Metode helmintologice. Metode de cercetare de bază pentru protozoare

Cele mai simple sunt împărțite în 4 clase:

În timpul enchistației, microorganismul dobândește forma rotunda si acoperit cu o manta de protectie. Sub formă de chist, protozoarele devin mai puțin sensibile la factori nefavorabili mediu inconjurator.

Cercetarea poate include:

Notă:Există o mulțime de varietăți de diagnosticare, vom lua în considerare acele tipuri care sunt cele mai comune în practica clinică de laborator.

Tipuri private de diagnosticare

În fiecare caz specific, asistentul de laborator este însărcinat să găsească un anumit agent patogen, uneori alții sunt găsiți împreună cu cel principal.

Există 6 specii ale acestui microorganism capabile să trăiască în intestinul uman. Semnificație clinică are doar ameba dizenterică, întâlnită sub formă vegetativă și sub formă de chisturi.

În plus, se folosesc metode imunologice:

• imunofluorescență indirectă;
• aglutinare indirectă (PHA);
• imunodifuzie radială.

Notă: metode serologice sunt neinformative și sunt folosite doar ca adaos la cele principale în cazuri îndoielnice.

Diagnosticul ciliar (ciliat)

Forma patogenă a microorganismelor din acest gen este balantidia. Acesta este un microb care provoacă balantidiaza - o boală însoțită de un proces ulcerativ al intestinului gros. Agentul cauzal se găsește într-un frotiu nativ sub forma unei forme vegetative și a unui chist. Materialul pentru frotiu (fecale și mucus) este prelevat în timpul unui examen sigmoidoscopic și semănat pe medii speciale.

Diagnosticarea flagelatelor (leishmania, giardia, tripanozomii, trichomonadele)

Leishmania, tripanosomul, giardia, trichomonadele sunt periculoase pentru oameni.

Leishmania- microbi provocând leishmanioză, sunt examinate în frotiuri de sânge, materiale măduvă osoasă, zgârieturi de la infiltrate cutanate. În unele cazuri, în diagnosticul Leishmania se folosește însămânțarea pe medii nutritive.

Tripanozomi– agenți patogeni boala somnului(Tripanosomiaza americană/africană sau boala Chagas).

Versiunea africană este definită în perioada initialaîn studiu sânge periferic. Microbii patologici în timpul progresiei bolii se găsesc în materialul de puncție a ganglionilor limfatici, în stadii avansate - în lichidul cefalorahidian.

Pentru a diagnostica tripanozomii în caz de suspiciune a bolii Chagas, materialul de testat este examinat la microscop la o mărire mică. În acest caz, frotiurile și o picătură groasă sunt pre-pătate.

Trichomonas(intestinale, orale) sunt detectate prin microscopie a materialelor prelevate din mucoasele afectate.

Identificarea sporozoarelor (plasmodul malaric, agentul cauzal al coccidozei etc.)

Cea mai comună și periculoasă specie pentru oameni este plasmodiul malaric, care are 4 soiuri principale de agent patogen: patogen malarie de trei zile, malarie de patru zile, malarie tropicalăși ovalul malariei.

Dezvoltarea sexuală a Plasmodium (sporogonie) are loc la țânțarii Anopheles. Asexual (schizogonie tisulară și eritrocitară) - în țesutul hepatic și eritrocitele umane. Aceste caracteristici ciclu de viață trebuie luate în considerare în diagnosticul plasmodiului malaric.

Deci, în sângele unui pacient nou bolnav, pot fi găsite celule germinale ale ciclului de sporogonie. Dar la apogeul atacurilor de malarie, schizoții apar în număr mare în sânge.

Mai mult, în diferite faze febra malarica apărea diferite forme Plasmodium:

• în perioada de frig, sângele este umplut cu merozoiți, un fel de schizont;
• la înălțimea temperaturii, trofozoiții în formă de inel se acumulează în eritrocite;
• scăderea temperaturii se caracterizează prin predominanța trofozoiților amiboizi;
• pe perioade stare normală sângele conține forme adulte de schizonți.

Studiul agentului cauzal al malariei (plasmodul malaric) se efectuează într-un frotiu și într-o picătură groasă.

Notă:diagnosticul de malarie în studiul frotiurilor și picăturilor groase de sânge este uneori eronat. Trombocitele din sânge, în unele cazuri, pot fi clasificate în mod eronat ca agent patogen al malariei. De asemenea, fragmentele de leucocite și alte celule simulează uneori plasmodiul.

Metode de cercetare de bază pentru protozoare

Să aruncăm o scurtă privire asupra celor mai comune metode de cercetare pentru prezența protozoarelor.

Diagnosticul protozoarelor folosind un frotiu nativ și un frotiu colorat cu soluție Lugol (în fecale)

Medicamentul este preparat dintr-o emulsie de fecale într-o soluție izotonă. Două picături de clorură de sodiu și soluție Lugol sunt aplicate pe o lamă de sticlă. Materialul de testat este adăugat la ambele compoziții cu un băț de lemn și, după ce a fost acoperit cu sticlă, este vizualizat la diferite rezoluții ale microscopului.

