Хелминтологични методи. Основни методи за изследване на протозоите

Най-простите са разделени на 4 класа:

По време на енцистацията микроорганизмът придобива кръгла формаи покрит със защитна обвивка. Под формата на киста протозоите стават по-малко податливи на неблагоприятни факторизаобикаляща среда.

Изследването може да включва:

Забележка:Има много разновидности на диагностика, ще разгледаме тези видове, които са най-често срещани в клиничната лабораторна практика.

Индивидуални видове диагностика

Във всеки конкретен случай лаборантът има за задача да открие конкретен патоген, понякога заедно с основния се откриват и други.

Има 6 вида от този микроорганизъм, способен да живее в червата на човека. Клинично значениеима само дизентерийна амеба, открита във вегетативна форма и под формата на цисти.

Освен това се използват имунологични методи:

• индиректна имунофлуоресценция;
• индиректна аглутинация (PHA);
• радиална имунодифузия.

Забележка: серологични методиса неинформативни и се използват само като допълнение към основните в съмнителни случаи.

Диагностика на цилиарни (ресничести)

Патогенната форма на микроорганизмите от този род е балантидия. Това е микроб, който причинява балантидиаза - заболяване, придружено от язвен процес на дебелото черво. Причинителят се открива в нативна цитонамазка под формата на вегетативна форма и киста. Материалът за намазката (изпражнения и слуз) се взема по време на сигмоидоскопско изследване и се засява върху специални среди.

Диагностика на камшичести (лейшмания, лямблия, трипанозоми, трихомонади)

Лайшмания, трипанозома, ламблия, трихомонади са опасни за хората.

Лайшмания- микроби причиняващи лайшманиоза, се изследват в кръвни натривки, материали костен мозък, изстъргвания от кожни инфилтрати. В някои случаи при диагностицирането на лейшмания се използва сеитба върху хранителни среди.

Трипанозоми– патогени сънна болест(Американска/африканска трипанозомоза или болест на Шагас).

Африканската версия е дефинирана в начален периодв изследването периферна кръв. Патологичните микроби по време на прогресията на заболяването се откриват в материала от пункции на лимфните възли, в напредналите стадии - в цереброспиналната течност.

За диагностициране на трипанозоми в случай на съмнение за болест на Chagas, материалът за изследване се изследва под микроскоп при ниско увеличение. В този случай петна и дебела капка са предварително оцветени.

Трихомонада(чревни, орални,) се откриват чрез микроскопия на материали, взети от засегнатите лигавици.

Идентифициране на спорозои (малариен плазмодий, причинител на кокцидоза и др.)

Най-често срещаният и опасен вид за хората е маларийният плазмодий, който има 4 основни разновидности на патогена: патоген тридневна малария, четиридневна малария, тропическа маларияи малария овална.

Сексуалното развитие на плазмодия (спорогония) протича при комарите Anopheles. Асексуални (тъканна и еритроцитна шизогония) – в чернодробната тъкан и човешките еритроцити. Тези функции жизнен цикълтрябва да се има предвид при диагностицирането на малариен плазмодий.

Така че в кръвта на новоболен пациент могат да бъдат открити зародишни клетки от цикъла на спорогония. Но в разгара на маларийните атаки шизонтите се появяват в големи количества в кръвта.

Освен това, в различни фази маларийна трескасе появи различни формиплазмодий:

• по време на периода на студ кръвта е пълна с мерозоити, вид шизонт;
• при висока температура в еритроцитите се натрупват пръстеновидни трофозоити;
• намаляването на температурата се характеризира с преобладаване на амебоидни трофозоити;
• по време на периоди нормално състояниекръвта съдържа възрастни форми на шизонти.

Изследването на причинителя на маларията (маларичен плазмодий) се извършва в намазка и в дебела капка.

Забележка:диагнозата малария при изследване на петна и дебели капки кръв понякога е погрешна. Кръвните тромбоцити в някои случаи могат погрешно да бъдат класифицирани като малариен патоген. Също така фрагменти от левкоцити и други клетки понякога симулират плазмодий.

Основни методи за изследване на протозоите

Нека да разгледаме накратко най-често срещаните методи за изследване на наличието на протозои.

Диагностика на протозои чрез нативна цитонамазка и цитонамазка, оцветена с разтвор на Лугол (в изпражнения)

Лекарството се приготвя от емулсия на изпражнения в изотоничен разтвор. Две капки натриев хлорид и разтвор на Лугол се нанасят върху предметно стъкло. Тестовият материал се добавя към двата състава с дървена пръчица и след като се покрие със стъкло, се гледа при различни разделителни способности на микроскопа.

