Estructura cristalina de la saliva. mantener la salud dental

Capítulo 2. Problemas actuales en el diagnóstico y seguimiento de la eficacia del tratamiento de la úlcera duodenal. Características de la cristalografía de saliva en patología gastroduodenal (revisión de la literatura).

2.1 Determinación instrumental de un defecto mucoso en la úlcera duodenal.

2.2 Diagnóstico morfológico de la fase de inflamación en la úlcera duodenal.

2.3 Estado actual Diagnóstico de infección por Helicobacter pylori.

2.4 Posibilidades de utilizar la cristalografía de saliva en el diagnóstico y evaluación de la eficacia del tratamiento de la enfermedad ulcerosa péptica.

Capítulo 3. Alcance y métodos de la investigación.

Capítulo 4. Características del cuadro cristalográfico de la saliva en la úlcera duodenal.

Capítulo 5. Discusión de los resultados de la investigación.

Capítulo 6. Conclusiones.

Introducción de la tesis (parte del resumen) sobre el tema "Cristalografía de saliva en el diagnóstico y seguimiento de la eficacia del tratamiento de la úlcera duodenal"

Lista de referencias para la investigación de tesis. Candidato de Ciencias Médicas Vorobyov, Alexander Viktorovich, 2004

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TRABAJO DE CALIFICACIÓN DE POSGRADO
"Uso de cristaloscopia para identificar leucemia aguda en ratones AKR"

Introducción................................................. ....... ................................... 3
Capítulo I. Revisión de la literatura................................................. ....... ................ 3
1.1 Cristalografía de fluidos biológicos................................. 6
1.1.1 Conceptos básicos del estado cristalino de la materia.......... 6
1.1.2 Procesos de cristalización en sistemas vivos................................. 8
1.1.3 Características cristalográficas de los fluidos biológicos... 8
1.1.4 Morfología de los fluidos biológicos................................. 8
1.2 Métodos de investigación cristalográfica................................. 12
1.2.1 Requisitos previos para estudiar el fenómeno de la cristalización de fluidos biológicos.................................... ............. ............. 12
1.2.2 Estado actual de las ideas sobre los métodos de investigación cristalográfica.................... ............. ........................ 18
1.2.2.1 Características generales de la técnica de tesiocristaloscopia de sustratos biológicos.................................... ............. ................. 25
2. Objetos, fines y métodos de investigación................................................. .......... 26
2.1 Metas, objetivos y etapas del estudio................................. .......... 26
2.2 Preparación de platos y zona de trabajo.................................... ...... 28
2.3 Métodos de investigación aplicados................................................ ...... 28
2.3.1 Procedimiento de prueba de tesiocristaloscopia................................ 28
2.4 Procesamiento de datos estadísticos................................................ ...... 43
3. Resultados de la investigación................................................ ......... 44
3.1 Morfología de la orina de ratones sanos e infectados artificialmente con leucemia................................. ............................................................ 44
3.2 Los principales criterios para evaluar la facies tesigráfica de la orina en ratones en condiciones normales y con patología (leucemia)................... ....... .......... 46
3.3 Ratones de la línea AKR................................................ ........ ................ 49
3.4.Dinámica del desarrollo de la leucemia................................................ ...... ... 50
3.5 Conclusiones................................................ ... ...........................
Lista de literatura usada................................................ ..... 52

Introducción

Las biotecnologías modernas son una síntesis de los logros científicos en diversos campos de las ciencias naturales: medicina, biología, matemáticas, física, química y otras ciencias. Zh. Alferov, premio Nobel de Física, señaló que en los últimos años sus alumnos obtuvieron resultados especialmente significativos en el trabajo realizado en la intersección de la física y la biología, la física y la medicina. Un ejemplo de esto es el enfoque para resolver el problema social moderno más acuciante: el diagnóstico y tratamiento eficaz de las enfermedades malignas. Cada año, muchos millones de niños y personas mayores, así como animales de granja de gran valor, mueren a causa de la leucemia. En todo el mundo, las tecnologías para el desarrollo y tratamiento de la leucemia en humanos se estudian en animales de una línea genética estrictamente definida. Desde hace más de 10 años, la Institución Estatal Federal "KNIIG y PC FMBA de Rusia" lleva a cabo investigaciones sobre el desarrollo de la leucemia continua utilizando el modelo de ratón ACR. A pesar de los avances logrados en el campo de la leucemia experimental y clínica, el problema de la patología descrita está muy lejos de una solución definitiva.
En los últimos 40 años se ha desarrollado activamente una nueva dirección de diagnóstico: la cristaloscopia, basada en la determinación de la composición cualitativa de los fluidos biológicos mediante la formación de estructuras cristalinas en ellos.
Primera experiencia aplicacion clinica La cristalografía se remonta a principios de los años 60 del siglo pasado. Inicialmente, la mayoría de los investigadores utilizaron el método tesigráfico. En 1964, Daems realizó un estudio de cristalogramas sanguíneos de pacientes con hipertrofia y carcinoma de próstata. J.Leal y B.Finlayson (1977) establecieron las características de la formación de cristales en la orina.

A.A. Kozhinova y L.S. Maslennikova (1968). V.Ya. Neretin y V.I. Kiryakov (1977) utilizó este método para estudiar el líquido cefalorraquídeo de pacientes con diversas enfermedades del cerebro y la médula espinal. En el trabajo de D. B. Kalikshtein y otros (1981) se estudió la imagen tezigráfica de la orina de pacientes con diversas enfermedades renales. V.V. Usin (1995) estudió los cambios cristalográficos en el líquido cefalorraquídeo y la saliva en pacientes con síndromes de dolor neurogénico crónico de la cabeza y la cara. Además, la tesigrafía se utilizó con fines de diagnóstico y pronóstico en pediatría, ginecología, gastroenterología y otras áreas de la medicina.
Actualmente, el análisis cristaloscópico se utiliza para estudiar casi todos los fluidos biológicos (sangre, orina, saliva, líquido cefalorraquídeo, bilis, secreciones nasales, etc.). Las estructuras cristalinas de los fluidos biológicos contienen la información más importante sobre el estado de un órgano en particular, un sistema separado del cuerpo y el cuerpo en su conjunto.
Actualmente, el interés de los científicos por utilizar el método de cristalografía de fluidos biológicos en medicina sigue siendo alto. Así, se han desarrollado y puesto en práctica numerosas técnicas de diagnóstico para facilitar el estudio de una amplia gama de características de los biosustratos (ensayos bioquímicos, inmunológicos, morfológicos, biofísicos, etc.). El punto débil de la mayoría de los métodos enumerados es su alto costo debido a la utilización de reactivos, equipos costosos y la capacitación de personal altamente calificado. Todo lo anterior requiere el mantenimiento y mantenimiento de una cantidad suficientemente grande de servicios de soporte.
Sin embargo, las condiciones económicas cambiantes requieren el desarrollo y la implementación de métodos altamente eficaces y rentables para diagnosticar la leucemia.
El método cristaloscópico tiene una sensibilidad diagnóstica significativa y, por lo tanto, ha encontrado una amplia aplicación, primero en la práctica del análisis químico forense y luego en la medicina. Permitió ampliar las capacidades de diagnóstico diferencial para determinar la naturaleza del proceso patológico (alérgico, inflamatorio, etc.), para identificar la presencia de anemia, edema, intoxicación y el grado de su gravedad. Utilizando el método de cristalografía de biopolímeros, es posible determinar la patología. varios órganos. Dado que esta técnica implica la combinación de partículas de material con una solución formadora de cristales, la naturaleza del proceso maligno se puede juzgar a partir del patrón formado de cristales (Kontorschikova K.N. et al. (2002-2012).
El propósito de esta tesis fue desarrollar un método de análisis cristaloscópico de orina de ratones AKR para el diagnóstico de leucemia aguda.

1 Revisión de la literatura.
1.1 Cristalografía de fluidos biológicos.

El término "cristal" proviene de la palabra griega "krystallos", que significa "hielo". En un cristal, los átomos y las moléculas forman una estructura ordenada (red cristalina). Los cristales son importantes tanto en la naturaleza viva como inanimada, lo que sirvió de base para la identificación de una rama independiente: la cristalografía. La cristalografía es la ciencia de la estructura y propiedades físicas de monocristales y agregados cristalinos, fenómenos que ocurren en un medio cristalino bajo la influencia de propiedades internas o influencias externas.

1.1.1 Conceptos básicos del estado cristalino de la materia

Los cristales se forman a partir de vapor, solución, masa fundida, sustancia amorfa o de una sustancia en otro estado físico. La cristalización comienza bajo ciertas condiciones externas, por ejemplo, sobreenfriamiento del líquido, sobresaturación del vapor, deshidratación de la solución, cuando aparecen gradualmente muchos cristales pequeños alrededor de los centros de cristalización. Un cristal crece agregando átomos o moléculas de un líquido o vapor.
Hay equilibrio y formas reales de cristales. La forma de equilibrio de los cristales se logra sólo en condiciones de equilibrio, es decir. con un proceso de cristalización infinitamente lento.
Desde los parámetros ambiente externo heterogéneo en el tiempo y el espacio, inevitablemente surgen varios defectos en la estructura cristalina. Por tanto, las formas reales (forzadas) de los cristales reflejan no sólo la simetría del cristal, sino también la influencia de las condiciones externas de crecimiento (la concentración de diversas sustancias en el entorno de formación del cristal, temperatura, presión, etc.) en cualquier cambio en que los cristales reaccionan muy sensiblemente. Algunas formas de cristales se muestran en la Fig. 1.

A b V

GRAMO d mi

y h Y

Fig. 1 Formas de cristales en varios fluidos biológicos: a, b - filiformes, c, d, e, f, g - formaciones de esferulita con agujas ubicadas radialmente; dendrita con supresión z; y – dendrita ramificada.
Lo más natural y técnico. materiales duros Son policristales, los monocristales se llaman monocristales. Cuando los metales y las sales cristalizan, a menudo se forman cristales en forma de árboles: dendritas. Durante la cristalización de uno o más centros, se forman esferulitas, que consisten en agujas cristalinas ubicadas radialmente.

