Color y transparencia del medio terminado. Reacción en cadena del uranio y reacción en cadena de sensaciones.

119. Reacciones de Pandi y Nonne - Apelt

Como reactivo para la reacción de Pandi se utiliza un líquido transparente sobrenadante, que se obtiene agitando vigorosamente 100 g de ácido carbólico líquido con 1000 ml de agua destilada. Para obtener sedimentos y líquido claro(reactivo), esta mezcla se coloca primero en un termostato durante 3 a 4 horas y luego se mantiene a temperatura ambiente durante 2 a 3 días.

Se coloca un vaso de reloj o portaobjetos sobre papel oscuro y se le aplican 2-3 gotas del reactivo, luego 1 gota fluido cerebroespinal. Si la gota se vuelve turbia o aparece una turbidez filamentosa a lo largo de su periferia, la reacción se considera positiva.

Para llevar a cabo la reacción de Nonne-Apelt se necesitan tubos de ensayo limpios, una solución saturada de sulfato de amonio, agua destilada y papel oscuro. Se prepara una solución saturada de sulfato de amonio. de la siguiente manera: Se colocan 0,5 g de sulfato de amonio neutro químicamente puro en un matraz de 1000 ml, luego se vierten 100 ml de agua destilada calentada a 95 ° C, se agita hasta que la sal se disuelva por completo y se deja durante varios días a temperatura ambiente. Después de 2-3 días, se filtra la solución y se determina el pH. La reacción debe ser neutral.

Se vierten 0,5-1 ml de la solución resultante en un tubo de ensayo y se añade cuidadosamente la misma cantidad de líquido cefalorraquídeo a lo largo de la pared del tubo de ensayo. Después de 3 minutos, evalúe el resultado. La aparición de un anillo blanquecino indica una reacción positiva. Luego se agita el contenido del tubo de ensayo y se determina el grado de turbidez comparándolo con un tubo de ensayo que contiene agua destilada. Los resultados de la reacción se evalúan sobre un fondo de papel negro.

120. Bordet - reacción de Zhangou

Una valiosa prueba de diagnóstico cuando se detecta gonorrea crónica entre las personas que padecen enfermedades crónicas enfermedades inflamatorias sistema genitourinario. Según la literatura, cuando uso correcto Este método detecta hasta el 80% de los casos de gonorrea que no fueron detectados mediante métodos bacterioscópicos o bacteriológicos.

La reacción de Bordet-Zhang puede ser un rastro de una enfermedad previa o del uso de una gonovacina con fines diagnósticos (método de provocación inmunobiológica) y terapéuticos (tratamiento de procesos inflamatorios crónicos del sistema genitourinario en mujeres según Baksheev). objetivo. Por lo tanto, antes de realizarlo, es necesario recopilar cuidadosamente una anamnesis,

La reacción también puede ser falsa positiva cuando se administra leche, utilizada en fines medicinales pirógeno.

En consecuencia, una reacción positiva de Bordet-Giangu no sirve como prueba indiscutible de la presencia infección gonocócica, al igual que uno negativo, no puede ser evidencia de la ausencia de gonorrea. Sin embargo resultados positivos Durante un largo período de tiempo, el médico debe concentrarse en encontrar la fuente de la infección gonocócica en el cuerpo.

Como antígeno se utiliza un cultivo de gonococos muertos que contiene entre 3 y 4 mil millones de cuerpos microbianos en 1 ml. El antígeno gonocócico se conserva con una solución de formaldehído y se vierte en ampollas de 1 a 5 ml. Las ampollas sin abrir son adecuadas durante 6 meses, las abiertas se pueden almacenar durante 2-3 días en un tubo esterilizado en el refrigerador a una temperatura de 3-5 ° C.

La reacción de fijación del complemento de Bordet-Giangu se lleva a cabo de manera similar a la reacción de Wasserman (ver núm. 121). El antígeno gonocócico se diluye con una solución isotónica de cloruro de sodio según el título indicado en la etiqueta de la ampolla. La reacción se lleva a cabo con mayor frecuencia en un volumen de 2,5 ml, por lo tanto, a 0,5 ml de suero problema diluido 1:5 se añaden 0,5 ml de antígeno diluido a cada tubo. Los 1,5 ml restantes son 1 ml de sistema hemolítico y 0,5 ml de complemento.

La reacción se considera positiva si se expresa en grados variables retraso de la hemólisis en el suero problema. En control (suero sanguíneo gente sana) se observa hemólisis completa.

121. Reacción de Wasserman

El suero sanguíneo de pacientes con sífilis contiene reaginas y anticuerpos. Las reaginas tienen la propiedad de combinarse con el antígeno de cardiolipina. Los anticuerpos específicos contra Treponema pallidum se combinan con antígenos específicos. Los complejos antígeno-anticuerpo resultantes son absorbidos por el complemento añadido a la reacción. La indicación se realiza mediante la introducción de un sistema hemolítico (glóbulos rojos de oveja + suero hemolítico).