După anumite semne, protozoarele găsite sunt înregistrate. Pentru acuratețe, se prepară 2-3 preparate dintr-un singur material. În cazurile îndoielnice, analiza se repetă de mai multe ori pe parcursul a 2-3 săptămâni.

Metoda poate detecta formele vegetative și chistice:

• lamblia;
• balantidia;
• ameba dizenteriei.

Împreună cu formele patogene se determină și protozoarele nepatogene. De asemenea la purtători sănătoși există forme luminale și chistice.

Important:cercetarea pentru a evita inexactitățile și erorile ar trebui efectuată în mod repetat.

Rezultatul diagnosticului de protozoare prin metoda unui frotiu nativ și colorat ar trebui să conțină o descriere a formei agentului patogen (translucid, chist, țesut).

Cerințe de cercetare:

• materialul luat pentru analiză (fecale lichide) este examinat nu mai târziu de 30 de minute după defecare;
• fecalele formate trebuie diagnosticate în 2 ore după defecare;
• materialul nu trebuie să conțină impurități ( dezinfectante, apă, urină);
• pentru a lucra cu materialul se folosesc doar bețe de lemn, cele de sticlă nu sunt potrivite din cauza alunecării mucusului;
• Bețișoarele trebuie arse imediat după utilizare.

Metoda de conservare (examinarea fecalelor) în diagnosticul protozoarelor

Studiul se realizează prin fixarea protozoarelor cu un conservant. Diferența dintre această metodă și cea anterioară este că conservanții vă permit să păstrați medicamentul pentru o perioadă lungă de timp.

Conservanti folositi:

• Barrow. Conține ingrediente conservante: 0,7 ml clorură de sodiu, 5 ml formol, 12,5 ml alcool 96%, 2 g fenol și 100 ml apă distilată. Compoziție colorantă: 0,01% soluție de tionină (azur).
• Soluția lui Safarliev. Ingrediente: 1,65 g sulfat de zinc, 10 ml formol, 2,5 g fenol cristalin, 5 ml acid acetic, 0,2 g albastru de metilen, 100 ml apă. Acest conservant este utilizat în cazurile în care materialul trebuie păstrat mai mult de o lună.

Sticlele goale sunt umplute cu un conservant, materialul este transferat în ele, în proporții de 3: 1, apoi, dacă este necesar, se adaugă un colorant. Evaluarea rezultatelor se realizează în studiul a 2-3 medicamente.

Metoda de îmbogățire cu formol-eter (analiza prezenței protozoarelor în fecale)

Această metodă de diagnosticare vă permite să separați și să concentrați chisturile protozoare. Următoarele ingrediente sunt necesare pentru analiză: formol (10 ml), 0,85 g soluție izotonă, apă distilată, eter sulfuric, solutie Lugol.

Un amestec de biomaterial cu lichidele enumerate este amestecat și centrifugat. Precipitatul obţinut la fundul tubului se colorează cu soluţie Lugol şi se examinează pentru prezenţa chisturilor şi a formelor vegetative.

Metoda de detectare a Leishmania ( frotiu de măduvă osoasă)

Pentru diagnosticarea leishmaniozei se folosesc reactivi: un amestec de Nikiforov (eter sulfuric și etanol), tampon fosfat, Azur-eozin conform Romanovsky.

Substanța măduvei osoase se așează foarte atent pe o lamă de sticlă după antrenament special. Se folosește un microscop cu sistem de imersie.

ÎN perioada acuta bolile se găsesc la punctate un numar mare de leishmania.

Notă:Uneori celule de sânge poate semăna cu leishmania procesată, de aceea este foarte important ca tehnicianul de laborator să fie atent și să aibă suficientă experiență pentru autoexaminare.

Metodă de depistare a leishmaniei într-un frotiu dintr-un infiltrat cutanat

Reactivii necesari sunt similari cu testul anterior.

Materialul de testat este obținut din conținutul de tuberculi sau ulcerații existente. Razuirea cu suspiciune de leishmanioza se face foarte atent cu bisturiul, fara sange. Apoi preparatul se prepară pe sticlă. Pentru acuratețea rezultatelor obținute se examinează simultan mai multe preparate.

În prezența unei boli, printre macrofage, fibroblaste și celule limfoide prezente în materialul de testat, se determină și Leishmania.

Metodă de izolare a unei culturi pure de Leishmania obţinută prin răzuirea ţesuturilor patologice

Cu această metodă de diagnosticare cele mai simple răzuire de țesut sunt plasate într-un special mediu nutritiv, în care are loc reproducerea activă a Leishmania.

