Helmintološke metode. Osnovne metode proučavanja protozoa

Protozoe se dijele u 4 klase:

Kada se encistira, mikroorganizam stječe zaobljeni oblik i prekriven zaštitnim omotačem. U obliku ciste, protozoe postaju manje osjetljive na nepovoljni faktori okoliš.

Sljedeće može biti predmet istraživanja:

Bilješka:Postoje mnoge vrste dijagnostike, a mi ćemo razmotriti one vrste koje su najčešće u kliničkoj laboratorijskoj praksi.

Privatne vrste dijagnostike

U svakom konkretnom slučaju laboratorijski pomoćnik ima zadatak pronaći određeni patogen, ponekad se uz glavni otkrivaju i drugi.

Postoji 6 vrsta ovog mikroorganizma koji može živjeti u ljudskom crijevu. Klinički značaj Ima samo dizenterična ameba koja se javlja u vegetativnom obliku i u obliku cista.

Dodatno se koriste imunološke metode:

• neizravna imunofluorescencija;
• neizravna aglutinacija (INA);
• radijalna imunodifuzija.

Bilješka: serološke metode su neinformativni i koriste se samo kao dodatak glavnim u sumnjivim slučajevima.

Dijagnostika trepljastih (ciliata)

Patogeni oblik mikroorganizama ovog roda je balantidij. To je mikrob koji uzrokuje balantidijazu, bolest praćenu ulceroznim procesom debelog crijeva. Uzročnik se otkriva u nativnom razmazu u obliku vegetativne forme i ciste. Materijal za bris (izmet i sluz) uzima se sigmoidoskopskim pregledom i sije na posebne podloge.

Dijagnostika flagelata (Leishmania, Giardia, Trypanosomes, Trichomonas)

Leishmania, tripanosomi, lamblia i trichomonas opasni su za ljude.

Lišmanija– mikrobi, izazivajući lišmaniozu, ispituju se u razmazima krvi, materijalima koštana srž, strugotine iz kožnih infiltrata. U nekim slučajevima, kada se dijagnosticira leishmania, koristi se kultura na hranjivim medijima.

Tripanosomi– uzročnici bolesti bolest spavanja(američka/afrička tripanosomijaza ili Chagasova bolest).

Afrička varijanta definirana je u početno razdoblje tijekom istraživanja periferne krvi. Kako bolest napreduje, patološki mikrobi nalaze se u materijalu punkcija limfnih čvorova, au uznapredovalim stadijima - u cerebrospinalnoj tekućini.

Za dijagnosticiranje tripanosoma ako se sumnja na Chagasovu bolest, materijal koji se ispituje ispituje se pod mikroskopom pri malom povećanju. U ovom slučaju, mrlje i debela kap su prethodno obojeni.

Trichomonas(crijevne, oralne,) otkrivaju se mikroskopijom materijala uzetih sa zahvaćene sluznice.

Identifikacija sporozoa (malarični plazmodij, uzročnik kokcidoze i dr.)

Najčešća i najopasnija vrsta za ljude je malarijski plazmodij, koji ima 4 glavne vrste patogena: tercijanska malarija, četverodnevna malarija, tropska malarija a malarija ovalna.

Spolni razvoj plazmodija (sporogonija) odvija se kod komaraca Anopheles. Aseksualna (tkivna i eritrocitna shizogonija) – u tkivu i eritrocitima ljudske jetre. Ove značajke životni ciklus mora se uzeti u obzir pri postavljanju dijagnoze malaričnog plazmodija.

Tako se u krvi tek oboljelog pacijenta mogu detektirati zametne stanice ciklusa sporogonije. Ali na vrhuncu napada malarije, shizonti se pojavljuju u velikom broju u krvi.

Štoviše, u različite faze malarična groznica pojaviti se raznih oblika plazmodij:

• tijekom razdoblja hladnoće krv se puni merozoitima, vrstom shizonta;
• pri povišenim temperaturama u eritrocitima se nakupljaju prstenasti trofozoiti;
• smanjenje temperature karakterizira prevlast trofozoita sličnih amebi;
• tijekom razdoblja normalno stanje krv sadrži odrasle oblike shizonta.

Proučavanje uzročnika malarije (malarijski plazmodij) provodi se u razmazu i debeloj kapi.

Bilješka:Dijagnoza malarije pregledom razmaza i debelih kapi krvi ponekad je pogrešna. Krvne pločice u nekim slučajevima mogu se pogrešno pripisati uzročniku malarije. Također ponekad fragmenti leukocita i drugih stanica simuliraju plazmodij.

Osnovne metode proučavanja protozoa

Pogledajmo ukratko najčešće metode istraživanja prisutnosti protozoa.

Dijagnostika protozoa pomoću nativnog brisa i brisa obojenog Lugolovom otopinom (u stolici)

Lijek se priprema iz emulzije izmeta u izotoničnoj otopini. Dvije kapi natrijeva klora i Lugolovu otopinu nanesu na predmetno staklo. Ispitni materijal se dodaje u obje kompozicije pomoću drvenog štapića i nakon prekrivanja staklom se promatra u različitim rezolucijama mikroskopa.