По определени признаци се регистрират откритите протозои. За точност се приготвят 2-3 препарата от един материал. В съмнителни случаи анализът се повтаря няколко пъти в продължение на 2-3 седмици.

Методът може да открие вегетативни и кистозни форми:

• ламблия;
• балантидия;
• дизентерийна амеба.

Заедно с патогенните форми се определят и непатогенни протозои. Също при здрави носителиима луминални и кистозни форми.

Важно:изследванията трябва да се извършват многократно, за да се избегнат неточности и грешки.

Резултатът от диагностицирането на протозои чрез метода на нативна и оцветена намазка трябва да съдържа описание на формата на патогена (полупрозрачен, киста, тъкан).

Изисквания за изследване:

• материалът, взет за анализ (течни изпражнения), се изследва не по-късно от 30 минути след дефекацията;
• формираните изпражнения трябва да бъдат диагностицирани в рамките на 2 часа след дефекация;
• материалът не трябва да съдържа примеси ( дезинфектанти, вода, урина);
• за работа с материала се използват само дървени пръчки, стъклените не са подходящи поради изплъзване на слузта;
• Пръчките трябва да се изгорят веднага след употреба.

Консервационен метод (изследване на изпражнения) в диагностиката на протозои

Изследването се провежда чрез фиксиране на протозоите с консервант. Разликата между този метод и предишния е, че консервантите ви позволяват да запазите лекарството за дълъг период от време.

Използвани консерванти:

• Бароу. Съдържа консерванти: 0,7 ml натриев хлорид, 5 ml формалин, 12,5 ml 96% алкохол, 2 g фенол и 100 ml дестилирана вода. Състав на оцветителя: 0,01% разтвор на тионин (лазур).
• Решението на Сафарлиев. Състав: 1,65 g цинков сулфат, 10 ml формалин, 2,5 g кристален фенол, 5 ml оцетна киселина, 0,2 g метиленово синьо, 100 ml вода. Този консервант се използва в случаите, когато материалът трябва да се съхранява повече от месец.

Празните бутилки се пълнят с консервант, материалът се прехвърля в тях в пропорции 3: 1, след което, ако е необходимо, се добавя оцветител. Оценката на резултатите се извършва при изследването на 2-3 лекарства.

Метод за обогатяване на формалин-етер (анализ за наличие на протозои в изпражненията)

Този диагностичен метод ви позволява да отделите и концентрирате протозойни кисти. За анализ са необходими следните съставки: формалин (10 ml), 0,85 g изотоничен разтвор, дестилирана вода, серен етер, разтвор на Лугол.

Смес от биоматериал с изброените течности се смесва и центрофугира. Получената утайка на дъното на епруветката се оцветява с разтвор на Лугол и се изследва за наличие на кисти и вегетативни форми.

Метод за откриване на лайшмания (намазка от костен мозък)

За диагностика на лайшманиоза се използват реактиви: смес от Никифоров (серен етер и етанол), фосфатен буфер, азур-еозин по Романовски.

Субстанцията от костен мозък се поставя много внимателно върху предметно стъкло след това специално обучение. Използва се микроскоп с имерсионна система.

IN остър периодзаболявания се откриват в пунктат голям бройлейшмания.

Забележка:Понякога кръвни клеткиможе да прилича на преработена лайшмания, така че е много важно лаборантът да бъде внимателен и да има достатъчно опит за самоизследване.

Метод за откриване на лайшмания в цитонамазка от кожен инфилтрат

Необходимите реагенти са подобни на предишния анализ.

Материалът за изследване се получава от съществуващото туберкулозно или язвено съдържание. Остъргването със съмнение за лайшманиоза се извършва много внимателно със скалпел, без кръв. След това препаратът се приготвя върху стъкло. За точността на получените резултати се изследват едновременно няколко препарата.

При наличие на заболяване сред макрофагите, фибробластите и лимфоидните клетки, присъстващи в тестовия материал, се определя и Leishmania.

Метод за изолиране на чиста култура от лайшмания, получена чрез изстъргване на патологични тъкани

С този метод за диагностициране най-простите тъканни изстъргвания се поставят в специален хранителна среда, при които се извършва активно размножаване на Leishmania.

Преди да вземете остъргване, кожата се третира внимателно с алкохол, след това се прави разрез в туберкула, от дъното на което се отстранява съдържанието и се поставя в епруветка със средата. Материалът се взема няколко пъти, след което се поставя в различни епруветки. След това в термостат при температура 22-24 градуса се извършва култивиране. Резултатите се оценяват под микроскоп. Този метод се използва, когато други, по-евтини и бързи начинидиагностика на протозои е неефективна.