1.1.2 Procesos de cristalización en sistemas vivos.

Todos los medios biológicos del cuerpo animal y humano tienen una estructura molecular ordenada específica, ya que son cristales líquidos liotrópicos. Un organismo vivo es un sistema complejo y altamente dinámico en el que ocurren constantemente procesos de interacción de muchos componentes estructurales entre sí y con el medio ambiente. En condiciones normales, las fluctuaciones en los parámetros biofísicos del cuerpo se limitan a límites relativamente estrechos. Sin embargo, en ciertas situaciones pueden ir más allá límites normales por suficiente un largo periodo. En algunos casos, esto se explica por la adaptación del cuerpo a nuevas condiciones de existencia inusuales, en otros, por una profunda alteración de la homeostasis con descompensación persistente. Estos procesos complejos y altamente dinámicos se reflejan claramente en las características de las estructuras cristalinas de diversos fluidos biológicos o biopolímeros.

1.1.3 Características cristalográficas de los fluidos biológicos.

Se sabe que los trastornos metabólicos, como componente de la patogénesis. varias enfermedades, conduce a un cambio composición química y propiedades fisicoquímicas de los fluidos biológicos (en lo sucesivo denominados biofluidos). Los complejos procesos dinámicos que ocurren en los biofluidos se reflejan en las características morfológicas de las estructuras formadas durante la cristalización de las muestras de biofluidos. Actualmente, se han desarrollado y utilizado en la práctica clínica métodos de diagnóstico originales basados ​​​​en el análisis estructural de fluidos biológicos. Las estructuras de la fase sólida de los fluidos biológicos están formadas por moléculas y, principalmente, microagregados de sustancias orgánicas y minerales disueltas en el fluido biológico. Las características específicas de las estructuras están determinadas por las propiedades fisicoquímicas generales del biofluido, la composición cuantitativa y cualitativa de las moléculas de estas sustancias y su capacidad para establecer enlaces químicos intramoleculares e intermoleculares. Como resultado, la estructura de los fluidos biológicos contiene información integral sobre el estado del metabolismo de los órganos del sujeto lavados por el biofluido y sobre la homeostasis del cuerpo en su conjunto.
La morfología de los fluidos biológicos está probada. dirección científica en el campo de la medicina, la veterinaria y otras ciencias. La formación de la estructura de un biofluido durante la cristalización tiene patrones claros.
La contaminación ambiental con diversas toxinas, entre las que los metales pesados ​​(HM) ocupan un lugar especial, provoca un aumento significativo de la probabilidad de padecer determinadas enfermedades, incluido el cáncer. La combinación del análisis morfológico de fluidos corporales con su análisis elemental local puede servir como una nueva herramienta analítica para la investigación en el campo del diagnóstico precoz del cáncer.
Los avances en la mejora del análisis microquímico, la óptica cristalina y la tesigrafía proporcionaron la base para estudiar las estructuras cristalinas de los fluidos biológicos de humanos y animales en diversas patologías. Los procesos cristalográficos en fluidos biológicos atraen cada vez más la atención de los científicos. Las investigaciones realizadas durante las últimas décadas se han centrado en identificar la relación entre las características cristalográficas de los biofluidos y el desarrollo de procesos patológicos en el organismo; o se propusieron la tarea de estudiar la influencia de influencias externas en la formación de estructuras cristalinas en biofluidos (Skopinov S.A. et al. 1997).
Así, en un fluido biológico se puede observar un complejo de reordenamientos estructurales desde solución hasta cristales. El análisis cristalográfico permite detectar cambios patológicos en la red cristalina a nivel supramolecular. Estos cambios pueden servir como criterio de diagnóstico temprano para el desarrollo de un proceso patológico.

1.1.4. Morfología de los fluidos biológicos.

El estudio de la imagen morfológica de diversos biofluidos es una dirección bien conocida en las ciencias naturales, a la que científicos de muchas disciplinas han comenzado a prestar especial atención en los últimos años. Actualmente, se ha desarrollado un método para obtener información sobre el estado del cuerpo, las funciones de los órganos y tejidos individuales en la etapa de expresión. manifestaciones clínicas enfermedades y en la etapa presintomática, es decir, a nivel de desarrollo de un proceso patológico de una naturaleza u otra (inflamatorio, oncológico, formación de cálculos, hipóxico-isquémico, esclerótico, etc.). El método de cristalografía de varios biopolímeros es sencillo en su técnica y registro de los resultados. investigado imagen morfológica Gota deshidratada (seca) de fluido biológico, que es una sección delgada estándar. Por ejemplo, al examinar una gota de orina, se puede determinar la actividad del proceso de formación de cálculos en el tejido renal y la composición de un cálculo renal existente o en desarrollo (urato, oxalato de calcio, fosfato de calcio); curso agudo o crónico de candidiasis del sistema genitourinario, daño hipóxico-isquémico al tejido renal y la gravedad del proceso (nefropatía hipóxica, nefritis intersticial, insuficiencia renal aguda, infarto renal); Infección bacteriana (sin determinar el tipo de patógeno).
Una gota de líquido biológico puede decir con qué está enferma una persona y cuál es su edad biológica. Se coloca una gota de líquido seco sobre el cristal de un microscopio real y en el monitor aparece una imagen ampliada muchas veces. "En una gota de saliva tomada con el estómago vacío, se ven grietas trirradiadas fraccionadas, esto es evidencia de estancamiento. Y en una gota tomada después del desayuno, no hay grietas, lo que significa que los conductos de las glándulas salivales están en orden. Pero la acidez del jugo gástrico se reduce ligeramente”, ahora hay una gota de suero sanguíneo en la pantalla, parece un botón con un borde y está cubierto de grietas radiales, la estructura de las grietas se somete a un análisis cuidadoso: el patrón en la periferia sugiere que la presión arterial del paciente aumenta ocasionalmente debido al vasoespasmo.
Profesor S.N. Shatokhina explica que el cuerpo se puede dividir en dos sistemas: celular y no celular. Todo el mundo estudia las células en primer lugar, sin embargo, los fluidos biológicos que conectan las células entre sí contienen mucha información sobre sus funciones vitales. Cuando una gota de biofluido se seca, la información codificada en ella se vuelve visible. "Durante la transición a un estado estable, la fuerza de los enlaces aumenta en dos órdenes de magnitud", explican los investigadores. "Después de eliminar el agua, queda una película en la que se dibuja un patrón de disposición espacial de los elementos que antes estaban en se registra un estado disuelto”, la enfermedad siempre va acompañada de la acumulación de algunas sustancias químicas, lo que cambia la estructura, se rompe la simetría, y aparecen esas mismas “lenguas”, “hojas” o “placas” que el profesor S.N. En el paciente encontraron a Shatokhina. Y para encontrar estos patrones, los investigadores desarrollaron un método especial para secar gotas. Una gota de saliva puede decirte mucho. Refleja caries y periodontitis. Y también, por ejemplo, la otitis purulenta, que provoca la aparición de formas laminares en una gota de saliva. Al analizar una gota de jugo gástrico, los especialistas identifican gastritis crónica y úlceras; líquido articular - artrosis; finalmente, lágrimas: glaucoma, cataratas, procesos inflamatorios en la retina.
Hoy en día, los científicos trabajan en estrecha colaboración con los médicos, ayudándolos a ver patologías ocultas y perfeccionar los métodos de tratamiento. Al analizar los biofluidos, los investigadores también pueden determinar la verdadera edad biológica de una persona. Es producido por estructuras laminares en el suero sanguíneo, que son colesterol por naturaleza química. A partir de ello se formará en el futuro. placas ateroscleróticas en embarcaciones. Este es uno de los "marcadores de envejecimiento" más importantes. Los científicos también evalúan el potencial mutuo de la salud; para esto, la sangre en un tubo de ensayo se irradia con un campo electromagnético o láser; después de dicha exposición, los enlaces intermoleculares se destruyen, por lo tanto, cuando dicha sangre se seca, el patrón de la película será diferente; en una persona sana, tarda cuatro horas en restablecer los vínculos después de la irradiación. Si tarda uno o tres días, debería preocuparse. Los investigadores creen que con este método es posible determinar si una persona es capaz de trabajar en condiciones extremas.

1.2 Métodos de investigación cristalográfica.
1.2.1 Requisitos previos para estudiar el fenómeno de la cristalización de fluidos biológicos.