Para llevar a cabo la reacción necesitas:

a) solución isotónica de cloruro de sodio;

b) antígenos ultrasónicos treponémicos (conservados en el frigorífico a +4°C) y cardiolipina (conservados a temperatura ambiente);

c) complemento, que es suero sanguíneo obtenido de punción cardíaca de 5 a 10 cobayas sanos. Se puede conservar en el frigorífico durante 2 meses, siempre que
enlatado con solución al 4% ácido bórico y solución de sulfato de sodio al 5%;

d) hemolisina: suero sanguíneo hemolítico de conejo inmunizado con eritrocitos de oveja con diferentes títulos (conservado en el frigorífico a 4 °C);

e) glóbulos rojos de oveja obtenidos por punción vena yugular. La sangre se recoge en un frasco esterilizado con bolas de vidrio (para mezclar) y se agita durante 15 minutos. Los coágulos de fibrina se separan mediante filtración a través de una gasa esterilizada. La sangre desfibrada se puede almacenar en el refrigerador hasta por 5 días.

A veces es necesario un almacenamiento más prolongado de sangre de oveja y, por lo tanto, se conserva con un conservante especial (6 g de glucosa, 4,5 g de ácido bórico, 100 ml de solución isotónica de cloruro de sodio), que se hierve en un baño de agua durante 20 minutos al día durante 3 días Para 100 ml de sangre de oveja desfibrinada se necesitan 15 ml de conservante. La sangre desfibrada así conservada se conserva en el frigorífico.

El experimento principal está precedido por varias etapas.

un paciente de vena cubital tomar 5-10 ml de sangre y procesar el suero. En los niños, la sangre se puede extraer de la vena temporal o de una incisión en el talón. La punción se realiza con instrumentos esterilizados, una jeringa y una aguja.
prelavado con solución isotónica de cloruro de sodio.

La sangre para investigación se extrae con el estómago vacío; 3-4 días antes del estudio, el paciente tiene prohibido consumir drogas narcóticas, preparaciones de digital, tomar alcohol.

El estudio no debe realizarse en pacientes con temperatura elevada cuerpo, después de una lesión, cirugía, anestesia, enfermedades infecciosas recientes, en mujeres durante la menstruación, en mujeres embarazadas (en los últimos 10 días de embarazo), en mujeres en trabajo de parto (en los primeros 10 días después del nacimiento), así como en recién nacidos ( en los primeros 10 días de vida).

La sangre resultante en un tubo esterilizado se coloca en un termostato a una temperatura de 37 °C durante 15 a 30 minutos. El coágulo resultante se separa de las paredes del tubo de ensayo con una varilla de vidrio esterilizada y se coloca en el refrigerador durante un día. El suero transparente separado (encima del coágulo) se aspira con una pipeta Pasteur utilizando una pera de goma o se vierte con cuidado en otro tubo estéril y se inactiva en un baño de agua durante 30 minutos a una temperatura de 56 °C. El suero preparado de esta manera para el experimento se puede conservar en el frigorífico hasta 5-6 días.

Los antígenos se diluyen según el método y el título indicados en la etiqueta.

Preparar un sistema hemolítico. Para ello, se centrifuga sangre de oveja desfibrinada o glóbulos rojos en la cantidad necesaria para la reacción, se separa cuidadosamente el plasma y se lava el sedimento con 5-6 volúmenes de solución isotónica de cloruro de sodio hasta que el líquido sobrenadante se vuelve completamente incoloro. A partir del sedimento se prepara una suspensión de glóbulos rojos al 3% en una solución isotónica de cloruro de sodio a título triple.

Se mezclan rápidamente una solución de suero hemolítico y una suspensión de eritrocitos de oveja y se colocan en un termostato durante 30 minutos.

El complemento seco se diluye con una solución isotónica de cloruro de sodio en una proporción de 1:10, suero humano normal inactivado - 1:5.

El complemento se titula en 30 tubos colocados en una gradilla de 10 tubos en 3 filas. En dos filas se titula en presencia de dos antígenos, en la tercera, con una solución isotónica de cloruro de sodio. Cinco tubos son tubos de control: dos para los dos antígenos correspondientes y uno para la monitorización del complemento, suero hemolítico y solución isotónica de cloruro de sodio para hemotoxicidad; complételos de la siguiente manera:

Los tubos de ensayo se colocan en un termostato durante 45 minutos y luego se controlan. No debe haber hemólisis en ningún tubo de ensayo.

