El mecanismo de reacción de precipitación de la reacción difiere de la reacción. Reacción de precipitación (método inmunológico)
Consiste en la interacción de un antígeno soluble con un anticuerpo, seguida de la precipitación de un precipitado de grano fino (precipitado).
La reacción de precipitación le permite determinar la presencia de un antígeno desconocido en el material de prueba agregando un anticuerpo conocido o usando un antígeno conocido, un anticuerpo desconocido. precipitación va peor en ausencia de sales. El óptimo de precipitación está en el rango de pH=7.0-7.4.
El mecanismo de precipitación es similar al de la aglutinación. Bajo la influencia del sistema inmunitario que ha reaccionado con el antígeno, el grado de su dispersión disminuye. El suero y el antígeno deben ser completamente transparentes. Al configurar la precipitación, se pueden agregar diferentes diluciones del antígeno a una dilución de suero, o viceversa.
La precipitación se registra mejor si el antígeno se superpone en el tubo de ensayo al anticuerpo. En este caso, se observa la aparición de un precipitado en forma de anillo: precipitación en anillo. La precipitación anular se lleva a cabo en tubos de ensayo especiales con un diámetro de 2,5-3,5 mm. Para determinar el número de antígenos en el material de prueba o diferentes anticuerpos en el suero, se usa la reacción de precipitación en agar: se vierte agar clarificado al 1% en o sobre portaobjetos de vidrio. Las soluciones de antígeno y anticuerpo se vierten en diferentes pocillos hechos en agar, que se difunden entre sí, formando líneas de precipitación. La reacción de precipitación se usa ampliamente en el diagnóstico (ver reacción de Ascoli).
La precipitación en agar permite determinar la toxigenicidad de los cultivos de difteria.
EN investigación forense la precipitación sirve para establecer la afiliación de especies de sangre, órganos y tejidos con la ayuda de sueros precipitantes específicos.
Precipitación: la reacción de precipitación de un complejo de antígeno (precipitinógeno) y anticuerpos (precipitina). La precipitación es uno de los fenómenos inmunológicos que permite determinar el contenido de anticuerpos (ver) en el suero sanguíneo de personas enfermas o vacunadas, así como en la sangre de animales inmunizados. Cuando se utilizan sueros estándar, la reacción de precipitación se puede utilizar para valorar antígenos solubles de varios orígenes (ver).
En la forma más simple de establecer la reacción de precipitación, el suero de prueba en una serie de diluciones múltiples se agrega por capas a una serie de tubos de ensayo con una cantidad constante de antígeno. Después de 30-60 min. la incubación a temperatura ambiente en el límite de los dos líquidos formó un anillo de turbidez - anillo de precipitación. La cantidad mínima de suero que da una reacción de precipitación se toma como título de antisuero. Cuando la reacción se invierte con un antisuero estándar, es posible estimar la concentración relativa del antígeno en varios fluidos biológicos.
Los resultados de la titulación de anticuerpos y antígenos basados en el método anterior no tienen una expresión cuantitativa absoluta. Para cuantificar el contenido de anticuerpos, Heidelberger, Kabat (M. Heidelberger, E. Kabat) y otros desarrollaron Método cuantitativo reacción de precipitación, que se basa en la detección de la llamada zona de equivalencia. Cuando se mezclan cantidades de antígeno apropiadas para la edad con volúmenes constantes de antisuero, la cantidad de precipitado formado inicialmente aumenta y luego vuelve a disminuir debido a un aumento en la solubilidad del complejo antígeno-anticuerpo en exceso de antígeno. Si determinamos el contenido de anticuerpos en el sobrenadante en todos los tubos de ensayo, resulta que en los tubos de ensayo del medio de una fila o incluso en un solo tubo de ensayo no hay anticuerpos en el sobrenadante; al mismo tiempo, aquí se forma el precipitado más grande. Dado que en la zona de equivalencia todo el antígeno introducido en la mezcla de reactivos también está involucrado en el precipitado, después de restar el precipitado de proteína del antígeno de la cantidad de proteína, se obtiene el valor exacto del contenido de anticuerpos en un volumen dado de suero de prueba. El contenido de proteínas del precipitado después de un lavado minucioso con solución salina fría se determina mediante nitrógeno o algún método colorimétrico.
Al evaluar el valor de la reacción de precipitación como método de diagnóstico hay que tener en cuenta que en los sueros inmunes pueden estar presentes anticuerpos que no tienen las propiedades de las precipitinas y, por tanto, no forman un precipitado al interactuar con un antígeno. Estos incluyen principalmente anticuerpos incompletos, así como algunos otros anticuerpos que pertenecen al grupo de las globulinas gamma-A.
La capacidad del antisuero para precipitar el antígeno puede verse afectada por calentamiento a 65-70 °, tratamiento con disolventes orgánicos, reducción en un medio ácido [Isliker (N. Isliker), A.Ya. Kühlberg]. El fenómeno de precipitación con antisuero, que a sabiendas contiene precipitinas, solo es posible a una cierta temperatura, concentración de sales e iones de hidrógeno. La reacción de precipitación procede más rápidamente a 25-37°. Una condición indispensable para la formación de un precipitado es la presencia de cloruro de sodio en concentraciones isotónicas (solución de NaCl al 0,85 %). Cuando la concentración de NaCl se aumenta al 15%, los precipitados formados por el antígeno de naturaleza polisacárida se disuelven parcialmente, lo que puede utilizarse para extraer anticuerpos puros. La reacción de precipitación con antígenos de naturaleza proteica procede a la misma velocidad y completa tanto en 0,85% como en 15%. soluciones de NaCl. La concentración óptima de iones de hidrógeno para la formación de un precipitado corresponde a valores de pH de 5,0 a 9,0.
En la práctica de laboratorio, se utilizan varias modificaciones de la reacción de precipitación. En particular, la reacción de termoprecipitación se usa para detectar antígenos bacterianos. ántrax, botulismo, etc., no sujetos a desnaturalización térmica (coctoantígenos). Esta reacción difiere de la reacción de precipitación en anillo solo en que el filtrado del material de prueba hervido se usa como antígeno (ver Reacción A).