Pronađene protozoe bilježe se na temelju određenih karakteristika. Za točnost pripremite 2-3 preparata od istog materijala. U sumnjivim slučajevima, analiza se ponavlja nekoliko puta tijekom 2-3 tjedna.

Metoda može otkriti vegetativne i cistične oblike:

• lamblia;
• balantidij;
• dizenterična ameba.

Uz patogene oblike identificiraju se i nepatogene protozoe. Također zdravi kliconoše postoje luminalni i cistični oblici.

Važno:istraživanje treba provoditi više puta kako bi se izbjegle netočnosti i pogreške.

Nalaz dijagnostike protozoa metodom nativnog i obojenog razmaza treba sadržavati opis oblika uzročnika (luminum, cista, tkivo).

Zahtjevi istraživanja:

• materijal uzet za analizu (tekući izmet) ispituje se najkasnije 30 minuta nakon defekacije;
• formalizirana stolica mora se dijagnosticirati unutar 2 sata nakon defekacije;
• materijal ne smije sadržavati nečistoće ( dezinfekcijska sredstva, voda, urin);
• za rad s materijalom koristite samo drvene štapiće, staklene nisu prikladne zbog klizanja sluzi;
• Štapići se moraju spaliti odmah nakon upotrebe.

Metoda konzerviranja (pregled stolice) za dijagnosticiranje protozoa

Studija se provodi fiksiranjem protozoa s konzervansom. Razlika između ove metode i prethodne je u tome što vam konzervansi omogućuju dugotrajno očuvanje lijeka.

Konzervansi koji se koriste:

• Barrow. Sadrži sastojke konzervansa: 0,7 ml natrijevog klorida, 5 ml formalina, 12,5 ml 96% alkohola, 2 g fenola i 100 ml destilirane vode. Sastav za bojanje: 0,01% otopina tionina (azura).
• Safarlijevo rješenje. Sastojci: 1,65 g cink sulfata, 10 ml formalina, 2,5 g kristalnog fenola, 5 ml octena kiselina, 0,2 g metilen plavog, 100 ml vode. Ovaj konzervans se koristi u slučajevima kada se materijal mora čuvati više od mjesec dana.

Prazne boce se pune konzervansom, u njih se pretače materijal u omjeru 3:1, te se po potrebi dodaje boja. Rezultati se procjenjuju proučavanjem 2-3 lijeka.

Metoda obogaćivanja formalin-eterom (analiza na prisutnost protozoa u fecesu)

Ova dijagnostička metoda omogućuje vam odvajanje i koncentriranje cista protozoa. Za analizu su potrebni sljedeći sastojci: formaldehid (10 ml), 0,85 g izotonične otopine, destilirana voda, sumporni eter, Lugolova otopina.

Smjesa biomaterijala s navedenim tekućinama se miješa i centrifugira. Dobiveni sediment na dnu epruvete boji se Lugolovom otopinom i ispituje se na prisutnost cista i vegetativnih oblika.

Metoda otkrivanja leishmanije (bris koštane srži)

Za dijagnosticiranje lišmanioze koriste se sljedeći reagensi: Nikiforovljeva smjesa (sumporni eter i etanol), fosfatni pufer, Azur-eozin po Romanovskom.

Supstanca koštane srži se nakon toga vrlo pažljivo stavi na predmetno staklo posebni trening. Koristi se mikroskop s imerzijskim sustavom.

U akutno razdoblje bolesti se otkrivaju u punktatu veliki broj lišmanija.

Bilješka:Ponekad krvne stanice može nalikovati prerađenoj lišmaniji, stoga je vrlo važno da laboratorijski tehničar bude oprezan i ima dovoljno iskustva za samostalno istraživanje.

Metoda otkrivanja lišmanije u razmazu kožnog infiltrata

Potrebni reagensi slični su prethodnim analizama.

Ispitni materijal se uzima iz postojećeg tuberkuloznog ili ulceroznog sadržaja. Ako se sumnja na lišmaniozu, struganje se radi vrlo pažljivo skalpelom, bez krvi. Zatim se preparat priprema na staklu. Kako bi se osigurala točnost dobivenih rezultata, istovremeno se ispituje nekoliko preparata.

U prisutnosti bolesti, lišmanija se otkriva i među makrofagima, fibroblastima i limfoidnim stanicama prisutnim u ispitivanom materijalu.

Metoda izolacije čiste kulture lišmanije dobivene struganjem patoloških tkiva

Ovom metodom dijagnosticiranja protozoa, strugotine tkiva stavljaju se u poseban hranjivi medij, u kojem dolazi do aktivne reprodukcije Leishmanije.

