انتروپاتی نوزادان، علائم، درمان. نقص ایمنی ناشی از نقص ایمنی سلولی

خلاصه

این بیماری با شروع نقص ایمنی اولیه مشخص می شود، که خود را به عنوان یک نارسایی چند سیستمی خودایمنی نشان می دهد، که اغلب از نظر بالینی در سال اول زندگی ظاهر می شود. در حال حاضر تنها حدود 150 مورد در جهان شرح داده شده است. سندرم IPEX ناشی از نقص ژن FOXP3 است که یک فاکتور رونویسی است که بر فعالیت سلول های T تنظیم کننده مسئول تأثیر می گذارد. برایحفظ تحمل حدود 70 جهش بیماریزا در این ژن تاکنون شرح داده شده است. اکثر بیماران مبتلا به سندرم IPEX تظاهرات بالینی بیماری را در اوایل دوره نوزادی یا در طی 3-4 ماه اول زندگی دارند. برای این بیماری تظاهرات سه گانه بالینی زیر مشخص است: انتروپاتی خود ایمنی (100٪)، دیابت شیرین (70٪)، ضایعات پوستی (65٪)، همانطور که در ساختار سندرم شامل تاخیر رشد شدید (50٪)، بیماری تیروئید ( 30 درصد، عفونت های مکرر (20 درصد)، سیتوپنی خودایمنی نادرتر (کم خونی همولیتیک مثبت کومبس)، پنومونی، نفریت، هپاتیت، آرتریت، میوزیت، آلوپسی. با این حال، برخی از موارد تظاهرات بعدی توصیف شد (در بیماران بیش از 1 سال) که بیماران تمام علائم بالینی و آزمایشگاهی معمولی برای اشکال شدید بیماری را نشان ندادند. با توجه به شدت بیماری و مرگ و میر بالا در این گروه از بیماران، تشخیص زودهنگام و شروع به موقع درمان بسیار مهم است. مقالهیک مورد بالینی از دیابت شیرین دائمی نوزادان در ساختار سندرم IPEX را توصیف می کند.

سندرم IPEX (نقص ایمنی، پلی اندوکرینوپاتی، انتروپاتی، سندرم وابسته به X). مترادف: XLAAD (سندرم اختلال خودایمنی-آلرژیک مرتبط با X) - بیماری نادر; حدود 150 مورد در سراسر جهان شرح داده شده است. بر اساس برخی منابع خارجی، شیوع سندرم IPEX در بیماران مبتلا به دیابت شیرین دائمی نوزادان حدود 4 درصد است. این سندرم با بروز نقص ایمنی اولیه مشخص می شود که با آسیب اندام های متعدد خودایمنی ظاهر می شود و اغلب به صورت بالینی در سال اول زندگی ظاهر می شود. در سال 1982 پاول و همکاران. برای اولین بار خانواده ای را توصیف کرد که در آن 19 مرد یک بیماری مرتبط با X داشتند که با اسهال و پلی اندوکرینوپاتی، از جمله دیابت وابسته به انسولین آشکار می شد. بعداً در سال 2000، کاتیلا و همکاران. یک جهش در ژن کد کننده دامنه اتصال DNA ترمینال C (FKN) در دو مورد شناسایی شد. بیماران مختلفمرد با مشابه تصویر بالینی. در سال 2000-2001 بنت و همکاران و ویلدین و همکاران به طور مستقل تایید کرد که سندرم IPEX بر اساس جهش در ژن FOXP3 است. در حال حاضر حدود 70 جهش بیماریزای این ژن شرح داده شده است. ژن FOXP3 یک فاکتور رونویسی است که بر فعالیت سلول های T تنظیمی که مسئول حفظ تحمل خودکار هستند تأثیر می گذارد. بر اساس اطلاعات منتشر شده توسط برزقی و همکاران. در سال 2012، مکانیسم اصلی آسیب اندام خودایمنی در سندرم IPEX دقیقاً اختلال در عملکرد سلول های T تنظیمی در نظر گرفته شد. بنابراین، سندرم IPEX با ایجاد نقص ایمنی شدید مشخص می شود که می تواند منجر به عوارض سپتیک و اغلب منجر به مرگ شود. در حال حاضر، حدود 300 ژن شناخته شده است که منجر به توسعه می شود نقص ایمنی اولیه(PID). پیش از این تصور می شد که این بیماری ها بسیار نادر هستند، اما مطالعات در سال های اخیر شیوع قابل توجهی از آنها را نشان می دهد. هوشیاری پزشکان اطفال در مورد وجود احتمالی PID به ویژه در موارد عفونت شدید همراه با بیماری های خودایمنی در کودکان بسیار مهم است. در اکثر بیماران مبتلا به سندرم IPEX، تظاهرات بالینی بیماری در اوایل دوره نوزادی یا در طی 3-4 ماه اول زندگی شروع می شود. برای این آسیب شناسی، یک سه گانه بالینی از تظاهرات معمول است: آنتروپاتی خود ایمنی (100٪)، دیابت (70٪)، ضایعات پوستی (65٪)، همچنین ساختار سندرم شامل تاخیر رشد شدید (50٪)، غده تیروئید است. آسیب (30%)، عفونت های مکرر (20%)، سیتوپنی خودایمنی کمتر شایع (آنمی همولیتیک مثبت Coombs)، پنومونیت، نفریت، هپاتیت، آرتریت، میوزیت، آلوپسی. با این حال، موارد تظاهرات بالای یک سال توصیف می شود، زمانی که بیماران تمام تظاهرات بالینی و آزمایشگاهی مشخصه اشکال شدید بیماری را نداشتند. یکی از اجزای اصلی سندرم IPEX پلی اندوکرینوپاتی است که با ایجاد دیابت خودایمنی ظاهر می شود. تیروئیدیت خود ایمنی. نشانگرهای ایمونولوژیک غدد درون ریز شامل آنتی بادی های انسولین (IAA)، سلول های جزایر پانکراس (ICA)، گلوتامات دهیدروژناز (GAD)، تیروزین فسفاتاز (IA-2)، آنتی بادی های ناقل روی (ZNT8)، آنتی بادی های تیروپراکسیداز و تیروگلوبولین است. سایر اتوآنتی بادی ها نیز شناسایی می شوند - به نوتروفیل ها، گلبول های قرمز و پلاکت ها، ضد هسته ای، آنتیمیتوکندریایی، آنتی بادی های کراتین، کلاژن و غیره. علاوه بر این، برای این بیماریایجاد انتروپاتی خودایمنی مشخصه است، که از نظر بالینی با اسهال آبکی فراوان همراه با ایجاد سندرم سوء جذب، نشانگرهای ایمونولوژیکی که آنتی بادی های آنتروسیت ها (ویلین VAA و هارمین HAA) هستند، ظاهر می شود. افزایش سطح IgE و افزایش تعداد ائوزینوفیل ها مشخصه بیماران مبتلا به نوع شدید کلاسیک بیماری است. با توجه به شدت بیماری و مرگ و میر بالا در این گروه از بیماران اهمیت فوق العاده ای دارد تشخیص زودهنگامو شروع به موقع درمان تا به امروز، موثرترین روش درمان پیوند است. مغز استخوانیا پیوند سلول های بنیادی خونساز آلوژنیک. به منظور اصلاح نقص ایمنی، می توان از تک درمانی سرکوب کننده سیستم ایمنی (سیکلوسپورین A، تاکرولیموس) یا ترکیبی - ترکیبی از داروهای سرکوب کننده سیستم ایمنی با استروئیدها استفاده کرد. نشان داده شده است که سیرولیموس (راپامایسین) موثر است و چندین بیمار بهبودی پایدار بیماری را تجربه می کنند. علاوه بر سرکوب کننده سیستم ایمنی، درمان جایگزیناختلالات غدد درون ریز، حمایت تغذیه ای کافی، درمان علامتی. مورد بالینی بیمار ک. متولد 29 فروردین 1395 در ترم با وزن 2840 گرم طول بدن 51 سانتی متر به دلیل افزایش هیپوکسی داخل رحمی جنین به روش سزارین اورژانسی زایمان انجام شد. امتیاز آپگار 7/7 است. از تاریخچه مشخص شده است که این بارداری چهارم در پس زمینه یک عفونت مزمن تناسلی، نارسایی جفت، گاستریت مزمنافزایش وزن اندک، نارسایی ایستمی-سرویکس، تهدید به وقفه در هفته سی ام. حاملگی های قبلی با سقط خود به خود به پایان رسید تاریخ های اولیه. دلایل سقط جنین مشخص نیست، زن مورد بررسی قرار نگرفته است. از بدو تولد، وضعیت کودک به دلیل اختلالات تنفسی و علائم افسردگی سیستم عصبی مرکزی (CNS) وخیم بود. IVL انجام شد. پس از بازیابی تنفس خودبخودی اکستوبه می شود. از روز اول زندگی، افزایش قند خون تا 10.4 میلی مول در لیتر با افزایش دینامیک تا 29.0 میلی مول در لیتر آشکار شد، طبق CBS، علائم اسیدوز متابولیک مشاهده شد. افزایش سطح گلیسمی با گلوکوزوری (قند ادرار تا 2000 میلی گرم در دسی لیتر) و کتونوری همراه بود. در آزمایش خون بیوشیمیایی، علائم هیپرآنزیمی وجود دارد (ALT 87.8 U/L، AST 150 U/l). در روز دوم زندگی، به دلیل هیپرگلیسمی پایدار (حداکثر سطح گلوکز خون 33.6 میلی مول در لیتر)، تجویز داخل وریدی انسولین ساده با نرخ U/kg/h 0.03-0.1 بسته به مقادیر گلوکز خون آغاز شد. تغذیه روده ای با مخلوط های سازگار به صورت کسری از طریق یک پروب دریافت شد. در طول نظارت روزانه سطح گلوکز خون در برابر پس زمینه انسولین درمانی، تغییر قابل توجهی از گلیسمی در طول روز از 1.7 تا 22.0 میلی مول در لیتر ثبت شد. در روز هشتم زندگی، وخامت بیماری مشاهده شد (علائم افسردگی CNS، افزایش نارسایی تنفسی، اختلالات متابولیک مرتبط با جبران متابولیسم کربوهیدرات، تب زیر تب مداوم تا 37.9 درجه سانتیگراد، نفخ، استفراغ مکرر، اسهال، اختلالات تروفیک). پوست به صورت خشکی و لایه برداری لایه بزرگ). این علائم به عنوان تظاهرات آنتروکولیت نکروزان (NEC 2a) در نظر گرفته شد. برای معاینه و درمان بیشتر، بیمار به RRC GBUZ DRB، Petrozavodsk منتقل شد. در طی معاینه در RRC GBUZ DRB، یک سری آزمایش خون بالینی کاهش سطح هموگلوبین را از 150 به 110 گرم در لیتر، لکوسیتوز از 8.9 به 22.4 هزار، تغییر در فرمول لکوسیت به دلیل افزایش تعداد ائوزینوفیل ها نشان داد. از 5 تا 31 درصد، مونوسیت ها و پلاکت های خون. با توجه به نتایج آزمایش خون بیوشیمیایی، هیپوپروتئینمی تا 36.4 گرم در لیتر (N 49-69)، تمایل به هیپوناترمی 135 میلی مول در لیتر (N 135-155) ثبت شد. طبیعیپتاسیم 4.7 میلی مول در لیتر (N 4.5-6.5)، هیپرفرمنتمی AlAT-87 U / L (N0-40) و AST 150 U / L (N0-40)، تیتر CRP را به 24.7 میلی گرم در متر افزایش داد. رشد میکرو فلورا در کشت خون وجود ندارد، انتروکوک در کشت ادرار یافت شد. در ارتباط با هیپرگلیسمی پایدار، سطح پپتید C تعیین شد که مشخص شد کاهش می یابد (0.1 نانومول در لیتر؛ N0.1-1.22 نانومول در لیتر). در معاینه سونوگرافیپنوماتوز دیواره های روده و افزایش اندازه لوزالمعده (سر - 9.0 میلی متر، بدن - 9.0 میلی متر، دم - 10.0 میلی متر) را نشان داد، در پویایی پیشرفت اندازه وجود داشت. او تغذیه تزریقی، انفوزیون درمانی با هدف از بین بردن اختلالات الکترولیت، درمان آنتی بیوتیکی، انسولین به صورت داخل وریدی دریافت کرد. در طول درمان، اختلالات الکترولیتی از بین رفت، با این حال، دستیابی به تثبیت شاخص های گلوکز ممکن نبود و اختلالات سوء هاضمه برجسته نیز ادامه داشت. هنگام تلاش برای بازگرداندن تغذیه روده، نفخ مشاهده شد، استفراغ و اسهال ظاهر شد. در نوزدهمین روز زندگی، پسر با وضعیت وخیم به بخش مراقبت های ویژه منتقل شد. مرکز پری ناتالکلینیک های دانشگاه پزشکی دولتی سنت پترزبورگ. پس از پذیرش، کودک یک گریه کند، بی احساس، خود به خود دارد فعالیت بدنیو تون عضلانی کاهش یافت، رفلکس های نوزادی ضعیف بود. تب (دمای بدن 38.1 درجه سانتیگراد). فونتانل بزرگ 1.0 × 1.0 سانتی متر، غرق. پوست رنگ پریده، خشک، تورگ کاهش یافته، لایه برداری لایه بزرگ است. در طول سمع، تنفس سخت بود، به طور مساوی در تمام قسمت های ریه انجام می شد. تعداد تنفس 46 در دقیقه صداهای قلب ریتمیک، کمی خفه بود. ضربان قلب - 156 در دقیقه. نفخ شدید، بزرگ شدن متوسط ​​کبد وجود داشت. میزان دیورز - 7-8 میلی لیتر / کیلوگرم در ساعت (در مقابل درمان انفوزیون در حال انجام). مدفوع آبکی 7-9 بار در روز. پویایی افزایش وزن منفی بود (وزن هنگام تولد - 2840 گرم، پس از پذیرش در کلینیک دانشگاه پزشکی اطفال ایالتی سنت پترزبورگ - 2668 گرم). در بخش مراقبت های ویژه انفوزیون درمانی با هدف از بین بردن اختلالات الکترولیتی ادامه یافت. اصلاح هیپوناترمی به دلیل مشکل است مکانیسم جبرانیتعادل اسمولاریته خون در پاسخ به هیپرگلیسمی، همراه با پلی اوری تا 7-8 میلی لیتر در کیلوگرم در ساعت و از دست دادن سدیم در ادرار، و همچنین انتروپاتی شدید (مدفوع 6-10 بار در روز، فراوان، مایع تا 350 میلی لیتر / روز). انسولین به صورت داخل وریدی 0.01-0.04 U/kg/h بسته به گلوکز خون دریافت کرد. تغذیه نسبی روده ای با یک مخلوط هیدرولیزات پاستوریزه با انتقال تدریجی از تغذیه لوله ای به تغذیه کسری مستقل در برابر پس زمینه تثبیت حالت انجام شد. در بیست و هشتمین روز تولد به بخش آسیب شناسی نوزادان و نوزادان منتقل شد و معاینه و درمان ادامه یافت. در طول معاینه، کم خونی در هموگرام مشاهده شد (هموگلوبین - 93 گرم در لیتر، گلبول های قرمز - 2.91 ∙ 1012 / L). لکوسیتوز (تا 28.7 ∙ 109 / L)، ائوزینوفیلی شدید (تا 61٪). در آزمایش خون بیوشیمیایی، هیپوپروتئینمی (کل پروتئین - 38.4 گرم در لیتر). هنگام بررسی سطح هورمون خون، مجدداً تشخیص داده شد سطح پایینپپتید C - 0.5 نانوگرم در میلی لیتر (N 0.1-1.22 نانومول در لیتر). هورمون های تیروئید طبیعی بودند (T4 free - 14.8 pmol / L (N 10.0-23.2)؛ TSH - 6.28 μU / ml (N 0.23-10.0). ترکیبی از دیابت قند نوزاد، انتروپاتی، خاص تظاهرات پوستیو علائم عفونت مزمن عود کننده (تب تب دار، افزایش لکوسیتوز پس از قطع مصرف آنتی بیوتیک درمانی) امکان مشکوک شدن بیمار به سندرم IPEX را فراهم کرد که ساختار آن شامل نقص ایمنی است. برای روشن شدن ماهیت پلی اندوکرینوپاتی، مطالعه ای با هدف جستجوی نشانگرهای ایمونولوژیک انجام شد. در نتیجه، تیتر بالایی از آنتی بادی های تیروپراکسیداز (243.9 Med/ml؛ N 0-30) و آنتی بادی های جزایر لانگرهانس در تیتر مثبت (آنتی بادی های GAD1.29 U/ml؛ N 0-1.0) تیتر آنتی بادی به انسولین 5.5 U/ml (N 0.0-10.0) بود. آنتی بادی برای سلول های تولید کننده استروئید غدد فوق کلیوی شناسایی نشد. بنابراین ماهیت خودایمنی دیابت ملیتوس ثابت شد و تیروئیدیت خودایمنی تشخیص داده شد. با در نظر گرفتن وجود علائم بالینی و آزمایشگاهی نقص ایمنی، یک معاینه ایمونولوژیک عمیق انجام شد، سطح بالایی از IgE (573.6 IU/ml با نرخ 0-15) تشخیص داده شد. یک مطالعه ژنتیکی مولکولی (توالی‌یابی هدفمند چند ژنی) انجام شد که در نتیجه آن یک جهش در ژن FOXP3 شناسایی شد و وجود سندرم IPEX را در کودک تأیید کرد. در سن دو ماهگی چهار روز به دلیل خطر بالای سپسیس و تهدید نتیجه کشندهپسر به موسسه بودجه ایالت فدرال "FNKTs DGOI آنها" منتقل شد. دیمیتری روگاچف» از وزارت بهداشت روسیه برای درمان سرکوب کننده سیستم ایمنی و پیوند مغز استخوان. در مورد بالینی ارائه شده، یک جهش قبلاً توصیف نشده ژن FOXP3 c.1190G > T (p.Arg397Leu) در یک کودک مبتلا به دیابت شیرین نوزادی، نقص ایمنی اولیه و آنتروپاتی شدید تشخیص داده شد. آنالیز DNA مادر بیمار همان ضایعه را در حالت هتروزیگوت نشان داد. واریانت شناسایی شده در حوزه چنگال ترمینال C اتصال به DNA محلی است و توسط برنامه های پیش بینی اصلی (Polyphen2، SIFT، Mutation Taster) بیماری زا در نظر گرفته می شود. یک استدلال غیرمستقیم سنگین به نفع بیماری زایی نوع شناسایی شده این واقعیت است که جهش c. 1189C > T و s. 1190G>A که بر همان کدون 397 تأثیر می گذارد، قبلاً در بیماران مبتلا به سندرم IPEX یافت شده بود. مشخص شده است که مادران بیماران مبتلا به سندرم IPEX با حضور چندین دوره سقط جنین خود به خود در حین حمل جنین پسر مشخص می شوند. در مورد شرح داده شده، سابقه مادر بیمار (ناقل جهش) نیز با سقط جنین در مراحل اولیه تشدید شد. این یک بار دیگر تأیید می کند که جهش جدیدی که ما کشف کردیم تأثیر جدی بر عملکرد FOXP3 دارد و باعث افزایش مرگ و میر جنینی می شود. تأیید ژنتیکی دیابت شیرین نوزادان بسیار مفید است، زیرا به شما امکان می دهد ماهیت بیماری را روشن کنید و استراتژی درمانی بهینه را انتخاب کنید. این امر به ویژه در مورد بیماران مبتلا به اشکال سندرمی، که به عنوان یک قاعده، دارند، صادق است دوره شدید. تشخیص جهش در یک کودک بیمار برای مشاوره ژنتیک پزشکی خانواده بسیار مهم است، زیرا امکان انجام تشخیص DNA قبل از تولد در صورت بارداری های بعدی را فراهم می کند. را مورد بالینینشان می دهد که تعامل پزشکان با تخصص های مختلف (نوئاتولوژیست ها، غدد درون ریز، متخصصین گوارش، ایمونولوژیست ها، ژنتیک ها) به ایجاد موثرتر تشخیص صحیح در بیماران مبتلا به بیماری های نادر کمک می کند.