Cuando se analiza una mezcla compleja de antígenos mediante la reacción de precipitación, es imposible caracterizar las propiedades de los componentes individuales de la mezcla. Para solucionar este problema se recurre a métodos de precipitación en agar e inmunoelectroforesis. El método de precipitación en agar en la modificación más común de Ouchterlony (O. Ouchterlony) se basa en el hecho de que el antígeno y el antisuero, al difundirse uno hacia el otro en una fina capa de agar, forman una línea de precipitación cuando se encuentran. Por el número de tales líneas, se puede juzgar el número de componentes contenidos en una mezcla dada de antígenos. El método de Ouhgerlonu permite comparar diferentes mezclas antigénicas y determinar el grado de relación de los componentes presentes en ellas. Al analizar una mezcla antigénica compleja que contiene sustancias con las mismas velocidades de difusión en agar, gran ayuda puede traer el método de inmunoelectroforesis. La mezcla de antígenos se separa preliminarmente en un campo eléctrico en una placa de agar, después de lo cual se revela componentes individuales antisuero El antisuero se introduce en una zanja hecha en agar paralela a la línea a lo largo de la cual se movieron los antígenos durante la electroforesis. Cada uno de los antígenos da un arco de precipitación individual con antisuero. La inmunoelectroforesis es ampliamente utilizada para el análisis anomalías patológicas en proteínas séricas, así como en el análisis inmunológico de tejidos y antígenos bacterianos.
Precipitación forense. La precipitación se utiliza en medicina forense para determinar las especies de sangre, partes de órganos y tejidos. En varios casos de investigación, se requiere establecer el tipo de sangre encontrada en los instrumentos del crimen, la ropa del delincuente o víctima, etc. Para la reacción de precipitación, los sueros precipitantes obtenidos al inmunizar conejos, gallos y cabras con proteínas de varios animales se utilizan. Generalmente se preparan sueros que precipitan humanos, caballos, gatos, pollos, cerdos, perros, ganado. Deben tener un título de al menos 1:10.000 y ser suficientemente específicos. Se preparan extractos de la mancha o costra de sangre estudiada para salina psicológica, que luego se analizan con sueros precipitantes. Se considera que el tipo de proteína está establecido si uno de los sueros precipitantes forma un precipitado con un extracto de la sangre de prueba con una reacción de control apropiada. La reacción de precipitación también puede determinar el tipo de proteína en tejidos y órganos humanos o animales. Normalmente, la reacción de precipitación se lleva a cabo en tubos de ensayo con un extremo en forma de cono. Tras la recepción de extractos turbios, la reacción de precipitación se lleva a cabo en agar según Ouchterlon.
La reacción de precipitación (RP) es la precipitación de un antígeno soluble bajo la acción de anticuerpos en presencia de un electrolito. Efecto de reacción visible (fenómeno de precipitación) - turbiedad (formación de anillo turbio o sedimento - precipitado).
RP se utiliza para detectar un antígeno desconocido en una serie de enfermedades infecciosas: con ántrax, tularemia, meningitis, viruela. En medicina forense, se utiliza para determinar las especies de sangre, espermatozoides; en la investigación sanitaria e higiénica - para establecer la falsificación productos alimenticios. RP es muy diferente. alta sensibilidad y permite detectar antígeno en una dilución de 1:1.000.000 y 1:10.000.000.
Componentes de la reacción de precipitación.
1. Antígeno (precipitinógeno) - es un antigeno naturaleza molecular, que se encuentra en un estado finamente disperso (soluble). Los precipitatinógenos son diversos lisados o extractos de tejidos, etc. El precipitatinógeno difiere del aglutinógeno en el tamaño de las partículas de antígeno. aglutinógeno Tiene tamaños de celda(estas no son células enteras destruidas), pero las dimensiones precipitinógeno acorde con tamaño molecular(estas son proteínas y sus complejos con carbohidratos o lípidos). solución de precipitinógeno transparente.
2. Anticuerpos (precipitinas) se encuentran en suero humano o en sueros precipitantes para diagnóstico inmunitario que contienen anticuerpos conocidos.
3. Electrólito- solución isotónica de cloruro de sodio.
Obtención de precipitinógeno.
Se obtiene triturando el material y extrayéndole los antígenos proteicos por ebullición o por otros métodos.
Ejemplos de precipitinógenos: lisados o extractos varios cuerpos y tejidos, sangre extraña suero (suero es solución, en primer lugar, varios proteínas), filtrados de caldos de cultivo de microbios, extractos de sal de microbios, autolisados, etc.
Obtención de sueros precipitantes.
Obtenido por hiperinmunización de conejos con precipitinógenos apropiados. Dichos sueros contienen anticuerpos contra los precipitinógenos con los que se inmunizaron los conejos.
Ejemplos de precipitación de sueros: precipitando suero de ántrax (contiene anticuerpos contra los antígenos del ántrax), precipitación de suero antimeningocócico(contiene anticuerpos contra los antígenos del agente causante de la meningitis), etc.
título El suero precipitante es la dilución más alta de precipitinógeno a la que el suero todavía da una reacción de precipitación.
Formas de establecer RP.
1. Reacción de precipitación de anillo - llevado a cabo en tubos de precipitación especiales (diámetro - 0,4-0,5 cm, altura - 7-8 cm). Se añaden 0,2 - 0,3 ml de suero de precipitación al tubo de ensayo y se deposita cuidadosamente la misma cantidad de precipitinógeno a lo largo de la pared con la punta larga de una pipeta Pasteur. Luego, con cuidado desde una posición horizontal, los tubos se colocan verticalmente.
Contabilización de los resultados de la reacción se lleva a cabo por la aparición de un anillo blanco en el borde del antígeno-anticuerpo. Con una reacción positiva se observa tal anillo. En este caso, el antígeno corresponde al anticuerpo y se produce su unión.
Si los extractos acuosos hervidos y filtrados de órganos y tejidos se usan como precipitantes, entonces la reacción se llama reacción precipitación térmica (por ejemplo, cuando se diagnostica ántrax).
2. Reacción de precipitación en gel - se lleva a cabo en cajas Petri o sobre portaobjetos de vidrio, donde se coloca una capa de gel de agar. Cuando el gel se solidifica, se cortan pocillos en los que se colocan antígenos o anticuerpos, o ambos. Distinguir 2 métodos PR en gel:
un método inmunodifusión simple (radial): uno de los componentes de la reacción inmune (antígeno o anticuerpo) se coloca en el pocillo y el otro componente se mezcla con agar; en un resultado positivo (antígeno corresponde a un anticuerpo) alrededor del pocillo se forma anillo de precipitado ;
b) método inmunodifusión doble: tanto el anticuerpo como el antígeno se colocan en pozos separados, se difunden en el gel de agar uno hacia el otro; con un resultado positivo donde los anticuerpos y los antígenos se encuentran líneas de precipitación .
