Хелминтологични методи. Основни методи за изследване на протозоите

Протозоите са разделени на 4 класа:

При енцистиране микроорганизмът придобива заоблена формаи покрити със защитна обвивка. Под формата на киста протозоите стават по-малко податливи на неблагоприятни факторизаобикаляща среда.

Следното може да бъде обект на изследване:

Забележка:Има много видове диагностика, ще разгледаме тези видове, които са най-често срещани в клиничната лабораторна практика.

Индивидуални видове диагностика

Във всеки конкретен случай лаборантът има за задача да открие конкретен патоген, понякога заедно с основния се откриват и други.

Има 6 вида от този микроорганизъм, способен да живее в червата на човека. Клинично значениеИма само дизентерийната амеба, която се среща във вегетативна форма и под формата на цисти.

Освен това се използват имунологични методи:

• индиректна имунофлуоресценция;
• индиректна аглутинация (INA);
• радиална имунодифузия.

Забележка: серологични методиса неинформативни и се използват само като допълнение към основните в съмнителни случаи.

Диагностика на ресничести (ресничести)

Патогенната форма на микроорганизмите от този род е балантидий. Това е микроб, който причинява балантидиаза, заболяване, придружено от язвен процес на дебелото черво. Патогенът се открива в нативната намазка под формата на вегетативна форма и киста. Материалът за намазката (изпражнения и слуз) се взема по време на сигмоидоскопско изследване и се засява върху специални среди.

Диагностика на камшичести (лайшмания, лямблия, трипанозома, трихомонада)

Лайшманията, трипанозомите, ламблиите и трихомонадите са опасни за хората.

Лайшмания– микроби, причиняващи лайшманиоза, се изследват в кръвни натривки, материали костен мозък, изстъргвания от кожни инфилтрати. В някои случаи при диагностициране на лейшмания се използва култура върху хранителни среди.

Трипанозоми– патогени сънна болест(Американска/африканска трипанозомоза или болест на Шагас).

Африканският вариант е дефиниран в начален периодпо време на изследването периферна кръв. С напредване на заболяването патологични микроби се откриват в материала от пункции на лимфни възли, а в напреднал стадий - в цереброспиналната течност.

За диагностициране на трипанозоми, ако има съмнение за болест на Chagas, изследваният материал се изследва под микроскоп при ниско увеличение. В този случай петната и дебелата капка се оцветяват предварително.

Трихомонада(чревни, орални,) се откриват чрез микроскопия на материали, взети от засегнатите лигавици.

Идентифициране на спорозои (малариен плазмодий, причинител на кокцидоза и др.)

Най-често срещаният и опасен вид за хората е маларийният плазмодий, който има 4 основни вида патогени: патоген терциална малария, четиридневна малария, тропическа маларияи малария овална.

Сексуалното развитие на плазмодия (спорогония) протича при комарите Anopheles. Безполов (тъканна и еритроцитна шизогония) – в чернодробната тъкан и еритроцитите на човека. Тези функции жизнен цикълтрябва да се има предвид при диагностицирането на малариен плазмодий.

По този начин в кръвта на новоболен пациент могат да бъдат открити зародишни клетки от спорогониевия цикъл. Но в разгара на маларийните атаки шизонтите се появяват в големи количества в кръвта.

Освен това, в различни фази маларийна трескасе появи различни формиплазмодий:

• по време на студения период кръвта се изпълва с мерозоити, вид шизонт;
• при повишени температури в еритроцитите се натрупват пръстеновидни трофозоити;
• понижаването на температурата се характеризира с преобладаване на амебоподобни трофозоити;
• по време на периоди нормално състояниекръвта съдържа възрастни форми на шизонти.

Изследването на причинителя на маларията (маларичен плазмодий) се извършва в намазка и в дебела капка.

Забележка:Диагнозата на малария чрез изследване на петна и дебели капки кръв понякога е погрешна. Тромбоцитите в кръвта в някои случаи могат погрешно да бъдат приписани на маларийния патоген. Също така понякога фрагменти от левкоцити и други клетки симулират плазмодий.

Основни методи за изследване на протозоите

Нека разгледаме накратко най-често срещаните методи за изследване на наличието на протозои.

Диагностика на протозои чрез нативна цитонамазка и цитонамазка, оцветена с разтвор на Лугол (в изпражнения)

Лекарството се приготвя от емулсия на изпражнения в изотоничен разтвор. Две капки натриев хлор и разтвор на Лугол се нанасят върху предметно стъкло. Тестовият материал се добавя към двата състава с дървена пръчица и след покриване със стъкло се разглежда при различни разделителни способности на микроскопа.

