Кристалната структура на слюнката. поддържане на здравето на зъбите

Глава 2. Актуални проблеми на диагностиката и контрола на ефективността на лечението на язва на дванадесетопръстника. Характеристики на кристалографията на слюнката при гастродуоденална патология (преглед на литературата).

2.1 Инструментална дефиниция на лигавичен дефект при язва на дванадесетопръстника.

2.2 Морфологична диагностика на фазата на възпаление при дуоденална язва.

2.3 Сегашно състояниедиагностика на инфекция с Helicobacter pylori.

2.4 Възможностите за използване на кристалография на слюнката в диагностиката и оценката на ефективността на лечението на пептична язва.

Глава 3. Обхват и методи на изследване.

Глава 4. Характеристики на кристалографската картина на слюнката при язва на дванадесетопръстника.

Глава 5. Обсъждане на резултатите от изследването.

Глава 6. Изводи.

Въведение в дипломната работа (част от резюмето) на тема "Кристалография на слюнката в диагностиката и мониторинга на ефективността на лечението на язва на дванадесетопръстника"

Списък с литература за дисертационно изследване Кандидат на медицинските науки Воробьов, Александър Викторович, 2004 г

Моля, имайте предвид, че научните текстове, представени по-горе, са публикувани за преглед и получени чрез разпознаване оригинални текстоведисертации (OCR). В тази връзка те могат да съдържат грешки, свързани с несъвършенството на алгоритмите за разпознаване. В PDF файловете на дисертациите и резюметата, които предоставяме, няма такива грешки.

ЗАКЛЮЧИТЕЛНА КВАЛИФИКАЦИОННА РАБОТА
„Използването на кристалоскопията за разкриване остра левкемияв AKR мишки"

Въведение .................................................. ................................. 3
Глава I. Преглед на литературата ............................................ .. .............. 3
1.1 Кристалография на биологични течности ................................. 6
1.1.1 Основни понятия за кристалното състояние на материята .......... 6
1.1.2 Процеси на кристализация в живите системи .............................................. .... 8
1.1.3 Кристалографски характеристики на биологични течности ... 8
1.1.4 Морфология на биологичните течности.................................................. .... 8
1.2 Кристалографски методи на изследване .............................. 12
1.2.1 Предпоставки за изследване на явлението кристализация на биологични течности ................................... ........................ 12
1.2.2 Текущо състояние на идеите за кристалографските методи на изследване .................................. ........................ 18
1.2.2.1 Общи характеристики на техниката на тезиокристалоскопия на биологични субстрати ................................. ................................. ................. 25
2. Обекти, цели и методи на изследване ......................................... 26
2.1 Цели, задачи и етапи на изследването ............................................ ..... 26
2.2 Приготвяне на ястия и работна зона..................................... ... 28
2.3 Приложни методи на изследване.................................................. 28
2.3.1 Тезио-кристалоскопска тестова техника ................................ 28
2.4 Статистическа обработка на данни ............................................. ....... 43
3. Резултати от изследването..................................... ......... 44
3.1 Морфология на урината на здрави и изкуствено заразени мишки с левкемия ......................................... ........................ ........................ .................. 44
3.2 Основните критерии за оценка на тезиграфския фациес на урината при мишки в нормални и патологични състояния (левкемия) ................................. ................................. .......... 46
3.3 Мишки от линията AKR............................................. .. ............... 49
3.4 Динамика на развитие на левкемия .................................................. ... ... 50
3.5 Заключения................................................. ... ......................
Списък на използваната литература ................................................. ................. 52

Въведение

Съвременните биотехнологии са синтез от научни постижения в различни области на природните науки: медицина, биология, математика, физика, химия и други науки. Нобеловият лауреат по физика Ж. Алферов отбеляза, че през последните години неговите ученици са постигнали особено значими резултати в произведения, извършени в пресечната точка на физиката и биологията, физиката и медицината. Такъв пример е подходът към решаването на най-острия съвременен социален проблем – диагностиката и ефективното лечение на злокачествените заболявания. Всяка година много милиони деца и възрастни хора, както и селскостопански животни от високоценни породи умират от левкемия. В цял свят технологиите за развитие и лечение на левкемия при хората се изучават върху животни със строго определена генетична линия. Повече от 10 години FGU "KNIIG и PC FMBA на Русия" провежда изследвания за развитието на трансплантируема левкемия върху модела на мишки от линията AKR. Въпреки напредъка, постигнат в областта на експерименталната и клинична левкемия, проблемът с описаната патология е много далеч от окончателното си разрешаване.
През последните 40 години активно се развива нова диагностична посока - кристалоскопия, основана на определяне на качествения състав на биологичните течности чрез образуването на кристални структури в тях.
Първи опит клинично приложениекристалография се отнася до началото на 60-те години на миналия век. Първоначално повечето изследователи използват тезиграфския метод. През 1964 г. Daems провежда изследване на кръвни кристалограми на пациенти с хипертрофия и карцином на простатата. J.Leal и B.Finlayson (1977) установиха особеностите на образуването на кристали в урината.

А.А.Кожинова и Л.С. Масленникова (1968). В.Я. Неретин и В.И. Киряков (1977) използва този метод за изследване на цереброспиналната течност на пациенти с различни заболявания на главния и гръбначния мозък. D. B. Kalikshtein и др.(1981) изследват тезиграфската картина на урината на пациенти с различни бъбречни заболявания. VV Usin (1995) изследва кристалографските промени в цереброспиналната течност и слюнката при пациенти с хронични неврогенни болкови синдроми на главата и лицето. Освен това тезиграфията се използва за диагностични и прогностични цели в педиатрията, гинекологията, гастроентерологията и други области на медицината.
Понастоящем кристалоскопският анализ се използва за изследване на почти всички биологични течности (кръв, урина, слюнка, цереброспинална течност, жлъчка, назален секрет и др.). Кристалните структури на биологичните течности съдържат най-важната информация за състоянието на даден орган, отделна телесна система и тялото като цяло.
В момента интересът на учените към използването на метода за кристалография на биологични течности в медицината остава висок. По този начин са разработени и въведени в практиката множество диагностични техники, които допринасят за изследването на широк спектър от характеристики на биосубстратите (биохимични, имунологични, морфологични, биофизични тестове и др.). Слабото място на повечето от изброените методи е високата цена поради използването на скъпи реактиви, оборудване и обучение на висококвалифициран персонал. Всичко гореизложено налага поддържането и поддръжката на достатъчно голям брой поддържащи услуги.
Променените икономически условия обаче налагат разработването и прилагането на високоефективни и икономични методи за диагностика на левкемия.
Кристалоскопският метод има значителна диагностична чувствителност и следователно намери широко приложение, първо в практиката на съдебно-химическия анализ, а след това и в медицината. Това позволи да се разширят възможностите за диференциална диагностика при определяне на естеството на патологичния процес (алергичен, възпалителен и др.), При идентифициране на наличието на анемия, оток, интоксикация и нейната тежест. Използвайки метода на кристалография на биополимери, е възможно да се определи патологията различни тела. Тъй като тази техника включва комбинирането на материални частици с кристалообразуващ разтвор, естеството на злокачествения процес може да се съди и по образувания модел на кристали (Kontorshchikova K.N. et al. (2002-2012).
Целта на тази дипломна работа е да се разработи метод за кристалоскопия на урина на AKR мишки за диагностика на остра левкемия.

1 Литературен преглед.
1.1 Кристалография на биологични течности

Терминът "кристал" идва от гръцката дума "krystallos", което означава "лед". В кристала атомите и молекулите образуват подредена структура (кристална решетка). Кристалите са важни както в неживата, така и в живата природа, което е основата за обособяването на самостоятелен клон - кристалография. Кристалографията е наука за структурата и физичните свойства на единични кристали и кристални агрегати, явления, възникващи в кристална среда под влияние на вътрешни свойства или външни влияния.

1.1.1 Основни понятия за кристалното състояние на материята

Кристалите се образуват от пара, разтвор, стопилка, аморфно вещество или от вещество в различно агрегатно състояние. Кристализацията започва при определени външни условия, например преохлаждане на течността, пренасищане на парите, дехидратация на разтвора, когато много малки кристали постепенно се появяват около центровете на кристализация. Кристалът расте чрез добавяне на атоми или молекули от течност или пара.
Има равновесни и реални форми на кристалите. Равновесната форма на кристалите се постига само при равновесни условия, т.е. с безкрайно бавен процес на кристализация.
Тъй като параметрите външна средаса нехомогенни във времето и пространството, в кристалната структура неизбежно се появяват различни дефекти. И така, реалните (принудени) форми на кристалите отразяват не само симетрията на кристала, но и влиянието на външните условия на растеж (концентрация на различни вещества в средата на образуване на кристали, температура, налягане и т.н.) върху всякакви промени в което кристалите реагират много чувствително. Някои форми на кристали са показани на фиг.1.

А b V

Ж д д

и ч И

Фиг.1 Форми на кристали в различни биологични течности: a, b-нишковидни, c, d, e, f, g - сферолитни образувания с радиални игли; h-потиснат дендрит; и - разклонен дендрит.
Най-естествен и технически твърди материалиса поликристали, монокристалите се наричат ​​монокристали. При кристализацията на металите и солите често се образуват дървовидни кристали - дендрити. По време на кристализацията се образуват сферолити от един или няколко центъра, състоящи се от радиално разположени кристални игли.

1.1.2 Процеси на кристализация в живите системи

Всички биологични среди на организма на животните и хората имат специфична молекулярно подредена структура, тъй като те са лиотропни течни кристали. Живият организъм е сложна силно динамична система, в която непрекъснато протичат процеси на взаимодействие на много структурни компоненти между тях и околната среда. При нормални условия колебанията в биофизичните параметри на организма са ограничени в относително тесни граници. Въпреки това, в определени ситуациите могат да надхвърлят нормални границидостатъчно дълъг период. В някои случаи това се дължи на адаптирането на тялото към необичайни нови условия на съществуване, в други - на дълбоко нарушение на хомеостазата с постоянна декомпенсация. Тези сложни силно динамични процеси са ясно отразени в характеристиките на кристалните структури на различни биологични течности или биополимери.

1.1.3 Кристалографски характеристики на биологични течности

Известно е, че метаболитните нарушения, като компонент на патогенезата различни заболявания, води до промяна химичен състави физикохимични свойства на биологични течности (наричани по-нататък биотечности). Сложните динамични процеси, протичащи в биофлуидите, се отразяват в морфологичните характеристики на структурите, образувани по време на кристализацията на проби от биофлуиди. Понастоящем са разработени и използвани в клиничната практика оригинални диагностични методи, базирани на структурен анализ на биологични течности. Структурите на твърдата фаза на биологичните течности се образуват от молекули и главно микроагрегати от органични и минерални вещества, разтворени в биологичната течност. Специфичните характеристики на структурите се определят от общите физикохимични свойства на биофлуида, количествения и качествен състав на молекулите на тези вещества и способността им да установяват вътремолекулни и междумолекулни химични връзки. В резултат на това структурата на биологичните течности носи цялостна информация за състоянието на метаболизма на органите на субекта, измити от биофлуида, и за хомеостазата на тялото като цяло.
Морфологията на биологичните течности е доказана научно направлениев областта на медицината, ветеринарната медицина и други науки. Образуването на структурата на биотечност по време на кристализация има ясни модели.
Замърсяването на околната среда с различни токсини, сред които тежките метали (ТМ) заемат специално място, води до значително повишаване на вероятността от някои заболявания, включително рак. Комбинацията от морфологичен анализ на телесната биофлуид с неговия локален елементен анализ може да служи като нов аналитичен инструмент за изследвания в областта на ранната диагностика на онкологичните заболявания.
Напредъкът в подобряването на микрохимичния анализ, кристалната оптика и тезиграфията формира основата за изследване на кристалните структури на човешки и животински биологични течности при различни патологии. Кристалографските процеси в биологичните течности привличат все повече внимание на учените. Изследванията, проведени през последните десетилетия, са фокусирани върху идентифицирането на връзката между кристалографските характеристики на биотечностите и развитието на патологични процеси в тялото; или си поставят за задача да изследват влиянието на външни въздействия върху образуването на кристални структури в биофлуидите (Skopinov S.A. et al. 1997).
Така в една биологична течност може да се наблюдава комплекс от структурни пренареждания от разтвор към кристали. Кристалографският анализ дава възможност да се открият патологични промени в кристалната решетка на супрамолекулно ниво. Тези промени могат да служат като ранен диагностичен критерий за развитието на патологичния процес.