Можете да видите как тестовете за наличие на протозои се дешифрират на практика чрез капка кръв, като гледате видео преглед:

Лотин Александър, медицински колумнист

Изпражненията се изследват по два начина:

1. Макроскопичен - намерете хелминти, техните глави, сегменти, остатъци от стробили. Малки порции изпражнения се смесват с вода в плоска тава или петриево блюдо и се гледат на добра светлина тъмен фонс помощта на лупа, ако е необходимо. Всички подозрителни образувания се прехвърлят с пинсети в друга чаша с вода или върху предметно стъкло в капка разреден глицерин.

С метода поддържанеизследваната част от изпражненията се разбърква с вода в стъклен цилиндър, след утаяване се отцежда горен слойвода. Това се повтаря няколко пъти. Когато течността стане прозрачна, тя се отцежда и утайката се гледа в петриево блюдо.

2. Микроскопични - за откриване на яйца и ларви на хелминти. Има много методи за изследване.

1). нативна цитонамазка - най-често срещаният и технически достъпен метод за изследване. Можете да намерите яйца и ларви на всички хелминти. Въпреки това, с малък брой яйца, те не винаги се намират. Затова се използва методът на обогатяване.

1). Метод на Фюлеборг - това е метод за обогатяване, базиран на появата на хелминтозни яйца в наситен разтвор на NaCl (1,2 - плътност; 400 g NaCl на 1 литър вода; 40% разтвор на NaCl). Методът е по-ефективен от нативната цитонамазка. 2-5 g изпражнения се поставят в стъклени буркани и се пълнят с разтвор на NaCl, разбъркват се и след 45 минути образуваният филм се отстранява с метална примка, капка глицерол се поставя върху предметно стъкло. Разгледайте под микроскоп. Недостатъкът на метода е забавянето на появата на яйца от различни хелминти, джудже тения - след 15-20 минути, кръгли червеи - 1,5 часа, камшичести червеи - 2-3 часа.

2) Метод на Калантарян - също метод за обогатяване, но се използва наситен разтвор на NaNO 3 (плътност 1,38). Повечето от яйцата плуват, не е необходимо изследване на утайката. Недостатъкът е, че яйцата се държат в разтвор за дълго време, което води до факта, че някои яйца започват да набъбват и се утаяват на дъното, изчезвайки от повърхностния филм.

3. Метод на Горячев – базирани на принципа на отлагане на яйца, откриване малки яйцатрематоди. Като разтвор се използва наситен разтвор на NaCl и отгоре внимателно се наслояват 3-4 ml разтвор на фекалии. След 15-20 часа яйцата на трематодите се утаяват на дъното. Течността се отцежда, утайка върху предметно стъкло и под микроскоп.

4. Метод на усукване на Шулман – за откриване на ларви на хелминти в изпражненията. Изследвайте само прясно изолирани изпражнения. 2-3 гр. се поставят в стъклен буркан и се налива 5 пъти по-голямо количество вода, бързо се разбърква с клечка, без да се докосват стените на буркана - 20-30 минути, след което клечката бързо се отстранява и се капва капка. течността в края се прехвърля върху предметно стъкло и се микроскопира.

5. Метод на Берман - въз основа на способността на ларвите на хелминтите да мигрират към топлина и служи за идентифицирането им в изпражненията.

6. Метод на Харада и Мори (метод на отглеждане на ларви) и се препоръчва за изследване за анкилостомия. Методът се основава на факта, че при топлина и върху влажна филтрирана хартия яйцата на анкилостомите се развиват във филариформни ларви, които могат лесно да бъдат открити. В средата на лента от филтрирана хартия се нанасят 15 г изпражнения, хартията с изпражненията се поставя в буркан, като долният край се потапя във вода, а горният край се закрепва с тапа. Бурканът се държи в термостат при 28 0 С за 5-6 дни. Филариформните ларви се развиват през това време и се спускат във водата. Течността се изследва под лупа. Ако е трудно да се открие, течността се центрофугира, след унищожаване на ларвите чрез нагряване до 60 0. Лаборантът трябва да носи ръкавици.

7. Методи за ентеробиоза – откриване на яйца на острици и бича тения.

а) остъргване от перианалните гънки - с памучен тампон, плътно навит върху дървена пръчка и навлажнен с 50% разтвор на глицерин. В лабораторията тампонът се измива с 1-2 капки 50% воден разтвор на глицерол.

