हेल्मिंथियासिस का प्रयोगशाला निदान। पैथोलॉजिकल ऊतकों को खुरच कर प्राप्त लीशमैनिया की शुद्ध संस्कृति को अलग करने की विधि

सरल तरीके

स्थूल विधि. मल की जांच करते समय, आप कृमि, उनके सिर, खंड और स्ट्रोबिला के टुकड़े पा सकते हैं, जो स्वतंत्र रूप से या कृमि मुक्ति के बाद निकलते हैं। यह विधि विशेष रूप से एंटरोबियासिस, टेनियासिस और टेनियारिनचोसिस की पहचान के लिए अनुशंसित है।

मल के छोटे हिस्से को एक फ्लैट स्नान में या पेट्री डिश में पानी के साथ मिलाया जाता है और देखा जाता है अच्छी रोशनीएक गहरे रंग की पृष्ठभूमि पर, यदि आवश्यक हो तो एक आवर्धक कांच का उपयोग करके, चिमटी या पिपेट के साथ कृमि और सभी संदिग्ध सफेद संरचनाओं को हटा दें। एकत्रित सामग्री को आगे के अध्ययन के लिए पानी के साथ दूसरे कप में या पतला ग्लिसरॉल या आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान की एक बूंद में एक ग्लास स्लाइड पर स्थानांतरित किया जाता है।

निपटान विधि के साथ, परीक्षण किए जा रहे मल के पूरे हिस्से को एक कांच के सिलेंडर में पानी के साथ मिलाया जाना चाहिए, फिर सावधानीपूर्वक सूखा दिया जाना चाहिए ऊपरी परतपानी। इसे कई बार दोहराया जाता है. जब तरल साफ हो जाता है, तो इसे सूखा दिया जाता है, और तलछट की जांच ग्लास बाथ या पेट्री डिश में छोटे भागों में की जाती है, जैसा कि ऊपर बताया गया है।

हेल्मिंथ अंडे या लार्वा का पता लगाने के लिए मल की जांच करने का मुख्य तरीका सूक्ष्मदर्शी विधियां हैं। विभिन्न शोध विधियों का वर्णन नीचे किया गया है। परीक्षा की विश्वसनीयता बढ़ाने के लिए, परीक्षणों को प्रतिदिन कई बार या 1-3 दिनों के अंतराल के साथ दोहराया जा सकता है।

देशी धब्बा विधि. नेटिव स्मीयर सबसे आम और तकनीकी रूप से है उपलब्ध विधिमल अध्ययन. देशी स्मीयर में आप सभी प्रकार के कृमि के अंडे और लार्वा का पता लगा सकते हैं। हालाँकि, यदि मल में अंडों की संख्या कम है, तो उन्हें हमेशा नहीं पाया जा सकता है। इसलिए, केवल देशी स्मीयर का उपयोग करके मल परीक्षण पूरा नहीं होता है और इसे संवर्धन विधियों के साथ पूरक किया जाना चाहिए। मल के नमूने से तैयार की गई चार स्लाइडों को बिना कवर स्लिप वाली दो स्लाइडों पर देखने से देशी स्मीयर की जांच करने की दक्षता में उल्लेखनीय रूप से सुधार होता है, जिससे काटो विधि (नीचे देखें) के साथ मल की लगभग समान मात्रा की जांच की जा सकती है।

मिश्रित मल की एक छोटी मात्रा (माचिस की तीली के आकार की) को 50% ग्लिसरीन घोल की एक बूंद में कांच की स्लाइड की सतह पर लकड़ी की छड़ी से पतला कर दिया जाता है। आमतौर पर एक स्लाइड पर दो स्मीयर तैयार किये जाते हैं। स्मीयर को कम आवर्धन माइक्रोस्कोप (वॉल्यूम 8, लगभग 7) के नीचे देखा जाता है। संदिग्ध मामलों में, इसे एक कवर ग्लास से ढक दिया जाता है और उच्च आवर्धन (आवर्धन 40) के तहत जांच की जाती है।

एक बड़ा देशी स्मीयर तैयार करने के लिए, 200-300 मिलीग्राम मल (एक बड़े मटर के आकार का) को ग्लिसरॉल के 50% जलीय घोल की 15-20 बूंदों में 6x9 सेमी मापने वाले ग्लास पर पीस लिया जाता है। दूरबीन स्टीरियोस्कोपिक माइक्रोस्कोप (obv. 4, लगभग. 12.5 या obv. 2, लगभग. 17) के नीचे बिना कवर चश्मे के संचारित प्रकाश में देखें। संदिग्ध मामलों में, आप लेंस को उच्च आवर्धन पर स्विच कर सकते हैं। ऐसे स्मीयरों में, रंगीन बड़े हेल्मिंथ अंडे स्पष्ट रूप से दिखाई देते हैं, जबकि बौने टेपवर्म के पारदर्शी अंडे कुछ हद तक खराब होते हैं। यह विधि छोटे अंडों का पता लगाने के लिए उपयुक्त नहीं है। साथ ही, अध्ययन के तहत सामग्री की एक बड़ी मात्रा और क्षेत्र की उच्च गहराई के साथ देखने का एक बड़ा क्षेत्र पारंपरिक देशी स्मीयर की तुलना में इस संशोधन की महत्वपूर्ण प्रभावशीलता सुनिश्चित करता है।

सिलोफ़न (काटो विधि) के साथ गाढ़ा स्मीयर देशी स्मीयर का अध्ययन करने की तुलना में अधिक प्रभावी है, लेकिन इसके लिए संवर्धन विधियों के साथ संयोजन की भी आवश्यकता होती है। सभी प्रकार के कृमियों के अंडों का पता लगाया जाता है, हालांकि, बौने टेपवर्म (पारदर्शी अंडे) या ओपिसथोरचिड (छोटे अंडे) के अंडों का पता लगाने के लिए, प्रयोगशाला तकनीशियन को विशेष रूप से सावधान रहना चाहिए कि वे छूट न जाएं (चित्र 21)।

यह विधि ग्लिसरीन से साफ किए गए और मैलाकाइट हरे रंग से रंगे हुए मल के गाढ़े टुकड़े में हेल्मिंथ अंडे का पता लगाने पर आधारित है। प्री-हाइड्रोफिलिक सिलोफ़न को 20 x 40 मिमी मापने वाली प्लेटों में काटा जाता है और काटो मिश्रण (मैलाकाइट ग्रीन के 3% जलीय घोल का 6 मिलीलीटर, ग्लिसरीन का 500 मिलीलीटर, 6% फिनोल समाधान का 500 मिलीलीटर) में डुबोया जाता है। मिश्रण का 3-5 मिलीलीटर 100 प्लेटों के लिए पर्याप्त है, जो एक दिन में उपयोग के लिए तैयार हो जाता है और कमरे के तापमान पर एक अच्छी तरह से सीलबंद कंटेनर में 6 महीने तक उसी मिश्रण में संग्रहीत किया जा सकता है। मैलाकाइट ग्रीन (प्रयोगशाला सहायक की आंखों की थकान को कम करने के लिए अनुशंसित) और फिनोल (कीटाणुनाशक) की अनुपस्थिति में, आप ग्लिसरॉल के केवल 50% जलीय घोल का उपयोग कर सकते हैं, अध्ययन की प्रभावशीलता कम नहीं होती है।

चावल। 20. काटो के अनुसार सिलोफ़न से गाढ़ा स्टूल स्मीयर तैयार करने की विधि

100 मिलीग्राम मल को एक कांच की स्लाइड पर लगाया जाता है, ऊपर बताए अनुसार सिलोफ़न प्लेट से ढक दिया जाता है और रबर स्टॉपर से दबाया जाता है ताकि मल सिलोफ़न के नीचे से न फैले। स्मीयर तैयार करने के 1 घंटे (गर्म मौसम में - 30-40 मिनट) के बाद माइक्रोस्कोप के कम या उच्च आवर्धन पर माइक्रोस्कोपी की जाती है। दवा की अपारदर्शिता का कारण मल की मोटी परत, काटो मिश्रण में प्लेट का खराब प्रसंस्करण, या सिलोफ़न के तहत दवा के संपर्क की अपर्याप्त अवधि हो सकती है। ग्लिसरीन के साथ लंबे समय तक सफाई और तैयारी की अत्यधिक सूखने से भी अंडों का पता लगाना मुश्किल हो जाता है।

एस.एस. के अनुसार घुमाने की विधि शुल्मन. यह विधि मल में हेल्मिंथ लार्वा, मुख्य रूप से स्ट्रांगाइलोइड्स का पता लगाने के लिए प्रस्तावित है। केवल ताजा उत्सर्जित मल की जांच की जाती है, जिनमें से 2-3 ग्राम को कांच के जार में स्थानांतरित किया जाता है, बर्तन की दीवारों को छुए बिना, शारीरिक समाधान की 3-5 गुना मात्रा के साथ गोलाकार गति में कांच की छड़ से हिलाया जाता है। केंद्र में कृमि के अंडे और लार्वा जमा हो जाते हैं। मिश्रण पूरा होने के बाद, छड़ी के अंत में बूंद को तुरंत एक ग्लास स्लाइड में स्थानांतरित किया जाता है, एक कवरस्लिप के साथ कवर किया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है।

संवर्धन के तरीके. संवर्धन विधियां अंडों के विशिष्ट गुरुत्व और उपयोग किए गए खारे घोल में अंतर पर आधारित होती हैं, जिससे उन्हें कम मात्रा में पता लगाया जा सकता है। यदि अंडों का विशिष्ट गुरुत्व तरल के विशिष्ट गुरुत्व से अधिक है, तो अंडे एक तलछट में केंद्रित होते हैं, जिसकी जांच माइक्रोस्कोप के तहत की जाती है। इस अवसादन विधि का उपयोग ट्रेमेटोड अंडों के लिए किया जाता है। घोल के उच्च विशिष्ट गुरुत्व के साथ, अंडे तरल की सतह पर तैरते हैं, और फिर फिल्म की जांच की जाती है। ये प्लवनशीलता (फ्लोटिंग) विधियां हैं, ये हुकवर्म, व्हिपवर्म और बौने टेपवर्म के अंडों का पता लगाने के लिए सबसे प्रभावी हैं।

प्लवन विधियाँ. फुलबॉर्न विधि सोडियम क्लोराइड के संतृप्त घोल में हेल्मिंथ अंडों के तैरने पर आधारित है, जिसमें उच्च सापेक्ष घनत्व (1.2) होता है, जिससे कम मात्रा में अंडों का पता लगाना संभव हो जाता है। यह विधि देशी स्मीयर का अध्ययन करने से अधिक प्रभावी है, हालाँकि यह अधिक जटिल है। विधि के लाभ कम लागत और पहुंच हैं। देशी स्मीयर और फुलबॉर्न विधि के अध्ययन को संयोजित करने की अनुशंसा की जाती है।

उबलते समय 1 लीटर पानी में 400 ग्राम सोडियम क्लोराइड घोलकर एक संतृप्त घोल तैयार किया जाता है। विलयन का आपेक्षिक घनत्व 1.18-1.22 है। घोल को एक बंद बोतल में संग्रहित किया जाता है। विश्लेषण करने के लिए, 2-3 ग्राम मल को 30-50 मिलीलीटर की मात्रा वाले जार में रखा जाता है और छड़ी से हिलाते हुए, सोडियम क्लोराइड का एक संतृप्त घोल लगभग शीर्ष पर डाला जाता है। बड़े तैरते कणों को शीघ्रता से हटाने के लिए कागज की एक पट्टी का उपयोग किया जाता है। 45-60 मिनिट बाद. एक तार लूप के साथ व्यवस्थित होने के बाद, सतह की फिल्म को हटा दें और इसे 50% जलीय ग्लिसरॉल घोल की एक बूंद में एक ग्लास स्लाइड पर स्थानांतरित करें। फिल्म को लूप से हटाने के बजाय, आप ऊपर से जार में घोल डाल सकते हैं, कांच की स्लाइड से ढक सकते हैं, जिसकी सतह पर तैरते अंडे चिपक जाते हैं। कई तैयारियां की जा रही हैं. इसके अतिरिक्त, तलछट से 2-4 तैयारियों की जांच की जाती है, इसे 2 ग्लास स्लाइडों पर एक आंख पिपेट के साथ इकट्ठा किया जाता है। सतह फिल्म के अलावा, तलछट की जांच करना भी आवश्यक है, क्योंकि ट्रेमेटोड्स, टैनीइड्स और अनिषेचित राउंडवॉर्म अंडे इस घोल में तैरते नहीं हैं। कई कृमियों के अंडे नमक के घोल में तुरंत सतह पर नहीं तैरते हैं। इसलिए, यदि बौने टेपवर्म अंडों की अधिकतम संख्या 15-20 मिनट के बाद निकलती है, तो एस्केरिस - 1.5-2 घंटे के बाद, व्हिपवर्म - 2-3 घंटे के बाद।

इस प्रकार, इस विधि के फायदों में इसकी कम लागत और उपलब्धता शामिल है, नुकसान में सतह फिल्म और तलछट पर तैयारियों को देखने की आवश्यकता, साथ ही निपटान की अवधि शामिल है।

ई.वी. कलंतार्यन की विधि भी एक संवर्धन विधि है, लेकिन यह फुलबॉर्न विधि की तुलना में अधिक प्रभावी और सरल है। 1.38 के सापेक्ष घनत्व वाले सोडियम नाइट्रेट के संतृप्त घोल का उपयोग किया जाता है। इसलिए, अधिकांश कृमियों के अंडे तैरते हैं और सतह की फिल्म में पाए जाते हैं; तलछट की जांच की आवश्यकता नहीं होती है।

सोडियम नाइट्रेट का संतृप्त घोल तैयार करने के लिए 1 किलो सोडियम नाइट्रेट नमक (सोडियम नाइट्रेट) को 1 लीटर पानी में घोलकर तब तक उबाला जाता है जब तक कि यह पूरी तरह से घुल न जाए और सतह पर एक फिल्म न बन जाए। बिना छाने सूखी बोतल में डालें। सोडियम नाइट्रेट की अनुपस्थिति में, इसे 1.7 किलोग्राम प्रति 1 लीटर पानी में घोलकर अमोनियम नाइट्रेट (अमोनियम नाइट्रेट) से बदला जा सकता है। परिणामी घोल का सापेक्ष घनत्व 1.3 है, जो सोडियम नाइट्रेट घोल की तुलना में दक्षता को थोड़ा कम कर देता है।

विधि के लाभ: अधिकांश कृमियों के अंडे तेजी से तैरते हैं और सतह की फिल्म में पाए जाते हैं, जिससे तलछट की जांच करने की आवश्यकता समाप्त हो जाती है। विधि के नुकसान में सोडियम नाइट्रेट की कमी है, साथ ही यह तथ्य भी है कि ट्रेमेटोड अंडे और टैनिड ऑन्कोस्फीयर तैरते नहीं हैं और तलछट में रहते हैं। यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि जब मल को लंबे समय तक (1-2 घंटे से अधिक) घोल में रखा जाता है, तो कुछ कृमियों के अंडे फूलने और जमने लगते हैं, और सतह की फिल्म से गायब हो जाते हैं।

अवसादन विधियाँ

पी. पी. गोरीचेव की विधि अंडे के अवसादन के सिद्धांत पर आधारित है। इस मामले में, स्मीयर मोटे अशुद्धियों के बिना हल्का हो जाता है, जिससे ट्रेमेटोड्स (ओपिस्टोरचिड, आदि) के छोटे अंडों का पता लगाना आसान हो जाता है। ओपिसथोर्च अंडों का विशिष्ट गुरुत्व अधिक होता है, इसलिए वे खारे घोल में तैरते नहीं हैं।

70-100 मिलीलीटर संतृप्त सोडियम क्लोराइड घोल को 2-3 सेमी व्यास वाले सिलेंडर में डाला जाता है। अलग से, 20-25 मिलीलीटर पानी में 0.5 ग्राम मल को सावधानीपूर्वक हिलाएं और नमकीन घोल के लिए एक सिलेंडर में धुंध की दो परतों के साथ एक फ़नल के माध्यम से सावधानीपूर्वक फ़िल्टर करें, हिलाने से बचें (ताकि दो स्पष्ट रूप से सीमांकित परतें बन जाएं)। 2-3 घंटों के बाद, मल के साथ ऊपरी परत को पिपेट से चूस लिया जाता है, और शेष खारा घोल 12-20 घंटों के लिए छोड़ दिया जाता है या सेंट्रीफ्यूज कर दिया जाता है। तलछट को एक ग्लास स्लाइड पर पिपेट किया जाता है, कवरस्लिप से ढक दिया जाता है और माइक्रोस्कोप के नीचे जांच की जाती है।

गोरीचेव की विधि ओपिसथोरचिड अंडों का पता लगाने के लिए प्रस्तावित की गई थी और यह देशी स्मीयर और फुलबॉर्न विधि के अध्ययन से अधिक प्रभावी साबित हुई। वर्तमान में, ओपिसथोरचियासिस (क्लोनोरचियासिस) के निदान के लिए, काटो और कलंतार्यन के तरीकों को काफी प्रभावी और तकनीकी रूप से सरल माना जाता है।

कसीसिलनिकोव की विधि। डिटर्जेंट (डिटर्जेंट) में शामिल सर्फेक्टेंट के प्रभाव में, हेल्मिंथ अंडे मल से निकलते हैं और तलछट में केंद्रित होते हैं।

