Mehanizam reakcije taloženja razlikuje se od reakcije. Reakcija precipitacije (imunološka metoda)
Sastoji se od interakcije topljivog antigena s protutijelom, nakon čega slijedi stvaranje sitnozrnatog sedimenta (taloga).
Reakcija taloženja omogućuje određivanje prisutnosti nepoznatog antigena u ispitivanom materijalu dodavanjem poznatog antitijela ili korištenjem poznatog antigena za određivanje nepoznatog antitijela. Taloženje postaje sve gore u nedostatku soli. Optimum oborine je u rasponu pH=7,0-7,4.
Mehanizam taloženja blizak je mehanizmu aglutinacije. Pod utjecajem imunološkog sustava, koji je reagirao s antigenom, smanjuje se stupanj njegove disperzije. Potrebno je da serum i antigen budu potpuno prozirni. Prilikom izvođenja precipitacije jednom razrjeđenju seruma možete dodati različita razrjeđenja antigena ili obrnuto.
Taloženje se bolje bilježi ako se antigen nanese na antitijelo u epruveti. U tom slučaju uočava se pojava taloga u obliku prstena - prstenasta precipitacija. Prstenasto taloženje provodi se u posebnim cijevima promjera 2,5-3,5 mm. Za određivanje broja antigena u ispitivanom materijalu ili različitih protutijela u serumu koristi se reakcija taloženja agara: 1% pročišćenog agara ulije se u ili na stakalce. Otopine antigena i antitijela ulijevaju se u različite jažice napravljene u agaru, koje difundiraju jedna prema drugoj, tvoreći linije taloženja. Reakcija precipitacije naširoko se koristi u dijagnostici (vidi Ascolijevu reakciju).
Precipitacija u agaru omogućuje određivanje toksigenosti difteričnih kultura.
U forenzičko istraživanje precipitacija služi za određivanje vrste krvi, organa i tkiva pomoću specifičnih taloženih seruma.
Precipitacija je reakcija taloženja kompleksa antigena (precipitinogena) i protutijela (precipitina). Precipitacija je jedan od imunoloških fenomena koji omogućuje određivanje sadržaja protutijela (vidi) u krvnom serumu bolesnih ili cijepljenih ljudi, kao iu krvi imuniziranih životinja. Kada se koriste standardni serumi, reakcija taloženja može se koristiti za titraciju topivih antigena različitog podrijetla (vidi).
U najjednostavnijem obliku postavljanja reakcije precipitacije, testni serum dodaje se slojevitošću u niz epruveta s konstantnom količinom antigena u nizu višestrukih razrjeđenja. Nakon 30-60 min. inkubacija na sobnoj temperaturi, prsten zamućenja stvara se na granici dviju tekućina - prstenasta precipitacija. Minimalna količina seruma koja daje reakciju precipitacije uzima se kao titar antiseruma. Izvođenjem reverzne reakcije sa standardnim antiserumom moguće je procijeniti relativnu koncentraciju antigena u različitim biološkim tekućinama.
Rezultati titracije antitijela i antigena prema navedenoj metodi nemaju apsolutni kvantitativni izraz. Kako bi kvantificirali sadržaj protutijela, Heidelberger, Kabat (M. Heidelberger, E. Kabat) i drugi razvili su kvantitativna metoda taložna reakcija, koja se temelji na detekciji tzv. zone ekvivalencije. Kod miješanja dobno specifičnih količina antigena s konstantnim volumenima antiseruma, količina nastalog precipitata se u početku povećava, a zatim opet smanjuje zbog povećane topljivosti kompleksa antigen-antitijelo u višku antigena. Odredimo li sadržaj protutijela u supernatantu u svim epruvetama, pokazat će se da u srednjim epruvetama reda ili čak u jedinoj epruveti nema protutijela u supernatantu; ujedno se ovdje stvara najveći talog. Budući da je u zoni ekvivalencije cijeli antigen uveden u smjesu reagirajućih tvari također uključen u talog, nakon oduzimanja proteina antigena od količine proteina precipitata, dobiva se točna vrijednost sadržaja antitijela u određenom volumenu ispitnog seruma. . Sadržaj bjelančevina u precipitatu nakon temeljitog ispiranja ohlađenom fiziološkom otopinom određuje se dušikom ili nekom kolorimetrijskom metodom.
Pri procjeni vrijednosti reakcije oborine kao dijagnostička metoda potrebno je uzeti u obzir da imunološki serumi mogu sadržavati antitijela koja nemaju svojstva precipitina i stoga ne stvaraju talog u interakciji s antigenom. Tu spadaju prvenstveno nepotpuna antitijela, kao i neka druga antitijela koja pripadaju skupini gama A-globulina.
Sposobnost antiseruma da precipitira antigen može biti oslabljena zagrijavanjem na 65-70°, obradom s organskim otapalima, redukcijom u kiseloj sredini [Izliker (N. Isliker), A.Ya. Kullberg]. Fenomen precipitacije s antiserumom za koji se zna da sadrži precipitine moguć je samo pri određenoj temperaturi, koncentraciji soli i vodikovih iona. Reakcija taloženja se najbrže odvija na 25-37°. Neizostavan uvjet za nastanak taloga je prisutnost natrijevog klorida (0,85% otopina NaCl) u izotoničnoj koncentraciji. Kad se koncentracija NaCl poveća na 15%, djelomično se otapaju precipitati formirani od polisaharidnog antigena, koji se mogu koristiti za ekstrakciju čistih protutijela. Reakcija taloženja s proteinskim antigenima događa se istom brzinom i potpunošću u 0,85% i 15% otopine NaCl. Optimalna koncentracija vodikovih iona za stvaranje taloga odgovara pH vrijednostima od 5,0 do 9,0.
U laboratorijskoj praksi koriste se različite modifikacije reakcije taloženja. Konkretno, reakcija termoprecipitacije se koristi za otkrivanje bakterijskih antigena antraks, botulizam itd., koji nisu podložni toplinskoj denaturaciji (koktoantigeni). Ova se reakcija razlikuje od prstenaste precipitacijske reakcije samo po tome što se kao antigen koristi filtrat kuhanog ispitnog materijala (vidi Što je reakcija).
Pri analizi složene mješavine antigena pomoću reakcije taloženja nemoguće je karakterizirati svojstva pojedinih komponenti smjese. Za rješavanje ovog problema pribjegavaju metodama taloženja u agaru i imunoelektroforeze. Metoda taloženja na agaru u najčešćoj modifikaciji O. Ouchterlonyja temelji se na činjenici da antigen i antiserum, difundirajući jedan prema drugome u tankom sloju agara, pri susretu tvore linije precipitacije. Po broju takvih linija može se suditi o broju komponenti sadržanih u danoj mješavini antigena. Ouhgerlonu metoda omogućuje vam usporedbu različitih antigenskih smjesa i određivanje stupnja srodnosti komponenti prisutnih u njima. Pri analizi složene antigene smjese koja sadrži tvari s istim brzinama difuzije u agaru, velika pomoć može donijeti metodu imunoelektroforeze. Mješavina antigena se prethodno odvaja u električnom polju u agar ploči, nakon čega se razvija pojedinačne komponente antiserum. Antiserum se dodaje u udubljenje napravljeno u agaru paralelno s linijom po kojoj su se kretali antigeni tijekom elektroforeze. Svaki antigen proizvodi pojedinačni luk precipitacije s antiserumom. Imunoelektroforeza se široko koristi za analizu patološke abnormalnosti u serumskim proteinima, kao i u imunološkoj analizi tkivnih i bakterijskih antigena.