Înainte de a lua o răzuire, pielea este tratată cu atenție cu alcool, apoi se face o incizie în tubercul, de pe fundul căreia se scoate conținutul și se pune într-o eprubetă cu mediu. Materialul este luat de mai multe ori, după care este pus în diferite eprubete. Apoi, într-un termostat la o temperatură de 22-24 de grade, are loc cultivarea. Rezultatele sunt evaluate la microscop. Această metodă este folosită atunci când altele, mai ieftine și moduri rapide diagnosticul protozoarelor este ineficient.

Puteți vedea cum testele pentru prezența protozoarelor sunt descifrate în practică printr-o picătură de sânge, urmărind o recenzie video:

Lotin Alexander, editorialist medical

Scaunele sunt examinate în două moduri:

1. Macroscopic - găsiți helminți, capetele lor, segmente, resturi de strobili. Porțiuni mici de fecale sunt amestecate cu apă într-o tavă plată sau în vase Petri și văzute în lumină bună pe fundal întunecat folosind o lupă dacă este necesar. Toate formațiunile suspecte sunt transferate cu o pensetă într-o altă cană de apă sau pe o lamă de sticlă într-o picătură de glicerină diluată.

Cu metoda sustinerea porțiunea investigată de fecale se amestecă cu apă într-un cilindru de sticlă, după decantare, se scurge strat superior apă. Acest lucru se repetă de mai multe ori. Când lichidul devine transparent, acesta este scurs, iar sedimentul este văzut într-o cutie Petri.

2. Microscopic - pentru a detecta ouăle și larvele de helminți. Există multe metode de cercetare.

1). frotiu nativ - metoda de cercetare cea mai comună și disponibilă tehnic. Puteți găsi ouă și larve ale tuturor helminților. Cu toate acestea, cu un număr mic de ouă, acestea nu se găsesc întotdeauna. Prin urmare, se utilizează metoda de îmbogățire.

1). metoda Fülleborg - aceasta este o metodă de îmbogățire, bazată pe apariția ouălor de helmintiază într-o soluție saturată de NaCl (1,2 - densitate; 400 g NaCl la 1 litru de apă; soluție NaCl 40%). Metoda este mai eficientă decât frotiul nativ. 2-5 g de fecale se pun în borcane de sticlă și se umplu cu soluție de NaCl, se agită, iar după 45 de minute pelicula formată se îndepărtează cu o buclă de metal, se pune o picătură de glicerină pe o lamă de sticlă. Examinați la microscop. Dezavantajul metodei este apariția întârziată a ouălor diverșilor helminți, tenia pitică - după 15-20 de minute, viermi rotunzi - 1,5 ore, viermi bici - 2-3 ore.

2) Metoda Kalantaryan - tot o metodă de îmbogățire, dar se folosește o soluție saturată de NaNO 3 (densitate 1,38). Majoritatea ouălor plutesc, nu este necesară examinarea sedimentului. Dezavantajul este că ouăle sunt ținute în soluție timp îndelungat, ceea ce duce la faptul că unele ouă încep să se umfle și să se așeze pe fund, dispărând din pelicula de suprafață.

3. Metoda lui Goriaciov – bazat pe principiul depunerii ouălor, detectării ouă mici trematode. O soluție saturată de NaCl este utilizată ca soluție și 3-4 ml de soluție de fecale sunt stratificate cu grijă deasupra. După 15-20 de ore, ouăle de trematode se așează pe fund. Se scurge lichidul, se sedimentează pe o lamă de sticlă și la microscop.

4. Metoda de răsucire Shulman – pentru a detecta larvele de helminți în fecale. Examinați numai fecalele proaspăt izolate. Se pun 2-3 g într-un borcan de sticlă și se toarnă de 5 ori cantitatea de apă, se amestecă rapid cu un bețișor, fără a atinge pereții borcanului - 20-30 de minute, apoi se scoate rapid bețișorul, iar o picătură de lichid la sfârșit se transferă pe o lamă de sticlă și se microscopează.

5. Metoda Berman - se bazează pe capacitatea larvelor de helminți de a migra către căldură și servește la identificarea lor în fecale.

6. Metoda lui Harada și Mori (metoda de creștere a larvelor) și este recomandată pentru testarea anchilostomiei. Metoda se bazează pe faptul că, la căldură și pe hârtie filtrată umedă, ouăle de anchilostoma se dezvoltă în larve filariforme, care pot fi ușor detectate. Pe mijlocul unei benzi de hârtie filtrată se aplică 15 g de fecale, hârtia cu fecale se pune într-un borcan, astfel încât capătul inferior să fie scufundat în apă, iar capătul superior să fie fixat cu un dop. Borcanul se tine intr-un termostat la 28 0 C timp de 5-6 zile. Larvele filariforme se dezvoltă în acest timp și coboară în apă. Lichidul este examinat sub o lupă. Dacă este dificil de detectat, lichidul este centrifugat, după uciderea larvelor prin încălzire la 60 0. Tehnicianul de laborator trebuie să poarte mănuși.