ماریا ای تورکونووا

دانشگاه پزشکی اطفال دولتی سنت پترزبورگ، وزارت بهداشت و درمان فدراسیون روسیه

اتوآنتی بادی ها به هارمونین و ویلین نشانگرهای تشخیصی در کودکان مبتلا به سندرم IPEX هستند.
منبع: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3826762/

آزمایش های طراحی و توسعه یافته: V.L. بوزی آر.ب. آزمایشات انجام شده: CL E. Bazzigaluppi CB. تجزیه و تحلیل داده ها: VL LP FB RB E. Bosi. معرف ها / مواد / ابزار تجزیه و تحلیل مورد استفاده: LP FB. مقاله نوشت: ای.بوزی. کمک به نوشتن/ویرایش نسخه خطی: VL LP FB RB.

اتوآنتی بادی های ملتحمه آنتی ژن های انتروسیتی (75 کیلو دالتون پروتئین USH1C) و پرزها (95 کیلو دالتون پروتئین اتصال دهنده به اکتین) با اختلال در تنظیم ایمنی، پلی اندوکرینوپاتی، انتروپاتی، سندرم وابسته به X (IPEX) مرتبط هستند. در این مطالعه، ارزش تشخیصی اتوآنتی‌بادی‌های هارمونیک و پرز را در سندرم‌های IPEX و IPEX مانند ارزیابی کردیم. اتوآنتی‌بادی‌های هارمونین و ویلین با کمی‌سازی جدید سیستم ایمنی رسوب‌دهنده درخشان (LIPS) در بیماران مبتلا به IPEX، سندرم شبه IPEX، نقص ایمنی اولیه (PID) با آنتروپاتی، که همه با توالی‌یابی ژن FOXP3 تشخیص داده شدند، و در دیابت نوع 1 اندازه‌گیری شدند. (T1D)، بیماری سلیاک و اهداکنندگان خون سالم به عنوان گروه شاهد. اتوآنتی بادی هارمونین و ویلین به ترتیب در 12 (92%) و 6 (46%) از 13 بیمار IPEX و هیچ یک از بیماران IPEX، PID، T1D و سلیاک شناسایی شدند. همه بیماران IPEX، از جمله یک مورد با تظاهرات بالینی دیرهنگام و غیر معمول، دارای اتوآنتی بادی هارمونیکا و/یا پرز بودند یا با ایمونوفلورسانس غیرمستقیم برای آنتی بادی های انتروسیتی مثبت بودند. هنگامی که در بیماران مبتلا به IPEX در بهبودی پس از درمان سرکوب‌کننده ایمنی یا پیوند سلول‌های بنیادی خون‌ساز اندازه‌گیری شد، اتوآنتی‌بادی‌های هارمونیک و پرز در همه موارد غیرقابل شناسایی شدند یا در عیار پایین باقی ماندند، اما در مواردی که اتوآنتی‌بادی‌های هارمونیک به طور مداوم بالا باقی ماندند. در یک بیمار، اوج آنتی بادی های هارمونیک به موازات فاز آنتروپاتی عود کننده است. مطالعه ما نشان می‌دهد که اتوآنتی‌بادی‌های هارمونیک و پرز اندازه‌گیری شده با LIPS، نشانگرهای حساس و اختصاصی IPEX هستند، IPEX، از جمله موارد غیر معمول، را از سایر اختلالات دوران کودکی مرتبط با انتروپاتی متمایز می‌کنند، و برای غربالگری و نظارت بالینی کودکان مبتلا مفید هستند.