Un ejemplo de RP en un gel es la reacción de inmunodifusión doble de Ouchterlony en el diagnóstico de la difteria
inmunoelectroforesis - es un método que combina el método de electroforesis y la reacción de precipitación. Una mezcla de antígenos (por ejemplo, proteínas séricas) se separa en el gel mediante electroforesis. Luego, para encontrar y determinar la proteína deseada (antígeno desconocido), se utiliza un suero precipitante de diagnóstico que contiene anticuerpos contra esta proteína (anticuerpo conocido). Para ello, se introduce suero de diagnóstico en el surco paralelo a las proteínas. Si entre las proteínas hay una que corresponde al anticuerpo en el suero, entonces a su alrededor se forman líneas de precipitación.
reacción de precipitación- PR (desde lat. praeci-pito- precipitado,) es la formación y precipitación de un complejo de un antígeno molecular soluble con anticuerpos en forma de turbidez, llamado precipitado. Se forma mezclando antígenos y anticuerpos en cantidades equivalentes; el exceso de uno de ellos reduce el nivel educativo complejo inmune. A diferencia de la reacción de aglutinación, el antígeno para la reacción de precipitación son compuestos solubles, cuyo tamaño de partículas se aproxima al tamaño de las moléculas. Estos pueden ser proteínas, complejos de proteínas con carbohidratos y lípidos, extractos bacterianos, varios disados o filtrados de caldos de cultivo microbianos. Los anticuerpos que intervienen en la reacción de precipitación se denominan precipitinas. El complejo antígeno-anticuerpo resultante se detecta mediante ciertos métodos de estadificación de la reacción de precipitación.
La reacción de precipitación del anillo fue propuesta por primera vez por Ascoli. Se utiliza en el diagnóstico de ántrax, peste, tularemia, meningitis. El método es simple y accesible.
Se vierte un suero de inmunoprecipitación específico en tubos de precipitación estrechos y el antígeno se coloca en capas sobre él con mucho cuidado. Como antígeno, por ejemplo, cuando se diagnostica ántrax, se toman trozos de piel, lana, pieles de un animal caído, etc., se hierven, el líquido se filtra y se usa como antígeno. La aparición de un anillo, un precipitado en el límite de dos líquidos, indica la presencia del antígeno correspondiente.
La reacción de precipitación en gel de agar, o método de precipitación por difusión, permite estudiar en detalle la composición de mezclas antigénicas hidrosolubles complejas. Para configurar la reacción, se utiliza un gel (agar semilíquido o más espeso). Cada componente que forma el antígeno se difunde hacia el anticuerpo correspondiente a una velocidad diferente. Por lo tanto, los complejos de varios antígenos y los anticuerpos correspondientes se encuentran en Diferentes areas gel, donde se forman líneas de precipitación. Cada una de las líneas corresponde a un único complejo antígeno-anticuerpo. La reacción de precipitación normalmente se establece a temperatura ambiente.
El método de inmunoelectroforesis recibido amplio uso V últimos años en el estudio de la estructura antigénica de los microbios. El complejo de antígenos se coloca en el pozo, que se encuentra en el centro del gel de agar, se vierte en la placa. Luego, se pasa una corriente eléctrica a través del gel de agar, como resultado de lo cual los diversos antígenos incluidos en el complejo se mueven hacia el campo. corriente eléctrica dependiendo de su movilidad electroforética. Una vez completada la electroforesis, se introduce un suero inmune específico en la zanja ubicada a lo largo del borde de la placa y se coloca en una cámara húmeda. En los lugares donde se forma el complejo antígeno-anticuerpo, aparecen líneas de precipitación.
Reacciones de precipitación poner en tubos de ensayo (reacción de precipitación de anillo), en geles, medios nutrientes, etc. Amplio distribución recibida variedades de reacción de precipitación en un gel semilíquido de agar o agarosa: inmunodifusión doble según Ouchterlony. inmunodifusión radial, inmunoelectroforesis y etc
Reacción de inmunodifusión radial. El suero inmune con gel de agar fundido se vierte uniformemente sobre el vaso. Después de la solidificación en el gel, se hacen pocillos en los que se coloca el antígeno en varias diluciones. El antígeno, al difundirse en el gel, forma con anticuerpos zonas de precipitación en anillo alrededor de los pocillos (fig. 13.7). El diámetro del anillo de precipitación es proporcional a la concentración de antígeno. La reacción se utiliza para determinar los niveles en sangre de inmunoglobulinas de varias clases, componentes del sistema del complemento, etc.
inmunoelectroforesis- una combinación del método de electroforesis e inmunoprecipitación: se introduce una mezcla de antígenos en los pocillos del gel y se separan en el gel mediante electroforesis. Luego, paralelamente a las zonas de electroforesis, se introduce en el surco un suero inmune cuyos anticuerpos, al difundirse en el gel, se forman en el punto de encuentro con el antígeno de la línea de precipitación.
Microscopía electrónica inmune- microscopía electrónica de microbios, más a menudo virus, tratados con anticuerpos apropiados. Los virus tratados con suero inmune forman agregados inmunes (microprecipitados). Alrededor de los viriones, se forma una "corolla" de anticuerpos, en contraste con el ácido fosfotúngstico u otras preparaciones electrónicamente densas.
123. Reacción de precipitación en gel para determinar la toxigenicidad de microorganismos, mecanismo, métodos de fraguado.
Reacción de precipitación (RP)- esta es la formación y precipitación de un complejo de un antígeno molecular soluble con anticuerpos en forma de turbidez, llamado precipitado. Se forma mezclando antígenos y anticuerpos en cantidades equivalentes; un exceso de uno de ellos reduce el nivel de formación del complejo inmune.
En 1946, J. Oudin propuso el método de difusión simple, según el cual uno de los componentes de la reacción de precipitación, generalmente suero, está en el gel, y el otro, el antígeno, se superpone al primero en forma de una capa. solución.
El antígeno, que se difunde en el gel, forma líneas blancas de precipitación con anticuerpos, que son claramente visibles con iluminación lateral. En 1948, J. Ouchterlonu desarrolló un método aún más simple y conveniente de contradifusión bidimensional, que permite la comparación directa de varios antígenos y sueros. Este método también es muy valioso en el estudio de reacciones cruzadas.
Para montar la reacción según Ouchterlon se utiliza agar al 1% preparado en suero fisiológico, que se vierte en cajas Petri con una capa de 0,5 cm alrededor de la circunferencia a una distancia de 1-2 cm del centro. El suero precipitante de diagnóstico se vierte en el pozo central, y una solución de homólogos y antígenos comparados con él se vierte en los pozos periféricos. Los resultados se registran después de 24, 48 y 72 horas de incubación a temperatura ambiente.
Los anticuerpos y los antígenos se difunden entre sí, y en áreas donde se crean sus concentraciones equivalentes, se forman bandas de precipitación arqueadas. Si las bandas de precipitación provenientes de dos pozos adyacentes se fusionan, esto indica la presencia de varios componentes antigénicos en el fluido de prueba. La reacción de contradifusión según Ouchterlohn se usa a menudo para determinar la toxicidad de bacterias, como la difteria.
