Причини аглютинації еритроцитів, її види та антиглобуліновий тест. Холодова аглютинінова хвороба (хаб)

Захворювання крові

Холодові аглютиніни

Холодові аглютиніни, або кріопротеїни, є антитілами, що взаємодіють з антигенами оболонки еритроцитів. При цьому може активуватися система комплементу, викликаючи аутоімунну реакцію, що призводить до агрегації та руйнування еритроцитів, але тільки при низьких температурах. Ця патологія зустрічається переважно у хворих старше 50 років. Антитіла можуть бути представлені IgM, IgG або IgA, у першому випадку аглютинація виражена значно. Існують лабораторні методи діагностики холодових аглютинінів та визначення температури початку аглютинації. Зазвичай причиною виникнення холодових аглютинінів є інфекція, найчастіше вірусна. Їхня кількість може поступово зменшуватися, тому при їх виявленні операцію в умовах гіпотермії та із застосуванням холодової кардіоплегії краще по можливості відкласти. Можна також визначити титри холодових аглютинінів при різної температурикрові, і при перфузії уникати охолодження до температури, за якої може наступити аглютинація. Якщо ж потрібна глибша гіпотермія, потрібно провести плазмаферез, видаливши антитіла, що містяться в сироватці. При високих титрах холодових аглютинінів охолодження може призвести до серйозних ускладнень: періопераційного ІМ, ниркової недостатності, гемолітичної анемії, тромбозів Планування операції у таких хворих має бути особливо ретельним, спрямованим на те, щоб уникнути охолодження хворого. Гемодилюція при ІЧ в деякій мірі знижує ризик аглютинації, проте цей ефект недостатньо передбачуваний, тому ідо, і під час, і після ІЧ хворий не повинен охолоджуватися. Бажано використовувати водяний матрац з підігрівом, ІЧ слід проводити при нормотермії, підігрів попередньо розчин, що заповнює систему. Якщо під час ІЧ вводиться еритроцитарна маса, її необхідно попередньо зігріти. Якщо необхідне застосування холодної кардіоплегії, то вона має бути кристалоїдною, яка не містить крові. Починають у разі з введення 200 – 300 мл теплого розчину, який вимиває кров з коронарних артерій, потім вводять холодний розчин. Температура холодного кардіоплегічного розчину така, що практично напевно призведе до аглютинації, тому кардіоплегія, що містить кров, вводиться лише теплою. Безпосередньо перед зняттям затиску з аорти доцільно ввести теплий кардіоплегічний розчин, щоб кров, що надходить у коронарні артерії, не охолоджується.

Серповидно – клітинна анемія

У нормі в людини еритроцити містять переважно гемоглобін А, серповидно – клітинна анемія обумовлена ​​вмістом в еритроцитах аномального гемоглобіну S. У гомозиготних за цією ознакою хворих еритроцити містять переважно гемоглобін S, клінічно це проявляється серповидно – клітинною анемією. У гетерозиготних хворих на гемоглобін S становить менше 45% від загальної кількості, вони є носіями гена захворювання. При серповидно-клітинній анемії еритроцити мають характерну форму серпа чи півмісяця, менш рухливі, схильні до агрегації та швидше руйнуються. При низькому вмісті кисню серпоподібні еритроцити можуть брати в облогу. У хворих серповидно - клітинною анемією крім власне анемії відзначають внутрішньосудинні тромбози. При кризі (або кризі – не певен, не пам'ятаю) виникає оклюзія кровоносних судин, що супроводжується больовим синдромом, задишкою та судомами.