б) метод на лепкави акари (метод на Греъм)

Адхезивната лента се поставя върху перианалните гънки, след това с лепкав слой върху предметното стъкло и се микроскопира.

В) остъргване с пръчици за очи (метод на Рабинович). За перианално остъргване се използват стъклени клечки за очи, чиято най-широка част е покрита със специално лепило, което позволява да се задържат яйцата на острици.

Изследване на кръв, жлъчка, храчки и мускули

Микроскопия на кръвта - откриват се ларви на филарии.

Изследване на храчки - яйца на параганим, ларви на аскариди, некатор, стронгилоид, елементи от ехинококов мехур.

Изследване на мускулите - при съмнение за трихинелоза се изследват мускулите на болния или трупа, както и месото, за което се предполага, че е причинило заразяването на човека. За целите на трихинелоскопията мускулът се нарязва на малки парчета и се поставя в компресори, това са две широки дебели стъкла, които смачкват мускулите и се намират ларви на трихинела под формата на капсули - методът на компресия.

Метод на храносмилане - мускулите се наливат с изкуствен стомашен сок (разтвор на солна киселинаи пепсин). Мускулите се усвояват и ларвите се идентифицират лесно. Определяне на интензивността на инвазията: броят на ларвите до 200 на 1 g мускулна тъкан– умерена интензивност на инвазията; до 500 - интензивно; над 500 - суперинтензивна инвазия.

Серологични методи

Хелминтологични методи за изследване. Методите за диагностициране на хелминтиазите са разделени на директни, базирани на директното откриване на самите хелминти или техни фрагменти, както и на ларви и яйца на хелминти (методи за изследване на изпражнения, урина, жлъчка и дуоденално съдържание, храчки, кръв и тъкани, материал, получен чрез изстъргване от перианалната област и поднокътните пространства), и индиректни, с помощта на които разкриват вторични променивъзникващи в човешкото тяло в резултат на жизнената активност на хелминтите (изследвания на морфологичния състав на кръвта, имунологични методи за диагностициране на хелминтози, рентгенови изследванияи т.н.). От директните методи най-разпространени са копрологичните, които се делят на макро- и микрохелминтоскопия. В някои случаи се използват специални методи.

Макрогелмитоскопски методи за изследваненасочени към търсене на хелминти или техни фрагменти (сколекси, сегменти, части от стробили на цестоди). Те се използват за диагностициране на тези хелминтиази, при които яйцата не се екскретират с екскрементите на пациента или се екскретират в малки количества и не винаги (например при ентеробиоза, острици се откриват в изпражненията, при тениидози, сегменти).

За да се открият острици или сегменти от цестоди в изпражненията, изпражненията се гледат с просто око. За диференциална диагноза taeniasis, се препоръчва да се гледат изпражненията, разредени с вода, на отделни малки порции в черни фотографски кювети или в панички на Петри на тъмен фон. Големи образувания, подозрителни за фрагменти от хелминти, се изследват под лупа между две предметни стъкла. Ако от клинични показанияпредполагат откриване на малки хелминти или глави на цестоди след третиране, след това подозрителните частици се изследват под лупа в капка глицерол и, ако е необходимо, под микроскоп.

Микрохелминтоскопски методи за изследване(качествени) са насочени към идентифициране на яйца и ларви на хелминти. Приложете метода на дебелото намазване с целофанова покривна плоча според Kato. Като блендът се състои от 6 мл 3% воден разтвор на малахитово зелено, 500 млглицерин и 500 мл 6% разтвор на фенол. Kato плочи (хидрофилен целофан, нарязан на парчета 20´ 40 мм) се потапят на 24 чв сместа Като, така че да са съседни една на друга (3-5 млРазтвор на Kato за 100 чинии). 100 мгизпражненията се нанасят върху предметно стъкло, покриват се с целофаново покритие според Като и се притискат надолу, така че изпражненията да се размажат върху предметното стъкло в целофановата пластина. Намазката се оставя на стайна температура за избистряне на 40-50 мин.,и след това се гледа под микроскоп. В горещия сезон, за да се предотврати изсъхването на препарата, върху чинията на приготвения препарат се поставя влажна гъба.

За пълно откриване на всички видове хелминти трябва да се използва методът за дебело намазване с целофанова покривна плоча Kato заедно с един от методите за обогатяване. Най-често срещаните от тях са методът на Калантарян и методът на Фюлеборн.