Otro desarrollo del método de precipitación en gel es la inmunoelectroforesis. Este término se refiere a un método que combina la separación electroforética de una mezcla de antígenos y la contradifusión de Ouchterlohn en la misma placa de gel de agar. Luego, el suero precipitado se vierte en un surco cortado en el gel paralelo a la dirección de la separación electroforética.
Las líneas de precipitación formadas como resultado de la reacción tienen forma de arcos alargados en la dirección del movimiento electroforético de las fracciones de antígeno. La inmunoelectroforesis permite determinar la composición de mezclas complejas de antígenos solubles que contienen hasta 30 componentes y, por lo tanto, es un valioso método de diagnóstico.
Reacción de precipitación(RP) se denomina precipitación de una solución de Ag (precipitinógeno) cuando se expone a suero inmune (precipitina) y electrolitos.
Mediante PR es posible detectar un antígeno en diluciones de 1:100.000 e incluso 1:1.000.000, es decir, en cantidades tan pequeñas que no se pueden detectar químicamente.
Los precipitatinógenos son partículas ultramicroscópicas de proteína-PS natural: extractos de micras, órganos y TC, material pat; productos de descomposición de una célula bacteriana, sus lisados, filtrados. Los precipitatinógenos son térmicamente estables, por lo que para su obtención se somete el material a ebullición.
En RP se utilizan Ags líquidos transparentes.
Los sueros precipitantes suelen obtenerse hiperinmunizando conejos en ciclos de varios meses, introduciéndoles suspensiones bacterianas, filtrados de cultivo en caldo, autolisados, extractos salinos de microorganismos y proteínas de suero.
Puesta en escena por RP Ascoli. En un tubo de ensayo estrecho con una pequeña cantidad de suero precipitante sin diluir, manteniéndolo en una posición inclinada, el mismo volumen de Ag se deposita lentamente a lo largo de la pared con una pipeta.
Para no mezclar los dos líquidos, el tubo de ensayo se coloca verticalmente con cuidado. Con una reacción positiva en un tubo de ensayo, aparece un anillo blanco grisáceo después de 5 a 10 minutos en el límite entre el suero y el extracto estudiado. La reacción va necesariamente acompañada de controles de suero y antígeno.
La reacción de Ascoli se utiliza para identificar ántrax, tularemia, peste Ag.
También ha encontrado aplicación en medicina forense para determinar la especie de una proteína, en particular manchas de sangre, en la práctica sanitaria en la detección de falsificación de carne, pescado, productos de harina, impurezas en la leche. La desventaja de este RP es la inestabilidad del precipitado (anillo), que desaparece incluso con una ligera agitación. Además, no puede utilizarse para determinar composición cuantitativa Ag involucrado en la formación del precipitado.
Reacción de precipitación de Ouchterlony. La reacción se pone en placas de Petri en los pocillos de gel de agar.
El agar transparente bien lavado se usa como gel. Ag y suero se introducen en el gel de agar de forma que los pocillos que los contienen queden a cierta distancia. Difundidos uno hacia el otro y conectados entre sí, el anticuerpo y el antígeno forman un complejo inmune en forma de banda blanca en 24-48 horas.
En presencia de un precipitinógeno complejo, aparecen varias bandas. Al mismo tiempo, las bandas de antígenos serológicamente relacionados se fusionan y las bandas heterogéneas se cruzan, lo que permite determinar los detalles de la estructura antigénica de las sustancias en estudio.
Es ampliamente utilizado para diagnosticar enfermedades causadas por virus y bacterias que producen exotoxinas.
3.La reacción de hemaglutinación indirecta (RNGA). Se utiliza para detectar polisacáridos, proteínas, extractos de bacterias, micoplasmas, rickettsias y virus, cuyos complejos inmunes con aglutininas no se pueden ver en la AR clásica convencional, o para detectar anticuerpos en el suero de los pacientes frente a estas sustancias altamente dispersas y los microorganismos más pequeños. .
RNGA para el serodiagnóstico de enfermedades infecciosas. Usando RNHA para detectar anticuerpos en el suero de pacientes, se preparan diagnósticos de antígenos eritrocitarios.
reacción de precipitación.
Para ello, los eritrocitos se tratan durante 15 minutos con una solución de taninos a una dilución de 1:20.000-1:200.000, que les da estabilidad y aumenta su capacidad de adsorción. Luego se mezclan con un antígeno conocido y se incuban durante 2 horas a una temperatura de 37 ° C. Los eritrocitos sensibilizados con antígeno se lavan 2-3 veces con solución isotónica de cloruro de sodio y se agregan al suero, se diluyen y se vierten en los pocillos del paneles
Las suspensiones de eritrocitos intactos y cargados de antígeno, que se añaden a los sueros, dan reacciones obviamente positivas y negativas, sirven como control.
Los resultados de la reacción se tienen en cuenta 2 horas después de la incubación en un termostato y se evalúan con más: "++++": los eritrocitos cubren el pozo en forma de paraguas con bordes irregulares; "-" - acumulación de eritrocitos en forma de "botón"
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Reacción de precipitación de anillo
La reacción de adhesión del anillo es una de las más simples. métodos serológicos. Se realiza en tubos de precipitación estrechos. Primero, una solución clara del antígeno tomado en varias diluciones (1:2; 1:4; 1:8; 1:16) se vierte por igual en todos los tubos de ensayo.
La conexión de antígenos y anticuerpos se produce en el borde de contacto de los reactivos. Como resultado de esta interacción, en los casos positivos (cuando el antígeno corresponde al anticuerpo), al cabo de un tiempo se forma un precipitado en forma de anillo opalescente.
Reacción encontrada aplicación amplia V práctica médica para detectar antígeno de ántrax en lana, pieles, carne de animales (reacción de Ascoli); para detectar otros patógenos de enfermedades infecciosas en material patológico obtenido de pacientes o en objetos ambiente externo, así como en examen medico forense para determinar la especie de una proteína, en particular, una proteína sanguínea u otros fluidos biológicos.
Inmunodifusión de Ouchterlony
La reacción de precipitación se puede realizar en un gel de agar.
El método se basa en el hecho de que las partículas de antígenos y anticuerpos, debido a sus diferentes tamaños, se difunden en el gel a diferentes velocidades y, como resultado, se desplazan a diferentes distancias. Esto permite separar sistemas individuales de antígenos cuando están en una mezcla y, por lo tanto, permite estudiar la estructura antigénica de bacterias y proteínas complejas, sueros y tejidos animales.
visuales y metodo efectivo Ouchterlony sugirió la precipitación en gel.
Se hacen pequeños pocillos en placas de Petri con agar, recortados a cierta distancia entre sí. El antígeno se vierte en uno de ellos, el suero en otros. Los componentes de la reacción se difunden en el gel unos hacia otros y forman una línea visible de precipitación donde los antígenos se encuentran con concentraciones óptimas de anticuerpos específicos para él. Dado que los reactivos se difunden concéntricamente fuera de los pocillos, se pueden realizar varios ensayos colocando varios pocillos con diferentes antígenos (o diferentes diluciones del mismo antígeno) alrededor de un pocillo de anticuerpo.