लोटस वाशिंग पाउडर का 1% घोल पहले से तैयार कर लें। ऐसा करने के लिए, 10 ग्राम पाउडर को 1 लीटर नल के पानी में घोलें। यदि कमल उपलब्ध नहीं है तो आप अन्य का उपयोग कर सकते हैं वाशिंग पाउडर, लेकिन आपको उनमें से प्रत्येक को उतना ही लेना होगा जितना 1 लीटर नल के पानी में तलछट बनाए बिना घुल जाए। 30-50 मिली की क्षमता वाले कांच के बर्तन में 20-30 मिली डिटर्जेंट घोल डाला जाता है, मल का एक छोटा सा हिस्सा वहां रखा जाता है और अच्छी तरह मिलाया जाता है। मल और घोल का अनुपात लगभग 1:20 होना चाहिए। मल कम से कम 24 घंटे तक घोल में रहना चाहिए। इस दौरान तल पर 2-3 परतों की तलछट बन जाती है। निचली परत में मोटे, भारी कण होते हैं, मध्य परत में हेल्मिंथ अंडे एकत्र होते हैं, और शीर्ष परत सफेद-भूरे रंग के गुच्छे होते हैं। फिर, एक पिपेट का उपयोग करके, मध्य परत से तरल की 2-3 बूंदें लें और इसे एक ग्लास स्लाइड में स्थानांतरित करें। एक स्लाइड पर 2 तैयारियां तैयार की जाती हैं, कवरस्लिप से ढक दिया जाता है और माइक्रोस्कोप के नीचे जांच की जाती है।

कसीसिलनिकोव की विधि मल में उत्सर्जित सभी प्रकार के कृमि के अंडों का पता लगाना संभव बनाती है।

ईथर-फॉर्मेलिन अवसादन विधि और रासायनिक अवसादन विधि उच्च दक्षताबहुत श्रम-गहन हैं, खासकर सामूहिक परीक्षाओं के दौरान; इसलिए, ईथर-एसिटिक विधि का उपयोग करना अधिक उचित है। यह, रासायनिक अभिकर्मकों के साथ तलछट के अतिरिक्त उपचार के बाद, लगभग केवल हेल्मिन्थ अंडे प्राप्त करने की अनुमति देता है, जिससे छोटे ट्रेमेटोड अंडों की पहचान करना आसान हो जाता है। यह विधि सार्वभौमिक साबित हुई, सभी आंतों के कृमि के अंडों, आंतों के प्रोटोजोआ के सिस्ट का पता लगाती है, और इसका उपयोग आक्रमण की तीव्रता को मापने के लिए भी किया जा सकता है।

10% घोल का 7 मिलीलीटर सेंट्रीफ्यूज ग्रेजुएटेड ट्यूबों में डाला जाता है एसीटिक अम्लऔर 8 मिलीलीटर के निशान में 1 ग्राम मल मिलाएं। एक सजातीय मिश्रण बनने तक मल को एक छड़ी से अच्छी तरह मिलाया जाता है, और फिर धुंध की दो परतों के माध्यम से एक अन्य अपकेंद्रित्र ट्यूब में फ़िल्टर किया जाता है (ताकि छने हुए घोल की नई टेस्ट ट्यूब में फिर से 8 मिलीलीटर हो; यदि कम हो, तो आप अतिरिक्त कर सकते हैं) एसिटिक एसिड के 10% समाधान के साथ एक पट्टी के साथ फ़नल को कुल्ला, जिसके माध्यम से मल समाधान को फ़िल्टर किया गया)। इस परखनली में 2 मिलीलीटर ईथर (10 मिलीलीटर के निशान तक) डालें, इसे बंद करें और 30 सेकंड के लिए जोर से हिलाएं। मिश्रण को 3000 आरपीएम पर 1 मिनट (या 1500 आरपीएम पर 2 मिनट) के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। कौयगुलांट परत (टेस्ट ट्यूब के ऊपरी भाग में एक प्लग के रूप में) को एक छड़ी की मदद से टेस्ट ट्यूब की दीवारों से अलग किया जाता है और सतह पर तैरनेवाला तरल के साथ सावधानीपूर्वक सूखा दिया जाता है। अवक्षेप (आमतौर पर छोटा, रंगहीन) को कांच की स्लाइडों पर पाइप से डाला जाता है, कवरस्लिप से ढक दिया जाता है और सूक्ष्मदर्शी रूप से जांच की जाती है।

प्रोटोजोआ को 4 वर्गों में बांटा गया है:

जब घेर लिया जाता है, तो सूक्ष्मजीव एक गोल आकार प्राप्त कर लेता है और एक सुरक्षात्मक आवरण से ढक जाता है। सिस्ट के रूप में, प्रोटोजोआ प्रतिकूल पर्यावरणीय कारकों के प्रति कम संवेदनशील हो जाता है।

निम्नलिखित शोध का विषय हो सकता है:

टिप्पणी:निदान के कई प्रकार हैं; हम उन प्रकारों पर विचार करेंगे जो नैदानिक ​​प्रयोगशाला अभ्यास में सबसे आम हैं।

निजी प्रकार के निदान

प्रत्येक विशिष्ट मामले में, प्रयोगशाला सहायक को एक विशिष्ट रोगज़नक़ खोजने का काम सौंपा जाता है; कभी-कभी मुख्य रोगज़नक़ के साथ अन्य की भी खोज की जाती है।

इस सूक्ष्मजीव की 6 प्रजातियाँ हैं जो मानव आंत में रहने में सक्षम हैं। केवल पेचिश अमीबा, जो वानस्पतिक रूप में और सिस्ट के रूप में होता है, नैदानिक ​​महत्व का है।

इसके अतिरिक्त, प्रतिरक्षाविज्ञानी तरीकों का उपयोग किया जाता है:

• अप्रत्यक्ष इम्यूनोफ्लोरेसेंस;
• अप्रत्यक्ष एग्लूटीनेशन (आईएनए);
• रेडियल इम्युनोडिफ्यूजन।

टिप्पणी: सीरोलॉजिकल तरीकेजानकारीहीन हैं और केवल संदिग्ध मामलों में मुख्य के अतिरिक्त उपयोग किए जाते हैं।

सिलिअटेड (सिलियेट्स) का निदान

इस जीनस के सूक्ष्मजीवों का रोगजनक रूप बैलेंटिडियम है। यह एक सूक्ष्म जीव है जो बैलेन्टिडायसिस का कारण बनता है, एक बीमारी जिसमें बड़ी आंत की अल्सरेटिव प्रक्रिया होती है। रोगज़नक़ का पता देशी स्मीयर में वानस्पतिक रूप और सिस्ट के रूप में लगाया जाता है। स्मीयर के लिए सामग्री (मल और बलगम) को सिग्मायोडोस्कोपी परीक्षा के दौरान लिया जाता है और विशेष मीडिया पर बोया जाता है।

फ्लैगेलेट्स का निदान (लीशमैनिया, जियार्डिया, ट्रिपैनोसोम्स, ट्राइकोमोनास)

लीशमैनिया, ट्रिपैनोसोम्स, लैम्ब्लिया और ट्राइकोमोनास इंसानों के लिए खतरनाक हैं।

लीशमैनिया– सूक्ष्म जीव, लीशमैनियासिस का कारण, रक्त स्मीयरों, सामग्रियों में जांच की जाती है अस्थि मज्जा, त्वचा से खरोंचें घुसपैठ करती हैं। कुछ मामलों में, लीशमैनिया का निदान करते समय, पोषक तत्व मीडिया पर संस्कृति का उपयोग किया जाता है।

ट्रिपैनोसोम्स- नींद की बीमारी के प्रेरक एजेंट (अमेरिकी/अफ्रीकी ट्रिपैनोसोमियासिस, या चागास रोग)।

परिधीय रक्त के अध्ययन के दौरान प्रारंभिक अवधि में अफ्रीकी संस्करण का निर्धारण किया जाता है। जैसे-जैसे बीमारी बढ़ती है, पैथोलॉजिकल रोगाणु लिम्फ नोड पंचर की सामग्री में पाए जाते हैं, और उन्नत चरणों में - मस्तिष्कमेरु द्रव में।

चगास रोग का संदेह होने पर ट्रिपैनोसोम का निदान करने के लिए, जांच की जा रही सामग्री की जांच कम आवर्धन पर माइक्रोस्कोप के तहत की जाती है। इस मामले में, धब्बा और मोटी बूंद पूर्व-दागदार होती है।

ट्रायकॉमोनास(आंतों, मौखिक) का पता प्रभावित श्लेष्म झिल्ली से ली गई सामग्री की माइक्रोस्कोपी द्वारा लगाया जाता है।

स्पोरोज़ोअन्स की पहचान (मलेरिया प्लास्मोडियम, कोक्सीडोसिस का प्रेरक एजेंट, आदि)

मनुष्यों के लिए सबसे आम और खतरनाक प्रजाति मलेरिया प्लास्मोडियम है, जिसमें 4 मुख्य प्रकार के रोगज़नक़ होते हैं: तीन दिवसीय मलेरिया, चार दिवसीय मलेरिया, उष्णकटिबंधीय मलेरिया और मलेरिया ओवले का प्रेरक एजेंट।

एनोफ़ेलीज़ मच्छरों में प्लाज़मोडियम (स्पोरोगोनी) का यौन विकास होता है। अलैंगिक (ऊतक और एरिथ्रोसाइट सिज़ोगोनी) - मानव यकृत ऊतक और एरिथ्रोसाइट्स में। ये सुविधाएं जीवन चक्रमलेरिया प्लास्मोडियम का निदान करते समय इसे ध्यान में रखा जाना चाहिए।

इस प्रकार, एक नए बीमार रोगी के रक्त में, स्पोरोगनी चक्र की रोगाणु कोशिकाओं का पता लगाया जा सकता है। लेकिन मलेरिया के हमलों के चरम पर, रक्त में शिज़ोन्ट बड़ी संख्या में दिखाई देते हैं।

इसके अलावा, मलेरिया बुखार के विभिन्न चरणों में, प्लास्मोडियम के विभिन्न रूप प्रकट होते हैं:

• ठंड की अवधि के दौरान, रक्त मेरोज़ोइट्स से भर जाता है, एक प्रकार का शिज़ोन्ट;
• ऊंचे तापमान पर, रिंग के आकार के ट्रोफोज़ोइट्स एरिथ्रोसाइट्स में जमा हो जाते हैं;
• तापमान में कमी अमीबा जैसे ट्रोफोज़ोइट्स की प्रबलता की विशेषता है;
• सामान्य स्थिति की अवधि के दौरान, रक्त में सिज़ोन्ट्स के वयस्क रूप होते हैं।

मलेरिया के प्रेरक एजेंट (मलेरिया प्लास्मोडियम) का अध्ययन एक स्मीयर और एक मोटी बूंद में किया जाता है।

टिप्पणी:रक्त के धब्बों और मोटी बूंदों की जांच से मलेरिया का निदान करना कभी-कभी गलत होता है। कुछ मामलों में रक्त प्लेटलेट्स को गलती से मलेरिया रोगज़नक़ के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है। इसके अलावा कभी-कभी ल्यूकोसाइट्स और अन्य कोशिकाओं के टुकड़े प्लास्मोडियम का अनुकरण करते हैं।

प्रोटोजोआ के अध्ययन की बुनियादी विधियाँ

आइए प्रोटोजोआ की उपस्थिति के लिए सबसे आम शोध विधियों पर संक्षेप में नज़र डालें।

देशी स्मीयर और लुगोल के घोल से सना हुआ स्मीयर (मल में) का उपयोग करके प्रोटोजोआ का निदान

यह दवा आइसोटोनिक घोल में मल के इमल्शन से तैयार की जाती है। सोडियम क्लोरीन और लुगोल के घोल की दो बूंदें एक कांच की स्लाइड पर डाली जाती हैं। परीक्षण सामग्री को लकड़ी की छड़ी के साथ दोनों रचनाओं में जोड़ा जाता है और कांच से ढकने के बाद, विभिन्न माइक्रोस्कोप रिज़ॉल्यूशन पर देखा जाता है।

पाए जाने वाले प्रोटोजोआ को कुछ विशेषताओं के आधार पर दर्ज किया जाता है। सटीकता के लिए, एक ही सामग्री से 2-3 तैयारी तैयार करें। संदिग्ध मामलों में, विश्लेषण 2-3 सप्ताह में कई बार दोहराया जाता है।

विधि वनस्पति और सिस्टिक रूपों का पता लगा सकती है:

• लैंबलिया;
• बैलेंटिडियम;
• पेचिश अमीबा.

रोगजनक रूपों के साथ-साथ गैर-रोगजनक प्रोटोजोआ की भी पहचान की जाती है। इसके अलावा स्वस्थ वाहकों में ल्यूमिनल और सिस्टिक रूप होते हैं।

महत्वपूर्ण:अशुद्धियों और त्रुटियों से बचने के लिए अनुसंधान बार-बार किया जाना चाहिए।

देशी और दागदार स्मीयर विधि का उपयोग करके प्रोटोजोआ के निदान के परिणाम में रोगज़नक़ (ल्यूमिनल, सिस्ट, ऊतक) के रूप का विवरण होना चाहिए।

अनुसंधान आवश्यकताएँ:

• विश्लेषण के लिए ली गई सामग्री (तरल मल) की जांच शौच के 30 मिनट बाद नहीं की जाती है;
• औपचारिक मल का निदान शौच के 2 घंटे के भीतर किया जाना चाहिए;
• सामग्री में अशुद्धियाँ (कीटाणुनाशक, पानी, मूत्र) नहीं होनी चाहिए;
• सामग्री के साथ काम करने के लिए, केवल लकड़ी की छड़ियों का उपयोग करें; बलगम के फिसलने के कारण कांच वाली छड़ें उपयुक्त नहीं हैं;
• उपयोग के तुरंत बाद लकड़ियों को जला देना चाहिए।

प्रोटोजोआ के निदान के लिए संरक्षण विधि (मल परीक्षण)।

एक परिरक्षक के साथ प्रोटोजोआ को ठीक करके अध्ययन किया जाता है। इस पद्धति और पिछली पद्धति के बीच अंतर यह है कि परिरक्षक आपको दवा को लंबे समय तक संरक्षित रखने की अनुमति देते हैं।

प्रयुक्त परिरक्षक:

• बैरो. इसमें संरक्षक तत्व शामिल हैं: 0.7 मिली सोडियम क्लोराइड, 5 मिली फॉर्मेलिन, 12.5 मिली 96% अल्कोहल, 2 ग्राम फिनोल और 100 मिली आसुत जल। रंग संरचना: थिओनिन (अज़ुरा) का 0.01% घोल।
• सफ़ार्लिव का समाधान। सामग्री: 1.65 ग्राम जिंक सल्फेट, 10 मिली फॉर्मेलिन, 2.5 ग्राम क्रिस्टलीय फिनोल, 5 मिली एसिटिक एसिड, 0.2 ग्राम मेथिलीन ब्लू, 100 मिली पानी। इस परिरक्षक का उपयोग उन मामलों में किया जाता है जहां सामग्री को एक महीने से अधिक समय तक संग्रहीत किया जाना चाहिए।

खाली बोतलों को एक परिरक्षक से भर दिया जाता है, सामग्री को 3:1 के अनुपात में उनमें स्थानांतरित किया जाता है, फिर यदि आवश्यक हो तो डाई मिलाया जाता है। 2-3 दवाओं का अध्ययन करके परिणामों का आकलन किया जाता है।

फॉर्मेलिन-ईथर संवर्धन विधि (मल में प्रोटोजोआ की उपस्थिति का विश्लेषण)

यह निदान पद्धति आपको प्रोटोजोआ सिस्ट को अलग करने और केंद्रित करने की अनुमति देती है। विश्लेषण के लिए निम्नलिखित सामग्रियों की आवश्यकता है: फॉर्मेल्डिहाइड (10 मिली), 0.85 ग्राम आइसोटोनिक घोल, आसुत जल, सल्फ्यूरिक ईथर, लुगोल का समाधान।

सूचीबद्ध तरल पदार्थों के साथ बायोमटेरियल का मिश्रण मिश्रित और सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। टेस्ट ट्यूब के तल पर प्राप्त तलछट को लुगोल के घोल से रंगा जाता है और सिस्ट और वनस्पति रूपों की उपस्थिति के लिए जांच की जाती है।

लीशमैनिया (अस्थि मज्जा स्मीयर) का पता लगाने की विधि

लीशमैनियासिस का निदान करने के लिए, निम्नलिखित अभिकर्मकों का उपयोग किया जाता है: निकिफोरोव का मिश्रण (सल्फ्यूरिक ईथर और इथेनॉल), फॉस्फेट बफर, रोमानोव्स्की के अनुसार अज़ूर-एओसिन।

अस्थि मज्जा पदार्थ को विशेष तैयारी के बाद बहुत सावधानी से कांच की स्लाइड पर रखा जाता है। विसर्जन प्रणाली वाले माइक्रोस्कोप का उपयोग किया जाता है।

रोग की तीव्र अवधि के दौरान, पंचर में बड़ी संख्या में लीशमैनिया पाए जाते हैं।

टिप्पणी:कभी-कभी रक्त कोशिकासंसाधित लीशमैनिया जैसा हो सकता है, इसलिए प्रयोगशाला तकनीशियन के लिए सावधान रहना और स्वतंत्र अनुसंधान करने के लिए पर्याप्त अनुभव होना बहुत महत्वपूर्ण है।

त्वचा की घुसपैठ से स्मीयर में लीशमैनिया का पता लगाने की विधि

आवश्यक अभिकर्मक पिछले विश्लेषण के समान हैं।

परीक्षण सामग्री मौजूदा ट्यूबरकल या अल्सरेटिव सामग्री से प्राप्त की जाती है। यदि लीशमैनियासिस का संदेह है, तो रक्त के बिना स्केलपेल के साथ स्क्रैपिंग बहुत सावधानी से की जाती है। फिर कांच पर तैयारी की जाती है. प्राप्त परिणामों की सटीकता सुनिश्चित करने के लिए, कई तैयारियों की एक साथ जांच की जाती है।

रोग की उपस्थिति में, परीक्षण सामग्री में मौजूद मैक्रोफेज, फ़ाइब्रोब्लास्ट और लिम्फोइड कोशिकाओं के बीच लीशमैनिया का भी पता लगाया जाता है।