Forenzička precipitacija. Precipitacija se koristi u sudskoj medicini za utvrđivanje vrste krvi, dijelova organa i tkiva. U nizu istražnih slučajeva potrebno je utvrditi vrstu krvi koja se nalazi na instrumentima zločina, na odjeći zločinca ili žrtve itd. Za precipitacijsku reakciju koriste se precipitirajući serumi, dobiveni imunizacijom kunića, pijetlovi, koze s bjelančevinama raznih životinja. Obično se pripremaju serumi koji talože ljudske, konjske, mačje, pileće, svinjske, pseće, goveda. Moraju imati titar najmanje 1:10 000 i biti dosta specifični. Ekstrakti se pripremaju iz mrlje ili korice krvi koja se ispituje. slana otopina, koji se zatim testiraju taloženim serumima. Vrsta proteina smatra se utvrđenom ako jedan od taloženih seruma tvori talog s ekstraktom iz ispitivane krvi uz odgovarajuću kontrolnu reakciju. Reakcija taloženja također može odrediti vrstu proteina u ljudskim ili životinjskim tkivima i organima. Obično se reakcija taloženja provodi u epruvetama s konusnim krajem. Kada se dobiju mutni ekstrakti, reakcija taloženja se provodi u Ouchterlohn agaru.
Precipitacijska reakcija (RP) je taloženje topljivog antigena pod djelovanjem protutijela u prisutnosti elektrolita. Vidljivi učinak reakcije (fenomen taloženja) – naoblaka (stvaranje mutnog prstena ili sedimenta - talog).
RP se koristi za otkrivanje nepoznatog antigena u nizu zaraznih bolesti: za antraks, tularemiju, meningitis, male boginje. U sudskoj medicini koristi se za određivanje vrste krvi i sperme; u sanitarnim i higijenskim studijama - za utvrđivanje krivotvorenja prehrambeni proizvodi. RP je vrlo različit visoka osjetljivost i omogućuje otkrivanje antigena u razrjeđenjima od 1:1 000 000 i 1:10 000 000.
Komponente reakcije taloženja.
1. Antigen (precipitinogen) - ovo je antigen molekularne prirode, koji je u fino dispergiranom (topljivom) stanju. Precipitinogeni su različiti lizati ili ekstrakti tkiva itd. Precipitinogen se od aglutinogena razlikuje po veličini čestica antigena. Aglutinogen Ima veličine ćelija(to nisu uništene cijele stanice), već dimenzije precipitinogen razmjerno s molekularne veličine(to su bjelančevine i njihovi kompleksi s ugljikohidratima ili lipidima). Otopina precipitinogena transparentan.
2. Antitijela (precipitini) nalaze se u ljudskom krvnom serumu ili u imunodijagnostičkim precipitirajućim serumima koji sadrže poznata protutijela.
3. elektrolit– izotonična otopina natrijeva klorida.
Dobivanje precipitinogena.
Dobiva se mljevenjem materijala i ekstrahiranjem proteinskih antigena iz njega kuhanjem ili drugim metodama.
Primjeri precipitinogena: lizati ili ekstrakti raznih organa i tkiva, strani krvni serum (serum je riješenje, prije svega, razne proteini), filtrati bujonskih kultura mikroba, solni ekstrakti mikroba, autolizati itd.
Priprema taloženih seruma.
Dobiva se hiperimunizacijom kunića odgovarajućim precipitinogenima. Takvi serumi sadrže antitijela na one precipitinogene kojima su kunići imunizirani.
Primjeri taloženih seruma: taloženje serum protiv antraksa (sadrži antitijela na antigene antraksa), precipitirajući antimeningokokni serum(sadrži antitijela protiv antigena uzročnika meningitisa) itd.
Titar precipitirajući serum - to je najveće razrjeđenje precipitinogena pri kojem serum još daje reakciju precipitacije.
Metode postavljanja RP.
1. Prstenasta reakcija taloženja – provodi se u posebnim taložnim cijevima (promjer - 0,4-0,5 cm, visina - 7-8 cm). U epruvetu se doda 0,2 - 0,3 ml taloženog seruma i ista količina precipitinogena pažljivo se slojevito nanese duž stijenke dugim izljevom Pasteurove pipete. Zatim pažljivo postavite epruvete okomito iz vodoravnog položaja.
Obračunavanje rezultata reakcije provodi se pojavom bijelog prstena na granici antigen-antitijelo. Ako je reakcija pozitivna uočava se stvaranje takvog prstena. U ovom slučaju, antigen odgovara antitijelu i oni se vežu.
Ako se kao precipitinogen koriste prokuhani i filtrirani vodeni ekstrakti organa i tkiva, reakcija se naziva reakcija termoring precipitation (na primjer, kod dijagnosticiranja antraksa).
2. Reakcija taloženja u gelu – provodi se u Petrijevim zdjelicama ili na predmetnim stakalcima, gdje se stavlja sloj agar gela. Kako se gel stvrdnjava, izrezuju se jažice u koje se stavljaju antigeni ili antitijela, ili oboje. razlikovati 2 metode RP u gelu:
a) metoda jednostavna (radijalna) imunodifuzija: u jažicu se stavi jedna od komponenti imunološke reakcije (antigen ili antitijelo), a druga se komponenta pomiješa s agarom; na pozitivan rezultat (antigen odgovara antitijelu) a taložni prsten ;
b) metoda dvostruka imunodifuzija: i antitijelo i antigen se stave u odvojene jažice, difundiraju jedno prema drugom u agar gelu; ako je rezultat pozitivan gdje se stvaraju antitijela i antigen oborinske linije .
Primjer RP u gelu je Ouchterlonyjeva reakcija dvostruke imunodifuzije kod dijagnosticiranja difterije
Imunoelektroforeza – Ovo je metoda koja kombinira metodu elektroforeze i reakciju taloženja. Mješavina antigena (na primjer, serumskih proteina) odvaja se u gel elektroforezom. Zatim, da bi se pronašao i identificirao protein od interesa (nepoznati antigen), koristi se dijagnostički precipitirajući serum koji sadrži antitijela na taj protein (poznato antitijelo). Da biste to učinili, dijagnostički serum se uvodi u utor paralelno s proteinima. Ako među proteinima postoji onaj koji odgovara antitijelu koje se nalazi u serumu, tada oborinske linije.
Reakcija taloženja- RP (od lat. praecipito- precipitat) - to je stvaranje i taloženje kompleksa topljivog molekularnog antigena s protutijelima u obliku zamućenja, tzv. talog. Nastaje miješanjem antigena i antitijela u ekvivalentnim količinama; višak jednog od njih smanjuje razinu obrazovanja imunološki kompleks. Za razliku od reakcije aglutinacije, antigen za reakciju taloženja su topljivi spojevi, čija se veličina čestica približava veličini molekula. To mogu biti proteini, kompleksi proteina s ugljikohidratima i lipidima, bakterijski ekstrakti, različiti disati ili filtrati bujonskih kultura mikroba. Protutijela uključena u reakciju taloženja nazivaju se precipitini. Rezultirajući fino dispergirani kompleks antigen-protutijelo detektira se određenim metodama određivanja stupnjeva reakcije precipitacije.