اختلال در تنظیم ایمنی، پلی اندوکرینوپاتی، انتروپاتی، سندرم X-linked (IPEX) یک بیماری خودایمنی تک ژنی است که با آنتروپاتی شدید، دیابت نوع 1 (T1D) و اگزما مشخص می شود. این سندرم به دلیل جهش در ژن FOXP3 که مسئول آن است ایجاد می شود نقض جدیسلول های T تنظیمی (Treg) در حالی که آنالیز ژنتیکی روش انتخابی برای تشخیص قطعی است، هیچ ارتباط واضحی بین ژنوتیپ و فنوتیپ وجود ندارد و سیر بیماری از بیمار به بیمار دیگر متفاوت است. علاوه بر این، علیرغم طبقه بندی IPEX به عنوان نقص ایمنی، هیچ پارامتر ایمنی مشخصی وجود ندارد که شدت بیماری یا پاسخ به درمان را پیش بینی کند. علاوه بر این، اختلالات با فنوتیپ بالینی مشابه، که سندرم های شبه IPEX نامیده می شوند، می توانند در غیاب جهش های FOXP3 وجود داشته باشند، که این امر را دشوار می کند. مدیریت بالینیو انتخاب عوامل درمانی بنابراین، شناسایی نشانگرهایی که به طور خاص با اختلال عملکرد ایمنی IPEX مرتبط هستند برای اهداف تشخیصی بسیار مفید خواهد بود. اتوآنتی‌بادی‌های انتروسیتی در گردش که توسط ایمونوفلورسانس غیرمستقیم شناسایی شده‌اند، در گذشته در ارتباط با آنتروپاتی‌های مختلف، از جمله مواردی که در نهایت به عنوان سندرم IFEX شناخته می‌شوند، توصیف شده‌اند. اهداف مولکولیاین نشانگرهای سرولوژیکی مدتهاست ناشناخته بوده اند. سپس یک اتوآنتی ژن انتروسیتی متفاوت که توسط سرم بیماران IPEX شناسایی شد، به عنوان پروتئین AIE-75 75 کیلو دالتون شناسایی شد و بیشتر به عنوان پروتئین سندرم سندرم آشر (USH1C) شناخته شد، پروتئینی که گزارش شده بخشی از پروتئین فوق مولکولی است، همچنین به عنوان هارمونیکا شناخته می شود. شبکه ها، پروتئین های گذرنده را به اسکلت سلولی در سلول های گیرنده نوری و سلول های مو متصل می کنند گوش داخلی. اتوآنتی بادی های هارمونین (HAA) شناسایی شده توسط ایمونوبلات و رادیو لیگاند در بیماران IPEX و در بخش کوچکی از بیماران مبتلا به سرطان کولون گزارش شده است. اخیراً، یک پروتئین اتصال دهنده به اکتین، به نام اکتین 95 کیلو دالتون، که در سازماندهی اسکلت سلولی اکتین در مرز برس اپیتلیال نقش دارد، به عنوان یک هدف اضافی از اتوآنتی بادی ها در زیر مجموعه ای از بیماران IPEX توصیف شده است. در مقابل، طبق دانش ما، هیچ اطلاعاتی در مورد HAA یا اتوآنتی‌بادی‌های پرز (VAA) در سندرم‌های شبه IPEX، نقص ایمنی اولیه (PID) همراه با آنتروپاتی، یا در اختلالاتی که اغلب با IPEX مرتبط هستند، مانند T1D و آنتروپاتی‌های خودایمنی مختلف گزارش نشده است. منشاء.

هدف از این مطالعه توسعه سنجش‌های کمی برای اندازه‌گیری HAA و VAA بر اساس سیستم بارش‌زای ایمونو لومینسنت جدید (LIPS)، برای تعیین دقت تشخیصی آن‌ها در سندرم‌های IPEX، IPEX مانند و PID و ارزیابی آن‌ها بر اساس آنتی‌بادی‌های انتروسیتی بود. تست شده توسط ایمونوفلورسانس، و ارزیابی ارزش خود را در پیگیری بالینی بیماران IPEX.

سیزده بیمار مبتلا به IPEX و 14 بیمار مبتلا به سندرم شبه IPEX در LIPS برای حضور HAA و VAA مورد آزمایش قرار گرفتند. به عنوان گروه شاهد، ما 5 بیمار مبتلا به PID با منشاء مختلف [دو نفر با کمبود CD25، دو نفر با سندرم Wiskott Aldrich (WAS)) و یکی با کمبود آدنوزین دآمیناز در نقص ایمنی ترکیبی شدید (ADA-SCID) را بررسی کردیم، که همه شرایط با شروع زودرس انتروپاتی مشخص می شود. ]، 123 با T1D، 70 مبتلا به بیماری سلیاک، و 123 اهداکننده خون سالم. تشخیص IPEX بر اساس یافته های بالینی و مولکولی بر اساس معیارهای تعیین شده توسط انجمن هماتولوژی و انکولوژی کودکان ایتالیا (AIEOP، www.AIEOP.org) بود. جهش ها و داده های بالینی بیماران مبتلا به IPEX و IPEX به ترتیب در جداول S1 و S2 نشان داده شده است. همه بیماران مبتلا به IPEX، به استثنای Pt19، Pt21، Pt22 و Pt24، در مقالات قبلی توضیح داده شده اند. PT24 یک شکل غیر معمول بیماری است که با شروع دیررس، بدون علائم انتروپاتی، اما گاستریت شدید در حضور ارتشاح مخاطی التهابی همراه با آتروفی پرز مشخص می شود. سطح عمومی IgG در 10 بیمار از 13 بیمار IPEX مورد مطالعه در دسترس بود: از این تعداد، 8 مورد در این بیماران بودند محدوده نرمالبر اساس سن (فقط یک بیمار تحت درمان داخل وریدی (IV) Ig)، در حالی که در دو مورد کمی افزایش یافته بود. بیمارانی که مبتلا به سندرم شبه IPEX تشخیص داده شده بودند، تظاهرات بالینی IPEX داشتند اما آزمایش جهش در ژن FOXP3 منفی بود. بیمارانی مانند IPEX حداقل یکی از موارد اصلی را ارائه کردند ویژگی های بالینی IPEX (انتروپاتی خودایمنی و/یا T1D) مرتبط با یک یا چند مورد از بیماری های خودایمنی یا با واسطه ایمنی زیر: درماتیت، تیروئیدیت، کم خونی همولیتیک، ترومبوسیتوپنی، نفروپاتی، هپاتیت، آلوپسی، هیپر IgE با یا بدون ائوزینوفیلی. پارامترهای بالینی و آزمایشگاهی دیگر بیماری های تک ژنی مانند WAS، سندرم Omenn، سندرم hyper IgE و سندرم لنفوپرولیفراتیو خودایمنی را رد کردند. حداقل یک نمونه سرم از بیماران مبتلا به سندرم های IPEX و شبه IPEX برای تجزیه و تحلیل اتوآنتی بادی در زمان تشخیص در دسترس بود. در شش بیمار IPEX، چندین نمونه سرم نیز در طول پیگیری بالینی به‌دست آمد و برای اندازه‌گیری‌های اضافی اتوآنتی‌بادی‌ها برای بررسی همبستگی با پیامد بالینی مورد استفاده قرار گرفت (نمونه‌های Pt12:8 از تولد تا 8 سالگی، نمونه‌های Pt14:7 از 6 ماه تا 13 سال. ، نمونه Pt17-3، 4 ماه تا 3.5 سال؛ Pt19:44 نمونه، 4 ماه تا 2 سال؛ Pt22: 3 نمونه، 0 تا 5 ماه؛ Pt 23:44، 4 تا 10 سال). همه بیماران مبتلا به PID بر اساس آزمایش مولکولی تشخیص داده شدند. بیماران مبتلا به T1D همه موارد اخیر، با تشخیص بر اساس معیارهای انجمن دیابت آمریکا بودند. بیماران مبتلا به بیماری سلیاک در زمان تشخیص بر اساس بیوشیمی ژژنوم مورد مطالعه قرار گرفتند.

طبق بیانیه هلسینکی، رضایت نامه کتبی آگاهانه از طرف خردسالان/کودکان شرکت کننده در این مطالعه ارائه شد. این مطالعه توسط کمیته اخلاق تحقیق محلی در سن رافائل تایید شد.

همه بیماران طبقه بندی شده به عنوان دارای IPEX یا سندرم شبه IPEX برای جهش FOXP3 وارد شدند. DNA ژنومی از خون محیطی با استفاده از روش فنل-کلروفرم یا کیت QIAamp DNA Blood Mini (Qiagen) طبق دستورالعمل سازنده جدا شد. یازده اگزون، از جمله تمام مرزهای اینترون-اگزون، از DNA ژنومی با استفاده از PCR با جفت‌های پرایمر اینترون اختصاصی طرفین تکثیر شدند. قطعات ژنی تکثیر شده با استفاده از کیت دوچرخه‌سواری BigDye Terminator (Applied Biosystems) روی یک آنالایزر ژنتیکی خودکار ABI PRISM 3130xl و یک آنالایزر ژنتیکی ABIPRISM 3730 (Applied Biosystems) تعیین توالی شدند.

توالی کد کننده Renilla luciferase در پلاسمید pTnT (Promega، میلان، ایتالیا) برای تولید وکتور pTnT-Rluc کلون شد. سپس توالی‌های کد کننده DNA هارمونیک و پرزهای تمام طول با RT-PCR تکثیر و به طور جداگانه در pTnT-Rluc در پایین دست و در فریم با Renilla lumiferase کلون شدند. کایمریک نوترکیب Rluc-Harmonin و Rluc-Villin در رونویسی و ترجمه جفت شده آزمایشگاهی با استفاده از سیستم سلولی آزاد رتیکولوسیتی خرگوش pTnT-سریع بیان شد (Promega). برای آزمایش وجود HAA یا VAA، Rluc-Harmonin و Rluc-Villin به عنوان آنتی ژن در LIPS (17) با انکوبه کردن 4 × 106 واحد نور با 1 میکرولیتر از سرم هر بیمار در PBS ph 7.4-Tween 0.1٪ (PBST) استفاده شدند. به مدت 2 ساعت در دمای اتاق، کمپلکس های IgG-ایمنی با افزودن پروتئین-A-Sepharose (GE Healthcare، میلان، ایتالیا) و پس از 1 ساعت انکوباسیون در دمای 4 درجه سانتی گراد و شستشو با PBST نقره غیر متصل با فیلتراسیون در سال 96 جدا شدند. صفحات فیلتر کاستار 3504 (Corning Life Sciences, Tewkesbury, USA). سپس آنتی ژن‌های رسوب‌شده ایمنی با اندازه‌گیری فعالیت لوسیفراز بازیافت‌شده پس از افزودن بستر Renilla lumiferase (Promega) و اندازه‌گیری انتشار نور به مدت ۲ ثانیه در روشنایی سنج Centro XS3 (Berthold Technologies GmbH & Co. KG, Bad Wildbad, Germany) اندازه‌گیری شدند. نتایج در واحدهای دلخواه مشتق‌شده از شاخص آنتی‌بادی (BAA) با استفاده از سرم‌های مثبت و منفی بر اساس فرمول (سرم کنترل cps-cps-سرم منفی) / (سرم cps-مثبت سرم-cp-منفی) x100 یا از یک منحنی استاندارد (HAA) متشکل از رقت‌های سریالی سرم استوک مثبت. برش مثبت بر روی صدک 99 مقادیر مشاهده شده در اهداکنندگان خون سالم تنظیم شد، همانطور که در کارگاه‌های آموزشی اتوآنتی‌بادی حساس به T1D که حساسیت و ویژگی را تجزیه و تحلیل می‌کنند، مرسوم است.

اتوآنتی‌بادی‌های انتروسیتی در جمعیت‌های بیماران IPEX و IPEX مانند با ایمونوفلورسانس غیرمستقیم بر روی مکان‌های کرایوستات ژژنوم طبیعی انسان یا میمون، همانطور که قبلاً توضیح داده شد، تعیین شدند.

نشانگرهای اتوآنتی بادی برای T1D و بیماری سلیاک، از جمله آنتی بادی های گلوتامیک اسید دکربوکسیلاز (GADA)، پروتئین 2 مرتبط با انسولینوما، انسولین، ناقل روی 8 و ترانس گلوتامیناز-C، در تمام IPEX، IPEX-like، PID، T1D، سلیاک اندازه گیری شد. بیماری و افراد سالم گروه‌های کنترل اهداکننده با استفاده از رسوب ایمنی با استفاده از LIPS یا هدف رادیویی همانطور که قبلاً توضیح داده شد. تمام نتایج در واحدهای دلخواه مشتق شده از منحنی های استاندارد به دست آمده با رقت سریال سرم های اولیه مثبت بیان شد.

در این پژوهش فقط از آمار توصیفی استفاده شده است. محاسبه 99 صدک واحدهای دلخواه در اهداکنندگان خون برای انتخاب آستانه با استفاده از Stata (StataCorp LP، ایالات متحده آمریکا) انجام شد. احتمال مشروط تست مثبت (حساسیت) یا منفی (ویژگی) برای HAA یا VAA بسته به وجود یا عدم وجود وضعیت بیماری IPEX و موارد مربوطه فاصله اطمینان 95٪ با استفاده از وب سایت Vassar Stats برای محاسبات آماری (http://vassarstats.net/clin1.html) محاسبه شد. همبستگی بین تیترهای HAA و VAA بر اساس معیارهای همبستگی رتبه اسپیرمن و با استفاده از نرم افزار Graphpad Prism 5 محاسبه شد.