Se vierte complemento en una dilución de 1:10 en 10 tubos de la 1.ª fila de la gradilla en dosis: 0,1, 0,16, 0,2,0,24, 0,3, 0,36,0,4,0,44, 0,5 y 0,55 ml. Agregue una solución isotónica de cloruro de sodio hasta 1 ml al contenido de cada tubo de ensayo y mezcle bien. Se transfieren 0,25 ml de la mezcla de cada tubo de ensayo a los tubos de ensayo correspondientes de la segunda y tercera fila. Se agita la gradilla con los tubos, se añaden 0,5 ml de sistema hemolítico a la 3.ª fila de tubos, se agita nuevamente y se coloca en un termostato a 37 °C durante 45 minutos. Se vierte suero sanguíneo humano normal, diluido con una solución isotónica de cloruro de sodio en una proporción de 1:5, en los 30 tubos de ensayo de 0,25 ml cada uno.

Antígeno I (ultrasonido treponémico), diluido por título con solución isotónica de cloruro de sodio, se añaden 0,25 ml a 10 tubos de ensayo de la 1ª fila; antígeno II (cardiolipina en la misma dilución y en la misma cantidad) - en 10 tubos de la segunda fila. Se vierten 0,25 ml de solución isotónica de cloruro de sodio en 10 tubos de ensayo de la 3ª fila y se vierten los 0,25 ml restantes. Después de la incubación en un termostato, se añaden 0,5 ml de sistema hemolítico a 20 tubos (primera y segunda fila), se agitan y se vuelven a colocar en el termostato durante 45 minutos.

Después de 45 minutos, se determina la dosis de trabajo del complemento, es decir, su título con un aumento del 15-20%.

Se considera el título del complemento. cantidad minima, provocando una hemólisis completa de los glóbulos rojos de oveja en presencia de antígeno y suero sanguíneo humano normal.

El experimento principal consiste en que cada suero inactivado de prueba, diluido en una proporción de 1: 5 con una solución isotónica de cloruro de sodio, se vierte en 0,25 ml en tres tubos de ensayo. Añadir 0,25 ml de antígeno I al primer tubo de ensayo, 0,25 ml de antígeno II al segundo y 0,25 ml de solución isotónica de cloruro de sodio al tercero (control). También se añaden a todos los tubos de ensayo 0,25 ml de complemento diluido hasta la dosis de trabajo. Todos los tubos se colocan en un termostato durante 45 minutos, luego se les agregan 0,5 ml de sistema hemolítico, se agitan y se colocan en un termostato durante 45-50 minutos. El resultado del experimento se registra después del inicio de la hemólisis completa en tubos de control.

Los resultados de la reacción se evalúan como ventajas: retraso completo de la hemólisis (reacción muy positiva) ++++, significativo (reacción positiva) +++, parcial (reacción débilmente positiva) ++, insignificante (reacción dudosa) - ±, sin retraso de la hemólisis (reacción negativa) - .

En Método cuantitativo Para llevar a cabo la reacción de Wasserman, el experimento se realiza con volúmenes decrecientes de suero diluidos con una solución isotónica de cloruro de sodio.

Esquema del experimento principal de la reacción de Wasserman.

Es difícil sobreestimar la importancia clínica de la reacción de Wasserman. Se realiza en todos los pacientes antes del tratamiento, pero significado especial ella tiene en sífilis latente, fracaso órganos internos y sistema nervioso.

Los resultados de la reacción de Wasserman caracterizan la calidad del tratamiento brindado, lo que da motivos para eliminar a los pacientes tratados del registro dentro de un cierto período de tiempo.

En la sífilis primaria, la reacción de Wasserman suele ser positiva al final de la sexta semana desde el momento de la infección; con sífilis secundaria fresca es positivo en casi el 100% de los casos, con sífilis secundaria recurrente, en 98-100%; terciario activo - en 85%; terciario oculto - en el 60% de los casos.

La reacción de Wasserman se lleva a cabo dos veces para todas las mujeres embarazadas, pacientes con enfermedades somáticas, nerviosas, mentales y Enfermedades de la piel, así como poblaciones decretadas. Al mismo tiempo, los resultados de reacciones positivas y débilmente positivas deben tratarse de manera crítica, ya que pueden ocurrir al final del embarazo y después del parto, con hipertiroidismo, malaria, lepra, caries. tumor maligno, enfermedades infecciosas, colagenosis, etc. Por lo tanto, si hay manifestaciones clínicas En primer lugar, se deben tener en cuenta sus enfermedades, junto con los datos de la bacterioscopia.

Al mismo tiempo, existen factores que pueden distorsionar la verdadera naturaleza de los resultados obtenidos de la reacción de Wasserman: material de vidrio de laboratorio mal lavado (rastros de ácido y álcali en los tubos de ensayo), almacenamiento prolongado de sangre extraída para investigación, consumo de grasas y alcohol por parte de los pacientes antes del examen, período de menstruación, etc.

En todos los casos, es aconsejable realizar un examen completo del paciente, que incluya, además de la reacción de Wasserman, también RIBT (ver 122, 123, 124), etc.