Reakciju taloženja prstena prvi je predložio Ascoli. Koristi se u dijagnostici antraksa, kuge, tularemije i meningitisa. Metoda je jednostavna i pristupačna.
Specifični imunološki precipitacijski serum ulijeva se u uske precipitacijske epruvete i antigen se vrlo pažljivo nanosi na njega. Na primjer, kod dijagnosticiranja antraksa kao antigen se uzimaju komadići kože, vune, kože uginule životinje i sl. Prokuhaju se, tekućina se filtrira i koristi kao antigen. Pojava prstena - precipitata - na granici dviju tekućina ukazuje na prisutnost odgovarajućeg antigena.
Reakcija taloženja u agar gelu, odnosno metoda difuzijske precipitacije, omogućuje detaljno proučavanje sastava složenih u vodi topivih antigenskih smjesa. Za postavljanje reakcije koristiti gel (polutekući ili gušći agar). Svaka komponenta koja čini antigen difundira prema odgovarajućem antitijelu različitim brzinama. Stoga se u njemu nalaze kompleksi raznih antigena i odgovarajućih antitijela različitim područjima gel, gdje se formiraju precipitacijske linije. Svaka linija odgovara samo jednom kompleksu antigen-antitijelo. Reakcija taloženja obično se provodi na sobnoj temperaturi.
Dobivena je metoda imunoelektroforeze široku upotrebu V posljednjih godina pri proučavanju antigene strukture mikroba. Kompleks antigena stavlja se u jažicu koja se nalazi u središtu agar gela izlivenog na ploču. Električna struja zatim prolazi kroz agar gel, uzrokujući da se različiti antigeni uključeni u kompleks pomaknu u polje električna struja ovisno o njihovoj elektroforetskoj pokretljivosti. Nakon završetka elektroforeze, specifični imunološki serum se dodaje u žljeb uz rub ploče i stavlja u vlažnu komoru. Precipitacijske linije pojavljuju se na mjestima gdje nastaje kompleks antigen-antitijelo.
Reakcije taloženja staviti u epruvetama (reakcija taloženja prstena), u gelovima, hranjivim podlogama itd. Širok dobio distribuciju tipovi reakcija taloženja u polutekućem agaru ili agaroznom gelu: dvostruka imunodifuzija po Ouchterlonyju. radijalna imunodifuzija, imunoelektroforeza i tako dalje
Reakcija radijalne imunodifuzije. Imunološki serum s otopljenim agar gelom ravnomjerno se izlije na staklo. Nakon skrućivanja u gelu prave se jažice u koje se stavlja antigen u različitim razrjeđenjima. Antigen, difundirajući u gel, formira prstenaste precipitacijske zone oko jažica s protutijelima (slika 13.7). Promjer precipitacijskog prstena proporcionalan je koncentraciji antigena. Reakcija se koristi za određivanje sadržaja imunoglobulina različitih klasa, komponenti sustava komplementa itd. U krvi.
Imunoelektroforeza- kombinacija elektroforeze i imunoprecipitacije: smjesa antigena se unosi u jažice gela i elektroforezom razdvaja u gelu. Zatim se u žlijeb paralelno sa zonama elektroforeze unosi imunološki serum, čija antitijela, difundirajući u gel, formiraju liniju taloženja na mjestu kontakta s antigenom.
Imunološka elektronska mikroskopija- elektronska mikroskopija mikroba, najčešće virusa, tretiranih odgovarajućim antitijelima. Virusi tretirani imunološkim serumom stvaraju imunološke nakupine (mikroprecipitate). Oko viriona formira se "vijenac" protutijela, u kontrastu s fosfovolframovom kiselinom ili drugim elektronoptički gustim pripravcima.
123. Reakcija taloženja u gelu za određivanje toksigenosti mikroorganizama, mehanizam, metode formulacije.
Reakcija taloženja (RP)- to je stvaranje i taloženje kompleksa topljivog molekularnog antigena s protutijelima u obliku zamućenja, zvanog precipitat. Nastaje miješanjem antigena i antitijela u ekvivalentnim količinama; višak jednog od njih smanjuje razinu formiranja imunološkog kompleksa.
Godine 1946. J. Oudin predložio je jednostavnu difuzijsku metodu, u kojoj je jedna od komponenti reakcije taloženja, obično serum, u gelu, a druga - antigen - nanesena na prvu u obliku otopine. .
Antigen, difundirajući u gel, stvara u njemu bijele precipitacijske linije s antitijelima, jasno vidljive pod bočnim osvjetljenjem. Godine 1948. J. Ouchterlonyu razvio je još jednostavniju i praktičniju dvodimenzionalnu metodu kontra difuzije, koja omogućuje izravnu usporedbu različitih antigena i seruma. Ova je metoda također vrlo vrijedna u proučavanju unakrsnih reakcija.
Za postavljanje Ouchterlonove reakcije koristi se 1% agar pripremljen u fiziološkoj otopini koji se ulije u Petrijeve zdjelice u sloju od 0,5 cm.Nakon stvrdnjavanja u ploči agara se izrezuju rupice promjera 5-6 mm - jedna u sredini posude, 4-5 - duž oboda na udaljenosti od 1-2 cm od središnjeg. U središnju jažicu ulije se dijagnostički taloženi serum, a u perifernu jažicu otopina homolognih i usporedivih antigena. Rezultati se bilježe nakon 24, 48 i 72 sata inkubacije na sobnoj temperaturi.
Protutijela i antigeni difundiraju jedni prema drugima, au područjima gdje se stvaraju njihove ekvivalentne koncentracije stvaraju se lučne precipitacijske trake. Ako se taložne trake koje dolaze iz dvije susjedne jažice spoje, to ukazuje na prisutnost nekoliko antigenih komponenti u ispitnoj tekućini. Ouchterlohnova reakcija protudifuzije često se koristi za određivanje toksigenosti bakterija, poput difterije.
Daljnji razvoj metode precipitacije gelom je imunoelektroforeza. Ovaj izraz odnosi se na metodu koja kombinira elektroforetsko odvajanje mješavine antigena i Ouchterlonovu protudifuziju na istoj ploči agar gela. Taloženi serum se izlije u utor izrezan u gelu paralelno sa smjerom elektroforetskog odvajanja.
Precipitacijske linije koje nastaju kao rezultat reakcije imaju oblik lukova izduženih u smjeru elektroforetskog kretanja frakcija antigena. Imunoelektroforeza omogućuje određivanje sastava složenih smjesa topljivih antigena koje sadrže do 30 komponenti, te je stoga vrijedna dijagnostička metoda.
Reakcija taloženja(RP) naziva se taloženje iz otopine Ag (precipitinogena) kada je izloženo imunološkom serumu (precipitinu) i elektrolitu.
Pomoću RP moguće je detektirati antigen u razrjeđenjima od 1:100 000 pa čak i 1:1 000 000, dakle u tako malim količinama koje se kemijski ne detektiraju.
Precipitinogeni su ultramikroskopske čestice proteinsko-PS prirode: ekstrakti iz mikroorganizama, organa i tkiva, pat materijal; produkti razgradnje bakterijskih stanica, njihovi lizati, filtrati. Precipitinogeni su otporni na toplinu, pa se za njihovo dobivanje materijal kuha.