En el último cuarto del siglo pasado, hubo un gran interés por parte de la comunidad científica en los métodos de investigación cristalográfica, estudiados en términos de su aplicación práctica como un enfoque alternativo en el diagnóstico clínico. Permiten una evaluación integral de la capacidad de cristalización de diversos sustratos biológicos. En los últimos años, ha comenzado a desarrollarse activamente una nueva dirección de diagnóstico: la cristalografía clínica, basada en la determinación de la composición cualitativa de un líquido mediante la formación de estructuras cristalinas.
El método de determinación cualitativa de sustancias químicas según sus características cristalográficas fue propuesto por primera vez por el estudiante M.V. Lomonósov - T.E. Lovitz. En 1804, este último describió dos métodos para el análisis cualitativo de sustancias: el método de los "depósitos de sal erosionados" y un método basado en cambiar la formación normal de cristales mediante la introducción de otro ingrediente en la solución de la sustancia cristalizada, sentando así las bases para dos áreas modernas de cristalografía:
1) cristalografía de líquidos nativos: un método basado en determinar la composición cualitativa de un líquido a partir de los cristales que se forman durante la evaporación;
2) tezigrafía: un método basado en agregar una solución estándar formadora de cristales al líquido de prueba y analizar los cambios en los cristales de la solución estándar en presencia del líquido de prueba.
La primera experiencia de aplicación clínica de la cristalografía se remonta a principios de los años 60 del siglo pasado. Inicialmente, la mayoría de los investigadores utilizaron el método tesigráfico. En 1964, Daems realizó un estudio de cristalogramas sanguíneos de pacientes con hipertrofia y carcinoma de próstata. Leal J. y Finlayson B. (1977) establecieron las características de la formación de cristales en la orina.
El uso de métodos de investigación cristalográfica (CRI) en la medicina doméstica se informó por primera vez en el trabajo.
Kozhinova A.A. y Maslennikova L.S. (1968). Neretin V.Ya. y Kiryakov V.I. (1977) este método se utilizó para estudiar el líquido cefalorraquídeo de pacientes con diversas enfermedades del cerebro y la médula espinal. En el trabajo de D. B. Kalikshtein y otros (1981) se estudió la imagen tezigráfica de la orina de pacientes con diversas enfermedades renales. Usando V.V. (1995) estudiaron los cambios cristalográficos en el líquido cefalorraquídeo y la saliva en pacientes con síndromes de dolor neurogénico crónico de cabeza y cara. Además, la tesigrafía se utilizó con fines de diagnóstico y pronóstico en pediatría, ginecología, gastroenterología y otras áreas de la medicina.
Actualmente, el análisis cristalográfico se utiliza para estudiar casi todos los fluidos biológicos (sangre, orina, saliva, líquido cefalorraquídeo, bilis, secreciones nasales, etc.). Las estructuras cristalinas de los fluidos biológicos contienen la información más importante sobre el estado de los órganos y tejidos correspondientes.
Se utilizó por primera vez el análisis cristalográfico del líquido lagrimal (FT) para el diagnóstico de patología oftalmológica
Chentsova O.B. con coautores en 1985. Propusieron una técnica para la tesigrafía del líquido lagrimal: la cristalografía con la adición de una solución alcohólica de cloruro de cobre. Se colocan 0,02 ml de lágrimas en un tubo de ensayo cónico y se añaden 0,1 ml de una solución alcohólica de cloruro de cobre al 2% con agitación constante. El tubo de ensayo se cierra con un hisopo de algodón y se deja reposar a temperatura ambiente. Después de 1 hora y 20 minutos, se aplica una gota de la solución resultante a un portaobjetos de vidrio, que se coloca en una placa de Petri en un termostato a una temperatura de 25°C durante dos horas. Después del período de incubación, se lleva a cabo una evaluación macro y microscópica de los resultados.
Se observaron características de la imagen tezigráfica en pacientes con enfermedades inflamatorias, distróficas y tumorales de los ojos y la órbita. Según Chentsova O.B. et al., el patrón cristalográfico (CPC) del líquido lagrimal en adultos y niños es normalmente cristales cilíndricos transparentes, largos y escasamente ubicados, que se ensamblan en un patrón geométrico regular, con mayor frecuencia en forma de triángulo. Chentsova O.B. y otros (1989) realizaron CGI del SF para el diagnóstico diferencial de enfermedades orbitarias. Los autores identificaron diferencias cualitativas con respecto a la norma en las preparaciones de lágrimas en pacientes con oftalmopatía endocrina, enfermedades inflamatorias de la órbita y neoplasias.
Desde entonces, estos y otros autores han utilizado el examen cristalográfico en el diagnóstico de diversas enfermedades oculares.
Tyurikov Yu.A., Pokoeva V.A. (1992) utilizaron la técnica de tesigrafía con la adición de una solución acuosa saturada de glicina y exposición diaria a temperatura ambiente. Se revelaron cambios característicos en los cristalogramas de pacientes con neoplasias intraoculares y orbitarias.
Varios autores utilizaron la tesigrafía SG no solo para el diagnóstico, sino también para la monitorización dinámica del GC del SG del ojo afectado (Kokarev V.Yu. et al., 1990; Somov E.E., Brzhesky V.V., 1994; E.I. Ustinova et (1996) recomendaron el método de examen cristalográfico del SF como prueba de laboratorio adicional para el diagnóstico diferencial y la aclaración de la fase de actividad del proceso tuberculoso.
Chukhman T.P. (1999) mejoraron la técnica de la tesigrafía SG, proponiendo reemplazar la sedimentación a largo plazo de una mezcla de lágrimas y solución formadora de cristales por centrifugación, lo que redujo el tiempo de investigación. Además, se realizó un CGI del SG para diversas enfermedades inflamatorias oculares e identificó tipos de caracteristicas cristales, lo que permitió identificar oportunamente complicaciones incluso en la etapa preclínica. Además, el autor estudió la influencia de diversos factores externos (temperatura de secado de los preparados, humedad), así como los métodos de recogida de lágrimas, en la cristalogénesis.
El interés de los científicos por el uso del método de tesigrafía de fluidos biológicos en medicina sigue siendo alto hasta el día de hoy. Sin embargo, la tesigrafía resultó ser una técnica bastante laboriosa, que requirió el uso de reactivos adicionales y fue difícil de interpretar los resultados (Shatokhina S.N., Shabalin V.N., 1997). Además, se desconocen los patrones del proceso de cristalización en los que se basa el método de tesigrafía. La búsqueda de métodos de investigación cristalográfica más simples y accesibles ha llevado a la aparición de una serie de trabajos dedicados a la cristalografía de preparaciones nativas de biofluidos.
Como resultado, existe la necesidad de desarrollar un método rápido que pueda usarse como prueba primaria en el diagnóstico de diversas enfermedades. Además, los requisitos necesarios para su selección son un grado suficiente de precisión y la posibilidad de un uso generalizado sin invertir importantes recursos materiales (Menshikov V.V., 1988; Nazarenko G.I., Kishkun A.A., 2000; Zelenin V.A., Bulychev V.F., Steklova G.P. et al., 2004).
Especialistas de diversos campos de la medicina se interesaron por este problema. La consecuencia de esto fue el rápido desarrollo del diagnóstico de saliva, que, por un lado, no era invasivo y, por otro, permitió obtener rápidamente resultados preliminares (Borovsky E.V., Leontyev V.K., 1991; Sukmansky O.I., 1991; Komarova L. G., Alekseeva O. P., 1994; Antropova I. P., Gabinsky Ya. L., 1997; Butaev M. T., 1998; Grigoriev I. V., Chirkin A. A., 1998; Bulgakova V. A., 1999; Erichev I. V., Korotko G. G., Reshetova I.V., 1999; Denisov A.B., 2000, 2001;).
Los métodos para la determinación cualitativa de compuestos químicos según su capacidad de cristalizar fueron propuestos por primera vez por T. E. Lovitz, estudiante de M. V. Lomonosov, en 1804-1805. En sus trabajos describió dos pruebas originales para el análisis cualitativo de la estructura de las sustancias en estudio. Se trata del “método de depósito de sal erosionada” (depósitos cristalinos), así como de reacciones microcristalinas. El primero de los anteriores fue la base para el método de determinación cualitativa de fármacos desarrollado mucho más tarde (Knizhko P. O., 1956; Bubon N. T., Puzyrevsky K. Ya., 1965; Nikolskaya M. N., Gandel V. G., Popkov V. A., 1965; Lobanov V. I., 1966). La técnica de las reacciones microcristalinas ahora ha encontrado aplicación en la medicina forense (Belova A.V., 1960; Semenova T.D., 1972; Taher M.A. Assad, 1995).
En el contexto del desarrollo de ideas sobre la cristalización de fluidos biológicos humanos, cobra relevancia la cuestión de su aplicabilidad en el diagnóstico de diversas condiciones patológicas (Kokueva O.V., Savina L.V., Lee A.M., 2000; Zubeeva G.N., Motyleva I. M. , Potekhina Yu. P., 2001; Shabalin V. N., Shatokhina S. N., 2001; Vorobyov A. V., Vorobyova V. A., Neshtakova N. L., 2002; Alekseeva O. P. , Vorobyov A. V., 2003; Volosnikova N. N., Muzlaev G. G., Savina L. V. et al., 2003; Rapis E. G., 2003; Anaev E. Kh., Shatokhina S. N. ., Chuchalin A.G., 2004).
En este sentido, los métodos de investigación cristaloscópica, destinados a descifrar la información metabólica oculta en datos cualitativos y composición cuantitativa ambientes biológicos.
Además, un esquema de análisis unificado puede contribuir a la unificación y simplificación de los estudios cristalográficos. Esto será útil tanto en el diagnóstico diferencial como a la hora de realizar una prueba de orientación.
Un factor importante en la estandarización de los resultados de la cristalización diagnóstica de sustratos biológicos del cuerpo puede ser una forma unificada de conclusión sobre una prueba cristaloscópica, que incluye información sobre cambios cualitativos y cuantitativos en la composición de la facies del paciente en relación con la facies de personas prácticamente sanas. individuos (cambios en el número y tamaño de las estructuras, aparición de formaciones patológicas para una determinada formación de biofluido, etc.).