Намерените протозои се записват въз основа на определени характеристики. За точност пригответе 2-3 препарата от един и същи материал. В съмнителни случаи анализът се повтаря няколко пъти в продължение на 2-3 седмици.

Методът може да открие вегетативни и кистозни форми:

• ламблия;
• балантидий;
• дизентерийна амеба.

Наред с патогенните форми се идентифицират и непатогенни протозои. Също здрави носителиима луминални и кистозни форми.

Важно:изследванията трябва да се извършват многократно, за да се избегнат неточности и грешки.

Резултатът от диагностицирането на протозои с помощта на нативния и оцветен метод на намазка трябва да съдържа описание на формата на патогена (луминал, киста, тъкан).

Изисквания за изследване:

• материалът, взет за анализ (течни изпражнения), се изследва не по-късно от 30 минути след дефекацията;
• формализираните изпражнения трябва да бъдат диагностицирани в рамките на 2 часа след дефекация;
• материалът не трябва да съдържа примеси ( дезинфектанти, вода, урина);
• за работа с материала използвайте само дървени пръчки, стъклените не са подходящи поради подхлъзване на слуз;
• Пръчките трябва да се изгорят веднага след употреба.

Метод за запазване (изследване на изпражненията) за диагностициране на протозои

Изследването се извършва чрез фиксиране на протозои с консервант. Разликата между този метод и предишния е, че консервантите ви позволяват да запазите лекарството за дълъг период от време.

Използвани консерванти:

• Бароу. Съдържа консерванти: 0,7 ml натриев хлорид, 5 ml формалин, 12,5 ml 96% алкохол, 2 g фенол и 100 ml дестилирана вода. Състав на оцветителя: 0,01% разтвор на тионин (азура).
• Решението на Сафарлиев. Състав: 1,65 g цинков сулфат, 10 ml формалин, 2,5 g кристален фенол, 5 ml оцетна киселина, 0,2 g метиленово синьо, 100 ml вода. Този консервант се използва в случаите, когато материалът трябва да се съхранява повече от месец.

Празните бутилки се пълнят с консервант, материалът се прехвърля в тях в съотношение 3:1, след което се добавя оцветител, ако е необходимо. Резултатите се оценяват чрез изследване на 2-3 лекарства.

Метод за обогатяване на формалин-етер (анализ за наличие на протозои в изпражненията)

Този диагностичен метод ви позволява да отделите и концентрирате протозойни кисти. За анализа са необходими следните съставки: формалдехид (10 ml), 0,85 g изотоничен разтвор, дестилирана вода, серен етер, разтвор на Лугол.

Сместа от биоматериал с изброените течности се смесва и центрофугира. Получената утайка на дъното на епруветката се оцветява с разтвор на Лугол и се изследва за наличие на цисти и вегетативни форми.

Метод за откриване на лайшмания (намазка от костен мозък)

За диагностициране на лайшманиозата се използват следните реактиви: смес на Никифоров (серен етер и етанол), фосфатен буфер, азур-еозин по Романовски.

Субстанцията от костен мозък се поставя много внимателно върху предметно стъкло след това специално обучение. Използва се микроскоп с имерсионна система.

IN остър периодзаболявания се откриват в пунктата голям бройлейшмания.

Забележка:Понякога кръвни клеткиможе да наподобява преработена лайшмания, така че е много важно лабораторният техник да бъде внимателен и да има достатъчно опит за провеждане на независими изследвания.

Метод за откриване на лайшмания в цитонамазка от кожен инфилтрат

Необходимите реактиви са подобни на предишния анализ.

Материалът за изследване се получава от съществуващото туберкулозно или язвено съдържание. При съмнение за лайшманиоза изстъргването се прави много внимателно със скалпел, без кръв. След това препаратът се приготвя върху стъкло. За да се гарантира точността на получените резултати, няколко препарата се изследват едновременно.

При наличие на заболяването лейшмания се открива и сред макрофагите, фибробластите и лимфоидните клетки, присъстващи в тестовия материал.

Метод за изолиране на чиста култура от лайшмания, получена чрез изстъргване на патологични тъкани

С този метод за диагностициране на протозои тъканните изстъргвания се поставят в специален хранителна среда, при които се извършва активно размножаване на Leishmania.

Преди да вземете остъргването, кожата се третира старателно с алкохол, след което се прави разрез на туберкула, от дъното на което се отстранява съдържанието и се поставя в епруветка със среда. Материалът се взема няколко пъти, след което се поставя в различни епруветки. След това се извършва култивиране в термостат при температура 22-24 градуса. Резултатите се оценяват под микроскоп. Този метод се използва, когато други, по-евтини и бързи начиниДиагностиката на протозоите е неефективна.