Prije uzimanja struganja, koža se temeljito tretira alkoholom, zatim se napravi rez u tuberkulozu, s čijeg se dna uklanja sadržaj i stavlja u epruvetu s medijem. Materijal se uzima nekoliko puta, nakon čega se stavlja u različite epruvete. Zatim se uzgaja u termostatu na temperaturi od 22-24 stupnja. Rezultati se procjenjuju pod mikroskopom. Ova metoda se koristi kada drugi, jeftiniji i brzi načini Dijagnoza protozoa je neučinkovita.

Kako se u praksi dešifriraju testovi na prisutnost protozoa pomoću kapi krvi možete vidjeti gledajući video pregled:

Lotin Alexander, medicinski kolumnist

Stolice se ispituju na dvije metode:

1. Makroskopski – otkriti helminte, njihove glave, segmente, fragmente strobila. Male porcije fecesa pomiješaju se s vodom u ravnoj kadi ili Petrijevoj zdjelici i gledaju se pri dobrom svjetlu tamna pozadina, koristeći povećalo ako je potrebno. Sve sumnjive tvorevine se pincetom prenose u drugu čašicu s vodom ili na predmetno staklo u kapi razrijeđenog glicerola.

Uz metodu braneći se Probni dio izmeta pomiješa se s vodom u staklenom cilindru i nakon taloženja se iscijedi. gornji sloj voda. To se ponavlja nekoliko puta. Kada tekućina postane prozirna, ocijedi se i ispituje sediment u Petrijevoj zdjelici.

2. Mikroskopski – za otkrivanje jaja i ličinki helminta. Postoje mnoge metode istraživanja.

1). Nativni bris – najčešća i tehnički pristupačna metoda istraživanja. Mogu se otkriti jaja i ličinke svih helminta. Međutim, s malim brojem jajašaca nije ih uvijek moguće pronaći. Stoga se koristi metoda obogaćivanja.

1). Fülleborg metoda – ovo je metoda obogaćivanja koja se temelji na plutanju jajašaca helmintijaze u zasićenoj otopini NaCl (1,2 – gustoća; 400 g NaCl na 1 litru vode; 40% otopina NaCl). Metoda je učinkovitija od nativnog brisa. 2-5 g izmeta stavi se u staklene posude i napuni otopinom NaCl, promiješa i nakon 45 minuta metalnom omčom odstrani nastali film, kap glicerina stavi na predmetno staklo. Pregledajte pod mikroskopom. Nedostatak metode je sporo pojavljivanje jaja raznih helminta, patuljaste trakavice - nakon 15-20 minuta, valjkastih glista - 1,5 sati, bičaša - 2-3 sata.

2) Kalantaryan metoda – također metoda obogaćivanja, ali se koristi zasićena otopina NaNO 3 (gustoće 1,38). Većina jaja pluta; ispitivanje sedimenta nije potrebno. Nedostatak je što držanje jaja u otopini dulje vrijeme dovodi do činjenice da neka jaja počnu bubriti i taložiti se na dno, nestajući s površinskog filma.

3. Metoda Goryacheva – na principu odlaganja jaja, detekcija mala jaja trematode Zasićena otopina NaCl koristi se kao otopina i pažljivo se nanosi 3-4 ml otopine fecesa na vrh. Nakon 15-20 sati jaja trematoda talože se na dno. Tekućina se iscijedi, a sediment se stavi na predmetno staklo i pod mikroskop.

4. Shulmanova metoda uvijanja – za otkrivanje ličinki helminta u izmetu. Pregledava se samo svježe izlučeni izmet. 2-3 g se stavi u staklenu posudu i doda 5-struka količina vode, brzo promiješa štapićem ne dodirujući stijenke posude - 20-30 minuta, zatim se štapić brzo izvadi i kap tekućina se na kraju prenese na stakalce i mikroskopira.

5. Bermanova metoda – temelji se na sposobnosti ličinki helminta da migriraju prema toplini i služi za njihovu identifikaciju u izmetu.

6. Harada i Mori metoda (metoda uzgoja ličinki) i preporučuje se za testiranje na infekcije ankilostomama. Metoda se temelji na činjenici da se na toplini i na vlažnom filtriranom papiru jajašca ankilostomatozoida razviju u filariformne ličinke koje se lako otkrivaju. Na sredinu trake filtriranog papira nanese se 15 g fecesa, papir s fecesom se stavi u staklenku tako da se donji kraj uroni u vodu, a gornji učvrsti čepom. Staklenka se drži u termostatu na 28 0 C 5-6 dana. Za to vrijeme razvijaju se filariformne ličinke i spuštaju se u vodu. Tekućina se ispituje pod povećalom. Ako ju je teško otkriti, tekućina se centrifugira, prethodno ubivši ličinke zagrijavanjem na 60 0. Laborant mora nositi rukavice.

7. Metode za enterobiasis – otkrivanje jaja glista i goveđa trakavica.

a) struganje s perianalnih nabora – pamučnim štapićem čvrsto namotanim na drveni štapić i navlaženim 50% otopinom glicerina. U laboratoriju se bris ispere s 1-2 kapi 50% vodene otopine glicerina.

b) metoda ljepljivih grinja (Graham metoda)

Ljepljiva traka se nalijepi na perianalne nabore, zatim se ljepljivi sloj nanese na predmetno staklo i pregleda pod mikroskopom.