La reacción de Ouchterlony permite sacar una conclusión sobre la naturaleza del antígeno a partir de un suero conocido y, a la inversa, a partir de un antígeno conocido se determina la naturaleza de los anticuerpos.
La ventaja del método es que permite comparar los componentes antigénicos de mezclas complejas y juzgar sus similitudes o diferencias. Para comparar la similitud de los antígenos, se prepara un agar con pocillos: el antisuero se vierte en uno y los antígenos que se comparan se vierten en los otros. Si los antígenos son diferentes, las bandas de precipitación se ubican de manera desigual.
inmunoelectroforesis
En los últimos años, el método de inmunoelectroforesis se ha utilizado para estudios inmunológicos finos. El método fue descrito por primera vez por P.
Grabar y K. A. Williams en 1953. Es una combinación de electroforesis en gel de agar en placas de vidrio con inmunodifusión. Al principio se lleva a cabo una separación electroforética del antígeno, que suele ser una mezcla de proteínas u otras moléculas. Para ello, el antígeno se introduce en un pozo previamente cortado en el agar, y la placa de agar se coloca durante algún tiempo en una zona de corriente eléctrica continua.
Porque velocidad diferente el movimiento de las moléculas es la separación del antígeno en sus partes componentes. Después de eso, el suero inmune precipitante se introduce en la ranura cortada en la dirección paralela al flujo de corriente.
El antígeno y el antisuero se difunden en el gel uno hacia el otro.
precipitación
Cada antígeno da una zona de precipitación en forma de arco con los anticuerpos que le corresponden. El número, la posición y la forma de estas líneas dan una idea de la composición de la mezcla original de antígenos.
reacción de floculación
El método fue propuesto por Ramón en 1924.
Se basa en el hecho de que una mezcla de toxina con suero antitóxico bajo ciertas condiciones da turbidez y precipitación. En este caso, la reacción se produce antes en aquellas probetas donde la cantidad de antitoxina corresponde a la dosis que neutraliza completamente esta cantidad de toxina.
Por lo tanto, si se conoce la potencia de la toxina, se puede determinar la cantidad de antitoxina en el suero de prueba desconocido. Para ello se preparan varias diluciones del suero problema, se añaden a cada dilución las mismas cantidades de una toxina conocida, tras lo cual se observa cuál de los tubos de ensayo flocula (turbidez de la solución) primero. Determinar la floculación inicial. Luego se hace el cálculo.
Por ejemplo, se requiere determinar la concentración de anticuerpos antidifteria en el suero de prueba. La reacción utiliza toxina diftérica que contiene 50 Lf por 1 ml (Lf es la cantidad mínima de toxina que es neutralizada por 1 unidad antitóxica (AU) de antisuero.
Suponga que se nota la floculación inicial en un tubo de ensayo que contiene 0,2 ml de este suero y 2 ml de una toxina conocida con una actividad de 100 Lf (50 Lf x 2).
Entonces, 0,2 ml de suero neutralizaron esta toxina. Por tanto, 0,2 ml de suero contienen 100 AU, y en 1 ml de este suero, la concentración de anticuerpos corresponde a 500 AU (100 AU x 5).
Por un método similar, la reacción de floculación se puede usar para el propósito opuesto: determinar las propiedades inmunitarias de los toxoides.
Esto requiere un suero antitóxico estándar.
reacción de neutralización
La reacción se utiliza en el diagnóstico de intoxicación bacteriana alimentaria para determinar las toxinas bacterianas en el material de prueba. Además, se puede poner en el estudio de algunos objetos del entorno externo para el contenido. bacteria patogénica producir toxinas, por ejemplo, al examinar el suelo para detectar la presencia de patógenos del tétanos o gangrena gaseosa.
Se sabe que la toxina mezclada con suero antitóxico homólogo no muestra su acción tóxica a medida que la toxina se neutraliza. La reacción de la interacción de una toxina con una antitoxina, por regla general, es estrictamente específica, por lo tanto, para establecer una reacción de neutralización para determinar el tipo de toxina, es necesario tener sueros de diagnóstico específicos para cada tipo. y tipo de toxina. Es posible aplicar al mismo tiempo una mezcla de 2-3 sueros antitóxicos y más si se espera que varias toxinas estén presentes en el material de prueba.
La reacción de neutralización le permite determinar el tipo y el tipo de toxina patógena.
El material de prueba puede ser un filtrado de productos alimenticios que supuestamente provocaron intoxicaciones, lavados de platos donde se encontraban estos productos, etc.
Se lleva a cabo una neutralización preliminar de la supuesta toxina. Para ello, se añade al tubo de ensayo con el material de ensayo (tubo de ensayo experimental) un suero de diagnóstico antitóxico (contiene anticuerpos contra la toxina deseada); se añade un volumen igual de solución salina fisiológica a otro tubo de ensayo (control).
Tras una breve incubación, el contenido de los tubos de ensayo se introduce en dos grupos de ratones blancos (experimental y de control).
Los resultados de la reacción de neutralización se tienen en cuenta inmediatamente después de la muerte de los animales de control. En este caso, el hecho de la supervivencia de los animales que recibieron suero antitóxico junto con el material de prueba, indica la presencia de una toxina en el mismo, correspondiente al suero inyectado.
La ventaja de la reacción de neutralización es la alta fiabilidad de los resultados obtenidos.
Sin embargo, en su sensibilidad y rapidez para obtener una respuesta, es inferior a otros métodos de investigación.
Reacciones de lisis
Las reacciones de lisis suelen denominarse disolución de antígenos corpusculares bajo la acción de anticuerpos específicos para este antígeno en presencia de complemento.
De reacciones inmunitarias basado en el fenómeno de lisis de bacterias y otros antígenos corpusculares, se utilizan principalmente reacciones de bacteriólisis y hemólisis.
reacción de bacteriólisis
La reacción ocurre tanto in vitro como in vivo. Esta última se conoce como la reacción de V.I. Isaev-Pfeiffer.
Estos científicos han demostrado que si conejillos de indias preinmunizados con antígenos del cólera, su posterior introducción en la cavidad abdominal de un cultivo altamente virulento de vibrio cholerae no causa infección en los animales, ya que en cavidad abdominal el patógeno se disuelve bajo la influencia de anticuerpos específicos.
Más tarde yo.
I. Mechnikov demostró que se produce una disolución similar del vibrio del cólera bajo la influencia del suero inmune en un tubo de ensayo, si se agrega suero fresco, una fuente de complemento, a los componentes principales. La disolución de bacterias bajo la acción de anticuerpos específicos en presencia de complemento se denomina reacción de bacteriólisis.