غلظت HAA در گردش بالا در 12 از 13 (92٪) بیمار مبتلا به IPEX یافت شد، در حالی که این غلظت در بیماران مبتلا به IPEX، PID، T1D و بیماری سلیاک منفی بود (شکل 1A). افزایش غلظت VAA در گردش در 6 (46%) بیمار IPEX (Pt19، Pt14، Pt12، Pt17، Pt3، Pt21، با چهار مورد آخر دارای تیتر برابر یا بیشتر از 98 VAA AU)، از جمله بیمار بدون HAA (Pt17) یافت شد. ، سپس چگونه VAA ها در گروه های مشابه IPEX و سایر گروه های کنترل بیماری منفی بودند (شکل 1B). همه بیماران IPEX از نظر HAA یا VAA مثبت بودند، که منجر به ترکیبی از حساسیت تست HAA و VAA 100٪ (95٪ فاصله اطمینان: 71.6 تا 100٪) و ویژگی آزمون 97.6٪ (95٪ CI: 92.5 تا 99.4٪) شد. برای تشخیص سندرم IPEX هیچ ویژگی بالینی یا فنوتیپی با حضور هر دو اتوآنتی بادی در بیماران مبتلا به IPEX ارتباط نداشت. هیچ ارتباط معنی داری در بیماران IPEX بین تیتان های اتوآنتی بادی AAA و VAA مشاهده نشد (Spearman r = -0.3 p = ns). GADA به عنوان شایع ترین اتوآنتی بادی T1D، در بیماران مبتلا به IPEX (9 از 13، 5 با T1D)، سندرم نوع IPEX (4 از 14، 2 با T1D)، و PID (3 از 5، 1 با T1D) یافت شد. شکل 1C). سایر اتوآنتی بادی های T1D در نسبت های پایین تری یافت شدند، از جمله اتوآنتی بادی های انسولین در 5 IPEX، 4 آنتی بادی شبه IPEX و 2 PID، و اتوآنتی بادی Zinc Transporter 8 در یک بیمار IPEX. هیچ ارتباطی بین تیترهای GADA و HAA یا VAA مشاهده نشد (به ترتیب Spearman r = -0.017 p = ns و r = 0.34 p = ns). هیچ یک از بیماران مبتلا به IPEX، سندرم شبه IPEX یا PID، اتوآنتی بادی ترانس گلوتامیناز-C بافتی IgA یا IgG مرتبط با بیماری سلیاک نداشتند (داده‌ها نشان داده نشده است).

تیترهای IgG سرم HAA (پانل A)، VAA (پانل B) و GADA (پانل C) به صورت واحدهای دلخواه در IPEX (n=13)، IPEX مانند (n=14)، PID (n=5)، T1D بیان می‌شوند. (VAA و GADA n = 123، VAA n = 46)، بیماران مبتلا به بیماری سلیاک (HAA n = 70، VAA n = 46، GADA n = 44) و گروه شاهد (HAA و VAA n = 123، GADA n = 67). خط نقطه نقطه نقطه قطع مثبت بودن را نشان می دهد.

همه سرم های IPEX، به جز یک (Pt 22)، 10 سرم IPEX مانند و 3 سرم PID برای آنتی بادی های انتروسیتی با ایمونوفلورسانس در بخش های کرایوستات روده مورد آزمایش قرار گرفتند. تمام بیماران IPEX آزمایش شده برای آنتی بادی های انتروسیتی مثبت بودند. سرم‌های HAA مثبت واکنش‌پذیری قوی در برابر انتروسیت‌های روده و سیتوزول با بیشترین شدت در مرز برس نشان دادند (شکل 2A). VAA با تیتر بالای جدا شده رنگ آمیزی قوی برای پاک کردن مرز نشان داد اما سیتوزول را نه (شکل 2B). خارج از گروه بیماران IPEX، تنها یک سرم از یک بیمار مبتلا به عفونت PID با جهش ژن CD25 و منفی برای HAA و VAA (Pt L1) رنگ آمیزی مثبت انتروسیت های محدود به مرز دست را نشان داد (شکل 2C).

HAA از IPEX Pt 19 مرز دست و سیتوزول انتروسیت (پانل A) را متصل می کند، در حالی که VAA از IPEX Pt 17 فقط مرز دست (پانل B) را متصل می کند. IgG از PID Pt L1 مرز برس انتروسیت (پانل C) را متصل می کند. بدون اتصال در Pt L30 مانند IPEX (پانل D).

نمونه های سریال برای اندازه گیری HAA و VAA برای 6 بیمار IPEX (Pt12، Pt14، Pt17، Pt19، Pt22 و Pt23) در دسترس بود: همه آنها تحت پیوند سلول های بنیادی خونساز (HSCT) قرار گرفتند. درمان پزشکیدر 4 مورد یک دوره متغیر سرکوب سیستمیک سیستمیک وجود دارد. در زمان ارائه این گزارش (آوریل 2013)، همه بیماران پیوندی به جز دو نفر زنده بودند، در حال بهبودی بالینی از انتروپاتی خود بودند و از درمان سرکوب کننده سیستم ایمنی استفاده نمی کردند (جدول S1). تجزیه و تحلیل ژنتیکی خون محیطی جمع‌آوری‌شده پس از پیوند، 100 درصد کایمریسم اهداکننده را در 4 مورد (Pt12، Pt14، Pt19 و Pt22) و کایمریسم مخلوط دهنده/گیرنده را در سایر بیماران نشان داد. در شروع انتروپاتی، سه بیمار هر دو HAA و VAA داشتند (Pt12، Pt14 و Pt19)، یک بیمار فقط VAA (Pt17) و دو بیمار فقط HAA داشتند (Pt22 و Pt23) (شکل 3). در پنج مورد (Pt12، Pt14، Pt17، Pt22 و Pt23)، بهبودی بالینی یا بهبود قابل توجه پس از سرکوب سیستم ایمنی یا HSCT با کاهش در هر دو تیتر HAA و/یا VAA همراه بود که در چهار مورد غیرقابل تشخیص بود یا در تیترهای بسیار پایین ادامه داشت. موارد با طولانی ترین مشاهده در یک مورد (Pt19) پس از HSCT، VAA غیرقابل تشخیص شد در حالی که HAA علیرغم بهبودی بالینی در عیار بالا باقی ماند (شکل 3D). حداقل در یک مورد (Pt14)، HAA ​​یک نشانگر حساس آنتروپاتی است: HAA با تیترهای بالا همراه با انتروپاتی شدید در زمان تشخیص IPEX شناسایی شد و سپس در طول بهبودی بالینی و بافتی پس از درمان سرکوب کننده ایمنی کاهش یافت و به اوج خود رسید. در طول عود بالینی و سپس پس از موفقیت آمیز HSCT و بهبودی بالینی به طور مداوم غیرقابل تشخیص شد (شکل 3B). اگرچه کمتر رایج است، اما VAA الگویی مشابه با الگوی HAA نشان داد. کاهش در اتوآنتی بادی های مشاهده شده پس از HSCT به دلیل کمبود سلول B و IgG ثانویه به شرطی سازی بود. در واقع، به استثنای Pt22 که یک پیوند کوتاه پس از عمل داشت، همه بیماران با کاهش تیتر HAA یا VAA بعد از HSCT (Pt12، 17 و 23) قبلاً ایمن شده بودند و درمان IVIg در طول اولین پس از HSCT مستقل بود.

محور عمودی نشان‌دهنده HAA (الماس‌ها) و VAA (مثلث)، تیترهای آنتی‌بادی خودکار، بیان‌شده در واحدهای دلخواه، در امتداد زمان محور افقی در ماه است. خط نقطه چین عمودی تاریخ HSCT را نشان می دهد، خطوط افقی نقطه چین و خط چین به ترتیب نقطه برش مثبت HAA و VAA را نشان می دهد.

در این مطالعه، ما نشان می‌دهیم که HAA و VAA، که به راحتی توسط سنجش‌های جدید LIPS اندازه‌گیری می‌شوند و به صورت ترکیبی مورد استفاده قرار می‌گیرند، نشانگرهای بسیار حساس و اختصاصی سندرم IPEX هستند و می‌توانند پیامد بالینی آن را پیش‌بینی کنند. در واقع، تمام بیماران IPEX با تشخیص تایید شده توسط آزمایش ژنتیک، غلظت HAA یا VAA افزایش یافته بودند. در مقابل، هیچ یک از بیماران انتروپاتی بدون جهش FOXP3 (به عنوان مثال، IPEX مانند یا PID)، بیماران T1D، یا بیماران مبتلا به بیماری سلیاک از نظر HAA یا VAA مثبت نبودند. از بین دو نشانگر، HAA ​​بالاترین حساسیت را داشت که در 12 بیمار از 13 بیمار IPEX یافت شد، در حالی که VAA تنها در شش مورد از آنها یافت شد. قابل ذکر است که HAA و VAA نشانگرهای ارزشمندی برای نشانگان IPEX هستند همچنین در موارد غیر معمول مانند Pt24 که انتروپاتی بخشی از تظاهرات بالینی نبود، در عوض گاستریت شدید غالب بود که در آن IPEX مشکوک بود و سپس با تعیین توالی ژن FOXP3 تنها پس از تایید شد. تشخیص HAA بالا در آینده، یک سنجش جدید LIPS امکان غربالگری سیستماتیک بیشتری را برای HAA و VAA در بیماران مبتلا به ناهمگن فراهم خواهد کرد. سندرم های بالینی، با امکان تشخیص بیشترموارد سندرم IPEX غیر معمول بالینی

GADA دومین واکنش شایع اتوآنتی بادی بود که در بیماران IPEX بعد از HAA مشاهده شد. اگرچه GADA رایج ترین نشانگر اتوآنتی بادی T1D است، با طیف گسترده ایتیتر در طول شروع بالینی، همیشه با دیابت همراه نیستند. در واقع، آنها را می توان در سایر بیماری های خود ایمنی، از جمله سندرم مرد سخت و پلی اندوکرینوپاتی خودایمنی (APS) یافت. جالب اینجاست که در بیماران مبتلا به AFP، GADA با ایجاد علائم گوارشی بیشتر از دیابت مرتبط است. جالب توجه است، همچنین در بیماران IPEX ما، GADA عمدتاً بدون ارتباط دائمی با T1D شایع بود.

علاوه بر اینکه نشانگرهای دقیق سندرم IPEX هستند، HAA ​​و VAA ممکن است دارای ارزش پیش بینی بالقوه، به ویژه در رابطه با آنتروپاتی مرتبط باشند. شش بیمار با نمونه های پس از نمونه موجود، تیتر بالایی از HAA و VAA را در زمان تشخیص یا در شروع علائم گوارشی و قبل از درمان نشان دادند. پس از آن، در پنج مورد پس از درمان سرکوب کننده سیستم ایمنی و/یا HSCT (Pt12، Pt14، Pt17، Pt22، و Pt23)، تیتر HAA و VAA کاهش یافت، غیرقابل تشخیص شد یا در تیترهای پایین در اطراف آستانه تشخیص باقی ماند، که منعکس کننده بهبودی بالینی و بافتی است. آنتروپاتی مرتبط در یکی از آنها (Pt14)، عود گذرا انتروپاتی که در طول درمان سرکوب کننده سیستم ایمنی رخ می دهد با یک اوج HAA و به دنبال آن سقوط پس از بهبودی بالینی همراه بود. متأسفانه در این بیمار، فقدان نمونه های متوالی به ما اجازه نمی دهد که زمان افزایش اتوآنتی بادی ها را قبل از عود انتروپاتی تعیین کنیم. در یک مورد (Pt19)، بهبودی بالینی با کاهش VAA همراه بود، اما نه در HAA، که در تیترهای بالا تا 15 ماه پس از HSCT ادامه داشت. یافتن کاهش تیترهای HAA و VAA بعد از HSCT در اکثر بیماران اما نه همه آنها بسیار جالب است، که احتمالاً مربوط به بقای لنفوسیت های میزبان یا پلاسماسل های باقی مانده مسئول تولید مداوم این اتوآنتی بادی ها است.