पैथोलॉजिकल ऊतकों को खुरच कर प्राप्त लीशमैनिया की शुद्ध संस्कृति को अलग करने की विधि

प्रोटोजोआ के निदान की इस पद्धति के साथ, ऊतक स्क्रैपिंग को एक विशेष में रखा जाता है पोषक माध्यम, जिसमें लीशमैनिया का सक्रिय प्रजनन होता है।

स्क्रैपिंग लेने से पहले, त्वचा को पूरी तरह से अल्कोहल से उपचारित किया जाता है, फिर ट्यूबरकल में एक चीरा लगाया जाता है, जिसके नीचे से सामग्री को हटा दिया जाता है और माध्यम के साथ एक टेस्ट ट्यूब में रखा जाता है। सामग्री को कई बार लिया जाता है, जिसके बाद इसे अलग-अलग टेस्ट ट्यूबों में रखा जाता है। फिर खेती थर्मोस्टेट में 22-24 डिग्री के तापमान पर होती है। परिणामों का मूल्यांकन माइक्रोस्कोप के तहत किया जाता है। इस विधि का उपयोग तब किया जाता है जब प्रोटोजोआ के निदान के अन्य, सस्ते और तेज़ तरीके अप्रभावी होते हैं।

आप वीडियो समीक्षा देखकर देख सकते हैं कि रक्त की एक बूंद का उपयोग करके प्रोटोजोआ की उपस्थिति के परीक्षणों को व्यवहार में कैसे समझा जाता है:

लोटिन अलेक्जेंडर, चिकित्सा स्तंभकार

तरीकों हेल्मिंथोलॉजिकल अनुसंधानप्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष में विभाजित हैं। प्रत्यक्ष तरीके: स्वयं कृमि का पता लगाना, उनके टुकड़े, अंडे, मल, मूत्र, ग्रहणी स्राव, थूक, नाक और योनि बलगम में लार्वा, उपांग स्थानों की सामग्री, ऊतक के बायोप्सीड टुकड़े। अप्रत्यक्ष तरीके: पहचान द्वितीयक परिवर्तन, परजीवी की महत्वपूर्ण गतिविधि, सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं के परिणामस्वरूप मानव शरीर में उत्पन्न होना, सामान्य शोधरक्त, मूत्र. मल की जांच के लिए सबसे आम तरीके हेल्मिंथ-ओवोस्कोपिक और प्रोटोज़ोस्कोपिक हैं। निदान करते समय, इसमें रहने वाले सभी प्रकार के कृमियों के अंडे या लार्वा की पहचान करना असंभव है पाचन तंत्रव्यक्ति। इस प्रकार, प्लवनशीलता विधि का उपयोग करते समय, ट्रेमेटोड अंडे और, कुछ मामलों में, अनिषेचित राउंडवॉर्म अंडे सतह फिल्म में तैरते नहीं हैं (उनके उच्च विशिष्ट गुरुत्व के कारण)। मल में पिनवॉर्म अंडे और टैनिड ओंकोस्फीयर का पाया जाना बहुत दुर्लभ है, जिन्हें विशेष अनुसंधान विधियों का उपयोग करके पता लगाया जाता है: पिनवॉर्म और टैनिड के लिए पेरिअनल सिलवटों से स्क्रैपिंग, ट्रेमेटोड्स (ऑपिसथोरचिड अंडे, आदि) के लिए अवसादन विधियां। इसलिए, हेल्मिंथ संक्रमण के लिए एक रोगी की लक्षित जांच के लिए, रेफरल में डॉक्टर को यह बताना होगा कि किस हेल्मिंथ पर ध्यान केंद्रित किया जाना चाहिए (निदान), जो प्रयोगशाला सहायक को इस प्रकार के हेल्मिंथ की पहचान करने के लिए उचित तकनीक चुनने की अनुमति देगा। मल से लिया गया अलग - अलग जगहेंएक साफ कांच के कंटेनर में कम से कम 50 ग्राम (चम्मच) की मात्रा में मल को शौच के 24 घंटे बाद प्रयोगशाला में भेजा जाना चाहिए और प्राप्ति के दिन जांच की जानी चाहिए। यदि मल को तब तक सुरक्षित रखना आवश्यक है अगले दिनइसे ठंडे स्थान (0-4°C) में रखा जाता है या किसी परिरक्षक से भर दिया जाता है। जांच से पहले, मल को एक छड़ी से मिलाया जाता है ताकि हेल्मिंथ अंडे समान रूप से वितरित हो जाएं कुल द्रव्यमान. यदि तैयारी में किसी हेल्मिंथ के अंडे पाए जाते हैं, तो देखना बंद नहीं किया जाता है, क्योंकि दोहरा या तिगुना आक्रमण हो सकता है। हेल्मिंथ संक्रमण के उपचार की प्रभावशीलता की निगरानी हेल्मिन्थ के अंडों के लिए मल की जांच करके उपचार के 2-3 सप्ताह या 2-3 महीने बाद की जाती है, जो कि पाए गए हेल्मिन्थ पर निर्भर करता है। नग्न आंखों से या हाथ के आवर्धक कांच का उपयोग करके मल में संपूर्ण परिपक्व कृमि या उनके टुकड़ों का पता लगाने के लिए मैक्रोस्कोपिक तरीकों का उपयोग किया जाता है। अक्सर, शौच के बाद मल की सतह पर सक्रिय रूप से रेंगने वाले पिनवॉर्म देखे जा सकते हैं; राउंडवॉर्म मल में उत्सर्जित होते हैं; कभी-कभी लोग स्वयं कृमि के मार्ग को नोटिस करते हैं। डिफाइलोबोथ्रियासिस वाले रोगियों में, टेपवर्म स्ट्रोबिली के टुकड़े ("नूडल्स" के रूप में) उत्सर्जित हो सकते हैं, और टेनीइड्स (सूअर का मांस या गोजातीय टेपवर्म) से संक्रमित लोगों में, हेल्मिंथ के खंड अक्सर मल के साथ ("सफेद कतरनों" के रूप में) निकल जाते हैं ”) या वे सक्रिय रूप से गुदा से बाहर रेंगते हैं। टेनियासिस और टेनियारिनचोसिस (एक सर्वेक्षण के साथ संयोजन में) के विभेदक निदान के लिए मैक्रोस्कोपिक विधि मुख्य है। विशेष स्थूल विधियों में से मल की क्रमिक धुलाई की विधि का प्रयोग किया जाता है। एक समान निलंबन प्राप्त करने के लिए मल को पानी में मिलाया जाता है, जिसके बाद, अच्छी रोशनी के तहत, उन्हें काले फोटोग्राफिक क्यूवेट में या पेट्री डिश में एक अंधेरे पृष्ठभूमि के खिलाफ अलग-अलग छोटे हिस्सों में सावधानीपूर्वक जांच की जाती है। चिमटी या विच्छेदन सुई का उपयोग करके, सभी संदिग्ध सफेद कणों, हेल्मिन्थ के टुकड़ों के लिए संदिग्ध बड़ी संरचनाओं को हटा दें, और दो स्लाइडों के बीच एक आवर्धक कांच के नीचे उनकी जांच करें। छोटे कृमि या सेस्टोड सिरों की जांच एक आवर्धक कांच के नीचे ग्लिसरीन की एक बूंद में या एक माइक्रोस्कोप के नीचे की जाती है। सूअर, गोजातीय टेपवर्म और चौड़े टेपवर्म के खंडों के निदान के लिए इस विधि का उपयोग करते समय, धोए गए खंडों को दो गिलासों के बीच रखा जाता है और, एक आवर्धक कांच या कम आवर्धन माइक्रोस्कोप के नीचे प्रकाश को देखकर, प्रजाति की संरचना द्वारा निर्धारित की जाती है गर्भाशय (परिपक्व खंड में)। सूअर का मांस टेपवर्म 8-12 पार्श्व शाखाएं केंद्रीय ट्रंक से फैली हुई हैं, और गोजातीय टेपवर्म में 18-32, अधिक बार 28-32 होती हैं; चौड़े टेपवर्म में, खंड व्यापक होते हैं और केंद्र में गर्भाशय " के रूप में होता है रोसेट")। यदि गर्भाशय को देखना कठिन हो तो उसे पहले 50% ग्लिसरीन के घोल में कुछ देर के लिए रखा जा सकता है, जिसके बाद गर्भाशय के खाली धड़ को भी स्पष्ट रूप से देखा जा सकता है। अलग किए गए सिरों की संरचना द्वारा इन सेस्टोड की पहचान करते समय, उन्हें स्लाइड के बीच ग्लिसरीन की एक बूंद में गर्दन के साथ सावधानीपूर्वक रखा जाता है (या एक कवरस्लिप के साथ कवर किया जाता है) और, बिना निचोड़े, कम आवर्धन पर एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है।

सूक्ष्म विधियों को सरल, जटिल और विशेष में विभाजित किया गया है।

सरल लोगों में देशी स्मीयर की विधियाँ, लुगोल के घोल के साथ देशी स्मीयर, काटो के अनुसार सिलोफ़न के नीचे गाढ़े स्मीयर की विधियाँ, ट्विस्टिंग (शुलमैन के अनुसार) और पेरिअनल स्क्रैपिंग शामिल हैं।

जटिल विधियाँ अधिक प्रभावी हैं और तैयारियों में अंडों की सांद्रता पर आधारित हैं। इनमें तरल अभिकर्मकों के साथ मल का पूर्व-उपचार शामिल होता है, जिसके परिणामस्वरूप हेल्मिन्थ अंडे या तो अवक्षेपित हो जाते हैं या तरल की सतह पर तैरने लगते हैं।

को जटिल तरीकेसंवर्धन विधियों में शामिल हैं:

ए) प्लवनशीलता (जब अंडों का विशिष्ट गुरुत्व खारे घोल के विशिष्ट गुरुत्व से कम होता है और अंडे सतह फिल्म में तैरते हैं);

बी) अवसादन (जब अंडों का विशिष्ट गुरुत्व खारे घोल के विशिष्ट गुरुत्व से अधिक होता है और अंडे तलछट में बस जाते हैं)।

हेल्मिंथ के अंडे और लार्वा, सिस्ट और प्रोटोजोआ के वानस्पतिक रूपों का पता लगाने के लिए विशेष तरीकों में स्क्रैपिंग, प्लवनशीलता, अवसादन, लार्वास्कोपी, प्रोटोजोस्कोपी, पित्त परीक्षण और मल, थूक आदि के धुंधलापन के तरीके शामिल हैं।

नमूनाकरण एवं संरक्षण

शोध के लिए अलग-अलग स्थानों से मल को 50 ग्राम के हिस्सों में लिया जाता है और एक साफ कांच या प्लास्टिक के तंग ढक्कन वाले कंटेनर में प्रयोगशाला में भेजा जाता है। ताजा मल (एक दिन से अधिक पुराना नहीं) की जांच की जाती है, और कुछ मामलों में (स्ट्रॉन्गिलॉइडियासिस के लिए परीक्षण करते समय) शौच के तुरंत बाद। हेल्मिंथ अंडे युक्त कई मल परिरक्षकों का प्रस्ताव किया गया है: 4-10% फॉर्मेलिन समाधान, जिसे हुकवर्म अंडे के विकास को रोकने के लिए 50-60 डिग्री के तापमान तक गर्म किया जाना चाहिए; सोडियम नाइट्रेट (1900 मिली), लुगोल का घोल (5 ग्राम आयोडीन, 10 ग्राम पोटेशियम आयोडाइड, 250 मिली पानी), फॉर्मेलिन (300 मिली) और ग्लिसरीन (25 मिली) का 0.2% जलीय घोल का मिश्रण, जिसमें हेल्मिंथ अंडे संरक्षित होते हैं 6-8 महीने; ग्लिसरीन (5 मिली), फॉर्मेलिन (5 मिली) और पानी (100 मिली) का मिश्रण; 1-1.5% डिटर्जेंट "लोटोस", "एक्स्ट्रा", "बर्फ", "टाइड", आदि के समाधान (मल और डिटर्जेंट समाधान के वजन अनुपात 1: 5 में); मेरथिओलेट 1: 1000 (200 मिली), फॉर्मेलिन (25 मिली), ग्लिसरीन (5 मिली), आसुत जल (250 मिली) का मिश्रण जिसमें 0.6 मिली लुगोल का घोल (1 ग्राम मल प्रति 10 की दर से) मिलाया जाता है मिश्रण का एमएल)।

हेल्मिंथियासिस का निदान करने के लिए, मल की जांच के लिए मैक्रो- और माइक्रोहेल्मिन्थोस्कोपिक तरीकों का उपयोग किया जाता है।

मैक्रोहेल्मिन्थोस्कोपी अध्ययन

निपटान विधि

मल के एक दैनिक हिस्से को पानी की 5-10 गुना मात्रा के साथ अच्छी तरह मिलाया जाता है, लंबे कांच के सिलेंडरों (जार, बाल्टियों) में डाला जाता है और तब तक छोड़ दिया जाता है जब तक कि निलंबित कण पूरी तरह से व्यवस्थित न हो जाएं। ऊपरी बादल वाली परत को सावधानीपूर्वक सूखा दिया जाता है और शीर्ष पर साफ पानी डाला जाता है (जब तक कि तलछट के ऊपर का पानी साफ न हो जाए, इसे कई बार दोहराएं)। ऊपरी परत को सूखाने के बाद, तलछट को क्युवेट या पेट्री डिश में स्थानांतरित करें और इसे एक आवर्धक कांच के नीचे या नग्न आंखों से (एक अंधेरे पृष्ठभूमि के खिलाफ) देखें।

स्क्रीनिंग विधि

पानी के साथ मिश्रित मल को उपकरण की ऊपरी छलनी पर रखा जाता है, जिसमें घटते व्यास के छेद वाली छलनी की एक प्रणाली होती है, उपकरण जल आपूर्ति नेटवर्क से जुड़ा होता है और पानी के नल को खोलकर, इसे धोया जाता है, और बहता है तरल को सीवर में बहा दिया जाता है। बड़े कृमि ऊपरी छलनी पर रहते हैं, जबकि छोटे कृमि निचली छलनी पर बने रहते हैं। छलनी को पलट दिया जाता है और, सामग्री को अंधेरे क्यूवेट में धोने के बाद, उनकी नग्न आंखों से या एक आवर्धक कांच के नीचे जांच की जाती है।

माइक्रोहेल्मिन्थोस्कोपी अध्ययन

अंडे (हेल्मिंथ-ओवोस्कोपिक विधियाँ - रंग। चित्र 1) या हेल्मिंथ लार्वा (हेल्मिंथ-ओवोस्कोपिक विधियाँ) का पता लगाने के उद्देश्य से किया जाता है।

हेल्मिंथूवोस्कोपिक विधियाँ

संवर्धन के बिना गुणात्मक तरीके

देशी धब्बा. मल की थोड़ी मात्रा को 50% ग्लिसरीन घोल या उबले हुए पानी की एक बूंद में कांच की स्लाइड पर डाला जाता है। बड़े कणों को सावधानीपूर्वक हटा दिया जाता है, मिश्रण को कवरस्लिप से ढक दिया जाता है और माइक्रोस्कोप के नीचे जांच की जाती है (दो स्मीयर की जांच की जाती है)। दो ग्लास स्लाइडों के बीच लंबे स्मीयर तैयार करना अधिक सुविधाजनक और आसान है। देशी स्मीयर का उपयोग केवल संवर्धन विधियों के अलावा किया जाता है, क्योंकि यह पर्याप्त प्रभावी नहीं है, खासकर कमजोर संक्रमण के लिए।

काटो के अनुसार सिलोफ़न के साथ गाढ़ा धब्बा(के. काटो, 1954) बहुत है प्रभावी तरीकाअनुसंधान। हाइड्रोफिलिक सिलोफ़न (आकार में 4x2 सेमी) के टुकड़ों को ग्लिसरीन (50 मिली), 6% फिनोल घोल (500 मिली) और 3% जलीय घोल (6 मिली) हरे मैलाकाइट (बाद वाला वैकल्पिक है) के मिश्रण में 24 घंटे के लिए भिगोया जाता है। ). ठीक है। 100 मिलीग्राम मल को कांच की स्लाइड पर फैलाया जाता है और गीले सिलोफ़न के टुकड़े से ढककर रबर स्टॉपर नंबर 5 से दबाया जाता है। तैयारी की जांच 30-60 मिनट के बाद की जाती है, जब यह थोड़ा सूख जाता है और स्पष्ट हो जाता है, जैसे कि जिसके परिणामस्वरूप कम आवर्धन माइक्रोस्कोप के तहत हेल्मिन्थ अंडों का पता लगाना आसान हो जाता है।

संवर्धन के साथ गुणात्मक तरीके (फ्लोटिंग और निपटान विधियां)

पहले विभिन्न रसायनों के संतृप्त समाधानों के उपयोग पर आधारित हैं। वे पदार्थ जिनमें विशिष्ट गुरुत्व में अंतर के कारण अंडे तैरते हैं।

कोफॉइड-नाई विधि(सीएच.ए. कोफॉइड, एम.ए. बार्बर) फुलेबॉर्न द्वारा संशोधित (एफ. फुलेबॉर्न, 1920)। ठीक है। एक लंबे और संकीर्ण जार (100 मिलीलीटर मात्रा) में 5 ग्राम मल को 100 मिलीलीटर संतृप्त घोल में लकड़ी की छड़ी से हिलाया जाता है टेबल नमक, मारो इसका वजन 1.18 है (1 लीटर पानी में उबालने पर 400 ग्राम नमक घुल जाता है)। सतह पर तैरने वाले बड़े कणों को छड़ी या कागज के टुकड़े से तुरंत हटा दिया जाता है। - मिश्रण को जमने के बाद 45-90 मिनट तक रखें. सभी सतह फिल्म को हटाने और इसे एक ग्लास स्लाइड में स्थानांतरित करने के लिए एक तार लूप (0.8-1 सेमी व्यास) का उपयोग करें। हुकवर्म अंडों का परीक्षण करते समय, मिश्रण को 10-15 मिनट के लिए छोड़ दिया जाता है। आप फिल्म को सीधे कांच की स्लाइड से हटा सकते हैं, जार को ढक दें ताकि यह तरल के संपर्क में आ जाए (जार के किनारों पर एक संतृप्त नमक का घोल डाला जाता है)। जमने के बाद, स्लाइड को हटा दिया जाता है, जल्दी से पलट दिया जाता है, और उस पर चिपके हेल्मिंथ अंडों वाली फिल्म की माइक्रोस्कोप (बिना कवर ग्लास के) के नीचे जांच की जाती है। यह विधि सभी नेमाटोड और बौने टेपवर्म के अंडों की पहचान करने में अच्छी है। भारी अस्थायी अंडे; अधिकांश सेस्टोड और अनिषेचित राउंडवॉर्म खराब रूप से तैरते हैं, इसलिए तलछट की भी जांच की जाती है। ऐसा करने के लिए, फिल्म को हटाने के बाद, जार से तरल को जल्दी से सूखा दिया जाता है और एक लूप या पिपेट के साथ तलछट से कुछ बूंदें ली जाती हैं, एक ग्लास स्लाइड में स्थानांतरित की जाती हैं, स्पष्टीकरण के लिए ग्लिसरॉल की एक बूंद डाली जाती है और एक के तहत जांच की जाती है। सूक्ष्मदर्शी.