Метод на Калантарян: в колби с широко гърло от 100 млразбъркайте старателно със стъклена пръчка 5 Жизпражнения, като постепенно се добавя наситен разтвор на натриев нитрат (1 килограманатриев нитрат на 1 лвода при кипене) до ръба на чашата. Едрите частици, изплували на повърхността, се отстраняват с хартиена лъжичка. Предметно стъкло се нанася върху повърхността на физиологичния разтвор (физиологичен разтвор се добавя, докато сместа влезе в пълен контакт с предметното стъкло). След 20-30 минПредметното стъкло се отстранява и филмът се гледа под микроскоп. При липса на тази сол можете да използвате наситен разтвор на готварска сол според Fholleborn (400 Жсол в 1 лвряща вода).

Поради факта, че яйцата с голям специфично тегло(неоплодени яйца на аскариди, яйца на трематоди и големи цестоди), не плават, в допълнение към изследването на повърхностния слой на течността, когато се използва методът на Fülleborn, е необходимо да се видят 2-4 препарата от утайката под микроскоп .

Специални лабораторни методи за изследване на различни хелминтози.

За да се открият фрагменти от хелминти, изпражненията се разглеждат голи, след това се смесват с вода и се изследват на малки порции в петриево блюдо на тъмен фон. Всички подозрителни частици се поставят върху предметно стъкло в капка вода и се изследват под лупа. Можете да поставите дневната порция в цилиндър с добавяне на 5-10 пъти количество вода. След разбъркване съдът се оставя до пълното утаяване на суспендираните частици. Повърхностен слойналиване и наливане на течности чиста вода. Промитата утайка се разглежда на малки порции с просто око или под лупа. За откриване на яйца се използват микроскопски методи за изследване.

Метод нативна цитонамазка. Малко количество изпражнения различни местатестовата част се стрива върху предметно стъкло в капка 50% разтвор на глицерол, изотоничен разтвор на натриев хлорид или вода. Сместа се покрива с покривно стъкло и се гледа под микроскоп.

Плаващ метод на Fülleborn. Една част от изпражненията се смесва с 20 части наситен разтвор на натриев хлорид (специфично тегло 1,18), добавен на малки порции. Едрите частици, изплували на повърхността, веднага се отстраняват и сместа се оставя за 45 минути. През това време яйцата на хелминтите, които имат по-ниско специфично тегло от разтвора на натриев хлорид, изплуват на повърхността. Повърхностният филм се отстранява с телена примка с диаметър около 1 cm и се прехвърля върху предметно стъкло за изследване под микроскоп.

Метод на Калантарян. Ефективността на плаващия метод се повишава чрез замяна на натриевия хлорид с наситен разтвор на натриев нитрат. В този случай сместа се държи 10-15 минути.

Повърхностният филм, образуван след утаяване на смес от изпражнения с разтвор на натриев хлорид или натриев нитрат, също може да бъде отстранен с предметно стъкло. За тази цел буркан, напълнен до ръба със смес от изпражнения със солен разтвор, се покрива с предметно стъкло, така че долната му повърхност да е в контакт с течността. След утаяване стъклото се отстранява и бързо се обръща повърхността, върху която е разположен филмът, се разглежда под микроскоп.

Остъргването на сперианалните гънки (за идентифициране на яйца от острици и онкосфери от говежда тения) се извършва сутрин преди тоалетна. С дървена шпатула, потопена във вода или в 50% разтвор на глицерин, изстържете наоколо анус. Полученият материал се прехвърля върху предметно стъкло в капка вода или 50% разтвор на глицерол и се гледа под микроскоп. Шпатулата може да бъде заменена с влажен памучен тампон, който се използва за избърсване на перианалната област, след което се изплаква добре с вода. Водата се центрофугира и утайката се изследва под микроскоп.

Метод на Берман (за откриване на ларви). Метална мрежа, покрита с 5-6 g изпражнения, се фиксира върху стъклена фуния, поставена в стойка. В долния край на фунията се поставя гумена тръба със скоба. Фунията се пълни с вода, загрята до t ° 50 °, така че Долна частмрежи с изпражнения са били в контакт с вода. Ларвите активно се движат във водата и се натрупват в долната част на гумената тръба. След 4 часа течността се спуска в центрофужни епруветки, центрофугира се и утайката се изследва под микроскоп.