RP koristi tekuće prozirno Ag.
Precipitirajući serumi obično se dobivaju hiperimunizacijom kunića u ciklusima tijekom nekoliko mjeseci, ubrizgavanjem bakterijskih suspenzija, filtrata bujonskih kultura, autolizata, ekstrakata soli mikroorganizama i proteina sirutke.
Produkcija RP Ascoli. U usku epruvetu s malom količinom nerazrijeđenog taloženog seruma, držeći je u nagnutom položaju, pipetom se polagano naslaga isti volumen Ag uz stijenku.
Kako bi se izbjeglo miješanje dviju tekućina, epruveta se pažljivo postavlja okomito. Ako je reakcija u epruveti pozitivna, nakon 5-10 minuta na granici između seruma i ispitivanog ekstrakta pojavljuje se sivkasto-bijeli prsten. Reakcija je nužno popraćena kontrolama seruma i antigena.
Ascolijeva reakcija koristi se za identifikaciju antraksa, tularemije i kuge Ag.
Također je pronašao primjenu u forenzičkoj medicini za određivanje vrste proteina, posebice krvnih mrlja, u sanitarnoj praksi u identificiranju krivotvorenja mesa, ribe, proizvodi od brašna, nečistoće u mlijeku. Nedostatak ovog RP je nestabilnost taloga (prstena) koji nestaje već i pri laganom mućkanju. Štoviše, ne može se koristiti za određivanje kvantitativni sastav Agi uključeni u stvaranje taloga.
Ouchterlonyjeva reakcija taloženja. Reakcija se provodi na Petrijevim zdjelicama u jažicama agar gela.
Kao gel se koristi dobro isprani prozirni agar. Ag i serum se dodaju u agar gel tako da jažice koje ih sadrže budu na određenoj udaljenosti. Difundirajući jedno prema drugome i spajajući se jedno s drugim, antitijelo i antigen nakon 24-48 sati formiraju imunološki kompleks u obliku bijele pruge.
U prisutnosti kompleksnog precipitinogena pojavljuje se nekoliko traka. U ovom slučaju, trake serološki srodnih antigena spajaju se zajedno, a trake različitih se presijecaju, što omogućuje određivanje pojedinosti antigenske strukture tvari koje se proučavaju.
Široko se koristi za dijagnosticiranje bolesti uzrokovanih virusima i bakterijama koje proizvode egzotoksine.
3.Reakcija neizravne hemaglutinacije (IRHA). Koristi se za otkrivanje polisaharida, proteina, ekstrakata bakterija, mikoplazme, rikecija i virusa, čiji se imunološki kompleksi s aglutininima ne mogu vidjeti u konvencionalnom klasičnom RA, ili za otkrivanje antitijela u serumima pacijenata na te visoko raspršene tvari i male mikroorganizme.
RNGA za serodijagnostiku zaraznih bolesti. Koristeći RNGA za detekciju antitijela u serumu bolesnika pripremaju se ERITROCITNE ANTIGEN DIJAGNOSTIKE.
Reakcija taloženja.
Da bi se to postiglo, crvena krvna zrnca tretiraju se 15 minuta otopinom tanina u razrjeđenju 1:20 000–1:200 000, što im daje stabilnost i povećava adsorpcijski kapacitet. Zatim se pomiješaju s poznatim antigenom i inkubiraju 2 sata na temperaturi od 37 ° C. Crvena krvna zrnca osjetljiva na antigen isperu se 2-3 puta izotoničnom otopinom natrijeva klorida i dodaju serumu, razrijede i izliju u jažice. od panela.
Kontrola je suspenzija intaktnih i antigenom opterećenih eritrocita, koji se dodaju serumima koji očito daju pozitivne i negativne reakcije.
Rezultati reakcije uzimaju se u obzir 2 sata nakon inkubacije u termostatu i ocjenjuju se plusevima: "++++" - crvene krvne stanice prekrivaju jažicu u obliku kišobrana s nazubljeni rubovi; “–” – nakupljanje crvenih krvnih stanica u obliku “gumbića”
Povezane informacije:
Tražite na stranici:
Prstenasta reakcija taloženja
Reakcija spajanja prstena je jedna od najjednostavnijih serološke metode. Izvodi se u uskim taložnim cijevima. Najprije se bistra otopina antigena uzeta u nekoliko razrjeđenja (1:2; 1:4; 1:8; 1:16) podjednako ulije u sve epruvete.
Kombinacija antigena i antitijela događa se na granici kontakta reagensa. Kao rezultat ove interakcije, u pozitivnim slučajevima (kada se antigen podudara s antitijelom), nakon nekog vremena nastaje talog u obliku opalescentnog prstena.
Pronađena reakcija široka primjena V medicinska praksa za otkrivanje antigena antraksa u vuni, koži i mesu životinja (Ascolijeva reakcija); za otkrivanje drugih uzročnika zaraznih bolesti u patološkom materijalu dobivenom od bolesnika ili u predmetima vanjsko okruženje, kao i u sudsko-medicinski pregled odrediti vrstu proteina, posebno proteina krvi ili drugih bioloških tekućina.
Ouchterlonijeva imunodifuzija
Reakcija taloženja može se izvesti na agar gelu.
Metoda se temelji na činjenici da čestice antigena i antitijela, zbog svoje različite veličine, difundiraju u gelu različitim brzinama i, kao rezultat toga, pomiču se na različite udaljenosti. To omogućuje razdvajanje pojedinačnih antigenskih sustava u slučajevima kada su u mješavini, te stoga omogućuje proučavanje antigene strukture bakterija i složenih proteinskih tvari, seruma i životinjskih tkiva.
Vizualni i učinkovita metoda taloženje u gelu predložio je Ouchterlony.
Na Petrijevim zdjelicama s agarom prave se male rupe, izrezane na određenoj udaljenosti jedna od druge. U jedan se ulijeva antigen, u drugi serum. Reakcijske komponente difundiraju u gelu jedna prema drugoj i formiraju vidljivu taložnu liniju gdje se antigeni susreću s optimalnom koncentracijom protutijela specifičnih za njih. Budući da reagensi difundiraju koncentrično iz jažica, višestruki testovi se mogu izvesti postavljanjem više jažica koje sadrže različite antigene (ili različita razrjeđenja istog antigena) oko jažice s antitijelima.
Ouchterlonyjeva reakcija omogućuje izvođenje zaključka o prirodi antigena iz poznatog seruma i, obrnuto, iz poznatog antigena određuje se priroda protutijela.
Prednost metode je u tome što omogućuje usporedbu antigenskih komponenti složenih smjesa i procjenu njihove sličnosti ili razlike. Za usporedbu sličnosti antigena, pripremite agar s jažicama: u jednu se ulije antiserum, a u drugu antigeni koji se uspoređuju. Ako su antigeni različiti, onda su precipitacijske vrpce različito smještene.
Imunoelektroforeza
Posljednjih godina za delikatna imunološka istraživanja koristi se metoda imunoelektroforeze. Metodu je prvi opisao P.
Grabar i K. A. Williams 1953. Kombinacija je agar gel elektroforeze na staklenim pločama s imunodifuzijom. Prvo se provodi elektroforetska separacija antigena, koji je često mješavina proteina ili drugih molekula. Da bi se to postiglo, antigen se unosi u jažicu prethodno izrezanu u agaru, a ploča s agarom se neko vrijeme stavlja u zonu konstantne električne struje.