معرفی این نشانگرهای اتوآنتی بادی به عمل بالینیبا توجه به سهولت اندازه گیری آنها با LIPS که به تازگی توسعه یافته است، نسبتا ساده خواهد بود. اخیراً، این فناوری به‌عنوان یک روش غیر رادیواکتیو جدید برای جایگزینی آنتی‌بادی رادیواکتیو و استاندارد طلایی در شرایط آزمایشگاهی پروتئین-A از آنتی‌ژن‌های نوترکیب انسانی رونویسی‌شده و ترجمه‌شده با برچسب متیونین ۳۵S که توسط برنامه‌های استانداردسازی آنتی‌بادی تعیین‌شده در هر دو تأیید شده است، پیشنهاد شده است. T1D و بیماری سلیاک. در گزارش‌های اخیر، LIPS عملکردی قابل مقایسه با سنجش‌های ارتباط رادیویی و بهتر از ELISA از قبل موجود نشان داده است. در این مطالعه، LIPS با استفاده از Renilla (Rluc)-Harmonin و Rluc-Villin کایمریک لومیفراز نوترکیب به عنوان آنتی ژن طراحی شد که منجر به سنجشی با نویز پس زمینه کم و کمی سازی اتوآنتی بادی خطی شد که قادر به تشخیص است. نتایج مثبتاز نمونه های سرم منفی بنابراین، اندازه گیری HAA و VAA با استفاده از LIPS یک آزمایش سریع، ساده و قابل تکرار است که به راحتی برای استفاده بالینی قابل استفاده است.

جالب توجه است، همان عملکرد تشخیصی ترکیبی HAA و VAA با اتوآنتی‌بادی‌های انتروسیتی که توسط ایمونوفلورسانس غیرمستقیم معمولی شناسایی شده‌اند، مشاهده شد. همچنین مشخص نیست، اما ارزش بررسی در آینده را دارد که آیا هارمونیک ها و پرزها تنها آنتی ژن هایی هستند که توسط اتوآنتی بادی های مرتبط با IPEX روی انتروسیت ها شناسایی می شوند یا اینکه سایر اهداف اتوآنتی ژن انتروسیتی آنتی بادی های مرتبط با IPEX هنوز شناسایی نشده اند.

تا کنون IPEX به عنوان یک سلول T در نظر گرفته شده است بیماری ایمنیاختلالات Treg، با توجه محدود به نقایص مرتبط در پاسخ ایمنی هومورال: نتایج ما ارتباط جهش‌های اصلی ژن FOXP3 را با یک آنتی‌بادی خاص آنتی ژن قابل اعتماد و قابل سنجش نشان می‌دهد. با این حال، از آنجایی که سلول های B FOXP3 را بیان نمی کنند، بعید است جهش های FOXP3 مستقیماً بر رشد سلول های B و/یا تولید آنتی بادی تأثیر بگذارد. با این حال، مطالعات اخیر نشان می‌دهد که سلول‌های B می‌توانند هدف مستقیم و غیرمستقیم عملکرد مهاری با واسطه سلول Treg باشند و تغییر سلول‌های Treg بر تیتر آنتی‌بادی‌های خود هم در مدل‌های موش و هم در انسان تأثیر می‌گذارد. فقدان سلول های Treg با رشد غیر طبیعی سلول های B، از دست دادن آلرژی به سلول های B و توسعه سلول های پلاسما با عمر طولانی همراه است. علاوه بر این، اخیراً نشان داده شده است که در انسان، کمبود FOXP3 منجر به تجمع کلون‌های خود واکنشی در محفظه سلول‌های B بالغ می‌شود، که نشان‌دهنده نقش مهم سلول‌های Treg در کنترل ایست بازرسی از دیدگاه سلول‌های B محیطی است.

مکانیسم های مسئول خودایمن سازی هورمون ها و پرزها در IPEX و نقش این اتوآنتی ژن ها در تظاهرات پاتولوژیک سندرم IPEX ناشناخته مانده است. هارمونین در چندین بافت از جمله بیان می شود روده کوچک، روده بزرگ، کلیه، چشم، دهلیز گوش داخلی و ضعیف، پانکراس. در روده، بیان هماهنگ کننده عمدتاً در سلول های اپیتلیال سطح مجرا و در نیمه بالایی کریپت های روده یافت می شود و احتمالاً در میکروویلی های دست قرار دارد. محلی سازی مشابهی برای پرزها نشان داده شده است. با توجه به اینکه ویژگی اصلی هیستوپاتولوژیک انتروپاتی IPEX آتروفی پرزهایی همراه با مرگ سلول های اپیتلیال آپوپتوتیک روده همراه با التهاب متوسط ​​تا شدید است، احتمالا هارمونیک ها و پرزها ممکن است به عنوان اهداف مولکولی مناسب خودایمنی بیماری زا در این زمینه عمل کنند.

این مطالعه نشان داد که HAA و VAA اندازه‌گیری شده با LIPS نشانگرهای تشخیصی دقیق سندرم IPEX هستند، با 100% تطابق با جهش‌های ژن FOXP3 که IPEX، از جمله موارد غیر معمول، را از سایر اختلالات دوران کودکی مرتبط با آنتروپاتی متمایز می‌کند. به طور کلی، این داده ها نشان می دهد که HAA و VAA باید در جریان تشخیصی گنجانده شوند مشاهده بالینیبرای بیماران مبتلا به سندرم IPEX، که در آنها تغییرات در تیترهای HAA و VAA که نشان دهنده آنتروپاتی عود کننده است ممکن است به پزشکان در تصمیم گیری سریع درمانی کمک کند.

ویژگی های بالینی بیماران IPEX

ویژگی های بالینی بیماران شبه IPEX

برای اطلاعات بیشتر اینجا را کلیک کنید.

نویسندگان از همکاران خود که با مهربانی نمونه های سرم را ارائه کردند سپاسگزاری می کنند اطلاعات بالینیدر مورد بیماران IPEX و IPEX خود: E. S. Kang و Y. H. Choe، سئول، جمهوری کره؛ G. Zuin، میلان، ایتالیا; A. Staiano، R. Tronchone و V. Discepolo، ناپل، ایتالیا. J. Schmidtko، برن، سوئیس; A. IkinciogullariZ. SedaUyan، M. Aydogan، E. O. Zu، آنکارا، ترکیه; G.R. Corazza and R. Ciccocioppo، Pavia، Italy; S. Vignola، جنوا، ایتالیا; A. Bilbao and S. Sanchez-Ramon، مادرید، اسپانیا. J. Reichenbachand M. Hoernes، زوریخ، سوئیس; M. Abinun و M. Slatter، نیوکاسل آپون تاین، بریتانیا؛ M. Cipolli، ورونا، ایتالیا; F. Gurakan، آنکارا، ترکیه; F. Locatelli و B. Lucarelli، رم، ایتالیا; C. Cancrini و S. Corrente، رم، ایتالیا. A. Tommasini، Trieste، ایتالیا; L. Guidi، رم، ایتالیا; E. Richmond Padilla and O. Porras, San José, Costa Rica; S. Martino and D. Montin، تورین، ایتالیا; M. Hauschild، آلمان; K. Nadeau و M. Butte، استانفورد، CA; A. Aiuti، G. Barera، F. Meschi و R. Bonfanti، میلان، ایتالیا. نویسندگان همچنین از: M. Cecconiand D. Coviello برای ژنوتیپ FOXP3 تشکر می کنند. و اعضای گروه مطالعاتی IPEX ایتالیا (www.ipexconsortium.org) R. Badolato، M. Cecconi، G. Colarusso، D. Coviello، E. Gambinera و A. Tommasini برای حمایت و تشویق. نویسندگان از بیماران و خانواده های آنها به خاطر اعتماد و مشارکت آنها در تحقیق ما سپاسگزاری می کنند.

سندرم IPEX یک سندرم اختلال در تنظیم ایمنی، پلی اندوکرینوپاتی و انتروپاتی با وراثت مغلوب مرتبط با X است (ایمونودیسثیت، پلی اندوکرینوپاتی و انتروپاتی، X-Linked).

علائم: پلی اندوکرینوپاتی (نقض غدد درون ریز)، که با ایجاد دیابت نوع 1 آشکار می شود. در این نوع دیابت، سلول‌های ایمنی به سلول‌های پانکراس که انسولین، هورمونی که در متابولیسم (تبادل) گلوکز (قند) در بدن دخیل است، تولید می‌کنند، حمله کرده و آن‌ها را از بین می‌برند. در بیماران مبتلا به IPEX، انسولین تولید نمی شود، حالت هیپرگلیسمی ایجاد می شود - محتوای بالاقند خون. همچنین ممکن است ایجاد تیروئیدیت خود ایمنی - التهاب غده تیروئید ناشی از حمله به سیستم ایمنی خود باشد، غده تیروئید دیگر نمی تواند وظایف خود را به درستی انجام دهد (به عنوان مثال، متابولیسم کلسیم در بدن مختل می شود). انتروپاتی (عفونت دستگاه گوارش) با اسهال مداوم که قبل یا در حین غذا خوردن شروع می شود، ظاهر می شود. خونریزی روده. کم خونی همولیتیک - همولیز (تخریب) گلبول های قرمز خون و کاهش میزان هموگلوبین. بثورات پوستیبر اساس نوع اگزما (بثورات پوستی، همراه با خارش و لایه برداری). آرتریت (التهاب مفاصل)، لنفادنوپاتی (افزایش و درد) گره های لنفاوی)، آسیب کلیه. کاشکسی ( درجه شدیدفرسودگی). افزایش حساسیت به عفونت ها به دلیل وجود اختلال در تنظیم ایمنی (اختلال در تعامل سلول های سیستم ایمنی با یکدیگر و با سلول های دیگر) و / یا نوتروپنی (کاهش تعداد نوتروفیل ها - سلول های سیستم ایمنی که عملکرد اصلی آنها محافظت در برابر است. عفونت ها: پنومونی (التهاب ریه)، پریتونیت ( التهاب چرکیصفاق)، سپسیس (مسمومیت خون)، آرتریت سپتیک(التهاب چرکی مفاصل).

سندرم IPEX با جهش در ژن FOXP3 همراه است

روش تحقیق: تعیین توالی ژن FOXP3

پروتئین سندرم)، که نقش مهمی در عملکرد اسکلت سلولی ایفا می کند. پلیمریزاسیون اکتین را تنظیم می کند. عملکرد طبیعی این پروتئین برای تحرک کامل سلول ها، پلاریزاسیون آنها، تشکیل فیلوپودیا در حین کموتاکسی، چسبندگی سلولی و تشکیل سیناپس ایمنی در طول تعامل سلول های سیستم ایمنی ضروری است.

بسته به محل جهش ها و طول ناحیه ژنی تحت تأثیر آنها، سه نوع بالینی بیماری ایجاد می شود: سندرم Wiskott-Aldrich کامل (پیامد حذف) و انواع با تظاهرات جداگانه ترومبوسیتوپنی یا نوتروپنی. تصویر کلاسیک سندرم Wiskott-Aldrich با ترومبوسیتوپنی همراه با پلاکت های کوچک، اگزما و عفونت های مکرر مشخص می شود.

سندرم Wiskott-Aldrich با اختلالات متعدد در سیستم ایمنی مشخص می شود که عمدتاً بر فعالیت فاگوسیتیک و سیتولیتیک سلول های ایمنی ذاتی تأثیر می گذارد. عملکردهایی که بیشتر به حرکت سلولی و مشارکت فعال اسکلت سلولی وابسته هستند. نقض تشکیل سیناپس ایمنی بین لنفوسیت های T و APC بر تمام تظاهرات ایمنی تطبیقی ​​تأثیر می گذارد.

آتاکسی تلانژکتازی (سندرم لوئیس بار)

بیماری ارثی ناشی از نقص در ژن ATM (Ataxia telangiectasia mutated). به بیماری های مبتنی بر سندرم تجزیه کروموزومی اشاره دارد. این بیماری در نتیجه جهش هایی ایجاد می شود که در هر بخشی از ژن ATM رخ می دهد. نتیجه جهش ها می تواند غیبت کامل یا تضعیف سنتز پروتئین ATM و همچنین سنتز پروتئین معیوب عملکردی باشد.