C) struganje pomoću očnih štapića (metoda Rabinovich). Za perianalno struganje koriste se staklene očne šipke čiji je široki dio prekriven posebnim ljepilom koje omogućuje zadržavanje jajašca pinworma.

Pregled krvi, žuči, sputuma i mišića

Mikroskopija krvi otkriva ličinke filarije.

Pregled sputuma - jajašca paraganima, larve valjkastih crva, nekator, strongiloid, elementi ehinokoknog mjehura.

Pregled mišića - ako se sumnja na trihinelozu, pregledavaju se mišići bolesnika ili leša, kao i meso od kojeg se pretpostavlja da se osoba zarazila. Za potrebe trihineloskopije mišić se reže na sitne komadiće i stavlja u kompresorij, to su dva široka debela stakla koja gnječe mišiće i nalaze se larve trihinele u obliku kapsula - metoda kompresije.

Metoda probave - mišići se pune umjetnim želučanim sokom (otopina klorovodične kiseline i pepsin). Mišići se probavljaju, a ličinke se lako identificiraju. Određivanje intenziteta invazije: broj ličinki do 200 u 1 g mišićno tkivo– umjeren intenzitet invazije; do 500 – intenzivno; preko 500 – superintenzivna invazija.

Serološke metode

Helmintološke metode istraživanja. Metode za dijagnosticiranje helmintoza dijele se na izravne, koje se temelje na izravnoj detekciji samih helminta ili njihovih fragmenata, kao i ličinki i jajašca helminta (metode ispitivanja izmeta, urina, žuči i duodenalnog sadržaja, sputuma, krvi i tkiva, materijala dobivene struganjem s perianalnog područja i subunguvalnih prostora), i neizravne, uz pomoć kojih otkrivaju sekundarne promjene, koji nastaju u ljudskom tijelu kao rezultat vitalne aktivnosti helminta (istraživanja morfološkog sastava krvi, imunološke metode za dijagnosticiranje helmintičkih infekcija, X-zrake studije itd.). Od izravnih metoda najčešće su skatološke, koje se dijele na makro- i mikrohelmintoskopske. U nekim slučajevima koriste se posebne metode.

Makrohelmitoskopske metode istraživanja usmjeren na traženje helminta ili njihovih fragmenata (skoleks, segmenti, dijelovi strobila cestoda). Koriste se za dijagnosticiranje onih helmintija u kojima se jajašca ne izlučuju u izlučevine pacijenta ili se izlučuju u malim količinama, a ne uvijek (na primjer, kod enterobiaze, pinwormi se nalaze u izmetu, kod taeniasis - segmenti).

Da bi se otkrili pinwormi ili segmenti cestoda u izmetu, izmet se ispituje golim okom. Za diferencijalna dijagnoza Taeniasis, preporuča se promatrati izmet razrijeđen s vodom u odvojenim malim obrocima u crnim fotografskim kivetama ili u Petrijevim zdjelicama na tamnoj pozadini. Velike formacije sumnjive na fragmente helminta ispituju se pod povećalom između dva stakalca. Ako prema kliničke indikacije sugeriraju otkrivanje malih helminta ili glavica cestoda nakon tretmana, zatim se sumnjive čestice ispituju pod povećalom u kapi glicerina, a po potrebi i pod mikroskopom.

Mikrohelmintoskopske metode istraživanja(kvalitativni) usmjereni su na identifikaciju jaja i ličinki helminta. Koristi se metoda debelog razmaza s celofanskom pokrovnom pločom po Katu. Kato mješavina sastoji se od 6 ml 3% vodena otopina malahitnog zelenila, 500 ml glicerin i 500 ml 6% otopina fenola. Kato ploče (hidrofilni celofan se reže na komade dimenzija 20´ 40 mm) uronjena 24 h u smjesu Kato tako da budu jedna uz drugu (3-5 ml Kato otopina na 100 ploča). 100 mg izmet se nanese na predmetno stakalce, pokrije celofanskom pokrovnom pločom prema Katu i pritisne tako da se izmet razmaže po stakalcu unutar granica celofanske ploče. Bris se ostavi na sobnoj temperaturi da posvijetli za 40-50 min, a zatim ispitati pod mikroskopom. U vrućoj sezoni, kako biste spriječili isušivanje pripravka, stavite vlažnu spužvu na tanjur pripremljenog pripravka.

Za potpunu detekciju helminta svih vrsta potrebno je koristiti Kato metodu debelog razmaza s celofanskom pokrovnom pločom u kombinaciji s jednom od metoda obogaćivanja. Najčešće od njih su Kalantaryan metoda i Fulleborn metoda.