Zbog različite brzine Kretanje molekula uzrokuje podjelu antigena na sastavne dijelove. Nakon toga se taloženi imunološki serum uvodi u žlijeb koji je usječen u smjeru paralelnom s protokom struje.
Antigen i antiserum difundiraju jedan prema drugom u gelu.
Taloženje
Svaki antigen stvara precipitacijsku zonu u obliku luka sa svojim odgovarajućim antitijelima. Broj, položaj i oblik ovih linija daju ideju o sastavu izvorne mješavine antigena.
Reakcija flokulacije
Metodu je predložio Ramon 1924.
Temelji se na činjenici da mješavina toksina s antitoksičnim serumom pod određenim uvjetima daje zamućenje i taloženje. U tom slučaju reakcija se javlja ranije u onim epruvetama gdje količina antitoksina odgovara dozi koja potpuno neutralizira tu količinu toksina.
Stoga, ako je jakost toksina poznata, tada se može odrediti količina antitoksina u nepoznatom ispitivanom serumu. Da biste to učinili, pripremite nekoliko razrjeđenja ispitnog seruma, dodajte jednake količine poznatog toksina u svako razrjeđenje, a zatim promatrajte u kojoj od epruveta se prva pojavljuje flokulacija (zamućenje otopine). Određuje se početna flokulacija. Zatim se vrši izračun.
Na primjer, potrebno je odrediti koncentraciju antidifteričnih protutijela u ispitivanom serumu. U reakciji se koristi toksin difterije koji sadrži 50 Lf u 1 ml (Lf je minimalna količina toksina koju neutralizira 1 antitoksična jedinica (AU) antiseruma.
Pretpostavimo da je početna flokulacija opažena u epruveti koja sadrži 0,2 ml ovog seruma i 2 ml poznatog toksina s aktivnošću od 100 Lf (50 Lf x 2).
To znači da je 0,2 ml seruma neutraliziralo ovaj toksin. Dakle, 0,2 ml seruma sadrži 100 AE, au 1 ml ovog seruma koncentracija antitijela odgovara 500 AE (100 AE x 5).
Sličnom metodom, reakcija flokulacije može se koristiti u suprotnu svrhu - za određivanje imunizirajućih svojstava toksoida.
Za to je potreban standardni antitoksični serum.
Reakcija neutralizacije
Reakcija se koristi u dijagnostici bakterijskog trovanja hranom za određivanje bakterijskih toksina u ispitivanom materijalu. Osim toga, može se koristiti pri ispitivanju određenih objekata vanjskog okruženja za održavanje. patogene bakterije proizvode toksine, na primjer, prilikom testiranja tla na prisutnost uzročnika tetanusa ili plinske gangrene.
Poznato je da toksin, kada se pomiješa s homolognim antitoksičnim serumom, ne pokazuje svoju toksični učinak, budući da je toksin neutraliziran. Reakcija interakcije toksina s antitoksinom u pravilu je strogo specifična, stoga je za izvođenje reakcije neutralizacije u svrhu određivanja vrste toksina potrebno imati dijagnostičke serume specifične za svaku vrstu i vrstu toksina. toksin. Mješavina 2-3 antitoksična seruma ili više njih može se koristiti istovremeno ako se očekuje prisutnost nekoliko toksina u ispitivanom materijalu.
Reakcija neutralizacije omogućuje određivanje vrste i vrste toksina patogena.
Materijal koji se ispituje može biti filtrat prehrambenih proizvoda koji su navodno uzrokovali trovanje, ispiranje posuđa u kojem su se ti proizvodi nalazili itd.
Sumnjivi se toksin prvo neutralizira. Za to se u epruvetu s ispitivanim materijalom (pokusna epruveta) dodaje antitoksični dijagnostički serum (sadrži antitijela na željeni toksin); u drugu epruvetu (kontrolu) doda se jednak volumen fiziološke otopine.
Nakon kratkotrajne inkubacije, sadržaj epruveta se daje dvjema skupinama bijelih miševa (pokusnoj i kontrolnoj).
Rezultati reakcije neutralizacije uzimaju se u obzir odmah nakon smrti kontrolnih životinja. U ovom slučaju, činjenica preživljavanja primljenih životinja antitoksični serum zajedno s ispitivanim materijalom, ukazuje na prisutnost toksina u njemu koji odgovara primijenjenom serumu.
Prednost reakcije neutralizacije je visoka pouzdanost dobivenih rezultata.
No, po osjetljivosti i brzini dobivanja odgovora inferiorna je u odnosu na neke druge metode istraživanja.
Reakcije lize
Reakcije lize obično se nazivaju otapanje korpuskularnih antigena pod utjecajem protutijela specifičnih za određeni antigen u prisutnosti komplementa.
Iz imunološke reakcije, koji se temelji na fenomenu lize bakterija i drugih korpuskularnih antigena, uglavnom se koriste reakcije bakteriolize i hemolize.
Reakcija bakteriolize
Reakcija se odvija i in vitro i in vivo. Posljednja je poznata kao V.I. reakcija. Isaev-Pfeiffer.
Ovi su znanstvenici pokazali da ako zamorci pre-imunizirati antigenima kolere, zatim naknadno ubrizgavanje u trbušnu šupljinu visoko virulentne kulture Vibrio cholerae ne uzrokuje infekciju životinja, jer trbušne šupljine Uzročnik se otapa pod utjecajem specifičnih protutijela.
Naknadno sam ja.
I. Mečnikov je dokazao da se slično otapanje Vibrio cholerae pod utjecajem imunološkog seruma događa u epruveti ako se glavnim komponentama doda svježi serum, izvor komplementa. Otapanje bakterija pod djelovanjem specifičnih protutijela u prisutnosti komplementa naziva se reakcija bakteriolize.
Pri postavljanju reakcije bakteriolize najprije se priprema serija 10-erostrukih razrjeđenja ispitnog seruma. Zatim se u svaku epruvetu doda ista količina (1-2 kapi) mikrobne suspenzije. U smjesu se dodaje komplement. Nakon inkubacije na 37 °C, smjesa se inokulira iz svake epruvete na hranjivi medij kako bi se utvrdila prisutnost ili odsutnost živih bakterija.
Reakcija se može koristiti za određivanje protutijela pomoću poznatog mikroorganizma ili za određivanje vrste mikroba pomoću dijagnostičkog imunološkog seruma.
U praktični rad Ovu reakciju bakteriolozi rijetko koriste, uglavnom za razlikovanje kolere i koleri sličnih vibrija.
Reakcija hemolize
Mehanizam hemolize sličan je mehanizmu bakteriolize.
Crvena krvna zrnca koja se koriste u reakciji su antigen. Izvor protutijela je antieritrocitni serum (npr. ako se u reakciji koriste ovčji eritrociti, tada se potreban serum sa specifičnim antieritrocitnim protutijelima dobiva od kunića imuniziranih ovčjim eritrocitima).
Krvni serum zamorca najčešće se koristi kao komplement u reakcijama lize, budući da sadrži znatno više komplementa od seruma drugih životinja.