Тактика проведення перфузії має бути спрямована на те, щоб уникнути кризи з усіма його наслідками. Необхідно підтримувати високий рівень насичення киснем та не охолоджувати хворого. У хворих з переважним вмістом гемоглобіну S насичення еритроцитів киснем має бути не нижче 85%, у хворих із частковим вмістом гемоглобіну S – не нижче 40%. Хворим з частковим вмістом гемоглобіну S під час ІЧ необхідно підтримувати високий рівень насичення киснем та не допускати ацидозу, що сприяє руйнуванню серповидних еритроцитів. Дотримуючись цих правил, ускладнень зазвичай вдається уникнути. Охолодження також сприяє порушенню функції серповидних еритроцитів, тому охолодження краще уникати, застосовувати теплу або кристалоїдну кардіоплегію так само, як при холодових аглютинінах. Гемодилюція при перфузії грає також позитивну роль. З метою профілактики порушення прохідності судин слід застосовувати вазодилататори.

Лабораторне дослідження, спрямоване на виявлення аутоантитіл, що викликають аглютинацію та гемоліз еритроцитів за низьких температур.

Синоніми росіяни

Холодові аглютинини, дослідження повних холодових аглютинінів.

Синоніми англійські

Cold agglutinins blood test, Cold Autoantibodies, Cold-Reacting Antibodies.

Метод дослідження

Реакція аглютинації.

Який биоматериал можна використовуватиме дослідження?

Венозну кров.

Як правильно підготуватись до дослідження?

• Не курити протягом 30 хвилин до дослідження.

Загальна інформація про дослідження

Аутоімунні гемолітичні анемії (АІГА) виникають внаслідок зриву внаслідок низки причин імунологічної толерантності та вироблення антитіл проти власних еритроцитів. Розрізняють теплові та холодові аутоантитіла. Теплові найефективніше зв'язуються з еритроцитарними антигенами за температури 37 °С, а холодові – при 4-18 °С. Залежно від ефекту, який аутоантитіла виявляють на еритроцити у пробірці, виділяють гемолізини (руйнують клітини) та аглютиніни (викликають склеювання еритроцитів між собою).

Автоімунна гемолітична анеміяз холодовими аглютинінами – відносно рідкісна форма імунних гемолітичних анемій (за деякими даними, 20% усіх випадків АІГА). Можливо як ідіопатичної (причина виникнення невідома), і симптоматичної. Ідіопатичний варіант частіше зустрічається в осіб похилого та старечого віку(60-80 років), в той час як симптоматичний може виникати в дитячому та юнацькому віці, ускладнюючи перебіг мікоплазмової пневмонії, інфекційного мононуклеозу, легіонельозу, а також системних аутоімунних захворювань(системна червона вовчанка, ревматоїдний артрит). У людей похилого віку АІГА з холодовими аглютинінами часто асоційована з лімфопроліферативними захворюваннями, такими як хронічний лімфолейкозта макроглобулінемія Вальденстрема

Холодові аглютиніни – це найчастіше IgM, рідше – представлені сумішшю імуноглобулінів різних класів. Вони зв'язуються з мембраною еритроцитів за низьких температур і приєднують комплемент - сімейство сироваткових білків, які руйнують мічені антитілами клітини. Після приєднання комплементу на мембрані еритроцита утворюється мембраноушкоджуючий комплекс, формування якого призводить до утворення великої кількостіпір в оболонці клітини, її набухання та руйнування.

Як лабораторний маркер аутоімунного гемолізу, обумовленого холодовими аглютинінами, доцільно використовувати виявлення в сироватці крові пацієнта антитіл, що призводять до аглютинації еритроцитів у процесі інкубації при низьких температурах.

Сучасним методом постановки тесту на холодові аглютинини є реакція аглютинації в гелі. У мікропробірки, що містять нейтральний гель, додають завись донорських еритроцитів. Потім додають сироватку, що досліджується, і інкубують при температурі 2-8 °С. За наявності у досліджуваній сироватці холодових аглютинінів у процесі інкубації при низьких температурах вони зв'язуються з еритроцитами та викликають їхню аглютинацію. Оцінка результату тесту проводиться після центрифугування, в процесі якого відбувається поділ аглютинованих та неаглютинованих еритроцитів. Неаглютиновані еритроцити мають розмір, який можна порівняти з розміром частинок гелю, і вільно проходять крізь них під дією відцентрової сили, формуючи на дні мікропробірки компактний осад червоного кольору, а аглютиновані еритроцити через великих розмірівзатримуються на поверхні гелю або у його товщі.