Kalantaryan metoda: u bocama sa širokim grlom zapremine 100 ml dobro promiješajte staklenim štapićem 5 G izmet, postupnim dodavanjem zasićene otopine natrijeva nitrata (1 kg natrijev nitrat po 1 l voda kad proključa) do ruba čaše. Velike čestice koje isplivaju na površinu uklanjaju se papirnatom lopaticom. Staklo se nanosi na površinu fiziološke otopine (fiziološka otopina se dodaje sve dok smjesa ne dođe u potpuni dodir s predmetnim stakalcem). U 20-30 min predmetno staklo se ukloni i film se pregleda pod mikroskopom. U nedostatku ove soli, možete koristiti zasićenu otopinu kuhinjske soli prema Fhollebornu (400 G sol u 1 l kipuće vode).

Zbog činjenice da jaja imaju veliku specifična gravitacija(neoplođena jaja valjkastih glista, jaja trematoda i velikih cestoda) ne plutaju, osim pregleda površinskog sloja tekućine, kod Fulleborn metode potrebno je pregledati 2-4 preparata iz sedimenta pod mikroskopom.

Posebne laboratorijske metode za ispitivanje raznih helmintijaza.

Da bi se otkrili fragmenti helminta, izmet se ispituje golim okom, zatim se pomiješa s vodom i ispituje u malim obrocima u Petrijevoj zdjelici na tamnoj pozadini. Sve sumnjive čestice stavljaju se na predmetno staklo u kap vode i ispituju pod povećalom. Dnevnu porciju možete staviti u cilindar uz dodatak 5-10 puta veće količine vode. Posuda se nakon miješanja ostavi dok se suspendirane čestice potpuno ne slegnu. Površinski sloj tekućine se ocijede i izliju čista voda. Isprani sediment ispituje se u malim obrocima golim okom ili pod povećalom. Za otkrivanje jajašca koriste se mikroskopske metode ispitivanja.

Metoda nativnog razmaza. Mala količina stolice iz razna mjesta Ispitivani dio se samelje na predmetnom staklu u kapi 50% otopine glicerola, izotonične otopine natrijeva klorida ili vode. Smjesa se pokrije pokrovnim stakalcem i pregleda pod mikroskopom.

Fulleborn plutajuća metoda. Jedan dio izmeta pomiješa se s 20 dijelova zasićene otopine natrijevog klorida (specifične težine 1,18), dodanih u malim obrocima. Velike čestice koje isplivaju na površinu odmah se uklone, a smjesa se ostavi 45 minuta. Tijekom tog vremena, jajašca helminta, koja imaju nižu specifičnu težinu od otopine natrijevog klorida, plutaju na površini. Površinski film se ukloni žičanom omčom promjera oko 1 cm i prenese na predmetno stakalce za ispitivanje pod mikroskopom.

Kalantaryan metoda. Učinkovitost plutajuće metode povećava se zamjenom natrijevog klorida zasićenom otopinom natrijevog nitrata. U tom slučaju smjesa se drži 10-15 minuta.

Površinski film nastao nakon taloženja mješavine izmeta s otopinom natrijevog klorida ili natrijevog nitrata također se može ukloniti predmetnim staklom. U tu svrhu se staklenka do vrha napunjena mješavinom izmeta i otopine soli pokrije predmetnim staklom tako da njegova donja površina bude u dodiru s tekućinom. Nakon taloženja, staklo se uklanja i, brzo okrećući prema gore s površinom na kojoj se nalazi film, ispituje se pod mikroskopom.

Struganje sperianalnih nabora (za identifikaciju jajašca pinworma i onkosfera goveđe trakavice) obavlja se ujutro prije toalete. Koristeći drvenu lopaticu umočenu u vodu ili 50% otopinu glicerina, stružite okolo anus. Dobiveni materijal se prenese na predmetno staklo u kapi vode ili 50% otopine glicerola i pregleda pod mikroskopom. Lopatica se može zamijeniti vlažnom vatom, kojom se briše perianalno područje, a potom dobro ispere u vodi. Voda se centrifugira, a sediment se pregleda pod mikroskopom.

Behrmannova metoda (za identifikaciju ličinki). Metalna mrežica na koju se nanese 5-6 g izmeta učvrsti se na stakleni lijevak umetnut u tronožac. Na donji kraj lijevka postavljena je gumena cijev sa stezaljkom. Lijevak se napuni vodom zagrijanom na t° 50°, tako da se Donji dio mrežica koja je sadržavala izmet došla je u kontakt s vodom. Larve se aktivno kreću u vodu i nakupljaju u donjem dijelu gumene cijevi. Nakon 4 sata tekućina se odlije u epruvete za centrifugiranje, centrifugira, a talog se pregleda pod mikroskopom.

Analiza sputuma, nosne sluzi i iscjedak iz rodnice za identifikaciju jajašca plućnog trematoda paragonimusa, ličinki valjkastih glista i ankilostoma, jajašca pinworma i fragmenata ehinokoknog mjehura. Ispitni dio sluzi (iscjedak) razmaže se na staklo i pregleda makroskopski na crno-bijeloj pozadini, a zatim pod mikroskopom. U ispitni materijal možete dodati 25% otopinu antiformina, temeljito protresti i ostaviti 1-1,5 sati da se sluz otopi. Smjesa se centrifugira, a talog se pregleda pod mikroskopom.