U slučajevima kada protutijela u prisutnosti komplementa razaraju crvena krvna zrnca, hemoglobin izlazi iz njih, a reakcijska smjesa mutne suspenzije crvenih krvnih zrnaca pretvara se u prozirnu crvenu tekućinu (lakirana krv).
Ova reakcija se naziva hemoliza. U laboratorijskoj praksi koristi se kao pokazatelj adsorpcije komplementa u reakciji vezanja komplementa.
Povezane informacije:
Tražite na stranici:
Sadržaj predavanja: Predmet i kratka povijest razvoja mikrobiologije. Opća svojstva mikroorganizama i njihov položaj u prirodi. reakcija taloženja
Veterinarska mikrobiologija i njezine zadaće
mir.zavantag.com > Biologija > Predavanje
1 … 7 8 9 10 11 12 13 14 15
| ^
RA je prvi razvio M. Gruber 1896. godine. Suština reakcije je interakcija antitijela s antigenom, koja rezultira lijepljenjem (aglutinacijom) mikroba uz stvaranje ljuskica i grudica vidljivih golim okom. RA se široko koristi za serološka dijagnostika puno bakterijske infekcije(bruceloza, sakagija, salmoneloza, kolibaciloza i dr.) te za serološku identifikaciju vrsta i tipova izoliranih mikroorganizama. Postoji više metoda za određivanje stadija RA: epruveta (volumen), drip (ploča), kap krvi, prstenasta reakcija s mlijekom, reakcija hemaglutinacije i njezine varijante (RZGA, RNGA), Coombsov antiglobulinski test itd. ^ – umjesto seruma uzima se krv. Izvodi se reakcija ploče. Dijagnosticirana je pulloroza pilića i purana, mikoplazmoza pilića. Coombsova reakcija�� omogućuje prepoznavanje nepotpunih antitijela. Potonji su monovalentni, pa stoga inhibiraju stvaranje aglutinata. Metoda se temelji na upotrebi antiglobulinskog seruma, koji služi kao posrednik za povezivanje nepotpunih antitijela fiksiranih na korpuskularne antigene (eritrociti, bakterije). ^ – ne odnosi se na serološke i dijagnostički točne reakcije, ali vam omogućuje otkrivanje antigena - hemaglutinina i uspostavljanje hemaglutinirajućih svojstava (sposobnost aglutinacije crvenih krvnih stanica) kod nekih bakterija i mikoplazme. RNGA– posljednjih godina zauzima jedno od vodećih mjesta u serodinamici. Njegova bit leži u činjenici da se proteinske molekule antigena odgovarajućeg patogena ili protutijela prethodno adsorbiraju na taninom tretirane eritrocite ovce ili druge životinje. Zatim se provodi reakcija miješanjem senzibiliziranih eritrocita s krvnim serumima bolesnih životinja ili, u drugom slučaju, s antigenom koji se proučava. Ako u serumu postoji posebna. Antitijela na ovaj antigen (ili obrnuto) uzrokuju aglutinaciju crvenih krvnih stanica - pozitivnu reakciju. Predložio R. Kraus 1897. godine. Precipitacija je pojava koja se opaža tijekom interakcije precipitinskih protutijela i precipitinogenog antigena. Bit reakcije je promjena u disperziji antigenskih koloida i njihovo taloženje pod utjecajem specifičnih antitijela koja se nalaze u imunološkom serumu. RP se može isporučiti u epruvetama u tekućem mediju (prstenasta reakcija) ili u agar gelu (ploča RP). Reakciju prstenaste precipitacije prvi je predložio Ascoli (1910.); ona se najčešće koristi za dijagnozu antraksa. Prilikom dirigiranja veterinarski pregled RP je metoda za utvrđivanje krivotvorenja mesa, brašna i drugih proizvoda. Posebno značenje Ova reakcija javlja se u sudsko-medicinskom pregledu pri određivanju krvne grupe. Međutim, uporaba reakcije taloženja u tekućem mediju ne omogućuje karakterizaciju heterogenosti antigena, tj. količina i koncentracija antigena u preparatu. Ove informacije mogu se dobiti stavljanjem RP u gel (obično agar). Uz brzinu kretanja, različiti antigeni lijeka difundiraju nejednako, stvarajući precipitate u debljini prozirnog gela na mjestu susreta s homolognim antitijelom. Lokalizacija i koncentracija precipitinskih linija bit će karakteristična za svaku komponentu antigenskog pripravka, što služi kao kriterij njegove kvalitete. Razrjeđivanjem lijeka može se karakterizirati relativni sadržaj antigena u njemu. Razvijeno je nekoliko metoda za postavljanje RDP-a: metoda izravne jednodimenzionalne difuzije prema Houdinu (1946.), metoda jednostavne radijalne imunodifuzije prema Manciniju (1963.), metoda dvostruke difuzije u agar gel prema Ouchterlonyju ( 1948), itd. ^
(RN) na modelu toksini tetanusa i antitoksini. Bit RN leži u sposobnosti homolognih antitijela imunološkog seruma da suzbiju (neutraliziraju) infektivna svojstva patogena ili njegovih metaboličkih produkata. Da bi se utvrdio rezultat reakcije, laboratorijske životinje, CC i EC su zaražene mješavinom antigena i antitijela. Pokazatelj je pozitivan RN - odsutnost smrti bioloških testnih sustava. U bakterijska praksa RN se koristi u dijagnostici anaerobne enterotoksemije, botulizma itd. RN se provodi za detekciju i titraciju toksina, toksoida ili antitoksina. Koristi se za dokazivanje antitijela u krvnom serumu i za dokazivanje antigena u ispitivanom materijalu (na brucelozu, sakagiju, rikeciozu, tuberkulozu itd.). Ova reakcija je neizravna reakcija dva sustava. Uključuje 5 komponenti:
Komponente 3,4,5 čine sustav indikatora. Ako antigen i antitijelo ispitivanog seruma odgovaraju jedno drugom prijatelju, nastaje imunološki kompleks antigen-antitijelo, koji veže i izvlači komplement iz okoline u kojoj se javlja reakcija. Ako u ispitivanom serumu nema protutijela koja odgovaraju antigenu, navedeni kompleks se ne formira - komplement ostaje slobodan. Budući da su to nevidljivi procesi, da bi se riješilo pitanje što se dogodilo s komplementom, u epruvetu se kao indikator uvode komponente hemolitičkog sustava - hemolitički serum + crvena krvna zrnca. Ako je komplement vezan u bakteriološkom sustavu, neće doći do hemolize crvenih krvnih stanica, nalaz je pozitivan – serum sadrži protutijela. Prisutnost hemolize služi kao pokazatelj prisutnosti slobodnog komplementa u bakteriološkom sustavu, što je moguće samo ako u ispitivanom serumu nema protutijela - rezultat je negativan. RSC se javlja pod strogim kvantitativni odnosi komponente. To se postiže njihovom preliminarnom titracijom (komplement i hemolitički serum titriraju se na dan reakcije; mikrobni antigen - jednom unutar 2-3 mjeseca). Titracija je određivanje najmanje količine određene komponente u reakciji za izvođenje reakcije; višak ili manjak znači iskrivljenje rezultata. RDSC je varijanta RSK, ali se razlikuje po tome što prva faza reakcije traje 16-18 sati na hladnom (40C), što povećava osjetljivost zbog dulje adsorpcije komplementa kompleksom antigen-antitijelo. |
7 8 9 10 11 12 13 14 15
Sličan:
| Definicija pojma “ekološka mikrobiologija” Opća mikrobiologija, koja proučava međusobne odnose mikroorganizama, s objektima okoliša i makroorganizmima |
Najopćenitiji i temeljni pojmovi koji odražavaju bitne... Filozofija je znanost koja najviše proučava opće odredbe o čovjeku, prirodi i znanju |
||
| Plan Predmet i metoda discipline “Međunarodni ekonomski odnosi”... Predmet i metoda discipline “Međunarodni ekonomski odnosi” i povijest razvoja međunarodnih ekonomskih odnosa |
Pitanja za ispit iz predmeta “Pravna psihologija” Za studente… Pojam pravne psihologije. Predmet, ciljevi i povijest razvoja pravne psihologije |
||
| 1. Predmet i metoda povijesti političkih i pravnih nauka > Predmet… To iz razloga što se u okviru ove pravne discipline proučava i obrađuje specifičan predmet - povijest nastanka... |
1.