122. Reacción de Sachs-Vitebsky (citocólica)

Se utiliza para detectar la sífilis. Se basa en la formación de un precipitado al mezclar el suero sanguíneo del paciente con un antígeno.

Para preparar el antígeno, se limpian los músculos de varios corazones de bovinos de tendones, fascias y grasa, se muelen en una picadora de carne y se extraen con un volumen cinco veces mayor de alcohol etílico al 96% durante 15 días con agitación diaria de 20 minutos. El extracto resultante se evapora al baño maría en una taza de porcelana al vacío. Al residuo (una masa de lipoides de color amarillo brillante) se le añade alcohol etílico caliente al 96% en una cantidad de 1/3 del volumen tomado para la extracción muscular.

El extracto se mantiene durante 3 días a temperatura ambiente, se filtra (en agua fría) y añadir una solución de colesterol cristalino al 0,3-0,6%, dependiendo de los resultados de la titulación con sueros positivos y negativos. Guarde el antígeno citocólico a temperatura ambiente en ampollas selladas o tubos tapados.

Metodología. Se añade rápidamente 1 ml de antígeno citocólico a 2 ml de solución isotónica de cloruro de sodio y se deja a temperatura ambiente durante 15 minutos hasta que aparezcan escamas. Añadir 0,1 ml de emulsión antigénica a 0,2 ml de suero inactivado en un tubo de ensayo, agitar durante 3 minutos y dejar actuar 30 minutos, después de lo cual se añade 1 ml de solución isotónica de cloruro de sodio.

Agregue 1,2 ml de solución isotónica de cloruro de sodio y 0,1 ml de emulsión de antígeno al tubo de control con antígeno. No debe haber escamas en el control. Los resultados de la reacción se tienen en cuenta visualmente o con lupa y se designan, según la cantidad de escamas que caen, con ventajas (++++, +++, ++). Si la reacción es negativa, no se forman escamas, pero el contenido del tubo puede volverse ligeramente opalescente.

En 1931, P. Sachs y E. Witebsky propusieron una modificación de esta técnica, que consiste en diluir el antígeno en dos fases: añadir 2 partes de solución isotónica de cloruro de sodio a 1 parte del antígeno, mantener a temperatura ambiente durante 5 minutos y agregar otras 9 partes de solución isotónica de cloruro de sodio. También se recomienda diluir el antígeno con una solución de cloruro de sodio al 2%, lo que, según los autores, aumenta la sensibilidad de la reacción. También es posible una modificación cuantitativa de la reacción con dilución de suero (1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64, etc.).

La reacción es bastante sensible, tarda poco tiempo (aproximadamente 1 hora) y sus resultados se leen inmediatamente.

123. Reacción de inmovilización de Treponema pallidum (RIBT)

Mediante una reacción, se detectan anticuerpos y complemento que inmovilizan a Treponema pallidum en el suero sanguíneo de pacientes con sífilis.

En la sífilis primaria, la RIBT es predominantemente negativa, en la secundaria, positiva en el 92-96% de los casos, en la terciaria, en el 92-100%, en la sífilis del sistema nervioso y congénita, en el 86-89% de los casos.

Se observaron resultados positivos de RIBT en sarcoide, eritematosis, diabetes, tumores malignos, hepatitis viral, cirrosis hepática, malaria, lepra, mononucleosis infecciosa, algunas enfermedades de los países cálidos (pinta, pian, etc.).

El antígeno es una suspensión de treponema pálido extraída de los testículos de un conejo infectado con sífilis introduciendo en el testículo 0,75-1 ml de una suspensión de treponema pálido en una solución isotónica de cloruro de sodio (50 animales por campo de visión).

El material del testículo debe tomarse entre 6 y 8 días después de que el animal esté infectado. Antes de tomar el antígeno, se mata al conejo mediante hemorragia (punción cardíaca o Arteria carótida). El tejido testicular se tritura y se llena con suero sanguíneo de un conejo sano, se diluye con una solución isotónica de cloruro de sodio, se agita durante -30 minutos y luego se centrifuga durante 10 minutos (1000 rpm). El líquido sobrenadante se examina microscópicamente. Debe haber al menos entre 10 y 15 Treponema pallidums en cada campo de visión.

Se prepara el complemento de la manera habitual de la sangre de cobayas.

Para realizar RIBT se necesitan: 1,2 ml de solución de gelatina al 0,2%, 2,8 ml de solución de albúmina al 5%, 1,6 ml de suspensión de Treponema pallidum; El pH del ambiente es 7,2. A esta mezcla se le añaden 0,15 ml de complemento (cóctel). Paralelamente se realizan dos pruebas: con complemento activo (experimento) y reactivo (control).

Los melangeurs se llenan con el suero problema hasta la marca “1”, luego con un cóctel hasta la marca “2” y se cierran con un anillo de goma esterilizado.