Analiza duodenalnog i želučana kiselina za identifikaciju jaja jetrenih metilja, ankilostoma, ličinki Strongyloides. Sva tri dijela duodenalnog sadržaja dobivena s centrifugiraju se i sediment pregleda pod mikroskopom. Oni također istražuju.

Istraživanje tkiva. Da bi se identificirale ličinke trihinele, komadići biopsiranog mišića pažljivo se razdvoje u vlakna, stisnu između kompresorskih stakala (debela stakla s vijcima) i pregledaju pod mikroskopom na zatamnjenom svjetlu. Da bi se identificirali cisticeri, mišići se seciraju iglama za seciranje, izolirana vezikula se očisti od okolnog tkiva, stisne između dva stakalca i pregleda pod povećalom.

Test krvi (za otkrivanje ličinki filarije). Pregledajte viseću kap na pokrovnom staklu obrubljenom vazelinom. Možete pomiješati 0,3 ml krvi s 10 puta većom količinom 3% otopine. Smjesa se centrifugira, a talog se pregleda pod mikroskopom. Za obogaćivanje lijekova do 1 ml venske krvi dodati 3 ml 2% otopine formalina ili 5 puta veću količinu tekućine koja se sastoji od 95 ml 5% otopine formalina, 5 ml octene kiseline i 2 ml koncentr. otopina alkohola hematoksilin. Smjesa se centrifugira, talog se ispere destiliranom vodom i pregleda pod mikroskopom. Za razlikovanje različiti tipovi filarije se ispituju razmazima obojenim metodom Giemsa-Romanovsky.

Metode imunološka dijagnostika. Također se koriste alergijski dijagnostički testovi (vidi) s odgovarajućom vrstom helminta (aglutinacija, fiksacija komplementa).

Helmintološke metode istraživanja. Riža. Jaja helminta. 1-10 - jaja valjkasti crvi(nematode): 1 - 3 - valjkasti crvi (1 - oplođeno jaje, 2 - oplođeno jaje bez bjelanjka, 3 - neoplođeno jaje); 4 - mačji okrugli crvi; 5 - okrugli crvi mesožderi; 5 - pinworms; 7 - bičaš; 8 - tominx; 9 - ankilostoma; 10 - trichostrongylid. 11-15 - jaja trakavice(cestodi): 11 - goveđa trakavica; 12 - patuljasta trakavica; 13 - štakorska trakavica; 14 - bundeva trakavica; 15 široka traka. 16 - 24 - jaja metilja (trematoda): 16 - trematoda (šistosoma) japanska; 17 - trematode (shistosomi) urin - spolni; 18 - trematode (shistosomi) Munson; 19 - trematode (parogonymus) plućne; 20 - trematode (opisthorchis) Sibirski (mačji); 21 - trematode (clonorchis) chinensis; 22 - crijevne trematode (metagonimus); 23 - trematode (fasciole) jetre; 24 - trematode (dicrocelium) lancetaste.

Učinkovita i prikladna metoda helmintološkog istraživanja je studija debelog razmaza prema Katou, čija je suština otkrivanje jaja helminta u debelom razmazu izmeta, očišćenom glicerinom i obojenom malahitno zelenom bojom. Sastav Kato mješavine je 6 ml 3% vodene otopine malahit zelene, 500 ml glicerina, 500 ml 6% otopine fenola. Otopina je stabilna i može se čuvati na sobnoj temperaturi. Za pripremu pripravaka komadići izmeta veličine zrna graška nanose se na predmetno staklo, prekrivaju filmom od hidrofilnog celofana i drže u smjesi Kato 24 sata te pritisnu na staklo da se jednolika raspodjela materijal. Razmazi očišćeni 40-60 minuta pregledavaju se pod mikroskopom. Otkrivena jaja helminta se broje i morfološke karakteristike odrediti njihovu vrstu. Metoda vam omogućuje prepoznavanje jaja okruglih crva, bičaša, cestoda, trematoda i, u manjoj mjeri, ankilostoma i patuljaste trakavice.