Можете да видите как тестовете за наличие на протозои с помощта на капка кръв се дешифрират на практика, като гледате видео прегледа:

Лотин Александър, медицински колумнист

Изпражненията се изследват по два метода:

1. Макроскопичен – откриване на хелминти, техните глави, сегменти, фрагменти от стробили. Малки порции изпражнения се смесват с вода в плоска вана или петриево блюдо и се гледат на добра светлина тъмен фон, като използвате лупа, ако е необходимо. Всички подозрителни образувания се прехвърлят с пинсети в друга чаша с вода или върху предметно стъкло в капка разреден глицерол.

С метода защитавайкиТестовата част от изпражненията се смесва с вода в стъклен цилиндър и след утаяване се отцежда горен слойвода. Това се повтаря няколко пъти. Когато течността стане прозрачна, тя се отцежда и утайката се изследва в петриево блюдо.

2. Микроскопични – за откриване на яйца и ларви на хелминти. Има много методи за изследване.

1). Нативна цитонамазка – най-разпространеният и технически достъпен метод за изследване. Могат да бъдат открити яйца и ларви на всички хелминти. Въпреки това, с малък брой яйца не винаги е възможно да ги намерите. Затова се използва методът на обогатяване.

1). Метод на Фюлеборг – това е метод за обогатяване, базиран на плаване на хелминтозни яйца в наситен разтвор на NaCl (1,2 – плътност; 400 g NaCl на 1 литър вода; 40% разтвор на NaCl). Методът е по-ефективен от нативната цитонамазка. 2-5 g изпражнения се поставят в стъклени буркани и се пълнят с разтвор на NaCl, разбъркват се и след 45 минути се отстранява полученият филм с метална примка, капка глицерин се поставя върху предметно стъкло. Разгледайте под микроскоп. Недостатъкът на метода е бавното появяване на яйца от различни хелминти, тения джудже - след 15-20 минути, кръгли червеи - 1,5 часа, камшичести червеи - 2-3 часа.

2) Метод на Калантарян – също метод за обогатяване, но се използва наситен разтвор на NaNO 3 (плътност 1,38). Повечето яйца плават; не е необходимо изследване на утайката. Недостатъкът е, че задържането на яйца в разтвор за дълго време води до факта, че някои яйца започват да набъбват и се утаяват на дъното, изчезвайки от повърхностния филм.

3. Метод на Горячев – базирани на принципа на отлагане на яйца, откриване малки яйцатрематоди Като разтвор се използва наситен разтвор на NaCl и върху него внимателно се наслояват 3-4 ml разтвор на фекалии. След 15-20 часа яйцата на трематодите се утаяват на дъното. Течността се отцежда и утайката се поставя върху предметно стъкло и под микроскоп.

4. Метод на усукване на Шулман – за откриване на ларви на хелминти в изпражненията. Изследват се само прясно отделени изпражнения. 2-3 г се поставят в стъклен буркан и се добавя 5-кратно количество вода, бързо се разбърква с клечка, без да се докосват стените на буркана - 20-30 минути, след което клечката бързо се отстранява и се капва капка течността в края се прехвърля върху предметно стъкло и се микроскопира.

5. Метод на Берман – се основава на способността на ларвите на хелминтите да мигрират към топлината и служи за идентифицирането им в изпражненията.

6. Метод на Харада и Мори (метод за отглеждане на ларви) и се препоръчва за тестване за инфекции с анкилостоми. Методът се основава на факта, че при топлина и върху влажна филтрирана хартия яйцата на анкилостомите се развиват във филариформни ларви, които могат лесно да бъдат открити. В средата на лента от филтрирана хартия се нанасят 15 g изпражнения, хартията с изпражнения се поставя в буркан, така че долният край да се потопи във вода, а горният край да се закрепи със запушалка. Бурканът се държи в термостат при 28 0 С за 5-6 дни. Филариформните ларви се развиват през това време и се спускат във водата. Течността се изследва под лупа. Ако е трудно да се открие, течността се центрофугира, като първо се убиват ларвите чрез нагряване до 60 0. Лаборантът трябва да носи ръкавици.

7. Методи за ентеробиоза – откриване на яйца на острици и говежда тения.

а) остъргване от перианалните гънки – с памучен тампон, плътно навит на дървена пръчка и навлажнен с 50% разтвор на глицерин. В лабораторията тампонът се измива с 1-2 капки 50% воден разтвор на глицерин.