Al configurar la reacción de bacteriólisis, primero se prepara una serie de diluciones de 10 veces del suero de prueba. Luego, se agrega la misma cantidad (1-2 gotas) de suspensión microbiana a cada tubo de ensayo. Se añade complemento a la mezcla. Después de la incubación a 37 °C, la mezcla se inocula de cada tubo en un medio nutritivo para determinar la presencia o ausencia de bacterias viables.
La reacción se puede usar para detectar anticuerpos usando un microorganismo conocido o para determinar el tipo de microbios usando un suero inmunológico de diagnóstico.
EN trabajo practico los bacteriólogos rara vez utilizan esta reacción, principalmente para diferenciar el cólera de los vibriones similares al cólera.
reacción de hemólisis
El mecanismo de la hemólisis es similar al de la bacteriólisis.
Los eritrocitos utilizados en la reacción son el antígeno. La fuente de anticuerpos es el suero antieritrocitos (por ejemplo, si se utilizan eritrocitos de oveja en la reacción, entonces el suero necesario con anticuerpos antieritrocitos específicos se obtiene de conejos inmunizados con eritrocitos de oveja).
El suero de sangre de cobaya se usa con mayor frecuencia como complemento en las reacciones de lisis, ya que contiene significativamente más complemento que en los sueros de otros animales.
En aquellos casos en que los anticuerpos en presencia del complemento destruyen los eritrocitos, se libera hemoglobina y la mezcla reactiva de una suspensión turbia de eritrocitos se convierte en un líquido rojo transparente (laca de sangre).
Esta reacción se llama hemólisis. En la práctica de laboratorio, se utiliza como indicador de la adsorción del complemento en la reacción de fijación del complemento.
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RA fue desarrollado por primera vez por M. Gruber en 1896. La esencia de la reacción es la interacción del anticuerpo con el antígeno, lo que resulta en el pegado (aglutinación) de microbios con la formación de escamas, grumos visibles a simple vista. La AR es ampliamente utilizada para diagnóstico serológico muchos infecciones bacterianas(brucelosis, muermo, salmonelosis, colibacilosis, etc.) y para la identificación serológica de especies y tipos de microorganismos aislados. Existen varios métodos para configurar la AR: probeta (volumétrica), goteo (placa), gota de sangre, reacción de anillo con leche, reacción de hemaglutinación y sus variantes (RHGA, RNHA), prueba de antiglobulina de Coombs, etc. ^ – en lugar de suero, se toma sangre. Ajuste la reacción de la placa. Diagnosticar pullorosis de pollos y pavos, micoplasmosis de pollos. reacción de Coombs permite la detección de anticuerpos incompletos. Estos últimos son monovalentes, por lo que inhiben la formación de aglutinados. El método se basa en el uso de suero de antiglobulina, que sirve como intermediario para la conexión de anticuerpos incompletos fijados en antígenos corpusculares (eritrocitos, bacterias). ^ - no se aplica a reacciones serológicas y diagnósticamente precisas, sin embargo, le permite detectar el antígeno - hemaglutinina y establecer propiedades hemaglutinantes (la capacidad de aglutinar glóbulos rojos) en algunas bacterias y micoplasmas. RNGA- en los últimos años ha ocupado uno de los lugares principales en serodinámica. Su esencia radica en el hecho de que las moléculas de proteína del antígeno del patógeno o anticuerpo correspondiente se adsorben previamente en los eritrocitos de una oveja u otro animal tratado con tanino. Luego ponga la reacción mezclando eritrocitos sensibilizados con sueros sanguíneos de animales enfermos o en el segundo caso con el antígeno en estudio. En presencia de suero spec. Los anticuerpos contra este antígeno (o viceversa) se produce aglutinación de eritrocitos: la reacción es positiva. Propuesto por R. Kraus en 1897. La precipitación es un fenómeno observado durante la interacción de anticuerpos-precipitinas y antígeno-precipitinógeno. La esencia de la reacción es cambiar la dispersión de los coloides del antígeno y su precipitación bajo la influencia de anticuerpos específicos en el suero inmune. La RP puede colocarse en tubos de ensayo en medio líquido (reacción de precipitación anular) o en gel de agar (RDP lamelar). La reacción de precipitación en anillo fue propuesta por primera vez por Ascoli (1910), es la más utilizada para el diagnóstico del ántrax. Al realizar pericia veterinaria RP es un método para determinar la falsificación de carne, harina y otros productos. Significado especial esta reacción tiene un examen médico forense en la determinación del tipo de sangre. Sin embargo, el uso de la reacción de precipitación en un medio líquido no permite caracterizar la heterogeneidad de los antígenos, es decir, el número y la concentración de antígenos en la preparación. Esta información se puede obtener colocando RP en un gel (generalmente agar). Al tener una velocidad de movimiento, diferentes antígenos del fármaco se difunden de manera diferente, formando precipitados en el espesor del gel transparente en el lugar donde se encuentran con el anticuerpo homólogo. La localización y concentración de las líneas de precipitina será característica de cada componente de la preparación antigénica, lo que sirve como criterio de calidad de la misma. Al diluir la preparación, es posible caracterizar el contenido relativo de antígenos en ella. Se han desarrollado varios métodos para establecer RDP: el método de difusión unidimensional directa según Uden (1946), el método de inmunodifusión radial simple según Mancini (1963), el método de doble difusión en gel de agar según Ouchterlony (1948 ), etc. ^
(PH) en el modelo toxinas tetánicas y antitoxinas. La esencia de la RN radica en la capacidad de los anticuerpos homólogos del suero inmunitario para suprimir (neutralizar) las propiedades infecciosas del agente causante de la enfermedad o sus productos metabólicos. Para establecer el resultado de la reacción con una mezcla de antígeno-anticuerpo infectar animales de laboratorio, CC, EC. Un indicador de pH positivo es la ausencia de muerte de los sistemas de prueba biológicos. EN práctica bacteriana La RN se utiliza en el diagnóstico de enterotoxemia anaeróbica, botulismo, etc. La RN se realiza para detectar y titular toxinas, toxoides o antitoxinas. Se utiliza para detectar anticuerpos en suero sanguíneo y para detectar antígenos en el material de prueba (para brucelosis, muermo, rickettsiosis, tuberculosis, etc.). Esta reacción pertenece a la reacción indirecta de dos sistemas. Tiene 5 componentes:
Los componentes 3,4,5 conforman el sistema indicador. Si el antígeno y el anticuerpo del suero de prueba se corresponden entre sí en otro, surge un complejo inmunitario antígeno-anticuerpo, que se une y extrae el complemento del medio donde tiene lugar la reacción. En ausencia de anticuerpos correspondientes al antígeno en el suero de prueba, el complejo especificado no se forma; el complemento permanece libre. Dado que estos son procesos invisibles, para resolver la cuestión de qué sucedió con el complemento, los componentes del sistema hemolítico se introducen en el tubo de ensayo como indicador: suero hemolítico + eritrocitos. Si el complemento se une al sistema bacteriológico, no se producirá hemólisis de los eritrocitos, el resultado es positivo: el suero contiene anticuerpos. La presencia de hemólisis sirve como indicador de la presencia de complemento libre en el sistema bacteriológico, que solo es posible en ausencia de anticuerpos en el suero de prueba: el resultado es negativo. RSC procede bajo estricto proporciones cuantitativas componentes Esto se logra mediante su titulación preliminar (el complemento y el suero hemolítico se titulan el día de la reacción; el antígeno microbiano, una vez cada 2-3 meses). La titulación es la determinación de la menor cantidad de uno u otro componente en la reacción para llevar a cabo la reacción, un exceso o deficiencia es una distorsión de los resultados. La RDSC es una variante de la CSC, pero se diferencia en que la primera fase de la reacción transcurre durante 16 a 18 horas en frío (40 °C), lo que aumenta la sensibilidad debido a una adsorción más prolongada del complemento por parte del complejo antígeno-anticuerpo. |
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reacción de precipitación
La precipitación y la aglutinación son reacciones bastante similares que difieren principalmente sobre la base de propiedades físicas AG.