विधि ई. वी. कलंतार्यन(1938) फुलबॉर्न पद्धति का अधिक प्रभावी संशोधन है। इसमें टेबल नमक के घोल को सोडियम नाइट्रेट, एसपी के संतृप्त घोल से बदल दिया जाता है। वजन 1.39 है (उबालने पर सोडियम नाइट्रेट की एक मात्रा समान मात्रा में पानी में घुल जाती है), फिल्म 20-30 मिनट के बाद हटा दी जाती है।

फ़ॉस्ट (ई.एस. फ़ॉस्ट, 1939), ब्रुडास्तोवा और अन्य की विधियों का भी उपयोग किया जाता है। (1970) और अन्य।

हेल्मिंथ अंडे जमा करने के लिए रसायनों का उपयोग किया जाता है। पदार्थ जो मल में वसा और प्रोटीन को घोलते हैं।

टेलीमैन विधि (डब्ल्यू. टेलीमैन, 1908) मियागावा द्वारा संशोधित (वाई. मियागावा, 1913). ठीक है। 5 ग्राम मल को मोर्टार या जार में पीस लिया जाता है, जिसमें 5 मिलीलीटर एथिल ईथर और 50% खारा घोल मिलाया जाता है; मिश्रण को एक तार या बाल छलनी के माध्यम से एक परखनली में फ़िल्टर किया जाता है और सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। टेस्ट ट्यूब में, 3 परतें बनती हैं: शीर्ष पर - विघटित वसा के साथ ईथर, नीचे - विघटित प्रोटीन पदार्थों के साथ हाइड्रोक्लोरिक एसिड, तलछट में - मल और हेल्मिन्थ अंडे के अघुलनशील भाग। ऊपरी परतों को सूखा दिया जाता है, और पानी को अवक्षेप में मिलाया जाता है और सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। तलछट की कुछ बूंदों को एक ग्लास स्लाइड में स्थानांतरित किया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है। यह विधि सभी प्रकार के कृमियों के अंडों का पता लगा सकती है, लेकिन कभी-कभी वे विकृत हो जाते हैं।

रिची विधि (एल.एस. किची, 1948)।फॉर्मेल्डिहाइड और ईथर का उपयोग वसा और प्रोटीन को घोलने के लिए किया जाता है।

हेल्मिंथ अंडे को अवक्षेपित करने के लिए विभिन्न डिटर्जेंट का उपयोग किया जा सकता है। विशेष बेल उपकरणों में निस्पंदन विधि विदेशों में व्यापक हो गई है, जिसका उपयोग न केवल मल, बल्कि मूत्र, रक्त आदि का अध्ययन करने के लिए भी किया जाता है।

प्लवनशीलता और अंडा अवसादन के सिद्धांतों को संयोजित करने वाली कई विधियाँ हैं। इनमें एस. ए. लेन, डी. रिवास, गोर्किना और एस. टी. डार्लिंग की विधियाँ शामिल हैं। इन प्लवनशीलता-अवसादन विधियों में से एक, साथ ही अनुक्रमिक नालियों की विधि, एन.वी. डेमिडोव (1963, 1965) द्वारा फैसीओलियासिस और डाइक्रोसेलियोसिस पर शोध के लिए प्रस्तावित की गई थी।

मात्रात्मक विधियां

स्टॉल विधि(एन. आर. स्टोल, 1926)। सोडियम हाइड्रॉक्साइड का एक डेसीनॉर्मल घोल एक स्नातक चौड़ी टेस्ट ट्यूब या फ्लास्क (दो निशान के साथ: 56 और 60 मिलीलीटर) में पहले निशान तक डाला जाता है, मल को तब तक जोड़ा जाता है जब तक कि तरल स्तर दूसरे निशान तक नहीं पहुंच जाता है, एक ग्लास रॉड के साथ अच्छी तरह मिलाएं और , 10 कांच के मोती या छोटे कंकड़ रखकर, स्टॉपर रखें और 1 मिनट के लिए हिलाएं। जल्दी से, ताकि निलंबन व्यवस्थित न हो, एक स्नातक पिपेट के साथ मिश्रण का 0.075 मिलीलीटर (मल का 0.005 ग्राम) लें, इसे ग्रिड के साथ एक ग्लास स्लाइड में स्थानांतरित करें, इसे एक कवरस्लिप के साथ कवर करें और हेल्मिंथ अंडे की गिनती करें माइक्रोस्कोप के तहत तैयारी में; परिणामी संख्या को 200 से गुणा करने पर 1 ग्राम मल में अंडों की संख्या प्राप्त होती है। अधिक सटीक परिणाम के लिए, दो या अधिक तैयारियों में अंडों की गिनती करें और औसत लें। हल्के आक्रमणों के लिए स्टोल विधि असंवेदनशील है। इसलिए, तैयार तैयारियों में अंडों की संख्या गिनने की सिफारिश की जाती है विभिन्न तरीकेप्लवन या अवसादन, समान मात्रा के मल और व्यंजनों के बराबर हिस्से के निरंतर उपयोग के अधीन। गाढ़े काटो स्मीयर का भी उपयोग किया जाता है।

बीवर विधि(आर. एस. बीवर, 1950)। एक मानक स्मीयर तैयार किया जाता है, जिसकी मोटाई एक इलेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके निर्धारित की जाती है, और फिर इसमें सभी हेल्मिन्थ अंडों की गिनती की जाती है।

हेल्मिन्थोलार्वोस्कोपिक विधियाँ

बेहरमन विधि(जी. बर्मन, 1917)। 5-10 ग्राम ताज़ा उत्सर्जित मल को एक कांच की फ़नल में धातु की जाली पर रखा जाता है, जिसके संकीर्ण सिरे पर एक रबर ट्यूब के साथ एक क्लैंप लगाया जाता है। मल के कणों के साथ तलछट के संदूषण से बचने के लिए, कागज (जाल पर) रखने या मल में जानवरों का कोयला या मकई का आटा मिलाने की सिफारिश की जाती है। फ़नल को गर्म पानी (t° 45-50°) से तब तक भरा जाता है जब तक कि यह मल के संपर्क में न आ जाए। थर्मोट्रोपिज्म के कारण, लार्वा सक्रिय रूप से अंदर चले जाते हैं गर्म पानीऔर धीरे-धीरे क्लैंप के ऊपर, फ़नल के निचले हिस्से में जमा हो जाता है। 3-4 घंटों के बाद, क्लैंप खोला जाता है, तरल को 1-2 टेस्ट ट्यूबों में डाला जाता है, 2-3 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जाता है, शीर्ष परत को सूखा दिया जाता है, और तलछट की जांच माइक्रोस्कोप के तहत कांच की स्लाइड पर की जाती है।

शिस्टोसोम मिरासिडिया की पहचान करने की विधि। मल को अंधेरे में 8-10° के तापमान पर धोया जाता है, तलछट को 45 मिनट तक रखा जाता है। t° 28° पर तेज रोशनी में, फिर एक अंधेरे फ्लास्क में किनारे पर एक पुआल रखकर डालें। मिरासिडिया एक पारदर्शी साइड ट्यूब में केंद्रित होते हैं, जहां से उन्हें चुना जा सकता है।

हुकवर्म लार्वा की पहचान करने के लिए फुलेबॉर्न एट अल के तरीकों का भी उपयोग किया जाता है।

अन्य स्रावों, साथ ही ऊतकों और अंगों के अध्ययन के तरीके

ठीक है। 100 मिलीलीटर परीक्षण मूत्र को 30 मिनट के लिए छोड़ दिया जाता है। एक सिलेंडर में और, शीर्ष परत को हटाकर, एक टेस्ट ट्यूब में 10-15 मिलीलीटर तलछट डालें, 1-2 मिनट के लिए 1500 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज करें; तलछट की जांच की जाती है. मूत्र के पूरे दैनिक भाग को एकत्र करने की सलाह दी जाती है।

यूरोजेनिटल शिस्टोसोमियासिस का निदान मिरासिडिया की पहचान करके किया जाता है। ताजा मूत्र के एक हिस्से को 5 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जाता है, तलछट को एक काले रंग के फ्लास्क में डाला जाता है, जिसके शीर्ष पर एक पारदर्शी ग्लास ट्यूब लगाई जाती है। 1:5, 1:10 के अनुपात में पानी डालें और 2 घंटे के लिए 25-30° पर थर्मोस्टेट में रखें। अंडों से निकलने वाले मिरासिडिया एक पारदर्शी ट्यूब के माध्यम से तेजी से घूमने वाले बिंदुओं के रूप में नग्न आंखों को दिखाई देते हैं। क्रोनिक, शिस्टोसोमियासिस का एक रूप, मरीज़ पेशाब के अंत में रक्त छोड़ते हैं, लेकिन मूत्र में अंडे शायद ही कभी पाए जाते हैं, इसलिए मूत्राशय बायोप्सी का सहारा लेने की सिफारिश की जाती है।

बलगम जांच.थूक में पैरागोनिमस, शिस्टोसोम्स, टोमिनक्स, माइग्रेटिंग नेमाटोड के लार्वा और इचिनोकोकल मूत्राशय के टुकड़े के अंडे हो सकते हैं। थूक के पूरे वितरित हिस्से की नग्न आंखों से या एक आवर्धक कांच के नीचे सावधानीपूर्वक जांच की जाती है, ऊतक के सभी दिखाई देने वाले स्क्रैप, जंग के रंग के संचय आदि का चयन और जांच की जाती है; फिर पूरे हिस्से को स्मीयर से स्कैन करें। पीपयुक्त थूक 0.5% कास्टिक क्षार घोल की समान मात्रा डालें, सेंट्रीफ्यूज करें और अवक्षेप की जांच करें।

कुछ हेल्मिंथियासिस में, थूक देखा जाता है चारित्रिक परिवर्तन. उदाहरण के लिए, पैरागोनिमिएसिस के साथ, थूक में पीले रंग की गांठों के रूप में अंडों का संचय पाया जा सकता है, साथ ही बड़ी मात्रा में बलगम, ल्यूकोसाइट्स, लाल रक्त कोशिकाएं, वायुकोशीय कोशिकाएं, कुर्शमैन सर्पिल, लोचदार फाइबर, चारकोट-लेडेन क्रिस्टल भी पाए जा सकते हैं। . नुकीले सिरे वाले विशिष्ट हीरे के आकार के क्रिस्टल भी सामने आए। उपलब्धता बड़ी संख्या मेंइओसिनोफिल्स किसी को तपेदिक से पैरागोनिमियासिस को अलग करने की अनुमति देता है।

फोड़े-फुन्सियों और बिन्दुओं की सामग्री की जांच. में शुद्ध स्रावफोड़े-फुंसियों के साथ-साथ सर्जरी के दौरान हटाए गए ट्यूमर और सिस्ट में हेल्मिंथ, उनके टुकड़े, लार्वा और अंडे (इचिनोकोकस, एल्वोकोकस, स्पार्गनम, सिस्टीसर्कस, डायरोफिलेरिया, राउंडवॉर्म, टॉक्सोकारा, पैरागोनिमस, आदि) पाए जा सकते हैं। अनुसंधान तकनीक सामान्य है; कुछ मामलों में, ट्यूमर ऊतक से हिस्टोलॉजिकल अनुभाग तैयार किए जाते हैं। टेलीमैन विधि का उपयोग करके पुरुलेंट सामग्री का इलाज किया जा सकता है; स्पष्ट तरल की जांच ग्रहणी की सामग्री की तरह ही की जाती है, जिसमें सल्फ्यूरिक ईथर मिलाया जाता है। इचिनोकोकल द्रव को सेंट्रीफ्यूज किया जाता है और स्कोलेक्स और हुक की उपस्थिति के लिए तलछट की जांच की जाती है; ज़ीहल-नील्सन के अनुसार तैयारियों को कार्बोल्फुचिन से रंगा गया है।

रक्त परीक्षण।रक्त में माइक्रोफ़िलारिया और प्रवासी नेमाटोड के लार्वा पाए जाते हैं। रक्त की एक बूंद उंगली या कान की लोब से ली जाती है और ताजा जांच की जाती है या उससे तैयारी तैयार की जाती है।

रक्त की एक बूंद को वैसलीन के एक वर्ग के साथ स्लाइड पर रखा जाता है और कवरस्लिप से हल्के से दबाया जाता है। माइक्रोस्कोप के तहत, माइक्रोफ़िलारिया रक्त कोशिकाओं के बीच घूमता हुआ दिखाई देता है। रक्त को चिपकने वाली सेलूलोज़ टेप की दो परतों के बीच रखा जा सकता है; माइक्रोफ़िलारिया 6 घंटे तक गतिशील रहता है; पूरी तरह से सूखी तैयारी में उन्हें 30 दिनों के भीतर माइक्रोस्कोप के तहत पहचाना जा सकता है। माइक्रोफ़िलारिया प्रजाति को केवल दागदार धब्बों या मोटी बूंदों में ही पहचाना जा सकता है। तैयार तैयारियों को रोमानोव्स्की के अनुसार सुखाया जाता है, हेमोलाइज़ किया जाता है और दाग दिया जाता है - गिम्सा, राइट, ज़ीहल-नीलसन, लीशमैन, पापनिकोलाउ (देखें राइट स्टेनिंग विधि, रोमानोव्स्की-गिम्सा विधि, ज़ीहल-नील्सन विधि)। रोमानोव्स्की-गिम्सा के अनुसार रक्त की एक बूंद में माइक्रोफ़िलारिया का पता चलने के बाद, तैयारी को हेन्सन के हेमेटोक्सिलिन के साथ अतिरिक्त रूप से रंगा जाता है; 15-60 मिनट में. 2 मिनट तक धोएं. बहते पानी में. पुनर्रंगित तैयारी को 0.2% खारे घोल में विभेदित किया जाता है; माइक्रोफ़िलारिया आवरण को हल्के बैंगनी रंग से रंगा गया है, और शरीर का परमाणु पदार्थ गहरे बैंगनी रंग का है।

हल्के संक्रमण के लिए, रक्त के 2-10 टुकड़ों की एंटी-कौयगुलांट (उदाहरण के लिए, 5% घोल) से जांच करना आवश्यक है सोडियम सिट्रट) निम्नलिखित विधियों में से किसी एक का उपयोग करना।

नॉट की विधि (जे. नॉट, 1939), मार्केल और वोगे द्वारा संशोधित (ई.के. मार्केल, एम. वोगे, 1965)। 2 मिलीलीटर रक्त को एक सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में 1% एसिटिक एसिड के 10 भागों के साथ मिलाया जाता है, 2 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। 1500 आरपीएम पर; सतह परतसूखाकर, तलछट को कई ग्लास स्लाइडों पर वितरित किया जाता है और माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है। रोमानोव्स्की-गिम्सा या अन्य तरीकों का उपयोग करके तैयारियों को दागदार किया जा सकता है।

बेल फ़िल्टरिंग विधि (डी. आर. बेल, 1967)। एक उपकरण में एक आयताकार छेद और एक ही आकार के झिल्ली फिल्टर के साथ एक स्टेनलेस स्टील फ़नल होता है, जिसकी माप 19 x 42 मिमी होती है, जिसका छिद्र आकार 0.8 से 5 माइक्रोन होता है, 1 मिलीलीटर टिपोल डिटर्जेंट और 9 के मिश्रण में रक्त को हेमोलाइज़ किया जाता है। एमएल फ़िज़ियोल समाधान (निस्पंदन को तेज करने के लिए, डिवाइस एक वैक्यूम पंप से जुड़ा हुआ है)। फ़िल्टर को उबलते आसुत जल में स्थापित किया जाता है और रोमानोव्स्की-गिम्सा या एर्लिच के गर्म हेमेटोक्सिलिन से रंगा जाता है। रंगीन फिल्टर को डेसिकेटर या आइसोप्रोपिल अल्कोहल (क्रमिक रूप से 3 कप में) में सुखाया जाता है, विसर्जन तेल के साथ ग्लास पर साफ किया जाता है और एक कवरस्लिप के नीचे जांच की जाती है। रंगीन तैयारियां कई हफ्तों तक चलती हैं। रक्त में माइक्रोफ़िलारिया की मात्रात्मक रिकॉर्डिंग के लिए बेल विधि सबसे प्रभावी है।