Al mismo tiempo, se lleva a cabo una reacción similar con sueros claramente positivos y claramente negativos.

Las melangeurs se numeran y se colocan en un termostato a una temperatura de 35 °C durante 18 a 20 horas, tras lo cual se retiran del termostato por parejas (experimento - control) y se vierte el contenido en los tubos de ensayo correspondientes. Se aplican 2 gotas sobre un portaobjetos de vidrio: a la izquierda está el experimento, a la derecha está el control, se cubre con un cubreobjetos y se coloca el microscopio en un campo de visión oscuro.

Primero, se estudian los resultados del control: se determina el porcentaje de Treponema pallidum móvil e inmóvil. Fórmula de cálculo: X = (A - B)/A * 100, donde A es el número de treponema pálido móvil en el control; B - el número de treponemas pálidos móviles en el experimento.

Ejemplo: (24 - 19) / 24 * 100 = 21%.

Evaluaciones de resultados de RIBT: menos del 20% - negativo. 21-30% - dudoso, 31-50% - débilmente positivo, más del 50% - positivo.

Antígeno, complemento y auxiliar, indicador o sistema hemolítico: suero hemolítico y eritrocitos de oveja.

Si se forma un complejo antígeno + anticuerpo específico en el primer sistema, entonces el complemento se adsorbe (se combina con este complejo) y no se produce hemólisis en el segundo sistema.

La reacción requiere:

1. Suero de prueba, que se obtiene de la sangre extraída mediante punción de la vena cubital del paciente. Después de la coagulación de la sangre, el suero se aspira en un tubo separado y se inactiva durante 30 minutos a 56 °C en un baño de agua.

2. Antígeno: una suspensión de gonococos muertos.

3. Los glóbulos rojos de oveja se obtienen a partir de sangre desfibrinada recogida de forma esterilizada. Se lavan centrifugando 3 veces con nuevas porciones de solución salina. En la reacción se utiliza una suspensión de glóbulos rojos al 3%.

4. El suero hemolítico se prepara previamente inmunizando conejos con glóbulos rojos de oveja. Antes de su uso, se titula el suero.

5. Complemento - suero fresco de cuy. Se succiona sangre del corazón del conejillo de indias con una jeringa y, después de la coagulación, se separa el suero. Antes del experimento, se titula la dosis de trabajo de complemento. Para ello, se toma la dilución básica del complemento 1:10 y se vierte en tubos de ensayo de 0,1 a 0,5, después de lo cual el volumen en cada tubo se ajusta a 1,5 ml con solución salina.

Al mismo tiempo, se prepara un sistema hemolítico: diluido en suero hemolítico de triple título + suspensión al 3% de eritrocitos de oveja. Ambos ingredientes se colocan en diferentes volúmenes y se mantienen en un termostato durante 30 minutos (sensibilización de la mezcla), después de lo cual se añade 1 ml de la mezcla a tubos de ensayo y se coloca en un termostato durante 30 minutos. 2 tubos de ensayo sirven como control:

1. 1 ml de sistema hemolítico + 1,5 ml de solución fisiológica;

2. 0,5 ml de complemento 1:10 + 0,5 ml de suspensión de glóbulos rojos + 1,5 ml de solución fisiológica.

El título del complemento es la cantidad mínima en la que todavía se produce hemólisis. Para preparar la reacción, se toma una dosis de trabajo de complemento, aumentada con respecto al título en un 20-25%, es decir, generalmente la cantidad de complemento que está presente en el penúltimo tubo de ensayo con hemólisis. Es necesario aumentar la dosis de complemento porque en la reacción la actividad del complemento puede quedar algo suprimida por otros ingredientes de la reacción (antígeno, suero).
43) RSK Wasserman

Colocado para el diagnóstico de sífilis con el fin de detectar anticuerpos, así como para determinar la efectividad. terapia especifica. Se basa en el principio de la reacción de fijación del complemento de Bordet-Gengou. Una diferencia significativa entre la reacción de Wasserman es la inespecificidad del antígeno: extractos lipoides de órganos normales animales

Para realizar la reacción de Wasserman es necesario contar con el suero del paciente, diagnósticos, antígenos de reacción cruzada N° 1, N° 2, complemento, suero hemolítico, glóbulos rojos de oveja, salina.

Diagnosticum No. 1: específico, treponémico.

Diagnosticum No. 2 - inespecífico, antígeno de cardiolipina, que son extractos de corazón de bovino altamente purificados con una composición química constante de lipoides. Lipoides, por composición química están próximos a los lipoides de Treponema pallidum, por lo que, aunque no son específicos, fijan anticuerpos contra la espiroqueta.

Estos antígenos se producen de forma centralizada y se utilizan diluidos en la reacción según el título indicado en la etiqueta.

Simultáneamente con el experimento principal, se colocan 2 controles: con sueros obviamente negativos y con sueros obviamente positivos.