1.2.2 Estado actual de las ideas sobre cristalografía
Métodos de búsqueda

Métodos de investigación cristalográfica.– un conjunto de enfoques metodológicos para extraer información sobre el metabolismo y la homeostasis del cuerpo y/o sus partes, basándose en el fenómeno de la formación de cristales libres o iniciados por sustancias básicas de diversas composiciones químicas de líquido seco o material biológico líquido con interpretación posterior de los resultados de la cristalogénesis.
Durante los últimos treinta años, se han formado numerosos enfoques metodológicos para la realización de cristaloscopia diagnóstica, sin embargo, cabe señalar que la mayoría de ellos son esencialmente solo una modificación de las condiciones para llevar a cabo el proceso de deshidratación, mientras que parece posible distinguir solo en principio tres opciones: cristalización libre, en el caso de que el fluido biológico analizado se seque directamente; cristalogénesis iniciada, cuando se visualiza el resultado de la deshidratación del sistema “entorno biológico - sustancia básica formadora de cristales”, basándose principalmente en el estudio de la estructura génesis de este último; La cristalización parcial (método de compuestos modelo) es un conjunto de métodos para recrear componentes individuales de la imagen cristaloscópica de un determinado sustrato biológico y, por lo tanto, es importante principalmente para la investigación científica.
En general, hasta la fecha se han propuesto los siguientes métodos en cristaloscopia moderna:
1) La cristaloscopia clásica (Kalikshtein D.B., Moroz L.A., Kvitko N.N. et al., 1990; Savina L.V., 1992, 1999; Shabalin V.N., Shatokhina S.N., 2001; Alekseeva O.P., Vorobyov A.V., 2003) es una de las opciones más comunes para realizando una prueba de deshidratación, cuya esencia, como ya se indicó, es la cristalización directa de fluidos biológicos. La preparación de los preparados se puede realizar tanto en condiciones ambientales como en un termostato (37-400 ° C), sin embargo, según numerosas publicaciones, la duración de la preparación de micropreparados de medios biológicos es de 1 a 2 días, lo que claramente no cumple con los requisitos. para pruebas rápidas. En este sentido, se requieren ajustes importantes en las condiciones de secado para optimizar el tiempo dedicado a la preparación de la micromuestra.
Cabe señalar que este enfoque cristaloscópico permite evaluar las propiedades formadoras de cristales de un biofluido y, por lo tanto, no solo obtener facies diagnósticamente significativas (muestras cristalizadas), sino también establecer la presencia de componentes individuales del sustrato analizado (Savina L.V., Pavlishchuk S.A., Samsygin V. Yu. et al., 2003). Esta cuestión no se ha resuelto adecuadamente en la literatura especializada, pero es importante para la identificación práctica de inclusiones patológicas en entornos biológicos, la biología y la medicina: el estudio de los aspectos patogénicos de la patología humana y animal, así como la selección y evaluación razonables de la eficacia de la terapia farmacológica y no farmacológica (Buiko A. S., Tsykalo A. L., Terentyeva L. S. et al., 1977; Erichev I. V., Korotko G. G., Reshetova I. V., 1999; Zaichik A. Sh., Churilov L. P., 2001; Alekseeva O. P., Vorobyov A. V., 2003; Baydaulet I. O., 2003). Para ello es necesario estudiar las características de la cristalogénesis de los componentes de los fluidos biológicos, incluso mediante el modelado parcial de la deshidratación. L.V. Savina et al. propusieron ciertas formas de resolver este problema. (2003). A pesar de la importancia de este enfoque metodológico, hay que reconocer que en este caso no se tiene en cuenta uno de los factores más importantes que determina la naturaleza de la cristalogénesis de un biosustrato: la presencia de interacciones intermoleculares entre los componentes de un biofluido que difieren. en la estructura química, que, a su vez, juega un papel importante en la formación de los cuadros cristaloscópicos definitivos, en particular determinando el número y el diámetro de las “zonas primarias” de las facies, transformadas durante el proceso de deshidratación en cinturones de cristalización (Koledintsev M.N. , 1999; Koledintsev M.N., Nechaev D.F., Maychuk N.V., 2002; Koledintsev M.N., Maychuk N.V., 2002).
G. G. Korotko (2000) realizó intentos similares para simular la formación de cristales, que se analizarán más adelante.
2) La tesigrafía (Nefedova N. B., Tsyvenkova L. A., 1985; Moroz L. A., Kalikshtein D. B., 1986; Gugutishvili T. G., Simonishvili L. M., 1990; Kidalov V. N. ., Khadartsev A. A., Yakushina G. N., 2004) también se refiere a la prevaleciente ing y métodos más comunes de realizar una prueba cristaloscópica y representa una introducción adicional de diversas sustancias químicas en el biofluido seco del cuerpo humano para iniciar los procesos de formación de cristales. Para ello se utiliza una amplia gama de agentes formadores de cristales (NaCl, CaCl2, MgCl2 y otros), la mayoría de ellos con propiedades formadoras de complejos y concentraciones de varios autores variar mucho.
En los laboratorios que utilizan este método cristalográfico, su implementación se realiza mediante tesigrafía clásica, es decir. considerar exclusivamente el resultado de la deshidratación de un sistema compuesto por un biomaterial y una sustancia básica formadora de cristales como muestra independiente, lo que complica significativamente la interpretación de la información obtenida debido a las dificultades objetivas para comparar muestras obtenidas en diferentes condiciones y diferentes estados funcionales. del cuerpo de los sujetos examinados. En este sentido, un tesigrama generado de acuerdo con el enfoque descrito anteriormente requiere una comparación del resultado obtenido con "patrones" preexistentes (enfoque "fotográfico") (Shabalin V.N., Shatokhina S.N., 2002; Baydaulet I.O., 2003; Beloglazov V.G. , Atkov E. L., Fedorov A. A. et al., 2003; Volosnikova N. N., Muzlaev G. G., Savina L. V. et al., 2003; Kidalov V.N., Khadartsev A.A., Yakushina G.N., 2004) o los valores de parámetros descubiertos empíricamente (Tarusinov G.A., 1994; Koledintsev M.N., Nechaev D.F., Maichuk N.V. ., 2002), sin embargo, este factor reduce definitiva y significativamente el contenido de la información y la confiabilidad del diagnóstico tesigráfico.
Parece importante destacar que en la actualidad no existe un esquema-algoritmo generalmente aceptado para la descripción, análisis e interpretación de las facies tesigráficas, así como tampoco existe un método unificado para su obtención.
Hay informes aislados sobre el uso de una muestra de control de sustancias básicas (Tarusinov G. A., 1994), pero por razones desconocidas su uso es muy limitado (Kamakin N. F., Martusevich A. K., 2003; Martusevich A. K., 2004).
3) Perfil de deshidratación (Shabalin V.N., Shatokhina S.N., 1999). Consiste en aplicar fluidos biológicos a un portaobjetos de vidrio pretratado con una solución de lecitina de cierta concentración. Según los autores, con la ayuda de la lecitina parece posible cambiar la afinidad de los cristales por la base y, en consecuencia, transformar las características termodinámicas del biosustrato deshidratado.
4) La cristaloscopia al vacío (Savina L.V., 1999) implica la preparación (secado) de preparaciones en condiciones de vacío. Esto asegura el aislamiento de la muestra deshidratada del ambiente externo, creando un sistema relativamente cerrado en el que se elimina directamente la parte líquida del ambiente biológico y los procesos de biocristalización.
5) Cristalización de fluidos biológicos en una celda cerrada (Antropova I.P., Gabinsky Ya.L., 1997). Se garantiza el aislamiento de la muestra en formación del entorno externo, similar a la cristaloscopia al vacío, pero técnicamente este método es más conveniente para el uso práctico, ya que no requiere la creación de condiciones de vacío, sino solo el uso de una celda cerrada, en la que es posible realizar análisis microscópicos directos. Los autores de la modificación utilizaron una centrifugación preliminar del biomaterial.
6) La cristaloscopia de cinturón es un método de investigación cristalográfica basado en el estudio de cinturones de cristal y formaciones de cristales individuales (Koledintsev M.N., 1999; Koledintsev M.N., Nechaev D.F., Maichuk N.V., 2002; Koledintsev M. N., Maychuk N.V., 2002). La base fisicoquímica del método es la heterogeneidad de la composición de los componentes de los fluidos biológicos en función de las masas moleculares de las sustancias que son elementos de un entorno biológico determinado y, en consecuencia, de su diferente capacidad para moverse a través de las facies en el proceso de deshidratación gradual de la muestra y formación de la facies. Esto conduce a la formación de uno o (mucho más a menudo) varios cinturones de cristalización, cuyo registro permite juzgar una determinada característica de un fluido biológico (M. N. Koledintsev, D. F. Nechaev, N. V. Maichuk, 2002).
7) Método de deshidratación en forma de cuña (V.N. Shabalin, S.N. Shatokhina, 2001-2005). Un método para deshidratar una gota de fluido biológico colocada en un plano transparente. La gota tiene forma de cuña en sección transversal, lo que crea las condiciones para una tasa de deshidratación desigual en la dirección radial. Esto provoca el movimiento osmoforético de los solutos en el volumen de la gota deshidratada de acuerdo con los parámetros fisicoquímicos y la formación de estructuras claras, estrictamente individualizadas, correspondientes al estado del organismo del que se obtuvo el líquido en estudio.
8) Microscopía de polarización (Rapis E. G., 1976; Antropova I. P., Gabinsky Ya. L., 1997; Savina L. V., Pavlishchuk S. A., Samsygin V. Yu. et al., 2003): un método para evaluar los resultados del cristal libre o iniciado. formación de un fluido biológico en luz polarizada, lo que permite identificar algunos Características adicionales tanto la facies en su conjunto como sus elementos estructurales individuales, así como caracterizar su textura. Es una modificación universal del enfoque para visualizar los resultados de la cristalogénesis y puede usarse como complemento a cualquiera de los métodos cristalográficos para estudiar medios biológicos.
9) Congregación de sustrato (G. G. Korotko, 2000): un método cristalográfico auxiliar que permite simular la formación de cristales de componentes individuales que son componentes de sustratos biológicos (lípidos, proteínas, polisacáridos). En este caso, en comparación con el método de los “compuestos modelo”, se logra una mayor aproximación a la composición real del entorno biológico en términos de variedad, pero no en la proporción exacta de componentes, sin embargo, es posible tener en cuenta los cambios. en el biofluido en sus principales elementos bioquímicos.
10) Termografía de cristal líquido (Buiko A.S., Tsykalo A.L., Terentyeva L.S. et al., 1977; Shkromida M.I., Pospishin Yu.A., 1977): una técnica prometedora para la investigación cristalográfica, cuyo punto fundamental es el uso de cristal líquido colestérico. (rango de temperatura de fusión 33,5-38,20C o 36,8-41,20C) recubrimientos de las superficies estudiadas con sistemas con pelargoleato de colesterilo, oleato de colesterilo, etc. En este caso, se utiliza piel como “sustrato” sobre el que se aplica la composición. La interpretación de la transformación del estado de los cristales líquidos se evalúa mediante un espectrofotómetro especializado.
Las capacidades de diagnóstico bastante amplias de este enfoque metodológico prácticamente no se utilizan actualmente, a pesar de su evidente promesa, simplicidad y rapidez de implementación.
11) El método de transferencia de información energética de fluidos biológicos a un portador (Vorobiev A.V., Vorobyova V.A., Neshtakova N.L. et al., 2002) consiste en transferir información de medios biológicos a “guisantes puros de azúcar de leche” y luego se combinan en un portaobjetos de vidrio con 0,1 ml de la sustancia base (solución acuosa de sulfato de cobre al 5%). La preparación de los portaobjetos se realiza en una habitación oscura durante 24 horas y la evaluación se realiza mediante análisis cualitativo de las muestras de cristalizado resultantes.
Tal variedad de opciones metodológicas para realizar una prueba basada en la deshidratación de sustratos biológicos posiblemente se deba a que el uso de diferentes enfoques contribuye a una mejor identificación de los resultados obtenidos (tabla). Extraer información oculta en la totalidad de los metabolitos, sus relaciones cuantitativas y cualitativas en biomateriales es una de las tareas más importantes e importantes del diagnóstico cristaloscópico. Desde el punto de vista de numerosos autores (Alekseeva V.I., 1965; Gugutishvili Ts.G., Simonishvili L.M., 1990; Kalikshtein D.B., Moroz L.A., Kvitko N.N. et al., 1990; Antropova I. P., Gabinsky Ya. L., 1997; Plaksina G. V., Rimarchuk G. V., Butenko S. V. et al., 1999; Shabalin V. N., Shatokhina S. N., 2001, 2004; Alekseeva O. P., Vorobyov A. V., 2003; Baydaulet I. O., 2003; Rapis E. G., 2003; Savina L. V., 19 99; 2003; Bystrevskaya A. A., Deev L. A., 2004; Zalessky M. G., Emmanuel V. L., Krasnova M. V., 2004; Kidalov V. N., Khadartsev A. A., Yakushina G. N., 2004; Gromova I. P., 2005), el papel principal en revelar cambios metabólicos en la composición de la Los medios del cuerpo humano y animal se dan al componente cualitativo, teniendo en cuenta las relaciones deterministas entre las formaciones individuales (naturaleza cristalina y amorfa). Se presta mucha menos atención al componente cuantitativo, aunque es un criterio claro para la objetividad de las diferencias observadas.