गोल्डस्मिड पॉलीविडोन विधि का भी उपयोग किया जाता है।

त्वचा परीक्षण.त्वचा में आप ओंकोसेर्सी के माइक्रोफ़िलारिया और जानवरों के कृमि के लार्वा पा सकते हैं जो इसका कारण बनते हैं त्वचीय रूप लार्वा प्रवासन(सेमी।)। स्कार्फिकेशन द्वारा प्राप्त त्वचा के खंड या सामग्री जांघ, पिंडली, नितंब या डेल्टॉइड मांसपेशी से ली जाती है। एपिडर्मिस का एक शंकु के आकार का टुकड़ा एक एंटोमोलॉजिकल पिन के साथ उठाया जाता है और, रेजर से काटकर, फिजियोल समाधान की एक बूंद में कांच पर जांच की जाती है। पर नकारात्मक परिणाम 10 मिनट के बाद ताजा तैयारी की दोबारा जांच की जाती है; लार्वा आमतौर पर तैयारी के किनारों पर स्थानीयकृत होते हैं। परिणामी सामग्री को 2 मिलीलीटर फ़िज़ियोल घोल में 1-2 घंटे के लिए रखा जा सकता है। और तलछट की जांच करें. रोगी से 5 त्वचा खंड लेने की सिफारिश की जाती है।

वर्गों के मजबूत संपीड़न के बाद निकलने वाले रक्त और ऊतक द्रव से भी तैयारी तैयार की जा सकती है। मेयर, रोमानोव्स्की-गिम्सा या डेलाफिल्ड के हेमेटोक्सिलिन के अनुसार बूंदों को दाग दिया जाता है।

संक्रमण की मात्रा निर्धारित करने की मानक विधि। बायोप्सीड त्वचा क्षेत्र डायम. 3-5 मिमी और वजन कम से कम 1-4 मिलीग्राम, तौलें, छोटे टुकड़ों में काटें और फिजियोल में माइक्रोस्कोप के नीचे लार्वा की गिनती करें। कांच की स्लाइड पर घोल; दृश्य क्षेत्र में 1-4 लार्वा को + चिन्ह से, 5-9 लार्वा को ++ चिन्ह से, 10-19 लार्वा को +++ चिन्ह से, 20 या अधिक को + + + + चिन्ह से दर्शाया जाता है। रंगीन तैयारियों पर मात्रात्मक गणना करना अधिक सुविधाजनक है।

ट्राइचिनोसिस, सिस्टीसर्कोसिस और शिस्टोसोमियासिस के लिए परीक्षण

ट्राइचिनेला लार्वा का पता लगाना

संपीड़न विधि।दो सिरों वाला एक टुकड़ा या पिंडली की मांसपेशी(कण्डरा के पास), सड़न रोकनेवाला का उपयोग करके शल्य चिकित्सा द्वारा लिया जाता है, विच्छेदन सुइयों के साथ अलग-अलग पतले तंतुओं में विभाजित किया जाता है, ग्लिसरीन की एक बूंद में दो ग्लास स्लाइडों के बीच निचोड़ा जाता है ताकि तैयारी पतली और पारदर्शी हो। एक अंधेरे क्षेत्र के दृश्य के साथ एक माइक्रोस्कोप के तहत, त्रिचिनेला लार्वा स्पष्ट रूप से दिखाई देते हैं। पशु चिकित्सा में उपयोग किए जाने वाले कंप्रेसोरियम में मांसपेशियों के कई टुकड़ों का अध्ययन करना प्रभावी है। अभ्यास करें, विशेष रूप से विशेष ट्राइचिनेलोस्कोप में।

बेचमैन की पाचन विधि(जी. डब्ल्यू. बैचमैन, 1928)। 1 और कुचली हुई मांसपेशियों को 60 मिलीलीटर कृत्रिम गैस्ट्रिक रस (0.5 ग्राम पेप्सिन; 0.7 मिलीलीटर केंद्रित हाइड्रोक्लोरिक एसिड; 100 मिलीलीटर पानी) के साथ डाला जाता है और 18 घंटे के लिए छोड़ दिया जाता है। थर्मोस्टेट में t° 37° पर; तरल की ऊपरी परत को सूखा दिया जाता है, गर्म पानी (t° 37-45°) को तलछट में मिलाया जाता है और बेहरमन उपकरण में डाला जाता है। एक घंटे के बाद, तरल को एक टेस्ट ट्यूब में डाला जाता है, सेंट्रीफ्यूज किया जाता है और तलछट की जांच की जाती है। यदि लार्वा कैल्सीफाइड कैप्सूल में बंद हैं, तो उन्हें पहले हाइड्रोक्लोरिक, नाइट्रोजन, या सल्फ्यूरिक एसिड के घोल में डीकैल्सीफाई किया जाता है।

जैवपरख. अध्ययन की जा रही मांसपेशियों के टुकड़ों को सफेद चूहों या चूहों को खिलाया जाता है। 2-3 दिनों के बाद, यौन रूप से परिपक्व ट्राइचिनेला ग्रहणी की सामग्री में पाया जा सकता है, और 2-3 सप्ताह के बाद, लार्वा डायाफ्राम और जीभ की मांसपेशियों में पाया जा सकता है।

हिस्टोलॉजिकल अनुभाग।मांसपेशियों के टुकड़े बौइन, ज़ेंकर या अन्य तरल में स्थिर होते हैं; सामान्य तरीके सेअनुभागों को माइक्रोटोम पर तैयार किया जाता है और डेलाफ़ील्ड के हेमेटोक्सिलिन से रंग दिया जाता है।

सिस्टीसर्किस का पता लगाना

विलुप्त मांसपेशी, संयोजी ऊतक आदि के एक टुकड़े की नग्न आंखों से जांच की जाती है, सिस्टीसर्कस को सावधानीपूर्वक अलग किया जाता है - 1-2 सेमी आकार का एक सफेद पारभासी पुटिका, ग्लिसरीन की एक बूंद में दो ग्लास स्लाइडों के बीच कुचल दिया जाता है और एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है . ऊतकों से पृथक सिस्टिसिरसी की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए, उन्हें फिजियोल के लिए 50% पित्त समाधान में रखा जाता है। t° 37° पर थर्मोस्टेट में समाधान; 10-60 मिनट में. व्यवहार्य सिस्टीसर्कस का सिर बाहर की ओर मुड़ता है। कैल्सीफाइड सिस्टीसेरसी को एक घंटे के लिए नाइट्रिक एसिड के 4% समाधान के साथ प्रारंभिक रूप से डीकैल्सीफाई किया जाता है।

शिस्टोसोम अंडे का पता लगाना

ह्रोन में, शिस्टोसोमियासिस के रूप, जब ग्रैनुलोमा का गठन ऊतकों से आंतों के लुमेन या मूत्र पथ में अंडे की रिहाई को रोकता है, तो रेक्टल म्यूकोसा की बायोप्सी का उपयोग किया जाता है, जो एक रेक्टोस्कोप का उपयोग करके एक विशेष चम्मच के साथ किया जाता है, दृश्यमान घाव वाले क्षेत्र का चयन करना। बायोप्सी किए गए टुकड़े को दो ग्लास स्लाइडों के बीच कुचल दिया जाता है और माइक्रोस्कोप के नीचे जांच की जाती है। यदि परिणाम नकारात्मक है, तो टुकड़ों को कास्टिक क्षार के 4% समाधान में स्पष्ट किया जाता है और उनसे हिस्टोल तैयार किया जाता है। स्लाइस. जेजुनल म्यूकोसा की बायोप्सी मौखिक रूप से की जाती है और परिणामी सामग्री की संपीड़न विधि का उपयोग करके जांच की जाती है या हिस्टोल अनुभाग इससे तैयार किए जाते हैं। जेनिटोरिनरी शिस्टोसोमियासिस के कुछ मामलों में, निदान केवल एंडोवेसिकल बायोप्सी के आधार पर किया जा सकता है। शिस्टोसोमियासिस के हेपेटोलिएनल रूप में, यकृत की एक पंचर बायोप्सी की जाती है; परिणामी सामग्री से, हिस्टोल और अनुभाग तैयार किए जाते हैं और एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है। एक अंधेरे क्षेत्र के साथ प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप का उपयोग शिस्टोसोम अंडे के लिए यकृत ऊतक की जांच के लिए भी किया जाता है। यदि महिला जननांग पथ शिस्टोसोम्स से प्रभावित होता है, तो योनि स्पेकुलम का उपयोग करके निर्वहन एकत्र किया जाता है या गर्भाशय ग्रीवा के श्लेष्म झिल्ली के टुकड़ों को एक तेज चम्मच से लिया जाता है; परिणामी सामग्री की फ़िज़ियोल घोल की एक बूंद में कांच पर माइक्रोस्कोप के नीचे जांच की जाती है।

एंटरोबियासिस और टेनियासिस के लिए परीक्षण

पेरिअनल स्क्रैपिंग (इसे शाम को, रोगी के बिस्तर पर जाने के 1 - 1.5 घंटे बाद, या सुबह शौचालय जाने से पहले लेने की सलाह दी जाती है)। एक माचिस की मदद से, तिरछा काटें और तरल की एक बूंद (फिजियोल, घोल, उबला हुआ पानी या सोडा के बाइकार्बोनेट का 2% घोल) में भिगोकर, एक ग्लास स्लाइड पर लगाएं, मैं सावधानी से ऐसा करता हूं? गुदा की श्लेष्मा झिल्ली और उसके चारों ओर की सिलवटों से (केंद्र से बाहर की ओर) खुरचना। माचिस के अंत में एकत्रित बलगम को एक कवर ग्लास के किनारे से एक ग्लास स्लाइड पर तरल की एक बूंद में खुरच कर निकाला जाता है और, उसी कवर ग्लास से ढककर उसकी जांच की जाती है। सामूहिक परीक्षाओं के दौरान, जब बच्चों या अन्य संस्थानों में स्क्रैपिंग ली जाती है, तो इस्तेमाल की गई माचिस को एक ग्लास स्लाइड पर तरल की एक बूंद में रखा जाता है; बूंद सूखने के बाद, इसे दूसरे ग्लास स्लाइड से ढक दिया जाता है और प्रयोगशाला में लपेटा जाता है। कागज़ और इलास्टिक बैंड से सुरक्षित किया गया। मलाशय के बलगम का अध्ययन करने के लिए, वे एक विशेष उपकरण का उपयोग करते हैं - एक शेखमातोव या ज़ीमैन ट्यूब, जिसके साथ वे मलाशय से बलगम लेते हैं और माइक्रोस्कोप के नीचे स्मीयर की जांच करते हैं।

कपास झाड़ू विधि. मरीजों को घर ले जाने के लिए कांच या लकड़ी की छड़ी पर रुई के फाहे के साथ एक टेस्ट ट्यूब दी जाती है; सुबह में रोगी पेरिअनल सिलवटों को गीले स्वाब से पोंछता है उबला हुआ पानी, और इसे थोड़ी मात्रा में पानी के साथ एक परखनली में रखें। प्रयोगशाला में, स्वाब को उसी टेस्ट ट्यूब में पानी के एक नए हिस्से से धोया जाता है, और सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद तलछट की जांच की जाती है।

हॉल की सिलोफ़न विधि (एम.एस. हॉल, 1937)। सिलोफ़न का एक चौकोर टुकड़ा कांच की छड़ पर एक इलास्टिक बैंड से सुरक्षित किया गया है। स्क्रैपिंग को सूखे सिलोफ़न से बनाया जाता है और एक टेस्ट ट्यूब में रखा जाता है। प्रयोगशाला में सिलोफ़न को छड़ी से थोड़ा सा हिलाया जाता है और उसकी नोक को कैंची से काटकर कांच की स्लाइड पर सीधा कर दिया जाता है; डेसिनॉर्मल सोडियम हाइड्रॉक्साइड घोल से गीला किया गया, कवरस्लिप से ढका गया और माइक्रोस्कोप के नीचे जांच की गई।

ग्राहम की सेलूलोज़ टेप विधि (एस. एफ. ग्राहम, 1941)। सेलूलोज़ टेप की एक पट्टी को चिपकने वाली तरफ से विषय के पेरिअनल सिलवटों पर दबाया जाता है, फिर उसी तरफ से एक ग्लास स्लाइड पर दबाया जाता है और बिना कवर ग्लास के जांच की जाती है; आप टोल्यूनि की एक बूंद मिला सकते हैं। वी. वी. कलेडिन (1972) ने इन उद्देश्यों के लिए धुली हुई एक्स-रे फिल्म से काटी गई और ग्लिसरीन से सिक्त सेल्युलाइड डिस्क का उपयोग करने का प्रस्ताव रखा; डिस्क की जांच ग्लास स्लाइड पर सिलिकेट गोंद की एक बूंद में की जाती है। सेलूलोज़ टेप विधि का उपयोग बच्चों के अंडरवियर की जांच के लिए भी किया जा सकता है।

सबंगुअल स्क्रैपिंग। नाखून के किनारों, नाखून के बिस्तर और उपांगीय स्थानों को कास्टिक क्षार के 0.5-1% घोल से सिक्त किया जाता है और नम कपास झाड़ू से पोंछ दिया जाता है। स्वैब को उसी घोल के साथ सेंट्रीफ्यूज ट्यूबों में रखा जाता है, सेंट्रीफ्यूज किया जाता है और तलछट की जांच की जाती है।

वस्तुओं के अध्ययन की विधियाँ पर्यावरणहेल्मिंथ के अंडे और लार्वा के लिए (स्वच्छता और हेल्मिंथोलॉजिकल अध्ययन)

हेल्मिंथ के अंडे और लार्वा के साथ वस्तुओं के संदूषण की डिग्री निर्धारित करने के लिए अनुसंधान किया जाता है बाहरी वातावरण. प्राप्त आंकड़ों का उपयोग गरिमा का आकलन करने के लिए किया जाता है। संस्थानों और उद्यमों की स्थिति और हेल्मिंथियासिस से निपटने के लिए किए गए उपायों की प्रभावशीलता।

हेल्मिंथ के अंडे और लार्वा के साथ विभिन्न पर्यावरणीय वस्तुओं के संदूषण की डिग्री का अध्ययन करते समय और हेल्मिंथ संक्रमण की महामारी विज्ञान में उनकी भूमिका का आकलन करते समय, न केवल पाए गए अंडों की संख्या स्थापित करना महत्वपूर्ण है, बल्कि उनकी व्यवहार्यता और आक्रामकता भी निर्धारित की जाती है। : ए) उपस्थिति से, माइक्रोस्कोप के नीचे; बी) ल्यूमिनसेंट सहित विभिन्न रंगों से रंगना; एक नियम के रूप में, जीवित अंडे और लार्वा को चित्रित नहीं किया जाता है; ग) आक्रामक अवस्था तक अनुकूलतम परिस्थितियों में खेती; घ) प्रयोगशाला पशुओं का संक्रमण (जैवपरख)।

जल एवं सीवरेज अध्ययन. एक अध्ययन के लिए, 10-25 लीटर पानी (नदियाँ, समुद्र, तालाब, स्विमिंग पूल, जल आपूर्ति) और 1-2-5 लीटर सीवेज का उपयोग करें।

विधि 3. जी वासिलकोवा (1941)। पानी या सीवेज को गोल्डमैन उपकरण में झिल्ली अल्ट्राफिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है, जिसमें एक ग्लास या धातु फ़नल होता है जिसमें रिंग-नोजल के माध्यम से बन्सेन फ्लास्क से जुड़े फिल्टर होते हैं। निस्पंदन प्रक्रिया को तेज करने के लिए, एक वैक्यूम पंप डिवाइस से जुड़ा हुआ है। निस्पंदन के बाद, झिल्ली फिल्टर की माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है, 50% ग्लिसरॉल समाधान के साथ साफ किया जाता है; संचित तलछट को साफ किया जाता है और स्मीयर के रूप में अलग से जांच की जाती है। अन्य डिज़ाइन के फ़िल्टर उपकरणों का भी उपयोग किया जाता है।

सीवर द्रव के अध्ययन के लिए जी. श्री गुडज़ाबिद्ज़े और जी. ए. युडिन (1963) की विधि। लिसेंको सिलेंडर में 1 लीटर तरल 2 घंटे के लिए छोड़ दिया जाता है; परिणामी तलछट (5-9 मिली) को मृदा परीक्षण के अनुसार संसाधित किया जाता है (नीचे देखें)।

विधि एन. ए. रोमानेंको (1967)। 1200-1500 मिलीलीटर की क्षमता वाले ग्लास सिलेंडर में रखे गए 1 लीटर अपशिष्ट तरल में, 0.4-0.6 ग्राम एल्यूमीनियम सल्फेट या फेरिक क्लोराइड मिलाएं (जमावट के उद्देश्य से, निलंबित कणों के अवसादन की प्रक्रिया को तेज करना) और 40 के बाद मिनट। मिश्रण को 3 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। 1000 आरपीएम पर; ऊपरी परत को सूखा दिया जाता है, और गुच्छे को घोलने के लिए, हाइड्रोक्लोरिक एसिड के 3% घोल का 1-2 मिली, फिर सोडियम नाइट्रेट का 150 मिली संतृप्त घोल मिलाया जाता है। तलछट की जांच मिट्टी की तरह की जाती है।

मृदा अनुसंधान

हेल्मिंथियासिस के फॉसी की पहचान करने और उनके सुधार पर काम की प्रभावशीलता का आकलन करने के लिए हेल्मिन्थ अंडों के साथ मिट्टी के संदूषण का निर्धारण किया जाता है।