Povijest filozofije kao znanosti. Njegov predmet i metoda |
||
| Studentski savez Ministarstva obrazovanja i znanosti Republike Kazahstan... Ovim pravilnikom o republičkom natjecanju „Učenik godine 2011.“ (u daljnjem tekstu: natjecanje) utvrđuju se njegovi ciljevi i zadaci, sudionici... |
Definicija pojmova “mikrobiologija” i “mikroorganizam” … |
||
| Pitanja za pripremu za test iz discipline "konfliktologija" Konfliktologija kao znanost: predmet, ciljevi, zadaci, aktualni problemi, značaj u moderna pozornica razvoj društva |
O regionalnom natjecanju video spotova “K-role-k!” Opće odredbe Ovim Pravilnikom utvrđuju se ciljevi, ciljevi, načela Natječaja, postupak njegove organizacije i provedbe, postupak sudjelovanja i utvrđivanja... |
Dodajte gumb na svoju web stranicu:
Školski materijal
mir.zavantag.com
Reakcija taloženja
Precipitacija i aglutinacija prilično su slične reakcije koje se uglavnom razlikuju na temelju fizička svojstva AG.
U prvom slučaju, prikazan je u topivim, u drugom - u korpuskularnim oblicima. Osnova RP je stvaranje taloga tijekom AG-AT reakcije. RP je vrlo specifičan i osjetljiv.
Reakcijski sastojci:
1. topljivi AG ili hapten (precipitigen);
2. AT - precipitini (imuni precipitirajući serum; dobiva se imunizacijom kunića odgovarajućim otopinama antigena);
Reakcija taloženja
izotonična otopina natrijeva klorida ili agar gel.
Metode za postavljanje RP:
1) RP u otopinama - str.
prstenasta oborina;
2) RP u gelu.
Reakcija prstenaste precipitacije provodi se u uskim precipitacijskim epruvetama u koje se ulijevaju taložni serumi.
Zatim se ulije otopina precipitinogena. Ako je reakcija pozitivna, na granici između sastojaka pojavljuje se mutni taložni prsten.Primjer ove metode određivanja stupnja RP je Ascolijeva reakcija termoprecipitacije, koja se koristi za detekciju termostabilnog haptena uzročnika antraksa, ekstrahiranog iz životinjskih organa, kože, i vune ekstrakcijom kuhanjem. Jedna od varijanti RP u gelu (Ouchterlonyjeva reakcija) omogućuje određivanje toksikogenosti bacil difterije koristeći antitoksični serum.
U Petrijevoj zdjelici sa hranjivi medij Stavite traku filter papira natopljenu antitoksičnim serumom protiv difterije i inokulirajte je test kulturama u obliku pruga okomito na traku papira. Inkubirajte na 37 PS 24 sata. U prisutnosti toksigene kulture na mjestu interakcije toksina s antitoksinom stvaraju se precipitacijske linije.Reakcija taloženja u gelu naziva se imunodifuzija.
Često foreza u gelu - imunoelektroforeza. Princip metode: antigen koji se proučava se frakcionira elektroforetski. dobivene frakcije se analiziraju dvostrukom difuzijom pomoću antiseruma.
Ascoli test se provodi za dijagnosticiranje antraksa kako bi se otkrio antigen bacila antraksa. Za izvođenje reakcije taloženja potrebno je imati: precipitinogen - hapten B.
Antrachis (ekstrakt tkiva), precipitin (taloženi serum za antraks) i fiziološka otopina.
Priprema termoprecipitinogena.
1. Tikvicu od 8 koja sadrži 1 g zdrobljene kožice ili 1 ml B. antilgas kulture napunite s 10 ml fiziološke otopine.
2. Stavite tikvicu u kipuću kupelj 30-45 minuta.
3. Filtrirajte kroz azbestni materijal. Filtrat treba biti potpuno proziran. Za reakciju taloženja, filtrat se razrijedi 100 puta ili više.
Postavljanje prstenaste reakcije taloženja.
1) 0,3 ml seruma za taloženje, cijelog ili razrijeđenog 1:5, 1:10, ulije se u epruvetu za taloženje.
2) Precipitinogen se pažljivo nanosi duž stijenke epruvete. Reakcija se smatra pozitivnom ako se mutni prsten taloženog proteina formira na granici dviju tekućina najkasnije 5-15 minuta.
Pri postavljanju reakcije taloženja koriste se sljedeće kontrole:
a) antigen i fiziološka otopina;
b) specifični serum i fizikalni.
c) antigen i nespecifični serum.
U svim kontrolnim epruvetama ne bi trebalo biti zamućenja. Za taložnu reakciju koriste se posebne taložne epruvete visine 40-60 mm i promjera 4-5 mm. Taloženje u uskim epruvetama nastaje mnogo brže i jasnije se pojavljuje nego u obične tube, dobro se operu i osuše, tako da im staklo bude potpuno prozirno i suho.
U reakciji taloženja taloži se specifični imunološki kompleks koji se sastoji od topljivog antigena (lizat, ekstrakt, hapten) i specifičnog protutijela u prisutnosti elektrolita.
Mutni prsten ili talog nastao kao rezultat ove reakcije naziva se talog. Ova se reakcija uglavnom razlikuje od reakcije aglutinacije u veličini čestica antigena.
Reakcija precipitacije obično se koristi za određivanje antigena u dijagnostici niza infekcija (antraks, meningitis itd.); u sudskoj medicini - za određivanje vrste krvi, sperme itd.; u sanitarnim i higijenskim studijama - pri utvrđivanju krivotvorenja proizvoda; uz njegovu pomoć utvrđuje se filogenetski odnos životinja i biljaka. Za reakciju vam je potrebno:
1. Antitijela (precipitini) - imunološki serum s visokim titrom antitijela (ne nižim od 1:100 000). Titar taloženog seruma određen je najvećim razrjeđenjem antigena s kojim reagira. Serum se obično koristi nerazrijeđen ili razrijeđen 1:5 -1:10.
2. Antigen - otopljene tvari proteinske ili lipoidne polisaharidne prirode (puni antigeni i hapteni).
3. Izotonična otopina.
Glavne metode za provođenje reakcije taloženja su: prstenasta reakcija taloženja i reakcija taloženja u agaru (gelu).
Pažnja! Sve komponente uključene u reakciju taloženja moraju biti potpuno prozirne.