پروتئین ATM - پروتئین کیناز سرین ترئونین. عملکرد اصلی آن شروع سیگنال های ترمیم برای شکست های DNA دو رشته ای است که هم در شرایط فیزیولوژیکی (در طول میوز، بازآرایی ژن های V گیرنده های تشخیص آنتی ژن و غیره) و هم ناشی از عمل اتفاق می افتد. عوامل خارجی(مثلاً تشعشعات یونیزان). هنگامی که DNA شکسته می شود، ATM کیناز اتوفسفریله می شود و از فرم دیمری به مونومر تغییر می کند. ATM کیناز فسفوریلاسیون پروتئین های کمپلکس MRN و عوامل مرتبط را که مستقیماً ترمیم DNA را انجام می دهند، فراهم می کند. در صورت تعداد کمی وقفه، آنها این عملکرد را با موفقیت انجام می دهند. اگر ترمیم موفقیت آمیز امکان پذیر نباشد، آپوپتوز ایجاد می شود که توسط فاکتور p53 ایجاد می شود. عدم ترمیم کامل DNA باعث بی ثباتی ژنوم و در نتیجه افزایش حساسیت پرتوی سلول ها و فرکانس رشد می شود. تومورهای بدخیمبه ویژه لنفوم ها و لوسمی ها.

مشخص ترین علامت بالینی آتاکسی تلانژکتازی، آتاکسی پیشرونده است که با تغییر در راه رفتن ظاهر می شود. این بیماری در اثر تخریب عصبی همراه با آتروفی مخچه ایجاد می شود. توسعه فرآیندهای عصبی به این دلیل است که در طول بلوغ نورون های مغز، فرآیندهای نوترکیب DNA رخ می دهد که با شکست های مضاعف آن همراه است. یکی دیگر از علائمی که نام این بیماری را تعیین کرد، تلانژکتازی، گشاد شدن مداوم رگ های خونی چشم و صورت است.

نقض ترمیم شکستگی های DNA که در طول بلوغ لنفوسیت های T و B رخ می دهد نیز زمینه ساز نقص ایمنی مشاهده شده در آتاکسی تلانژکتازی است. نقص ایمنی در بیماری های عفونی باکتریایی و ویروسی مزمن عود کننده دستگاه برونش ریوی ظاهر می شود که معمولاً باعث مرگ بیمار می شود.

سندرم نایمگن

نایمخن شهری در هلند است که برای اولین بار این سندرم در آنجا توصیف شد. این بیماری ارثی به عنوان سندرم های تجزیه کروموزومی، همراه با تشکیل ناپایداری ژنوم شناخته می شود. توسعه این بیماری با یک جهش در ژن NBS1 همراه است که محصول آن، نیبرین، در ترمیم DNA به عنوان بخشی از کمپلکس MRN نقش دارد و بستری برای فسفوریلاسیون توسط پروتئین کیناز ATM است. در این راستا، هم پاتوژنز و هم تظاهرات بالینی سندرم نایمگن عملاً با علائم آتاکسی-تلانژکتازی منطبق است. در هر دو مورد، تغییرات نورودژنراتیو ایجاد می شود، با این حال، در سندرم نایمگن، پدیده میکروسفالی غالب است، زیرا فرآیندهای نوترکیبی DNA نیز در طول بلوغ نورون های مغز رخ می دهد.

سندرم لنفوپرولیفراتیو خود ایمنی

این بیماری با اختلال آپوپتوز و تکثیر لنفاوی غیر بدخیم همراه، هیپرایمونوگلوبولینمی، فرآیندهای خودایمنی و افزایش محتوای سلول های CD3+ CD4-CD8- در خون مشخص می شود. جهش های زمینه ساز این سندرم اغلب در ژن TFRRSF6 که گیرنده Fas را کد می کند (CD95) موضعی می شود. فقط جهش هایی که باعث تغییرات در ناحیه داخل سلولی مولکول CD95 می شوند منجر به تظاهرات بالینی می شوند. به طور معمول، جهش ها بر لیگاند Fas و ژن های کاسپاز 8 و 10 تأثیر می گذارد (به بخش 3.4.1.5 مراجعه کنید). جهش ها با بیان ضعیف مولکول های کدگذاری شده توسط ژن مربوطه و تضعیف یا غیبت کاملانتقال سیگنال آپوپتوتیک

سندرم لنفوپرولیفراتیو مرتبط با X

یک نقص ایمنی نادر که با یک پاسخ ضد ویروسی، ضد توموری و ایمنی منحرف مشخص می شود. عامل سندرم لنفوپرولیفراتیو مرتبط با X، ویروس اپشتین بار است. ویروس از طریق برهمکنش مولکول gp150 پوشش ویروسی با گیرنده CD21 روی غشای سلولی وارد سلول های B می شود. در بیماران مبتلا به سندرم لنفوپرولیفراتیو مرتبط با X، فعال شدن پلی کلونال سلول های B و تکثیر بدون مانع ویروس رخ می دهد.

عفونت ویروس اپشتین بار در سندرم لنفوپرولیفراتیو مرتبط با X نتیجه جهش در ژن SH2D1A است که پروتئین آداپتور SAP را کد می کند. پروتئین مرتبط با مولکول فعال سازی لنفوسیتی سیگنالینگ (SLAM).]. دامنه SH2 پروتئین SAP موتیف تیروزین را در قسمت سیتوپلاسمی SLAM و تعدادی مولکول دیگر تشخیص می دهد. فرآیندهایی که در سلول‌های سیستم ایمنی پس از فعال‌سازی به واسطه گیرنده SLAM ایجاد می‌شوند، نقش مهمی در ایمنی ضد ویروسی دارند. گیرنده SLAM بر روی تیموسیت ها، سلول های T-، B-dendritic و ماکروفاژها بیان می شود. بیان با فعال شدن سلول افزایش می یابد. عملکرد تنظیمی پروتئین SAP با سرکوب فعالیت تیروزین فسفاتازها در ارتباط است.

4.7. نقص ایمنی

در مورد SLAM در غیاب SAP، SH-2 فسفاتاز آزادانه به گیرنده SLAM متصل می شود، آن را دفسفریله می کند و انتقال سیگنال را سرکوب می کند. هیچ فعال سازی عوامل اصلی محافظت ضد ویروسی - سلول های T و NK وجود ندارد، که منجر به تولید مثل کنترل نشده ویروس Epstein-Barr می شود. علاوه بر این، SAP تعامل تیروزین کیناز Fyn با گیرنده SLAM را تسهیل می کند، که انتقال سیگنال فعال سازی را تسهیل می کند.

در انواع تظاهرات بالینی سندرم لنفوپرولیفراتیو مرتبط با X، ثابت‌ترین آنها برق‌آلود است. مونونوکلئوز عفونی، اختلالات لنفوپرولیفراتیو خوش خیم و بدخیم و همچنین دیسگاماگلوبولینمی یا هیپوگاماگلوبولینمی. در بین ضایعات موضعی، آسیب کبدی ناشی از انفیلتراسیون با سلول های B آلوده به ویروس اپشتین بار و سلول های T فعال شده که منجر به نکروز بافت کبد می شود، غالب است. نارسایی کبد یکی از علل اصلی مرگ در بیماران مبتلا به سندرم لنفوپرولیفراتیو مرتبط با X است.

سندرم IPEX

سندرم مرتبط با X اختلال در تنظیم ایمنی، پلی اندوکرینوپاتی و آنتروپاتی ( اختلال در سیستم ایمنی، پلی اندوکرینوپاتی، انتروپاتیسندرم وابسته به X) در نتیجه جهش در ژن FOXP3 واقع در کروموزوم X ایجاد می شود. FOXP3 "ژن اصلی" است که مسئول توسعه سلول های T تنظیمی فنوتیپ CD4+CD25+ است. این سلول ها نقش مرکزی در مهار فعالیت کلون های لنفوسیت T خوداختصاصی در محیط دارند. نقص در ژن FOXP3 با فقدان یا کمبود این سلول ها و مهار فرآیندهای مختلف خود ایمنی و آلرژیک همراه است.

سندرم IPEX خود را در ایجاد ضایعات خودایمنی متعدد در اندام های غدد درون ریز نشان می دهد. دستگاه گوارشو سیستم تولید مثل این بیماری از سنین پایین شروع می شود و با آسیب به تعدادی از اندام های غدد درون ریز (دیابت نوع I، تیروئیدیت) مشخص می شود. سطح بالااتوآنتی بادی، انتروپاتی شدید، کاشکسی، کوتاهی قد، تظاهرات آلرژیک(اگزما، آلرژی غذایی، ائوزینوفیلی، افزایش سطح IgE)، و همچنین تغییرات خونی (کم خونی همولیتیک، ترومبوسیتوپنی). کودکان بیمار (پسران) در سال اول زندگی بر اثر بیماری های عفونی شدید مکرر جان خود را از دست می دهند.

سندرم APECED

پلی اندوکرینوپاتی خودایمنی، کاندیدیازیس، دیستروفی اکتودرمی ( پلی اندوکرینوپاتی خودایمنی، کاندیدیازیس، دیستروفی اکتودرمی) یک سندرم خود ایمنی است که به دلیل نقص در انتخاب منفی تیموسیت ها ایجاد می شود. علت آن جهش در ژن AIRE است که مسئول بیان نابجای پروتئین های اختصاصی اندام در سلول های اپیتلیال و دندریتیک بصل النخاع تیموس مسئول انتخاب منفی است (به بخش 3.2.3.4 مراجعه کنید). فرآیند خودایمنی عمدتاً بر غدد پاراتیروئید و غدد فوق کلیوی و همچنین جزایر پانکراس (دیابت نوع I ایجاد می شود)، غده تیروئید و اندام های تناسلی تأثیر می گذارد.

اغلب با ایجاد کاندیدیازیس همراه است. نقص در مورفوژنز مشتقات اکتودرم نیز آشکار می شود.

هنگام در نظر گرفتن طیف نقص ایمنی اولیه، عدم وجود واحدهای nosological مرتبط با آسیب شناسی سلول های NK توجه را به خود جلب می کند. تا به امروز، کمی بیش از ده ها جهش توصیف شده است که بر عملکرد این سلول ها در افراد تأثیر می گذارد، که به ما اجازه می دهد نتیجه بگیریم که نقص ایمنی که به طور انتخابی بر سلول های NK تأثیر می گذارد بسیار نادر است.

4.7.2. عفونت HIV و سندرم نقص ایمنی اکتسابی

علاوه بر نقص ایمنی اولیه، تنها بیماری که آسیب به سیستم ایمنی پایه پاتوژنز است و علائم را تعیین می کند، سندرم نقص ایمنی اکتسابی (ایدز) است. سندرم نقص ایمنی اکتسابی- ایدز). فقط می توان آن را به عنوان یک بیماری نقص ایمنی اکتسابی مستقل تشخیص داد.

تاریخچه کشف ایدز به سال 1981 باز می گردد، زمانی که گزارشی توسط گروهی از پزشکان از نیویورک و لس آنجلس در مجموعه مقالات مرکز کنترل بیماری (ایالات متحده آمریکا، آتلانتا) در مورد یک بیماری غیرعادی ثبت شده در مردان همجنس منتشر شد. مشخصه آن یک نوع شدید پنومونی ناشی از قارچ فرصت طلب Pneumocystis carinii بود. در گزارش‌های بعدی، داده‌هایی در مورد گسترش گروه بیماران و داده‌هایی در مورد وجود نقص ایمنی مرتبط با کاهش شدید محتوای لنفوسیت‌های T CD4+ در گردش خون، همراه با توسعه فرآیندهای عفونی که می‌تواند ایجاد شود، ارائه شد. علاوه بر پنوموسیست ها، توسط سایر پاتوژن های اختیاری. برخی از بیماران به سارکوم کاپوزی مبتلا شدند که با سیر تهاجمی غیرعادی مشخص می شد. تا زمان انتشار این مطالب، 40 درصد از بیماران شناسایی شده فوت کرده بودند. بعدها مشخص شد که اپیدمی این بیماری قبلاً آفریقای استوایی را در بر گرفته است ، جایی که این بیماری عمدتاً از طریق تماس جنسی دگرجنس گرا گسترش می یابد. جامعه پزشکی بین المللی نه تنها وجود یک شکل نوزولوژیک جدید - "سندرم نقص ایمنی اکتسابی" را به رسمیت شناخته است. سندرم نقص ایمنی اکتسابی)، ولی

و آغاز همه گیری این بیماری بود. اولین نمایش چشمگیر ایدز، آن را بسیار فراتر از محیط حرفه ای مورد توجه عموم قرار داد. در علم پزشکی، به ویژه در ایمونولوژی، مشکل ایدز به طور قابل توجهی بر توزیع تلاش ها و منابع مالی در توسعه تحقیقات علمی تأثیر گذاشته است. این اولین باری بود که یک بیماری مرتبط با ضایعه غالب سیستم ایمنی از نظر علمی و اجتماعی بسیار مهم بود.

