci când se întâlnesc. După numărul de astfel de linii se poate aprecia numărul de componente conținute într-un amestec dat de antigeni. Metoda Ouhgerlonu vă permite să comparați diferite amestecuri antigenice și să determinați gradul de înrudire a componentelor prezente în ele. Când se analizează un amestec antigenic complex care conține substanțe cu aceleași viteze de difuzie în agar, mare ajutor poate aduce metoda imunoelectroforezei. Amestecul de antigen este separat în prealabil într-un câmp electric într-o placă de agar, după care este dezvoltat componente individuale antiser. Antiserul este adăugat într-un șanț făcut în agar paralel cu linia de-a lungul căreia s-au deplasat antigenele în timpul electroforezei. Fiecare antigen produce un arc individual de precipitare cu antiser. Imunoelectroforeza este utilizată pe scară largă pentru analiză anomalii patologiceîn proteinele serice, precum și în analiza imunologică a antigenelor tisulare și bacteriene.
Precipitații criminalistice. Precipitația este folosită în medicina legală pentru a determina speciile de sânge, părți de organe și țesuturi. Într-o serie de cazuri de anchetă se cere să se stabilească tipul de sânge găsit pe instrumentele infracțiunii, hainele infractorului sau victimei etc. Pentru reacția de precipitare, serurile de precipitare obținute prin imunizarea iepurilor, cocoșilor și caprelor. cu proteine de la diverse animale se folosesc. Se prepară de obicei seruri care precipită oameni, cal, pisici, pui, porc, câine, bovine. Trebuie să aibă un titru de cel puțin 1:10.000 și să fie destul de specifici. Extractele sunt preparate din pata sau crusta de sânge care este examinată. soluție salină, care sunt apoi testate cu ser de precipitare. Tipul de proteină se consideră stabilit dacă unul dintre serurile precipitante formează un precipitat cu un extract din sângele testat cu reacția martor corespunzătoare. Reacția de precipitare poate determina, de asemenea, tipul de proteină din țesuturile și organele umane sau animale. De obicei, reacția de precipitare este efectuată în eprubete cu un capăt în formă de con. Când se obțin extracte tulburi, reacția de precipitare este efectuată în agar Ouchterlohn.
Reacția de precipitare (RP) este precipitarea unui antigen solubil sub acțiunea anticorpilor în prezența unui electrolit. Efect de reacție vizibil (fenomen de precipitare) – tulbureala (formarea unui inel sau sediment tulbure - precipitat).
RP este utilizat pentru a detecta un antigen necunoscut într-un număr de boli infecțioase: pentru antrax, tularemie, meningită, variolă. În medicina legală se folosește pentru determinarea speciilor de sânge și spermă; în studii sanitare şi igienice – să stabilească falsificarea Produse alimentare. RP este foarte diferit sensibilitate crescutăși vă permite să detectați antigenul la diluții de 1:1.000.000 și 1:10.000.000.
Componentele reacției de precipitare.
1. Antigen (precipitinogen) - acesta este un antigen natura moleculara, care se află într-o stare fin dispersată (solubilă). Precipitinogenii sunt diferite lizate sau extracte de țesuturi etc. Precipitinogenul diferă de aglutinogen prin dimensiunea particulelor de antigen. Aglutinogen Are dimensiunile celulelor(acestea nu sunt celule întregi distruse), ci dimensiunile precipitatogen pe măsura dimensiuni moleculare(acestea sunt proteinele și complexele lor cu carbohidrați sau lipide). Soluție de precipitatogen transparent.
2. Anticorpi (precipitine) se găsesc în serul din sânge uman sau în serurile de precipitare a diagnosticului imun care conțin anticorpi cunoscuți.
3. Electrolit– soluție izotonică de clorură de sodiu.
Obținerea precipitinogenului.
Se obține prin măcinarea materialului și extragerea antigenelor proteice din acesta prin fierbere sau prin alte metode.
Exemple de precipitinogeni: lizate sau extracte diverse organeși țesuturi, ser de sânge străin (serul este soluţie, în primul rând, diverse proteine), filtrate de culturi în bulion de microbi, extracte sărate de microbi, autolizate etc.
Obținerea serurilor precipitante.
Obținut prin hiperimunizarea iepurilor cu precipitinogeni corespunzători. Astfel de seruri conțin anticorpi la acei precipitinogeni cu care iepurii au fost imunizați.
Exemple de seruri precipitante: precipitand ser de antrax (conține anticorpi la antigenele antraxului), ser antimeningococic precipitant(conține anticorpi împotriva antigenelor agentului cauzal al meningitei) etc.
Titrul ser de precipitare - aceasta este cea mai mare diluție de precipitinogen la care serul dă încă o reacție de precipitare.
Metode de configurare a RP.
1. Reacția de precipitare în inel – se efectuează în tuburi speciale de precipitare (diametru - 0,4-0,5 cm, înălțime - 7-8 cm). În eprubetă se adaugă 0,2 - 0,3 ml de ser precipitant și aceeași cantitate de precipitanogen este stratificată cu grijă de-a lungul peretelui cu gura lungă a unei pipete Pasteur. Apoi, așezați cu grijă eprubetele pe verticală dintr-o poziție orizontală.
Contabilizarea rezultatelor reacțiilor realizată prin apariția unui inel alb la interfața antigen-anticorp. Dacă reacția este pozitivă se observă formarea unui astfel de inel. În acest caz, antigenul se potrivește cu anticorpul și se leagă.
Dacă sunt folosite extracte apoase fierte și filtrate de organe și țesuturi ca precipitatogen, atunci reacția se numește reacție precipitații termice (de exemplu, la diagnosticarea antraxului).
2. Reacția de precipitare în gel - se efectuează în vase Petri sau pe lame de sticlă, unde se așează un strat de gel de agar. Pe măsură ce gelul se întărește, sunt tăiate godeuri în care sunt plasați antigene sau anticorpi, sau ambele. Distinge 2 metode RP în gel:
o metodă imunodifuzie simplă (radială).: una dintre componentele reacției imune (antigen sau anticorp) se pune în godeu, iar cealaltă componentă se amestecă cu agar; la rezultat pozitiv (antigenul corespunde unui anticorp) în jurul godeului se formează inel precipitat ;
b) metoda imunodifuzie dublă: atât anticorpul cât și antigenul sunt plasați în godeuri separate, difuzează unul spre celălalt în gelul de agar; cu rezultat pozitiv unde se întâlnesc anticorpii și antigenii linii de precipitații .