En el primer caso, se presenta en forma soluble, en el segundo, en formas corpusculares. RP se basa en la formación de un precipitado durante la reacción AG-AT. La RP es altamente específica y sensible.
Ingredientes de reacción:
1. antígeno soluble o hapteno (precipititógeno);
2. AT - precipitinas (suero precipitante inmune; obtenido por inmunización de conejos con soluciones apropiadas de antígenos);
reacción de precipitación
solución isotónica de cloruro de sodio o gel de agar.
Métodos de configuración de RP:
1) RP en soluciones - r.
precipitación de anillos;
2) PR en gel.
La reacción de precipitación en anillo se coloca en tubos de precipitación estrechos en los que se vierten los sueros de precipitación.
Luego vierta la solución de precipitinógeno. Con una reacción positiva, aparece un anillo de precipitación turbia en la interfaz de los ingredientes.Un ejemplo de este método de establecimiento de RP es la reacción de termoprecipitación de Ascoli, que se utiliza para detectar un hapteno termoestable del patógeno del ántrax, extraído de órganos animales, piel y lana por extracción durante la ebullición Una de las variedades de RP en el gel (reacción de Ouchterlony) le permite determinar la toxigenicidad bacilo de la difteria con suero antitóxico.
En una placa de Petri con medio nutritivo colocar una tira de papel filtro impregnado con suero diftérico antitóxico e inocular con los cultivos estudiados en forma de trazos perpendiculares a la tira de papel. Incubado a 37 PS durante el día. En presencia de un cultivo toxigénico, se forman líneas de precipitación en el sitio de interacción de la toxina con la antitoxina.La reacción de precipitación en el gel se denomina inmunodifusión.
A menudo por foresis en gel - inmunoelectroforesis. Principio del método: el antígeno estudiado se fracciona electroforéticamente. las fracciones obtenidas se analizan por el método de doble difusión utilizando antisuero.
La reacción de Ascoli se utiliza para diagnosticar el ántrax con el fin de detectar el antígeno del bacilo del ántrax. Para configurar una reacción de precipitación, debe tener: precipitinógeno - hapteno B.
Antrachis (extracto de tejido), precipitina (suero precipitante de ántrax) y solución salina.
Preparación de termoprecipitinógeno.
1. Vierta 10 ml de solución salina fisiológica en un matraz que contenga 1 g de piel triturada o 1 ml de cultivo de B. anthracis.
2. Coloque el matraz en un baño hirviendo durante 30-45 minutos.
3. Filtrar a través de amianto. El filtrado debe ser completamente claro. Para la reacción de precipitación, el filtrado se diluye 100 veces o más.
Configuración de la reacción de precipitación del anillo.
1) Se vierten en el tubo de precipitación 0,3 ml de suero de precipitación entero o diluido 1:5, 1:10.
2) Se coloca cuidadosamente una capa de precipitinógeno a lo largo de la pared del tubo.La reacción se considera positiva si se forma un anillo turbio de proteína precipitada en el borde de dos líquidos no más tarde de 5 a 15 minutos.
Al configurar la reacción de precipitación, se utilizan los siguientes controles:
a) antígeno y solución salina;
b) suero específico y físico.
c) antígeno y suero no específico.
No debe haber turbidez en todos los tubos de control.Para la reacción de precipitación, se utilizan tubos de precipitación especiales de 40-60 mm de alto y 4-5 mm de diámetro, la precipitación en tubos estrechos ocurre mucho más rápido y se manifiesta más claramente que en los tubos de ensayo ordinarios. , se lavan y secan minuciosamente, de manera que su cristal quede completamente transparente y seco.
En la reacción de precipitación, se precipita un complejo inmune específico, que consta de un antígeno soluble (lisado, extracto, hapteno) y un anticuerpo específico en presencia de electrolitos.
El anillo turbio o precipitado formado como resultado de esta reacción se llama precipitado. Esta reacción difiere de la reacción de aglutinación principalmente en el tamaño de las partículas de antígeno.
La reacción de precipitación suele utilizarse para determinar el antígeno en el diagnóstico de diversas infecciones (ántrax, meningitis, etc.); en medicina forense - para determinar las especies de sangre, esperma, etc.; en estudios sanitarios e higiénicos - al establecer falsificación de productos; con su ayuda determinar la relación filogenética de animales y plantas. Para la reacción necesitas:
1. Anticuerpos (precipitinas) - suero inmune con un alto título de anticuerpos (no inferior a 1:100.000). El título del suero precipitante está determinado por la dilución más alta del antígeno con el que reacciona. El suero generalmente se usa sin diluir o diluido. 1:5 -1:10.
2. Antígeno: sustancias disueltas de naturaleza proteica o polisacárida lipoide (antígenos completos y haptenos).
3. Solución isotónica.
Los principales métodos para llevar a cabo la reacción de precipitación son: reacción de precipitación en anillo y reacción de precipitación en agar (gel).
¡Atención! Todos los componentes involucrados en la reacción de precipitación deben ser completamente transparentes.
Reacción de precipitación de anillos. Se añaden 0,2 - 0,3 ml (5-6 gotas) de suero al tubo de precipitación con una pipeta Pasteur (el suero no debe caer sobre las paredes del tubo). El antígeno se coloca cuidadosamente en capas sobre el suero en el mismo volumen, vertiéndolo con una pipeta Pasteur delgada a lo largo de la pared del tubo de ensayo. El tubo de ensayo se mantiene en una posición inclinada. Con la estratificación adecuada, debe obtenerse un límite claro entre el suero y el antígeno. Con cuidado, para no mezclar el líquido, coloque el tubo de ensayo en un trípode. Con un resultado positivo de la reacción, se forma un "anillo" turbio en el borde del antígeno y el anticuerpo: un precipitado.