به شماره اوایل 2007تعداد مبتلایان به HIV بالغ بر 43 میلیون نفر بوده که از این تعداد 25 میلیون نفر جان خود را از دست داده اند، افزایش سالانه این تعداد 5 میلیون نفر و میزان مرگ و میر سالانه 3 میلیون نفر است که 60 درصد از مبتلایان در جنوب صحرای آفریقا زندگی می کنند.

در سال 1983 تقریباً به طور همزمان در فرانسه [L. Montagnier (L. Montagnier)]

و ایالات متحده آمریکا [R.S. گالو ( R.C. گالو )] تعریف شده است

4.7. نقص ایمنی

ماهیت ویروسی ایدز و عامل ایجاد کننده آن - HIV (ویروس نقص ایمنی انسانی، ویروس نقص ایمنی انسانی -اچ‌آی‌وی). این متعلق به رتروویروس ها است، یعنی. ویروس هایی که در آنها RNA به عنوان حامل اطلاعات ارثی عمل می کند و با استفاده از رونوشت معکوس خوانده می شود. این ویروس متعلق به زیر خانواده لنتی ویروس ها - ویروس های کند اثر، بیماری زابا طولانی دوره نفهتگی. جنس HIV شامل گونه HIV-1 است که عامل ایجاد کننده آن است شکل معمولیایدز و HIV-2 که از نظر جزئیات ساختار و عملکرد بیماری زا با HIV-1 متفاوت است، اما از نظر کلی شبیه به آن است. HIV-2 نوع خفیف تری از این بیماری را ایجاد می کند که عمدتاً در آفریقا یافت می شود. اطلاعات زیر در درجه اول در مورد HIV-1 اعمال می شود (مگر اینکه به طور دیگری ذکر شده باشد). 3 گروه HIV وجود دارد - M، O و N، که به 34 زیر گروه تقسیم می شوند.

دیدگاه پذیرفته شده فعلی این است که HIV-1 از یک ویروس شامپانزه در غرب آفریقا (به احتمال زیاد در کامرون، یک کشور بومی HIV) در حدود دهه 1930 سرچشمه گرفته است. HIV-2 از ویروس simian SIVsm مشتق شده است. انواع HIV-1 به طور نابرابر در سراسر جهان توزیع شده است. در کشورهای توسعه یافته غرب، زیرگروه B، در اروپای مرکزی و روسیه - زیرگروه های A، B و نوترکیب های آنها غالب است. گونه های دیگر در آفریقا و آسیا غالب هستند و همه زیرگروه های شناخته شده HIV در کامرون وجود دارند.

مورفولوژی، ژن ها و پروتئین های ویروس نقص ایمنی انسانی

ساختار HIV در شکل نشان داده شده است. 4.46. قطر این ویروس در حدود 100 نانومتر است. اطراف آن توسط پوسته ای احاطه شده است که از آن به شکل قارچ بیرون زده است

پوسته

پروتئین ها و آنزیم های نوکلئوکپسید

نوکلئوکپسید

برنج. 4.46. نمودار ساختاری ویروس نقص ایمنی انسانی 1 (HIV-1)

فصل 4

برنج. 4.47. ساختار ژنوم ویروس نقص ایمنی انسانی 1 (HIV-1). مکان ژن ها روی دو مولکول RNA ویروس نشان داده شده است

خوشه ها که قسمت بیرونی آن توسط پروتئین پوششی gp120 و قسمت های مجاور غشاء و غشاء توسط پروتئین gp41 تشکیل شده است. سنبله ها نشان دهنده تریمرهای مولکول های نامگذاری شده هستند. این پروتئین ها در تعامل بین ویروس و سلول میزبان نقش دارند و پاسخ ایمنی میزبان عمدتاً علیه آنها است. لایه ماتریس عمیق تر است که به عنوان یک چارچوب عمل می کند. قسمت میانی ویروس توسط یک کپسید مخروطی شکل تشکیل شده است که حاوی RNA ژنومی است. نوکلئوپروتئین ها و آنزیم ها نیز در اینجا محلی هستند: رونوشت معکوس (p66/p51)، اینتگراز (p31-32)، پروتئاز (p10)، و RNase (p15).

ساختار ژنتیکی HIV و پروتئین های کدگذاری شده توسط ژن های آن در شکل نشان داده شده است. 4.47. دو مولکول RNA تک رشته ای با طول کلی 9.2 کیلوبایت حاوی 9 ژن هستند که 15 پروتئین HIV را کد می کنند. توالی‌هایی که ساختارهای ویروس را کد می‌کنند در انتهای 5' و 3' توسط تکرارهای انتهایی طولانی (LTR -Long terminal repeats) که عملکردهای تنظیمی را انجام می‌دهند، محدود می‌شوند. ژن های ساختاری و تنظیمی تا حدی همپوشانی دارند. ژن های ساختاری اصلی عبارتند از 3-gag، pol و env. ژن gag تشکیل آنتی ژن های هسته ای خاص گروه - نوکلوئید و ماتریکس را تعیین می کند. ژن pol DNA پلیمراز (ترانس کریپتاز معکوس) و سایر پروتئین های نوکلئوتیدی را کد می کند. ژن env تشکیل پروتئین های پوششی ذکر شده در بالا را رمزگذاری می کند. در همه موارد، محصول ژن اولیه تحت پردازش قرار می گیرد، یعنی. به پروتئین های کوچکتر تجزیه می شود. ژن‌های تنظیم‌کننده بین ژن‌های pol و env قرار دارند (ژن‌های vif، vpr، vpu، vpx، rev، tat) و علاوه بر این، قسمت 3'-پایانه ژنوم را اشغال می‌کنند (قطعاتی از ژن‌های tat و rev، ژن nef). . پروتئین های کدگذاری شده توسط ژن های تنظیم کننده برای تشکیل ویریون و ارتباط آن با سلول مهم هستند. از این میان، مهم‌ترین پروتئین‌ها عبارتند از tat، یک فعال‌کننده رونویسی، و nef (27 کیلو دالتون)، تنظیم‌کننده منفی آن. پروتئین nef معیوب در "کبدهای طولانی" آلوده به HIV که پیشرفت بیماری ندارند شناسایی می شود.

پروتئین های پوششی gp120 و gp41 برای ایمونولوژی عفونت HIV، تشخیص و توسعه رویکردهای ایمونوتراپی ایدز بسیار مهم هستند. تنوع بسیار بالای HIV با ژنوم menv مرتبط است. این ژن شامل 5 منطقه ثابت (C) و پنج متغیر (V) است. در مورد دوم، توالی اسید آمینه از یک ویروس جدا شده به ویروس دیگر 30-90٪ متفاوت است. حلقه متغیر V3 به ویژه برای ایمنی زایی مهم است. فراوانی جهش در ژن env 10-4-10-5 رویداد در هر ژنوم در هر چرخه است، یعنی. 2-3 مرتبه بزرگتر از فراوانی معمول جهش های ژنی. بخش قابل توجهی از مولکول توسط بقایای کربوهیدرات اشغال شده است.

4.7. نقص ایمنی

عفونت سلول ها با ویروس نقص ایمنی انسانی

فرآیند عفونت سلول های انسانی با HIV و تکثیر بعدی آن شامل چندین مرحله است. در فاز اولیه چرخه زندگیمراحل زیر را می توان تشخیص داد:

– اتصال HIV به سطح سلول (دریافت)؛

– ادغام غشاهای ویروس و سلول و نفوذ ویروس به داخل سلول (همجوشی و "برهنه کردن").

– شروع رونویسی معکوس؛ تشکیل یک مجتمع پیش ادغام؛

– انتقال کمپلکس پیش از ادغام به نوکلئوپلاسم؛

– ادغام پروویروس در ژنوم سلول

به مراحل مرحله پایانی چرخه زندگی HIV عبارتند از:

– رونویسی RNA ویروسی روی الگوی DNA پروویروسی یکپارچه.

– صادرات RNA ویروسی به سیتوزول.

– ترجمه RNA ویروسی، پردازش پروتئین؛

– مونتاژ ذره ویروسی روی غشای سلولی؛

– انتشار ویریون تازه تشکیل شده

دروازه های اصلی ورود عفونت غشاهای مخاطی دستگاه تناسلی ادراری و گوارشی است. در صورت وجود آسیب به غشای مخاطی، نفوذ ویروس به بدن بسیار تسهیل می شود، اما عفونت حتی در غیاب آنها نیز امکان پذیر است. در این مورد، ویروس توسط فرآیندهای سلول های دندریتیک که به لومن اندام نفوذ می کنند، دستگیر می شود. در هر صورت، سلول های دندریتیک اولین کسانی هستند که با HIV تعامل دارند. آنها ویروس را به غدد لنفاوی منطقه ای منتقل می کنند، جایی که سلول های CD4+ T را در طول تعامل سلول های دندریتیک با لنفوسیت های T در طول ارائه آنتی ژن آلوده می کند.

دریافت HIV به دلیل شناخت متقابل تریمر پروتئین gp120 ویروس و گلیکوپروتئین غشایی CD4 سلول میزبان است. در هر دو مولکول، مکان‌های مسئول برهم‌کنش آنها موضعی هستند. در مولکول gp120، این ناحیه در قسمت C ترمینال آن قرار دارد (باقی مانده 420-469)، علاوه بر این، 3 منطقه دیگر برای تشکیل محل برهمکنش با CD4 و منطقه (254-274) مهم است. مسئول نفوذ ویروس به داخل سلول پس از اتصال به غشاء CD4 است. در مولکول CD4، محل اتصال gp120 در دامنه N ترمینال V (D1) قرار دارد و شامل دنباله هایی از باقی مانده های 31-57 و 81-94 است.

از آنجایی که گیرنده HIV مولکول CD4 است، طیف سلول های هدف این ویروس با بیان آن تعیین می شود (جدول 4.20). به طور طبیعی، اهداف اصلی برای آن لنفوسیت‌های T CD4+ و همچنین تیموسیت‌های نابالغ هستند که هر دو گیرنده مشترک (CD4 و CD8) را بیان می‌کنند. سلول‌های دندریتیک و ماکروفاژهایی که CD4 را ضعیف بر روی غشاء بیان می‌کنند نیز به طور موثر با ویروس آلوده می‌شوند و به‌عنوان تولیدکننده فعال آن عمل می‌کنند (تکثیر HIV در سلول‌های دندریتیک حتی بیشتر از لنفوسیت‌های T است). سایر سلول‌های حاوی حداقل مقادیر کمی CD4 روی سطح نیز هدف HIV هستند - ائوزینوفیل‌ها، مگاکاریوسیت‌ها، سلول‌های اندوتلیال، برخی اپیتلیال (اپیتلیوم تیموس، سلول‌های M روده) و سلول های عصبی(نرون ها، سلول های میکروگلیال، آستروسیت ها، الیگودندروسیت ها)، اسپرم ها، سلول های کوریونالانتویس، ماهیچه های مخطط.