б) метод на лепкави акари (метод на Греъм)

Адхезивната лента се поставя върху перианалните гънки, след което адхезивният слой се нанася върху предметно стъкло и се изследва под микроскоп.

В) остъргване с очни пръчки (метод на Рабинович). За перианално остъргване се използват стъклени пръчки за очи, чиято широка част е покрита със специално лепило, което позволява да се задържат яйца на острици.

Изследване на кръв, жлъчка, храчки и мускули

Микроскопията на кръвта разкрива ларви на филарии.

Изследване на храчки - яйца на параганим, ларви на кръгли червеи, некатор, стронгилоид, елементи от ехинококов мехур.

Изследване на мускулите - при съмнение за трихинелоза се изследват мускулите на болния или трупа, както и месото, от което се предполага, че е причинило заразата. За целите на трихинелоскопията мускулът се нарязва на малки парчета и се поставя в компресориум, това са две широки дебели стъкла, които смачкват мускулите и се намират ларви на трихинела под формата на капсули - компресионен метод.

Метод на храносмилане - мускулите се пълнят с изкуствен стомашен сок (разтвор на солна киселинаи пепсин). Мускулите се усвояват и ларвите се идентифицират лесно. Определяне на интензивността на инвазията: брой ларви до 200 на 1 g мускулна тъкан– умерена интензивност на инвазията; до 500 – интензивен; над 500 – супер интензивна инвазия.

Серологични методи

Хелминтологични методи за изследване. Методите за диагностициране на хелминтни инфекции се разделят на директни, базирани на директно откриване на самите хелминти или техни фрагменти, както и на ларви и яйца на хелминти (методи за изследване на изпражнения, урина, жлъчка и дуоденално съдържание, храчки, кръв и тъкани, материал получени чрез изстъргване от перианалната област и поднокътните пространства), и индиректни, с помощта на които разкриват вторични промени, възникващи в човешкото тяло в резултат на жизнената активност на хелминтите (изследвания на морфологичния състав на кръвта, имунологични методи за диагностициране на хелминтни инфекции, Рентгенови изследванияи т.н.). От директните методи най-разпространени са скатологичните, които се делят на макро- и микрохелминтоскопски. В някои случаи се използват специални методи.

Макрохелмитоскопски методи на изследваненасочени към търсене на хелминти или техни фрагменти (сколекси, сегменти, части от стробили на цестоди). Те се използват за диагностициране на тези хелминтози, при които яйцата не се екскретират в екскрементите на пациента или се екскретират в малки количества и не винаги (например при ентеробиоза, острици се откриват в изпражненията, при тениаза - сегменти).

За да се открият острици или цестодни сегменти в изпражненията, изпражненията се изследват с просто око. За диференциална диагноза Taeniasis, се препоръчва да се гледат изпражненията, разредени с вода, на отделни малки порции в черни фотографски кювети или в панички на Петри на тъмен фон. Големи образувания, съмнителни за фрагменти от хелминти, се изследват под лупа между две предметни стъкла. Ако според клинични показанияпредполагат откриване на малки хелминти или глави на цестоди след третиране, след това подозрителните частици се изследват под лупа в капка глицерин и, ако е необходимо, под микроскоп.

Микрохелминтоскопски методи на изследване(качествени) са насочени към идентифициране на яйца и ларви на хелминти. Използва се методът на дебелото намазване с целофаново покритие по Kato. Като сместа се състои от 6 мл 3% воден разтвор на малахитово зелено, 500 млглицерин и 500 мл 6% разтвор на фенол. Kato плочи (хидрофилен целофан се нарязва на парчета с размери 20´ 40 мм) потопен за 24 чв сместа Като, така че да са съседни една на друга (3-5 мл Kato разтвор на 100 плаки). 100 мгизпражненията се нанасят върху предметно стъкло, покриват се с целофаново покритие според Като и се притискат надолу, така че изпражненията да се размажат върху предметното стъкло в рамките на целофановата пластина. Намазката се оставя на стайна температура да изсветли с 40-50 мин.,и след това се изследва под микроскоп. В горещия сезон, за да предотвратите изсъхването на препарата, поставете влажна гъба върху чинията на приготвения препарат.

За пълно откриване на хелминти от всички видове трябва да се използва методът за дебело натриване Kato с целофаново покритие в комбинация с един от методите за обогатяване. Най-често срещаните от тях са методът на Калантарян и методът на Фулеборн.