Configurando el experimento principal

Primero, se vierte suero problema inactivado y diluido 1:5 en 4 tubos de ensayo. Luego se vierten antígenos en 2 tubos de ensayo (No. 1, No. 2) y en el tercer tubo se vierte solución fisiológica. Después de esto, se agrega una dosis de trabajo de complemento a todos los tubos. Después de mezclar los ingredientes, la gradilla con los tubos de ensayo se coloca en un termostato a 37 °C durante 30 minutos. Después de mantenerlo en un termostato, se agrega el sistema hemolítico a todos los tubos de ensayo. Los tubos se colocan nuevamente en un termostato durante 2 horas y luego se dejan a temperatura ambiente. Al día siguiente se anota el resultado y se evalúa el grado de intensidad de la reacción, cuatro más (++++), tres (+++), dos (++) y uno (+), dependiendo de la intensidad. del color del líquido y del tamaño del sedimento de glóbulos rojos en el fondo. La hemólisis completa se indica con un (-) menos. Si hay una marcada discrepancia entre los resultados con diferentes antígenos, el experimento se repite con una nueva porción de sangre.
44) RIT-r. Inmovilización de Treponema pallidum.

Esta reacción se utiliza como en fines de diagnóstico y por el reconocimiento resultados falsos positivos reacciones serológicas estándar, especialmente para la sífilis latente.

RIBT es que en presencia de inmovilisinas en el suero de pacientes con sífilis y complemento activo, el treponema pallidum pierde su motilidad.

RIBT se coloca en cajas esterilizadas. La reacción involucra el suero problema, el complemento y el antígeno.

En RIBT, el antígeno es una suspensión de treponema pálido de un testículo de conejo en fechas tempranas(7-8 días después de la infección) orquitis sifilítica. Un medio de suspensión especial preserva la viabilidad de Treponema pallidum durante al menos un día. El complemento se utiliza en RIBT conejillos de indias. RIBT ocurre en condiciones anaeróbicas. Los tubos de ensayo con los ingredientes se colocan en un microanaerostato, del cual aire atmosférico y se inyecta una mezcla de gases (95 partes de nitrógeno y 5 partes dióxido de carbono). El microanaerostato con los tubos de ensayo se coloca en un termostato (35°C) durante 18 a 20 horas.

Paralelamente a la formulación de la reacción, estudios de control con suero sanguíneo positivo y negativo extraído de experiencia previa.

Los resultados de RIBT se evalúan después de retirar los tubos del termostato (es decir, después de 18 a 20 horas de experimento). Con una pipeta Pasteur se aplica una gota del contenido del tubo de ensayo a un portaobjetos de vidrio, que se cubre con un cubreobjetos y se examina en un microscopio de campo oscuro (objetivo 40, ocular 10). Cuando se inmoviliza hasta el 20% de Treponema pallidum, la reacción se considera negativa, del 21 al 30% - dudosa, del 31 al 50% débilmente positiva, del 51 al 100% - positiva. El porcentaje de inmovilización de Treponema pallidum se determina mediante una tabla especial.

45) Reacción fagocítica de Opson

Mecanismo: aumento de la fagocitosis de las células microbianas bajo la influencia de los efectos beneficiosos de los anticuerpos, el suero inmunológico y el complemento.

Componentes de la reacción:

1) antígeno - cultivo microbiano diario;

3) complemento: suero fresco de cobaya;

4) fagocitos - suspensión de leucocitos.

Las opsoninas son anticuerpos que se encuentran en el suero normal e inmune y preparan a los microbios para la fagocitosis.

La reacción se lleva a cabo en tubos de ensayo especiales a t = 37° minutos. Luego se preparan frotis de cada tubo de ensayo, se cuentan 100 fagocitos y se determina el número de microcontroles fagocitados.

Índice opsónico = índice fagocítico. suero/índice fagocítico del suero normal

Cuanto mayor sea el índice opsónico (debe ser >1) del suero que se está analizando y, por tanto, ¡más alto será! brucelosis).

Se utiliza para la determinación de opsoninas, anticuerpos que estimulan la actividad fagocítica de los leucocitos, es decir, Serodiagnóstico de infecciones, como la brucelosis.

El fortalecimiento de la fagocitosis se produce debido a la unión de opsoninas con centros activos (fragmento Rav) a determinantes bacterianos, y luego con la ayuda de fragmentos Pc a los receptores Pc de los fagocitos. El suero normal contiene pequeñas cantidades de opsoninas, que ejercen sus efectos en presencia del complemento. Hay más opsoninas en el suero inmunológico y su actividad depende menos del complemento.

Componentes:

suero de prueba

suero normal

Cultivo microbiano diario (p. ej., estafilocócico)

Fagocitos: una suspensión de neutrófilos.