1.2.2.1. Características generales de la técnica de tesiocristaloscopia de sustratos biológicos.

Con base en el análisis de la información bibliográfica presentada anteriormente, también se propuso un método integrador de tesiocristaloscopia de sustratos biológicos, basado en la implementación simultánea y paralela de cristaloscopia clásica y tesigrafía comparada, realizada sobre el mismo vidrio. Esto permite evaluar tanto la capacidad de un fluido biológico para cristalizar directamente como su potencial iniciador en relación con la sustancia básica formadora de cristales especificada por el investigador (Tabla 1).

Tabla 1. Características comparativas de algunos métodos cristalográficos.

• parte experimental

• 2.Objetos, objetivos y métodos de investigación.

• 2.1. Metas, objetivos y etapas del estudio.

• El propósito de este estudio estudio de la morfología de muestras de orina seca de ratones sanos y con leucemia linfoide (LL).
• Para lograr el objetivo planteado en el trabajo se formuló lo siguiente: tareas:
• 1. Estudiar la literatura moderna sobre los problemas de la cristalografía de biosustratos.
• 2. Dominar la técnica de realización de tesiocristaloscopia de biosustratos.
• 3. Evaluar la naturaleza de la formación de cristales en la orina en ratones sanos.
• 4. Establecer las características de la cristalogénesis iniciada en orina de ratón con LL.
• El trabajo se llevó a cabo en el laboratorio de conservación de sangre y tejidos del Instituto de Investigación de Hematología y Transfusión de Sangre de Kirov.
• Etapas de la investigación:

1. Preparación de ratones de laboratorio sanos de la línea ACR para investigación.
2. Inoculación de la forma linfoide de leucemia en ratones ACR.
3. Recogida de biosustrato (orina) para investigación en ratones sanos y ratones con leucemia.
4. Preparación de micromuestras de orina de ratones sanos y con leucemia.
5. Análisis tesigráfico de micromuestras secas de orina de ratones sanos y con leucemia.

• El tema del estudio fueron los “patrones” tezigráficos de la orina de ratones sanos y con leucemia.
• El objeto de este estudio experimental fue la orina de 10 ratones sanos y 10 ratones con leucemia.
• Como sustancia base para la prueba de tezigrafía utilizamos una solución al 10% de cloruro de sodio, que es un formador de cristales activo.
• En total se obtuvieron 20 micromuestras de orina, tomadas del grupo control (ratones sanos) y de ratones con leucemia (grupo experimental).
• La parte experimental del trabajo incluyó el estudio de la morfología de muestras de orina seca de ratones sanos con leucemia.

2.2 Preparación de platos y zona de trabajo

Los platos utilizados en el trabajo (tubos de ensayo, pipetas medidoras, portaobjetos de vidrio) se lavaron con agua caliente con detergente, se enjuagaron primero con agua del grifo, luego con agua destilada y se secaron.
La esterilización de los platos previamente envueltos en papel de regalo se realizó en autoclave a una temperatura de 120°C y una presión de 1 atm durante 25 minutos.
El trabajo de recogida del líquido biológico se llevó a cabo en el laboratorio de animales (vivario) de la Institución Estatal Federal "KNIIG y PK" de Roszdrav. La obtención adicional de facies tesiocristalscópicas del suero sanguíneo se llevó a cabo en el laboratorio de conservación de sangre y tejidos de la Institución Estatal Federal "KNIIG y PK" del Ministerio de Salud de Rusia. Antes del trabajo, la habitación se irradió con una lámpara de cuarzo durante 30 minutos. La mesa de trabajo fue tratada con alcohol al 70% antes y después del trabajo.

2.3. Métodos de investigación utilizados.

2.3.1 Procedimiento de prueba tesiocristalscópica

El estudio de las propiedades cristalópticas de los biosustratos (suero sanguíneo) de ratones sanos y leucémicos se llevó a cabo mediante el método de tesiocristaloscopia (Kamakin N.F., Martusevich A.K., 2005; Martusevich A.K. et al., 2000-2006).
Se aplican muestras de material biológico (suero sanguíneo, orina, saliva, sudor, lágrimas, etc.) en un volumen de 0,3 ml sobre un portaobjetos de vidrio previamente desgrasado, lavado y secado, que como establecimos anteriormente es óptimo tanto en términos de área del vidrio y en términos del número de estructuras cristalinas y amorfas que son objeto de análisis posterior. La diferencia entre el método de tesiocristaloscopia es que se aplican 3 muestras al vidrio en estudio (Fig. 2.1), la primera (1) de las cuales contiene solo biomaterial, la segunda (2), una mezcla de biofluido y formador de cristales (básico ) sustancia, el tercero (3 ) - control del compuesto formador de cristales. Como sustancia base se utilizó una solución de NaCl al 10%.

Fig.2.1. Esquema de una preparación preparada mediante el método de tesiocristaloscopia.

La micropreparación resultante se seca utilizando un método modificado en una corriente de aire caliente. En este caso, la posición horizontal del vaso y la correspondiente dirección del flujo deben asegurar la deshidratación de las muestras en las mismas condiciones, evitando su encharcamiento. Luego los patrones cristaloscópicos resultantes se analizan según el esquema tradicional, por separado para los componentes cristalográficos y tesigráficos.
El secado de una gota de sustrato sobre una superficie mojada (vidrio) conduce a la formación de 3 zonas diferentes: exterior (marginal: agua, electrolitos, compuestos de bajo peso molecular); interno (central: proteínas concentradas de alto peso molecular, electrolitos, compuestos de bajo peso molecular) e intermedio, caracterizado por la menor concentración de sustancias. La zona interna puede tener límites expresados ​​​​y no expresados. Las estructuras cristalinas y amorfas suelen estar adyacentes al contorno exterior del límite interior.
El secado del coloide se acompaña de su retracción, un aumento de la concentración de compuestos de bajo peso molecular y la formación de estructuras cristalinas de diversos tipos.
El procesamiento estadístico de los resultados obtenidos se realizó en el entorno Microsoft Excel XP utilizando funciones integradas.
Para interpretar los patrones cristaloscópicos, clasificamos todas las formaciones cristalinas y amorfas que encontramos (Tabla 2.1, Fig. 2). De acuerdo con esta clasificación se realizó la evaluación de las preparaciones preparadas para el análisis mediante la técnica clásica de cristaloscopia. Se realizó tanto un estudio general de las características cristaloscópicas del biofluido como de sus características comparativas.

Tabla 2.1 Estructuras cristalinas y amorfas encontradas en el análisis cristaloscópico “clásico” de biofluidos

Nota: * - varían en cantidad (pequeños - en total ocupan menos del 30% del área del campo visual, cantidad moderada - en total ocupan el 30-50% del área del campo visual, números grandes - en total ocupan más del 50% del el área del campo visual) y en tamaño (pequeños, medianos, grandes, agregados).
Sobre la base del análisis de numerosos micropreparados de fluidos biológicos secos, se identificaron 5 clases de estructuras cristalinas (Kamakin N.F., Martusevich A.K., 2005;), cada una de las cuales, a su vez, incluye formaciones específicas (Tabla 2.1). Para algunos de ellos, se ha descifrado la composición química, lo que permite, con cierto grado de aproximación, juzgar los cambios en las características cualitativas y cuantitativas de las proporciones de los componentes en los medios biológicos en el caso de un estudio dinámico de los cristales. propiedades formativas de este último.
Una categoría separada está formada por cuerpos de naturaleza no cristalina: formaciones amorfas. Derivados del carbonato de calcio, son extremadamente variables en tamaño y cantidad, lo que puede tener valor diagnóstico.
También es de interés el tipo de interacción entre cristales grandes y partículas amorfas en las facies del biosustrato deshidratado (Figura 2). El contenido informativo de este fenómeno aún no se ha establecido, pero, en nuestra opinión, requiere mucha atención, ya que puede reflejar la influencia de componentes cristalográficamente no visualizados de un biofluido (por ejemplo, macromoléculas de proteínas, grasas, carbohidratos, etc. ) sobre la cristalogénesis.