Exemplu de RP în gel este reacția de imunodifuzie dublă Ouchterlony la diagnosticarea difteriei
Imunoelectroforeza - Aceasta este o metodă care combină metoda electroforezei și reacția de precipitare. Un amestec de antigeni (de exemplu, proteine serice) este separat într-un gel folosind electroforeză. Apoi, pentru a găsi și identifica proteina de interes (antigen necunoscut), se folosește un ser precipitant de diagnosticare care conține anticorpi la acea proteină (anticorp cunoscut). Pentru a face acest lucru, serul de diagnostic este introdus în șanțul paralel cu proteinele. Dacă printre proteine există una care corespunde anticorpului găsit în ser, atunci linii de precipitații.
Reacția de precipitare- RP (de la lat. praecipito- precipitat,) este formarea și precipitarea unui complex de antigen molecular solubil cu anticorpi sub formă de turbiditate, numit precipitat. Se formează prin amestecarea antigenelor și anticorpilor în cantități echivalente; un exces al unuia dintre ele reduce nivelul de studii complex imun. Spre deosebire de reacția de aglutinare, antigenul pentru reacția de precipitare este compuși solubili, a căror dimensiune a particulelor se apropie de dimensiunea moleculelor. Acestea pot fi proteine, complexe de proteine cu carbohidrați și lipide, extracte bacteriene, diverse dizatate sau filtrate de culturi microbiene în bulion. Anticorpii implicați în reacția de precipitare se numesc precipitine. Complexul fin antigen-anticorp rezultat este detectat prin anumite metode de stadializare a reacției de precipitare.
Reacția de precipitare a inelului a fost propusă pentru prima dată de Ascoli. Este utilizat în diagnosticul antraxului, ciumei, tularemiei și meningitei. Metoda este simplă și accesibilă.
Ser de precipitare imun specific este turnat în tuburi de precipitare înguste și antigenul este stratificat cu foarte mare grijă pe acesta. De exemplu, la diagnosticarea antraxului se iau ca antigen bucăți de piele, lână, pielea unui animal mort etc.. Se fierb, lichidul este filtrat și folosit ca antigen. Apariția unui inel - precipitat - la marginea a două lichide indică prezența antigenului corespunzător.
Reacția de precipitare a gelului de agar sau metoda de precipitare prin difuzie face posibilă studierea în detaliu a compoziției amestecurilor antigenice complexe solubile în apă. Pentru a stabili reacția, utilizați un gel (agar semi-lichid sau mai gros). Fiecare componentă care alcătuiește antigenul difuzează către anticorpul corespunzător cu viteze diferite. Prin urmare, complexele diferitelor antigene și anticorpii corespunzători sunt localizate în zone diferite gel, unde se formează linii de precipitare. Fiecare dintre linii corespunde unui singur complex antigen-anticorp. Reacția de precipitare este de obicei stabilită la temperatura camerei.
Metoda de imunoelectroforeză primită utilizare largă V anul trecutîn studiul structurii antigenice a microbilor. Complexul de antigen este plasat într-un godeu, care este situat în centrul unui gel de agar turnat pe placă. Un curent electric este apoi trecut prin gelul de agar, ceea ce face ca diferitele antigene incluse în complex să se deplaseze în câmp curent electricîn funcţie de mobilitatea lor electroforetică. După ce electroforeza este finalizată, serul imun specific este adăugat într-un șanț situat de-a lungul marginii plăcii și plasat într-o cameră umedă. Liniile de precipitare apar la locurile unde se formează complexul antigen-anticorp.
Reacții de precipitare a puneîn eprubete (reacție de precipitare inelară),în geluri, medii nutritive etc. Lat distribuite primite varietăți de reacție de precipitare într-un gel semi-lichid de agar sau agaroză: imunodifuzie dublă conform Ouchterlony. imunodifuzie radială, imunoelectroforeză si etc
Reacție de imunodifuzie radială. Serul imunitar cu gel de agar topit este turnat uniform pe pahar. După solidificare în gel, se fac godeuri în care antigenul este plasat în diferite diluții. Antigenul, difuzând în gel, formează zone de precipitare în formă de inel în jurul godeurilor cu anticorpi (Fig. 13.7). Diametrul inelului de precipitare este proporțional cu concentrația de antigen. Reacția este utilizată pentru a determina conținutul de imunoglobuline din diferite clase, componente ale sistemului complementului etc. în sânge.
Imunoelectroforeza- o combinație de electroforeză și imunoprecipitare: un amestec de antigeni este introdus în godeurile gelului și separat în gel prin electroforeză. Apoi, serul imun este introdus în șanțul paralel cu zonele de electroforeză, ai căror anticorpi, difuzând în gel, formează o linie de precipitare în punctul de contact cu antigenul.
Microscopia electronică imunitară- microscopia electronică a microbilor, cel mai adesea viruși, tratați cu anticorpi corespunzători. Virușii tratați cu ser imun formează agregate imunitare (microprecipitate). În jurul virionilor se formează o „corolă” de anticorpi, în contrast cu acidul fosfotungstic sau alte preparate dense electron-optic.
123. Reacția de precipitare într-un gel pentru determinarea toxigenității microorganismelor, mecanism, metode de formulare.
Reacția de precipitare (RP)- aceasta este formarea si precipitarea unui complex de antigen molecular solubil cu anticorpi sub forma de tulburare, numit precipitat. Se formează prin amestecarea antigenelor și anticorpilor în cantități echivalente; un exces al unuia dintre ele reduce nivelul de formare a complexului imun.
În 1946, J. Oudin a propus metoda simplă de difuzie, în care una dintre componentele reacției de precipitare, de obicei ser, se află într-un gel, iar cealaltă - antigen - este stratificat deasupra primului sub formă de soluție. .
Antigenul, difuzând în gel, formează linii albe de precipitare în el cu anticorpi, clar vizibili la iluminarea laterală. În 1948, J. Ouchterlonyu a dezvoltat o metodă și mai simplă și mai convenabilă de contra-difuzie bidimensională, permițând compararea directă a diferitelor antigene și seruri. Această metodă este, de asemenea, foarte valoroasă în studiul reacțiilor încrucișate.