680 فصل 4

جدول 4.20. وضعیت پارامترهای ایمونولوژیک در سندرم نقص ایمنی اکتسابی

فهرست مطالب	پیش بالینی	مرحله بالینی
		تجلیات
تعداد لنفوسیت ها
	طبیعی یا کاهش یافته است	کمتر از 200 سلول در هر
		1 میکرولیتر خون
	معمولی یا مرتفع	طبیعی یا کاهش یافته است
		(درصد ممکن است باشد
نسبت CD4+ /CD8+
نسبت Th1/Th2	طبیعی یا کاهش یافته است
فعالیت سیتوتوکسیک	افزایش یافت
سلول های T iCal
پاسخ سلول T	طبیعی یا کاهش یافته است	به شدت افسرده
برای میتوژن ها
	طبیعی یا کاهش یافته است
آنتی ژنمی	ظاهر می شود	گم شده
	هفته دوم تا هشتم
آنتی بادی های در گردش	معمولا بعد از آن ظاهر می شوند	حاضر
عوامل محلول در	اشکال محلول زنجیره α IL-2R، CD8، TNFR،
جریان	β2-میکروگلوبولین، نئوپترین
		ویژگی کاهش یافته است
بافت های لنفاوی،	کاهش زودهنگام محتوا	سرکوب شدید
با مخاط ذکر شده است	سرکوب سلول های CD4+ T	سلول های T، به خصوص زیر
پوسته های ty		جمعیت CD4+
مصونیت ذاتی	طبیعی یا سرکوب شده	افسرده

مولکول های اضافی لازم برای ورود HIV به سلول ها، گیرنده های مشترک آن 2 گیرنده کموکاین هستند: CXCR4 (گیرنده برای کموکاین CXCL12) و CCR5 (گیرنده برای کموکاین های CCL4 و CCL5). به میزان کمتر، نقش یک گیرنده مشترک در بیش از دوازده گیرنده کموکاین ذاتی است. CXCR4 به عنوان یک گیرنده مشترک برای سویه های HIV-1 کشت شده بر روی آن عمل می کند خطوط سلولی Tو CCR5 - برای سویه های کشت شده بر روی خطوط ماکروفاژ (در ماکروفاژها، سلول های دندریتیک و همچنین در سلول های CD4+ T وجود دارد). هر دوی این گیرنده‌ها به‌عنوان رودوپسین مانند طبقه‌بندی می‌شوند و سیگنالی را از طریق پروتئین G مرتبط با آنها به سلول منتقل می‌کنند (به بخش 4.1.1.2 مراجعه کنید). هر دو گیرنده شیمیایی با هم تعامل دارند

با پروتئین gp120; محل اتصال این گیرنده ها پس از برهمکنش با CD4 در مولکول gp120 باز می شود (شکل 4.48). ایزوله های مختلف HIV از نظر گزینش پذیری برای گیرنده های مشترک متفاوت هستند. نقش مکمل در پذیرش HIV-2 توسط مولکول های چسبنده، به ویژه LFA-1 بازی می شود. پس از عفونت سلول های دندریتیک در تعامل

با HIV در گیرنده لکتین نقش داردعلامت DC.

4.7. نقص ایمنی

مناطق فوق متغیر gp120

برنج. 4.48. طرح تعامل بین ویروس و سلول هدف در طول عفونت آن. یکی از گزینه‌های برهمکنش مولکول‌های گیرنده سلول T و مولکول‌های HIV-1 که نفوذ ویروس به داخل سلول را تضمین می‌کند، نشان داده شده است.

گیرنده های مرکزی نقش مهمی در ادغام پوشش ویروسی با غشای سلول دارند. از طرف ویروس، نقش اصلی در همجوشی توسط پروتئین gp41 ایفا می شود. پس از مراحل همجوشی (همجوشی) و "برهنه کردن" ویروس، یک کمپلکس ریورستاز تشکیل می شود که با تشکیل DNA پروویروسی دو رشته ای رونویسی معکوس را فراهم می کند.

با کمک آنزیم اینتگراز ویروسی، cDNA در DNA سلول ادغام می شود و یک پروویروس را تشکیل می دهد. یکی از ویژگی های ادغام ژن های HIV در ژنوم سلولی این است که برای اجرای آن نیازی به تقسیم سلولی نیست. در نتیجه ادغام، یک عفونت نهفته تشکیل می شود که معمولاً سلول های T حافظه، ماکروفاژهای "خفته" را درگیر می کند که به عنوان ذخیره عفونت عمل می کنند.

تکثیر HIV عمدتاً یا منحصراً در سلول های فعال رخ می دهد. فعال سازی سلول های CD4+ T باعث ایجاد فاکتور رونویسی NF-KB می شود که به پروموترهای DNA سلولی و ویروسی متصل می شود. RNA پلیمراز سلولی RNA ویروسی را رونویسی می کند. زودتر از سایرین، ژن‌های tat و rev رونویسی می‌شوند که محصولات آن‌ها در تکثیر ویروس نقش دارند. Tat پروتئینی است که با توالی‌های انتهایی طولانی (LTR) در تعامل است که به طور چشمگیری سرعت رونویسی ویروس را افزایش می‌دهد. Rev پروتئینی است که خروج از هسته رونوشت‌های mRNA ویروسی را، هم به صورت اسپلایس شده و هم بدون پیوند، تسهیل می‌کند. mRNA ویروسی آزاد شده از هسته به عنوان الگویی برای سنتز پروتئین های ساختاری و تنظیمی عمل می کند. پروتئین های ساختاری gag، env، pol یک ذره ویروسی را تشکیل می دهند که از سلول جوانه می زند.

تحریک لنفوسیت ها توسط میتوژن ها تکثیر HIV و اثر سیتوپاتوژنیک آن را افزایش می دهد. این را می توان با عوامل درون زا همراه با فعال سازی سلولی که در لنفوسیت های فعال و ماکروفاژها ایجاد می شود تسهیل کرد (NF-kB قبلاً ذکر شد). سیتوکین ها، به ویژه TNFα و IL-6 نیز می توانند از این عوامل باشند. اولی رونویسی ژن های HIV را فعال می کند، دومی بیان HIV را در سلول های میزبان تحریک می کند. فاکتورهای تحریک کننده کلنی GM-CSF و G-CSF اثر مشابهی دارند. IL-1، IL-2، IL-3 و IFNγ می توانند به عنوان کوفاکتورهای فعال کننده HIV عمل کنند. هورمون های گلوکوکورتیکوئید غدد فوق کلیوی به اجرای برنامه ژنتیکی HIV کمک می کنند. IL-4، IL-7 و IFNα اثرات متضادی دارند.

پاسخ ایمنی به آنتی ژن های HIV

عفونت حاد ویروسی با تشکیل نسبتاً سریع سلول های T CD4+ و CD8+ اختصاصی آنتی ژن مشخص می شود که IFNγ را سنتز می کنند. این منجر به کاهش سریع محتوای ویروس در خون می شود، اما نه ناپدید شدن آن. پاسخ سلولی به عفونت HIV شامل تشکیل کمک‌کننده‌های CD4+ T و کشنده‌های CD8+ T است. سلول‌های سیتوتوکسیک CD8+ T در سراسر ایدز به جز در مراحل پایانی شناسایی می‌شوند، در حالی که سلول‌های CD4+ T اختصاصی ویروس فقط در مراحل اولیه بیماری شناسایی می‌شوند. کشنده های CD8+ T سلول های آلوده را قبل از خروج ویروس از سلول می کشند و در نتیجه تکثیر ویروس را قطع می کنند. رابطه معکوس واضحی بین تیتر ویروس در پلاسمای خون و تعداد کشنده های خاص CD8+ T وجود دارد. افزایش فعالیت تکثیری سلول های T آنتی ژن اختصاصی CD4+ و CD8+ با کاهش سرعت پیشرفت بیماری ارتباط دارد. برای بیمارانی که دارای تعداد زیادی کشنده CD8+ T هستند، پیشرفت آهسته بیماری مشخص است. سلول های CD4+ T همچنین نقش مهمی در از بین بردن ویروس دارند: بین پاسخ تکثیر سلول های T CD4+ به آنتی ژن های HIV و سطح ویروس در پلاسما رابطه وجود دارد. اشاره شده است که شدت ویرمی با تولید IL-2 نسبت معکوس بیشتری نسبت به IFNγ دارد. در عفونت مزمن ویروسی، سلول های T موثر به صورت کمی حفظ می شوند، اما از نظر عملکردی تغییر می کنند. کاهش توانایی سلول های CD4+ T برای سنتز IL-2. تشکیل مولکول های سیتوتوکسیک توسط سلول های CD8+ T ضعیف می شود. اعتقاد بر این است که کاهش فعالیت تکثیری سلول های CD8+ T ناشی از کاهش تولید IL-2 توسط کمک کننده های CD4+ است. تضعیف حفاظت ضد ویروسی با تمایز سلول های CD4 + T به کمک کننده های نوع Th2 تسهیل می شود. حتی طیف سیتوکین های سنتز شده توسط لنفوسیت های T سیتوتوکسیک CD8+ با غلبه سیتوکین های Th2 مشخص می شود.

طبیعی است که انتظار داشته باشیم که فرآیندهای ایمنی، که هر چند به شکل ضعیف، در پاسخ به یک ویروس مهاجم ایجاد می شوند، حداقل بتوانند درجه کوچکاز بدن در برابر عفونت محافظت می کند. در واقع، اگر این اتفاق بیفتد، فقط در دوره اولیهبیماری ها متعاقباً، علیرغم وجود سلولهای T CD4+ و CD8+ اختصاصی آنتی ژن، تکثیر شدید ویروس رخ می دهد. این یک نتیجه از انتخاب ویروس ها با تغییرات در اپی توپ های شناخته شده است

شرایط ناشی از نقص ایمنی سلولی (نقص سلول T) سندرم های نقص ایمنی ترکیبی شدید هستند. در برخی از بیماران، این اشکال نقص ایمنی می تواند باعث ایجاد بیماری های بسیار خطرناک (تا تهدید کننده زندگی) شود، در حالی که در برخی دیگر - فقط مشکلات جزئی سلامتی. اجازه دهید با جزئیات بیشتری در مورد بیماری هایی که با نقض ایمنی سلولی ایجاد می شوند صحبت کنیم.

کاندیدیازیس مزمن پوست و غشاهای مخاطی

کاندیدیازیس (برفک دهان) زمانی ایجاد می شود که پوست و غشاهای مخاطی تحت تأثیر عفونت قارچی قرار گیرند. در موارد نادر، عفونت می تواند به اندام های داخلی سرایت کند.

استعداد ابتلا به کاندیدیازیس با نارسایی انتخابی سلول های T وجود دارد. درمان کاندیدیازیس نیاز به استفاده از داروهای خاص دارد داروهای ضد قارچ(برخی بیماران نیاز به درمان نگهدارنده مادام العمر دارند.)

کندرودیسپلازی متافیزال

این بیماری یک نقص ایمنی اتوزومال مغلوب است. در ازدواج های فامیلی رایج است. بیمارانی که از کندرودیسپلازی متافیزال رنج می برند موهای نازک و شکننده دارند و بسیار مستعد ابتلا به عفونت های ویروسی هستند. در برخی موارد، این بیماری با پیوند مغز استخوان قابل درمان است.

سندرم لنفوپرولیفراتیو مرتبط با X

سندرم لنفوپرولیفراتیو مرتبط با X با افزایش آسیب پذیری نسبت به ویروس اپشتین بار مشخص می شود. ویروس اپشتین بارمی تواند باعث ایجاد بیماری های خطرناک (مونونوکلئوز عفونی، کم خونی آپلاستیک، سرطان غدد لنفاوی، آبله مرغان، واسکولیت، تبخال) شود.

لازم به ذکر است که این بیماری فقط در مردان به ارث می رسد.

سندرم IPEX

سندرم IPEX (تنظیم ایمنی مرتبط با X) می تواند باعث ایجاد بیماری های خود ایمنی مختلف (به ویژه دیابت) و همچنین اسهال مزمن و اگزما شود. سندرم IPEX فقط مردان را مبتلا می کند. درمان سندرم IPEX شامل دوره ای از سرکوب کننده های ایمنی و به دنبال آن پیوند مغز استخوان است. نتایج درمان معمولاً مطلوب است.

بیماری انسداد وریدی کبد

بیماری انسداد وریدی کبد شکل بسیار نادری از نقص ایمنی است که به صورت اتوزومال مغلوب با اختلال در سلول‌های T و B به ارث می‌رسد. بیمارانی که از این نقص ایمنی رنج می برند مستعد ابتلا به عفونت های قارچی هستند. همچنین ممکن است داشته باشند مقدار ناکافیپلاکت ها و بزرگ شدن کبد درمان پیوند کبد است.

دیسکراتوز مادرزادی

این سندرم باعث ایجاد میکروسفالی و پان سیتوپنی می شود. متأسفانه درمان این بیماری بسیار دشوار است و اغلب به درمان بیمار کمک نمی کند.

سندرم ICF

سندرم ICF (سندرم نقص ایمنی، بی ثباتی سانترومر و ناهنجاری های صورت) به دلیل نقص در DNA از هر دو والدین به ارث می رسد. بیماران دارای ویژگی‌های غیرطبیعی صورت (ماکروگلوسیا)، افزایش حساسیت به آن هستند بیماری های باکتریایی. یک درمان احتمالی پیوند سلول های بنیادی آلوژنیک است.

سندرم نترتون

سندرم نترتون یک اختلال بسیار نادر با توارث اتوزومال مغلوب است. بیماران دارند مقدار معمولیسلول های T، اما تعداد سلول های B کاهش می یابد. بیماران مستعد ابتلا به این بیماری هستند