Također naširoko korišten metode obogaćivanja. Princip metode flotacije je suspendiranje fecesa u slanoj otopini, koja ima veću relativnu gustoću u odnosu na jaja helminta, zbog čega oni isplivaju na površinu. Sadržaj površinskog filma ispituje se pod mikroskopom. Kao smjese za obogaćivanje koriste se sljedeće otopine: stolna sol- 400 g u 1 litri vode (relativna gustoća po Fullebornu -1,18); natrijev nitrat - 1 kg u 1 litri vode (relativna gustoća prema "Kalantaryan-1,38); natrijev nitrat - 900 g i kalijev nitrat - 400 g u 1 litri vode (relativna gustoća prema Brudastovu i Krasnonosu - 1,48). Pripremljeno otopine se prokuhaju i ohlade.
Za istraživanje dodajte 5-10 g izmeta u staklenu ili zemljanu čašu, dodajte 100-200 ml fiziološke otopine i dobro promiješajte. Zatim se plutajuće velike čestice uklone drvenom lopaticom ili lopaticom od papira ili kartona i odmah se široko stakalce nanese na površinski film tako da fiziološka otopina i stakalce budu u potpunom kontaktu. Nakon što je smjesa ostavljena 30-40 minuta, predmetno staklo se izvadi, stavi pod mikroskop s filmom okrenutim prema gore i cijela se površina pažljivo pregleda. Kako biste izbjegli isušivanje, možete dodati 2-3 kapi 50% otopine glicerina. Površinski film također se može ukloniti žičanom omčom. Učinkovitost metoda flotacije raste s povećanjem relativne gustoće slane otopine. Ovim metodama moguće je otkriti jaja nematoda, cestoda i trematoda.

Za otkrivanje jaja u izmetu koristi se metoda sedimentacije Krasilnikov. Izmet se miješa s 1% otopinom deterdženta ( prašak za pranje“Lotus” itd.) u omjeru 1:10 do stvaranja suspenzije. Pod utjecajem deterdženta otapaju se različite komponente izmeta (proteini, masti, elementi tkiva). Nakon 30 minuta sadržaj epruvete se mućka 1-2 minute, nakon čega se centrifugira 5 minuta. Iz sedimenta se pripremaju preparati koji se ispituju pod mikroskopom.
U uvjeti na terenu, kao i tijekom masovnih pregleda stanovništva za infestaciju helmintima, prikladno je koristiti Kato metodu debelog razmaza. U stacionarnim uvjetima Pri pregledu pacijenata poželjno je koristiti najučinkovitije metode flotacije. Kod korištenja ovih metoda tijekom mikroskopiranja, preporučljivo je prebrojati jajašca koja se nalaze u preparatu. Ako je uzorak ili volumen uzet za proučavanje izmeta standardiziran (na primjer, 1 žličica ili žlica) i konstantan jednoličan volumen slanih otopina, može se grubo procijeniti intenzitet invazije. Ovo kvantitativno računovodstvo može biti korisno u opravdavanju propisanog liječenja i procjeni učinkovitosti dehelmintizacije. Osim toga, mogu se koristiti i druge preciznije metode za utvrđivanje intenziteta infekcije. kvantitativne metode, posebno Stoll metoda.

Za dijagnozu teniarhinhoze i enterobiaze Koristi se metoda proučavanja perianalno-rektalnih strugotina. Drvenom lopaticom namočenom u 50% otopinu glicerina sastružite perianalne nabore ujutro prije defekacije po obodu. anus I donji odjeljci rektum. Dobiveni materijal očišćen sa lopatice rubom pokrovnog stakla stavi se na predmetno staklo u kap 50%-tne otopine glicerola, prekrije pokrovnim staklom i pregleda pod mikroskopom. Također možete pregledati traku celulozne trake koja se najprije ljepljivom stranom pritisne na perinanalne nabore, zatim se stavi na predmetno staklo i mikroskopski pregleda.

Detekcija ličinki nematoda u fecesu Bermanovom metodom. Metoda se temelji na termotropnom svojstvu ličinki. Za istraživanje uzmite 1 žlicu izmeta i stavite je u metalnu mrežicu ili mrežicu od nekoliko slojeva gaze na žičanom okviru. Mreža je ugrađena u lijevak postavljen na tronožac. Na lijevak je pričvršćena gumena cijev sa stezaljkom. Nakon podizanja mrežice, lijevak se puni vodom (temperatura +40°...+50°C) tako da je donji dio mrežice uronjen u vodu. Larve iz izmeta aktivno migriraju u Topla voda i taložeći se nakupljaju u donjem dijelu lijevka. Nakon 2-4 sata stezaljka se otvori, voda se ispusti u epruvetu za centrifugu i centrifugira 2-3 minute. Zatim se tekućina iz supernatanta isuši, sediment se prenese na predmetno staklo i pregleda pod mikroskopom, gdje se pronađu pokretne ličinke uzročnika strongiloidijaze.

Harada metoda i Mori omogućuje razlikovanje ličinki ankilostoma i nekatora. Ličinke ankilostoma se uzgajaju na filter papiru. U tu svrhu se 0,5 g svježeg izmeta, uzetog od bolesnika najkasnije 1 sat nakon defekacije, nanese na trake filtar papira dimenzija 12X1,5 cm, s tim da oba kraja trake budu čista. Jedan kraj trake se uroni u epruvetu od koje se četvrtina napuni vodom, a drugi se stegne čepom. Epruvete se stavljaju u termostat na temperaturu od +26... + 28°C. Ličinke koje se razvijaju iz jajašca spuštaju se kroz filter papir i talože na dno epruvete. Nakon 5-6 dana trakica papira se izvadi, a zaostala tekućina u epruveti ispita se pod povećalom ili centrifugira. Talog nastao centrifugiranjem ispituje se pod svjetlosnim mikroskopom. Kada se koristi umjesto tetraedarskih cijevi staklene posude(veličine 15HHH7 cm), na čije zidove su pričvršćene 4 papirnate trake, povećava se učinkovitost analiza (G. M. Maruashvili i sur., 1966.).