Анализ на храчки, назална слуз и вагинално течениеза откриване на яйца от белодробен трематоден парагонимус, ларви на аскариди и анкилостоми, яйца на острици, фрагменти от ехинококов пикочен мехур. Изследваната порция слуз (секрет) се намазва върху стъкло и се гледа макроскопски на черно-бял фон, а след това под микроскоп. Можете да добавите 25% разтвор на антиформин към тестовия материал, разклатете добре и задръжте за 1-1,5 часа, за да разтворите слузта. Сместа се центрофугира и утайката се изследва под микроскоп.

Анализ на дванадесетопръстника и стомашен сокза откриване на яйца на чернодробен метил, анкилостома, ларви на Strongyloides. И трите порции от дуоденалното съдържимо, получени с, се центрофугират и утайката се изследва под микроскоп. Също така проучете и.

Изследване на тъкани. За да се идентифицират ларвите на Trichinella, парчета от биопсирания мускул внимателно се разделят на влакна, притискат се между компресорни стъкла (дебели стъкла с винтове) и се изследват под микроскоп със засенчена светлина. За идентифициране на цистицерци мускулите се разслояват с дисекционни игли, изолираната везикула се почиства от околната тъкан, притиска се между две предметни стъкла и се изследва под лупа.

Кръвен тест (за откриване на ларви на филарии). Висяща капка се изследва върху покривно стъкло, покрито с вазелин. Можете да смесите 0,3 ml кръв с 10 пъти повече от 3% разтвор. Сместа се центрофугира и утайката се изследва под микроскоп. За обогатяване на препарати до 1 мл венозна кръвдобавете 3 ml 2% разтвор на формалин или 5 пъти количеството течност, състояща се от 95 ml 5% разтвор на формалин, 5 ml оцетна киселина и 2 ml концентриран алкохолен разтворхематоксилин. Сместа се центрофугира, утайката се промива с дестилирана вода и се изследва под микроскоп. За разграничаване различни видове filariae изследват петна, оцветени по метода на Giemsa-Romanovsky.

Методи имунологична диагностика. Приложете (аглутинация, фиксиране на комплемента) и алергични диагностични тестове (вижте) със съответния тип хелминти.

Хелминтологични методи за изследване. Ориз. Яйца от хелминти. 1-10 - яйца кръгли червеи(нематоди): 1 - 3 - кръгли червеи (1 - оплодено яйце, 2 - оплодено яйце без белтъчна обвивка, 3 - неоплодено яйце); 4 - котешки кръгъл червей; 5 - месоядни кръгли червеи; 5 - острици; 7 - камшичен удар; 8 - томинкс; 9 - анкилостома; 10 - трихо-стронгилид. 11-15 - яйца тения(цестоди): 11 - говежда тения; 12 - тения джудже; 13 - плъх тения; 14 - кратуна тения; 15 - широка лента. 16 - 24 - яйца на метили (трематоди): 16 - трематоди (шистозоми) японски; 17 - трематоди (шистозоми) урина - полови; 18 - трематоди (шистозоми) Munson; 19 - трематоди (парогонимус) белодробен; 20 - трематоди (описторхис) сибирски (котешки); 21 - трематоди (clonorchis) китайски; 22 - чревни трематоди (метагонимус); 23 - трематоди (фасциоли) на черния дроб; 24 - трематоди (дикроцелий) ланцетни.

Ефективен и удобен метод за хелминтологично изследване е изследване на дебела цитонамазка по Kato, чиято същност е откриването на яйца на хелминти в дебела намазка от изпражнения, избистрена с глицерин и оцветена с малахитово зелено. Съставът на сместа Kato е 6 ml 3% воден разтвор на малахитово зелено, 500 ml глицерин, 500 ml 6% разтвор на фенол. Разтворът е стабилен и може да се съхранява при стайна температура. За да се приготвят препарати, парчета изпражнения с размер на грахово зърно се нанасят върху предметно стъкло, покриват се с филм от хидрофилен целофан, оставен в смес Като за 24 часа, и се притискат към стъклото за равномерно разпределениематериал. Намазки, избистрени за 40-60 минути, се изследват под микроскоп. Откритите яйца на хелминти се преброяват и морфологични особеностиопределя техния вид. Методът позволява да се разкрият яйцата на ascaris, камшичен червей, цестоди, трематоди, в по-малка степен - анкилостома и малка тения.