Pentru a stabili reacția Ouchterlon, folosiți agar 1% preparat în soluție fiziologică, care se toarnă în vase Petri cu un strat de 0,5 cm. După întărire, în placa de agar se decupează găuri cu diametrul de 5-6 mm - una în centrul vasului, 4-5 - de-a lungul circumferinței la o distanță de 1-2 cm de cea centrală. Serul de precipitare diagnostic este turnat în godeul central și o soluție de antigeni omologi și comparabili este turnată în godeurile periferice. Rezultatele sunt înregistrate după 24, 48 și 72 de ore de incubare la temperatura camerei.
Anticorpii și antigenii difuzează unul spre celălalt, iar în zonele în care sunt create concentrațiile lor echivalente, se formează benzi de precipitare arcuite. Dacă benzile de precipitare care provin din două godeuri adiacente se îmbină, aceasta indică prezența mai multor componente antigenice în fluidul de testat. Reacția de contra-difuzie Ouchterlohn este adesea folosită pentru a determina toxigenitatea bacteriilor, cum ar fi difteria.
O altă dezvoltare a metodei de precipitare pe gel este imunoelectroforeza. Acest termen se referă la o metodă care combină separarea electroforetică a unui amestec de antigeni și contradifuzia Ouchterlon pe aceeași placă de gel de agar. Serul care precipită este turnat într-un canal tăiat în gel paralel cu direcția de separare electroforetică.
Liniile de precipitare formate în urma reacţiei au forma unor arce alungite în direcţia mişcării electroforetice a fracţiilor antigenului. Imunoelectroforeza face posibilă determinarea compoziției amestecurilor complexe de antigene solubile care conțin până la 30 de componente și, prin urmare, este o metodă de diagnosticare valoroasă.
Reacția de precipitare(RP) se numește precipitare dintr-o soluție de Ag (precipitinogen) atunci când este expus la ser imunitar (precipitină) și electrolit.
Folosind RP, este posibil să se detecteze antigenul în diluții de 1:100.000 și chiar 1:1.000.000, adică în cantități atât de mici care nu sunt detectate chimic.
Precipitinogenii sunt particule ultramicroscopice de natură proteică-PS: extracte din microorganisme, organe și țesuturi, material pat; produse de degradare a celulelor bacteriene, lizatele lor, filtratele. Precipitinogenii sunt rezistenți la căldură, așa că pentru a le obține materialul este fiert.
RP folosește Ag lichid transparent.
Serurile de precipitare sunt obținute de obicei prin hiperimunizarea iepurilor în cicluri de mai multe luni, injectându-le cu suspensii bacteriene, filtrate de culturi în bulion, autolizate, extracte sărate ale microorganismelor și proteine din zer.
Producție de RP Ascoli.Într-o eprubetă îngustă cu o cantitate mică de ser precipitat nediluat, ținându-l într-o poziție înclinată, același volum de Ag este stratificat încet de-a lungul peretelui cu o pipetă.
Pentru a evita amestecarea celor două lichide, eprubeta este așezată cu grijă vertical. Dacă reacția este pozitivă într-o eprubetă, la granița dintre ser și extractul studiat apare un inel alb-cenușiu după 5-10 minute. Reacția este însoțită în mod necesar de controale serice și antigen.
Reacția Ascoli este utilizată pentru a identifica antraxul, tularemia și Ag ciuma.
De asemenea, a găsit aplicație în medicina legală pentru a determina tipul de proteine, în special petele de sânge, în practica sanitară în identificarea falsării cărnii, peștelui, produse din făină, impurități din lapte. Dezavantajul acestui RP este instabilitatea precipitatului (inelului), care dispare chiar si la agitare usoara. Mai mult, nu poate fi folosit pentru a determina compoziţia cantitativă Ag implicate în formarea precipitatului.
Reacția de precipitare Ouchterlony. Reacția se efectuează pe vase Petri în godeurile unui gel de agar.
Gelul transparent bine spălat este folosit ca gel. Ag și serul sunt adăugate la gelul de agar, astfel încât godeurile care le conțin să fie la o anumită distanță. Difuzând unul față de celălalt și combinându-se unul cu celălalt, anticorpul și antigenul formează un complex imun sub forma unei dungi albe după 24-48 de ore.
În prezența unui precipitinogen complex, apar mai multe benzi. În acest caz, benzile de antigene înrudite serologic se îmbină împreună, iar benzile celor diferiți se intersectează, ceea ce face posibilă determinarea detaliilor structurii antigenice a substanțelor studiate.
Folosit pe scară largă pentru a diagnostica boli cauzate de viruși și bacterii care produc exotoxine.
3.Reacție de hemaglutinare indirectă (IRHA). Este utilizat pentru a detecta polizaharide, proteine, extracte de bacterii, micoplasme, rickettsia și virusuri, ale căror complexe imune cu aglutinine nu pot fi observate în RA clasică convențională, sau pentru a detecta anticorpi în serul pacientului la aceste substanțe foarte dispersate și microorganisme mici.
RNGA pentru serodiagnosticul bolilor infecțioase. Folosind RNGA pentru detectarea anticorpilor în serul pacienților, se prepară DIAGNOSTICUL ANTIGEN ERITROCITAR.
reacție de precipitare.
Pentru a face acest lucru, celulele roșii din sânge sunt tratate timp de 15 minute cu o soluție de tanin la o diluție de 1:20.000–1:200.000, ceea ce le conferă stabilitate și crește capacitatea de adsorbție. Apoi se amestecă cu un antigen cunoscut și se incubează timp de 2 ore la o temperatură de 37° C. Globulele roșii sensibilizate la antigen se spală de 2-3 ori cu soluție izotonică de clorură de sodiu și se adaugă la ser, se diluează și se toarnă în godeuri. a panourilor.
Martorul este o suspensie de eritrocite intacte și încărcate cu antigen, care sunt adăugate serurilor care dau evident reacții pozitive și negative.
Rezultatele reacției sunt luate în considerare la 2 ore după incubare într-un termostat și evaluate cu plusuri: „++++” - globulele roșii acoperă puțul sub forma unei umbrele cu margini zimțate; „–” – acumulare de globule roșii sub forma unui „buton”
Informații conexe:
Cauta pe site:
Reacția de precipitare inelară
Reacția de cuplare a inelului este una dintre cele mai simple metode serologice. Se realizează în tuburi înguste de precipitare. Mai întâi, o soluție limpede de antigen luată în mai multe diluții (1:2; 1:4; 1:8; 1:16) este turnată în mod egal în toate eprubetele.