Arroz. 2.2.Interacciones de estructuras cristalinas y amorfas

Para obtener información adicional sobre las propiedades fisicoquímicas del fluido biológico analizado, se desarrollaron criterios adicionales para evaluar el resultado de la cristaloscopia clásica (Kamakin N.F., Martusevich A.K., 2005), incluidos los siguientes parámetros:
1. Celularidad (yo)– refleja las características de las interacciones orgánico-minerales en la facies. La valoración se realiza en una escala recta de seis puntos (0-5 puntos), siendo 0 puntos la ausencia total de signos de aparición de este fenómeno y 5 puntos la visibilidad de la celularidad sin microscopio.
2. Uniformidad distribuciones de elementos (R)– un criterio que indica la corrección del proceso de cristalogénesis libre. También se interpreta según la escala de seis puntos (0-5 puntos) dada en el apartado del componente tesigráfico.
3. Intensidad de la zona marginal (Kz)– un parámetro que indica la presencia y cantidad del componente proteico del entorno biológico (Shatokhina S.N., 1995; Nazarova L.O., Shatokhina S.N., Shabalin V.N., 2000). Proponemos un esquema para evaluar este indicador en una escala semicuantitativa de seis puntos:
- 0 puntos - ausencia absoluta zona marginal, se expresan estrías, signos locales de destrucción en la zona del borde de las facies;
- 1 punto – la zona del borde es poco visible con un aumento bajo de un microscopio óptico, se observan “interrupciones” únicas, incluidas las “veladas” vagamente expresadas;
- 2 puntos – la zona del borde es claramente visible, es casi uniforme, se observa un pequeño número de “defectos”;
- 3 puntos – la zona del borde está claramente delimitada de la zona intermedia, es homogénea, se notan “defectos” en todo el anillo del borde y no son destructivos;
- 4 puntos: la zona marginal se visualiza claramente, delimitada por un “eje” de la zona intermedia, tiene un número importante de “fracturas”, pero es indistinguible sin microscopía.
- 5 puntos – la zona marginal se visualiza sin microscopio, es uniforme, sin signos de destrucción; La microscopía indica un número significativo de "fracturas".
4. Grado de destrucción de facies (SDF)– un indicador integral que refleja el curso correcto de la cristalogénesis (la principal característica cualitativa de la facies) y resume tanto las exógenas (condiciones del proceso de deshidratación: temperatura, humedad, presión, velocidad del flujo de aire, entrada de sustancias adicionales, etc.) y factores endógenos (formación de cristales del componente termodinámico, presencia de una cantidad adecuada de agua para la formación de hidratos de cristales y estabilización de macromoléculas orgánicas, etc.).
* 0 grados– todos los elementos de la facies tienen la configuración correcta, no están destruidos ni en su conjunto ni en áreas individuales, no hay signos de destrucción de la textura de la facies;
* me titulo– los elementos de las facies tienen signos iniciales de destrucción, no se observan cambios destructivos en la textura;
*II grado– se visualizan numerosas estructuras destruidas o alteradas, hay violaciones locales de la integridad de la textura;
* III grado– todos los elementos de la facies están destruidos, es imposible distinguir las partes individuales de la facies y la estructura, la muestra es una masa informe de material amorfo, a menudo coloreado; hay claros signos de destrucción de la textura.
En general, el modelado de las estructuras formadas y el uso de diversos criterios de evaluación contribuirán a una diferenciación más clara de los cambios en la imagen cristaloscópica, aunque una "sobrecarga" excesiva con ellos conducirá a una complicación significativa del proceso de análisis de facies.
Como forma más informativa de evaluar la capacidad iniciadora de los sustratos biológicos que la tesigrafía clásica discutida anteriormente (Tarusinov G. A., 1994), utilizamos la tesigrafía comparada (Kamakin N. F., Martusevich A. K., 2002-2005; Martusevich A.K. et al., 2000-2005 ), que incluye el uso de una muestra de control adicional de una sustancia básica pura para nivelar diversas condiciones externas; permite indicar la dirección de iniciación (activación o depresión de la cristalogénesis del formador de cristales) y su gravedad.
Como ya se mencionó anteriormente, la evaluación de las facies tesigráficas es más difícil que las cristaloscópicas, lo que se asocia con la homogeneidad de la morfología de las primeras y, por lo tanto, si ya se ha desarrollado una tabla de identificación para la cristaloscopia clásica, se necesitarán criterios adicionales. solo juegan un papel clarificador, luego en la prueba tesigráfica toman posiciones de liderazgo (Nefedova N.B., Tsyvenkova L.A., 1985; Moroz L.A., Kalikshtein D.B., 1986; Gugutishvili Ts.G., Simonishvili L.M., 1990; Kidalov V. N., Khadartsev A. A., Yakushina G. N., 2004; Kamakin N. F., Martusevich A. K., 2003-2005). Al respecto, se propone una clasificación de criterios que pueden utilizarse al considerar facies tesigráficas:
I. Criterios básicos
- Coeficiente tezigráfico básico Q
- Coeficiente de justificación P
- Coeficiente de iniciación M
- Coeficiente relativo N
II. Criterios adicionales
uniformidad de densidad de facies (R);
grado de celularidad de la imagen (I);
índice de caos (CH)
severidad de las zonas de cristalización individuales (Z)

La identificación de los criterios anteriores hizo posible formar un enfoque matemático unificado para evaluar la facies tesigráfica (Martusevich A.K. et al., 2004, 2005), que se basa en verificar la importancia de cada indicador para determinar el coeficiente derivado requerido.

Explicaciones de los coeficientes de cálculo utilizados:
I. Criterios principales:
Q = A / B, donde A es el número de centros de cristalización en la muestra de prueba, unidades; B - número de centros de cristalización en la muestra de control, unidades.
P = d1 / d2, donde d1 es el radio de la zona mínima de cristalización, mm; d2 - radio de la zona de máxima cristalización, mm.

II. Criterios adicionales:
R - grado de uniformidad de la densidad de distribución de elementos de las facies tesigráficas, puntos;
I - grado de celularidad de las facies tesigráficas, puntos.

Nuestra investigación nos permitió asumir la importancia informativa de los coeficientes resaltados anteriormente para identificar las facies tesigráficas:
1. Coeficiente tezigráfico básico Q– indica el grado de organización/desorganización de la cristalogénesis de la sustancia base (en la mayoría de los casos, una solución de cloruro de sodio de concentración isosmótica, que en condiciones neutrales naturales es propensa a la formación de estructuras típicas de deshidratación) bajo la influencia del material bajo estudiar.
2. Coeficiente de justificación P– demuestra el grado de heterogeneidad de las masas moleculares de los componentes del sustrato en estudio.
3. Grado de celularidad de la imagen I.- posiblemente demuestra la presencia de conglomerados de proteínas de diferentes composiciones químicas y propiedades en cuanto al grado de hidrofilicidad/hidrofobicidad, así como la presencia de componentes liposolubles en una solución acuosa del entorno biológico.
4. Parámetro R: enfatiza la distribución uniforme de estructuras en las facies tesigráficas. Puede indicar el contenido de componentes no visualizables en el material que pueden causar localmente la inhibición de la cristalogénesis. Puede estar relacionado con el método de secado de la micromuestra.
Con base en los indicadores anteriores para evaluar las facies tesigráficas, se formuló una breve gradación de las características del registro de la composición de las facies tesigráficas de acuerdo con criterios de evaluación adicionales (Kamakin N.F., Martusevich A.K., 2005):
1. Uniformidad de la densidad de distribución de estructuras cristalinas en las facies (R):
0 puntos: caos total de facies, presencia de elementos heterogéneos, huecos, lugares de acumulación de estructuras cristalinas, diferente orientación de formaciones en el campo de visión.
1 punto: se delinean algunas agrupaciones de cristales, áreas aisladas construcción correcta, ocupando menos del 30% del área total del campo de visión, la dirección de las figuras sigue siendo caótica.
2 puntos: se observan claras “islas” de orden que ocupan del 30% al 50% del espacio del campo visual (en cada uno de al menos tres estudiados), las distancias entre elementos en grupos están aproximadamente igualadas, algún patrón de direccionalidad esta grabado formaciones estructurales facies.
3 puntos: un número bastante significativo de elementos estructurales de las facies (más del 50% del total) están estructurados, las "islas" de uniformidad se convierten en áreas de relativamente área grande. Dentro de estas zonas se observa la ubicación correcta y la uniformidad de distancias entre formaciones individuales. El patrón de dirección de los elementos y la zonificación se distinguen con bastante claridad.
4 puntos: la mayoría de los elementos de la facies están estructurados (más del 75% del total), el resto se distribuye en “islas” a lo largo del campo de visión, a menudo en la zona marginal. Las distancias entre formaciones individuales son casi constantes. La orientación de los elementos sigue un patrón determinado en casi toda la superficie del campo de visión.
5 puntos: todos los elementos de la facies tezigráfica están claramente estructurados en todo el campo de visión, lo que se confirma mediante el examen de varios campos. La división en zona central, intermedia y marginal es claramente visible incluso con control visual sin microscopio; los límites de esta última se pueden establecer. Las distancias entre los elementos del cuadro son constantes, la orientación de las figuras es correcta, natural en toda la superficie de las facies.
2. Grado de manifestación de la celularidad de la facies (I):
0 puntos: ausencia total de signos de celularidad, homogeneidad de la imagen, falta de identificación de "islas" de cristales. Las facies representan una única “capa” de formaciones cristalinas.
1 punto: la presencia de los primeros signos de heterogeneidad, "aplastamiento" de la imagen cristaloscópica (se destacan los principios más significativos desde el punto de vista diagnóstico):
el comienzo de la separación de grupos de elementos (menos del 30% de todas las formaciones ocupan menos del 30% del área del campo visual);
cierta heterogeneidad del panorama;
el comienzo del “trituramiento” de una única “capa” de figuras cristalinas.
2 puntos: hay una tendencia bastante visible hacia la "fragmentación" de las facies, la formación de "islas" de cristales (se destacan los principios más significativos desde el punto de vista del diagnóstico):
el número de elementos aislados en “islas” es del 30% al 50% de todas las estructuras, ocupan más del 30% de la superficie del campo de visión de la facies;
pronunciada heterogeneidad, zonalidad de la imagen;
Se visualiza el proceso de “división” de las facies en secciones, se registran los cinturones de cristalización en formación, que sirven como límites de estos últimos, en algunos casos no en toda su longitud, con un espesor de 1 cristal.
3 puntos: se observan cambios pronunciados en la facies:
los elementos en las “islas” representan del 50% al 75% del número total, la superficie que ocupan es más del 50% del campo de visión (en varios campos);
pronunciada heterogeneidad, "granulosidad" de la imagen;
el proceso de “desmembramiento” de la facies es claramente visible en varios campos de visión;
Los cinturones de cristalización son bastante distintos y están formados por más de una fila de estructuras cristalinas.
4 puntos: los signos de celularidad son visibles de manera confiable (se resaltan los principios más significativos desde el punto de vista del diagnóstico):
el número de estructuras agrupadas en celdas del 75% al ​​100% del número total de estas últimas;
los elementos agrupados ocupan todo el campo visual (al estudiar varios, al menos tres campos visuales);
Los cinturones de cristalización están formados por más de una fila de cristales y están presentes en toda la superficie del campo de visión. rodean completamente las "islas".
5 puntos: la imagen se caracteriza por las siguientes características morfológicas (se destacan los principios más significativos desde el punto de vista diagnóstico):
el número de estructuras agrupadas en celdas es del 75% al ​​100% del número total de estas últimas;
los elementos agrupados ocupan todo el campo visual (al estudiar varios, al menos tres campos visuales);
la “fragmentación” y “granulosidad” de la imagen se expresan muy claramente;
los cinturones de cristalización están formados por más de una fila de cristales, están presentes en toda la superficie del campo de visión y rodean completamente las "islas";
hay "interrupciones" en la imagen (a excepción de la facies del suero sanguíneo, para la cual este fenómeno es independiente signo diagnóstico).