7. Metode pentru enterobiaza – detectarea ouălor de oxiuri și tenia taurului.

a) răzuire din pliurile perianale - cu un tampon de vată înfășurat strâns pe un băț de lemn și umezit cu o soluție de glicerină 50%. În laborator, tamponul este spălat cu 1-2 picături dintr-o soluție apoasă 50% de glicerină.

b) metoda acarienilor lipicios (metoda Graham)

Banda adezivă se aplică pe pliurile perianale, apoi cu un strat lipicios pe lama de sticlă și se microscopează.

C) răzuire cu ajutorul bețișoarelor de ochi (metoda lui Rabinovici). Pentru răzuirea perianală, se folosesc bețișoare de ochi de sticlă, cea mai largă parte a cărora este acoperită cu un adeziv special, care face posibilă ținerea ouălor de oxiuri.

Examinarea sângelui, bilei, sputei și mușchilor

Microscopie sanguină - sunt detectate larve de filarii.

Examinarea sputei - ouă de paraganim, larve de viermi rotunzi, necator, strongiloid, elemente ale vezicii echinococice.

Examinarea mușchilor - dacă se suspectează trichineloza, se examinează mușchii pacientului sau cadavrul, precum și carnea care ar fi cauzat infecția persoanei. În scopul trichinoscopiei, mușchiul este tăiat în bucăți mici și plasat în compresoare, acestea sunt două pahare largi și groase care zdrobesc mușchii, iar larvele de Trichinella se găsesc sub formă de capsule - metoda compresiei.

Metoda de digestie - mușchii sunt turnați cu suc gastric artificial (soluție de acid clorhidricși pepsină). Mușchii sunt digerați și larvele sunt ușor de detectat. Determinarea intensității invaziei: numărul de larve până la 200 la 1 g tesut muscular– intensitate moderată a invaziei; până la 500 - intensiv; peste 500 - invazie superintensiva.

Metode serologice

Metode de cercetare helmintologică. Metodele de diagnosticare a helmintiazelor sunt împărțite în directe, bazate pe detectarea directă a helminților înșiși sau a fragmentelor acestora, precum și a larvelor și ouălor de helminți (metode de examinare a fecalelor, urinei, bilei și conținutului duodenal, spută, sânge și țesuturi, material obținut prin răzuire indirectă și subregiune sub-spațială) modificări secundare care apar în corpul uman ca urmare a activității vitale a helminților (studii ale compoziției morfologice a sângelui, metode imunologice de diagnosticare a helmintiazelor, studii cu raze X etc.). Dintre metodele directe, cele mai frecvente sunt coprologice, care sunt împărțite în macro- și microhelmintoscopia. În unele cazuri, se folosesc metode speciale.

Metode de cercetare în macrogelmitoscopie care vizează căutarea helminților sau a fragmentelor acestora (scolex, segmente, părți ale strobilei cestodelor). Ele sunt folosite pentru a diagnostica acele helmintiază în care ouăle nu sunt excretate cu excrementele pacientului sau sunt excretate în cantitate mică și nu întotdeauna (de exemplu, cu enterobiaza, oxiurii se găsesc în fecale, cu teniidoze, segmente).

Pentru a detecta oxiuri sau segmente de cestode în fecale, fecalele sunt privite cu ochiul liber. Pentru diagnostic diferentiat taeniasis, se recomandă vizualizarea fecalelor diluate cu apă în porții mici separate în cuve fotografice negre sau în vase Petri pe un fundal întunecat. Formatiunile mari suspecte de fragmente de helminti sunt examinate sub lupa intre doua lame de sticla. Dacă prin indicatii clinice sugerează detectarea helminților mici sau a capetelor de cestode după tratament, apoi particulele suspecte sunt examinate sub o lupă într-o picătură de glicerol și, dacă este necesar, la microscop.

Metode de cercetare în microhelmintoscopie(calitative) au ca scop identificarea ouălor și larvelor de helminți. Aplicați metoda de frotiu gros cu o placă de acoperire din celofan conform Kato. Amestecul Kato este format din 6 ml Soluție apoasă 3% de verde de malachit, 500 ml glicerină și 500 ml Soluție de fenol 6%. Placi Kato (celofan hidrofil tăiat în bucăți de 20´40 mm) sunt scufundate la 24 hîn amestecul Kato, astfel încât să fie adiacente unul altuia (3-5 ml soluția lui Kato pentru 100 de farfurii). 100 mg fecalele sunt aplicate pe o lamă de sticlă, acoperite cu o placă de acoperire din celofan conform Kato și presate astfel încât fecalele să fie mânjite pe lama de sticlă din placa de celofan. Frotiu este lăsat la temperatura camerei pentru clarificare cu 40-50 min,și apoi privit la microscop. În sezonul cald, pentru a preveni uscarea preparatului, pe farfuria preparatului preparat se pune un burete umed.

Pentru detectarea completă a tuturor tipurilor de helminți, metoda de acoperire a plăcii de celofan Kato trebuie utilizată împreună cu una dintre metodele de îmbogățire. Cele mai comune dintre acestea sunt metoda Kalantaryană și metoda Fülleborn.