1.1.4. Морфология на биологичните течности

Изследването на морфологичния модел на различни биотечности е добре познато направление в естествените науки, на което през последните години се обръща специално внимание от учени от много дисциплини. Понастоящем е разработен метод за получаване на информация за състоянието на тялото, функциите на отделните органи и тъкани на етапа на изразено клинични проявлениязаболявания и в предсимптоматичен стадий, т.е. на ниво развитие на патологичен процес от едно или друго естество (възпалителни, онкологични, образуване на камъни, хипоксично-исхемични, склеротични и др.). Методът за кристалография на различни биополимери е прост по отношение на техниката на настройка и отчитане на резултатите. Разследван морфологична картинадехидратирана (изсъхнала) капка биологична течност, която е стандартна тънка секция. Например, когато се изследва капка урина, може да се определи активността на процеса на образуване на камъни в бъбречната тъкан и състава на съществуващ или възникващ камък в бъбреците (урати, калциев оксалат, калциев фосфат); остър или хроничен ход на кандидоза на пикочно-половата система, хипоксично-исхемично увреждане на бъбречната тъкан и тежестта на процеса (хипоксична нефропатия, интерстициален нефрит, остра бъбречна недостатъчност, бъбречни инфаркти); бактериална инфекция (без определяне на вида на патогена).
Една капка биологична течност може да разбере от какво е болен човек и какъв е той. биологична възраст. Капка изсъхнала течност се поставя върху истинско микроскопско предметно стъкло и на монитора се появява многократно увеличено изображение. „В капка слюнка, взета на празен стомах, се виждат фракционни трилъчеви пукнатини, това е доказателство за стагнация. А в капка, взета след закуска, няма пукнатини, което означава, че каналите на слюнчените жлези са в Но киселинността на стомашния сок е леко намалена, сега има капка на екрана кръвен серум, той прилича на бутон с ръб и е покрит с радиални пукнатини, структурата на пукнатините е подложена на внимателен анализ : моделът по периферията показва, че налягането на пациента се повишава от време на време поради вазоспазъм.
Професор С.Н. Шатохина обяснява, че тялото може условно да се раздели на две системи: клетъчна и неклетъчна. Целият свят изучава клетките на първо място, но биологичните течности, които свързват клетките, носят много информация за тяхната жизнена дейност. Когато капка биофлуид изсъхне, кодираната в нея информация става видима. „При прехода към стабилно състояние силата на връзките се увеличава с два порядъка", обясняват изследователите. „След отстраняване на водата остава филм, върху който модел на пространствено разположение на елементи, които преди това са били в разтворен състояние е фиксирано”, болестта винаги е придружена от натрупване на някакви химикали, което променя структурата, нарушава се симетрията и самите „езици”, „листа” или „плочи”, които професор С.Н. Shatokhina намерени в пациента. И за да открият тези модели, изследователите разработиха специален метод за изсушаване на капки. Една капка слюнка може да каже много. Отразява кариес и пародонтоза. И също така, например, гноен отит, което води до появата на ламеларни форми в капка слюнка. Анализирайки капка стомашен сок, специалистите разкриват хроничен гастрит и язви; ставна течност - артроза; накрая, разкъсвания - глаукома, катаракта, възпалителни процеси в ретината.
Днес учените работят в тясно сътрудничество с клиницистите, като им помагат да видят скритите патологии и да усъвършенстват методите на лечение. Чрез анализиране на биофлуиди изследователите могат също така да определят истинската биологична възраст на човек. Той се отделя от ламеларни структури в кръвния серум, които по химическа природа са холестерол. От него в бъдеще се формират атеросклеротични плакина съдове. Това е един от най-величествените „маркери на стареенето“. И учените също така оценяват взаимния здравен потенциал, за това кръвта в епруветка се облъчва с електромагнитно поле или лазер - след такова излагане междумолекулните връзки се разрушават, следователно, когато такава кръв изсъхне, моделът на филма ще бъде различен, за здрав човек са необходими четири часа за възстановяване на връзките след облъчване. Ако отнеме ден - три - трябва да се притеснявате. Изследователите смятат, че чрез този метод може да се определи дали човек е в състояние да работи в екстремни условия.

1.2 Кристалографски методи на изследване.
1.2.1 Предпоставки за изследване на явлението кристализация на биологични течности

През последната четвърт на миналия век се наблюдава значителен интерес на научната общност към кристалографските методи на изследване, които се изучават от гледна точка на практическото им приложение като алтернативен подход в клиничната диагностика. Те позволяват цялостна оценка на капацитета на кристализация на различни биологични субстрати. През последните години активно се развива нова диагностична посока - клинична кристалография, основана на определяне на качествения състав на течност чрез образуването на кристални структури.
Методът за качествено определяне на химикалите по техните кристалографски характеристики е предложен за първи път от студента M.V. Ломоносов - Т. Е. Ловиц. През 1804 г. последният описва два метода за качествен анализ на вещества - методът на "набезите на изветрената сол" и методът, основан на промяна на нормалното образуване на кристали чрез въвеждане на друга съставка в разтвора на кристализиращо вещество, като по този начин се полагат основите за две съвременни направления в кристалографията:
1) кристалография на естествени течности - метод, основан на определяне на качествения състав на течност от кристалите, образувани по време на изпаряване;
2) тезиграфия - метод, основан на добавяне на стандартен кристалообразуващ разтвор към тестваната течност и анализиране на промените в кристалите на стандартния разтвор в присъствието на тестваната течност.
Първият опит за клинично приложение на кристалографията датира от началото на 60-те години на миналия век. Първоначално повечето изследователи използват тезиграфския метод. През 1964 г. Daems провежда изследване на кръвни кристалограми на пациенти с хипертрофия и карцином на простатата. Leal J. и Finlayson B. (1977) установяват особеностите на образуването на кристали в урината.
Използването на методи за кристалографско изследване (CGI) в домашната медицина е докладвано за първи път в работата
Кожинова А.А. и Масленникова Л.С. (1968). Неретин В.Я. и Киряков В.И. (1977) този метод е използван за изследване на цереброспиналната течност на пациенти с различни заболявания на мозъка и гръбначния мозък. D. B. Kalikshtein и др.(1981) изследват тезиграфската картина на урината на пациенти с различни бъбречни заболявания. Усин В.В. (1995) изследват кристалографските промени в цереброспиналната течност и слюнката при пациенти с хронични неврогенни болкови синдроми на главата и лицето. Освен това тезиграфията се използва за диагностични и прогностични цели в педиатрията, гинекологията, гастроентерологията и други области на медицината.
Понастоящем кристалографският анализ се използва за изследване на почти всички биологични течности (кръв, урина, слюнка, цереброспинална течност, жлъчка, назален секрет и др.). Кристалните структури на биологичните течности съдържат най-важната информация за състоянието на съответните органи и тъкани.
За първи път е използван кристалографски анализ на слъзната течност (LF) за диагностика на офталмологична патология
Ченцова О.Б. със съавтори през 1985 г. Те предложиха метод за тезиграфия на слъзната течност - кристалография с добавяне на алкохолен разтвор на меден хлорид. В конична епруветка се поставят 0,02 ml сълза и при непрекъснато разклащане се добавят 0,1 ml 2% алкохолен разтвор на меден хлорид. Епруветката се затваря с памучен тампон и се оставя да се утаи на стайна температура. След 1 час и 20 минути капка от получения разтвор се нанася върху предметно стъкло, което се поставя в петриево блюдо в термостат при температура 25°С за два часа. След изтичане на инкубационния период се извършва макро- и микроскопска оценка на резултатите.
Отбелязани са особеностите на тезиграфската картина при пациенти с възпалителни, дегенеративни и туморни заболявания на очите и орбитата. Според Ченцова O.B. et al., кристалографската картина (CHC) на слъзната течност при нормални възрастни и деца е прозрачни, дълги, рядко разположени цилиндрични кристали, които са събрани в правилен геометричен модел, най-често под формата на триъгълник. Ченцова О.Б. et al.(1989) провеждат CGI SF за диференциална диагноза на орбитални заболявания. Авторите разкриват качествени разлики от нормата в препаратите за сълзи при пациенти с ендокринна офталмопатия, възпалителни орбитални заболявания и неоплазми.
Оттогава кристалографското изследване се използва от тези и други автори при диагностицирането на различни очни заболявания.
Тюриков Ю.А., Покоева В.А. (1992) използва техниката тезиграфия с добавяне на наситен воден разтвор на глицин и ежедневно излагане на стайна температура. Разкрити са характерни промени в кристалограмите на пациенти с вътреочни и орбитални неоплазми.
Редица автори са използвали SF тезиграфия не само за диагностика, но и за динамично наблюдение на CHG SF на засегнатото око (Kokarev V.Yu. et al., 1990; Somov E.E., Brzhesky V.V., 1994; E.I. Ustinova et al. 1996) препоръчва метода на кристалографско изследване на SF като допълнителен лабораторен тест за диференциална диагноза и изясняване на фазата на активност на туберкулозния процес.
Чухман Т.П. (1999) подобри техниката на SF тезиграфия, като предложи да се замени дълготрайното утаяване на смес от сълзи и кристалообразуващ разтвор с центрофугиране, което намали времето за изследване. Също така, KGI SF беше извършен за различни възпалителни очни заболявания и идентифициран характерни видовекристали, което направи възможно навременното откриване на усложнения дори на предклиничния етап. Освен това авторът изследва ефекта върху кристалогенезата на различни външни фактори (температура на сушене на препаратите, влажност), както и методи за събиране на сълзи.
Интересът на учените към използването на метода на тезиграфия на биологични течности в медицината остава висок и в момента. Тезиграфията обаче се оказа доста трудоемка техника, изискваща използването на допълнителни реактиви и трудна за интерпретация на резултатите (Шатохина С.Н., Шабалин В.Н., 1997). Освен това не са известни закономерностите на процеса на кристализация, на които се основава методът на тезиграфията. Търсенето на по-прости и по-достъпни методи за кристалографско изследване доведе до появата на редица трудове, посветени на кристалографията на нативни препарати от биотечности.
В резултат на това възниква необходимостта от разработване на експресен метод, който да се използва като първичен тест при диагностицирането на различни заболявания. Освен това необходимите изисквания за избора му са достатъчна степен на точност и възможност за широко използване без инвестиране на значителни материални ресурси (Меншиков В.В., 1988; Назаренко Г.И., Кишкун А.А., 2000; Зеленин В.А., Буличев В.Ф., Стеклова Г.П. и др., 2004).
Специалисти от различни области на медицината се заинтересуваха от този проблем. Последствието от това беше бързото развитие на диагностиката на слюнката, която, от една страна, беше неинвазивна, от друга страна, направи възможно бързото получаване на предварителни резултати (Боровски Е. В., Леонтиев В. К., 1991; Сукмански О. И., 1991 ; Комарова Л. Г., Алексеева О. П., 1994; Антропова И. П., Габински Я. Л., 1997; Бутаев М. Т., 1998; Григориев И. В., Чиркин А. А., 1998; Булгакова В. А., 1999; Еричев И. В., Коротко Г. Г., Решетова И. В., 1999; Денисов А. Б., 2000, 2001;).
Методите за качествено определяне на химичните съединения по способността им да кристализират са предложени за първи път от Т. Е. Ловиц, ученик на М. В. Ломоносов, през 1804-1805 г. В своите трудове той описва два оригинални теста за качествен анализ на структурата на изследваните вещества. Това е „методът на отлагане на изветрена сол“ (кристални отлагания), както и микрокристални реакции. Първото от горното беше основата на метода за качествено определяне на лекарства, разработен много по-късно (Книжко П. О., 1956; Бубон Н. Т., Пузиревски К. Я., 1965; Николская М. Н., Гандел В. Г., Попков В. А., 1965; Лобанов В. И. , 1966). Техниката на микрокристалните реакции сега е намерила приложение в съдебната медицина (Белова A.V., 1960; Semenova T.D., 1972; Taher M.A. Assad, 1995).
В контекста на развитието на идеите за кристализацията на човешките биологични течности става актуален въпросът за неговата приложимост в диагностиката на различни патологични състояния (Кокуева О. В., Савина Л. В., Ли А. М., 2000; Зубеева Г. Н., Мотилева И. М. , Потехина Ю. П., 2001; Шабалин В. Н., Шатохина С. Н., 2001; Воробьов А. В., Воробьева В. А., Нещакова Н. Л., 2002; Алексеева О. П. , Воробьов А. В., 2003; Волосникова Н. Н., Музлаев Г. Г., Савина Л. В. и др. др., 2003; Рапис Е. Г., 2003; Анаев Е. Х., Шатохина С. Н. ., Чучалин А. Г., 2004).
В тази връзка кристалоскопските методи на изследване сега се обособяват в доста отделен клон на медицинската наука, чиято цел е декодирането на метаболитната информация, скрита в качествени и количествен съставбиологични среди.
Освен това една унифицирана схема за анализ може да допринесе за обединяването и опростяването на кристалографските изследвания. Това ще бъде полезно както при диференциална диагноза, така и при извършване на тест за ориентация.
Важен фактор за стандартизиране на резултатите от диагностичната кристализация на биологичните субстрати на тялото може да бъде и единна форма на заключение на кристалоскопски тест, включително информация за качествените и количествени промени в състава на лицето на пациента по отношение на лицето на пациента. практически здрави индивиди (промени в броя и размера на структурите, поява на патологични за дадена биотечност). образувания и др.).