Combinația de antigene și anticorpi are loc la limita de contact a reactivilor. Ca urmare a acestei interacțiuni, în cazurile pozitive (când antigenul se potrivește cu anticorpul), după un timp se formează un precipitat sub forma unui inel opalescent.
Reacția găsită aplicare largă V practică medicală pentru a detecta antigenul antraxului în lână, piele și carnea animalelor (reacția Ascoli); pentru detectarea altor agenți patogeni ai bolilor infecțioase în material patologic obținut de la pacienți sau în obiecte Mediul extern, precum și în examen medico-legal pentru a determina tipul de proteină, în special, proteine din sânge sau alte fluide biologice.
Imunodifuzia Ouchterlony
Reacția de precipitare poate fi efectuată într-un gel de agar.
Metoda se bazează pe faptul că particulele de antigene și anticorpi, datorită dimensiunilor lor diferite, difuzează în gel la viteze diferite și, ca urmare, se deplasează la distanțe diferite. Acest lucru face posibilă separarea sistemelor antigene individuale în cazurile în care acestea se află într-un amestec și, prin urmare, face posibilă studierea structurii antigenice a bacteriilor și a substanțelor proteice complexe, a serurilor și a țesuturilor animale.
vizuale şi metoda eficienta Precipitarea pe gel a fost sugerată de Ouchterlony.
Pe vase Petri se fac gauri mici cu agar, taiate la o oarecare distanta unele de altele. Antigenul este turnat într-una dintre ele, ser în altele. Componentele reacției difuzează în gel una către cealaltă și formează o linie vizibilă de precipitare unde antigenele se întâlnesc cu concentrații optime de anticorpi specifici acesteia. Deoarece reactivii difuzează concentric în afara godeurilor, pot fi efectuate teste multiple prin plasarea mai multor godeuri cu antigeni diferiți (sau diluții diferite ale aceluiași antigen) în jurul unui godeu de anticorp.
Reacția Ouchterlony face posibilă tragerea unei concluzii despre natura antigenului dintr-un ser cunoscut și, invers, dintr-un antigen cunoscut, se determină natura anticorpilor.
Avantajul metodei este că permite compararea componentelor antigenice ale amestecurilor complexe și evaluarea comunității sau diferențelor acestora. Pentru a compara comunitatea antigenelor, se prepară un agar cu godeuri: se toarnă antiser într-una, iar antigenele comparate sunt turnate în celelalte. Dacă antigenele sunt diferiți, atunci benzile de precipitare sunt situate diferit.
Imunoelectroforeza
În ultimii ani, metoda imunoelectroforezei a fost folosită pentru studii imunologice fine. Metoda a fost descrisă pentru prima dată de P.
Grabar și K. A. Williams în 1953. Este o combinație de electroforeză pe gel de agar pe plăci de sticlă cu imunodifuzie. În primul rând, se efectuează separarea electroforetică a antigenului, care este adesea un amestec de proteine sau alte molecule. Pentru a face acest lucru, antigenul este introdus într-un godeu pre-tăiat în agar, iar placa de agar este plasată pentru ceva timp într-o zonă de curent electric constant.
Din cauza viteze diferite Mișcarea moleculelor face ca antigenul să fie împărțit în părțile sale componente. După aceasta, serul imun precipitant este introdus într-un canal tăiat într-o direcție paralelă cu fluxul curent.
Antigenul și antiserul difuzează unul spre celălalt în gel.
Precipitare
Fiecare antigen dă naștere unei zone de precipitare în formă de arc cu anticorpii săi corespunzători. Numărul, poziția și forma acestor linii oferă o idee despre compoziția amestecului original de antigen.
Reacția de floculare
Metoda a fost propusă de Ramon în 1924.
Se bazează pe faptul că un amestec de toxină cu ser antitoxic în anumite condiții dă turbiditate și precipitare. În acest caz, reacția are loc mai devreme în acele eprubete în care cantitatea de antitoxină corespunde dozei care neutralizează complet această cantitate de toxină.
Prin urmare, dacă puterea toxinei este cunoscută, atunci cantitatea de antitoxină din serul de testare necunoscut poate fi determinată. Pentru a face acest lucru, pregătiți mai multe diluții ale serului de testat, adăugați cantități egale de o toxină cunoscută la fiecare diluție și apoi observați în care dintre eprubete are loc prima flocularea (turbiditatea soluției). Determinați floculația inițială. Apoi se face calculul.
De exemplu, este necesar să se determine concentrația de anticorpi anti-difteriei în serul de testat. Reacția folosește toxină difterice care conține 50 Lf în 1 ml (Lf este cantitatea minimă de toxină care este neutralizată de 1 unitate antitoxică (UA) de antiser.
Să presupunem că flocularea inițială a fost observată într-o eprubetă care conține 0,2 ml din acest ser și 2 ml dintr-o toxină cunoscută cu o activitate de 100 Lf (50 Lf x 2).
Deci 0,2 ml de ser au neutralizat această toxină. Prin urmare, 0,2 ml de ser conțin 100 AE, iar în 1 ml din acest ser concentrația de anticorpi corespunde la 500 AE (100 AE x 5).
Printr-o metodă similară, reacția de floculare poate fi utilizată în scopul opus - pentru a determina proprietățile de imunizare ale toxoizilor.
Acest lucru necesită un ser antitoxic standard.
Reacția de neutralizare
Reacția este utilizată în diagnosticul toxiinfecțiilor alimentare bacteriene pentru a determina toxine bacteriene din materialul de testat. În plus, poate fi folosit la examinarea anumitor obiecte din mediul extern pentru întreținere. bacterii patogene producerea de toxine, de exemplu, la testarea solului pentru prezența agenților patogeni de tetanos sau gangrenă gazoasă.
Se știe că toxina, atunci când este amestecată cu ser antitoxic omolog, nu își prezintă efect toxic, deoarece toxina este neutralizată. Reacția de interacțiune a unei toxine cu o antitoxină este, de regulă, strict specifică, prin urmare, pentru a efectua o reacție de neutralizare pentru a determina tipul de toxină, este necesar să existe seruri de diagnostic specifice fiecărui tip și tip de toxină. Un amestec de 2-3 seruri antitoxice sau mai multe poate fi utilizat simultan dacă este de așteptat prezența mai multor toxine în materialul de testat.