Incubar a 37°C durante 30 minutos. Se preparan frotis de cada tubo de ensayo, se tiñen según Romanovsky-Giemsa, y se cuenta bajo un microscopio el número de microbios en 100 o más neutrófilos, es decir, determinar el indicador fagocítico.

Indicador fagocítico: la cantidad de microbios absorbidos por un neutrófilo.

Índice opsónico: indicador fagocítico del suero inmune (de prueba) / indicador fagocítico del suero normal.

Cuanto mayor sea el índice opsónico (debe ser > 1), mayor será la inmunidad.

El índice opson-fagocítico es un indicador digital = el número de fagocitos x la evaluación de la fagocitosis (dependiendo del número de microbios absorbidos). El valor máximo es -75.

46) RN en ratones para establecer exotoxina

Esta reacción se basa en la capacidad de un suero antitóxico específico para neutralizar la exotoxina.

Los anticuerpos del suero inmunológico son capaces de neutralizar los efectos dañinos de los microbios o sus toxinas en células y tejidos sensibles, lo que se asocia con el bloqueo de los antígenos microbianos por parte de los anticuerpos, es decir, su neutralización.

La reacción de neutralización (RN) se lleva a cabo mediante la introducción de una mezcla de antígeno y anticuerpo en animales o en objetos de prueba sensibles (cultivos celulares, embriones). En ausencia de los efectos dañinos de los microorganismos o sus antígenos o toxinas en animales y objetos de prueba, se habla del efecto neutralizante del suero inmune y, por tanto, de la especificidad de la interacción del complejo antígeno-anticuerpo.

Para llevar a cabo la reacción, el material de prueba, que se espera que contenga una exotoxina, se mezcla con suero antitóxico, mantenido en un termostato y administrado a animales (cobayas, ratones). A los animales de control se les inyecta el filtrado del material de prueba, no se les trata con suero. Si la exotoxina se neutraliza con suero antitóxico, los animales del grupo experimental seguirán vivos. Los animales de control morirán como resultado de la exotoxina.

La reacción de neutralización de exotoxinas ocurre cuando interactúa con suero antitóxico (anticuerpos antitoxina). Como resultado de la formación del complejo antígeno-anticuerpo, la toxina pierde sus propiedades tóxicas.

La reacción de neutralización se lleva a cabo para detectar y valorar toxinas, toxoides o antitoxinas.

Las toxinas se obtienen filtrando líquido. medio nutritivo o material de prueba donde hayan crecido bacterias toxigénicas. Cuando se trata con formaldehído durante 30 a 45 días a una temperatura de 37°C, la toxina se convierte en toxoide, que se utiliza para inmunizar a los animales y obtener suero antitóxico.

Reacción de neutralización in vivo. Para determinar el tipo de toxina, se mezcla con suero antitóxico de diagnóstico y esta mezcla se inyecta en ratones blancos. Al neutralizar la toxina con suero antitóxico, los ratones no mueren.

La reacción de neutralización se utiliza para determinar la inmunidad antitóxica en niños con difteria (prueba de Schick) y escarlatina (prueba de Dick). Para ello, se inyecta por vía intradérmica una determinada cantidad de la toxina correspondiente (1/40 DLM) en la zona del antebrazo. Si hay antitoxinas en el cuerpo, la toxina se neutralizará y la reacción será negativa. En ausencia de antitoxinas en el cuerpo, reacción inflamatoria en el lugar de la inyección de la toxina.
47) RN (Reacción de Neutralización) en ratones para identificar el virus encefalitis transmitida por garrapatas

El virus TBE es patógeno para varios animales salvajes y de laboratorio. Los ratones blancos recién nacidos y jóvenes son los más sensibles. Después de la infección en el cerebro, por vía intraperitoneal, intramuscular, estos animales desarrollan encefalitis, lo que resulta en la muerte de los animales. Entre los animales de granja, las cabras son los más susceptibles al virus TBE, las ovejas y las vacas son menos susceptibles y los caballos son ligeramente susceptibles. El virus TBE tiene un efecto citopatógeno (CPE), provocando cambios citopáticos en cultivos primarios y continuos de células de riñón embrionario porcino (PEB y PES) y se multiplica sin un CPE pronunciado en muchos otros Culturas celulares. En el cerebro de los ratones infectados y en el líquido de cultivo de los cultivos infectados se produce la acumulación del virus TBE y de antígenos virales específicos: fijadores del complemento, hemaglutinantes, precipitantes, etc.

virus TBE largo tiempo se conserva a bajas temperaturas ( modo óptimo-60 grados C e inferiores), tolera bien la liofilización, puede almacenarse seco durante muchos años, pero se inactiva rápidamente a temperatura ambiente. Hervirlo mata en 2 minutos y en leche caliente a 60 grados. C muere en 20 minutos.

La formalina, el fenol, el alcohol y otros desinfectantes y la radiación ultravioleta también tienen un efecto inactivante.