1.2.2 Сегашното състояние на идеите за кристалографията
изследователски методи

Кристалографски методи на изследване– набор от методологични подходи за извличане на информация за метаболизма и хомеостазата на организъм и/или негови части, базирани на феномена на свободно или инициирано от основни вещества с различен химичен състав, кристално образуване на изсушена течност или течен биологичен материал, последвано от тълкуване на резултатите от кристалогенезата.
През последните тридесет години са формирани множество методологични подходи за провеждане на диагностична кристалоскопия, но трябва да се отбележи, че повечето от тях имат като същност само промяна на условията за провеждане на процеса на дехидратация, докато изглежда възможно да се само основно само три възможности: свободна кристализация, в случай че директно анализираната биологична течност е подложена на сушене; инициирана кристалогенеза, когато се визуализира резултатът от дехидратацията на системата "биосреда - основно кристалообразуващо вещество", основно въз основа на изследване на структурния генезис на последното; частичната кристализация (методът на моделните композити) е съвкупност от методи за пресъздаване на отделните компоненти на кристалоскопската картина на определен биологичен субстрат и поради това е значим преди всичко за научни изследвания.
Като цяло към днешна дата в съвременната кристалоскопия са предложени следните методи:
1) Класическата кристалоскопия (Д. Б. Каликщейн, Л. А. Мороз, Н. Н. Квитко и др., 1990; Л. В. Савина, 1992, 1999; В. Н. Шабалин, С. Н. Шатохина, 2001; Алексеева О. П., Воробьов А. В., 2003) е един от най-често срещаните варианти за извършване на тест за дехидратация, чиято същност, както вече беше споменато, е директната кристализация на биологични течности. Приготвянето на препарати може да се извърши както при стайни условия, така и в термостат (37-400 ° C), но според многобройна литература продължителността на приготвяне на микропрепарати от биологични среди е 1-2 дни, което очевидно не отговаря на изискванията за бързи тестове. В тази връзка е необходима значителна корекция на условията на сушене, за да се оптимизира времето, изразходвано за приготвяне на микропрепарата.
Трябва да се отбележи, че този кристалоскопски подход дава възможност да се оценят кристалообразуващите свойства на биофлуид и следователно не само да се получат диагностично значими фациеси (кристализирани проби), но и да се установи наличието на отделни компоненти на анализирания субстрат ( Савина Л. В., Павлишчук С. А., Самсигин В. Ю. и др., 2003). Този въпрос няма адекватно разрешение в специализираната литература, но е важен като практическа идентификация на патологичните включвания в биологичната среда, биологията и медицината - изучаването на патогенетичните аспекти на патологията на хората и животните, както и на разумен подбор и оценка на ефективността на лекарствената и нелекарствената терапия (Buiko A.S. , Tsykalo A.L., Terentyeva LS. ; Алексеева О. П., Воробьов А. В., 2003; Байдаулет И. О., 2003). Това налага изследването на особеностите на кристалогенезата на компонентите на биологичните течности, включително чрез частично моделиране на дехидратацията. Някои начини за решаване на поставения въпрос бяха предложени от L. V. Savina et al. (2003), според които изглежда възможно да се реконструира единна картина на биокристализацията чрез поетапно изследване на кристалообразуването на разтвори, които са моносистеми, съдържащи 1 компонент на биосредата в концентрация, която ясно съответства на него ( „композитен модел“). Въпреки значението на този методологичен подход, трябва да се признае, че в този случай не се взема предвид един от най-важните фактори, които определят природата на кристалогенезата на биосубстрата - наличието на междумолекулни взаимодействия между компонентите на биофлуида, които се различават по химическа структура, която от своя страна играе важна роля във формирането на окончателните кристалоскопични модели, по-специално, определяйки броя и диаметъра на "първичните зони" на фациесите, които се трансформират по време на процеса на дехидратация в кристализационни пояси ( Колединцев М.Н., 1999; Колединцев М.Н., Нечаев Д.Ф., Майчук Н.В., 2002; Колединцев М.Н., Майчук Н.В., 2002).
Подобни опити за моделиране на образуването на кристали са направени от G. G. Korotko (2000), които ще бъдат обсъдени по-нататък.
2) Тезиграфията (Нефедова Н. Б., Цывенкова Л. А., 1985; Мороз Л. А., Каликщейн Д. Б., 1986; Гугутишвили Ц. Г., Симонишвили Л. М., 1990; Кидалов В. Н. ., Хадарцев А. А., Якушина Г. Н., 2004) също се отнася до преобладаващи и повечето общи методи за извършване на кристалоскопски тест и представлява допълнително въвеждане на различни химикали в изсушената биотечност на човешкото тяло, за да се инициират процеси на образуване на кристали. За да направите това, използвайте широка гама кристалообразуващи (NaCl, CaCl2, MgCl2 и други), повечето от които имат комплексообразуващи свойства, а концентрациите при различни авториварират значително.
В лабораториите, използващи този кристалографски метод, прилагането му се осъществява чрез прилагане на класическа тезиграфия, т.е. разглеждане само на резултата от дехидратация на система, състояща се от биоматериал и основно кристалообразуващо вещество като независима проба, което значително усложнява интерпретацията на получената информация поради обективни трудности при сравняване на проби, получени при различни условия и нееднакъв функционален статус на организма на изследваните лица. В тази връзка тезиграмата, формирана в съответствие с описания по-горе подход, изисква сравнение на получения резултат с вече съществуващи "шаблони" ("фотографски" подход) (Shabalin V.N., Shatokhina S.N., 2002; Baydaulet I.O., 2003 ; Белоглазов В. Г., Атков Е. Л., Федоров А. А. и др., 2003; Волосникова Н. Н., Музлаев Г. Г., Савина Л. В. и др., 2003; Кидалов В. Н., Хадарцев А. А., Якушина Г. Н., 2004) или стойностите на емпирично намерени параметри ( Тарусинов Г. А., 1994; Колединцев М. Н., Нечаев Д. Ф., Майчук Н. В. ., 2002), но този фактор определено и значително намалява информационното съдържание и надеждността на тезиграфската диагностика.
Струва ми се важно да се подчертае, че към момента няма общоприета схема-алгоритъм за описание, анализ и интерпретация на тезиграфския фациес, както няма и единен метод за получаването му.
Има единични съобщения за използването на контролна проба от основни вещества (Tarusinov G. A., 1994), но използването му е рязко ограничено по неизвестни причини (Kamakin N. F., Martusevich A. K., 2003; Martusevich A. K. , 2004).
3) Профилна дехидратация (Shabalin V.N., Shatokhina S.N., 1999). Това включва нанасяне на биологични течности върху предметно стъкло, предварително обработено с разтвор на лецитин с определена концентрация. С помощта на лецитин според авторите изглежда възможно да се промени афинитета на кристалите към основата и следователно да се трансформират термодинамичните характеристики на дехидратирания биосубстрат.
4) Вакуумната кристалоскопия (Savina L.V., 1999) включва подготовка (сушене) на препарати под вакуум. Така се постига изолиране на дехидратираната проба от външната среда, създава се относително затворена система, в която се извършва отстраняването на течната част от биосредата и процесите на биокристализация.
5) Кристализация на биологични течности в затворена клетка (Антропова И.П., Габински Я.Л., 1997). Изолирането на образуващата се проба от външната среда се осигурява подобно на вакуумната кристалоскопия, но технически този метод е по-удобен за практическа употреба, тъй като не изисква създаване на условия на вакуум, а само използването на затворена клетка, в което е възможно да се проведе директен микроскопски анализ. Авторите на модификацията са използвали предварително центрофугиране на биоматериала.
6) Коланна кристалоскопия - кристалографски метод за изследване, основан на изследването на пояси от кристали и отделни кристални образувания (Колединцев М.Н., 1999; Колединцев М.Н., Нечаев Д.Ф., Майчук Н.В., 2002; Колединцев М.Н., Майчук Н.В., 2002). Физикохимичната основа на метода е хетерогенността на компонентния състав на биологичните течности в зависимост от молекулните тегла на веществата, които са елементи на тази биосреда, и следователно тяхната различна способност да се движат по фациесите по време на поетапното дехидратиране на пробата и образуването на фациес. Това води до образуването на един или (много по-често) няколко кристализационни пояса, чието регистриране позволява да се съди за тази характеристика на биологичната течност (Колединцев М.Н., Нечаев Д.Ф., Майчук Н.В., 2002).
7) Метод на клиновидна дехидратация (В. Н. Шабалин, С. Н. Шатохина, 2001-2005 г.). Метод за дехидратиране на капка биологична течност, поставена върху прозрачна плоскост. Капката има формата на клин в напречното сечение, което създава условия за неравномерна скорост на дехидратация в радиална посока. Това предизвиква осмофоретично движение на разтворените вещества в обема на дехидратираната капка в съответствие с физикохимичните параметри и образуване на ясни, строго индивидуализирани структури, съответстващи на състоянието на организма, от който е получена тестваната течност.
8) Поляризационна микроскопия (Rapis E.G., 1976; Antropova I.P., Gabinsky Ya.L., 1997; Savina L.V., Pavlishchuk S.A., Samsygin V.Y. et al., 2003) - метод за оценка на резултатите от свободен или иницииран кристал образуване на биологична течност в поляризирана светлина, което прави възможно идентифицирането на някои Допълнителни функциикакто на фациеса като цяло, така и на отделни негови структурни елементи, както и за характеризиране на текстурата му. Той е универсална модификация на подхода за визуализация на резултатите от кристалогенезата и може да се използва като допълнение към всеки от кристалографските методи за изследване на биологични среди.
9) Субстратната конгрегация (G. G. Korotko, 2000) е спомагателен кристалографски метод, който позволява моделиране на кристалообразуването на отделни компоненти, които са компоненти на биологични субстрати (липиди, протеини, полизахариди). В този случай, в сравнение с метода на „моделните композити“, се постига по-голямо приближение до реалния състав на биологичната среда по отношение на асортимента, но не и по отношение на точното съотношение на компонентите, но е възможно да се вземат предвид промените в биофлуида по основните му биохимични елементи.
10) Течнокристална термография (Buiko A.S., Tsykalo A.L., Terentyeva L.S. et al., 1977; Shkromida M.I., Pospishin Yu.A., 1977) е обещаваща техника за кристалографски изследвания, основната точка на която е използването на холестеричен течен кристал (температурен диапазон на топене 33.5-38.20C или 36.8-41.20C) покрития на изследваните повърхности със системи с холестерилпеларголеат, холестерилолеат и др. В този случай кожата се използва като "подложка", върху която се нанася състава. Интерпретацията на трансформацията на състоянието на течните кристали се оценява с помощта на специализиран спектрофотометър.
Достатъчно широките диагностични възможности на този методологичен подход в момента практически не се използват, въпреки очевидното обещание, простота и скорост на прилагане.
11) Методът за енергийно-информационен трансфер от биологични течности към носител (Vorobiev A.V., Vorobyova V.A., Neshtakova N.L. et al., 2002) се състои в прехвърляне на информация от биологична среда към „чист грах от млечна захар“, след което на предметно стъкло, те се смесват с 0,1 ml от основното вещество (5% воден разтвор на меден сулфат). Приготвянето на микропрепаратите се извършва в тъмна стая за 24 ч. Оценката се извършва чрез качествен анализ на получените кристализирани проби.
Такова разнообразие от методологични възможности за провеждане на теста, който се основава на дехидратацията на биологични субстрати, вероятно се дължи на факта, че използването на различни подходи допринася за по-добро идентифициране на получените резултати (таблица). Извличането на информация, скрита в съвкупността от метаболити, тяхното количествено и качествено съотношение в биоматериала, е една от най-важните и важни задачи на кристалоскопската диагностика. От гледна точка на много автори (Алексеева В. И., 1965; Гугутишвили Ц. Г., Симонишвили Л. М., 1990; Каликщейн Д. Б., Мороз Л. А., Квитко Н. Н. и др., 1990; Антропова И. П., Габински Я. Л., 1997; Плаксина Г. В., Римарчук Г. В., Бутенко С. В. и др., 1999; Шабалин В. Н., Шатохина С. Н., 2001, 2004; Алексеева О. П., Воробьов А. В., 2003; Байдаулет И. О., 2003; Рапис Е. Г., 2003; Савина Л. В., 19 99; 2003; Бистревская А. А., Деев Л. А., 2004; Залески М. Г., Емануил В. Л., Краснова М. В., 2004; Кидалов В. Н., Хадарцев А. А., Якушина Г. Н., 2004; Громова И. П., 2005), преобладаващата роля в разкриването на метаболитните промени в състава на средите на човешкото и животинското тяло се причислява към качествения компонент, като се вземат предвид детерминистичните връзки между отделните образувания (кристална и аморфна природа). На количествения компонент се обръща много по-малко внимание, но той е ясен критерий за обективност на наблюдаваните различия.