Метод на Калантарян: в бутилки с широко гърло с обем 100 бр млразбъркайте старателно със стъклена пръчка 5 Жизпражнения, като постепенно се добавя наситен разтвор на натриев нитрат (1 килограманатриев нитрат на 1 лвода при кипене) до ръба на чашата. Едрите частици, които изплуват на повърхността, се отстраняват с хартиена лъжичка. Предметно стъкло се поставя върху повърхността на физиологичния разтвор (физиологичният разтвор се добавя, докато сместа влезе в пълен контакт с предметното стъкло). През 20-30г минслайдът се отстранява и филмът се изследва под микроскоп. При липса на тази сол можете да използвате наситен разтвор на готварска сол според Fholleborn (400 Жсол в 1 лвряща вода).

Поради факта, че яйцата имат голям специфично тегло(неоплодени яйца на кръгли червеи, яйца на трематоди и големи цестоди) не плават, в допълнение към изследването на повърхностния слой на течността, когато се използва методът на Fulleborn, е необходимо да се изследват 2-4 препарата от утайката под микроскоп.

Специални лабораторни методи за изследване на различни хелминтози.

За откриване на фрагменти от хелминти, изпражненията се изследват с просто око, след това се смесват с вода и се изследват на малки порции в петриево блюдо на тъмен фон. Всички подозрителни частици се поставят върху предметно стъкло в капка вода и се изследват под лупа. Можете да поставите дневна порция в цилиндър с добавяне на 5-10 пъти количество вода. След разбъркване съдът се оставя до пълното утаяване на суспендираните частици. Повърхностен слойтечности се отцеждат и наливат чиста вода. Измитата утайка се изследва на малки порции с просто око или под лупа. За откриване на яйца се използват микроскопски методи за изследване.

Метод нативна цитонамазка. Малко количество изпражнения от различни местаТестовата порция се смила върху предметно стъкло в капка 50% разтвор на глицерол, изотоничен разтвор на натриев хлорид или вода. Сместа се покрива с покривно стъкло и се гледа под микроскоп.

Плаващ метод на Fulleborn. Една част от изпражненията се смесва с 20 части наситен разтвор на натриев хлорид (специфично тегло 1,18), добавен на малки порции. Едрите частици, които изплуват на повърхността, веднага се отстраняват и сместа се оставя за 45 минути. През това време яйцата на хелминтите, които имат по-ниско специфично тегло от разтвора на натриев хлорид, изплуват на повърхността. Повърхностният филм се отстранява с телена примка с диаметър около 1 cm и се прехвърля върху предметно стъкло за изследване под микроскоп.

Метод на Калантарян. Ефективността на плаващия метод се увеличава, когато натриевият хлорид се замени с наситен разтвор на натриев нитрат. В този случай сместа се държи 10-15 минути.

Повърхностният филм, образуван след утаяване на смес от изпражнения с разтвор на натриев хлорид или натриев нитрат, също може да бъде отстранен с предметно стъкло. За тази цел буркан, напълнен до ръба със смес от изпражнения и солен разтвор, се покрива с предметно стъкло, така че долната му повърхност да е в контакт с течността. След утаяване стъклото се отстранява и бързо се обръща нагоре с повърхността, върху която е разположен филмът, се изследва под микроскоп.

Изстъргването на сперианалните гънки (за идентифициране на яйца от острици и онкосфери от говежда тения) се извършва сутрин преди тоалетна. С помощта на дървена шпатула, потопена във вода или 50% разтвор на глицерин, изстържете наоколо анус. Полученият материал се прехвърля върху предметно стъкло в капка вода или 50% разтвор на глицерол и се разглежда под микроскоп. Шпатулата може да бъде заменена с влажен памучен тампон, който се използва за избърсване на перианалната област, след което се изплаква добре с вода. Водата се центрофугира и утайката се изследва под микроскоп.

Метод на Behrmann (за идентифициране на ларви). Метална мрежа с нанесени върху нея 5-6 g фекалии се фиксира върху стъклена фуния, поставена в статив. В долния край на фунията се поставя гумена тръба със скоба. Фунията се напълва с вода, загрята до t° 50°, така че Долна частмрежата, съдържаща изпражнения, влезе в контакт с водата. Ларвите активно се движат във водата и се натрупват в долната част на гумената тръба. След 4 часа течността се отцежда в центрофужни епруветки, центрофугира се и утайката се изследва под микроскоп.

Анализ на храчки, назална слуз и вагинално течениеза идентифициране на яйца на белодробния трематод paragonimus, ларви на кръгли червеи и анкилостоми, яйца на острици и фрагменти от ехинококов пикочен мехур. Частта от слуз (отделяне), която се изследва, се намазва върху стъкло и се разглежда макроскопски на черен и бял фон и след това под микроскоп. Можете да добавите 25% разтвор на антиформин към тестовия материал, да разклатите добре и да оставите за 1-1,5 часа, за да разтворите слузта. Сместа се центрофугира и утайката се изследва под микроскоп.