Metoda Kalantaryană: în baloane cu gât larg de 100 ml se amestecă bine cu o baghetă de sticlă 5 G fecale, adăugând treptat o soluție saturată de azotat de sodiu (1 kg azotat de sodiu la 1 l apa la fierbere) pe marginea paharului. Particulele mari care au plutit la suprafață sunt îndepărtate cu o linguriță de hârtie. Se aplică o lamă de sticlă pe suprafața soluției saline (se adaugă soluție salină până când amestecul este în contact complet cu lama de sticlă). După 20-30 min Lama de sticlă este îndepărtată și filmul este vizualizat la microscop. În absența acestei săruri, puteți folosi o soluție saturată de sare de masă conform Fholleborn (400 G sare in 1 l apă clocotită).

Datorită faptului că ouăle cu o mare gravitație specifică(ouă nefertilizate de ascaride, ouă de trematode și cestode mari), nu plutesc, pe lângă examinarea stratului de suprafață al lichidului, atunci când se utilizează metoda Fülleborn, este necesar să se vizualizeze 2-4 preparate din sediment la microscop.

Metode speciale de cercetare de laborator pentru diferite helmintiază.

Pentru a detecta fragmente de helminți, fecalele sunt văzute goale, apoi amestecate cu apă și examinate în porții mici într-o cutie Petri pe un fundal întunecat. Toate particulele suspecte sunt plasate pe o lamă de sticlă într-o picătură de apă și examinate cu o lupă. Poți pune porția zilnică într-un cilindru cu adaos de 5-10 ori cantitatea de apă. După agitare, vasul este lăsat până la sedimentarea completă a particulelor în suspensie. Strat de suprafață turnarea si turnarea lichidelor apă curată. Precipitatul spălat este privit în porțiuni mici cu ochiul liber sau sub lupă. Pentru detectarea ouălor se folosesc metode de examinare microscopică.

Metoda frotiului nativ. O cantitate mică de fecale locuri diferite porțiunea de testat se triturează pe o lamă de sticlă într-o picătură de soluție de glicerol 50%, soluție izotonică de clorură de sodiu sau apă. Amestecul este acoperit cu o lametă și vizualizat la microscop.

Metoda plutitoare a lui Fülleborn. O parte din fecale este amestecată cu 20 de părți dintr-o soluție saturată de clorură de sodiu (gravitate specifică 1,18), adăugată în porții mici. Particulele mari care au plutit la suprafață sunt imediat îndepărtate, iar amestecul este lăsat timp de 45 de minute. În acest timp, ouăle de helminți, având o greutate specifică mai mică decât soluția de clorură de sodiu, plutesc la suprafață. Filmul de suprafață este îndepărtat cu o buclă de sârmă de aproximativ 1 cm în diametru și transferat pe o lamă de sticlă pentru examinare la microscop.

Metoda Kalantariană. Eficiența metodei plutitoare este crescută prin înlocuirea clorurii de sodiu cu o soluție saturată de azotat de sodiu. În acest caz, amestecul se păstrează timp de 10-15 minute.

Filmul de suprafață format după decantarea unui amestec de fecale cu o soluție de clorură de sodiu sau azotat de sodiu poate fi îndepărtat și cu o lamă de sticlă. În acest scop, un borcan umplut până la refuz cu un amestec de fecale cu o soluție de sare este acoperit cu o lamă de sticlă, astfel încât suprafața sa inferioară să fie în contact cu lichidul. După decantare, sticla este îndepărtată și, răsturnând rapid suprafața pe care se află filmul, este privită la microscop.

Razuirea pliurilor sperianale (pentru a identifica ouale de oxiuri si oncosferele de tenia bovina) se face dimineata inainte de a face toaleta. Cu o spatulă de lemn înmuiată în apă sau într-o soluție de glicerină 50%, răzuiți în jur anus. Materialul rezultat este transferat pe o lamă de sticlă într-o picătură de apă sau soluție de glicerol 50% și vizualizat la microscop. Spatula poate fi înlocuită cu un tampon de bumbac umed, care este folosit pentru a șterge zona perianală, apoi clătiți bine cu apă. Apa este centrifugată și precipitatul este examinat la microscop.

Metoda lui Bermann (pentru detectarea larvelor). O plasă metalică acoperită cu 5-6 g de fecale este fixată pe o pâlnie de sticlă introdusă într-un suport. Un tub de cauciuc cu o clemă este pus la capătul inferior al pâlniei. Pâlnia este umplută cu apă încălzită la t ° 50 °, astfel încât Partea de jos plasele cu fecale erau în contact cu apa. Larvele se deplasează activ în apă și se acumulează în partea inferioară a tubului de cauciuc. După 4 ore, lichidul este coborât în ​​tuburi de centrifugă, centrifugat, iar precipitatul este examinat la microscop.