Reacția de neutralizare vă permite să determinați tipul și tipul de toxină a agentului patogen.
Materialul testat poate fi filtratul produselor alimentare care ar fi provocat otrăviri, spălări de la vasele în care se aflau aceste produse etc.
Toxina suspectată este mai întâi neutralizată. Pentru a face acest lucru, în eprubeta se adaugă un ser de diagnostic antitoxic cu materialul de testat (eprubetă experimentală) (conține anticorpi la toxina dorită); se adaugă un volum egal de soluţie fiziologică într-o altă eprubetă (martor).
După o incubare de scurtă durată, conținutul tuburilor este administrat la două grupuri de șoareci albi (experimental și martor).
Rezultatele reacției de neutralizare sunt luate în considerare imediat după moartea animalelor martor. În acest caz, faptul de supraviețuire a animalelor care au primit ser antitoxicîmpreună cu materialul de testat, indică prezența în acesta a unei toxine corespunzătoare serului administrat.
Avantajul reacției de neutralizare este fiabilitatea ridicată a rezultatelor obținute.
Cu toate acestea, în ceea ce privește sensibilitatea și viteza de obținere a unui răspuns, este inferior altor metode de cercetare.
Reacții de liză
Reacțiile de liză se numesc de obicei dizolvarea antigenelor corpusculare sub influența anticorpilor specifici pentru un anumit antigen în prezența complementului.
Din reacții imune, pe baza fenomenului de liză a bacteriilor și a altor antigene corpusculare, sunt utilizate în principal reacțiile de bacterioliză și hemoliză.
reacție de bacterioliză
Reacția are loc atât in vitro, cât și in vivo. Aceasta din urmă este cunoscută sub numele de reacția V.I. Isaev - Pfeiffer.
Acești oameni de știință au demonstrat că dacă porcușori de Guineea preimunizați cu antigeni holeric, apoi injectarea ulterioară în cavitatea abdominală a unei culturi foarte virulente de Vibrio cholerae nu provoacă infecția animalelor, deoarece cavitate abdominală Agentul patogen este dizolvat sub influența anticorpilor specifici.
Mai tarziu eu.
I. Mechnikov a dovedit că o dizolvare similară a Vibrio cholerae sub influența serului imun are loc într-o eprubetă dacă la componentele principale se adaugă ser proaspăt, o sursă de complement. Dizolvarea bacteriilor sub acțiunea anticorpilor specifici în prezența complementului se numește reacție de bacterioliză.
La stabilirea unei reacții de bacterioliză, se prepară mai întâi o serie de diluții de 10 ori ale serului de testare. Apoi, în fiecare eprubetă se adaugă aceeași cantitate (1-2 picături) de suspensie microbiană. Complementul este adăugat la amestec. După incubare la 37 °C, amestecul este inoculat din fiecare tub pe un mediu nutritiv pentru a determina prezența sau absența bacteriilor viabile.
Reacția poate fi utilizată pentru a determina anticorpi folosind un microorganism cunoscut sau pentru a determina tipul de microb folosind un ser imunitar de diagnostic.
ÎN munca practica Această reacție este rar folosită de bacteriologi, în principal pentru a diferenția holera și vibrioni asemănător holerei.
Reacția de hemoliză
Mecanismul hemolizei este similar cu mecanismul bacteriolizei.
Globulele roșii utilizate în reacție sunt antigenul. Sursa de anticorpi este serul antieritrocitar (de exemplu, dacă în reacție se folosesc eritrocite de oaie, atunci serul necesar cu anticorpi antieritrocitari specifici se obține de la iepuri imunizați cu eritrocite de oaie).
Serul sanguin de cobai este cel mai adesea folosit ca complement în reacțiile de liză, deoarece conține semnificativ mai mult complement decât serurile altor animale.
În cazurile în care anticorpii în prezența complementului distrug globulele roșii, hemoglobina iese din ele, iar amestecul de reacție dintr-o suspensie tulbure de globule roșii se transformă într-un lichid roșu transparent (sânge lacuit).
Această reacție se numește hemoliză. În practica de laborator, este folosit ca indicator al adsorbției complementului în reacția de fixare a complementului.
Informații conexe:
Cauta pe site:
Schema cursului: Subiectul și scurta istorie a dezvoltării microbiologiei. Proprietățile generale ale microorganismelor și poziția lor în natură. reacție de precipitare
Microbiologia veterinară și sarcinile acesteia
mir.zavantag.com > Biologie > Prelegere
1 … 7 8 9 10 11 12 13 14 15
| ^
RA a fost dezvoltat pentru prima dată de M. Gruber în 1896. Esența reacției este interacțiunea unui anticorp cu un antigen, având ca rezultat lipirea (aglutinarea) microbilor cu formarea de fulgi și bulgări vizibile cu ochiul liber. RA este utilizat pe scară largă pentru diagnostic serologic mulți infecții bacteriene(bruceloza, muca, salmoneloza, colibaciloza etc.) si pentru identificarea serologica a speciilor si tipurilor de microorganisme izolate. Există mai multe metode de stadializare a RA: eprubetă (volum), picurare (placă), picătură de sânge, reacție inelară cu lapte, reacție de hemaglutinare și variantele acesteia (RZGA, RNGA), testul antiglobulinei Coombs etc. ^ – în loc de ser se ia sânge. Se efectuează o reacție a plăcii. Pulloroza găinilor și curcanilor, micoplasmoza găinilor sunt diagnosticate. Reacția Coombs vă permite să identificați anticorpi incompleti. Acestea din urmă sunt monovalente și, prin urmare, inhibă formarea aglutinatului. Metoda se bazează pe utilizarea serului antiglobulinic, care servește ca intermediar pentru conectarea anticorpilor incompleti fixați pe antigenele corpusculare (eritrocite, bacterii). ^ – nu se aplică reacțiilor serologice și precise din punct de vedere diagnostic, dar vă permite să detectați antigenul - hemaglutinină și să stabiliți proprietăți hemaglutinante (capacitatea de a aglutina globulele roșii) în unele bacterii și micoplasme. RNGA– în ultimii ani a ocupat unul dintre locurile de frunte în serodinamică. Esența sa constă în faptul că moleculele proteice ale antigenului agentului patogen sau anticorpului corespunzător sunt pre-adsorbite pe eritrocitele tratate cu tanin ale unei oaie sau altui animal. Apoi se realizează o reacție prin amestecarea eritrocitelor sensibilizate cu serurile de sânge ale animalelor bolnave sau, în al doilea caz, cu antigenul studiat. Dacă există o specială în ser. Anticorpii împotriva acestui antigen (sau invers) provoacă