Навіщо використовується дослідження?

• Для виявлення у сироватці крові пацієнта антиеритроцитарних антитіл, що спричиняють гемоліз при низьких температурах.

Коли призначається дослідження?

• При підозрі на аутоімунну гемолітичну анемію з холодовими аглютинінами: характерна особливістьзахворювання – погана переносимістьхолоду, як і виявляються основні симптоми.

Що означає результати?

Референсні значення:не виявлено.

• Негативний результат – клітини утворюють компактний осад на дні мікропробірки – свідчить про відсутність холодових аглютинінів у досліджуваній сироватці.
• Позитивний результат - аглютиновані клітини утворюють червоний шар на поверхні або в товщі гелю - свідчить про наявність холодових антитіл у сироватці, що досліджується.

Що може впливати на результат?

• У низьких титрах холодові аглютиніни можуть виявлятися і в здорових людей.



Важливі зауваження

• При аутоімунній гемолітичній анемії з холодовими аглютинінами відбувається аутоаглютинація еритроцитів при кімнатній температурі, що створює проблеми та призводить до некоректних результатів при визначенні групи крові та підрахунку параметрів. периферичної крові(кількість еритроцитів та еритроцитарні індекси). Така аглютинація є оборотною при 37 °С, тому при нагріванні крові до температури тіла проблеми при проведенні досліджень усуваються.

Аглютинація еритроцитів – це біохімічний процесагрегації, злипання та випадання в осад червоних клітин крові, що протікає in vitro або in vivо.

Термін "аглютинація" згідно з перекладом з латинського "agglutinatio" означає "приклеювання". У біологічних системахабо лабораторному аналізіце склеювання та агрегація органічних частинок (бактерій, сперматозоїдів, клітин крові), що мають на своїй поверхні антигени-аглютиногени при взаємодії зі специфічними антитілами-аглютинінами. Сформований при цьому агломерат називається аглютинатом.

Навіть у нормі в крові людини можуть бути антитіла та антигени, що не викликають склеювання. Це компоненти системи антигенів АВО, які відповідають групі крові, антитіла, що з'являються як імунна відповідь при попаданні в організм певних бактерій або інших збудників інфекційних захворювань (дизентерія, черевний тиф).

Аглютинація еритроцитів

Реакція аглютинації за механізмом буває прямою (активною) та непрямою (пасивною). Ефект прямої аглютинації проявляється в організмі або пробі, коли структурні мембранні антигени еритроцитів починають взаємодіяти з власними плазмовими антитілами або компонентами бактеріальних клітин.

Пряма аглютинація застосовується при клінічних дослідженнях, Визначення групи крові або наявності резус-фактора Ефект пасивного склеювання повсюдно застосовується для встановлення діагнозу при інфекційних захворюваннях (бактеріальних, вірусних).

Чому відбувається аглютинація еритроцитів?

Аглютинація еритроцитарної маси стає наслідком біохімічної взаємодії молекул-антигенів, локалізованих у структурі мембрани кров'яної клітини з антитілами, що знаходяться в плазмі. Від цього знижується природний негативний заряд еритроцитів, відбувається їхнє зближення. Молекули аглютиніну, що не відповідає групі крові, можуть утворювати «містки» між еритроцитами. Як наслідок, формується тромб, розвивається гемолітична хвороба, аж до летального результату.