La reacción de neutralización se basa en la capacidad de sueros inmunes específicos para extinguir el efecto infeccioso de los virus. Aplicable en dos direcciones:

1) para tipificación de virus aislados;

2) para la titulación de anticuerpos en los sueros de quienes se han recuperado.

Configurando la reacción:

1. Sobre animales de laboratorio. Criterios para la presencia de un virus.

Sirve para la muerte de animales de laboratorio. Se calcula la LD50

La dilución máxima de la suspensión viral, que

provocó la muerte del 50% de los animales infectados. Para

Se lleva a cabo la identificación del virus de la encefalitis transmitida por garrapatas.

Infección intracerebral de ratones blancos.

2. En cultivos de tejidos. Los resultados se tienen en cuenta.

Según efecto citopático (CPE)

Según el método de prueba de color basado en el cambio de color.

Por hemadsorción.

3. En el embrión de pollo. Los resultados se registran de acuerdo con

la aparición de marcas de viruela a lo largo de la membrana corioalantoidea.

48) RTGA

Esta reacción se utiliza en la práctica virológica:

Determinar el tipo de virus (sobre vidrio);

Para detección en el suero de pacientes (ampliado).

Al preparar una reacción indicativa de inhibición de la hemaglutinación, se aplica al vidrio 1 gota de suero inmune de tipo específico, luego se agrega 1 gota del material de prueba y 1 gota de una suspensión de glóbulos rojos al 5%.

Contabilización de resultados: el tipo de virus está determinado por el suero con el que no se produjo la reacción, ya que el suero inmunológico específico del virus aislado suprime su actividad hemaglutinante y los glóbulos rojos no se aglutinan.
49)RIF

Como etiquetas se utilizan colorantes luminosos de fluorocromo (isotiocianato de fluorisceína, etc.).

Hay varias modificaciones de RIF. Para el diagnóstico rápido de enfermedades infecciosas, se utiliza Koons RIF para identificar microbios o sus antígenos en el material de prueba.

Según Koons existen dos métodos de RIF: directo e indirecto.

Componentes RIF directos:

1) el material que se examina (heces descargadas por la nasofaringe, etc.);

2) suero inmunológico específico marcado que contiene AT-la para el antígeno deseado;

3) solución isotónica de cloruro de sodio.

Un frotis del material de prueba se trata con antisuero marcado.

Se produce la reacción AG-AT. Durante un examen microscópico luminiscente, se detecta fluorescencia en el área donde se localizan los complejos AG-AT.

Componentes del RIF indirecto:

1) el material que se está estudiando;

2) antisuero específico;

3) suero antiglobulina (AT-la contra inmunoglobulina), marcado con fluorocromo;

4) Solución isotónica de cloruro de sodio.

Un frotis del material de prueba se trata primero con suero inmune al antígeno deseado y luego con suero antiglobulina marcado.

Los complejos luminiscentes AG-AT: AT marcados se detectan mediante un microscopio fluorescente.

La ventaja del método indirecto es que no es necesario preparar una amplia gama de sueros fluorescentes específicos, sino que solo se utiliza un suero antiglobulina fluorescente.

También existe un tipo de RIF indirecto de 4 componentes, cuando además se introduce complemento (suero de cobaya). En una reacción positiva, se forma un complejo de AG-AT - marcado - complemento AT.

La reacción se refiere a reacciones serológicas que involucran antígenos o anticuerpos marcados.

Se lleva a cabo por métodos directos e indirectos.

En método directo detectar antígeno en material de un paciente. Se utiliza un suero fluorescente de diagnóstico, que contiene inmunoglobulinas aisladas de sueros inmunes y marcadas con fluorocromos.

El antígeno específico se detecta en forma de conglomerados luminiscentes de color verde brillante y el fondo del preparado es de color rojo anaranjado.

Componentes de la reacción de inmunofluorescencia directa:

1) el material que se está estudiando;

2) suero luminiscente específico;

3) microscopio fluorescente.

Al diagnosticar la influenza, se diferencia entre los patógenos de la parainfluenza y infección por adenovirus. El hisopo nasofaríngeo se trata con suero fluorescente contra la influenza o inmunoglobulina contra la influenza.

El resultado “+” en forma de brillo verde se obtiene después de 3 horas.

Con el método indirecto se detectan y titulan anticuerpos específicos. El título del suero es su dilución máxima en la que se nota la fluorescencia de “++”.

Componentes de la reacción de inmunofluorescencia indirecta.

Para buscar un antígeno durante el diagnóstico rápido:

1) material de prueba (antígeno);

2) suero específico;

3) suero luminiscente antiglobulina

4) microscopio fluorescente.

/ fase específica

Los anticuerpos séricos se adsorben al antígeno.

// fase no específica

Se utiliza suero antiglobulina con anticuerpos marcados con fluorocromos. Se forma un complejo antígeno + anticuerpo (I) + suero antiglobulina (II), que brilla.