Analiza sputei, mucusului nazal și scurgeri vaginale pentru a detecta ouă de trematod pulmonar paragonimus, larve de ascaride și anchilostome, ouă de oxiuri, fragmente de vezică echinococică. Porțiunea de mucus (secreții) examinată este unsă pe sticlă și vizualizată macroscopic pe un fundal alb-negru și apoi la microscop. Puteți adăuga o soluție de 25% de antiformină la materialul de testat, agitați bine și mențineți timp de 1-1,5 ore pentru a dizolva mucusul. Amestecul este centrifugat și precipitatul este examinat la microscop.

Analiza duodenală și suc gastric pentru a detecta ouăle de dorloat hepatic, anchilostoma, larvele de Strongyloides. Toate cele trei porțiuni ale conținutului duodenal obținut cu sunt centrifugate și sedimentul este examinat la microscop. De asemenea, explorați și.

Studiul țesuturilor. Pentru a identifica larvele de Trichinella, bucăți din mușchiul biopsiat sunt împărțite cu grijă în fibre, strânse între pahare compresoare (pahare groase cu șuruburi) și examinate la microscop cu lumină umbrită. Pentru a identifica cisticercii, mușchii sunt stratificați cu ace de disecție, vezicula izolată este curățată de țesutul din jur, strânsă între două lame de sticlă și examinată cu lupa.

Test de sânge (pentru detectarea larvelor de filarie). O picătură agățată este examinată pe o lamelă tăiată cu vaselină. Puteți amesteca 0,3 ml de sânge cu o cantitate de 10 ori mai mare decât o soluție de 3%. Amestecul este centrifugat și precipitatul este examinat la microscop. Pentru îmbogățirea preparatelor la 1 ml sânge venos adăugați 3 ml de soluție de formol 2% sau de 5 ori cantitatea de lichid constând din 95 ml de soluție de formol 5%, 5 ml de acid acetic și 2 ml de concentrat soluție alcoolică hematoxilina. Amestecul este centrifugat, precipitatul este spălat cu apă distilată și examinat la microscop. Pentru diferențiere tipuri diferite filariae examinează frotiurile colorate după metoda Giemsa-Romanovsky.

Metode diagnosticul imunologic. Aplicați (aglutinare, fixarea complementului) și teste de diagnostic alergic (vezi) cu din tipul corespunzător de helmint.

Metode de cercetare helmintologică. Orez. Ouă de helminți. 1-10 - ouă viermi rotunzi(nematode): 1 - 3 - viermi rotunzi (1 - un ou fecundat, 2 - un ou fecundat fără înveliș proteic, 3 - un ou nefertilizat); 4 - viermi rotunzi feline; 5 - carnivore de viermi rotunzi; 5 - oxiuri; 7 - lovitura de bici; 8 - tominx; 9 - anchilostoma; 10 - trico-strongilid. 11-15 - ouă tenii(cestode): 11 - tenia bovină; 12 - pitic tenia; 13 - tenia de șobolan; 14 - tenia de tărtăcuță; 15 - panglică lată. 16 - 24 - ouă de trematode (trematode): 16 - trematode (schistozomi) japoneze; 17 - trematode (schistozomi) urina - sexuale; 18 - trematode (schistozomi) Munson; 19 - trematode (parogonim) pulmonare; 20 - trematode (opisthorchis) siberiene (feline); 21 - trematode (clonorchis) chinezești; 22 - trematode intestinale (metagonimus); 23 - trematode (fasciole) ale ficatului; 24 - trematode (dicrocelium) lanceolate.

O metodă eficientă și convenabilă de cercetare helmintologică este studiul unui frotiu gros conform lui Kato, a cărei esență este detectarea ouălor de helminți într-un frotiu gros de fecale, limpezite cu glicerină și colorate cu verde malachit. Compoziția amestecului Kato este de 6 ml de soluție apoasă 3% de verde de malachit, 500 ml de glicerină, 500 ml de soluție de fenol 6%. Soluția este stabilă și poate fi păstrată la temperatura camerei. Pentru prepararea preparatelor, bucăți de fecale de mărimea unui bob de mazăre sunt aplicate pe o lamă de sticlă, acoperite cu o peliculă de celofan hidrofil maturat într-un amestec Kato timp de 24 de ore și presate pe sticlă pentru distributie uniforma material. Frotiurile clarificate timp de 40-60 de minute sunt examinate microscopic. Se numără ouăle de helminți detectate și caracteristici morfologice determina specia lor. Metoda permite dezvăluirea ouălor de ascaris, tricoc, cestode, trematode, într-o măsură mai mică - anchilostoma și tenia pigmee.