Склеювання еритроцитів (реакція гемаглютинації – РДА) обумовлено різними факторами, які залежать від характеру аглютинуючого агента на поверхні форменого елемента або в плазмі:

• Холодові аглютинини. Можуть бути виявлені в крові при хворобах, спричинених вірусами та бактеріями, деякими новоутвореннями та переохолодженнями, викликаючи симптоми внутрішньосудинного гемолізу. У низькому титрі холодові аглютинини можуть виявитися і у здорових людей, не викликаючи помітних гемолітичних проявів. за хімічної природице, як правило, білки-імуноглобуліни (найчастіше IgM). Активуються вони при зниженні температури нижче 37°С, наприклад, при попаданні крові у верхні або нижні кінцівкиабо інші ділянки тіла, схильні до переохолодження. Холодові аглютиніни в залежності від типу можуть проявляти активність і локалізуватися по-різному: діяти в широкому або вузькому температурному діапазоні, при відновленні температури залишатися фіксованими на поверхні еритроциту або перебувати у плазмі.
• Еритроцитарні антигени. Сьогодні виділено понад 400 систем антигенів, комбінація яких є індивідуальною для людини. Більшість з них має слабкі антигенні властивості і не викликає відчутну аглютинацію еритроцитів. Найбільш критичні при переливанні крові системи АВО та резус-приладдя, несумісність за якими може викликати злипання кров'яних клітинз наступним гемотранфузійним шоком.
• Гемаглютиногени, що визначають групу крові. У структурі еритроцитарних мембран є специфічні маркери-антигени глікопротеїдної природи (аглютиногени А та В), а в плазмі специфічні імуноглобулінові речовини-антитіла (аглютинини альфа та бета). Одна з чотирьох можливих комбінацій поєднання цих антигенів та антитіл визначає групу крові, яка закладена генетично і не може змінитись протягом життя. В організмі людини не можуть одночасно перебувати однойменні аглютиногени та аглютиніни, інакше відбувається склеювання еритроцитів з наступним гемолізом. Це одна з генетично вироблених реакцій організму, спрямована на збереження антигенної індивідуальності та базисний принциппереливання крові.

• Антигени системи резус . Резус-антигени (Rh) за хімічною природою є ліпопротеїдами. Антигени Rh-системи представлені декількома видами (C, E, D), найсильнішим є D-тип. Людей, які мають такий антиген, називають резус-позитивними, інших відповідно резус-негативними. Плазма за норми не містить антитіл до резус-антигенів. Вони з'являються через порушення правил переливання крові та у разі резус-конфлікту при вагітності.
• Вірусна та бактеріальна аглютинація еритроцитів. Агрегація еритроцитарної маси при певних вірусних або бактеріальних захворюванняхможе виявлятися через безпосередню взаємодію вірусу або бактерії з поверхневими структурними молекулами еритроцитів або через реакцію з титром імунізованої сироватки еритроцитів, спеціально сенсибілізованих потрібним антигеном (in vitro). Аглютинація кров'яних клітин відбувається після адсорбції вірусу на поверхні еритроциту. У більшості вірусів гемаглютинін є структурним компонентомвіріона.

Специфічні маркери антигени глікопротеїдної природи (аглютиногени А та В)

Лабораторні методики, засновані на реакціях аглютинації

Реакції аглютинації мають діагностичне значення. Це серологічні методики виявлення та дослідження антитіл або антигенів, присутніх у титрі сироватки пацієнтів на основі імунологічних реакцій, ідентифікації маркерів-антигенів бактерій та вірусів, визначення антигенної структури мікробного збудника

Реакції непрямої чи пасивної гемаглютинації (РПГА чи РНГА) – основа методик ідентифікації певних антигенів чи антитіл у крові пацієнта. Цей метод застосовують для встановлення збудника інфекційного захворювання, якісного та кількісного визначення гонадотропного гормону при підозрі вагітності З обладнання використовують предметні стекла, стерильні пробірки, пластикові планшетки з лунками-осередками.

Основним реактивом виступає так званий еритроцитарний діагностикум(ЕД), який може бути виготовлений за двома принципами:

• антигенний ЕД (застосовують частіше);
• Антильний ЕД.

Залежно від типу діагностикуму на поверхні еритроцитарної клітини адсорбують ідентифікований антиген або антитіло, які при подальшій реакції з відповідними антитілами або антигенами сироватки крові пацієнта провокують злипання формених елементіві формування фестоноподібного осаду, що рівномірно покриває дно пробірки або комірки. Якщо проба виявиться негативною, осад на дні пробірки буде іншого виду.