विधि 3. जी. वासिलकोवा और वी. ए. गेफ्टर (1948)। 12.5 ग्राम मिट्टी को स्टेनलेस स्टील या पीतल से बनी टेस्ट ट्यूब (मात्रा 100 मिली) में 20 मिली कास्टिक क्षार के 5% घोल के साथ 10 कांच के मोती या छोटे कंकड़ मिलाकर मिलाया जाता है। ट्यूबों को रबर स्टॉपर्स से सील कर दिया जाता है और 20 मिनट तक हिलाया जाता है। हिलाने वाले उपकरण में या मैन्युअल रूप से। स्टॉपर्स को हटाने के बाद, ट्यूबों को 3-5 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जाता है, सतह के तरल को सूखा दिया जाता है, 60-80 मिलीलीटर संतृप्त सोडियम नाइट्रेट समाधान को तलछट में जोड़ा जाता है और, अच्छी तरह से मिश्रण करने के बाद, 3-5 मिनट के लिए फिर से सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। तैरते अंडों वाली इस सतही फिल्म को मिश्रण की सतह को एक जटिल लूप (एक सामान्य छड़ पर जुड़े 5-6 लूप) से छूकर हटा दिया जाता है और एक गिलास पानी में स्थानांतरित कर दिया जाता है; एक ही समाधान के साथ मिश्रण, अपकेंद्रित्र; पूरी प्रक्रिया कम से कम 3 बार दोहराई जाती है। जिस कप में फिल्म को स्थानांतरित किया जाता है उसकी सामग्री को पानी से पतला किया जाता है और झिल्ली फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है, जिसे ग्लिसरॉल की एक बूंद में माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है।

विधि 3. जी. वासिलकोवा और वी. ए. गेफ्टर, जैसा कि ए. ए. नमितोकोव (1961) द्वारा संशोधित किया गया है, मुख्य विधि से इस मायने में भिन्न है कि फिल्म की तैयारी की जांच करने के बजाय, टेस्ट ट्यूब की आधी सामग्री का उपयोग किया जाता है (हर बार एक नया भाग जोड़ना) संतृप्त सोडियम नाइट्रेट घोल), फ़िल्टर करें और फ़िल्टर की जांच करें।

एन. ए. रोमानेंको (1968) जी. श्री गुडज़ाबिद्ज़े द्वारा प्रस्तावित उपकरण का उपयोग करके हेल्मिंथ अंडों के लिए मिट्टी के नमूनों और सीवेज कीचड़ की जांच करने की सिफारिश करते हैं। 50 ग्राम मिट्टी को 1 मिनट तक अच्छी तरह मिलाया जाता है। इलेक्ट्रिक मोटर द्वारा संचालित विशेष ब्लेड के साथ अपकेंद्रित्र ट्यूबों (250 मिलीलीटर क्षमता) में 150 मिलीलीटर पानी में। मिश्रण को 3 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। 1000 आरपीएम पर, पानी निकालें और 150 मिलीलीटर संतृप्त सोडियम नाइट्रेट घोल डालें, मिश्रण करें और 3 मिनट के लिए फिर से सेंट्रीफ्यूज करें। नमूनों वाली टेस्ट ट्यूबों को एक स्टैंड में रखा जाता है, उत्तल मेनिस्कस बनने तक सोडियम नाइट्रेट का घोल डाला जाता है, ग्लास स्लाइड (10 x 6 सेमी) से ढक दिया जाता है और 10-15 मिनट के लिए छोड़ दिया जाता है, फिर ग्लास हटा दिए जाते हैं और जांच की जाती है; प्रक्रिया कम से कम 4 बार दोहराई जाती है।

बेहरमन (1917) की विधि का उपयोग करके हेल्मिंथ लार्वा पर शोध। 200-400 ग्राम मिट्टी को एक धातु की जाली (1-2 मिमी व्यास के छेद के साथ) पर धुंध के एक टुकड़े में रखा जाता है, जिसे एक तिपाई पर लगे कांच की फ़नल के चौड़े हिस्से पर रखा जाता है। फ़नल के संकीर्ण सिरे पर क्लैंप के साथ एक रबर ट्यूब खींची जाती है। फ़नल को गर्म (t° 50°) पानी से भर दिया जाता है ताकि मिट्टी के साथ जाल का निचला हिस्सा पानी के संपर्क में आ जाए। थर्मोट्रोपिज्म के कारण, लार्वा सक्रिय रूप से गर्म पानी में रेंगते हैं और, बसने के बाद, क्लैंप के ऊपर रबर ट्यूब के निचले हिस्से में जमा हो जाते हैं। 3-4 घंटों के बाद, 50 मिलीलीटर सामग्री को फ़नल से एक टेस्ट ट्यूब में छोड़ा जाता है, सेंट्रीफ्यूज किया जाता है और तलछट की जांच की जाती है।

सब्जियों, फलों और जामुनों का अनुसंधान

वे मुख्य रूप से बिना खाई जाने वाली सब्जियों, जामुनों और फलों का अध्ययन करते हैं उष्मा उपचार. विधि 3. जी वासिलकोवा (1948)। सब्जियों या फलों के 5-10 टुकड़े (लगभग 0.5 किग्रा) या 100-200 ग्राम साग (सलाद, हरी प्याज) को ग्राउंड स्टॉपर्स के साथ चौड़ी गर्दन वाले कांच के जार में कई घंटों तक पानी के साथ डाला जाता है और 10-20 मिनट तक हिलाया जाता है। . हिलाने वाले उपकरण में या मैन्युअल रूप से। पानी निकाला जाता है, अध्ययनाधीन वस्तुओं को धोया जाता है साफ पानीऔर सभी फ्लश पानी को गोल्डमैन उपकरण में फ़िल्टर किया जाता है; फिल्टर को ग्लिसरीन से साफ करके जांच की जाती है। आप ग्लिसरीन में 25% लुगोल के घोल से फिल्टर को रंग सकते हैं; इस मामले में, हेल्मिन्थ अंडे दागदार हो जाते हैं भूरा रंगऔर वे रंगे हुए स्टार्च के दानों के बीच आसानी से पहचाने जाते हैं नीला रंग. बड़ी तलछट को मिट्टी की तरह माना जाता है।

घरेलू वस्तुओं और हाथों से धुलने वाले पदार्थों का अध्ययन। एक गोंद ब्रश (या नायलॉन कपड़े के टुकड़े में लपेटा हुआ एक कपास झाड़ू) को सोडा के बाइकार्बोनेट के 2% घोल में भिगोकर बार-बार जांच की जा रही वस्तु या हाथों के ऊपर से गुजारा जाता है, और फिर उसी घोल में धोया जाता है जिसे एक परखनली में डाला जाता है। प्रयोगशाला में, ब्रश और स्वाब को साफ पानी से धोया जाता है; धोने के सारे पानी को सेंट्रीफ्यूज किया जाता है और तलछट की जांच की जाती है।

विधि वी. ए. गेफ़्टर (1960)। फ़नल से जुड़े वैक्यूम क्लीनर का उपयोग करके नरम उपकरणों से धूल इकट्ठा करना अधिक प्रभावी है; किनारों में 2 अलग करने योग्य भाग होते हैं: निचले हिस्से की सतह पर एक झिल्ली फ़िल्टर रखा जाता है, जिसे धातु या प्लास्टिक की जाली से ढक दिया जाता है, और मजबूत किया जाता है इसे लगाकर सबसे ऊपर का हिस्साफ़नल. असेंबल किया गया फ़नल एक रबर ट्यूब के साथ वैक्यूम क्लीनर नली से जुड़ा होता है। 3 मिनट के लिए वस्तु से धूल एकत्र की जाती है, जिसके बाद फ़िल्टर को हटा दिया जाता है और एक नए से बदल दिया जाता है। प्रयोगशाला में, फिल्टर की जांच माइक्रोस्कोप के तहत की जाती है, जिसे ग्लिसरीन से साफ किया जाता है। यदि फिल्टर पर धूल की परत बड़ी है, तो इसे खुरच कर हटा दिया जाता है और धब्बों के रूप में देखा जाता है या मिट्टी की तरह व्यवहार किया जाता है।

इम्यूनोलॉजिकल डायग्नोस्टिक तरीके

इम्युनोल का उपयोग करने की संभावना. हेल्मिंथियासिस के निदान के तरीके हेल्मिन्थ्स की सक्रिय एंटीजन उत्पन्न करने की क्षमता के कारण होते हैं जो मेजबान की प्रतिरक्षा सक्षम कोशिकाओं को प्रभावित करते हैं और एंटीबॉडी के उत्पादन को उत्तेजित करते हैं। आंतों के हेल्मिंथियासिस के लिए सबसे प्रभावी इम्यूनोडायग्नॉस्टिक विधियां हैं, जब हेल्मिंथ के स्राव और मलमूत्र, जिनमें एंटीजेनिक गतिविधि होती है, सीधे मेजबान के रक्त में प्रवेश करते हैं। इम्यूनोल प्रतिक्रियाओं का उपयोग एस्कारियासिस, ट्राइकिनोसिस, फाइलेरिया, शिस्टोसोमियासिस, इचिनोकोकोसिस और एल्वोकॉकोसिस, सिस्टीसर्कोसिस, पैरागोनिमियासिस, लार्वा माइग्रन्स लक्षण कॉम्प्लेक्स (टोक्सोकेरियासिस, एंजियोस्ट्रॉन्गिलोसिस) आदि के निदान के लिए किया जाता है। विभिन्न सेरोल परीक्षणों का उपयोग किया जाता है (वर्षा प्रतिक्रियाएं, एग्लूटीनेशन प्रतिक्रियाएं, पूरक निर्धारण) , फ्लोरोसिंग एंटीबॉडीज) और इंट्राडर्मल एलर्जी परीक्षण। ताजे जमे हुए या लियोफिलिज्ड ऊतकों के होमोजेनेट्स के नमक अर्क के साथ-साथ विभिन्न जैविक रूप से सक्रिय तरल पदार्थ (इचिनोकोकल फफोले से तरल, राउंडवॉर्म के पेट के तरल पदार्थ, आदि) का उपयोग करके लार्वा और परिपक्व हेल्मिन्थ से एंटीजन तैयार किए जाते हैं। इस तथ्य के कारण कि हेल्मिंथ में एक बहुत ही जटिल एंटीजेनिक संरचना होती है और उनके एंटीजेनिक मोज़ेक में घटक और व्यक्तिगत निर्धारक होते हैं जो अन्य प्रकार के हेल्मिंथ, बैक्टीरिया और मेजबान एंटीजन के साथ क्रॉस-प्रतिक्रिया करते हैं, उन्हें गैर-विशिष्ट घटकों से शुद्ध करने के तरीके विकसित किए जा रहे हैं। विखंडन किया जाता है विभिन्न तरीके: सेफैडेक्स के साथ कॉलम में जेल निस्पंदन, डीईएई-सेफैडेक्स पर आयन एक्सचेंज क्रोमैटोग्राफी, एसिड के साथ उपचार, आदि। फ्रैक्शनल एंटीजन में आमतौर पर पूरे अर्क की तुलना में अधिक विशिष्टता होती है, लेकिन उनकी गतिविधि लगभग समान होती है। इम्यूनोडायग्नोस्टिक तरीके सब कुछ ढूंढ लेते हैं अधिक से अधिक अनुप्रयोग. प्रतिक्रियाओं का उपयोग न केवल रोगियों की सबसे पूर्ण और प्रारंभिक पहचान के लिए किया जाता है, बल्कि फ़ॉसी का अध्ययन करने और हेल्मिंथियासिस की महामारी विज्ञान का अध्ययन करने के लिए भी किया जाता है।

सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाएं।जीवित लार्वा पर सूक्ष्म अवक्षेपण प्रतिक्रिया का उपयोग नेमाटोड के निदान के लिए किया जाता है - एस्कारियासिस, हुकवर्म रोग और ट्राइकिनोसिस का प्रीइमैजिनल चरण। संक्रमण (एस्कारियासिस, हुकवर्म रोग) के 5-10 दिन बाद प्रतिक्रिया सकारात्मक हो जाती है और 90-100 दिनों तक बनी रहती है। एंटीजन प्रयोगात्मक रूप से संक्रमित प्रयोगशाला जानवरों के ऊतकों से पृथक जीवित नेमाटोड लार्वा है। अलग किए गए लार्वा को मेजबान प्रोटीन से बाँझ फिजियोल, समाधान और आसुत जल और प्रत्येक की 10-15 प्रतियों के साथ अच्छी तरह से धोया जाता है। एक कुएं के साथ एक बाँझ ग्लास स्लाइड पर पाश्चर पिपेट का उपयोग करके रखा गया। परीक्षण सीरम की 2-3 बूंदें लगाएं, एक स्टेराइल कवर ग्लास से ढकें, इसे एक आर्द्र कक्ष में रखें (पेट्री डिश को गीले फिल्टर पेपर के साथ पंक्तिबद्ध करें) और 24-48 घंटों के लिए छोड़ दें। थर्मोस्टेट में t° 37° पर। यदि प्रतिक्रिया सकारात्मक है, तो कम आवर्धन माइक्रोस्कोप के तहत, मुंह के चारों ओर दिखाई देता है गुदा छिद्रलार्वा भूरे-सफ़ेद, गोलाकार या ज़िगज़ैग-आकार के अवक्षेपों के थोड़े ओपलेसेंट द्रव्यमान होते हैं। प्रतिक्रिया दक्षता 85-95% तक पहुँच जाती है।

ट्राइचिनोसिस के निदान के लिए रिंग वर्षण प्रतिक्रिया वी.पी. पाशुक (1957) द्वारा विकसित की गई थी। बीमारी के 2-3 सप्ताह में प्रतिक्रिया सकारात्मक हो जाती है। इसकी प्रभावशीलता 80-90% तक पहुंच जाती है। एंटीजन 35° पर सुखाए गए लार्वा से निकाला गया एक पाउडर है, जिसे संक्रमित जानवरों की मांसपेशियों से अलग किया जाता है। टेस्ट ट्यूब में दीया. 0.5 सेमी, एंटीजन के प्रत्येक तनुकरण का 0.1 मिलीलीटर डालें और ध्यान से उस पर परीक्षण सीरम की समान मात्रा की परत लगाएं (या इसे नीचे तक कम करें) ताकि तरल पदार्थ मिश्रण न करें। परखनलियों को 30 मिनट तक रखा जाता है। थर्मोस्टेट में t° 37° पर, और फिर 30-60 मिनट पर। कमरे के तापमान पर। सकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ, एंटीजन और सीरम के बीच इंटरफेस पर एक सफेद नाजुक अंगूठी दिखाई देती है, जो हिलने पर आसानी से विघटित हो जाती है।

ए. आई. गुसेव और वी. एस. स्वेत्कोव द्वारा माइक्रोमोडिफिकेशन में ओचटरलोनी (ओ. ओ. ओ. ओचटरलोनी, 1949) के अनुसार जेल में वर्षा प्रतिक्रिया को ओपिसथोरचियासिस के प्रारंभिक चरणों के निदान के लिए आई. ए. गिनोवकर, ई. ए. ज़बोज़लेवा, ए. वी. डोरोनिन (1970) द्वारा प्रस्तावित किया गया था। प्रारंभिक आंकड़ों के अनुसार, इसकी प्रभावशीलता 87% है। एंटीजन बिल्लियों के जिगर से अलग किए गए ताजा जमे हुए यौन रूप से परिपक्व ओपिसथोर्चिस के एक समरूप का अर्क है।

डायग्नोस्टिकम के साथ अप्रत्यक्ष हेमग्लूटीनेशन (देखें) की प्रतिक्रिया - इचिनोकोकल द्रव के साथ संवेदीकृत औपचारिक और तनीकृत भेड़ एरिथ्रोसाइट्स का एक निलंबन - विकसित किया गया है

इचिनोकोकोसिस और एल्वोकॉकोसिस के निदान के लिए एल.एन. स्टेपानकोव्स्काया (1972)।

सेरेब्रल सिस्टीसर्कोसिस के निदान के लिए एल. यह 85% मामलों में प्रभावी है।

एस्कारियासिस के प्रीइमेजिनल चरण के निदान के लिए एस्केरिस डायग्नोस्टिकम के साथ आरएनजीए का प्रस्ताव किया गया है।

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (देखें) सामान्य विधि के अनुसार की जाती है और इसका उपयोग ट्राइकिनोसिस और सिस्टीसर्कोसिस के निदान के लिए किया जाता है।

ल्यूमिनसेंट एंटीबॉडी विधि (अप्रत्यक्ष विधि)। ग्लास स्लाइड पर एंटीजन के रूप में पोर्क टेपवर्म सिस्टिसरसी के डीफ़ैटेड ड्राई होमोजेनेट के साथ यह विधि, जेआई द्वारा विकसित की गई थी। मानव सिस्टिकिकोसिस के निदान के लिए एम. कोनोवालोवा (1973)। ट्राइचिनोसिस के निदान के लिए एंटीजन के रूप में ट्राइचिनेला लार्वा के हिस्टोल, वर्गों के साथ समान प्रतिक्रिया विकसित की गई थी।

ई. एस. लीकिना, वी. ए. गेफ्टर।

जब विभिन्न पर्यावरणीय वस्तुओं (मिट्टी, पानी, सब्जियां, आदि) पर हेल्मिंथ अंडे पाए जाते हैं, तो उपस्थिति, महत्वपूर्ण रंगों के साथ धुंधलापन, इष्टतम स्थितियों में खेती और जैविक परीक्षण करने से उनकी व्यवहार्यता निर्धारित करना हमेशा आवश्यक होता है, यानी।

प्रयोगशाला पशुओं को खिलाना।

उपस्थिति के आधार पर हेल्मिंथ अंडे या लार्वा की व्यवहार्यता का निर्धारण। हेल्मिंथ अंडों को पहले कम आवर्धन पर, फिर उच्च आवर्धन पर सूक्ष्मदर्शी से जांचा जाता है। विकृत और मृत हेल्मिंथ अंडों में, खोल फटा हुआ या अंदर की ओर मुड़ा हुआ होता है, प्लाज्मा धुंधला और ढीला होता है। खंडित अंडों में, कुचलने वाली गेंदें (ब्लास्टोमेरेस) आकार में असमान, आकार में अनियमित और अक्सर एक ध्रुव पर स्थानांतरित हो जाती हैं। कभी-कभी असामान्य अंडे होते हैं जो बाहरी विकृति के बावजूद सामान्य रूप से विकसित होते हैं। जीवित राउंडवॉर्म लार्वा में, बारीक दानेदारता केवल शरीर के मध्य भाग में मौजूद होती है; जैसे ही वे मरते हैं, दानेदारता पूरे शरीर में फैल जाती है, और बड़े चमकदार हाइलिन रिक्तिकाएं दिखाई देती हैं - तथाकथित मोतियों की माला।