De asemenea, utilizat pe scară largă metode de îmbogățire. Principiul metodelor de flotație este suspendarea fecalelor într-o soluție salină, care are o densitate relativă mai mare în comparație cu ouăle de helminți, drept urmare acestea plutesc la suprafață. Conținutul filmului de suprafață este examinat la microscop. Soluțiile sunt utilizate ca amestecuri de îmbogățire: sare de masă- 400 g în 1 litru de apă (densitate relativă conform Fülleborn -1,18); azotat de sodiu - 1 kg în 1 litru de apă (densitate relativă conform Kalantaryan-1,38); azotat de sodiu - 900 g și azotat de potasiu - 400 g în 1 litru de apă (densitate relativă conform Brudastov și Krasnonos-1,48). Soluțiile preparate se fierb și se răcesc.
Pentru cercetare, se adaugă 5-10 g de fecale într-un pahar sau un pahar de faianță, se adaugă 100-200 ml de soluție salină și se amestecă bine. Apoi, particulele mari care au ieșit la suprafață sunt îndepărtate cu o spatulă de lemn sau o linguriță din hârtie sau carton și o lamă largă de sticlă este aplicată imediat pe filmul de suprafață, astfel încât soluția salină și lama de sticlă să fie în contact complet. După 30-40 de minute de decantare a amestecului, lama de sticlă se îndepărtează, se pune la microscop cu filmul în sus și se examinează cu atenție întreaga suprafață. Pentru a evita uscarea, puteți adăuga 2-3 picături dintr-o soluție de glicerină 50%. Filmul de suprafață poate fi îndepărtat și cu o buclă de sârmă. Eficiența metodelor de flotație crește pe măsură ce densitatea relativă crește soluții saline. Folosind aceste metode, este posibilă detectarea ouălor de nematode, cestode și trematode.

Pentru a detecta ouăle în fecale, se utilizează metoda de sedimentare Krasilnikov.. Fecalele sunt amestecate cu o soluție de detergent 1% ( detergent„Lotus”, etc.) într-un raport de 1:10 până când se formează o suspensie. Sub influența detergentului, se dizolvă diverse componente ale fecalelor (proteine, grăsimi, elemente tisulare). După 30 de minute, conținutul tubului este agitat timp de 1-2 minute, după care este centrifugat timp de 5 minute. Preparatele sunt preparate din sediment și vizualizate la microscop.
ÎN condiţiile de teren, precum și în anchetele în masă ale populației pentru infestarea cu helminți, este convenabil să se folosească metoda de frotiu gros Kato. ÎN condiții staționare la examinarea pacientilor este de preferat sa se foloseasca cele mai eficiente metode de flotatie. Atunci când utilizați aceste metode în timpul microscopiei, este indicat să numărați ouăle găsite în preparat. În funcție de greutatea sau volumul standard luat pentru studiul fecalelor (de exemplu, 1 linguriță sau lingură) și un singur volum constant de soluții saline, se poate aprecia aproximativ intensitatea invaziilor. Această înregistrare cantitativă poate fi utilă în fundamentarea tratamentului prescris și evaluarea eficacității deparazitării. În plus, se pot folosi și alte metode mai precise pentru a determina intensitatea infecției. metode cantitative, în special metoda Stoll.

Pentru diagnosticul teniarinhozei și enterobiazei aplică metoda de cercetare a răzuirilor perianal-rectale. Cu o spatulă de lemn înmuiată într-o soluție de glicerină 50%, se face o răzuire din pliurile perianale dimineața înainte de defecare în cerc. anusȘi diviziuni inferioare rect. Materialul rezultat, curățat cu o spatulă de marginea lamului de acoperire, se pune pe o lamă de sticlă într-o picătură de soluție de glicerol 50%, se acoperă cu o lamă și se examinează la microscop. De asemenea, puteți examina o bandă de bandă de celuloză, care este mai întâi presată cu o parte adezivă pe pliurile pernanale, apoi plasată pe o lamă de sticlă și microscopată.

Detectarea larvelor de nematod în fecale prin metoda Berman. Metoda se bazează pe proprietatea termotropă a larvelor. Pentru cercetare se ia 1 lingură de fecale, plasată într-o plasă metalică sau o plasă din mai multe straturi de tifon pe un cadru de sârmă. Grila este instalată într-o pâlnie fixată într-un trepied. Un tub de cauciuc cu o clemă se unește cu pâlnia. Ridicand plasa, palnia se umple cu apa (temperatura +40°...+50°C) astfel incat partea inferioara a plasei sa fie scufundata in apa. Larvele din fecale migrează activ spre apa caldași, depunându-se, se acumulează în partea de jos a pâlniei. După 2-4 ore, clema este deschisă, apa este coborâtă într-un tub de centrifugă și centrifugată timp de 2-3 minute. Apoi supernatantul este drenat, sedimentul este transferat pe o lamă de sticlă și vizualizat la microscop, unde se găsesc larve mobile ale agentului patogen de strongiloidiază.

metoda Harad și Mori permite diferențierea larvelor de viermi anchilostomos și necatori. Larvele de vierme sunt cultivate pe hârtie de filtru. În acest scop, 0,5 g de fecale proaspete prelevate de la pacient nu mai târziu de 1 oră după defecare se aplică pe benzi de hârtie de filtru de dimensiunea 12X1,5 cm, lăsând ambele capete ale benzii curate. Un capăt al benzii este scufundat într-o eprubetă, a patra parte din care este umplută cu apă, iar cealaltă este prinsă cu un dop. Tuburile sunt plasate într-un termostat la o temperatură de +26 ... + 28°C. Larvele care s-au dezvoltat din ouă coboară de-a lungul hârtiei de filtru și se așează pe fundul eprubetei. După 5-6 zile, banda de hârtie este îndepărtată, iar lichidul rămas în eprubetă este examinat sub lupă sau centrifugat. Precipitatul format în timpul centrifugării este examinat la microscop cu lumină. Când se utilizează în locul eprubetelor tetraedrice borcane de sticla(dimensiunea 15XYX7 cm), pe pereții cărora sunt atașate 4 benzi de hârtie, eficiența analizelor crește (G. M. Maruashvili și colab., 1966).