Для РПГА виготовляють діагностикум на основі клітин крові людини або тварин (кролик, баран, щур, кінь), які обробляють для консервації формальдегідом або іншими реактивами. Самі еритроцити для збільшення їхньої адсорбційної здатності сенсибілізують. спеціальними препаратами(Танін, хлористий хром, риванол).

Зворотний процес – реакція гальмування гемаглютинації

Деякі віруси (грипу, краснухи, кору, аденовіруси, чуми великого рогатої худоби) можуть провокувати аглютинування формених елементів. На реакціях, що зупиняють цей процес, базуються методики діагностики таких вірусних захворювань. Противірусні антитіла попередньо імунізованої сироватки протидіють вірусам, через що вони в результаті втрачають свою здатність викликати злипання еритроцитів.

Антиглобуліновий тест – реакція Кумбса

Пробу Кумбса виконують для ідентифікації неповних антитіл, що локалізуються в структурі мембрани еритроциту та викликають аглютинацію при додаванні спеціальної антиглобулінової сироватки. Розрізняють пряму та непряму реакцію Кумбса. Прямий антиглобуліновий тест виконують, якщо є підозри щодо присутності таких неповних антитіл на поверхні еритроциту.

Непряма пробаКумбса виконується з попередньою сенсибілізацією еритроциту відповідним антитілом та подальшим введенням антиглобулінового компонента. Виконують при діагностиці гемолітичної хворобиаутоімунної течії або у новонароджених, для встановлення резус-конфлікту між матір'ю (Rh-негативною) та дитиною (Rh-позитивною).

Непряма реакція Кумбса широко використовується трансфузіологами, тому що дає можливість з високою точністювизначити сумісність донорського матеріалуз кров'ю реципієнта за еритроцитарними антигенами.

Ще:

Призначення імуноглобуліну при резус конфлікті, показання та протипоказання

Виділяють дві форми цього захворювання: хвороба холодових аглютинінів та пароксизмальну холодову гемоглобінурію. При обох внутрішньосудинних імунних гемолізах може бути як первинним, так і вторинним. В останньому випадку він розвивається на тлі вірусних інфекцій (наприклад, інфекційного мононуклеозу), малярії, мікоплазмової пневмонії, гемобластозу або колагенозу. Автоімунна гемолітична анемія, викликана первинним внутрішньосудинним гемолізом, зазвичай протікає хронічно.

3. Хвороба холодових аглютинінів, обумовлена ​​вторинним внутрішньосудинним гемолізом,зустрічається при багатьох захворюваннях: інфекціях (мікоплазмова пневмонія, інфекційний мононуклеоз, кір, епідемічний паротитта інші вірусні інфекції, трипаносомози та малярія), колагенозах (рідко), гемобластозах (неходжкінські лімфоми, макроглобулінемія Вальденстрема, хронічний лімфолейкоз), саркомі Капоші. Слід наголосити, що при цих захворюваннях холодові аглютинини виявляються набагато частіше, ніж спостерігається гемоліз. У всіх перерахованих випадкахнасамперед лікують основне захворювання. В іншому лікування таке ж, як при хворобі холодових аглютинінів, викликаної первинним внутрішньосудинним гемолізом.

4. Пароксизмальна холодова гемоглобінурія - Рідкісна форма аутоімунної гемолітичної анемії. Гемоліз при цій хворобі виникає внаслідок двофазної реакції за участю IgG, які називають антитілами Доната-Ландштейнера. У першій фазі IgG при низькій температурі зв'язуються з еритроцитами та фіксують комплемент. У другій фазі, при температурі 37°C відбувається активація комплементу, що призводить до гемолізу. Антитіла Доната-Ландштейнера специфічні до P-антигена еритроцитів.

а.Клінічна картина.Пароксизмальна холодова гемоглобінурія часто зустрічається у хворих на сифіліс, особливо вроджений, може ускладнювати вірусні інфекції (кір, паротит, вітряну віспу, інфекційний мононуклеоз, грип), іноді буває первинним. Внутрішньосудинний гемоліз розвивається при зігріванні хворого після переохолодження. Прогноз сприятливий. Хворі зазвичай одужують самостійно. Іноді захворювання тече довго з періодичними гемолітичними кризами.