राउंडवॉर्म, व्हिपवर्म, पिनवॉर्म के परिपक्व अंडों की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए, लार्वा की सक्रिय गतिविधियों को दवा को थोड़ा गर्म करके (37 डिग्री सेल्सियस से अधिक नहीं तापमान पर) किया जाना चाहिए। अंडे के छिलके से अलग होने के बाद राउंडवॉर्म और व्हिपवर्म लार्वा की व्यवहार्यता का निरीक्षण करने के लिए तैयारी के कवर ग्लास पर एक विच्छेदन सुई या चिमटी के साथ दबाव डालना अधिक सुविधाजनक होता है।

आक्रामक राउंडवॉर्म लार्वा में, एक आवरण अक्सर सिर के अंत में छीलता हुआ देखा जाता है, और व्हिपवर्म लार्वा में, जिन्होंने अंडे में विकास पूरा कर लिया है, उच्च आवर्धन पर इस स्थान पर एक स्टाइललेट पाया जाता है। मृत हेल्मिंथ लार्वा में, चाहे उनका स्थान कुछ भी हो (अंडे में या उसके बाहर), शरीर का क्षय देखा जाता है। जिसमें आंतरिक संरचनालार्वा गुच्छेदार या दानेदार हो जाता है, और शरीर बादलदार और अपारदर्शी हो जाता है। शरीर में रिक्तिकाएँ पाई जाती हैं, और छल्ली पर विराम पाए जाते हैं।

टैनिड ऑन्कोस्फीयर (गोजातीय, पोर्क टेपवर्म, आदि) की व्यवहार्यता उनके संपर्क में आने पर भ्रूण की गति से निर्धारित होती है। पाचक एंजाइम. अंडों को कुत्ते के गैस्ट्रिक रस या कृत्रिम ग्रहणी रस के साथ एक वॉच ग्लास पर रखा जाता है। उत्तरार्द्ध की संरचना: पैनक्रिएटिन 0.5 ग्राम, सोडियम बाइकार्बोनेट 0.09 ग्राम, आसुत जल 5 मिली। अंडों के साथ वॉच ग्लास को थर्मोस्टेट में 36-38 डिग्री सेल्सियस पर 4 घंटे के लिए रखा जाता है। साथ ही, जीवित भ्रूणों को उनके खोल से मुक्त किया जाता है। जीवित ओंकोस्फीयर के गोले भी अम्लीय पेप्सिन और में घुल जाते हैं क्षारीय घोल 38 डिग्री सेल्सियस पर थर्मोस्टेट में 6-8 घंटों के बाद ट्रिप्सिन।

यदि आप टैनिड अंडे को सोडियम सल्फाइड के 1% घोल में, या सोडियम हाइपोक्लोराइड के 20% घोल में, या क्लोरीन पानी के 1% घोल में 36-38 डिग्री सेल्सियस पर रखते हैं, तो परिपक्व और जीवित भ्रूण झिल्ली से निकल जाते हैं और करते हैं 1 दिन के भीतर परिवर्तन नहीं. अपरिपक्व और मृत ओंकोस्फियर सिकुड़ते या सूजते हैं और तेजी से बढ़ते हैं, और फिर 10 मिनट - 2 घंटे के भीतर "विघटित" हो जाते हैं। जीवित टैनिड भ्रूण भी सक्रिय रूप से 1% सोडियम क्लोराइड समाधान, 0.5% सोडियम बाइकार्बोनेट समाधान और 36-38 पर पित्त के मिश्रण में चलते हैं। डिग्री सेल्सियस.

इचिनोकोक्की के स्कोलेक्स की व्यवहार्यता कम ताप पर निर्धारित की जाती है। ऐसा करने के लिए, पानी में धोए गए स्कोलेक्स या ब्रूड कैप्सूल को एक छेद वाली कांच की स्लाइड पर पानी की एक बूंद में रखा जाता है, कवरस्लिप से ढक दिया जाता है और 38-39 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर हीटिंग चरण के साथ माइक्रोस्कोप के तहत जांच की जाती है। यदि कोई हीटिंग टेबल नहीं है, तो दवा को किसी भी ताप स्रोत का उपयोग करके गर्म किया जाता है। उसी समय, व्यवहार्य स्कोलेक्स सक्रिय रूप से गति करता है, चूसने वालों को सिकोड़ता या शिथिल करता है, सूंड को लंबा और छोटा करता है। यदि आप स्कोलेक्स को 0.5-1% पर रखते हैं पानी का घोलकमरे के तापमान पर फिलिसिलीन, तो सभी व्यवहार्य स्कोलेक्स जल्दी से बाहर निकल जाएंगे और मर जाएंगे। गैर-व्यवहार्य स्कोलेक्स उलटे नहीं होते हैं।

पौधों और जल निकायों की अन्य वस्तुओं पर एकत्र किए गए एडोलसेरिया फैसीओली की व्यवहार्यता को हीटिंग चरण के साथ माइक्रोस्कोप के तहत शारीरिक समाधान में एक ग्लास स्लाइड पर जांच करके जांच की जाती है। जब ट्रेमेटोड लार्वा को गर्म किया जाता है, तो वे हिलना शुरू कर देते हैं।

बौने टेपवर्म अंडों की व्यवहार्यता भ्रूण पर हुक के स्थान से निर्धारित होती है।

बौने टेपवर्म के जीवित अंडों में, प्रोटोप्लाज्म की सुस्त पेंडुलम जैसी हरकतें और लगभग अगोचर रूप से अलग होना और पार्श्व जोड़ी हुक के नुकीले सिरों का मध्य जोड़ी से किनारों की ओर बढ़ना होता है।

भ्रूण के प्रोटोप्लाज्म और भ्रूण के हुक के संकुचन से भ्रूण को पहले ऑन्कोस्फीयर की झिल्लियों से और फिर अंडे के बाहरी आवरण से मुक्त होने में मदद मिलती है।

एक जीवित अंडे में, मध्य जोड़ी और हुक के पार्श्व जोड़े समानांतर स्थित होते हैं; कुछ अंडों में, पार्श्व जोड़े के ब्लेड एक साथ करीब होते हैं और हुक की मध्य जोड़ी के संबंध में 45 डिग्री से कम के कोण पर स्थित होते हैं।

मरता हुआ भ्रूण ऐंठन से सिकुड़ता है और धीरे-धीरे हुकों को अलग कर देता है। मृत भ्रूण में, हुक की गति रुक ​​जाती है, और वे अव्यवस्थित रूप से स्थित होते हैं; कभी-कभी आसन्न जोड़ी के पार्श्व हुक एक समकोण, अधिक या तीव्र कोण पर अलग हो जाते हैं।

कभी-कभी भ्रूण में झुर्रियाँ पड़ना और दाने का बनना देखा जाता है। एक अधिक सटीक विधि तापमान में तेज बदलाव के दौरान ऑन्कोस्फियर के आंदोलनों की उपस्थिति पर आधारित है: 5-10 से 38-40 डिग्री सेल्सियस तक।

अपरिपक्व नेमाटोड की व्यवहार्यता का निर्धारण एक आर्द्र कक्ष (पेट्री डिश) में किया जाना चाहिए, 24-30 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान में तैयार 3% फॉर्मेल्डिहाइड समाधान में राउंडवॉर्म अंडे रखकर, 3 में व्हिपवर्म अंडे रखें। % समाधान हाइड्रोक्लोरिक एसिड का 30-35 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर, पिनवर्म अंडों को 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल में डालें। बेहतर वातायन के लिए पेट्री डिश को सप्ताह में 1-3 बार खोलना चाहिए और फिल्टर पेपर को साफ पानी से दोबारा गीला करना चाहिए।

हेल्मिंथ अंडों के विकास का अवलोकन सप्ताह में कम से कम 2 बार किया जाता है। 2-3 महीनों के भीतर विकास के संकेतों की अनुपस्थिति उनकी अव्यवहार्यता को इंगित करती है। हेल्मिंथ अंडों के विकास के लक्षण सबसे पहले अंडे की सामग्री को अलग-अलग ब्लास्टोमेरेस में विभाजित करने, कुचलने के चरण हैं। पहले दिन के दौरान, 16 ब्लास्टोमेर विकसित होते हैं, जो दूसरे चरण - मोरुला, आदि में चले जाते हैं।

हुकवर्म अंडों को एक डाट से बंद कांच के सिलेंडर (50 सेमी ऊंचे और 7 सेमी व्यास) में संवर्धित किया जाता है। बाँझ रेत की समान मात्रा का मिश्रण, लकड़ी का कोयलाऔर हुकवर्म अंडे के साथ मल, अर्ध-तरल स्थिरता के लिए पानी से पतला, एक ग्लास ट्यूब का उपयोग करके सिलेंडर के तल पर सावधानीपूर्वक डाला जाता है। 25-30 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर अंधेरे में बसने के 1-2 दिनों के दौरान, अंडों से रबडीटिफॉर्म लार्वा निकलते हैं, और 5-7 दिनों के बाद वे फिलारिफॉर्म बन जाते हैं: लार्वा सिलेंडर की दीवारों पर रेंगते हैं, जहां वे होते हैं नग्न आंखों से भी दिखाई देता है. ट्रैपेटोड्स के अंडे, जैसे कि ओपिसथोरकिड्स, डिफाइलोबोथ्रिड्स, फासिओले, आदि, जो स्वाभाविक रूप से पानी में विकसित होते हैं, एक वॉच ग्लास, पेट्री डिश या किसी अन्य बर्तन में रखे जाते हैं, और साधारण पानी की एक छोटी परत डाली जाती है। फासिओला अंडों की खेती करते समय इस बात का ध्यान रखना चाहिए कि वे अंधेरे में तेजी से विकसित होते हैं, जबकि मिरासिडियम जीवित अंडों में 9-12 दिनों के बाद 22-24 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर बनता है। जब ट्रेमेटोड अंडों को विकसित करने वाली सूक्ष्मदर्शी से जांच की जाती है, तो मिरासिडियम की गतिविधियां स्पष्ट रूप से दिखाई देती हैं। मिरासिडियम फासिओला केवल प्रकाश में ही अंडे के छिलके से निकलता है। खेती के दौरान 2-3 दिनों के बाद पानी बदल दिया जाता है।

हुकवर्म और स्ट्रॉन्गिलॉइड लार्वा को जानवरों के कोयले के साथ पेट्री डिश में आगर पर संवर्धित किया जाता है। 5-6 दिनों के लिए 26-30 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर थर्मोस्टेट में रहने के बाद, लार्वा बैक्टीरिया (फुलबॉर्न विधि) का एक मार्ग छोड़कर, आगर में रेंगते हैं।

हरदा और मोरी की विधि (1955)। एक रैक में रखी टेस्ट ट्यूब में 7 मिलीलीटर आसुत जल डालें। एक लकड़ी की छड़ी का उपयोग करके, 0.5 ग्राम मल लें और बाएं किनारे से 5 सेमी की दूरी पर फिल्टर पेपर (15X150 मिमी) पर एक धब्बा बनाएं (प्रयोगशाला बेंच की सतह की रक्षा के लिए यह ऑपरेशन कागज की एक शीट पर किया जाता है)। फिर स्मीयर वाली पट्टी को टेस्ट ट्यूब में डाला जाता है ताकि स्मीयर से मुक्त बायां सिरा टेस्ट ट्यूब के नीचे तक पहुंच जाए। ऊपरी सिरे को सिलोफ़न के एक टुकड़े से ढका जाता है और एक इलास्टिक बैंड से कसकर लपेटा जाता है। जिस व्यक्ति की जांच की जा रही है उसका नंबर और उपनाम टेस्ट ट्यूब पर लिखा होता है। इस अवस्था में, ट्यूबों को 28 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 8-10 दिनों के लिए संग्रहीत किया जाता है। संस्कृति का अध्ययन करने के लिए, सिलोफ़न कवर हटा दें और चिमटी से फ़िल्टर पेपर की एक पट्टी हटा दें। ऐसा करते समय सावधानी बरतनी चाहिए क्योंकि छोटी संख्या में संक्रामक लार्वा फिल्टर पेपर के ऊपरी सिरे या ट्यूब के किनारे तक जा सकते हैं और सिलोफ़न की सतह के नीचे घुस सकते हैं।

ट्यूबों को 15 मिनट के लिए 50 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर गर्म पानी के स्नान में रखा जाता है, जिसके बाद उनकी सामग्री को हिलाया जाता है और लार्वा को तलछट करने के लिए तुरंत 15 मिलीलीटर टेस्ट ट्यूब में डाला जाता है। सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद, सतह पर तैरनेवाला हटा दिया जाता है, और तलछट को एक ग्लास स्लाइड में स्थानांतरित कर दिया जाता है, एक कवरस्लिप के साथ कवर किया जाता है, और कम आवर्धन के तहत सूक्ष्मदर्शी से जांच की जाती है।

फ़ाइलारिफ़ॉर्म लार्वा के विभेदक निदान के लिए, तालिका में प्रस्तुत डेटा का उपयोग करना आवश्यक है। 13.

हेल्मिंथ अंडे और लार्वा को धुंधला करने के तरीके। अधिकांश मामलों में मृत ऊतक जीवित ऊतकों की तुलना में रंगों को अधिक तेजी से समझते हैं। इन विशेषताओं का उपयोग हेल्मिन्थोलॉजी में हेल्मिन्थ अंडे और लार्वा की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए किया जाता है। हालाँकि, कुछ मामलों में, कुछ पेंट मृत ऊतकों की तुलना में जीवित ऊतकों द्वारा बेहतर समझे जाते हैं।

तालिका 13. क्रमानुसार रोग का निदान A.duodenale, N.americanus, स्ट्रांगाइलोइड्स स्टर्कोरेलिस, ट्राइकोस्ट्रॉन्गिलस एसपीपी के फाइलर के आकार के लार्वा।

जीवित और मृत अंडों और लार्वा की अलग-अलग पहचान के लिए निम्नलिखित पेंट और विधियों का उपयोग किया जाता है।

ल्यूकोबेस मेथिलीन ब्लू का उपयोग जीवित और मृत ऊतकों को दागने के लिए किया जाता है। एक जीवित कोशिका या ऊतक मेथिलीन ब्लू को रंगहीन ल्यूकोबेस में बदल देता है; मृत ऊतक में यह क्षमता नहीं होती है, इसलिए यह रंग प्राप्त कर लेता है।

राउंडवॉर्म अंडों को रंगने के लिए, आप कास्टिक क्षार (0.05 ग्राम मेथिलीन ब्लू, 0.5 ग्राम सोडियम हाइड्रॉक्साइड, 15 मिली लैक्टिक एसिड) के साथ लैक्टिक एसिड के घोल में मेथिलीन ब्लू का उपयोग कर सकते हैं। जीवित अंडे रंग नहीं पहचान पाते, मृत अंडों के भ्रूण नीले पड़ जाते हैं।

धुंधला करने की विधि राउंडवॉर्म और व्हिपवर्म के अपरिपक्व अंडों पर लागू नहीं होती है; रंजित खोल दागदार है, और इसलिए यह दिखाई नहीं देता है कि अंडे के अंदर रोगाणु कोशिका रंगीन है या नहीं।

एस्केरिस लार्वा को 1:10 000 की सांद्रता पर ब्रिलियंटक्रेसिल ब्लू पेंट के मूल घोल से रंगा जाता है। इस अनुसार: राउंडवॉर्म अंडे के साथ तरल की एक बूंद और मुख्य पेंट समाधान की एक बूंद को कांच की स्लाइड पर लगाया जाता है। तैयारी को एक कवरस्लिप के साथ कवर किया जाता है, जिसे एक विच्छेदन सुई के साथ हल्के से टैप करते हुए नमूने पर कसकर दबाया जाता है। उभरते हुए लार्वा की संख्या और उनके धुंधला होने की डिग्री को माइक्रोस्कोप के नीचे देखा जाता है, जिसके बाद 2-3 घंटों के बाद उसी तैयारी की फिर से जांच की जाती है। केवल विकृत लार्वा जो 2 घंटे तक दाग न लगे हों, उन्हें जीवित माना जाता है। मृत लार्वा को तब दाग दिया जाता है जब खोल टूट जाता है (आंशिक रूप से या पूरी तरह से)।

एवियन राउंडवॉर्म अंडे की व्यवहार्यता का निर्धारण करते समय आयोडीन समाधान के साथ धुंधला तैयारी की संभावना का संकेत दिया जाता है। इस मामले में, आयोडीन के 5% अल्कोहल समाधान का उपयोग डाई के रूप में किया जाता है। जब इसे तैयारी में लगाया जाता है, तो मृत एस्केरिडिया अंडों के भ्रूण 1-3 सेकंड के भीतर नारंगी हो जाते हैं। ओपिसथोर्चिस के मृत अंडे और गोजातीय टेपवर्म के ओंकोस्फीयर को टोलुइडीन ब्लू (1:1000) के घोल से रंगा जाता है, और गोजातीय टेपवर्म के मृत ओंकोस्फियर को ब्रिलियंट क्रेसिल ब्लू (1:10,000) के घोल से रंगा जाता है। इसी समय, मृत और जीवित दोनों अंडों के भ्रूण और खोल रंग प्राप्त कर लेते हैं। इसलिए, धुंधला होने के बाद, अंडे और ओंकोस्फीयर को धोया जाता है साफ पानीऔर इसके अतिरिक्त सैफ्रानिन से सना हुआ (10% अल्कोहल घोल में 1:10,000 पतला)। अल्कोहल सीपियों से रंग हटा देता है और सैफ्रानिन उन्हें लाल रंग देता है। परिणामस्वरूप, जीवित अंडे लाल हो जाते हैं, मृत अंडे का भ्रूण नीला हो जाता है और खोल लाल ही रहता है। गोजातीय टेपवर्म ओंकोस्फीयर के मृत भ्रूणों को कुछ ही मिनटों में जल्दी ही सफ्रानिन के साथ चमकीले लाल या गुलाबी रंग में रंग दिया जाता है या 1:4000 के तनुकरण पर शानदार क्रेसिल नीले रंग के साथ नीला या 1:1000-1:2000 के तनुकरण पर इंडिगो कारमाइन के साथ रंग दिया जाता है।