Metode de cercetare pentru schistosomiaza . Examinarea fecalelor - o porțiune de fecale se amestecă cu 250 ml de apă, se filtrează prin 3 straturi de tifon într-un vas conic, care se umple până la vârf cu apă. După 30 de minute, stratul lichid este scurs, se adaugă o porție proaspătă de apă la precipitat. Precipitatul este spălat până când se obține un supernatant limpede și examinat microscopic.

Metoda larvoscopiei - 20-25 g de fecale se pun intr-un balon Erlenmeyer cu un tub de sticla lipit pe lateral si spalat apă de la robinet. Apoi balonul este acoperit cu hârtie de culoare închisă, lăsând tubul de sticlă lipit la lumină la o temperatură de +25...+30°C. Miracidiile eclozate sunt concentrate la menisc din tubul lateral, unde pot fi văzute cu lupa sau cu ochiul liber. Examinarea urinei - 100 ml de urină se colectează între orele 10 și 14, sau se decontează porția zilnică, apoi se centrifughează la 1500 rpm. Precipitatul rezultat este aplicat* pe o lamă de sticlă și microscopat. OMS recomandă o metodă de filtrare a întregii porțiuni de urină. După filtrare, filtrele sunt tratate cu formol sau încălzite (pentru a ucide ouăle) și apoi umezite. soluție apoasă ninhidrina. În preparatele uscate, embrionii de ou capătă o culoare violet.

Utilizarea imunologice metodele de cercetare pentru diagnosticarea schistosomiazei sunt dificile, deoarece schistozomii adulți și ouăle lor conțin un număr mare de antigeni care cauzează reacții imune, care nu sunt specifice speciei (D. Bradley, 1979).

La noi pentru montare reacții imunologice cu helmintiaza se produce întreaga linie diagnostice standard. Uz practic ai o alergie test de piele pentru echinococoză și alveococoză, RLA cu antigen echinococic, RSK la rece, reacție de precipitare la rece în diverse modificări (precipitare inelară, precipitare în eprubete sau capilare, care se pun cu antigene de trichineloză, cisticercoză și migroascariază). Diagnosticele standard pentru stabilirea reacțiilor serologice de mai sus sunt realizate de întreprinderile producătoare de preparate bacteriene. Producătorul se atașează la diagnosticele fabricate instrucțiuni detaliate privind regulile de păstrare, datele de expirare ale medicamentului și instrucțiunile privind utilizarea antigenelor adecvate cu tehnica de stabilire a reacției.

ÎN anul trecut lista testelor serologice utilizate pentru diagnosticul helmintiazelor s-a extins semnificativ. În acest scop, se folosesc următoarele reacții: RIGA, imunofluorescență indirectă (RIF), imunodifuzie în gel (RID), contraimunoelectroforeză (VIEF), REAMA. Aceste reacții pot fi utilizate pentru ascariază, toxocaroză, trichineloză, infecții cu anchilostomia, filarioză, echinococoză și alveococoză, opistorhiază, schistosomiază, paragonimiază. Cu toate acestea, pentru aceste reacții în țara noastră, diagnosticul standard nu este emis și tehnica de stabilire a acestora nu este reglementată. Laboratoare separate, în mare parte științifice, își pregătesc propriile antigene specifice și le folosesc în diferite modificări. Descrierea acestor metode este prezentată pe scară largă în literatură și nu este strict unificată. Interpretarea datelor imunologice ar trebui să se bazeze pe studiul dinamicii răspunsului imun, ținând cont de nivelul de specificitate și sensibilitate al fiecărei aplicații. reacție serologică. Prin urmare, atunci când se pune un diagnostic, precum și în timpul anchetelor seroepidemiologice ale populației, este recomandabil să se utilizeze câteva dintre cele mai sensibile reacții. Din acest punct de vedere, reacțiile VIEF și REMA, care diferă sensibilitate crescutăşi o specificitate suficient de mare (P. Ambroise-Thomas, 1978; I. E. Ballad, 1979; G. M. Negryanu, 1980; A. M. Ponomareva, 1981; A. Ya. Lysenko, 1978 etc.). Eficacitatea REAMA a fost testată în amebiază, leishmanioză, tripanosomiază și toxoplasmoză (GA Ermolin, 1980).