Анализ на дванадесетопръстника и стомашен сокза идентифициране на яйца на чернодробни метили, анкилостоми, ларви на Strongyloides. И трите порции дуоденално съдържимо, получени с, се центрофугират и утайката се изследва под микроскоп. Те също проучват.

Изследване на тъкани. За да се идентифицират ларвите на Trichinella, парчета от биопсиран мускул внимателно се разделят на влакна, притискат се между компресорни стъкла (дебели стъкла с винтове) и се изследват под микроскоп на затъмнена светлина. За идентифициране на цистицерци мускулите се дисектират с дисекционни игли, изолираният везикул се изчиства от околната тъкан, притиска се между две предметни стъкла и се изследва под лупа.

Кръвен тест (за откриване на ларви на филарии). Разгледайте висящата капка върху покриващо стъкло, поръбено с вазелин. Можете да смесите 0,3 ml кръв с 10 пъти повече от 3% разтвор. Сместа се центрофугира и утайката се изследва под микроскоп. За обогатяване на лекарства до 1 мл венозна кръвдобавете 3 ml 2% разтвор на формалин или 5 пъти количеството течност, състоящо се от 95 ml 5% разтвор на формалин, 5 ml оцетна киселина и 2 ml концентриран алкохолен разтворхематоксилин. Сместа се центрофугира, утайката се промива с дестилирана вода и се изследва под микроскоп. За разграничаване различни видовефиляриите се изследват чрез петна, оцветени по метода на Гимза-Романовски.

Методи имунологична диагностика. Използват се и алергични диагностични тестове (виж) със съответния тип хелминти (аглутинация, фиксиране на комплемента).

Хелминтологични методи за изследване. Ориз. Яйца от хелминти. 1-10 - яйца кръгли червеи(нематоди): 1 - 3 - кръгли червеи (1 - оплодено яйце, 2 - оплодено яйце без белтък, 3 - неоплодено яйце); 4 - котешки кръгли червеи; 5 - месоядни кръгли червеи; 5 - острици; 7 - камшичен червей; 8 - томинкс; 9 - анкилостома; 10 - трихостронгилид. 11-15 - яйца тения(цестоди): 11 - говежда тения; 12 - джудже тения; 13 - плъх тения; 14 - тиквена тения; 15 широка лента. 16 - 24 - яйца на метили (трематоди): 16 - трематоди (шистозоми) японски; 17 - трематоди (шистозоми) урина - полови; 18 - трематоди (шистозоми) Munson; 19 - трематоди (парогонимус) белодробен; 20 - трематоди (описторхис) сибирски (котешки); 21 - трематоди (clonorchis) chinensis; 22 - чревни трематоди (метагонимус); 23 - трематоди (фасциоли) на черния дроб; 24 - трематоди (дикроцелий) ланцетни.

Ефективен и удобен метод за хелминтологично изследване е изследване на дебела цитонамазка по Kato, чиято същност е да се открият яйца на хелминти в дебела петна от изпражнения, изчистени с глицерин и оцветени с малахитово зелено. Съставът на сместа Kato е 6 ml 3% воден разтвор на малахитово зелено, 500 ml глицерин, 500 ml 6% разтвор на фенол. Разтворът е стабилен и може да се съхранява при стайна температура. За да се приготвят препаратите, парчета изпражнения с размер на грахово зърно се нанасят върху предметно стъкло, покриват се с филм от хидрофилен целофан, който се държи в сместа Kato за 24 часа и се притиска върху стъклото, за да равномерно разпределениематериал. Пречистените за 40-60 минути натривки се изследват под микроскоп. Откритите яйца на хелминти се преброяват и морфологични характеристикиопределя техния вид. Методът ви позволява да идентифицирате яйца от кръгли червеи, камшични червеи, цестоди, трематоди и в по-малка степен анкилостоми и джуджета.