1.2.2.1. Обща характеристика на техниката на тезиокристалоскопия на биологични субстрати

Въз основа на анализа на представените по-горе литературни данни е предложен интегративен метод за тезиокристалоскопия на биологични субстрати, базиран на едновременното и паралелно извършване на класическа кристалоскопия и сравнителна тезиграфия, извършени върху едно и също стъкло. Това дава възможност да се оцени както способността на биологичната течност за директна кристализация, така и нейния потенциал за иницииране по отношение на основното кристалообразуващо вещество, посочено от изследователя (Таблица 1.)

Таблица 1. Сравнителни характеристики на някои кристалографски методи

• експериментална част

• 2. Обекти, цели и методи на изследване

• 2.1. Цели, задачи и етапи на изследването.

• Целта на това изследванеизследване на морфологията на изсушени проби от урина от здрави мишки и мишки с лимфоидна левкемия (LL).
• За постигане на целта, очертана в работата, бяха формулирани следните. задачи:
• 1. Да се ​​проучи съвременната литература по проблемите на кристалографията на биосубстратите.
• 2. Да се ​​овладее техниката за извършване на тезиокристалоскопия на биосубстрати.
• 3. Оценете естеството на образуването на кристали в урината при здрави мишки.
• 4. Установете характеристиките на започналата кристалогенеза на урината при мишки с LL.
• Работата е извършена на базата на лабораторията за запазване на кръвта и тъканите на Научноизследователския институт по хематология и кръвопреливане Киров.
• Етапи на изследване:

1. Подготовка на здрави лабораторни мишки от линията AKR за изследване.
2. Инокулация на лимфоидна левкемия на AKR мишки.
3. Вземане на проби от биосубстрат (урина) за изследване при здрави мишки и мишки с левкемия.
4. Приготвяне на микропрепарати от урина от здрави мишки и мишки с левкемия.
5. Тезиграфски анализ на изсушени микропрепарати от урина от здрави мишки и мишки с левкемия.

• Обект на изследването са тезиграфски "модели" на урината на здрави мишки и мишки с левкемия.
• Обект на това експериментално изследване е урината на 10 здрави мишки и 10 мишки с левкемия.
• Използвахме 10% разтвор на натриев хлорид, който е активен кристалообразувател, като основно вещество в тезиграфския тест.
• Общо са получени 20 микропрепарата от урина, взети от контролната група (здрави мишки), от мишки с левкемия (експериментална група).
• Експерименталната част от работата включваше изследване на морфологията на изсушени проби от урина от здрави мишки с левкемия.

2.2 Приготвяне на ястия и работно място

Съдовете, използвани в работата (епруветки, мерителни пипети, предметни стъкла) бяха измити с гореща вода с препарат, изплакнати първо с чешмяна вода, след това с дестилирана вода и изсушени.
Съдовете, предварително опаковани в опаковъчна хартия, се стерилизират в автоклав при температура 120 ° C и налягане 1 atm за 25 минути.
Работите по време на вземането на проби от биологична течност са извършени в лабораторията (вивариум) на животни на Федералната държавна институция "КНИИГ и ПК" на Росздрав. По-нататъшното получаване на тезиокристален фациес на кръвния серум е извършено в лабораторията за консервиране на кръв и тъкани на Федералната държавна институция "KNIIG и PK" на Росздрав. Преди работа стаята се облъчва с кварцова лампа в продължение на 30 минути. Работният плот преди работа и в края й се третира със 70% алкохол.

2.3. Приложни методи на изследване

2.3.1 Тезиокристална техника за изпитване

Изследването на кристалооптичните свойства на биосубстратите (кръвен серум) на здрави и левкемични мишки е извършено по метода на тезиокристалоскопията (Kamakin N.F., Martusevich A.K., 2005; Martusevich A.K. et al., 2000-2006).
Проби от биологичен материал (кръвен серум, урина, слюнка, пот, сълзи и др.) се нанасят върху предварително обезмаслено, измито и подсушено предметно стъкло в обем от 0,3 ml, което, както установихме по-рано, е оптимално както при по отношение на стъклената площ и по отношение на количеството кристални и аморфни структури, които трябва да бъдат анализирани. В същото време разликата между метода на тезиокристалоскопията е, че върху изследваното стъкло се нанасят 3 проби (фиг. 2.1), първата (1) от които съдържа само биоматериал, втората (2) е смес от биофлуид и кристалообразуващо (основно) вещество, третият (3 ) - контрол на кристалообразуващото съединение. Като основно вещество се използва 10% разтвор на NaCl.

Фиг.2.1. Схема на препарата, получен по метода на тезиокристалоскопията

Полученият микропрепарат се суши модифицирано в поток от топъл въздух. В този случай хоризонталното положение на стъклото и съответната посока на потока трябва да осигурят дехидратирането на пробите при същите условия, предотвратявайки тяхното обединяване. След това получените кристалографски модели се анализират съгласно традиционната схема поотделно за кристалографските и тезиграфските компоненти.
Изсъхването на капка субстрат върху намокрена повърхност (стъкло) води до образуването на 3 различни зони: външна (маргинална - вода, електролити, нискомолекулни съединения); вътрешни (концентрирани са централни - високомолекулни протеини, електролити, нискомолекулни съединения) и междинни, характеризиращи се с най-ниска концентрация на вещества. Вътрешната зона може да има изразени и неизразени граници. Често кристални и аморфни структури граничат с външния контур на вътрешната граница.
Изсушаването на колоида е придружено от неговото прибиране, увеличаване на концентрацията на нискомолекулни съединения и образуване на кристални структури от различен тип.
Статистическата обработка на получените резултати е извършена в околната среда Microsoft Excel XP с помощта на вградени функции.
За да интерпретираме кристалоскопските модели, ние класифицирахме всички кристални и аморфни образувания, които срещнахме (Таблица 2.1, Фиг. 2). В съответствие с тази класификация е извършена оценка на препарати, подготвени за анализ по метода на класическата кристалоскопия. Проведено е както общо изследване на кристалоскопските характеристики на биофлуида, така и техните сравнителни характеристики.

Таблица 2.1 Кристални и аморфни структури, срещани в "класическия" кристалографски анализ на биофлуиди

Забележка: * - различават се по брой (малко - общо заемат по-малко от 30% от зрителното поле, умерено количество - общо заемат 30-50% от зрителното поле, голям брой - общо заемат повече от 50% от зрителното поле) и по размер (малки, средни, големи, единици).
Въз основа на анализа на многобройни микропрепарати от изсушени биологични течности бяха разграничени 5 класа кристални структури (Kamakin N.F., Martusevich A.K., 2005;), всеки от които на свой ред включва специфични образувания (Таблица 2.1). За някои от тях химичният състав е дешифриран, което позволява с известна степен на приближение да се прецени промяната в качествените и количествените характеристики на съотношенията на компонентите в биологичната среда в случай на динамично изследване на кристалообразуващите свойства на последния.
Отделна категория образуват тела с некристален характер - аморфни образувания. Произведени от калциев карбонат, те са изключително променливи по размер и брой, което може да бъде от диагностична стойност.
Интерес представлява и типът на взаимодействие на големи кристали и аморфни частици във фациесите на дехидратиран биосубстрат (Фигура 2). Информационното съдържание на това явление все още не е установено, но по наше мнение изисква внимателно внимание към себе си, тъй като може да отразява ефекта върху кристалогенезата на кристалоскопски невизуализирани компоненти на биофлуид (например протеинови макромолекули, мазнини , въглехидрати и др.).