aglutinarea globulelor roșii - o reacție pozitivă. Propus de R. Kraus în 1897. Precipitația este un fenomen observat în timpul interacțiunii dintre anticorpii precipitină și antigenul precipitinogen. Esența reacției este o modificare a dispersiei coloizilor antigen și precipitarea acestora sub influența anticorpilor specifici găsiți în serul imunitar. RP poate fi livrat în eprubete într-un mediu lichid (reacție circulară) sau într-un gel de agar (placă RP). Reacția de pricipitare inelă a fost propusă pentru prima dată de Ascoli (1910); este utilizată cel mai pe scară largă pentru diagnosticul antraxului. La conducere expertiza veterinara RP este o metodă de determinare a falsificării cărnii, făinii și a altor produse. Sens special Această reacție apare la examenul medico-legal la determinarea tipului de sânge. Utilizarea unei reacții de precipitare într-un mediu lichid nu permite, totuși, să se caracterizeze eterogenitatea antigenelor, de exemplu. cantitatea și concentrația de antigene din preparat. Aceste informații pot fi obținute prin plasarea RP într-un gel (de obicei, agar). Având viteza de mișcare, diverși antigeni ai medicamentului difuzează inegal, formând precipitate în grosimea gelului transparent în punctul de întâlnire cu anticorpul omolog. Localizarea și concentrarea liniilor de precipitină vor fi caracteristice fiecărei componente a preparatului antigenic, care servește drept criteriu pentru calitatea acestuia. Prin diluarea medicamentului, conținutul relativ de antigene din acesta poate fi caracterizat. Au fost dezvoltate mai multe metode de stadializare a RDP: metoda difuziei directe unidimensionale după Houdin (1946), metoda imunodifuziei radiale simple după Mancini (1963), metoda difuziei duble în gel de agar după Ouchterlony (1948). ), etc. ^
(RN) pe model toxine tetaniceși antitoxine. Esența RN constă în capacitatea anticorpilor omologi ai serului imun de a suprima (neutraliza) proprietățile infecțioase ale agentului patogen sau ale produselor metabolice ale acestuia. Pentru a stabili rezultatul reacției, animalele de laborator, CC și EC sunt infectate cu un amestec antigen-anticorp. Un indicator pozitiv al pH-ului este absența morții sistemelor de testare biologică. ÎN practica bacteriana RN este utilizat în diagnosticul enterotoxemiei anaerobe, botulismului etc. RN este efectuat pentru a detecta și titra toxine, toxoide sau antitoxine. Folosit pentru a detecta anticorpi în serul sanguin și pentru a detecta antigenul din materialul de testat (pentru bruceloză, mucusă, rickettsioză, tuberculoză etc.). Această reacție aparține reacției indirecte cu două sisteme. Are 5 componente:
Componentele 3,4,5 alcătuiesc sistemul de indicatori. Dacă antigenul și anticorpul serului de testare corespund între ele altul, apare un complex imun antigen-anticorp, care leagă și extrage complementul din mediul în care are loc reacția. În absența anticorpilor corespunzători antigenului din serul de testat, complexul specificat nu se formează - complementul rămâne liber. Deoarece acestea sunt procese invizibile, pentru a rezolva întrebarea ce sa întâmplat cu complementul, componentele sistemului hemolitic sunt introduse în eprubetă ca indicator - ser hemolitic + eritrocite. Dacă complementul este legat în sistemul bacteriologic, hemoliza eritrocitelor nu va avea loc, rezultatul este pozitiv - serul conține anticorpi. Prezența hemolizei servește ca indicator al prezenței complementului liber în sistemul bacteriologic, ceea ce este posibil numai în absența anticorpilor în serul de testare - rezultatul este negativ. RSC apare sub strictă relatii cantitative componente. Acest lucru se realizează prin titrarea lor preliminară (complementul și serul hemolitic sunt titrate în ziua reacției; antigenul microbian - o dată în 2-3 luni). Titrarea este determinarea celei mai mici cantități dintr-o anumită componentă într-o reacție pentru a efectua reacția; excesul sau deficiența înseamnă denaturarea rezultatelor. RDSC este o variantă a RSK, dar diferă prin aceea că prima fază a reacției se desfășoară timp de 16-18 ore la rece (40C), ceea ce crește sensibilitatea datorită adsorbției mai lungi a complementului de către complexul antigen-anticorp. |
7 8 9 10 11 12 13 14 15
Similar:
| Definiția conceptului „microbiologie ecologică” Microbiologie generală, studiind relațiile microorganismelor între ele, cu obiectele din mediu și macroorganismele |
Cele mai generale și fundamentale concepte care reflectă esențialul... Filosofia este o știință care studiază cel mai mult Dispoziții generale despre om, natură și cunoaștere |
||
| Plan Subiectul și metoda disciplinei „Relații economice internaționale”... Subiectul și metoda disciplinei „Relații economice internaționale” și istoria dezvoltării relațiilor economice internaționale |
Întrebări pentru examen la cursul „Psihologie juridică” Pentru studenți... Conceptul de psihologie juridică. Subiectul, obiectivele și istoria dezvoltării psihologiei juridice |
||
| 1. Subiectul și metoda istoriei doctrinelor politice și juridice > Subiectul... Acest lucru se datorează faptului că în cadrul acestei discipline juridice se studiază și se parcurge un anumit subiect - istoria originii... |
1.
Istoria filozofiei ca știință. Subiectul și metoda sa |
||
| Ministerul Educației și Științei din Republica Kazahstan Alianța Studenților... Acest regulament privind competiția republicană „Studentul Anului 2011” (denumit în continuare concurs) își definește scopurile și obiectivele, participanții... |
Definiția termenilor „microbiologie” și „microorganism” … |
||
| Întrebări pentru pregătirea testului la disciplina „conflictologie” Conflictologia ca știință: subiect, scopuri, obiective, probleme curente, semnificație în scena modernă dezvoltarea societatii |
Despre competiția regională de videoclipuri „K-role-k!” Dispoziții generale Prezentul Regulament definește scopurile, obiectivele, principiile Concursului, procedura de organizare și desfășurare a acestuia, procedura de participare și determinare... |
Adăugați un buton pe site-ul dvs.:
Materiale școlare
mir.zavantag.com
Reacția de precipitare
Precipitarea și aglutinarea sunt reacții destul de similare, care diferă în principal pe baza proprietăți fizice AG.