Metode ispitivanja šistosomijaze . Pregled fecesa - dio fecesa se pomiješa sa 250 ml vode, filtrira kroz 3 sloja gaze u konusnu posudu, koja se do vrha napuni vodom. Nakon 30 minuta tekući sloj se iscijedi, a talogu se doda svježi dio vode. Talog se ispire sve dok se ne dobije bistri supernatant i pregleda pod mikroskopom.

Larvoskopska metoda - 20-25 g fecesa stavi se u Erlenmeyerovu tikvicu sa zalemljenom staklenom cijevi sa strane, okrenutom prema gore, i opere voda iz pipe. Zatim se tikvica prekrije tamnim papirom, ostavljajući zalemljenu staklenu cijev na svjetlu na temperaturi od +25...+30°C. Izleženi miracidije koncentriraju se na meniskusu u lateralnoj cijevi, gdje se mogu vidjeti povećalom ili golim okom. Pregled urina - 100 ml urina sakupljenog između 10 i 14 sati, ili dnevni dio, taloži se i potom centrifugira na 1500 okretaja u minuti. Dobiveni sediment nanese se* na predmetno staklo i pregleda pod mikroskopom. WHO preporučuje metodu filtriranja cijelog uzorka urina. Nakon filtracije, filtri se tretiraju formaldehidom ili zagrijavaju (da se ubiju jajašca), a zatim se navlaže Vodena otopina ninhidrin. U osušenim pripravcima zameci jaja dobivaju ljubičastu boju.

Primjena imunoloških metode istraživanja za dijagnosticiranje shistosomijaze povezane su s poteškoćama, budući da odrasli shistosomi i njihova jajašca sadrže velik broj antigena koji uzrokuju imunološke reakcije, koji nisu specifični za određenu vrstu (D. Bradley, 1979).

U našoj zemlji za proizvodnju imunološke reakcije za helmintiju se oslobađa cijela linija standardna dijagnostika. Praktična upotreba imati alergije test kože za ehinokokozu i alveokokozu, RLA s ehinokoknim antigenom, RSC na hladnom, precipitacijska reakcija na hladnom u raznim modifikacijama (prstenasta precipitacija, precipitacija u epruvetama ili kapilarama, koje se stavljaju s antigenima trihineloze, cisticerkoze i migroaskariaze). Standardne dijagnostičke setove za izvođenje gore navedenih seroloških reakcija proizvode poduzeća koja proizvode bakterijske pripravke. Proizvođač uključuje proizvedene dijagnostičke setove detaljne upute o pravilima čuvanja, roku valjanosti lijeka i uputama o uporabi relevantnih antigena s tehnikom stadiranja reakcije.

U posljednjih godina Popis seroloških reakcija koje se koriste za dijagnosticiranje helmintijaze značajno je proširen. U te svrhe koriste se sljedeće reakcije: RIGA, neizravna imunofluorescencija (RIF), imunodifuzija u gelu (RID), kontra imunoelektroforeza (CIEF), CEMA. Ove reakcije mogu se koristiti za askaridozu, toksokarijazu, trihinelozu, ankilostomidozu, filarijazu, ehinokokozu i alveokokozu, opistorhijazu, šistosomijazu, paragonimiazu. Međutim, za ove reakcije u našoj zemlji se ne izdaju standardni dijagnostički testovi niti je regulirana tehnika njihove dijagnostike. Pojedinačni laboratoriji, uglavnom znanstveni, samostalno pripremaju specifične antigene i koriste ih u različitim modifikacijama. Opis ovih metoda široko je predstavljen u literaturi i nije striktno unificiran. Tumačenje podataka imunološke analize treba se temeljiti na proučavanju dinamike imunološkog odgovora, uzimajući u obzir razinu specifičnosti i osjetljivosti svake korištene metode. serološka reakcija. Stoga je prilikom postavljanja dijagnoze, kao i tijekom seroepidemioloških istraživanja stanovništva, preporučljivo koristiti nekoliko najosjetljivijih reakcija. S ove točke gledišta, reakcije VIEF-a i REMA-e, koje se razlikuju, dobro su se pokazale visoka osjetljivost i prilično visoka specifičnost (P. Ambroise-Thomas, 1978; I. E. Ballad, 1979; G. M. Negreanu, 1980; A. M. Ponomareva, 1981; A. Ya. Lysenko, 1978, itd.). Djelotvornost REMA ispitana je kod amebijaze, lišmanioze, tripanosomijaze i toksoplazmoze (G. A. Ermolin, 1980.).