Prstenasta reakcija taloženja. Pasteurovom pipetom dodajte 0,2 - 0,3 ml (5-6 kapi) seruma u epruvetu za taloženje (serum ne smije dospjeti na stijenke epruvete). Antigen u istom volumenu pažljivo se slojevito nanosi na serum, izlijevajući ga tankom Pasteur-ovom pipetom uz stijenku epruvete. Epruveta se drži u nagnutom položaju. Kada se pravilno nasloje, trebala bi postojati jasna granica između seruma i antigena. Pažljivo, kako ne bi došlo do miješanja tekućine, postavite epruvetu u stalak. Ako je reakcija pozitivna, na granici antigena i antitijela nastaje mutni "prsten" - talog.
Reakcija taloženja u agaru(gele). Osobitost reakcije je da se interakcija antigena i antitijela odvija u gustom okruženju, tj. gel. Nastali talog daje mutnu crtu u debljini medija. Odsutnost trake ukazuje na odstupanje između komponenti reakcije. Ova reakcija ima široku primjenu u biomedicinskim istraživanjima, posebice u proučavanju stvaranja toksina u uzročniku difterije.
Reakcija lize (imunološka citoliza)
Imunološka liza- ovo je otapanje stanica pod utjecajem protutijela uz obvezno sudjelovanje komplementa. Za reakciju vam je potrebno:
1. Antigen- mikrobi, crvena krvna zrnca ili druge stanice.
2. Antitijelo(lizin) - imunološki serum, rjeđe bolesnik. Bakteriolitički serum sadrži protutijela koja sudjeluju u razgradnji bakterija; hemolitički - hemolizini koji potiču lizu crvenih krvnih stanica; za lizu spiroheta potrebni su spirohetolizini, stanično-itolizini itd.
3. Upotpuniti, dopuna. Najviše komplementa sadrži serum zamoraca. Ovaj serum (mješavina nekoliko životinja) obično se koristi kao nadopuna.
4. Izotonična otopina.
Reakcija taloženja.
| Naziv parametra | Značenje |
| Tema članka: | Reakcija taloženja. |
| Rubrika (tematska kategorija) | Obrazovanje |
Reakcija taloženja (RP) - taloženje topljivog antigena pod djelovanjem protutijela u prisutnosti elektrolita. Vidljivi učinak reakcije (fenomen taloženja) – naoblaka (stvaranje mutnog prstena ili sedimenta - talog).
RP se koristi za otkrivanje nepoznatog antigena u brojnim slučajevima zarazne bolesti: za antraks, tularemiju, meningitis, male boginje. U sudskoj medicini koristi se za određivanje vrste krvi i sperme; u sanitarnim i higijenskim studijama - za utvrđivanje krivotvorenja prehrambenih proizvoda. RP je vrlo osjetljiv i može otkriti antigen u razrjeđenjima od 1:1 000 000 i 1:10 000 000.
Komponente reakcije taloženja.
1. Antigen (precipitinogen) - Ovo je antigen molekularne prirode, koji se nalazi u fino raspršenom (topivom) stanju. Precipitinogeni - razni lizati ili ekstrakti tkiva itd.
Objavljeno na ref.rf
Precipitinogen se razlikuje od aglutinogena po veličini čestica antigena. Aglutinogen Ima veličine ćelija(to nisu uništene cijele stanice), već dimenzije precipitinogen razmjerno s molekularne veličine(to su bjelančevine i njihovi kompleksi s ugljikohidratima ili lipidima). Otopina precipitinogena transparentan.
2. Antitijela (precipitini) nalaze se u ljudskom krvnom serumu ili u imunodijagnostičkim precipitirajućim serumima koji sadrže poznata protutijela.
3. elektrolit– izotonična otopina natrijeva klorida.
Dobivanje precipitinogena.
Dobiva se mljevenjem materijala i ekstrahiranjem proteinskih antigena iz njega kuhanjem ili drugim metodama.
Primjeri precipitinogena: lizati ili ekstrakti raznih organa i tkiva, strani krvni serum (serum je riješenje, prije svega, razne proteini), filtrati bujonskih kultura mikroba, solni ekstrakti mikroba, autolizati itd.
Priprema taloženih seruma.
Dobiva se hiperimunizacijom kunića odgovarajućim precipitinogenima. Takvi serumi sadrže antitijela na one precipitinogene kojima su kunići imunizirani.
Primjeri taloženih seruma: taloženje seruma antraksa(sadrži antitijela na antigene antraksa), precipitirajući antimeningokokni serum(sadrži antitijela protiv antigena uzročnika meningitisa) itd.
Titar precipitirajući serum - najveće razrjeđenje precipitinogena pri kojem serum još daje reakciju precipitacije.
Metode postavljanja RP.
1. Prstenasta reakcija taloženja – provodi se u posebnim taložnim cijevima (promjer - 0,4-0,5 cm, visina - 7-8 cm). U epruvetu se doda 0,2 - 0,3 ml taloženog seruma i ista količina precipitinogena pažljivo se slojevito nanese duž stijenke dugim izljevom Pasteurove pipete. Dalje, pažljivo od horizontalni položaj Epruvete se postavljaju okomito.
Obračunavanje rezultata reakcije provodi se pojavom bijelog prstena na granici antigen-antitijelo. Ako je reakcija pozitivna uočava se stvaranje takvog prstena. U ovom slučaju, antigen odgovara antitijelu i oni se vežu.
Ako se prokuha i procijedi vodeni ekstrakti organa i tkiva, tada se reakcija obično naziva reakcija termoring precipitation (na primjer, kod dijagnosticiranja antraksa).
2. Reakcija taloženja u gelu – provodi se u Petrijevim zdjelicama ili na predmetnim stakalcima, gdje se stavlja sloj agar gela. Kako se gel stvrdnjava, izrezuju se jažice u koje se stavljaju antigeni ili antitijela, ili oboje. razlikovati 2 metode RP u gelu:
a) metoda jednostavna (radijalna) imunodifuzija: u jažicu se stavi jedna od komponenti imunološke reakcije (antigen ili antitijelo), a druga se komponenta pomiješa s agarom; ako je rezultat pozitivan (antigen odgovara antitijelu) a taložni prsten ;
b) metoda dvostruka imunodifuzija: i antitijelo i antigen se stave u odvojene jažice, difundiraju jedno prema drugom u agar gelu; ako je rezultat pozitivan gdje se stvaraju antitijela i antigen oborinske linije.
Primjer RP u gelu je Ouchterlonyjeva reakcija dvostruke imunodifuzije kod dijagnosticiranja difterije
Imunoelektroforeza – Ovo je metoda koja kombinira metodu elektroforeze i reakciju taloženja. Mješavina antigena (na primjer, serumskih proteina) odvaja se u gel elektroforezom. Zatim, da bi se pronašao i identificirao protein od interesa (nepoznati antigen), koristi se dijagnostički precipitirajući serum koji sadrži antitijela na taj protein (poznato antitijelo). Da biste to učinili, dijagnostički serum se uvodi u utor paralelno s proteinima. Ako među proteinima postoji onaj koji odgovara antitijelu koje se nalazi u serumu, tada oborinske linije.
Reakcija taloženja. - pojam i vrste. Klasifikacija i značajke kategorije "Reakcija oborine." 2017., 2018. godine.