Ориз. 2.2 Взаимодействия на кристални и аморфни структури

За да се получи допълнителна информация за физикохимичните свойства на анализираната биологична течност, бяха разработени допълнителни критерии за оценка на резултата от класическата кристалоскопия (Kamakin N.F., Martusevich A.K., 2005), включително следните параметри:
1. Клетъчност (I)– отразява особеностите на органоминералните взаимодействия във фациесите. Оценката се извършва по шестобална директна скала (0-5 точки), като 0 точки е пълната липса на признаци за появата на това явление, а 5 точки е видимостта на клетъчността без микроскоп.
2. Еднородност разпределение на елементите (R)е критерий, показващ правилността на процеса на свободна кристалогенеза. Също така се тълкува според шестобалната скала (0-5 точки), дадена в раздела за тезиграфския компонент.
3. Тежестта на маргиналната зона (Kz)- параметър, показващ наличието и количеството на протеиновия компонент на биологичната среда (Шатохина С. Н., 1995; Назарова Л. О., Шатохина С. Н., Шабалин В. Н., 2000). Предлагаме схема за оценка на този показател по полуколичествена шестобална скала:
- 0 точки - абсолютна липсамаргинална зона, изразени стрии, локални признаци на деструкция в областта на ръба на фациеса;
- 1 точка - маргиналната зона е слабо различима при слабо увеличение на светлинен микроскоп, наблюдават се единични "неизправности", включително неясно изразени, "завоалирани";
- 2 точки - маргиналната зона е ясно различима, практически е хомогенна, има малък брой "разломи";
- 3 точки - маргиналната зона е ясно разграничена от междинната, хомогенна, по протежение на целия маргинален пръстен има "разломи", които не въвеждат разрушителен характер;
- 4 точки - маргиналната зона е ясно визуализирана, отграничена с "вал" от междинната, има значителен брой "разломи", но е неразличима без микроскопия.
- 5 точки - маргиналната зона се визуализира без микроскопия, хомогенна е, без признаци на деструкция; микроскопията показва значителен брой "неизправности".
4. Степен на унищожаване на фациес (SDF)- интегрален показател, който отразява правилността на хода на кристалогенезата (основната качествена характеристика на фациесите) и обобщава както екзогенни (условия на процеса на дехидратация - температура, влажност, налягане, скорост на въздушния поток, навлизане на допълнителни вещества и др. .) и ендогенни фактори (термодинамичен компонент образуване на кристали, наличие на достатъчно количество вода за образуване на кристални хидрати и стабилизиране на органични макромолекули и др.).
* 0 градуса– всички елементи на фациеса с правилна конфигурация, неразрушени както като цяло, така и в отделните им участъци, няма признаци на разрушаване на фациесната текстура;
* I степен– фациесните елементи имат начални признаци на деструкция, не се наблюдават деструктивни промени в текстурата;
* II степен- визуализират се множество разрушени или променени структури, има локални нарушения на целостта на текстурата;
* III степен- всички елементи на фациесите са унищожени, невъзможно е да се разграничат отделни части от фациесите и структурата, пробата е безформена маса от аморфен, често оцветен материал; има ясни признаци на разрушаване на текстурата.
Като цяло, моделирането на формираните структури и прилагането на различни критерии за оценка ще допринесат за по-ясно разграничаване на промените в кристалоскопския модел, въпреки че прекомерното „претоварване“ от тях ще доведе до значително усложняване на процеса на фациален анализ.
Като по-информативен от класическата тезиграфия, обсъдена по-горе (G. A. Tarusinov, 1994), метод за оценка на иницииращата способност на биологични субстрати, използвахме сравнителна тезиграфия (N. F. Kamakin, A. K. Martusevich, 2002-2005; Martusevich A. K. et al., 2000 -2005), което включва използването на допълнителна контролна проба от чисто основно вещество, за да се изравнят различни външни условия; дава възможност да се посочи посоката на започване (активиране или депресия на кристалогенезата на кристалообразувателя) и неговата тежест.
Както вече беше споменато по-горе, оценката на тезиграфския фациес е по-трудна от кристалоскопската, което е свързано с хомогенността на морфологията на първото и следователно, ако вече е разработена идентификационна таблица за класическа кристалоскопия, и допълнителни критерии ще играят само уточняваща роля, тогава в тезиграфския тест те заемат водещи позиции (Нефедова Н. Б., Цывенкова Л. А., 1985; Мороз Л. А., Каликщейн Д. Б., 1986; Гугутишвили Ц. Г., Симонишвили Л. М., 1990; Кидалов В. Н., Хадарцев А. А., Якушина Г. Н., 2004; Камакин Н. Ф., Мартусевич А. К., 2003-2005). В тази връзка се предлага класификация на критериите, които могат да се използват при разглеждане на тезиграфски фациес:
I. Основни критерии
- Основен тезиграфски коефициент Q
- Коефициент на обяснение R
- Иницииращ фактор М
- Относителен фактор N
II. Допълнителни критерии
еднаквост на фациалната плътност (R);
степента на клетъчност на картината (I);
индекс на случайност (IR)
тежестта на отделните зони на кристализация (Z)

Изборът на горните критерии позволи да се формира единен математически подход за оценка на тезиграфския фациес (Martusevich A. K. et al., 2004, 2005), който се основава на проверка на значимостта на всеки от показателите при определяне на необходимия производен коефициент .

Обяснения за използваните изчислени коефициенти:
I. Основни критерии:
Q = A / B, където A е броят на центровете за кристализация в прототипа, единици; B е броят на центровете за кристализация в контролната проба, единици.
P = d1 / d2, където d1 е радиусът на минималния кристализационен пояс, mm; d2 - радиус на максималната зона на кристализация, mm.

II. Допълнителни критерии:
R е степента на равномерност на плътността на разпределение на елементите на тезиграфския фациес, точки;
I - степента на клетъчност на тезиграфския фациес, точки.

Нашите проучвания ни позволиха да приемем информационното значение на коефициентите, идентифицирани по-горе, при идентифицирането на тезиграфския фациес:
1. Основен тезиграфски коефициент Q- показва степента на организация / дезорганизация на кристалогенезата на основното вещество (в повечето случаи разтвор на натриев хлорид с изоосмотична концентрация, склонен към образуване на типични дехидратационни структури при естествени неутрални условия) под въздействието на материала в процес на проучване.
2. Коефициент на яснота P– демонстрира степента на хетерогенност на молекулните маси на компонентите на изследвания субстрат.
3. Степен на клетъчност на модел I- евентуално демонстрира наличието на протеинови конгломерати с различен химичен състав и свойства по степен на хидрофилност/хидрофобност, както и наличието на мастноразтворими компоненти във водния разтвор на биологичната среда.
4. Параметър R - подчертава равномерността на разпределението на структурите по тезиграфския фациес. Може да показва съдържанието на невизуализируеми компоненти в материала, които могат локално да инхибират кристалогенезата. Може да се свърже с метода на изсушаване на микропрепарата.
Съгласно горните показатели за оценка на тезиграфския фациес е формулирана кратка градация на характеристиките на регистриране на състава на тезиграфския фациес според допълнителни критерии за оценка (Камакин Н.Ф., Мартусевич А.К., 2005):
1. Еднородност на плътността на разпределение на кристалните структури по фациесите (R):
0 точки - пълна случайност на фациите, наличие на разнородни елементи, кухини, места на натрупване на кристални структури, различна ориентация на образуванията в зрителното поле.
1 точка - очертани са някакви групи от кристали, отделни области правилна конструкция, заемащи по-малко от 30% от общата площ на зрителното поле, ориентацията на фигурите все още е хаотична.
2 точки - има ясни "острови" на подреждане, заемащи от 30% до 50% от пространството на зрителното поле (във всяка от поне три изследвани), разстоянията между елементите в групите са приблизително изравнени, някои се записва модел на насоченост структурни образуванияфациес.
3 точки - структурирани са достатъчно значителен брой структурни елементи на фациесите (повече от 50% от общия брой), "острови" на еднородност се превръщат в области на относително голяма площ. В рамките на тези зони се спазва правилното разположение и равномерност на разстоянията между отделните образувания. Закономерността на посоката на елементите и зонирането се открояват доста ясно.
4 точки - повечето от елементите на фациесите са структурирани (повече от 75% от общия брой), останалите са разпределени в "островчета" над зрителното поле, по-често в маргиналната зона. Разстоянията между отделните образувания са практически постоянни. Ориентацията на елементите се подчинява на определен модел върху почти цялата повърхност на зрителното поле.
5 точки - всички елементи на тезиграфския фациес са ясно структурирани в цялото зрително поле, което се потвърждава от изследването на няколко полета. Разделянето на централни, междинни и маргинални зони е ясно видимо дори при визуален немикроскопски контрол, възможно е да се установят границите на последните. Разстоянията между елементите на картината са постоянни, ориентацията на фигурите е правилна, правилна по цялата повърхност на фациесите.
2. Степента на проявление на клетъчността на фациесите (I):
0 точки - пълно отсъствие на признаци на поява на клетъчност, еднородност на картината, няма отделяне на "острови" от кристали. Фациесът представлява единичен "слой" от кристални образувания.
1 точка - наличието на първите признаци на хетерогенност, "смачкване" на кристалоскопския модел (маркирани са най-диагностично значимите принципи):
началото на разделянето на групи от елементи (по-малко от 30% от всички образувания, заемащи по-малко от 30% от зрителното поле);
известна хетерогенност на картината;
началото на "раздробяването" на единичен "пласт" от кристални фигури.
2 точки - има доста видима тенденция към "смачкване" на фациесите, образуване на "острови" от кристали (откроени са най-диагностично значимите принципи):
броят на изолираните елементи в "островите" - от 30% до 50% от всички структури, те заемат повече от 30% от повърхността на фациесното зрително поле;
изразена хетерогенност, зониране на картината;
визуализира се процеса на "разделяне" на фациесите на участъци, записват се появяващите се кристализационни пояси, служещи за граници на последните, в някои случаи не докрай, с дебелина 1 кристал.
3 точки - има изразени промени във фациуса:
елементите в "островите" съставляват от 50% до 75% от общия брой, повърхността, която заемат, е повече от 50% от зрителното поле (в няколко полета);
изразена хетерогенност, "зърнистост" на картината;
процесът на "разчленяване" на фациуса е ясно видим в няколко зрителни полета;
кристализационните пояси са доста различни, образувани от повече от един ред кристални структури.
4 точки - признаците на появата на клетъчност са надеждно видими (маркирани са най-диагностично значимите принципи):
броят на структурите, групирани в клетки от 75% до 100% от общия брой на последните;
групираните елементи заемат цялото зрително поле (при изучаване на няколко, поне три зрителни полета);
кристализационните пояси се образуват от повече от един ред кристали, присъстват по цялата повърхност на зрителното поле, обграждат напълно "островите".
5 точки - картината се характеризира със следните морфологични характеристики (маркирани са най-диагностично значимите принципи):
броят на структурите, групирани в клетки от 75% до 100% от общия брой на последните;
групираните елементи заемат цялото зрително поле (при изучаване на няколко, поне три зрителни полета);
много ясно изразена "фракционна", "зърнеста" картина;
кристализационните пояси се образуват от повече от един ред кристали, присъстват по цялата повърхност на зрителното поле, обграждат напълно "островите";
има "грешки" на картината (с изключение на фациесите на кръвния серум, за които това явление е независимадиагностичен знак).

Като цяло прилагането на горните критерии, показатели и изчислени коефициенти ни позволи да алгоритмизираме процедурата за извличане на информационния товар, скрит в качествения и количествен състав на анализираните субстрати.
В съответствие с тази схема анализът се извършва на етапи в две основни области - изследване на свободната кристалогенеза и образуването на инициирани кристали, което ни позволява да разгледаме изчерпателно както пряката кристалообразуваща способност на биофлуид, така и неговия инициационен потенциал.

Ориз. 2.3 Алгоритъм за оценка на тезио-кристалоскопичния фациес.