În primul caz, se prezintă în solubil, în al doilea - în forme corpusculare. Baza RP este formarea precipitatului în timpul reacției AG-AT. RP este foarte specific și sensibil.
Ingrediente de reacție:
1. AG solubil sau haptenă (precipititogen);
2. AT - precipitine (ser precipitant imun; obţinut prin imunizarea iepurilor cu soluţii adecvate de antigene);
Reacția de precipitare
soluție izotonică de clorură de sodiu sau gel de agar.
Metode de setare a RP:
1) RP în soluții - p.
precipitare inelară;
2) RP în gel.
Reacția de precipitare inelară se efectuează în tuburi de precipitare înguste în care se toarnă serul precipitat.
Apoi se toarnă o soluție de precipitatinogen. Dacă reacția este pozitivă, la interfața dintre ingrediente apare un inel de precipitare tulbure.Un exemplu de această metodă de stadializare a RP este reacția de termoprecipitare Ascoli, folosită pentru a detecta haptenul termostabil al agentului patogen antrax, extras din organele animalelor, piele, iar lâna prin extracție prin fierbere.Una dintre varietățile de RP în gel (reacția Ouchterlony) vă permite să determinați toxicogenitatea bacilul difteric folosind ser antitoxic.
Într-o cutie Petri cu mediu nutritiv Se pune o fâșie de hârtie de filtru înmuiată în ser antitoxic antidifteric și se inoculează cu culturile de testat sub formă de dungi perpendiculare pe fâșia de hârtie. Incubați la 37 PS timp de 24 de ore. În prezența unei culturi toxigenice se formează linii de precipitare la locul interacțiunii toxinei cu antitoxina.Reacția de precipitare în gel se numește imunodifuzie.
Adesea foreza într-un gel - imunoelectroforeză. Principiul metodei: antigenul studiat este fracţionat electroforetic. fracţiile rezultate se analizează prin dublă difuzie folosind antiser.
Testul Ascoli este efectuat pentru a diagnostica antraxul pentru a detecta antigenul bacililor antraxului. Pentru a efectua reacția de precipitare, trebuie să aveți: precipitinogen - haptenă B.
Antrahis (extract de țesut), precipitină (ser de antrax precipitat) și soluție salină.
Prepararea termoprecipitinogenului.
1. Se umple un balon de 8 ce conţine 1 g de piele zdrobită sau 1 ml de cultură B. antilgaz cu 10 ml de soluţie fiziologică.
2. Puneți balonul într-o baie de fierbere timp de 30-45 de minute.
3. Filtrați prin material de azbest. Filtratul trebuie să fie complet transparent. Pentru reacția de precipitare, filtratul este diluat de 100 de ori sau mai mult.
Stabilirea reacției de precipitare a inelului.
1) 0,3 ml de ser de precipitare, întreg sau diluat 1:5, 1:10, se toarnă într-un tub de precipitare.
2) Precipitinogenul este stratificat cu grijă de-a lungul peretelui eprubetei.Reacția este considerată pozitivă dacă la marginea celor două lichide se formează un inel tulbure de proteină precipitantă în cel mult 5-15 minute.
La configurarea reacției de precipitare, se folosesc următoarele controale:
a) antigen și soluție salină;
b) ser specific şi fizic.
c) antigen şi ser nespecific.
Nu trebuie să existe turbiditate în toate tuburile de control.Pentru reacția de precipitare se folosesc tuburi speciale de precipitare cu o înălțime de 40-60 mm și un diametru de 4-5 mm.Precipitarea în tuburile înguste are loc mult mai rapid și apare mai clar decât în tuburile obișnuite, acestea sunt bine spălate și uscate, astfel încât paharul lor să fie complet transparent și uscat.
În reacția de precipitare se precipită un complex imun specific, constând dintr-un antigen solubil (lizat, extract, haptenă) și un anticorp specific în prezența electroliților.
Inelul tulbure sau precipitatul format ca urmare a acestei reacții se numește precipitat. Această reacție diferă de reacția de aglutinare în principal prin dimensiunea particulelor de antigen.
Reacția de precipitare este utilizată de obicei pentru determinarea antigenului în diagnosticul unui număr de infecții (antrax, meningită etc.); în medicina legală - pentru a determina speciile de sânge, spermatozoizi etc.; în studii sanitare și igienice - la stabilirea falsificării produselor; cu ajutorul ei se determină relația filogenetică dintre animale și plante. Pentru reacție aveți nevoie de:
1. Anticorpi (precipitine) - ser imunitar cu un titru ridicat de anticorpi (nu mai mic de 1:100.000). Titrul serului precipitant este determinat de cea mai mare diluție a antigenului cu care reacționează. Serul este folosit de obicei nediluat sau diluat 1:5 -1:10.
2. Antigen - substanțe dizolvate de natură proteică sau lipoid polizaharidă (antigene și haptene complete).
3. Soluție izotonică.
Principalele metode de realizare a reacției de precipitare sunt: reacția de precipitare în ciclu și reacția de precipitare în agar (gel).
Atenţie! Toate componentele implicate în reacția de precipitare trebuie să fie complet transparente.
Reacția de precipitare inelară. Folosind o pipetă Pasteur, adăugați 0,2 - 0,3 ml (5-6 picături) de ser în tubul de precipitare (serul nu trebuie să ajungă pe pereții tubului). Antigenul din același volum este stratificat cu grijă pe ser, turnându-l cu o pipetă Pasteur subțire de-a lungul peretelui eprubetei. Eprubeta este ținută în poziție înclinată. Când sunt stratificate corespunzător, ar trebui să existe o graniță clară între ser și antigen. Cu grijă, pentru a nu amesteca lichidul, puneți eprubeta într-un suport. Dacă reacția este pozitivă, se formează un „inel” tulbure - un precipitat - la interfața antigenului și anticorpului.