Също така широко използван методи за обогатяване. Принципът на флотационните методи е да се суспендират изпражненията във физиологичен разтвор, който има по-висока относителна плътност в сравнение с яйцата на хелминтите, в резултат на което те изплуват на повърхността. Съдържанието на повърхностния филм се изследва под микроскоп. Като обогатителни смеси се използват следните разтвори: трапезна сол- 400 g в 1 литър вода (относителна плътност по Фулеборн -1,18); натриев нитрат - 1 кг в 1 л вода (относителна плътност по "Калантарян-1,38); натриева селитра - 900 г и калиев нитрат - 400 г в 1 л вода (относителна плътност по Брудастов и Краснонос-1,48). Приготвен разтворите се кипват и охлаждат.
За изследване добавете 5-10 g изпражнения в стъклена или фаянсова чаша, добавете към него 100-200 ml физиологичен разтвор и разбъркайте добре. След това плаващите големи частици се отстраняват с дървена шпатула или лъжичка от хартия или картон и незабавно върху повърхностния филм се нанася широко предметно стъкло, така че физиологичният разтвор и предметното стъкло да са в пълен контакт. След като сместа се остави да престои 30-40 минути, предметното стъкло се отстранява, поставя се под микроскоп с филма нагоре и цялата повърхност се изследва внимателно. За да избегнете изсушаване, можете да добавите 2-3 капки 50% разтвор на глицерин. Повърхностният филм може да се отстрани и с телена примка. Ефективността на флотационните методи се увеличава с увеличаване на относителната плътност солеви разтвори. С помощта на тези методи е възможно да се открият яйца от нематоди, цестоди и трематоди.

За откриване на яйца в изпражненията се използва методът на утаяване на Красилников. Изпражненията се смесват с 1% разтвор на детергент ( прах за пране“Lotus” и др.) в съотношение 1:10 до образуване на суспензия. Под въздействието на детергента различни компоненти на изпражненията (протеини, мазнини, тъканни елементи) се разтварят. След 30 минути съдържанието на епруветката се разклаща за 1-2 минути, след което се центрофугира за 5 минути. От утайката се приготвят препарати, които се изследват под микроскоп.
IN полеви условия, както и по време на масови прегледи на населението за хелминтна инвазия, е удобно да се използва методът на дебелото намазка Като. IN стационарни условияПри изследване на пациенти е за предпочитане да се използват най-ефективните флотационни методи. При използване на тези методи по време на микроскопия е препоръчително да се преброят яйцата, намерени в препарата. Ако пробата или обемът, взет за изследване на изпражненията, е стандартизиран (например 1 чаена лъжица или супена лъжица) и постоянен равномерен обем на физиологичните разтвори, може грубо да се прецени интензивността на инвазиите. Това количествено отчитане може да бъде полезно за обосноваване на предписаното лечение и оценка на ефективността на обезпаразитяването. Освен това могат да се използват други по-точни методи за установяване на интензивността на инфекцията. количествени методи, по-специално методът Stoll.

За диагностика на тениаринхоза и ентеробиозаИзползва се методът за изследване на перианално-ректални остъргвания. С дървена шпатула, напоена с 50% разтвор на глицерин, изстържете перианалните гънки сутрин преди дефекация в обиколката анусИ долни секцииректума. Полученият материал, почистен от шпатула с ръба на покривно стъкло, се поставя върху предметно стъкло в капка 50% разтвор на глицерол, покрива се с покривно стъкло и се изследва под микроскоп. Може да се изследва и лента от целулозна лента, която първо се притиска с адхезивната страна към перинаралните гънки, след което се поставя върху предметно стъкло и се изследва под микроскоп.

Откриване на ларви на нематоди в изпражненията по метода на Берман. Методът се основава на термотропното свойство на ларвите. За изследване вземете 1 супена лъжица изпражнения и ги поставете в метална мрежа или мрежа от няколко слоя марля върху телена рамка. Мрежата е монтирана във фуния, монтирана на статив. Към фунията е прикрепена гумена тръба със скоба. След повдигане на мрежата фунията се напълва с вода (температура +40°...+50°C), така че долната част на мрежата да е потопена във вода. Ларвите от изпражненията активно мигрират към топла водаи, утаявайки се, се натрупват в долната част на фунията. След 2-4 часа скобата се отваря, водата се източва в центрофужна епруветка и се центрофугира за 2-3 минути. След това супернатантната течност се отцежда, утайката се прехвърля върху предметно стъкло и се изследва под микроскоп, където се откриват подвижни ларви на причинителя на стронгилоидозата.