En general, el uso de los criterios, indicadores y coeficientes calculados descritos anteriormente nos permitió algoritmizar el procedimiento para extraer la carga de información oculta en la composición cualitativa y cuantitativa de los sustratos analizados.
De acuerdo con este esquema, el análisis se lleva a cabo paso a paso en dos direcciones principales: el estudio de la cristalogénesis libre y la formación de cristales iniciados, lo que permite considerar de manera integral tanto la capacidad directa de formación de cristales de un biofluido como su potencial iniciador. .

Arroz. 2.3.Algoritmo para la valoración de las facies siocristaloscópicas.

Así, el uso generalizado de aparatos matemáticos permite evaluar multiparamétricamente fluidos biológicos por su cristalogénesis, lo que proporciona una gran cantidad de información sobre sus propiedades físicas y químicas e, indirectamente, la composición cualitativa y cuantitativa de sus componentes, que, en nuestra opinión, , es de particular importancia para la ciencia clínica, principalmente diagnóstica, práctica y fundamental.

2.4 Procesamiento de datos estadísticos

El material real obtenido durante la investigación de todos los lavados estudiados se procesó mediante el método de estadística de variación (Tyurin Yu. N., Makarov A. A., 1998; Nasledov A. D., 2004). Se calcularon los valores promedio (M), su error estándar (m) y desviación estándar (). Los indicadores se consideraron confiables en valores de p.<0,05 (по t-критерию Стьюдента и U-критерия Манна-Уитни). Зависимость между признаками оценивали при помощи коэффициента парной корреляции (r), его ошибки (mr) и уровня значимости различий (по t-критерию Стьюдента). Зависимость считалась сильной при r  >0,7, promedio si el módulo del valor de correlación del par se encuentra en el rango de 0,3-0,7. Cuando se encontró un valor de correlación menor que el valor modal de 0,3, se consideró débil. También se calculó la confiabilidad de la correlación de pares encontrada (p).
Los cálculos se realizaron en el entorno de hoja de cálculo Microsoft Excel 2003, así como utilizando los paquetes de software estadístico Primer of biostatistics 4.03 y SPSS 11.0.

3. Resultados de la investigación.

La evaluación directa de los resultados de la cristalogénesis libre se llevó a cabo utilizando una única tabla de identificación, que incluye 5 clases principales de sustancias cristalinas y amorfas (morfometría), así como criterios adicionales (grado de destrucción de la facies - SDF, severidad de su zona marginal (Kz ) y celularidad (I), uniformidad de elementos de distribución (R)). La facies tesigráfica se analizó utilizando un sistema de parámetros básicos (coeficiente tesigráfico principal Q, coeficiente de zonalidad P) y adicionales (similares a los utilizados para la cristaloscopia clásica).
Estudiamos la dinámica de la cristalogénesis en orina libre e iniciada en ratones sanos y leucémicos.

3.1. Morfología de la orina de ratones sanos e infectados artificialmente con leucemia.

Nuestro análisis de micropreparaciones de muestras de orina seca nos permitió establecer "patrones" claros para las condiciones consideradas.
Se hizo una comparación de patrones cristaloscópicos obtenidos de animales sanos y enfermos.

Tabla 3.1. Características cristaloscópicas de ratones sanos y pacientes con leucemia.

Según los datos proporcionados en la Tabla 3.1, es obvio que existen claras variaciones en el patrón cristaloscópico entre los grupos control y experimental.

Con base en los resultados de la morfometría visual, se estableció que existen características significativas de la imagen cristaloscópica de la orina de ratones con leucemia en comparación con los animales sanos, entre las cuales las más significativas son:
un aumento en el número de dendritas en ratones enfermos, con la excepción de la ausencia total de estructuras policristalinas revestidas, lo que confirma los cambios registrados en el componente monocristalino;
concentración de formaciones amorfas, que consiste en su aumento y reducción en cantidad, su delimitación acentuada de grandes figuras cristalinas;
un aumento en el grado de destrucción de las facies (el principal indicador de la inestabilidad de las facies cristaloscópicas);
una disminución en la uniformidad de distribución de formaciones cristalinas y amorfas en un microespécimen, acompañada de desagregación de elementos de facies, que se manifiesta en un aumento significativo en el grado de celularidad (p<0,05).
A partir de los resultados de la evaluación de la capacidad de formación de cristales del suero sanguíneo de ratón, se formó un "patrón" característico de ratones sanos y con leucemia.

3.2. Los principales criterios para evaluar la facies tesigráfica del suero sanguíneo en ratones en condiciones normales y patológicas (leucemia).

El estudio incluyó tanto una búsqueda de marcadores cualitativos de leucemia como la formación de "patrones" cuantitativos de tezigrafía. Se compiló un conjunto de parámetros cualitativos de importancia diagnóstica basándose en la detección de signos de cambios patológicos en la orina de ratones enfermos.
De acuerdo con los datos presentados en la Fig. 2.4, los indicadores diferenciadores más significativos de los tesigramas de orina de ratones sanos y ratones con leucemia cuando se utiliza una solución de cloruro de sodio al 10% como sustancia base son:
- la naturaleza de la iniciación de la sustancia básica por el entorno biológico (en ratones sanos - activación pronunciada de la cristalogénesis de la sustancia básica, en ratones enfermos con leucemia - inhibición moderada);
- composición orgánico-mineral desigual del biofluido (predominio de componentes minerales en ratones sanos y predominio de compuestos orgánicos en ratones con leucemia);
- el grado de destrucción de facies, que es ligeramente mayor entre los representantes del grupo experimental;
- expansión de la zona marginal en la facies de ratones con leucemia, con su gravedad significativa en individuos prácticamente sanos, que es un marcador putativo de leucemia.

Tabla 3.2. Tezigrafía comparativa de orina de ratones sanos y ratones con leucemia (sustancia básica: solución de cloruro de sodio al 10%)

Nota: “*” – importancia de las diferencias en relación con el grupo de control p<0,05

Arroz. 2.4. Cambios en los criterios principales y adicionales para la tezigrafía de orina en ratones con leucemia en comparación con ratones sanos

3.3 ratones AKR

La línea de ratones AKR, altamente leucémicos, se obtuvo cruzando individuos estrechamente relacionados en 1928. Los ratones de ambos sexos son susceptibles a la leucemia linfoide. Aproximadamente el 91% de las mujeres mueren de leucemia a los 300 días.