И така, широкото използване на математическия апарат позволява многопараметрична оценка на биологичните течности чрез тяхната кристалогенеза, което предоставя голямо количество информация за техните физикохимични свойства и косвено за качествения и количествен компонентен състав, който според нас е на особено значение за клиничната, преди всичко диагностична, практика и фундаментална наука.

2.4 Статистическа обработка на данни

Фактическият материал, получен по време на изследването във всички изследвани измивания, е обработен по метода на вариационната статистика (Тюрин Ю. Н., Макаров А. А., 1998; Наследов А. Д., 2004). Изчислени са средните стойности (M), тяхната стандартна грешка (m) и стандартното отклонение (). Индикаторите се считат за значими при p стойности<0,05 (по t-критерию Стьюдента и U-критерия Манна-Уитни). Зависимость между признаками оценивали при помощи коэффициента парной корреляции (r), его ошибки (mr) и уровня значимости различий (по t-критерию Стьюдента). Зависимость считалась сильной при r  >0,7, средно, ако модулът на корелационната стойност на двойката е в рамките на 0,3-0,7. При намиране на стойност на корелация, по-малка от 0,3 в модална стойност, тя се приема като слаба. Надеждността на намерената двойна корелация (p) също беше изчислена.
Изчисленията бяха извършени в средата на електронни таблици Microsoft Excel 2003, както и с помощта на статистически софтуерни пакети Primer of biostatistics 4.03 и SPSS 11.0.

3. Резултати от изследванията.

Беше извършена директна оценка на резултатите от свободната кристалогенеза с помощта на единна идентификационна таблица, включваща 5 основни класа кристални и аморфни вещества (морфометрия), както и допълнителни критерии (степента на разрушаване на фациесите - SDF, тежестта на неговата маргинална зона (Kz) и клетъчност (I), равномерност на разпределението на елементите (R)). Тезиграфският фациес е анализиран с помощта на система от основни (основен тезиграфски коефициент Q, коефициент на осветеност P) и допълнителни параметри (подобни на тези, използвани за класическата кристалоскопия).
Изследвахме динамиката на свободната и инициирана кристалогенеза на урината при здрави мишки и мишки с левкемия.

3.1. Морфология на урината на здрави и изкуствено заразени мишки с левкемия.

Нашият анализ на микропрепарати от изсушени проби от урина направи възможно установяването на ясни „модели“ за разглежданите условия.
Извършено е сравнение на кристалоскопски снимки, получени от здрави и болни животни.

Таблица 3.1. Кристалоскопични характеристики на здрави мишки и пациенти с левкемия.

В съответствие с данните, дадени в таблица 3.1, очевидно е, че има ясни вариации в кристалографския модел между контролната и експерименталната групи.

Според резултатите от визуалната морфометрия е установено, че има значими характеристики на кристалоскопската картина на урината на мишки с левкемия в сравнение със здрави животни, сред които най-значимите са:
увеличаване на броя на дендритите при болни мишки, с изключение на пълното отсъствие на линейни поликристални структури, което потвърждава промените, регистрирани в монокристалния компонент;
концентрацията на аморфни образувания, която се състои в тяхното увеличаване и намаляване на броя, подчертаното им разграничаване от големи кристални фигури;
увеличаване на степента на разрушаване на фациесите (основният показател за нестабилността на кристалографските фациеси);
намаляване на равномерността на разпределението на кристални и аморфни образувания в микропрепарат, придружено от дезагрегация на фациални елементи, проявяващо се в значително повишаване на степента на клетъчност (p<0,05).
Въз основа на резултатите от оценката на кристалообразуващата способност на кръвния серум на мишки се формира „модел“, който е характерен за здрави мишки и мишки с левкемия.

3.2. Основните критерии за оценка на тезиграфския фациес на кръвния серум при мишки в нормални и патологични състояния (левкемия).

Проучването включва както търсенето на качествени маркери на левкемия, така и формирането на количествени „модели“ на тезиграфията. Въз основа на откриването на признаци на патологични промени в урината на болни мишки е съставен набор от диагностично значими качествени параметри.
В съответствие с данните, представени на фиг. 2.4, най-значимите диференциращи показатели на тезиграмите на урината на здрави мишки и мишки с левкемия при използване на 10% разтвор на натриев хлорид като основно вещество са:
- естеството на инициирането на основното вещество от биологичната среда (при здрави мишки - изразено активиране на кристалогенезата на основното вещество, при болни мишки с левкемия - умерено инхибиране);
- неравномерен органично-минерален състав на биофлуида (преобладаването на минерални компоненти при здрави мишки и преобладаването на органични съединения при мишки с левкемия);
- степента на деструкция на фациуса, която е малко по-висока при представителите на експерименталната група;
- разширяване на маргиналната зона във фациите на мишки с левкемия, със значителна тежест при практически здрави индивиди, което е предполагаем маркер за левкемия.

Таблица 3.2.Сравнителна тезиграфия на урина на здрави мишки и мишки с левкемия (основна субстанция - 10% разтвор на натриев хлорид)

Забележка: "*" - значимост на разликите спрямо контролната група Стр<0,05

Ориз. 2.4. Промени в основните и допълнителни критерии за тезиграфия на урина при мишки с левкемия в сравнение със здрави мишки

3.3 AKR мишки

Силно левкемичната линия на AKR мишки е получена чрез кръстосване на близкородствени индивиди през 1928 г. Мишки и от двата пола са податливи на лимфоидна левкемия. Около 91% от жените умират от левкемия до 300-ия ден.

3.4 Динамика на развитие на левкемия.

Ориз. 3.1 Хомогенен фациес, без изразени образувания - здрава мишка X40

Ориз. 3.2 Фациесът е хомогенен, появяват се първите признаци на фрагментация на маргиналната зона - първите признаци на развитие на левкемия, възраст 5 месеца. X40

Ориз. 3.3 Хетерогенност на структурата, слаба тежест на маргиналната зона, проява на клетъчност - началото на развитието на левкемия. 7 месеца X40

Ориз. 3.4 Началото на появата на облицовани дендритни структури - развитие на левкемия. 8 месеца X40

Ориз. 3.5 В структурата на фациесите преобладават линейни и правоъгълни дендритни структури - напреднала левкемия, 9 мес. X40

Ориз. 3.6 Изразена клетъчност на фациесите, неравномерна плътност на разпределение на елементите - силно развита левкемия. 13 месеца X40

3.5 Заключения

Въз основа на откриването на няколко качествени параметъра (най-малко 3) от експериментален биотест върху фациеса на суха капка урина, изглежда възможно да се идентифицира наличието на патологични промени или степента на развитие на остра левкемия.
Използвайки данните, дадени в таблица 3.2, може да се отбележи, че по отношение на коефициентите Q и P, значителни разлики в неговите стойности се записват в тезиграмите на урината.
В съответствие с данните, представени в таблица 3.2, надеждността на разликите между основните показатели на тезиграфията потвърждава значимостта на характеристиките на тезиграфските фациеси на урината, открити с помощта на качествени характеристики.
По този начин използването на метода за сравнителна тезиграфия на урината при здрави мишки и мишки с левкемия дава възможност да се идентифицират качествени и количествени маркери за наличие на левкемия.
Тезиокристалоскопичният анализ на биотечности дава възможност да се извърши мултипараметрична оценка на съдържащата се в тях метаболитна информация, която може да бъде полезна при посочване на физиологичните и патологични състояния на хора и животни. Всяка биотечност има свои собствени характеристики на кристалогенезата, което е свързано с диференцирането на техния химичен състав и функции.
При изучаване на кристалографския компонент се препоръчва използването на една таблица за идентификация, а тезиграфският компонент - основните (коефициенти Q и P) и допълнителни (равномерно разпределение на модела, клетъчност и др.) Критерии за оценка. Продължаването на изследванията ще послужи за развитие на идеи за суб- и молекулярните механизми на развитие на физиологични и патологични реакции на човешкото тяло.

Списък на използваната литература:

1. Агафонов В. А., Багров С. Н. Изследване на състоянието на стъкловидното тяло чрез метод на сушене. научни статии "Трансцилиарна хирургия на лещата и стъкловидното тяло". - Москва. - 1982. - С. 158-164.
2. Алексеева О. П., Воробьов А. В. Кристалография на слюнката - нов неинвазивен метод за диагностициране на H. pylori // Медицински журнал Нижни Новгород. - 2003. - № 2. - С. 73-78.
3. Антропова И. П., Габински Я. Л. Кристализация на биотечност в затворена клетка с използване на слюнка като пример.Клинична лабораторна диагностика. - 1997. - № 8. - С. 36-38.
4. Бабенко Г.А. Злокачествен растеж, метали и хелатиращи агенти. Биологичната роля на микроелементите. - М.: Наука, 1983.
5. Барер Г. М., Денисов А. Б., Михалева И. Н. и др. Кристализация на устната течност. Състав и чистота на повърхността на субстрата // Бюлетин по експериментална биология и медицина. - 1998. - Т. 126, № 12. – С. 693-696.
6. Безопасност на живота. Безопасност на технологичните процеси и производства (Охрана на труда). Уч. надбавка за университети / П. П. Кукин и др. - М., 1999.
7. Brown G., Walken J. Течни кристали и биологични структури. М.: Мир, 1982. - 198s.
8. Бубо Н. Т., Пузиревски К. Я. Микрокристалоскопска реакция за откриване на папаверин // Фармация. - 1965. - № 2. - С. 50-52.
9. Бузоверя М. Е., Шишпор И. В., Шатохина С. Н. и др. Морфометричен анализ на фациите на кръвния серум // Клинична лабораторна диагностика. - 2003. - № 9. - С. 22-23.
10. Bystrevskaya A. A., Deev L. A. Зависимост на структурата на слъзната течност от вида на дразнителя и качеството на субстрата // Доклади на III Всеруска научно-практическа конференция "Функционална морфология на биологичните течности". - Москва. - 2004. - С. 17-19.
11. Вегман Е. Ф., Руфанов Ю. Г., Федорченко И. Н. Кристалография, минералогия, петрография и радиография. М.: Металургия, 1990. - 263с.
12. Волчецки А. Л., Рувинова Л. Г., Спасенников Б. А. и др. Кристализация и кристалография: медицински и биологични аспекти. Архангелск, 1999. - 374с.
13. Волчецки А. Л., Спасенников Б. А., Агафонов В. М. и др. Модификация на метода и компютърната посока на тезиграфския анализ // Екология на човека. - 1999. - № 3. - С. 38-42.
14. Воробьов А. В., Воробьов П. В., Воробьева В. А. Определяне на енергийно-информационния компонент на човек с помощта на метода на чувствителната кристалография. доклади от XI Московска международна хомеопатична конференция "Развитие на хомеопатичния метод в съвременната медицина". - Москва. -2001. – С. 202-207.
15. Воробьева В. А., Воробьов А. В., Замаренов Н. А. Модел на образуване на кристалографски модел по време на взаимодействието на човешка биологична течност и хомеопатичен препарат с кристалообразуващ разтвор / Откритие. - Диплома на Руската академия по естествени науки № 231. (Приоритет от 8.06.2002 г.).
16. Голубев С. Н. Живи кристали // Природа. - 1989. - № 3. - С. 13-21.
17. А. Н. Гордиенко, Л. А. Курбатова и А. Н. Филипов, Phys. - Калинин. - 1985. - Бр. 8. - С. 83-86.
18. Gromova I. P. Кристалоскопичен метод за изследване на кръвен серум в токсикологичен и хигиеничен експеримент с помощта на метода "отворена капка" // Хигиена и санитария. - 2005. - № 2. - С. 66-69.
19. В. Г. Гуляев, А. К. Мартусевич и А. Н. Кошкин, „Особености и перспективи за използване на кристалографски методи на изследване в криминалистиката”, Мат. Междууниверситетска научно-практическа конференция с интернет участие "Актуални проблеми на криминалистиката и експертната дейност: проблеми и перспективи". - Киров: КФ МГУА. - 2004. - С. 35-39.
20. Гуляева С. Ф., Мартусевич А. К., Помаскина Т. В. Математическо моделиране на резултата от инициирана кристалогенеза на слюнката като критерий за ефективността на приема на минерална вода // Екология на човека. - 2005. - № 7. - С. 33-35.
21. De Gee V. Физични свойства на течнокристалните вещества. М.: Мир, 1982. - 175с.
22. Deryabina N. I., Zalessky M. G. Съдържанието на протеинови компоненти в капка кръвен серум по време на изсушаването му // Бюлетин за нови медицински технологии. - 2005. - Т. XII, № 1. - С. 85-87.
23. Доусън Р., Елиът Д., Елиът У. и др. Наръчник на биохимик. М.: Мир, 1997. - 544 с.
24. Замкова Н. Г., Зиненко В. И. Динамика на решетката на йонни кристали в модела на дишането и поляризуемите йони. // FTT. - 1998. - Т. 40, № 2. - С. 350-354.
25. Зайцев В.В., Зайцева Н.Б., Усолцева Н.В. Текстури на биологични течни кристали при пациенти с миокарден инфаркт // Известия на академията на науките. Физическа серия - 1996. - т. 60, № 4 - с. 115-118.
26. Зиненко В. И., Замкова Н. Г. Изследване на фазови преходи и несъизмерима фаза в кристали ASVKh 4 по метода на Монте Карло. // Кристалография. - 2000. - Т. 45, № 3. - С. 513-517.
27. Зиненко В. И., Замкова Н. Г. Микроскопски изчисления на структурни фазови преходи от тип изместване (кристали с елпасолитна структура) и тип ред-разстройство (семейство на калиев сулфат). // Кристалография. - 2004. - Т. 1, № 1. – С. 38-45.
28. Иванов О. В., Шпорт Д. А., Максимов Е. Г. Микроскопски изчисления на фероелектрична нестабилност в перовскитни кристали.
29. Каликщейн Д. Б., Мороз Л. А., Квитко Н. Н. и др. Кристалографско изследване на биологични субстрати // Клинична медицина. - 1990. - № 4. - С. 28-31.
30. Kalikshtein D. B., Moroz L. A., Chernyakov V. L. Значение на тезиграфския метод за изследване на урината // Лабораторен бизнес. - 1981. - № 2. - С. 79-81.
31. Калинин А.П. и др.. Информативност на метода на кристални отлагания на кръвен серум при някои ендокринни заболявания // Сборник от трудове на Всеруската научно-практическа конференция. "Кристалографски методи на изследване в медицината", Москва - 1997 г. - С. 131-133
32. Камакин Н. Ф., Мартусевич А. К. За метода на тезиокристалоскопията на биофлуиди // Клинична лабораторна диагностика. - 2002. - № 10. - стр. 3.
33. Камакин Н. Ф., Мартусевич А. К. Съвременни подходи към кристално-скопската идентификация на състава на биологичните течности // Екология на човека. - 2003. - № 5. - С. 23-25.
34. Камакин Н. Ф., Мартусевич А. К. Характеристики на тезиокристалоскопичния портрет на биологични течности на човешкото тяло в нормални и патологични състояния, Бюлетин за нови медицински технологии. - 2003. - Т. X, № 4. - С. 57-59.
35. N. F. Kamakin, A. K. Martusevich и E. P. Kolevatykh, „На първичната и вторичната биокристализация“, Sb. научни трудове „Естествознание и хуманизъм”. - Томск. - 2005. - Т. 2, № 1. - С. 18-19.
36. Камакин Н. Ф., Мартусевич А. К., Кошкин А. Н. Перспективи за развитие на кристалографски методи за изследване.Vyatskiy Medical Bulletin. - 2003. - № 3. - С. 6-11. Камакин Н.Ф., Мартусевич А.К. Характеристики на тезио-кристалоскопичния портрет на биологични течности на човешкото тяло в нормални и патологични състояния // Бюлетин за нови медицински технологии. 2003. Т. X. № 4. С. 57–59.
37. Камишников В. С. Наръчник по клинична и биохимична лабораторна диагностика. В 2 т. Минск: Беларус, 2000. Т.1. 495s.; Т.2. 463s.
38. Каркищенко Н. Н. Основи на биомоделирането. М .: Издателство на Военно-промишления комплекс, 2004. - 608 с.
39. Карачунски А.И. Остра лимфобластна левкемия при деца. Лекции по актуални проблеми на педиатрията. Изд. В. Ф. Демина, С. О. Ключникова, М: RSMU; 2000 г.
40. Кидалов В. Н., Хадарцев А. А., Якушина Г. Н. Тезиографски изследвания на кръвта и техните практически възможности // Бюлетин за нови медицински технологии. - 2004. - Т. XI, № 1-2. - С. 23-25.
41. Колединцев М. Н., Нечаев Д. Ф., Майчук Н. В. Физическа основа на кристалографския анализ в офталмологията. абстрактно доклади на междурегионалната научно-практическа конференция на млади учени и студенти с международно участие "Петербургски научни четения-2002". - Санкт Петербург. - 2002. - С. 42-43.
42. Колотилов Н. Н., Бакай Е. А. Течна кристална структура на биологични обекти // Молекулярна биология. - 1980. - Бр. 27. - С. 87-96.
43. E. V. Kononenko и E. V. Миронов, „Механизми на дислокация-дисклинация на трансформация на текстурата на биофлуида по време на агрегация“, Sb. научни доклади на 2-ра Всеруска научно-практическа конференция "Морфология на биологичните течности в диагностиката и мониторинга на ефективността на лечението." - Москва. - 2001. - С. 21-26.
44. Кораго А. А. Въведение в биоминералогията. Санкт Петербург: Недра, 1992. - 280с.
45. Кошкин А. Н., Мартусевич А. К., Лопатин М. А. Кристалоскопия на биофлуиди на човешкото тяло като диагностичен метод // Бюлетин на Руския държавен медицински университет. - 2002. - № 1. - С. 134.
46. ​​​​Кристалографски методи за изследване в медицината: сб. научен Доклади на 1-ва Всеруска научно-практическа конференция. - М., 1997.
47. Кристалоскопски метод за изследване на биологични субстрати: Метод. препоръки / L. A. Moroz, I. L. Teodor, V. E. Bryk и др. - М., 1981. - 9с.
48. Кузнецов VD Кристали и кристализация. М., 1954. - 65s.
49. Кузнецов А. В., Речкалов А. В., Смелишева Л. Н. Стомашно-чревен тракт и стрес. Курган: Издателство на Курганския държавен университет, 2004. - 254 с.
50. Кузнецов Н. Н., Вершинина Г. А., Скопинов С. М. и др. Оптично-поляризационни и рефрактометрични методи за оценка на тежестта на синдрома на ендогенна интоксикация при деца // Sat. научни доклади на 2-ра Всеруска научно-практическа конференция "Морфология на биологичните течности в диагностиката и мониторинга на ефективността на лечението." - Москва. - 2001. - С. 30-33.
51. Кузнецов Н. Н., Скопинов С. А., Вершинина Г. А. и др. Кристалоскопски метод за диагностика на ендогенна интоксикация при деца. Патент на Руската федерация № 2158923 от 04.03.1998 г.
52. Кунгуров Н. В., Кохан М. М., Кононенко Е. В. и др. Кристалографски изследвания на биологични течности при пациенти с хронична дерматоза. Екатеринбург, 1997. - 41s.
53. Курнишева Н. И., Деев А. И., Гризунов Ю. А. и др. Метод за оценка на инволюционна офталмологична ендотоксикоза чрез флуоресцентно изследване на слъзната течност Бюлетин по офталмология. - 2000. - № 3. - С. 16-19.
54. Лобанов V. I. Микрокристалоскопични реакции на откриване на някои производни на барбитуровата киселина // Journal of Analytical Chemistry. - 1966. - № 1. – С. 110.
55. А. А. Локтюшин и А. В. Манаков, „Минерали и живот в холографски модел на материята“, Proc. 2-ри международен семинар "Минералология и живот: биоминерални взаимодействия". - Сиктивкар. - 1996. - С. 10-11.
56. Мартусевич А. К. Кристалоскопични методи на изследване във физиологията // Руско списание по физиология. И. М. Сеченов. - 2004. - Т. 90, № 8. - С. 18.
57. Martusevich AK Информация физическа и биохимична теория на кристализацията като отражение на морфологията на биологичните течности // Бюлетин на сибирската медицина. - 2005. - Т. 4. - Приложение 1. - С. 185.
58. А. К. Мартусевич и А. Н. Кошкин, "Проблеми на изследователския подход в кристалографията на биофлуиди", Мат. третата интердисциплинарна конференция с международно участие "NBITT-21". - Петрозаводск. - 2004. - С. 50.
59. Мартусевич А. К., Кошкин А. Н. Особености на влиянието на условията за кристализация на биологични течности на човешкото тяло върху резултата от тезио-кристалоскопичния тест. научен статии на млади учени и специалисти от Руската федерация, посветени на конференцията. акад. Б. С. Гракова "Актуални въпроси на медицината и новите технологии-2003". - Красноярск. - 2003. - С. 154-157.
60. Мартусевич А. К., Пономарева Г. Л. Математически методи за идентифициране на тезиграфски фациес с помощта на приблизителен брой при пациенти с лумбална остеохондроза.Клинична лабораторна диагностика. - 2004. - № 9. - С. 85-86.
61. Меншиков VV Лабораторни изследвания в клиничната практика. М .: Медицина, 1988. - 428s.
62. Микрометод за определяне на свободни аминокиселини в кръвен серум с помощта на хартиена хроматография // Медицински лабораторни технологии. СПб., 1999. - Т. 2. - С. 106-108.
63. Мороз Л. А., Каликщейн Д. Б. Кристалографски метод за изследване на биологични субстрати. Насоки. М., 1986. - 24 с.
64. Мушкамбаров Н. Н. Физическа и колоидна химия: курс от лекции. М.: ГЕОТАР-МЕД, 2001. - 384 с.
65. Назаренко Г. И., Кишкун А. А. Клинична оценка на лабораторните резултати. М .: Медицина, 2000. - 544 с.
66. Николская М. Н., Гандел В. Г., Попков В. А. Откриване на сулфаниламидни препарати чрез кристализация в тънък слой // Фармацевтичен бизнес. - 1965. - № 4. - С. 13-14.
67. PB 10-115-96. Правила за устройство и безопасна експлоатация на съдове под налягане.
68. Пикин С. А. Структурни трансформации на течни кристали. - М. - 1981. - 269s.
69. Плаксина Г. В., Комолова Г. С., Машков А. Е. и др. Стабилизиращ ефект на ангиогенин от мляко върху кристалната структура на биологични течности Бюлетин по експериментална биология и медицина. - 2003. - Т. 136, № 10. - С. 406-409.
70. Плаксина Г. В., Римарчук Г. В., Бутенко С. В. и др. Клинично значение на кристалографския и кристалографски метод за изследване на урината Клинична лабораторна диагностика. - 1999. - № 10. - С. 34.
71. Пригожин И., Стенгерс И. Ред от хаоса / Пер. от английски. М.: Прогрес, 1986. - 429с.
72. Рапис Е. Г. Микрокристално-оптичен метод за използване на стъкловидното тяло на хора и животни в нормални условия и с хемофталмия Бюлетин по офталмология. - 1976. - № 4. - С. 62-67.
73. Рапис Е. Г. Протеин и живот. Самоорганизация, самосглобяване и симетрия на наноструктурирани супрамолекулни протеинови филми. М .: "MILTA - PKP GIT", 2003. - 368s.
74. Романов Ю. А. Теория на биологичните системи и проблемът за тяхната времева организация // Проблеми на хронобиологията. - 1992. - № 3-4. - С. 105-123.
75. Савина Л. В. Кристалоскопични структури на кръвен серум в клиниката по вътрешни болести: Резюме на дисертацията. дис... д.м.с. - Перм, 1992. - 40-те години.
76. Савина Л. В. Кристалоскопични структури на кръвния серум на здрав и болен човек. Краснодар, 1999. - 238s.
77. Савина L.V. Образуване на структурата на кръвния серум под вакуум // Клинична лабораторна диагностика. - 1999. - № 11. - С. 48.
78. Савина Л. В., Конуева О. В., Коротко Г. Г. и др. Кристалоскопска диагностика на нарушенията на екзокринната функция на панкреаса при пациенти с хроничен панкреатит / IV Международен конгрес "Парентерално и ентерално хранене". - Москва, 2000. - С. 98.
79. Савина Л. В., Павлишчук С. А., Самсигин В. Ю. и др. Поляризационна микроскопия в диагностиката на метаболитни нарушения // Клинична лабораторна диагностика. - 2003. - № 3. - С. 11-13.
80. Салтиков А. Б. Морфологични аспекти на процеса на формиране на функционални системи // Успехите на съвременната биология. - 2005. - Т. 125, № 2. – С. 167-178.
81. Скални А.В., Есенин А.В. Мониторинг и оценка на риска от излагане на олово на хората и околната среда с помощта на човешки биосубстрати // Токсикологичен бюлетин. № 6, 1996. - С. 16-23.
82. Скопинов SA Компютърна симулация на кристализация на сол от биотечности.// Кристалографски методи за изследване в медицината. сб. научен Доклади на 1-ва Всеруска научно-практическа конференция. . М., 1997. с. 33.36
83. Смотрова С.П., Чеснокова С.М. и др.. Дефицит на селен в условията на замърсяване на околната среда // Сборник на III международна научно-техническа конференция "Физика и радиоелектроника в медицината и биотехнологиите" - Владимир, 1998. - С. 304-305.
84. Собур С.В. Пожарна безопасност на електрически инсталации: Реф./С. В. Собур - М., 2003.
85. Сонин AS Въведение във физиката на течните кристали. М., 1989. - 369с.
86. Лични предпазни средства: Реф. надбавка/S. Л. Камински. - Л., 1989.
87. Суровкина М. С., Шатохина С. Н., Суровкин В. А. и др. Промени в нивото на молекулите със средна маса и системна организация на кръвната плазма при пациенти в напреднала възраст // Sat. научни доклади на 2-ра Всеруска научно-практическа конференция "Морфология на биологичните течности в диагностиката и мониторинга на ефективността на лечението." - Москва. - 2001. - С. 18-20.
88. Тарасевич С. Ю. // Вестник по техническа физика. - 2001. - Т. 71, бр. 5. - С. 123-125.
89. Тарусинов Г. А. Кристалографско изследване на урината в диагностиката и диференциалната диагноза на дифузни заболявания на съединителната тъкан при деца // Педиатрия. - 1994. - № 1. - С. 55-57.
90. Текуцкая Е.Е., Софьина Л.И. и др.. Методи и практика за мониторинг на съдържанието на тежки метали в биологични среди. // Хигиена и санитария - 1999-№4-S.72-74.
91. Тезиокристално изследване на биологични субстрати: Насоки / Камакин Н. Ф., Мартусевич А. К. - Киров, 2005. - 34 с.