इन रंगों के प्रभाव में जीवित भ्रूण 2-7 घंटे के बाद भी नहीं बदलते हैं।

बौने टेपवर्म अंडों की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए, निम्नलिखित पेंट का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है: 1) ब्रिलियंट क्रेसिल ब्लू (1:8000) - 1 घंटे के बाद, मृत अंडों का ऑन्कोस्फियर विशेष रूप से चमकीले रंग का हो जाता है, जो पीले रंग के मुकाबले तेजी से खड़ा होता है। या अंडे के बाकी हिस्से की रंगहीन पृष्ठभूमि; 2) सेफ्रानिन: 2 घंटे के लिए एक्सपोज़र के साथ 1:8000 पतला और 3-5 घंटे के लिए 1:5000; 3) 1:2 के तनुकरण में पाइरोगेलिक एसिड का 50% घोल - 29-30 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 1 घंटे के लिए उजागर होने पर (तापमान जितना कम होगा, रंगाई प्रक्रिया उतनी ही लंबी होगी)।

टेपवर्म के जीवित प्लेरोसेरकोइड को 5-20 मिनट के लिए न्यूट्रलरोट के जलीय घोल (1:1000) से बहुत अच्छी तरह से रंग दिया जाता है। एक स्थायी गुलाबी रंग प्राप्त करने के लिए जो 5 दिनों के भीतर गायब नहीं होता है और प्लेरोसेरकोइड की गतिशीलता को प्रभावित नहीं करता है, आमतौर पर 10 मिनट पर्याप्त होते हैं। रंग की डिग्री को शुद्ध आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान में लार्वा को देखकर नियंत्रित किया जाता है, जिसके लिए प्लेरोसेरकोइड को समय-समय पर पेंट से हटा दिया जाता है। मृत प्लेरोसेरकोइड को दागने के लिए मेथिलीन ब्लू का उपयोग करने की सलाह दी जाती है।

आर.ई. चोबानोव एट अल. (1986) ने "रूब्रिन" रंगद्रव्य का उपयोग करके हेल्मिंथ अंडे और लार्वा की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए एक विधि प्रस्तावित की, जो डाई के रूप में मोल्ड पेनिसिलियम रूब्रम की खेती से प्राप्त होता है। ऐसा करने के लिए, 3% जलीय डाई घोल का उपयोग करें।

अंडे और लार्वा को रंगने की प्रक्रिया 1.5 घंटे के बाद पूरी हो जाती है। पिनवर्म, गोजातीय और बौना टेपवर्म, हुकवर्म, ट्राइकोस्ट्रॉन्गिलिड के अव्यवहार्य अंडे गहरे गुलाबी रंग के हो जाते हैं, हुकवर्म और ट्राइकोस्ट्रॉन्गिलिड लार्वा लाल हो जाते हैं। राउंडवॉर्म और व्हिपवर्म के अंडों में कम चमकीला रंग देखा जाता है, क्योंकि, जब आंतों से निकलते हैं, तो उनका रंग पहले से ही गहरा भूरा होता है: व्यवहार्य अंडे और लार्वा रंगीन नहीं होते हैं।

ट्रेमेटोड अंडों से मिराकुलिड की रिहाई को उत्तेजित करने के लिए भौतिक-रासायनिक तरीके। एस.एम. जर्मन और एस.ए. बीयर (1984) द्वारा अंडों को एक प्रतिक्रिया माध्यम में उजागर करके ओपिसथोरचिड और डाइक्रोसेलियम अंडों की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए तरीके विकसित किए गए थे। यदि वे जीवित हैं, तो मिरासीडियम निकल जाता है। विधियाँ मिरासिडियम हैचिंग ग्रंथि के भौतिक रासायनिक सक्रियण और उत्तेजना पर आधारित हैं मोटर गतिविधिलार्वा. अनुक्रमिक तकनीकों के संयोजन में ट्रेमेटोड अंडों को एक विशेष प्रतिक्रिया माध्यम में उजागर करके उत्तेजना प्राप्त की जाती है - तापमान में अंतर पैदा करना, अंडों के निलंबन को सुखाना, परीक्षण ड्रॉप में तरल के कमजोर प्रवाह के संपर्क में आना, जो मिरासिडिया की बड़े पैमाने पर रिहाई में योगदान देता है अंडे।

हरमन और बीयर की विधि का उपयोग करके ओपिसथोरचिड अंडों की व्यवहार्यता का निर्धारण। पानी में अंडे का एक निलंबन (नल, बसे) 10-12 डिग्री सेल्सियस तक पहले से ठंडा किया जाता है। बाद के सभी ऑपरेशन कमरे के तापमान (18-22 डिग्री सेल्सियस) पर किए जाते हैं। 100-400 अंडों वाले सस्पेंशन की एक बूंद (लगभग 0.05 मिली) एक सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में डाली जाती है। अंडों को तलछट करने के लिए ट्यूबों को 5-10 मिनट के लिए रैक में रखा जाता है। तब संकरी पट्टीफ़िल्टर पेपर का उपयोग करके, अतिरिक्त पानी को सावधानीपूर्वक तब तक सोखें जब तक कि वह पूरी तरह से निकल न जाए। टेस्ट ट्यूब में माध्यम की 2 बूंदें डालें, हिलाएं, एक पिपेट के साथ सामग्री को एक ग्लास स्लाइड पर स्थानांतरित करें और 5-10 मिनट के लिए छोड़ दें, थोड़ा हिलाएं (या हेअर ड्रायर के नीचे रखें) ताकि सस्पेंशन के टेस्ट ड्रॉप में कमजोर तरल धाराएं बन सकें। . यह ऑपरेशन, जो मोलस्क आंत के क्रमाकुंचन का अनुकरण करता है, मिरासिडिया की रिहाई को सक्रिय करने की अनुमति देता है। इसके बाद, माध्यम की 2 और बूंदों को निलंबन में जोड़ा जाता है और फिर एक पारंपरिक प्रकाश माइक्रोस्कोप (X200) का उपयोग करके तैयारी को माइक्रोस्कोप किया जाता है। इस समय के दौरान, व्यवहार्य मिरासिडियम वाले अंडों का ढक्कन खुल जाना चाहिए, और लार्वा सक्रिय रूप से पर्यावरण में उभर आता है। इसमें इथेनॉल की उपस्थिति के कारण, मिरासिडियम को 3-5 मिनट के बाद स्थिर कर दिया जाता है, और फिर माध्यम में पाए जाने वाले डाई से रंग दिया जाता है। परिणामस्वरूप, मिरासिडिया का आसानी से पता लगाया और गिना जा सकता है।

प्रतिक्रिया माध्यम की तैयारी. माध्यम को 0.05 एम ट्रिस-एचसीआई बफर में 8.0-9.5 की इष्टतम पीएच स्थितियों पर तैयार किया जाता है। इथेनॉल को बफर में 10-13% और एक डाई (सैफ्रानिन, मेथिलीन ब्लू और अन्य जो पीएच रेंज के भीतर काम करते हैं) मिलाया जाता है। कमजोर धुंधलापनतरल (उदाहरण के लिए, सफ्रानिन के लिए इसकी अंतिम सांद्रता 1:50,000 होगी)। आप किसी अन्य बफर का उपयोग कर सकते हैं जो क्षारीय पीएच सीमा में काम करता है, उदाहरण के लिए 0.05 एम फॉस्फेट (पीएच 8.5)। इसलिए, माध्यम में 96% इथेनॉल होता है - 12 भाग; डाई (मदर सॉल्यूशन) - 1-10 भाग; 0.05 एम ट्रिस-एनएस! बफर (पीएच 8.5-9.5) - 100 भागों तक। माध्यम का उदाहरण: 96% इथेनॉल के 12 भाग, संतृप्त सफ़्रैनिन समाधान का 1 भाग, शेष 100 भागों तक - 0.05 एम ट्रिस-एचसीएल बफर, पीएच 9.5।

हरमन, बीयर, स्ट्रैटन की विधि का उपयोग करके डाइक्रोसेलियम अंडे की व्यवहार्यता का निर्धारण। 100-150 ट्रेमेटोड अंडों वाले सस्पेंशन की एक बूंद को अंडों को तलछट करने के लिए 1-2 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में रखा जाता है। फिर तरल को फिल्टर पेपर की एक पट्टी का उपयोग करके सावधानीपूर्वक सुखाया जाता है। पाश्चर पिपेट का उपयोग करके प्रतिक्रिया माध्यम की 1-2 बूंदें डालें और 2-3 मिनट के लिए 28-30 डिग्री सेल्सियस पर पानी के स्नान में रखें। मध्यम संरचना: ब्यूटेनॉल के 6 भाग, 0.4% सोडियम क्लोराइड घोल के 94 भाग या आसुत जल में 0.3% पोटेशियम क्लोराइड घोल। माध्यम में अंडे को एक पिपेट के साथ एक ग्लास स्लाइड पर स्थानांतरित किया जाता है और कमरे के तापमान (18-22 डिग्री सेल्सियस) पर 1.5-2 घंटे के लिए छोड़ दिया जाता है, हर 25-30 मिनट में 1-2 बूंदें (0.05) डाली जाती हैं (जैसे ही वे सूख जाते हैं) ) आसुत जल में ब्यूटेनॉल घोल का एमएल)। इसके बाद, तैयारी की जांच माइक्रोस्कोप के तहत 100-200x आवर्धन पर की जाती है। व्यवहार्यता मिरासिडिया जारी किए गए खुले अंडों की संख्या से निर्धारित होती है। ब्यूटेनॉल अंडे के छिलके के छिद्रों में प्रवेश करता है, मिरासिडिया तक पहुंचता है और उन्हें सक्रिय करता है। निर्धारित तापमान पर ऊष्मायन इस प्रक्रिया को बढ़ाता है। 3-7% की सांद्रता में ब्यूटेनॉल अंडे से निकलने वाले मिरासिडियम के लिए हानिकारक है। एक टेस्ट ट्यूब से अंडे के सस्पेंशन को एक ग्लास स्लाइड में स्थानांतरित करने से, जब तक मिरासिडियम जारी होता है (30-40 मिनट के बाद), अस्थिरता के कारण ब्यूटेनॉल की एकाग्रता को एक सुरक्षित स्तर (1.5-0.5%) तक कम करने की अनुमति मिलती है। माध्यम में 0.1-0.5% (या 0.05-0.4% की सांद्रता पर पोटेशियम क्लोराइड) की सांद्रता में सोडियम क्लोराइड की उपस्थिति जारी मिरासिडियम की गतिविधि को निर्धारित करती है। ओपिसथोर्च के छोटे पारदर्शी अंडों के विपरीत, डाइक्रोसेलियम अंडों में एक गहरे रंग का खोल होता है; उनके पास एक स्पष्ट रूप से दिखाई देने वाली टोपी होती है, जो मिरासिडियम के उभरने के बाद खुलती है। इसलिए, मिरासिडिया को दागने और गिनने के बजाय खुले हुए अंडों की गिनती करके डाइक्रोसेलियम अंडों की व्यवहार्यता का आकलन करना अधिक सुविधाजनक है।

हेल्मिंथ अंडे और लार्वा का अध्ययन करने के लिए ल्यूमिनसेंट विधि।

हेल्मिन्थोलॉजिकल अभ्यास में पहली बार, फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी विधियों का उपयोग 1955 में किया गया था। यह बताया गया था कि फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी अंडे को नुकसान पहुंचाए बिना जीवित और मृत वस्तुओं को अलग करना संभव बनाता है। प्रतिदीप्ति के लिए, यूवी किरणों का नहीं, बल्कि पारंपरिक माइक्रोस्कोप और ग्लास स्लाइड के साथ दृश्य प्रकाश के नीले-बैंगनी हिस्से का उपयोग किया गया था; OI-18 इलुमिनेटर पर लागू किया गया विशेष सेटरंग फिल्टर.

यह पाया गया कि राउंडवॉर्म, पिनवॉर्म, बौना टेपवर्म, बोवाइन टेपवर्म, ब्रॉड टेपवर्म और अन्य हेल्मिंथ के जीवित और मृत अंडे अलग-अलग तरह से फ्लोरोसेंट होते हैं। यह घटना रंगों के उपयोग के बिना प्राथमिक ल्यूमिनेसेंस के दौरान और फ्लोरोक्रोम (एक्रिडीन ऑरेंज, कोरिफोस्फीन, प्रिमुलिन, ऑरोलिन, बेर्लेरिन सल्फेट, ट्रिपाफ्लेविन, रिवानॉल, क्विनिन, आदि) के साथ दागने पर देखी जाती है।

बिना रंग वाले, सजीव, खंडित राउंडवॉर्म अंडे पीले रंग की टिंट के साथ चमकीले हरे रंग में चमकते हैं; मृत अंडों में खोल विकिरण करता है हरी बत्तीगहरे हरे रोगाणु की तुलना में बहुत अधिक चमकीला; लार्वा वाले राउंडवॉर्म अंडों में, केवल खोल दिखाई देता है, और मृत अंडों में, खोल और लार्वा दोनों चमकीले पीले होते हैं।

पिनवर्म और बौने टेपवर्म के अप्रकाशित और अखंडित जीवित अंडे हरी-पीली रोशनी उत्सर्जित करते हैं; मृत अंडों में, खोल गहरे हरे रंग के भ्रूण द्रव्यमान की पृष्ठभूमि के खिलाफ तीव्रता से चमकता है। द्वितीयक चमक के साथ (जब 30 मिनट से 2 घंटे तक 1:10,000 और 1:50,000 के तनुकरण पर एक्रिडीन ऑरेंज से रंगा जाता है), जीवित और मृत नेमाटोड, ट्रेमेटोड और सेस्टोड के खोल अलग-अलग तरह से चमकते हैं।

जीवित और मृत एस्केरिस लुम्ब्रिकोइड्स, टोक्सोकारा लियोनिना, एंटरोबियस वर्मीक्यूलिस, हाइमेनोलेपिस नाना, एच.फ्रेटरना, एच. डिमिनुटा, टी.सागिनैटस, डी.लैटम का खोल नारंगी-लाल रंग का होता है। जीवित Asc के भ्रूण. लुम्ब्रिकोइड्स, टी.लियोनिना, एच.डिमिनुटा, डी.लैटम और बोवाइन टेपवर्म ऑन्कोस्फीयर हल्के गहरे हरे या भूरे-हरे रंग में फ्लोरोसेंट होते हैं। इन कृमि अंडों के मृत भ्रूण एक "जलती हुई" नारंगी-लाल रोशनी उत्सर्जित करते हैं। पिनवॉर्म और टोक्सोकारा (अंडे के छिलके मुक्त) के जीवित लार्वा एक मंद भूरे-हरे रंग की रोशनी उत्सर्जित करते हैं; जब वे मर जाते हैं, तो सिर के अंत से रंग बदलकर "जलता हुआ" हल्का हरा, फिर पीला, नारंगी और अंत में, उज्ज्वल नारंगी हो जाता है।

जब फ्लोरोक्रोम - कोरिफोस्फिलस, प्रिमुलिन - से रंगा जाता है तो राउंडवॉर्म और व्हिपवर्म के मृत अंडे बकाइन-पीले से तांबे-लाल तक चमक दिखाते हैं। व्यवहार्य अंडे चमकते नहीं हैं, लेकिन गहरे हरे रंग में रंगे जाते हैं। ट्रेमेटोड्स पैरागोनिमस वेस्टरमनी और क्लोनोरचिस साइनेंसिस के जीवित अंडे एक्रिडीन नारंगी रंग से रंगे जाने पर चमकते नहीं हैं, लेकिन मृत अंडे पीले-हरे रंग की रोशनी उत्सर्जित करते हैं।

हेल्मिंथ लार्वा की व्यवहार्यता निर्धारित करने के लिए ल्यूमिनसेंस विधि का भी उपयोग किया जा सकता है। इस प्रकार, स्ट्रांगाइलेट और रबडिटैटस लार्वा फ्लोरोक्रोम एक्रिडीन ऑरेंज (1:2000) के घोल से चमकते हैं: जीवित - हरे (एक टिंट के साथ), मृत - एक उज्ज्वल नारंगी रोशनी के साथ। फ्लोरेसिन आइसोथियोसाइनेट, ऑरामाइन आदि के घोल से 10 मिनट तक उपचारित करने पर जीवित ट्राइचिनेला लार्वा चमकते नहीं हैं या कमजोर चमक देते हैं। फ्लोरोक्रोमेड मृत लार्वा (1:5000 की सांद्रता पर) चमकदार चमक देते हैं।

खोल से निकलने वाले जीवित मिरासिडिया सिलिया के बमुश्किल ध्यान देने योग्य हल्के पीले कोरोला के साथ एक मंद नीली रोशनी उत्सर्जित करते हैं, लेकिन मृत्यु के 10-15 मिनट बाद वे चमकदार "जलती हुई" हल्के हरे और फिर नारंगी-लाल रोशनी के साथ दिखाई देते हैं।