б.Лабораторні дослідження. Лабораторна діагностикапароксизмальної холодової гемоглобінурії заснована на виявленні антитіл Доната-Ландштейнера. Для цього 1) сироватку хворого змішують із нормальними еритроцитами групи 0; 2) інкубують 30 хв при температурі 4°C (для фіксації антитіл та комплементу на еритроцитах); 3) інкубують 30 хв при 37°C (для активації комплементу). Як негативний контроль використовують: 1) пробу з інактивованою нагріванням (для видалення комплементу) сироваткою хворого; 2) пробу із сироваткою хворого, інкубованої з еритроцитами групи 0 у зворотній послідовності (спочатку при 37°C, потім при 4°С).

в.Лікування. Хворі повинні уникати переохолодження.Кортикостероїди та спленектомія неефективні. Якщо потрібне переливання еритроцитарної маси, її підігрівають. Обов'язково лікують основне захворювання.

Аналіз на холодові аглютиніни - це аналіз крові, при якому вимірюється вміст цих антитіл в організмі. Холодові аглютинини виробляються нашим організмом у відповідь інфекцію. Вони змушують червоні кров'яні тільця збиратися разом за низьких температур. У здорових людей, як правило, низький рівеньхолодових антитіл у крові. Але лімфома та деякі інфекції (атипова пневмонія) підвищують рівень холодових аглютинінів.

Небагато підвищений рівеньхолодових аглютинінів зазвичай не завдає серйозних проблем. Іноді холодові аглютинини збирають червоні кров'яні тільця в групи, які застрягають у судинах розташованих близько до шкіри, що охолоджується. Це може призвести до збліднення шкіри та оніміння. У запущених випадках (при украй тривалому переохолодженні) це може призвести до гангрени.

Навіщо вимірювати холодові аглютинини?

Аналіз на холодові аглютинини робиться для того, щоб:

• З'ясувати, чи є холодові антитілапричиною аутоімунної гемолітичної анемії;
• Діагностувати атипову пневмонію.

У нашій клініці є профільні спеціалістипо данному питанню.

(4 спеціалісти)

2. Як підготуватися та як проводиться аналіз?

Як підготуватися до аналізу на холодові аглютинини?

Перед аналізом на холодові антитіла не потрібно готуватись.

Як проводиться аналіз на холодові аглютинини?

Рівень холодових антитіл вимірюється після взяття крові із вени. Забір крові проводиться за стандартною процедурою.

3. Які ризики та що може вплинути на аналіз?

Які ризики аналізу на холодові аглютиніни?

Можливі ризики аналізу крові на холодові антитіла можуть бути пов'язані тільки із самим забором крові. Зокрема, поява синців на місці пункції та запалення вени (флебіт). Теплі компресипо кілька разів на день позбавлять вас від флебіту. Якщо ви приймаєте препарати, що розріджують кров, то можлива кровотеча в місці пункції.

Що може перешкодити аналізу на холодові аглютиніни?

Результат аналізу на холодові аглютинини буде неточним, якщо ви приймаєте антибіотики, особливо пеніцилін та цефалоспорин.

Про що варто знати?

Більше половини людей, які страждають від атипової пневмонії, мають високий рівень холодових антитіл Проте для діагностики атипової пневмонії частіше проводять інші надійніші тести.

Якщо пов'язані червоні кров'яні тільця знаходять під час загального аналізукрові, то лікар може вимагати проведення аналізу на холодові аглютиніни.

Групу крові складніше визначити при високому рівні аглютиніну.

Якщо у людини спостерігається високий вмістхолодових агглютининов, у своїй він піддавався впливу низьких температур, йому необхідно тримати себе у теплі. Високий рівеньхолодових аглютинінів може призвести до анемії, обмороження або хвороби Рейно.