Reacția de precipitare în agar(gele). Particularitatea reacției este că interacțiunea dintre antigen și anticorp are loc într-un mediu dens, de exemplu. gel. Precipitatul rezultat dă o dungă tulbure în grosimea mediului. Absența unei benzi indică o discrepanță între componentele reacției. Această reacție este utilizată pe scară largă în cercetarea biomedicală, în special în studiul formării toxinelor în agentul cauzal al difteriei.
Reacția de liză (citoliza imună)
Liza imună- aceasta este dizolvarea celulelor sub influența anticorpilor cu participarea obligatorie a complementului. Pentru reacție aveți nevoie de:
1. Antigenul- microbi, globule roșii sau alte celule.
2. Anticorp(lizina) - ser imunitar, mai rar ser pacient. Serul bacteriolitic contine anticorpi implicati in liza bacteriilor; hemolitic - hemolizine care favorizează liza globulelor roșii; pentru liza spirochetelor este nevoie de spirochetolysins, cell-itolisins etc.
3. Completa. Serul de cobai conține cel mai mult complement. Acest ser (un amestec din mai multe animale) este de obicei folosit ca complement.
4. Soluție izotonică.
reacție de precipitare.
| Numele parametrului | Sens |
| Subiect articol: | reacție de precipitare. |
| Rubrica (categoria tematica) | Educaţie |
Reacția de precipitare (RP) - precipitarea unui antigen solubil sub acțiunea anticorpilor în prezența unui electrolit. Efect de reacție vizibil (fenomen de precipitare) – tulbureala (formarea unui inel sau sediment tulbure - precipitat).
RP este utilizat pentru a detecta un antigen necunoscut într-un număr de cazuri boli infecțioase: pentru antrax, tularemie, meningită, variolă. În medicina legală se folosește pentru determinarea speciilor de sânge și spermă; în studii sanitare şi igienice – pentru a determina falsificarea produselor alimentare. RP este foarte sensibil și poate detecta antigenul la diluții de 1:1.000.000 și 1:10.000.000.
Componentele reacției de precipitare.
1. Antigen (precipitinogen) - Acesta este un antigen de natură moleculară, situat într-o stare fin dispersată (solubilă). Precipitinogeni - diverse lizate sau extracte tisulare etc.
Postat pe ref.rf
Precipitinogenul diferă de aglutinogen prin dimensiunea particulelor de antigen. Aglutinogen Are dimensiunile celulelor(acestea nu sunt celule întregi distruse), ci dimensiunile precipitatogen pe măsura dimensiuni moleculare(acestea sunt proteinele și complexele lor cu carbohidrați sau lipide). Soluție de precipitatogen transparent.
2. Anticorpi (precipitine) se găsesc în serul din sânge uman sau în serurile de precipitare a diagnosticului imun care conțin anticorpi cunoscuți.
3. Electrolit– soluție izotonică de clorură de sodiu.
Obținerea precipitinogenului.
Se obține prin măcinarea materialului și extragerea antigenelor proteice din acesta prin fierbere sau prin alte metode.
Exemple de precipitinogeni: lizate sau extracte din diverse organe și țesuturi, ser de sânge străin (serul este soluţie, în primul rând, diverse proteine), filtrate de culturi în bulion de microbi, extracte sărate de microbi, autolizate etc.
Obținerea serurilor precipitante.
Obținut prin hiperimunizarea iepurilor cu precipitinogeni corespunzători. Astfel de seruri conțin anticorpi la acei precipitinogeni cu care iepurii au fost imunizați.
Exemple de seruri precipitante: ser de antrax precipitant(conține anticorpi la antigenele antraxului), ser antimeningococic precipitant(conține anticorpi împotriva antigenelor agentului cauzal al meningitei) etc.
Titrul ser de precipitare - cea mai mare diluție de precipitinogen la care serul dă încă o reacție de precipitare.
Metode de configurare a RP.
1. Reacția de precipitare în inel – se efectuează în tuburi speciale de precipitare (diametru - 0,4-0,5 cm, înălțime - 7-8 cm). În eprubetă se adaugă 0,2 - 0,3 ml de ser precipitant și aceeași cantitate de precipitanogen este stratificată cu grijă de-a lungul peretelui cu gura lungă a unei pipete Pasteur. În continuare, cu grijă de la pozitie orizontala Eprubetele sunt așezate vertical.
Contabilizarea rezultatelor reacțiilor realizată prin apariția unui inel alb la interfața antigen-anticorp. Dacă reacția este pozitivă se observă formarea unui astfel de inel. În acest caz, antigenul se potrivește cu anticorpul și se leagă.
Dacă se fierbe și se filtrează extracte apoase organe și țesuturi, atunci reacția se numește de obicei reacție precipitații termice (de exemplu, la diagnosticarea antraxului).
2. Reacția de precipitare în gel - se efectuează în vase Petri sau pe lame de sticlă, unde se așează un strat de gel de agar. Pe măsură ce gelul se întărește, sunt tăiate godeuri în care sunt plasați antigene sau anticorpi, sau ambele. Distinge 2 metode RP în gel:
o metodă imunodifuzie simplă (radială).: una dintre componentele reacției imune (antigen sau anticorp) se pune în godeu, iar cealaltă componentă se amestecă cu agar; cu rezultat pozitiv (antigenul corespunde unui anticorp) în jurul godeului se formează inel precipitat ;
b) metoda imunodifuzie dublă: atât anticorpul cât și antigenul sunt plasați în godeuri separate, difuzează unul spre celălalt în gelul de agar; cu rezultat pozitiv unde se întâlnesc anticorpii și antigenii linii de precipitații.
Exemplu de RP în gel este reacția de imunodifuzie dublă Ouchterlony la diagnosticarea difteriei
Imunoelectroforeza - Aceasta este o metodă care combină metoda electroforezei și reacția de precipitare. Un amestec de antigeni (de exemplu, proteine serice) este separat într-un gel folosind electroforeză. Apoi, pentru a găsi și identifica proteina de interes (antigen necunoscut), se folosește un ser precipitant de diagnosticare care conține anticorpi la acea proteină (anticorp cunoscut). Pentru a face acest lucru, serul de diagnostic este introdus în șanțul paralel cu proteinele. Dacă printre proteine există una care corespunde anticorpului găsit în ser, atunci linii de precipitații.
reacție de precipitare. - concept și tipuri. Clasificarea și caracteristicile categoriei „Reacția de precipitare”. 2017, 2018.