За правилното планиране на бременността, идентифициране на различни нарушения на репродуктивната система, избор на оптимален метод на контрацепция е необходимо да имате ясна представа за естеството на менструалната функция на жената, един от ключовите елементи на кое е овулация .

Менструален цикължени, което е периодът от 1-вия ден на една менструация до 1-вия ден на следващата менструация, средно продължава 28-30 дни. През първата половина на менструалния цикъл един от яйчниците узрява фоликул, който представлява флакон, пълен с течност и съдържащ узряваща яйцеклетка. На 14-15 ден от цикъланастъпва овулация, която се състои в това, че от фоликула излиза зряла яйцеклетка, готова за оплождане.

Зряла яйцеклетка след овулация способен на оплождане в рамките на 2 дни, а сперматозоидите имат оплождаща активност в продължение на 4 дни след еякулацията. Следователно общият период на най-вероятния зачеването е 6 дни .

За определяне на периода на вероятно зачеване се използват различни методи за определяне на момента на овулация, които включват: оценка на естеството на кристализацията на слузта, съдържаща се в цервикалния канал, или кристализацията на слюнката; измерване на температурата в ректума; ултразвукови данни; изследване на нивото на хормоните.

Така че, по време на периода на овулация, слузът, съдържащ се в цервикалния канал, след като се нанесе върху предметно стъкло и се изсуши, претърпява кристализация с образуването на модел, подобен на лист от папрат. Този процес на кристализация се дължи на редица биофизични и биохимични промени, настъпващи в цервикалната слуз.

Активността на производството на слуз от жлезите, които се намират в стените на цервикалния канал, се контролира от нивото на женските полови хормони - естроген. С наближаването на момента на овулацията концентрацията и активността на естрогена се повишава. Това води до увеличаване на количеството на произведената слуз и до увеличаване на натриевите и калиеви соли в нея. Следователно, когато слузта изсъхне, солите, съдържащи се в нея, взаимодействат с муцина, което образува модел, наподобяващ лист от папрат.

При изследване на намазка от слуз под микроскоп може да се види, че от 9-ия ден на цикъла се появяват слаби признаци на кристализация. Освен това степента на изразяване на модела постепенно се увеличава, по-ясно се проявява 3-4 дни преди овулацията и достига най-ясните си очертания в деня на овулацията. След овулацията кристализацията намалява. Чертежът става размит и придобива "размазан" вид в рамките на 2-3 дни.

Определянето на времето на овулация с помощта на тест за кристализация на цервикална слуз изисква ежедневно посещение при гинеколога. В редица случаи, поради патологични промени в шийката на матката или възпалителен процес, изследването може да бъде трудно или надеждността на резултата намалява, тъй като моделът на кристализация е изкривен.

Промени в модела на кристализация по време на менструалния цикъл, подобно на цервикалната слуз, се наблюдават и в слюнката. Увеличаването на нивата на естроген с наближаването на овулацията води до увеличаване на слюнката, както и на цервикалната слуз, количеството натриеви и калиеви соли. Тяхната концентрация достига максимум в деня на овулацията, което води до кристализация на слюнката по време на сушенето. Надеждността на теста за кристализация на слюнката за определяне на овулацията варира от 96% до 99%.

За да се оцени моделът на кристализация на слюнката и съответно да се определи времето на овулация, се използват различни мини-микроскопи, които са компактни и леки оптични инструменти, удобни за ежедневна употреба.

В дните, когато зачеването все още не е възможно(5-6 дни преди овулацията или повече) или когато това вече не е възможно (3-4 дни след овулацията), изсъхналата слюнка образува точковидна размита шарка. 3-4 дни преди овулацията се отбелязва картина на началото на образуването на папратовидна структура на модела. С наближаването на овулацията моделът ще стане по-ясен, което ще покаже висока вероятност за зачеване. В рамките на 2-3 дни след овулацията се наблюдава намаляване на яснотата на модела.

Възпалителните процеси в устната кухина или в ларинкса могат да доведат до изкривяване на резултата. Препоръчително е да използвате сутрешна слюнка или да използвате теста не по-рано от 2-3 часа преди хранене, миене на зъбите, пиене на алкохол и пушене.

Ако продължителността на съществуването на всяка микроскопична картина на кристализация както на цервикалната слуз, така и на слюнката, както и нейното заместване с друга картина, има постоянен и последователен характер в съответствие с фазите на менструалния цикъл, тогава това показва липсата на неговите нарушения, а овулацията настъпва своевременно и във всеки менструален цикъл. Продължителното съществуване на една и съща картина на кристализация, липсата или ненавременната й промяна с друга картина показва нарушение на функцията на яйчниците. В този случай определено трябва да се консултирате с лекар.

За определяне на овулациятаможете също да използвате температурен тест, което се основава на факта, че в зависимост от фазата на менструалния цикъл телесната температура се променя по определен начин. Най-точни данни за характера на протичащите топлинни промени могат да бъдат получени чрез измерване температура в ректумаведнага след сън, в покой, без да ставате от леглото, ежедневно през целия менструален цикъл. В първата фаза на нормалния менструален цикъл температурата обикновено е по-ниска 37°C. Буквално в навечерието на овулацията тя леко намалява и веднага след нея температурата се повишава с 0,4–0,6 ° C в сравнение с първоначалната и като правило става малко по-висока от 37 ° C. Продължаващите температурни колебания са свързани с промяна в нивото на естроген в първата и втората фаза на менструалния цикъл и повишаване на нивото прогестеронвъв втората фаза. В същото време прогестеронът, който започва да се произвежда в яйчника в по-голямо количество веднага след овулацията, засяга терморегулаторния център, което води до известно повишаване на телесната температура. Ако овулацията не настъпи по някаква причина, тогава температурата през целия цикъл ще бъде приблизително еднаква.

Като част от цялостна диагностика е възможно да се използват методи за определяне на нивото на женските полови хормони (различни фракции на естрогени и прогестерон), както и фоликулостимулиращи и лутеинизиращи хормони в кръвта. Концентрацията на тези хормони варира по определен начин от ден на ден, в зависимост от фазите на менструалния цикъл, наличието или отсъствието на овулация.

С помощта на ултразвук също е възможно да се проследи образуването на фоликула, да се определи неговия размер и да се определи моментът на овулация. Наличието на зреещ фоликул в яйчника се доказва от образуване на кухина, постепенно нарастващо до 2-3 cm в диаметър през първата половина на менструалния цикъл и изчезващо в средата му. Промяната в размера на тази формация, като правило, е ясно свързана с промените в модела на кристализация на слуз, с температурата в ректума и с нивото на хормоните. Признак за зрелостта на фоликула и ранното (1,5 - 2 дни) начало на овулацията според ултразвука е откриването на яйценосна туберкула, която изглежда като малка светла формация, съседна на вътрешната повърхност на фоликула. Овулацията се показва не само от изчезването на фоликула, но и от едновременното появяване на течност зад матката.

Смята се, че ултразвукът осигурява по-надеждна информация за узряването на фоликулитев сравнение с хормоналните тестове, тъй като общо няколко патологично незрели фоликула могат да осигурят нормално ниво на изследваните хормони, което ще създаде погрешно впечатление за нормалния ход на менструалния цикъл.

В момента ултразвукът е един от важните методи за наблюдение на процеса на стимулиране на овулацията и неговата ефективност. Така че, при прекомерна стимулация, има значително увеличение на яйчниците с образуването на множество кухини в тях.

По този начин използването на различни методи за определяне на овулацията позволява да се контролира естеството на менструалния цикъл и да се избере най-благоприятният период за зачеване по време на планирана бременност. Използвайки тези тестове за предотвратяване на нежелана бременност, можете да изберете най-рационалния схема за контрацепцияили просто изключете сексуалната активност в дните, когато зачеването е най-вероятно. С помощта на горните тестове е възможно също така да се контролира ефективността на текущото лечение, насочено към коригиране на менструалната функция.

Освен това, с помощта на редица прости тестове като измерване на температурата в ректума или оценка на кристализацията на слюнката, жената може самостоятелно да контролира менструалната си функция.