3.4 Dinámica del desarrollo de la leucemia.

Arroz. 3.1 La facies es homogénea, no hay formaciones pronunciadas – ratón sano X40

Arroz. 3.2 La facies es homogénea, aparecen los primeros signos de fragmentación de la zona marginal: los primeros signos del desarrollo de leucemia, a los 5 meses de edad. X40

Arroz. 3.3 Heterogeneidad de la estructura, expresión débil de la zona marginal, manifestación de celularidad: el comienzo del desarrollo de la leucemia. 7 meses X40

Arroz. 3.4 El comienzo de la aparición de estructuras dendríticas lineales es el desarrollo de la leucemia. 8 meses X40

Arroz. 3.5 En la estructura de la facies predominan las estructuras dendríticas revestidas y rectangulares - desarrolló leucemia, 9 meses. X40

Arroz. 3.6 Celularidad pronunciada de la facies, densidad desigual de distribución de elementos: leucemia muy desarrollada. 13 meses X40

3.5 Conclusiones

A partir de la detección de varios parámetros cualitativos (al menos 3) de una biomuestra experimental en la superficie de una gota de orina seca, parece posible identificar la presencia de cambios patológicos o el grado de desarrollo de leucemia aguda.
Utilizando los datos que figuran en la Tabla 3.2, se puede observar que en relación a los coeficientes Q y P, se registran diferencias significativas en sus valores en tesigramos de orina.
De acuerdo con los datos presentados en la Tabla 3.2, la confiabilidad de las diferencias entre los principales indicadores de la tesigrafía confirma la importancia de las características de las facies tesigráficas de la orina detectadas mediante signos cualitativos.
Así, el uso del método de tesigrafía comparativa de orina en ratones sanos y ratones con leucemia permite identificar marcadores cualitativos y cuantitativos de la presencia de leucemia.
El análisis tesiocristalscópico de biofluidos permite la evaluación multiparamétrica de la información metabólica que contienen, que puede ser útil para indicar condiciones fisiológicas y patológicas en humanos y animales. Cada biofluido tiene sus propias características de cristalogénesis, lo que se asocia a la diferenciación de su composición química y funciones.
Al estudiar el componente cristaloscópico, se recomienda utilizar una tabla de identificación única y el componente tesigráfico: los criterios de evaluación principales (coeficientes Q y P) y adicionales (uniformidad de distribución del patrón, celularidad, etc.). La continuación de la investigación servirá para desarrollar ideas sobre los mecanismos sub y moleculares del desarrollo de reacciones fisiológicas y patológicas del cuerpo humano.

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Para planificar adecuadamente el embarazo, identificar diversos trastornos del sistema reproductivo y elegir el método anticonceptivo óptimo, es necesario tener una comprensión clara de la naturaleza de la función menstrual de la mujer, uno de cuyos vínculos clave es ovulación .

Ciclo menstrual las mujeres, que representan el período desde el primer día de una menstruación hasta el primer día de la siguiente menstruación, dura en promedio 28-30 días. Durante la primera mitad del ciclo menstrual, uno de los ovarios madura folículo, que es una burbuja llena de líquido y que contiene un huevo en maduración. En 14-15 días del ciclo Se produce la ovulación, lo que significa que se libera un óvulo maduro del folículo, listo para la fertilización.

Óvulo maduro después de la ovulación. capaz de fertilizarse en 2 días, y los espermatozoides tienen actividad fertilizante durante 4 días después de la eyaculación. Por lo tanto, el período total del evento más probable la posibilidad de concepción es de 6 días .

Para determinar el período de concepción probable, se utilizan varios métodos para determinar el momento de la ovulación, que incluyen: evaluar la naturaleza de la cristalización del moco contenido en el canal cervical o la cristalización de la saliva; medir la temperatura en el recto; datos de ultrasonido; estudiando los niveles hormonales.

Así, durante el período de ovulación, el moco contenido en el canal cervical, después de aplicarse a un portaobjetos de vidrio y secarse, cristaliza para formar un patrón similar a una hoja de helecho. Este proceso de cristalización se debe a una serie de cambios biofísicos y bioquímicos que se producen en el moco cervical.

La actividad de producción de moco por parte de las glándulas ubicadas en las paredes del canal cervical está controlada por el nivel de hormonas sexuales femeninas. estrógeno. A medida que se acerca el momento de la ovulación, aumenta la concentración y actividad de los estrógenos. Esto conduce a un aumento en la cantidad de moco producido y a un aumento en las sales de sodio y potasio que contiene. En consecuencia, cuando el moco se seca, las sales que contiene interactúan con la mucina, que forma un patrón que se asemeja a una hoja de helecho.

Al examinar un frotis de moco con un microscopio, queda claro que a partir del noveno día del ciclo aparecen débiles signos de cristalización. Además, la gravedad del patrón se intensifica gradualmente, aparece más claramente 3 a 4 días antes de la ovulación y alcanza sus contornos más claros el día de la ovulación. Después de la ovulación, la cristalización disminuye. El dibujo se vuelve borroso y adquiere una apariencia "borrosa" al cabo de 2 o 3 días.

Determinar el momento de la ovulación mediante una prueba de cristalización del moco cervical requiere una visita diaria al ginecólogo. En algunos casos, debido a cambios patológicos en el cuello uterino o un proceso inflamatorio, el estudio puede resultar complicado o la fiabilidad del resultado puede verse reducida, ya que la imagen de cristalización está distorsionada.

Los cambios en los patrones de cristalización durante el ciclo menstrual, similares al moco cervical, también ocurren en la saliva. Un aumento en los niveles de estrógeno a medida que se acerca la ovulación conduce a un aumento en la cantidad de sales de sodio y potasio en la saliva, así como en el moco cervical. Su concentración alcanza un máximo el día de la ovulación, lo que provoca la cristalización de la saliva cuando se seca. La confiabilidad de la prueba de cristalización de saliva para determinar la ovulación es del 96% al 99%.

Para evaluar el patrón de cristalización de la saliva y, en consecuencia, determinar el momento de la ovulación, se utilizan varios minimicroscopios, que son instrumentos ópticos compactos y livianos que son convenientes para su uso en las condiciones cotidianas.

En los días en que la concepción aún no es posible(5-6 días antes de la ovulación o más) o cuando ya no es posible (3-4 días después de la ovulación), la saliva seca forma un patrón borroso en forma de puntos. 3-4 días antes de la ovulación, se observa una imagen del comienzo de la formación de una estructura del patrón similar a un helecho. A medida que se acerca la ovulación, el patrón se volverá más claro, lo que indica una alta probabilidad de concepción. Dentro de 2-3 días después de la ovulación, la claridad del patrón disminuye.

Los procesos inflamatorios en la cavidad bucal o la laringe pueden provocar resultados distorsionados. Se recomienda utilizar la saliva de la mañana o realizar la prueba no antes de 2 a 3 horas antes de comer, cepillarse los dientes, beber alcohol o fumar.

Si la duración de la existencia de cada patrón microscópico de cristalización tanto del moco cervical como de la saliva, así como su reemplazo por otro patrón, es constante y consistente de acuerdo con las fases del ciclo menstrual, entonces esto indica la ausencia de sus trastornos. y la ovulación ocurre en el momento adecuado y en cada ciclo menstrual. La existencia prolongada del mismo patrón de cristalización, su ausencia o reemplazo prematuro por otro patrón indica una disfunción de los ovarios. En este caso, definitivamente debes consultar a un médico.

Para determinar la ovulación también puedes usar prueba de temperatura, que se basa en que dependiendo de la fase del ciclo menstrual, la temperatura corporal cambia de cierta manera. Los datos más precisos sobre la naturaleza de los cambios térmicos que ocurren se pueden obtener midiendo temperatura en el recto inmediatamente después de dormir, en reposo, sin levantarse de la cama, diariamente durante todo el ciclo menstrual. En la primera fase del ciclo menstrual normal, la temperatura suele ser más baja. 37ºC. Literalmente, en vísperas de la ovulación, disminuye ligeramente e inmediatamente después, la temperatura aumenta entre 0,4 y 0,6 ° C en comparación con la inicial y, por regla general, llega a ser ligeramente superior a 37 ° C. Las fluctuaciones de temperatura que ocurren están asociadas con cambios en los niveles de estrógeno en la primera y segunda fase del ciclo menstrual y un aumento en el nivel. progesterona a la segunda fase. Al mismo tiempo, la progesterona, que comienza a producirse en mayor cantidad en el ovario precisamente después de la ovulación, afecta el centro de termorregulación, lo que conduce a un ligero aumento de la temperatura corporal. Si por alguna razón no se produce la ovulación, la temperatura durante todo el ciclo será aproximadamente la misma.

Como parte de un diagnóstico integral, es posible utilizar métodos para determinar el nivel de hormonas sexuales femeninas (varias fracciones de estrógenos y progesterona), así como hormonas folículoestimulantes y luteinizantes en la sangre. La concentración de estas hormonas cambia de cierta forma de un día a otro dependiendo de las fases del ciclo menstrual, la presencia o ausencia de ovulación.

Mediante ecografía también es posible controlar la formación del folículo, determinar su tamaño y determinar el momento de la ovulación. La presencia de un folículo en maduración en el ovario está indicada por la formación de una cavidad que aumenta gradualmente hasta 2-3 cm de diámetro en la primera mitad del ciclo menstrual y desaparece en la mitad. Los cambios en el tamaño de esta formación, por regla general, están claramente correlacionados con cambios en el patrón de cristalización del moco, con la temperatura en el recto y con el nivel hormonal. Un signo de madurez folicular y el inicio inminente (1,5 - 2 días) de la ovulación según la ecografía es la detección de un tubérculo con huevos, que parece una pequeña formación de color claro adyacente a la superficie interna del folículo. La ovulación está indicada no sólo por la desaparición del folículo, sino también por la aparición simultánea de líquido detrás del útero.

Se cree que la ecografía permite obtener información más confiable sobre la maduración del folículo en comparación con las pruebas hormonales, ya que varios folículos patológicamente inmaduros pueden proporcionar en conjunto un nivel normal de las hormonas que se analizan, lo que creará una impresión falsa del curso normal del ciclo menstrual.

Actualmente, la ecografía es uno de los métodos importantes para controlar el proceso de estimulación de la ovulación y su eficacia. Así, con una estimulación excesiva, se observa un agrandamiento significativo de los ovarios con la formación de múltiples estructuras cavitarias en ellos.

Por tanto, el uso de varios métodos para determinar la ovulación permite controlar la naturaleza del ciclo menstrual y elegir el período más favorable para la concepción durante un embarazo planificado. Utilizando estas pruebas para prevenir embarazos no deseados, puedes elegir la más racional. esquema anticonceptivo o simplemente evitar la actividad sexual en los días en que es más probable la concepción. Con la ayuda de las pruebas enumeradas, también es posible controlar la eficacia del tratamiento destinado a corregir la función menstrual.

Además, con la ayuda de una serie de pruebas sencillas, como medir la temperatura en el recto o evaluar la cristalización de la saliva, una mujer puede controlar de forma independiente su función menstrual.