Метод на Харада и Mori прави възможно разграничаването между ларвите на анкилостома и некатор. Ларвите на анкилостомите се култивират върху филтърна хартия. За целта върху ленти от филтърна хартия с размери 12Х1,5 см се нанасят 0,5 g пресни изпражнения, взети от болния не по-късно от 1 час след дефекацията, като двата края на лентата се оставят чисти. Единият край на лентата се потапя в епруветка, една четвърт от която се пълни с вода, а другият се захваща със запушалка. Епруветките се поставят в термостат при температура +26... + 28°C. Ларвите, които се развиват от яйцата, се спускат през филтърната хартия и се утаяват на дъното на епруветката. След 5-6 дни хартиената лента се отстранява и течността, останала в епруветката, се изследва под лупа или се центрофугира. Образуваната при центрофугирането утайка се изследва под светлинен микроскоп. Когато се използва вместо тетраедрични тръби стъклени буркани(размер 15ХХХ7 cm), към чиито стени са прикрепени 4 хартиени ленти, ефективността на анализите се увеличава (G. M. Maruashvili et al., 1966).

Методи за изследване на шистозомиаза . Изследване на изпражнения - порция изпражнения се смесва с 250 мл вода, прецежда се през 3 пласта марля в коничен съд, който се пълни до горе с вода. След 30 минути течният слой се отцежда и към утайката се добавя прясна порция вода. Утайката се промива, докато се получи бистър супернатант и се изследва под микроскоп.

Метод на ларвоскопия - 20-25 g изпражнения се поставят в ерленмайерова колба със стъклена тръба, запоена отстрани, насочена нагоре, и се измиват вода от чешмата. След това колбата се покрива с тъмна хартия, оставяйки запоена стъклена тръба на светлина при температура +25...+30°C. Излюпените мирацидии се концентрират в менискуса в страничната тръба, където могат да се видят с лупа или с просто око. Изследване на урината - 100 ml урина, събрана между 10 и 14 часа, или дневна порция, се утаяват и след това се центрофугират при 1500 rpm. Получената утайка се нанася* върху предметно стъкло и се изследва под микроскоп. СЗО препоръчва метод за филтриране на цялата проба от урина. След филтриране филтрите се третират с формалдехид или се нагряват (за унищожаване на яйцата) и след това се навлажняват воден разтворнинхидрин. В изсушени препарати яйчните ембриони придобиват лилав цвят.

Приложение на имунологични изследователските методи за диагностициране на шистозомиаза са свързани с трудности, тъй като възрастните шистозоми и техните яйца съдържат голям брой антигени, които причиняват имунни реакции, които не са видоспецифични (D. Bradley, 1979).

У нас за производство имунологични реакцииза хелминтоза се освобождава цяла линиястандартна диагностика. Практическа употребаимате алергии кожен тестза ехинококоза и алвеококоза, RLA с ехинококов антиген, RSC на студено, преципитационна реакция на студено в различни модификации (пръстеновидни утайки, утайки в епруветки или капиляри, които се поставят с антигени на трихинелоза, цистицеркоза и мигроаскариоза). Стандартните диагностични комплекти за извършване на горепосочените серологични реакции се произвеждат от предприятия, произвеждащи бактериални препарати. Производителят включва с произвежданите диагностични комплекти подробни инструкцииотносно правилата за съхранение, срока на годност на лекарството и инструкциите за употребата на съответните антигени с техниката на поставяне на реакцията.

IN последните годиниСписъкът на серологичните реакции, използвани за диагностициране на хелминтоза, се разшири значително. За тези цели се използват следните реакции: RIGA, индиректна имунофлуоресценция (RIF), имунодифузия в гел (RID), противоимуноелектрофореза (CIEF), CEMA. Тези реакции могат да се използват при аскариаза, токсокароза, трихинелоза, анкилостомоза, филариаза, ехинококоза и алвеококоза, описторхоза, шистозомиаза, парагонимиаза. За тези реакции обаче у нас не се издават стандартни диагностични тестове и не е регламентирана техниката за диагностицирането им. Отделни лаборатории, предимно научни, самостоятелно подготвят специфични антигени и ги използват в различни модификации. Описанието на тези методи е широко представено в литературата и не е строго унифицирано. Тълкуването на данните от имунологичния анализ трябва да се основава на изучаване на динамиката на имунния отговор, като се вземе предвид нивото на специфичност и чувствителност на всеки използван метод. серологична реакция. Ето защо при поставяне на диагноза, както и по време на сероепидемиологични изследвания на населението, е препоръчително да се използват няколко от най-чувствителните реакции. От тази гледна точка реакциите на VIEF и REMA, които се различават, се доказаха добре висока чувствителности доста висока специфичност (P. Ambroise-Thomas, 1978; I. E. Ballad, 1979; G. M. Negreanu, 1980; A. M. Ponomareva, 1981; A. Ya. Lysenko, 1978 и др.). Ефективността на REMA е тествана за амебиаза, лайшманиоза, трипанозомиаза и токсоплазмоза (G. A. Ermolin, 1980).