Също така широко използван методи за обогатяване. Принципът на флотационните методи е да се суспендират фекалиите във физиологичен разтвор, който има по-висока относителна плътност в сравнение с яйцата на хелминтите, в резултат на което те изплуват на повърхността. Съдържанието на повърхностния филм се изследва под микроскоп. Разтворите се използват като смеси за обогатяване: трапезна сол- 400 g в 1 литър вода (относителна плътност по Fülleborn -1,18); натриев нитрат - 1 кг в 1 л вода (относителна плътност по Калантарьян-1,38); натриев нитрат - 900 г и калиев нитрат - 400 г в 1 л вода (относителна плътност по Брудастов и Краснонос-1,48). разтворите са сварени и охладени.
За изследване 5-10 g изпражнения се добавят към чаша или фаянсово стъкло, към него се добавят 100-200 ml физиологичен разтвор и се разбъркват добре. След това големите частици, които са се появили на повърхността, се отстраняват с дървена шпатула или лъжичка от хартия или картон и незабавно върху повърхностния филм се поставя широко предметно стъкло, така че физиологичният разтвор и предметното стъкло да са в пълен контакт. След 30-40 минути утаяване на сместа предметното стъкло се отстранява, поставя се под микроскоп с филма нагоре и цялата повърхност се оглежда внимателно. За да избегнете изсушаване, можете да добавите 2-3 капки 50% разтвор на глицерин. Повърхностният филм може да се отстрани и с телена примка. Ефективността на флотационните методи се увеличава с увеличаване на относителната плътност солеви разтвори. С помощта на тези методи е възможно да се открият яйца от нематоди, цестоди и трематоди.

За откриване на яйца във фекалиите се използва методът на утаяване на Красилников.. Фекалиите се смесват с 1% разтвор на препарат ( прах за пране"Lotus" и др.) в съотношение 1:10 до образуване на суспензия. Под въздействието на детергента се разтварят различни компоненти на изпражненията (протеини, мазнини, тъканни елементи). След 30 минути съдържанието на епруветката се разклаща за 1-2 минути, след което се центрофугира за 5 минути. Препаратите се приготвят от утайката и се разглеждат под микроскоп.
IN полеви условия, както и при масови проучвания на населението за хелминтна инвазия, е удобно да се използва методът на дебелото намазване Като. IN стационарни условияпри изследване на пациенти е за предпочитане да се използват най-ефективните флотационни методи. При използване на тези методи по време на микроскопия е препоръчително да се преброят яйцата, намерени в препарата. При спазване на стандартното тегло или обем, взет за изследване на изпражненията (например 1 чаена лъжица или супена лъжица) и постоянен единичен обем физиологични разтвори, може грубо да се прецени интензивността на инвазиите. Този количествен запис може да бъде полезен при обосноваване на предписаното лечение и оценка на ефективността на обезпаразитяването. Освен това могат да се използват и други по-точни методи за определяне на интензивността на инфекцията. количествени методи, по-специално методът Stoll.

За диагностика на тениаринхоза и ентеробиозаприлагат метода за изследване на перианално-ректални изстъргвания. С дървена шпатула, потопена в 50% разтвор на глицерин, се прави остъргване от перианалните гънки сутрин преди дефекация в кръг анусИ по-ниски дивизииректума. Полученият материал, почистен с шпатула от ръба на покривното стъкло, се поставя върху предметно стъкло в капка 50% разтвор на глицерол, покрива се с покривно стъкло и се изследва под микроскоп. Можете също така да разгледате лента от целулозна лента, която първо се притиска с лепилна страна към пернаналните гънки, след което се поставя върху предметно стъкло и се микроскопира.

Откриване на ларви на нематоди във фекалиите по метода на Берман. Методът се основава на термотропното свойство на ларвите. За изследване се взема 1 супена лъжица изпражнения, поставени в метална мрежа или мрежа от няколко слоя марля върху телена рамка. Решетката е монтирана във фуния, фиксирана в статив. Към фунията се присъединява гумена тръба със скоба. Повдигайки мрежата, фунията се напълва с вода (температура +40°...+50°C), така че долната част на мрежата да е потопена във вода. Ларвите от изпражненията активно мигрират към топла водаи, утаявайки се, се натрупват на дъното на фунията. След 2-4 часа скобата се отваря, водата се спуска в центрофужна епруветка и се центрофугира за 2-3 минути. След това супернатантата се отцежда, утайката се прехвърля върху предметно стъкло и се гледа под микроскоп, където се откриват подвижни ларви на патогена на стронгилоидозата.