Reacción de precipitación en agar(gel). La peculiaridad de la reacción es que la interacción del antígeno y el anticuerpo se produce en un medio denso, es decir, en gel. El precipitado resultante da una banda turbia en el espesor del medio. La ausencia de una banda indica un desajuste entre los componentes de la reacción. Esta reacción se utiliza ampliamente en la investigación biomédica, en particular en el estudio de la formación de toxinas en el agente causante de la difteria.
Reacción de lisis (citólisis inmune)
lisis inmune- esta es la disolución de las células bajo la influencia de anticuerpos con la participación obligatoria del complemento. Para la reacción necesitas:
1. Antígeno microbios, eritrocitos u otras células.
2. Anticuerpo(lisina) - suero inmune, rara vez el suero del paciente. El suero bacteriolítico contiene anticuerpos implicados en la lisis de bacterias; hemolítico: hemolisinas que contribuyen a la lisis de los glóbulos rojos; para la lisis de espiroquetas, se necesitan espiroquetolizinas, células - itolizinas, etc.
3. Complementar. La mayor parte del complemento en el suero de cobayos. Este suero (mezcla de varios animales) se suele utilizar como complemento.
4. Solución isotónica.
reacción de precipitación.
| Nombre del parámetro | Significado |
| Tema del artículo: | reacción de precipitación. |
| Rúbrica (categoría temática) | Educación |
Reacción de precipitación (RP) - ϶ᴛᴏ precipitación de un antígeno soluble bajo la acción de anticuerpos en presencia de un electrolito. Efecto de reacción visible (fenómeno de precipitación) - turbiedad (formación de anillo turbio o sedimento - precipitado).
La RP se utiliza para detectar un antígeno desconocido en varios enfermedades infecciosas: con ántrax, tularemia, meningitis, viruela. En medicina forense, se utiliza para determinar el tipo de sangre, semen; en investigación sanitaria e higiénica - para establecer la falsificación de productos alimenticios. RP es muy sensible y puede detectar antígeno en diluciones de 1:1.000.000 y 1:10.000.000.
Componentes de la reacción de precipitación.
1. Antígeno (precipitinógeno) - es un antígeno de naturaleza molecular, que se encuentra en estado finamente disperso (soluble). Precipitinógenos - ϶ᴛᴏ varios lisados o extractos de tejidos, etc.
Alojado en ref.rf
Un precipitinógeno difiere de un aglutinógeno en el tamaño de las partículas de antígeno. aglutinógeno Tiene tamaños de celda(estas no son células enteras destruidas), pero las dimensiones precipitinógeno acorde con tamaño molecular(estas son proteínas y sus complejos con carbohidratos o lípidos). solución de precipitinógeno transparente.
2. Anticuerpos (precipitinas) se encuentran en suero humano o en sueros precipitantes para diagnóstico inmunitario que contienen anticuerpos conocidos.
3. Electrólito- solución isotónica de cloruro de sodio.
Obtención de precipitinógeno.
Se obtiene triturando el material y extrayéndole los antígenos proteicos por ebullición o por otros métodos.
Ejemplos de precipitinógenos: lisados o extractos de varios órganos y tejidos, suero de sangre extraña (el suero es solución, en primer lugar, varios proteínas), filtrados de caldos de cultivo de microbios, extractos de sal de microbios, autolisados, etc.
Obtención de sueros precipitantes.
Obtenido por hiperinmunización de conejos con precipitinógenos apropiados. Dichos sueros contienen anticuerpos contra los precipitinógenos con los que se inmunizaron los conejos.
Ejemplos de precipitación de sueros: precipitando el suero del ántrax(contiene anticuerpos contra los antígenos del ántrax), precipitación de suero antimeningocócico(contiene anticuerpos contra los antígenos del agente causante de la meningitis), etc.
título precipitación de suero - ϶ᴛᴏ la dilución más alta de precipitinógeno, en la que el suero todavía da una reacción de precipitación.
Formas de establecer RP.
1. Reacción de precipitación de anillo - llevado a cabo en tubos de precipitación especiales (diámetro - 0,4-0,5 cm, altura - 7-8 cm). Se añaden 0,2 - 0,3 ml de suero de precipitación al tubo de ensayo y se deposita cuidadosamente la misma cantidad de precipitinógeno a lo largo de la pared con la punta larga de una pipeta Pasteur. A continuación, con cuidado posicion horizontal Los tubos se colocan verticalmente.
Contabilización de los resultados de la reacción se lleva a cabo por la aparición de un anillo blanco en el borde del antígeno-anticuerpo. Con una reacción positiva se observa tal anillo. En este caso, el antígeno corresponde al anticuerpo y se produce su unión.
Si se hierve y se filtra extractos acuososórganos y tejidos, entonces la reacción generalmente se llama la reacción precipitación térmica (por ejemplo, en el diagnóstico de ántrax).
2. reacción de precipitación de gel - se lleva a cabo en cajas Petri o sobre portaobjetos de vidrio, donde se coloca una capa de gel de agar. Cuando el gel se solidifica, se cortan pocillos en los que se colocan antígenos o anticuerpos, o ambos. Distinguir 2 métodos PR en gel:
un método inmunodifusión simple (radial): uno de los componentes de la reacción inmune (antígeno o anticuerpo) se coloca en el pocillo y el otro componente se mezcla con agar; con un resultado positivo (antígeno corresponde a un anticuerpo) alrededor del pocillo se forma anillo de precipitado ;
b) método inmunodifusión doble: tanto el anticuerpo como el antígeno se colocan en pozos separados, se difunden en el gel de agar uno hacia el otro; con un resultado positivo donde los anticuerpos y los antígenos se encuentran líneas de precipitación.
Un ejemplo de RP en gel es la reacción de inmunodifusión doble de Ouchterlony en el diagnóstico de la difteria
inmunoelectroforesis - es un método que combina el método de electroforesis y la reacción de precipitación. Una mezcla de antígenos (por ejemplo, proteínas del suero sanguíneo) se separa en un gel mediante electroforesis. Luego, para encontrar y determinar la proteína deseada (antígeno desconocido), se utiliza un suero precipitante de diagnóstico que contiene anticuerpos contra esta proteína (anticuerpo conocido). Para ello, se introduce suero de diagnóstico en el surco paralelo a las proteínas. Si entre las proteínas hay una que corresponde al anticuerpo en el suero, entonces a su alrededor se forman líneas de precipitación.
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