Метод на Харад и Mori позволява да се разграничат ларвите на анкилостомите и некаторите. Ларвите на анкилостомите се култивират върху филтърна хартия. За целта върху ленти филтърна хартия с размери 12Х1,5 см се нанасят 0,5 g пресни изпражнения, взети от болния не по-късно от 1 час след дефекацията, като двата края на лентата се оставят чисти. Единият край на лентата се потапя в епруветка, чиято четвърта част се пълни с вода, а другата се затяга с тапа. Тръбите се поставят в термостат при температура от +26 ... + 28°C. Ларвите, които са се развили от яйцата, се спускат по филтърната хартия и се утаяват на дъното на епруветката. След 5-6 дни хартиената лента се отстранява и течността, останала в епруветката, се изследва под лупа или се центрофугира. Образуваната при центрофугирането утайка се изследва под светлинен микроскоп. Когато се използва вместо тетраедрични епруветки стъклени буркани(с размери 15XYX7 cm), към чиито стени са прикрепени 4 хартиени ленти, ефективността на анализите се увеличава (G. M. Maruashvili et al., 1966).

Методи за изследване на шистозомиаза . Изследване на изпражнения - порция изпражнения се смесва с 250 мл вода, прецежда се през 3 пласта марля в коничен съд, който се пълни до горе с вода. След 30 минути течният слой се отцежда, към утайката се добавя прясна порция вода. Утайката се промива до получаване на бистър супернатант и се изследва под микроскоп.

Метод на ларвоскопия - 20-25 g изпражнения се поставят в ерленмайерова колба със запоена отстрани стъклена тръба и се измиват вода от чешмата. След това колбата се покрива с тъмна хартия, оставяйки запоената стъклена тръба на светлина при температура +25...+30°C. Излюпените мирацидии се концентрират в менискуса в страничната тръба, където могат да се видят с лупа или с просто око. Изследване на урина - 100 ml урина се събират между 10 и 14 часа или дневната порция се отстоява, след което се центрофугира на 1500 rpm. Получената утайка се нанася* върху предметно стъкло и се микроскопира. СЗО препоръчва метод за филтриране на цялата порция урина. След филтриране филтрите се обработват с формалин или се нагряват (за унищожаване на яйцата) и след това се навлажняват. воден разтворнинхидрин. В изсушени препарати яйчните ембриони придобиват лилав цвят.

Използването на имунологични изследователските методи за диагностициране на шистозомиаза са трудни, тъй като възрастните шистозоми и техните яйца съдържат голям брой антигени, които причиняват имунни реакции, които не са видоспецифични (D. Bradley, 1979).

У нас за постановка имунологични реакциис произведена хелминтоза цяла линиястандартна диагностика. Практическа употребаимате алергия кожен тестза ехинококоза и алвеококоза, RLA с ехинококов антиген, CSC на студено, преципитационна реакция на студено в различни модификации (пръстеновидни утайки, утайки в епруветки или капиляри, които се поставят с антигени на трихинелоза, цистицеркоза и мигроаскариоза). Стандартни диагностикуми за поставяне на горните серологични реакции се изработват от предприятия, произвеждащи бактериални препарати. Производителят прикрепя към произведените диагностикуми подробни инструкцииотносно правилата за съхранение, сроковете на годност на лекарството и инструкциите за използването на подходящи антигени с техниката за настройка на реакцията.

IN последните годинисписъкът на серологичните тестове, използвани за диагностициране на хелминтиази, се разшири значително. За тази цел се използват следните реакции: RIGA, индиректна имунофлуоресценция (RIF), гел имунодифузия (RID), контра имуноелектрофореза (VIEF), REAMA. Тези реакции могат да се използват при аскариаза, токсокароза, трихинелоза, анкилостомоза, филариаза, ехинококоза и алвеококоза, описторхоза, шистозомиаза, парагонимиаза. За тези реакции обаче у нас не се издават стандартни диагностикуми и не е регламентирана техниката за поставянето им. Отделни лаборатории, предимно научни, подготвят свои специфични антигени и ги използват в различни модификации. Описанието на тези методи е широко представено в литературата и не е строго унифицирано. Интерпретацията на имунологичните данни трябва да се основава на изследване на динамиката на имунния отговор, като се вземе предвид нивото на специфичност и чувствителност на всеки приложен серологична реакция. Ето защо при поставяне на диагноза, както и по време на сероепидемиологични изследвания на населението, е препоръчително да се използват няколко от най-чувствителните реакции. От тази гледна точка реакциите VIEF и REMA, които се различават висока чувствителности достатъчно висока специфичност (P. Ambroise-Thomas, 1978; I. E. Ballad, 1979; G. M. Negryanu, 1980; A. M. Ponomareva, 1981; A. Ya. Lysenko, 1978 и др.). Ефективността на REAMA е тествана при амебиаза, лайшманиоза, трипанозомиаза и токсоплазмоза (GA Ermolin, 1980).